авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Основные изменения элементного и гормонально-метаболического статуса у мужчин с патоспермией

На правах рукописи

САФРОНЕНКО Александр Викторович ОСНОВНыЕ измЕНЕНия элЕмЕНтНОгО и гОРмОНАльНО-мЕтАбОличЕСКОгО СтАтуСА у мужчиН С пАтОСпЕРмиЕй 14.00.16 – патологическая физиология АВтОРЕФЕРАт диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Иркутск – 2008

Работа выполнена в ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук» Научные руководители:

доктор медицинских наук, член-корреспондент РАМН, Колесникова Любовь Ильинична профессор доктор медицинских наук, Сутурина Лариса Викторовна профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, Власов Борис Яковлевич профессор доктор медицинских наук, Семинский Игорь Жанович профессор

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», г. Томск

Защита состоится «» 2008 г. в часов на заседа нии диссертационного совета Д.001.038.02 при ГУ «Научный центр медицин ской экологии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук» по адресу: 664003, г. Иркутск, ул.

Тимирязева, 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук»

Автореферат разослан «21» ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Шолохов Л.Ф.

доктор медицинских наук ОбЩАя ХАРАКтЕРиСтиКА РАбОты Актуальность проблемы Проблема бесплодных браков остается одной из самых актуальных в акушерстве и гинекологии. По данным ГУ Научного Центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН (Москва) частота бесплодных браков в российской популяции достигла критической отметки – 15 %, частота женского бесплодия выросла на 43 %., при этом одной и причин бесплодия в 36–60 % случаев является нарушение репродуктивной функции мужчин (Алипов В.И.

и соавт., 2004;

Кулаков В.И., 2005;

Kunzle R. et al., 2004;

Van der Westerlaken L.

et al., 2005;

Vernaeve V. et al., 2006;

Jezek D. et al., 2007). Демографическая ситуация в Сибири также характеризуется негативными тенденциями, что, наряду с прочими факторами, определяется растущей частотой бесплодия, в том числе и мужского, в браке (Филиппов О.С., 1999).

Известно много этиологических факторов, приводящих к инфертильности у мужчин (Тиктинский О.Л. и соавт., 1999;

Евдокимов В.В. и соавт., 2006;

Gianotten J. et al., 2003;

Matthiesson K., 2005;

Brady B., 2006). Среди них есть как неоспоримо доказанные, так и вызывающие много предположений и научных дискуссий. В условиях длительного воздействия неблагоприятных факторов окружающей среды на человеческий организм особое значение имеет его ин дивидуальная чувствительность к данным воздействиям, которая определяется, наряду с другими факторами, состоянием гипоталамо-гипофизарно-гонадной, гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой, гипоталамо-гипофизарно тиреоидной систем, а так же состоянием процессов перекисного окисления липидов, активностью антиоксидантной системы, однако исследований, по священных этим аспектам патогенеза нарушений репродуктивной функции мужчин недостаточно (Йен C.С.К., Джаффе Р.Б., 1998;

Арутюнян А.В., Сте панов М.Г., 1999;

Никифорова Н.Г., 2002;

Nouri M. et al., 2007) Вместе с тем до сих пор недостаточно изучено в каких взаимоотношениях находится гипофизарно-тиреоидная, гипофизарно-тестикулярная, надпочеч никовая, ПОЛ-АОЗ системы и элементный статус при нарушениях репродук тивной функции у мужчин. Поэтому оценка характера этих взаимоотношений в патогенезе бесплодия у мужчин представляет одну из актуальных проблем патологической физиологии.

Все вышеизложенное и определило основную цель работы: оценить характер нарушений нейро-эндокринной регуляции, процессов ПОЛ-АОЗ и элементного статуса у мужчин с патоспермией из бесплодных супружеских пар.

Для реализации поставленной цели последовательно решались следующие задачи:

1. Оценить функциональное состояние гипофизарно-тестикулярной, гипофизарно-тиреоидной и гипофизарно-надпочечниковой систем у мужчин с патоспермией.

2. Установить изменения процессов перекисного окисления липидов и антиок сидантной защиты при патоспермии у мужчин из бесплодных супружеских пар.

3. Выявить изменения элементного состава спермы и волос при наруше ниях фертильности у мужчин.

4. Установить наиболее информативные показатели нарушений гормонально-метаболической системы и элементного статуса при патоспермии у мужчин из бесплодных супружеских пар.

Научная новизна Впервые показано, что у мужчин с патоспермией независимо от типа на рушений (олиго- или астенозооспермия) основными гормональными характе ристиками являются: изменения гонадотропной регуляции с относительным повышением уровня фолликулостимулирующего гормона на фоне снижения дигидроэпиандростерона, активация пролактинергической функции гипофиза и замедление конверсии трийодтиронина в его свободную фракцию.

Получены новые сведения о состоянии процессов ПОЛ у мужчин с пато спермией, которые свидетельствуют об активизации процессов пероксидации липидов на этапе образования начальных продуктов в сравнении с контроль ными значениями.



Новыми являются данные о снижении содержания I, Se, As, B и Li в во лосах, а также – уменьшении содержания Fe, I, As, Ni, в сперме у мужчин с патоспермией и повышение содержания токсических элементов – Ва в волосах, а также Ва и Hg в сперме у мужчин с патоспермией.

Впервые у мужчин с патоспермией установлена взаимосвязь между акти вацией пролактинергической функции гипофиза и андрогенным дефицитом со снижением содержания эссенциальных и условно - эссенциальных элементов (йода, мышьяка).

Получены новые сведения о патогенетической роли накопления ток сических элементов при развитии гипероксидации липидов у пациентов с патоспермией.

практическая значимость работы Полученные результаты позволяют обосновать применение в диагности ческом алгоритме при патоспермии исследования в биосубстратах мужчин содержания наиболее значимых эссенциальных элементов (железо, йод, се лен);

условно-эссенциальных элементов (мышьяк, бор, никель) и токсических элементов (барий, ртуть).

