Анализ взаимосвязи генов-кандидатов хронической обструктивной болезни легких с клиническими проявлениями болезни у татар и русских западной сибири
На правах рукописи
СЕИТОВА Гульнара Наримановна АНАЛИЗ ВЗАИМОСВЯЗИ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ С КЛИНИЧЕСКИМИ ПРОЯВЛЕНИЯМИ БОЛЕЗНИ У ТАТАР И РУССКИХ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.00.15 - генетика 14.00.43 – пульмонология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Томск – 2004
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего про фессионального образования «Сибирский государственный медицинский универси тет» МЗ РФ и ГУ НИИ медицинской генетики Томского научного центра СО РАМН, г. Томск Научные руководители: академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Пузырев Валерий Павлович кандидат медицинских наук, доцент Букреева Екатерина Борисовна
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Назаренко Людмила Павловна доктор медицинских наук, профессор Зарипова Татьяна Николаевна
Ведущая организация: Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск
Защита состоится «» _ 2004 года в час. мин. на заседании дис сертационного совета К 001.045.01 при ГУ НИИ медицинской генетики Томского научного центра СО РАМН по адресу: 634050 г. Томск, Набережная реки Ушайки, д.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ медицинской генетики Томского научного центра СО РАМН, г. Томск
Автореферат разослан «_» «_» 2004 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук А.Н. Кучер ВВЕДЕНИЕ Актуальность.
Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) - широко распространенное за болевание бронхо-легочной системы, которое приводит к существенному снижению ка чества жизни, обуславливает раннюю инвалидизацию и высокую смертность больных (Чучалин, 2000;
GOLD, 2003). Несмотря на значимость проблемы, до сих пор нет аде кватных методов диагностики ХОБЛ, в результате чего активная терапия начинается на поздней стадии развития заболевания, когда имеющиеся в арсенале средства ле чения уже не могут остановить прогрессирование болезни (ХОБЛ. Федеральная про грамма, 1999;
Чучалин, 2000). Поэтому разработка современных доступных и досто верных методов, позволяющих диагностировать заболевание на раннем этапе разви тия, формировать группы риска с целью проведения первичной профилактики раз вития ХОБЛ, а также прогнозировать особенности течения заболевания является одной из актуальных проблем современной пульмонологии.
Перспективными для этих целей являются исследования, посвященные изуче нию наследственной компоненты ХОБЛ, которые наиболее интенсивно стали про водиться с начала 21 века (Викторова с соавт., 2003;
Ивчик с соавт., 2001;
Корытина с соавт., 2004;
Ходжаянц, 2004;
Янбаева с соавт., 2004;
Янчина с соавт., 2004;
Joos et al., 2002;
Lomas et al., 2001;
Sakao et al., 2002;
Sanford et al., 2002;
Silverman et al., 2002). Однако, до сих пор единственным доказанным генетическим фактором риска развития болезни является тяжелая врожденная 1-антитрипсиновая недостаточ ность (ААТН) - аутосомно-рецессивное заболевание, обусловленное мутацией в ге не PI, частота которого невелика и составляет 1-2% от общего числа больных ХОБЛ (Гембицкая, 1976;
Пузырев с соавт., 2003;
Carrell et al., 1996;
GOLD, 2003). Исследо вания других генов-кандидатов ХОБЛ на сегодняшний день только начаты, немно гочисленны, а их результаты противоречивы.