На основании проведенного исследования можно дать теоретическое обо снование целесообразности коррекции нарушений элементного статуса при патоспермии, как патогенетически обоснованного подхода к восстановлению фертильности.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Основными отличиями состояния нейро-эндокринной системы у обследованных мужчин с олиго- и астенозооспермией являются: активация пролактинергической функции гипофиза и относительное повышение фолли кулостимулирующего гормона, а также снижение дигидроэпиандростерона и свободного трийодтиронина.

2. Состояние процессов пероксидации липидов у мужчин с патоспермией характеризуется накоплением начальных продуктов липопероксидации, при отсутствии изменений состояния антиокислительной системы.

3. Элементный состав исследованных биосубстратов пациентов с пато спермией характеризуется значимым снижением содержания I, Se, As, B и Li в волосах, а также – нижением содержания Fe, I, As, Ni, в сперме, повыше нижением,,,, нием содержания Ва в волосах и Ва, Hg в сперме в сравнении с фертильными мужчинами.

4. Предложенные уравнения канонической величины, основанные на наиболее информативных показателях гормонально-метаболической системы и элементного состава, являются моделью для прогнозирования нарушения фертильности у мужчин.

Апробация работы Материалы диссертации представлены и обсуждены:

• на ХIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006);

• на Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы медико-демографического развития и воспроизводства населения в России и регионах Сибири» (Иркутск, 2007);

• на Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы бесплодного брака» (Иркутск, 2007);

• на XVII ежегодной международной конференции РАРЧ «Репродуктивные технологии сегодня и завтра» (Казань, 2007).

публикации Соискатель имеет 6 опубликованных работ, в том числе по теме диссерта ции 6 работ, опубликованных в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных Высшей аттестационной комиссией – 2.

Структура диссертации Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы (отечественных и иностранных источников).

Текст диссертации иллюстрирован таблицами, рисунками в виде диаграмм и концептуальной схемы.

мАтЕРиАлы и мЕтОДы иССлЕДОВАНия Работа выполнена в 2005–2007 гг., в рамках государственной темы № «Основные механизмы формирования нарушений репродуктивного здоровья в экологически неблагоприятных условиях Восточной Сибири», на базе лаборато рий, входящих в состав ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно Сибирского научного центра СО РАМН»: патофизиологии репродукции (зав.

лабораторией член-корреспондент РАМН, д.м.н., профессор Л.И. Колесникова), гинекологической эндокринологии (зав. лабораторией д.м.н., профессор Л.В. Су турина), физиологии и патологии эндокринной системы (зав. лабораторией д.м.н.

Л.Ф. Шолохов). Анализ результатов исследования проводился в лаборатории эпидемиологии, моделирования и прогнозирования (зав. лабораторией д.б.н., профессор В.П. Ильин). Определение микроэлементного статуса проводилось в лаборатории Независимого Экспертно-Аналитического Совета по разработке и внедрению современных методов исследования и анализа на базе кафедры неорганической и аналитической химии МСХА им. К.А. Тимирязева и кафе дры клинической и лабораторной диагностики РГМУ (г. Москва). В работе с больными соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной медицинской ассоциации (World Medial Assoiation Delaration of Helsinki (1964, 2000 ред.). На первом этапе был проведен анализ результатов обследования 320 мужчин репродуктивного возраста из бесплодных семейных пар, обратившихся в Научный центр медицинской экологии Восточно Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. Далее была сформирована основная группа пациентов, которая составила 30 человек. В нее вошли мужчины фертильного возраста из бесплодных супружеских пар с установленной патоспермией. Обязательным условием включения в основную группу явилось наличие достоверных откло нений показателей эякулята от стандартов ВОЗ (1999). Критериями исключения были – наличие беременности у партнерши в анамнезе и тяжелая соматическая патология. Параллельно была сформирована группа контроля численностью 30 человек, в нее вошли мужчины с реализованной репродуктивной функцией и, нормальными показателями подвижности сперматозоидов, подобранные по принципу «копия-пара». Критериями исключения из группы контроля были:





ожирение, тяжелая соматическая патология, достоверные отклонения пока зателей эякулята от стандартов ВОЗ. Незначительное снижение количества сперматозоидов в 1 мл спермы наблюдаемое у 3,3 % фертильных мужчин не было критерием для исключения.

В исследуемых группах проводилось общеклиническое обследование, инструментальные и лабораторные методы исследования (согласно руковод ству ВОЗ по стандартизированному обследованию и диагностике бесплодных супружеских пар, 1993 г.) и обязательная консультация врача-андролога и смежных специалистов по показаниям.

Эпидемиологические методы исследования включали: анкетирование, анализ медицинской документации.

Методы стандартного клинического обследования пациентов из бесплод ных супружеских пар и мужчин из группы контроля включали: осмотр и паль пацию наружных половых органов, макро- и микроскопическое исследование эякулята, ультразвуковое исследование яичек и их придатков, анализ сока предстательной железы (по показаниям), бактериологическое исследование эякулята (по показаниям), прямую иммунофлюоресценцию (ПИФ) и поли мерную цепную реакцию (ПЦР) с целью обнаружения хламидий, уреаплазм, микоплазм, трихомонад, генитального герпеса.

биохимические исследования Забор крови у мужчин проводили из локтевой вены, натощак, с 8 до 9 часов утра в соответствии с общепринятыми требованиями. В качестве материала для биохимических исследований использовали сыворотку, плазму крови и гемолизат, приготовленный из эритроцитов.

На спектрофлюорофотометре Shimadzu RT=5000 (Япония) измеряли содержание ТБК активных продуктов ПОЛ (ТБК-АП, мкмоль/л) по методу В.Б. Гаврилова с соавт. (1987);

активность супероксиддисмутазы (СОД, усл.

ед.) методом H.P. Misra, I. Fridovih (1972);

концентрации -токоферола и ретинола (мкмоль/л) методом Р.Ч. Черняускене с соавт. (1984);

уровни вос становленного и окисленного глутатиона (GSH, GSSG, мкмоль/л) методом P.Y. Hissin, R. Hilf (1976).

Содержание субстратов с сопряженными двойными связями (Дв. св.) реги стрировали по методу И.А. Волчегорского с соавт. (1989). Диеновые коньюгаты (ДК), кетодиены и сопряженные триены (КД-СТ) определяли тем же методом, основанном на интенсивном поглощении конъюгированных диеновых структур гидроперекисей липидов в области 220 (Дв. св), 232 (ДК) и 278 (КД-СТ) нм.

Содержание Дв. cв., КД-СТ, ДК выражали в усл. ед. и в мкмоль/л (ДК). Оцен ку общей антиокислительной активности крови (АОА, усл.ед.) проводили по методу Г.И. Клебанова с соавт. (1988).

Гормональные исследования Забор крови для гормональных исследований осуществлялся из локтевой вены, с 8 до 9 часов утра, натощак. В качестве материала исследования исполь зовалась сыворотка крови. Определение концентрации трийодтиронина (Т3), тироксина (Т4), тиреотропного гормона (ТТГ), пролактина (ПРЛ), лютеинизиру ющего гормона (ЛГ), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) проводилось радиоиммунологическим методом с применением анализатора «Иммунотест» (наборы ООО «Диас» (Россия)). Иммуноферментный анализ применялся для определения уровней кортизола, свободного тироксина (Т4 св.), тестостерона (наборы «Алкор Био», Россия);

свободного трийодтиронина (Т3 св.) (наборы ХЕМА);

17-ОН-прогестерона, дегидроэпиандростерон-сульфата (ДГЭА-С) (наборы «DRG ELISAS», USA). Концентрации гормонов ПРЛ, ТТГ, ЛГ, ФСГ выражали в мЕД/мл;

кортизола, Т3, Т4, – в нмоль/л, свободных фракций Т3 и Т4, тестостерона – в пмоль/л, 17-ОН-прогестерона – в нмоль/л, ДГЭА-С – в мкмоль/л.

Исследование эякулята Анализ эякулята проводился по унифицированной методике (Миронова И.И.

с соавт. 2005). Подсчет количества сперматозоидов и оценка их подвижности осуществлялся в нативном препарате в камере МАКЛЕРА при 200-кратном увеличении, морфологические формы сперматозоидов и другие клетки эяку лята оценивались сначала в нативном препарате при увеличении 400, затем в окрашенных препаратах при увеличении 900. Окраска препаратов проводилась коммерческим препаратом «Квик-Дифф» фирмы «Абрис+» (Санкт-Петербург).

Оценка жизнеспособности сперматозоидов оценивали путем окраски нативного препарата 1% раствором эозина (Брагина Е.Е. и соавт., 2002).

Методика определения элементного состава спермы В соответствии с методикой определения элементного состава в сперме (Зейлер Г., 1993, Х.И. Зильберштейна., 1971, Subramanian KS, Iyengar GV, Okomoto K., 2003) отбор образца проводился строго в объеме 1 мл с последую щим хранением при температуре –5 С. Непосредственно перед пробоподго товкой каждый образец замороженной спермы опускался в горячую воду при температуре +80 С на 1 минуту, затем переносился в тефлоновый автоклав, где к нему добавляли 3 мл очищенной ОСЧ HNO3 и 1 мл 6% Н2О2. Затем автоклав помещался в микроволновую систему пробоподготовки MD-2000 фирмы CEM (США) обеспечивающую высокое давление и температуру кипения HNO3.

После охлаждения образца в течение 10 мин в автоклав добавляли 1 мл Н2О (24%) (ОСЧ) и продолжали процесс разложения. После охлаждения получен ных растворов в течение 60 минут от них отбирали по 1 мл в пластиковые сосуды и разбавляли в 5 раз бидистиллированной и деионизированной водой.

Для контроля чистоты анализа отдельно был приготовлен раствор «холостой» пробы) с содержанием HNO3, H2O2, H2O в пропорциях идентичных содержанию этих реагентов в исследуемых образцах.

Описанная выше методика пробоподготовки с использованием СВ нагрева в тефлоновых «бомбах» позволяет проводить быстрое «вскрытие» биопробы, избежать потерь летучих элементов (As, Se и т.д.), с высокой эф фективностью разложить биологическую матрицу влияющую на результаты анализа.

В качестве внутреннего стандарта в растворы вводили индий в концентра ции 25 мкг/л. Калибровочные растворы были проготовлены из стандартных растворов фирмы VTRC с известным содержанием в диапазоне от 5–1000 мгк/л (10–7 %). Полученные растворы анализировались на масс-спектрометре с ионизацией в индуктивно-связанной плазме «VG Plasma Quad PQ2 Turbo» (Англия), рабочая мощность СВЧ генератора 1,3 кВтб расход плазмообразую щего газа (аргон) 14 л/мин, расход транспортирующего газа 0,89 мл/мин, для определения щелочных металлов – расход – 1,05 мл/мин. Проводилось 3 экс позиции каждого образца, время интегрирования сигнала 60 сек. Результаты анализа «холостой пробы» автоматически вычитались в анализе. Единицы измерения ppb (мкг/л).

Методика определения элементного состава лобковых волос Для анализа микроэлементного состава в лобковых волосах использовал ся масс-спектрометрический метод с ионизацией в индукционно-связанной плазме (ИСП-МС). Диапазон измерения концентраций микроэлементов при использовании данного метода составляет 10–6/102 мг/л.

Данный метод предполагает проведение озоления на стадии пробоподго товки и перевод пробы в жидкое состояние. Для этого применяются муфельные печи или специализированные автоклавы, в которых совмещаются все этапы пробоподготовки. Наиболее современным методом пробоподготовки является пробоподготовка в пластиковых автоклавах с нагревом в СВЧ-печах. Для анализа методом ИСП-МС использовался аппарат Perkin-Elmer, США (серии Elan).