Среди большого числа генов, которые могут принимать участие в формирова нии предрасположенности к развитию ХОБЛ, наше внимание привлекли гены фак тора некроза опухолей-альфа (TNF), интерлейкина-8 (IL8), нейрональной и эндоте лиальной синтаз оксида азота (NOS1 и NOS3 соответственно) и ген макрофагального протеина 1, ассоциированного с естественной резистентностью (NRAMP1). Роль белковых продуктов этих генов в патогенезе ХОБЛ очевидна. Известно, что ключе вым моментом формирования ХОБЛ является хроническое воспаление, в развитии которого существенную роль играют такие медиаторы, как интерлейкин-8 (ИЛ8), фактор некроза опухолей-альфа (ФНО-), являющиеся мощными факторами адгезии и хемотаксиса нейтрофилов (Потапнев, 1995;
Sibille et al., 1993), а также эндогенный оксид азота (NO), участвующий в регуляции тонуса бронхиального дерева (Невзо рова с соавт., 1998;
Kharitonov et al., 2001;
Ricciardolo, 2003). Кроме того, учитывая, что одним из этиологических факторов развития и обострения ХОБЛ является инфек ция, обоснованным представляется изучение гена NRAMP1, который участвует в оп ределении чувствительности или невосприимчивости к некоторым инфекционным агентам (Govoni et al., 1998).
Цель исследования: Оценить популяционную распространенность и взаимо связь аллельных вариантов генов-кандидатов подверженности к бронхо-легочной патологии (TNF, IL8, NOS1, NOS3 и NRAMP1) с клиническими проявлениями хро нической обструктивной болезни легких у сибирских татар и русских, проживаю щих на территории Томской области.
Задачи исследования:
1. Изучить изменчивость генов фактора некроза опухолей-альфа (TNF), интерлей кина-8 (IL8), гена макрофагального протеина, ассоциированного с естественной резистентностью (NRAMP1) и группы генов конститутивных синтаз оксида азо та (NOS1 и NOS3).
2. Провести анализ ассоциаций аллельных вариантов, включенных в исследование генов, с хронической обструктивной болезнью легких и ее клиническими про явлениями.
3. Оценить взаимосвязь аллельных вариантов генов TNF, IL8, NOS1, NOS3 и NRAMP1 с количественными признаками, патогенетически значимыми для хро нической обструктивной болезни легких.
Научная новизна. Впервые проведено исследование генетической изменчиво сти генов TNF, IL8, NOS1, NOS3 и NRAMP1 у сибирских татар и гена IL8 у русских;
изучена вовлеченность полиморфизмов генов NOS1, IL8 и NRAMP1 в формирование предрасположенности к ХОБЛ;
проведено исследование взаимосвязи полиморфных вариантов генов TNF, IL8, NOS1, NOS3 и NRAMP1 с качественными и количествен ными признаками, патогенетически значимыми в развитии заболевания. Установле ны межэтнические различия в предрасположенности к ХОБЛ и клинических осо бенностях течения заболевания. Показана связь генов TNF (полиморфизм -308G/A), NOS1 (C/T полиморфизм) и NOS3 (полиморфизмы VNTR, 774C/T, -691C/T и 894G/T) с уровнем активности системы протеиназ;
генов NRAMP1 (полиморфизмы D543N и 469+14G/C) и NOS3 (полиморфизмы VNTR и 894G/T) – с активностью ин гибиторов протеиназ;
гена TNF (полиморфизм -308G/A) – с уровнем ФНО-.
Практическая значимость работы. Сведения о вкладе наследственности в формирование ХОБЛ и описание структуры наследственной компоненты в терми нах конкретных генов, обнаруженные взаимосвязи аллельных вариантов генов, уча ствующих в регуляции систем протеиназ, их ингибиторов и провоспалительных ци токинов, могут быть использованы в создании исследовательских и диагностиче ских панелей маркеров (биочипов). Полученные молекулярно-генетические данные могут быть учтены при разработке различных профилактических программ не толь ко на популяционном уровне, но и стать основой индивидуализированной профи лактики и лечения ХОБЛ. Результаты исследования широко используются в педаго гическом процессе у студентов-медиков ГОУВПО «Сибирский государственный медицинский университет» МЗ РФ и в последипломном образовании врачей для ил люстрации достижений геномной медицины в понимании роли наследственности в возникновении и развитии широко распространенных заболеваний человека.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. В семьях пробандов, страдающих хронической обструктивной болезнью легких, как русской, так и татарской национальностей, по сравнению с семьями кон трольных выборок имеет место накопление случаев хронического бронхита.