Статистический анализ Статистический анализ проводили с помощью современных вычислитель ных процедур и методов, реализованные в интегрированном статистическом пакете комплексной обработки данных STATICTICA 6.1 StatSoft In. (США) (правообладатель лицензии – ГУ НЦ МЭ ВСНЦ СО РАМН). Использованы различные методы параметрической и непараметрической статистики с уровнем значимости равным 5 % (0,05). Тип распределения определяли по критериям согласия 2 и Колмогорова-Смирнова. Анализ межгрупповых различий для независимых выборок по каждому из нормально распределен ных количественных признаков проводили параметрическими критериями Стьюдента (T-test) и Фишера (F-тест), для ненормально распределенных не T-test) -test) test) ) F-тест), -тест), параметрическими критериями: Манна-Уитни (Mann-Whitney U-Test), Вальда Вольфовица (Wald-Wolfowitz Runs Test (W-W test)) и Колмогорова-Смирнова (Kolmogorov-Smirnov Two-Sample Test (К-S test)). Анализ взаимосвязей по казателей проводили методами корреляционного анализа. Многофакторный дискриминантный анализ выполняли с пошаговым включением переменных для выявления наиболее информативных показателей и оценки их эффек тивности для классификации наблюдений. По выявленным информативным показателям, представленным в виде уравнений канонической величины, осуществляли оценку различий между исследуемыми группами, выраженным критерием Махалонобиса D2.

РЕзультАты иССлЕДОВАНия и иХ ОбСужДЕНиЕ Клинико-лабораторная характеристика обследованных мужчин репродуктивного возраста с патоспермией При исследовании эякулята 320 мужчин из бесплодных супружеских пар у 51,0 % мужчин выявлена нормоспермия, у 19 % – астенозооспермия, у 14 % – олигозооспермия, у 11 % – тератозооспермия и у 5 % – аспермия.

Таким образом, патоспермия обнаружена у 49,0 % мужчин из бесплодных супружеских пар.

Далее проводилось углубленное обследование 30 мужчин с патоспермией, которые составили основную группу. Средний возраст мужчин, вошедших в основную группу, составил 30 ± 4,6 лет. Средняя продолжительность беспло дия в браке при регулярной половой жизни без контрацепции в этой группе составила 4,3 года (от 1 года до 10 лет).

Параллельно была сформирована группа контроля численностью 30 чело век, в нее вошли мужчины, средний возраст которых составил 28,0 ± 4,3 лет, подобранных по принципу «копия-пара» с реализованной репродуктивной функцией (возраст детей в этой группе составил от 1 года до 3 лет) и нор мальными показателями спермограммы. По средним значениям массы тела и роста группы были сопоставимы: 78,4 ± 2,6 кг, 175,0 ± 4,1 см и 81,3 ± 2,5 кг, 176,0 ± 3,4 см соответственно. Таким образом, основным группообразующим признаком явились данные спермограммы. Наибольшая доля нарушений пока зателей спермограммы в основной группе приходится на снижение количества сперматозоидов (олигозооспермия) в 1 мл ( 20 млн.) – 43,3 %. При оценке подвижности сперматозоидов по критерию ВОЗ (а+б 50 %) – выявлено, что у 40 % мужчин из основной группы выявлено снижение подвижности сперма тозоидов (астенозооспермия). У 6,7 % мужчин с нарушенной фертильностью выявлено повышенное количество сперматозоидов с нарушенной морфологией (тератозооспермия), в дальнейшем в связи с малой репрезентатитвностью вы борки мужчин с тератозооспермией эта группа была исключена из сравнитель ного анализа. При оценке объема эякулята (по ВОЗ от 2 до 6 мл), он оказался снижен в 23,3 % у мужчин из основной группы.

Таким образом, основными выявленными дефектами эякулята у мужчин с нарушенной фертильностью являются: уменьшение количества сперматозоидов и нарушение подвижности сперматозоидов.

исследование гормональных показателей гипофизарно тестикулярной, гипофизарно-тиреоидной и гипофизарно надпочечниковой систем у фертильных мужчин и пациентов с патоспермией Для анализа отличий гормональных показателей у мужчин с патоспермией и группы контроля была проведена оценка нормальности распределения и определены методы для анализа показателей. Характер распределения всех изученных гормональных показателей в группе мужчин с патоспермией и в контроле расценен как нормальный. Однако поскольку большинство показа телей имели различия дисперсий, применялись непараметрические ранговые критерии: U-критерий Манна-Уитни, Wald-Wolfowitz, Колмогорова-Смирнова.

С учетом нормального распределения в случае равенства дисперсий гипотезу об отсутствии различий гормональных показателей в группах проверяли с ис пользованием Т-критерия Стъюдента. Для оценки показателей гормональной системы в двух подгруппах (по наиболее часто выявленным типам патоспер мии – мужчины с олигоспермией (количество сперматозоидов 20 млн/мл) и мужчины с астеноспермией (а+b 50 %) применялись непараметрические ранговые критерии.

Результаты анализа полученных гормональных показателей у мужчин кон трольной группы, пациентов основной группы и подгрупп с разными формами патоспермии представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, концентрации гонадотропных гормонов гипо физа и пролактина в группах обследуемых мужчин находились в пределах физиологической нормы. Однако, мужчины с патоспермией характеризовались более широким диапазоном значений пролактина у мужчин с патоспермией (p (F) = 0,000001).

При оценке уровня пролактина в группе мужчин как с олигоспермией, так и с астеноспермией отмечена относительная активация пролактинерги ческой системы в сравнении с группой контроля (p (W-W) = 0,04). Уровень ФСГ был повышен (в пределах референтных значений) как в группе мужчин с олигоспермией (p (W-W) = 0,01, p (K-S)= 0,01, p (U) = 0,0001), так и при астеноспермии (p (W-W) = 0,003, p (K-S)= 0,004, p (U) = 0,0001) по сравнению с группой контроля. При анализе уровней ЛГ в группе контроля и у мужчин с патоспермией значимых отличий не отмечено.

При сравнении уровней тестостерона были получены достоверные раз личия, с более широким диапазоном значений тестостерона у мужчин с пато спермией (p (F) = 0,004), при этом концентрации тестостерона не выходили за пределы референтных значений.

При анализе стероидпродуцирующей функции надпочечников отмечено существенное уменьшение диапазона концентрации ДГЭАС в сыворотке крови у мужчин с патоспермией (p (F) = 0,002), за счет снижения уровня ДГЭАС в группе мужчин с астеноспермией по сравнению с контрольной группы (p (W-W) = 0,008). При сравнительной оценке уровня ДГЭАС в группе мужчин с олигоспермией и группе контроля различий выявлено не было.

Таблица Характеристика гормональных показателей у мужчин контрольной группы и пациентов патоспермией (M ± m) n = (p 0,05) (n = 13) (n = 12) (n = 30) (p 0,05) (p 0,05) (p 0,05), / 275,7 ± 22,8 389,3 ± 60,4* 281,3 ± 30,5*** 439,2 ± 87,6***, / 2,0 ± 0,29 5,4 ± 0,67*,*** 6,6 ± 1,4*** 5,9 ± 1,04***, / 4,1 ± 0,48 3,2 ± 0,45 3,3 ± 0,8 3,5 ± 0,, / 17,6 ± 0,91 20,2 ± 1,5* 19,6 ± 2,6 22,5 ± 2,, / 2,0 ± 0,18 2,0 ± 0,15 2,0 ± 0,2 1,97 ± 0,26*** T3, / 1,7 ± 0,07 2,5 ± 0,12* 2,3 ± 0,2*** 2,5 ± 0,12***. T3, / 4,9 ± 0,12 3,6 ± 0,12**,*** 3,8 ± 0,19*** 3,4 ± 0,9*** T4, / 99,7 ± 4,7 134,7 ± 4,9**,*** 129,7 ± 9,6*** 142,3 ± 8,2***. T4, / 15,2 ± 0,5 15,2 ± 0,6 14,8 ± 1,05 15,2 ± 0,, / 6,3 ± 0,9 5,97 ± 0,46* 6,3 ± 0,8 5,9 ± 0,9***, / 494,8 ± 24,1 442,17 ± 21,7 436,2 ± 30,2 470,9 ± 0, 17- -, / 4,0 ± 0,2 3,84 ± 0,41 3,8 ± 0,4 4,5 ± 0, Примечание: * – статистически значимые различия дисперсий по F-критерию Фише ра на уровне = 0,05;

** – статистически значимые различия средних величин по Т-критерию Стьюдента на уровне = 0,05;

*** – статистиче ски значимые различия по трем ранговым критериям: Wald-Wolfowitz, КолмогороваСмирнова,Манна-Уитни, уровень значимости (p 0,05).

При анализе концентраций тиреотропного гормона у мужчин с патоспер мией и в группе контроля значимых различий не выявлено.

При сравнении дисперсий значений Т3 были получены достоверные раз личия с более широким диапазоном значений Т3 у мужчин с патоспермией (p (F) = 0,04), за счет повышения уровня Т3 у мужчин с патоспермией. В то же время выявлено снижение уровня свободных фракций Т3 у пациентов с патоспермией по сравнению с группой контроля как в группе мужчин с олигоспермией, так и при астеноспермии.

Анализ концентраций Т4 у мужчин основной и контрольных групп по казал, что средняя концентрация Т4 у пациентов с патоспермией даже превы шает его уровень в группе контроля (p (Т) = 0,000005), однако при сравнении концентраций св. Т4 в основной и контрольной группах значимых различий выявлено не было.

исследование перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы у фертильных мужчин и пациентов с патоспермией Результаты исследования процессов перекисного окисления липидов и состояния антиоксидантной системы у фертильных мужчин и пациентов с патоспермией представлены в таблицах 2 и 3.

Как видно из таблицы 2, при сравнении уровней субстратов ПОЛ – двой ных связей в сыворотке крови у мужчин с патоспермией и в группе контроля отмечено снижение его уровня у мужчин с патоспермией (p (K-S) = 0,01, p (U) = 0,01). При анализе уровня двойных связей у мужчин с олиго- и астеноспермией и группы контроля различий выявлено не было.

Уровень диеновых конъюгатов у мужчин с олигоспермией (p (W-W) = 0,0002, p (K-S) = 0,0051, p (U) = 0,0001), астеноспермией (p (W-W) = 0,0008, p (K-S) = 0,005, p (U) = 0,0003) был повышен, кроме того, были выявлены различия по дисперсиям с более широким диапазоном значений у мужчин с патоспермией p (F) = 0,00001.

Таблица Содержание субстратов и продуктов ПОЛ в сыворотке крови у мужчин контрольной группы и пациентов с патоспермией (M ± m), (n = 30) (p 0,05) (n = 12) (n = 30) (n = 13) (p 0,05) (p 0,05) (p 0,05).., 2,83 ± 0,13 2,42 ± 0,18** 2,51 ± 0,4 2,28 ± 0,..

, / 0,81 ± 0,04 1,53 ± 0,12*,** 1,51 ± 0,22** 1,49 ± 0,23** -,.. 0,31 ± 0,03 0,45 ± 0,06* 0,46 ± 0,12 0,41 ± 0, -, / 0,99 ± 0,08 1,07 ± 0,09 1,1 ± 0,16 1,03 ± 0, Примечание: * – статистически значимые различия дисперсий по F-критерию Фишера на уровне = 0,05;

** – статистически значимые различия по трем ранговым критериям: Wald-Wolfowitz, Колмогорова-Смирнова, Манна-Уитни, уровень значимости (p 0,05).

В таблице 3 представлен анализ состояния антиоксидантной защиты у мужчин с патоспермией и в группе контроля.