2. Сибирские татары и русские, проживающие на территории Томской области, отличаются по частотам аллельных вариантов генов синтаз оксида азота (NOS1), ин терлейкинов (IL8) и макрофагального белка, ассоциированного с естественной рези стентностью (NRAMP1) от других изученных популяций мирового народонаселения.
3. В структуре генетической компоненты предрасположенности к хронической обструктивной болезни легких и клинических особенностей течения заболевания имеется ряд межэтнических особенностей. У русских развитие хронической об структивной болезни легких ассоциируется с геном NOS3 (полиморфизм 894G/T), у сибирских татар – с генами TNF (полиморфизм -308G/A) и NOS3 (VNTR полимор физм). Возраст начала заболевания и степень обструкции дыхательных путей связа ны с аллельными вариантами гена NRAMP1 (полиморфизмы 1465-85G/A и D543N соответственно) у представителей обеих национальностей;
С/Т полиморфизм гена NOS1 связан с возрастом начала болезни только у татар.
4. Связь изученных полиморфных вариантов генов-кандидатов хронической обструктивной болезни легких с уровнем активности некоторых биохимических и иммунологических показателей, патогенетически значимых в формировании забо левания, отличается у русских и татар. У русских уровень ФНО- ассоциируется с одноименным геном TNF (полиморфизм -308G/A);
активность протеиназ связана с генами NOS1 (С/Т полиморфизм), NOS3 (полиморфизмы VNTR, 774С/Т, -691С/Т) и TNF (полиморфизм -308G/A);
антипротеиназная активность – с генами NRAMP (полиморфизмы D543N, 469+14G/C) и NOS3 (полиморфизмы VNTR, 894G/T). У та тар ген NRAMP1 (полиморфизм D543N) ассоциируется с активностью протеиназ, а ген NOS3 (полиморфизм 894G/T) связан с активностью, как протеиназ, так и их ингибиторов.
Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на 4-ом Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2003);
13-ом Национальном конгрессе по болезням ор ганов дыхания (Санкт Петербург, 2003);
5-ом Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2004);
Межлабораторном науч ном семинаре в ГУ НИИ медицинской генетике ТНЦ СО РАМН (Томск, 2004);
14 ом ежегодном Европейском респираторном конгрессе (Глазго, Шотландия, 2004).
Результаты работы отмечены дипломом 1-ой степени и именной стипендией на 13 ом Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Санкт Петербург, 2003).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 работ, из них 4 - в цен тральной печати.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав (Обзор литерату ры, Материал и методы, Результаты и обсуждение), заключения, выводов и списка литературы. Данные проиллюстрированы 54 таблицами и 13 рисунками. Список ли тературы включает 310 источников, из них 220 зарубежных.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Всего было обследовано 445 человек русской и татарской национальности, проживающих в Томской области. По результатам обследования были сформирова ны группы больных хронической обструктивной болезнью легких и группы сравне ния, дифференцированные по этнической принадлежности (табл. 1). Обязательным условием включения в группы было информированное согласие исследуемого. Кли ническое обследование и диагностику ХОБЛ проводили сотрудники кафедры внут ренних болезней педиатрического факультета ГОУВПО «Сибирский государствен ный медицинский университет» МЗ РФ (заведующая – д. м. н., профессор Л. И.
Волкова). Диагноз у пациентов был поставлен на основании наличия общепринятых критериев ХОБЛ (GOLD, 2003). Условиями для включения в контрольную группу были: отсутствие кашлевого анамнеза;
отсутствие в течение предшествующих 3-х месяцев острых респираторных заболеваний;
нормальные показатели функции внешнего дыхания по данным спирометрии.