Таблица Общая АОА и содержание антиоксидантов в сыворотке крови у мужчин контрольной группы и пациентов с патоспермией (M ± m), (n = 30) (p 0,05) (n = 12) (n = 30) (n = 13) (p 0,05) (p 0,05) (p 0,05),.. 15,44 ± 0,91 16,19 ± 1,28* 17,36 ± 2,12 13,87 ± 0,,.. 1,48 ± 0,02 1,49 ± 0,03 1,46 ± 0,04 1,50 ± 0, GSH, / 2,15 ± 0,04 2,25 ± 0,06 2,13 ± 0,03 2,29 ± 0, GSSG, / 1,96 ± 0,04 1,95 ± 0,04 1,99 ± 0,58 1,84 ± 0, -, / 8,23 ± 0,47 7,29 ± 0,58 7,48 ± 1,01 7,56 ± 0,, / 0,9 ± 0,07 0,74 ± 0,06 0,72 ± 0,09 0,81 ± 0, Примечание: * – статистически значимые различия дисперсий по F-критерию Фишера на уровне = 0,05.

При сравнении показателей общей АОА сыворотки крови отмечено, что их уровень существенно не отличается в двух группах. При этом более широкий диапазон значений АОА отмечен у мужчин с патоспермией p (F) = 0,0007.

Характеристика макро- и микроэлементного состава волос и спермы мужчин с патоспермией и фертильных мужчин Для анализа отличий элементного состава у мужчин с патоспермией и группы контроля была проведена оценка нормальности распределения и определены методы для анализа показателей. Характер распределения всех изученных показателей в группе мужчин с патоспермией и в контроле расце нен как ненормальный и поэтому применялись непараметрические ранговые критерии: U-критерий Манна-Уитни, Wald-Wolfowitz, Колмогорова-Смирнова.

Содержание эссенциальных элементов в лобковых волосах и сперме у мужчин с патоспермией и в группе контроля представлены в таблице 4.

Как следует из полученных результатов, определен более низкий уровень йода и селена в лобковых волосах у мужчин с патоспермией по сравнению с обследуемыми фертильными мужчинами (табл. 4). Также установлены низкие уровни железа, йода, кобальта и молибдена в сперме у мужчин с патосперми ей, а уровень хрома выше в сперме у мужчин с патоспермией по сравнению с группой контроля.

Таблица Содержание эссенциальных элементов в лобковых волосах и сперме у мужчин с патоспермией и в группе контроля (M ± m) :,,, / (n = 24) (n = 23), / ( 0,05) ( 0,05) 18,78 ± 0,79 17,49 ± 0, Fe 8,63 ± 0,4 7,1 ± 0,49* 13,09 ± 6,77 2,08 ± 0,19*,**,*** I 9,27 ± 5,79 1,4 ± 0,12*,**,*** 17,3 ± 0,92 18,93 ± 0, Cu 6,86 ± 0,52 5,25 ± 0, 161,7 ± 8,6 150,19 ± 9, Zn 17,48 ± 1,14 16,97 ± 1, 0,0 ± 0,0033 0,014 ± 0, Co 0,01±0,0009 0,009 ± 0,0008*,**,*** 0,55 ± 0,057 0,53 ± 0, Cr 0,31 ± 0,04 0,54 ± 0,04**,*** 0,03±0,0142 0,016 ± 0, Mo 0,01± 0,0028 0,002 ± 0,0005*,**,*** 0,67 ± 0,047 0,489 ± 0,031*,**,*** Se 0,44 ± 0,043 0,056 ± 0, 0,67 ± 0,047 0,489 ± 0, Mn 0,39 ± 0,045 0,46 ± 0, Примечание: * – статистически значимые различия по ранговому критерию Wald-Wolfowitz;

** – статистически значимые различия по ранговому критерию Колмогорова Смирнова;

*** – статистически значимые различия по ранговому критерию Манна-Уитни.

Содержание условно-эссенциальных элементов в лобковых волосах и сперме у мужчин с патоспермией и в группе контроля представлены в та блице 5.

Таблица Содержание условно-эссенциальных элементов в лобковых волосах и сперме у мужчин с патоспермией и в группе контроля (M ± m) - :,,, /, (n = 24) (n = 23), / ( 0,05) ( 0,05) 0,01 ± 0,0011 0,003 ± 0,0007*,**,*** As 0,01 ± 0,0024 0,001 ± 0,0002*,**,*** 8,85 ± 0,52 4,97 ± 0,6008*,**,*** B 4,23 ± 0,42 3,15 ± 0, 2,63 ± 0,25 3,88 ± 0, Br 0,37 ± 0,07 0,23 ± 0, 0,02 ± 0,001 0,015 ± 0,0007**,*** Li 0,15 ± 0,03 0,12 ± 0, 0,01 ± 0,001 0,013 ± 0, Ni 4,21 ± 4,21 0,01 ± 0,001**,*** 0,01 ± 0,0009 0,012 ± 0, V 0,01 ± 0,001 0,02 ± 0,007*,**,*** 18,77 ± 1,07 18,11 ± 0, Si 8,96 ± 0,64 7,3 ± 0,25**,*** Примечание: * – статистически значимые различия по ранговому критерию Wald-Wolfowitz;

** – статистически значимые различия по ранговому критерию Колмогорова Смирнова;

*** – статистически значимые различия по ранговому критерию Манна-Уитни.

При исследовании условно-эссенциальных элементов (табл. 5) определено снижение уровня мышьяка, бора и лития в лобковых волосах у мужчин с па тоспермией по сравнению с группой контроля. Так же установлено значимое снижение уровней мышьяка, никеля, кремния и повышения уровня ванадия в сперме у мужчин с патоспермией, по сравнению с группой контроля.

Содержание токсичных элементов в лобковых волосах и сперме у мужчин с патоспермией и в группе контроля представлены в таблице 6.

Таблица Содержание токсичных элементов в лобковых волосах и сперме у мужчин с патоспермией и в группе контроля (M ± m) :,,, / (n = 24) (n = 23), / ( 0,05) ( 0,05) 19,9 ± 1,4 19,9 ± 0, Al 17,43 ± 4,03 4,4 ± 0,19*,**,*** 0,004 ± 0,0009 0,001 ± 0,0005*,**,*** Cd 0,01 ± 0,0006 0,0004 ± 0,0001*,**,*** 1,63 ± 0,05 1,23 ± 0,054*,**,*** Pb 1,59 ± 0,05 1,082 ± 0,0514*,**,*** 0,003 ± 0,0007 0,003 ± 0, Hg 0,003 ± 0,0007 0,006 ± 0,0001*,**,*** 0,0008 ± 0,00004 0,00002 ± 0, Be 0,0026 ± 0,0005 0,005 ± 0,0005*,**,*** 2,48 ± 0,3 3,44 ± 0,47** Ba 0,4 ± 0,05 0,59 ± 0,058**,*** 0,002 ± 0,0006 0,001 ± 0,0006**,*** Tl 0,01 ± 0,0024 0,00008 ± 0,00002*,**,*** Примечание: * – статистически значимые различия по ранговому критерию Wald-Wolfowitz;

** – статистически значимые различия по ранговому критерию Колмогорова Смирнова;

*** – статистически значимые различия по ранговому критерию Манна-Уитни.

При анализе содержания токсичных элементов, выявлено снижение уров ня кадмия, свинца и талия, и повышение уровня бария в лобковых волосах у мужчин с патоспермией по сравнению с группой контроля (табл. 6). Так же установлены более низкие уровни алюминия, кадмия, свинца, талия и более высокие уровни ртути, бериллия и бария в сперме у мужчин с патоспермией, по сравнению с группой контроля.

Для анализа внутри- и межсистемных отношений в группе здоровых мужчин и пациентов с патоспермией был проведен корреляционный анализ.

Проведенные исследования показали, что в группе пациентов с патоспермией межсистемные взаимосвязи претерпевают значительные изменения. В группе бесплодных мужчин отмечены отрицательные корреляционные взаимосвязи между показателями гормонально-метаболических систем и микроэлемен тами: I (сперма) – ПРЛ (r = –0,79, p 0,012), Cu (сперма) – св.Т3 (r = –0,59, p 0,019), Ni (сперма) – Т (r = –0,78, p 0,026), Si (лоб. волосы) – Т4 (r = –0,66, p 0,027), Si (лоб. волосы) – 17-ОН-ПГ (r = –0,7, p 0,015), Pb (сперма) – ЛГ (r = –0,8, p 0,013), Be (лоб. волосы) – ЛГ (r = –0,78, p 0,026), Ag (сперма) – Т (r = –0,65, p 0,028) и положительные корреляционные взаимосвязи: Mo (лоб.

волосы) – ПРЛ (r = 0,78, p 0,02), Br (лоб. волосы) – ДГА (r = 0,6, p 0,015), Be (лоб. волосы) – ФСГ (r = 0,97, p 0,014), Pb (лоб. волосы) Дв. св (r = 0,59, p 0,013).

Таким образом, в группе пациентов с патоспермией отсутствуют меж системные взаимосвязи между показателями гормонально-метаболической системы и микроэлементного статуса, характерные для группы контроля и возникают дополнительные корреляционные связи, свидетельствующие о переходе функционирования этих систем на иной уровень.

Применение дискриминантного анализа позволило выявить наиболее ин формативные показатели у мужчин с патоспермией ими оказались показатели гормональной системы и элементного статуса: свободные Т3 и Т4, ФСГ, Mg, Rb, Mn, Cr, Zn.

Уравнения канонической величины для гормональной системы и элемент ного статуса имеют следующий вид:

К1 = –1,4 + 1,049 св.Т3 – 0,023 Т4 – 0,152 ФСГ.

К2 = 5,58 – 0,105 Mg – 19,65 Pb + 2,77 Mn – 116,32 As – 2,69 Cr – – 0,008 Zn.

Получены координаты центров:

для К1: контрольной группы мужчин – (+1,16), для группы мужчин с пато спермией – (–1,45). Граничным значением для отнесения в группы является величина: –0,12.

для К2: контрольной группы мужчин – (–1,61), для группы мужчин с пато спермией – (+1,45). Граничным значением для отнесения в группы является величина: –0,08.

Точность правильной классификации мужчин по статусу фертильности с использованием данных уравнений составила соответственно 93,0 и 97,0 % Таблица Оценка эффективности дискриминантного анализа показателей для диагностики нарушений фертильности у мужчин D2 97,0 % 9, 93,0 % 7, На основании вышеизложенного была предложена концептуальная схема изменений состояния гормонально-метаболических систем и микроэлемент ного статуса у мужчин с патоспермией, отражающая некоторые стороны патогенеза данного патологического состояния.

I* As* Se* Hg,Ba* Рис. 1. Концептуальная схема изменений состояния гормонально-метаболических систем и микроэлементного статуса у мужчин с патоспермией. * – соб ственные данные.

ВыВОДы 1. Частота патоспермии среди обследуемых мужчин из бесплодных су пружеских пар составила 49,0 %, включая астенозооспермию у 19 %, олиго зооспермию у 14 %, тератозооспермию у 11 % и аспермию у 5 %.

2. Пациенты с патоспермией характеризуются относительным повы шением уровня пролактина в сыворотке крови (389,3 ± 60,4 мЕд/мл, против 275,7 ± 22,8 мЕд/мл, р = 0,000001), повышением концентрации ФСГ (5,4 ± 0, мЕд/мл, против 2,0 ± 0,29 мЕд/мл, р = 0,000021), как в подгруппе с олиго спермией, так и в подгруппе с астенозооспермией, в сравнении с группой фертильных мужчин.

3. В группе мужчин с патоспермией определяется значимое снижение концентрации ДГЭАС в сыворотке крови в сравнении с его уровнем в кон трольной группе (5,97 ± 0,46 мкмоль/л против 6,3 ± 0,9 мкмоль/л, р = 0,002), в основном, за счет пациентов с астенозооспермией (5,9 ± 0,9 мкмоль/л против 6,3 ± 0,9 мкмоль/л соответственно, р = 0,008).

4. Тиреоидная функция у обследованных мужчин с патоспермией (от носительно группы фертильных мужчин) характеризуется повышением (в пределах референтных значений) Т3 в сыворотке крови (2,5 ± 0,12 нМ против 1,7 ± 0,07 нМ, р = 0,004) ), при снижении свободных фракций Т3 (3,6 ± 0,12 пМ против 4,9 ± 0,12 пМ, р (Т) = 0,000001) и увеличения уровня Т4 (134,7 ± 4,9 нМ против 99,7 ± 4,7 нМ, р = 0,000005 как при олигоспермии, так и при астено зооспермии.

5. У мужчин с патоспермией уровень ДК в сыворотке крови повы шен относительно контрольных значений (1,53 ± 0,12 мкмоль/л против 0,81 ± 0,04 мкмоль/л, р = 0,00001), при отсутствии существенных различий уровней ТБК-АП.

6. Общая антиокислительная активность сыворотки крови у мужчин с патоспермией в сравнении с группой контроля отличается большей вариа бельностью (р (F) = 0,0007) при отсутствии существенных различий уровней токоферола, ретинола, окисленного и восстановленного глутатиона и актив ности СОД.

7. Элементный состав у пациентов с патоспермией отличается значимым снижением содержания I, Se, As, B и Li в волосах, а также – снижением содер,,, жания Fe, I, As, Ni, в сперме от значениий в группе контроля и повышением со,,,, держания токсических элементов – Ва в волосах, а также – Ва, Hg в сперме.

8. У пациентов с патоспермией, в отличие от фертильных мужчин, вы явлены положительные корреляционные связи между уровнями токсических элементов (Pb, Be, Ba) и продуктами ПОЛ;

отрицательные корреляционные связи между содержанием I и уровнем пролактина в сыворотке крови, при этом отсутствуют отрицательная корреляционная зависимость между As и пролактином и положительная – между As и ДГЭАС.

9. Установлено, что наиболее информативными показателями гормонально метаболической системы и микроэлементами, позволяющими прогнозировать нарушение репродуктивной функции у мужчин являются: гормоны щитовид ной железы – св.Т3 и Т4, гормон гипофиза ФСГ и микроэлементы Mg, Rb, Mn, Cr, Zn.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации 1. Нарушение репродуктивного здоровья и репродуктивного потенциала в современных условиях Восточной Сибири / Л.И. Колесникова, Л.В. Сутурина, А.В. Лабыгина, А.В. Сафроненко и др. // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. – 2007. – № (54). – С. 41–43.

2. Характеристика элементного состава волос мужчин и женщин с нару шениями репродуктивной функции / Л.В. Сутурина, О.А. Громова, А.В. Сафро ненко и др. // XIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», Москва, 3–7 апреля 2006. – С. 297.

3. Эпидемиология бесплодия и перспективы развития ВРТ в Иркутской области / Л.В. Сутурина, Н.В. Протопопова, А.В. Сафроненко и др. // XVII ежегодная международная конференция РАРЧ «Репродуктивные технологии сегодня и завтра», Казань, 6–8 сентября 2007. – С. 10–11.

4. Роль нарушений гормонально-метаболических процессов в патоге незе бесплодия / А.В. Лабыгина, Л.В. Сутурина, А.В. Сафроненко и др. // Всероссийская конференция «Проблемы медико-демографического развития и воспроизводства населения в России и регионах Сибири», Иркутск, 2007.

– С. 134–136.

5. Сафроненко А.В. Особенности элементного статуса мужчин с пато спермией / А.В. Сафроненко, Л.В. Сутурина // Забайкальский медицинский вестник. – 2008. – С. 21.

6. Взаимосвязь нейро-эндокринных нарушений и изменений элементного состава волос и спермы у мужчин из бесплодных супружеских пар / А.В. Саф роненко, Л.В. Сутурина, Л.И. Колесникова, О.А. Громова // Забайкальский медицинский вестник. – 2008. – С. 7–9.

СпиСОК иСпОльзОВАННыХ СОКРАЩЕНий АОА – антиокислительная активность АОЗ – антиоксидантная защита ГПО – глутатионпероксидаза ГР – глутатионредуктаза ГТ – гонадотропины ДГЭАС – дигидроэпиандростерон-сульфат ДГТ – 5a-дигидротестостерон ДК – диеновые коньюгаты Дв. св – двойные связи Корт. – кортизол КД и СТ – кетодиены и сопряженные триены ЛГ – лютеинизирующий гормон МДА – малоновый диальдегид МЕ – международные единицы МЭ – микроэлементы ОАА – общая анитоксидантная активность ПРЛ – пролактин ПОЛ – перекисное окисление липидов РМК – реактивные метаболиты кислорода Св. Т3 – свободный Т СОД – супероксиддисмутаза СРО – свободнорадикальное окисление Т – тестостерон ТБК – тиобарбитуровая кислота ТБК-АП – ТБК-активные продукты перекисного окисления ТТГ – тиреотропный гормон УЗИ – ультразвуковое исследование ФСГ – фолликулостимулирующий гормон GSH – глутатион восстановленный GSSG – глутатион окисленный Se-Cys – селен-цистеин 17-ОН-ПГ – 17-ОН-прогестерон Подписано в печать 17.11.2008. Бумага офсетная. Формат 60х841/16.

Гарнитура Таймс. Усл. печ. л. 1, Тираж 100 экз. Заказ № 26608.

РИО НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН (Иркутск, ул. Борцов Революции, 1. Тел 29–03–37. Email: arleon@rol.ru)

 

Похожие работы:


 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.