Таблица Характеристика исследуемых групп Выборки Больные Контроль русские татары русские татары Анамнез (72 чел.) (50 чел.) (189 чел.) (134 чел.) Средний возраст (лет) 56,4+12 56,3+16 50,0+17 55,1+17, Длительность ХОБЛ (лет) 17,2+12,4 23,7+13,7 - Настоящие курильщики 41 (56,9%) 27 (54%) 104 (55,0%) 72 (53,7%) Бывшие курильщики 6 (8,4%) 4 (8%) 8 (4,2%) 4 (3,0%) Некурящие 25 (34,7%) 19 (38%) 77 (40,8%) 58 (43,3%) Имеют проф. вредности 52 (72,2%) 34 (68,0%) 123 (65,0%) 92 (68,7%) Обследование включало сбор семейного анамнеза и использование различных клинико-лабораторных методов. Исследование функции внешнего дыхания проводи лось в период клинической ремиссии заболевания;
данные спирометрии анализиро вали по следующим показателям: форсированная жизненная емкость легких (ФЖЕЛ), объем форсированного выдоха за 1 секунду (ОФВ1), отношение ОФВ1/ФЖЕЛ (Индекс Тиффно). Биохимические и иммунологические методы вклю чали определение активности протеиназ (эластазы, трипсиноподобных протеиназ);
ингибиторов протеиназ (1-протеиназного ингибитора, 2-макроглобулина, кислото стабильных ингибиторов);
количественное определение ФНО- и ИЛ8 в сыворотке крови и мокроте в период обострения и клинической ремиссии ХОБЛ (мокрота ис следовалась только у больных ХОБЛ). Микробиологическое исследование мокроты (проводилось только у больных русской национальности) включало: бактериологи ческое исследование с определением концентрации бактерий в 1 мл;
определение титров IgG, IgM к Ch. pneumoniae и M. pneumonia;
определение фрагментов генома этих микроорганизмов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
С помощью молекулярно-генетических методов исследовано 12 полиморфных вариантов 6 генов-кандидатов ХОБЛ: 2 полиморфизма гена 1-антитрипсина (PI), полиморфизма гена NOS3, 3 полиморфизма гена NRAMP1 и по 1 полиморфизму ге нов TNF, IL8 и NOS1. ДНК выделяли по стандартной неэнзиматической методике из лимфоцитов периферической крови (Маниатис, 1984;
Lahiri, 1992). Изучение поли морфных вариантов исследуемых генов проводили с помощью амплификации соот ветствующих участков генома методом ПЦР, используя структуру праймеров и па раметры температурных циклов, описанных в геномной базе данных (GDB) и лите ратуре (Dahl et al., 2001;
Hull et al., 2001;
Levecque et al., 2003;
Novoradovsky et al., 1999;
Patel et al., 2000;
Yang et al., 2000).
В работе использованы стандартные методы биометрии. При описании генети ческих характеристик исследованных групп использовали следующие методы: рас пределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на со ответствие ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (РХВ) с помощью точно го теста Фишера (Вейр, 1995);
для сравнения частот аллелей между различными группами и для оценки связи качественных признаков с исследуемыми генетиче скими маркерами использовали критерий 2 с поправкой Йейтса на непрерывность;
для оценки связи количественных признаков - непараметрические тесты Манна Уитни и Краскела-Уоллиса.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Клинико-генеалогическое исследование больных ХОБЛ. По данным генеа логического анамнеза была собрана информация о состоянии здоровья родственни ков 1-3-й степени родства пробандов, страдающих ХОБЛ (русских – 839, татар 955), и пробандов контрольных групп (русских – 1205, татар - 2552). Установлен достоверно (p0,01) более высокий уровень заболеваемости различными формами хронического бронхита (ХБ) у родственников 1-ой (у представителей обеих этниче ских групп) и 2-ой (только у русских) степеней родства больных пробандов по срав нению с родственниками индивидуумов контрольных групп (табл. 2). Общая часто та легочной патологии, включая туберкулез, опухолевые заболевания легких в рас сматриваемых группах существенно не различалась (табл. 2). У родителей пробан дов с ХОБЛ статистически значимо более часто (p0,001) регистрируются случаи ХБ по сравнению с родителями пробандов контрольных групп.
Частоты аллелей исследованных генов в двух этнических группах Томской области – сибирских татар и русских. У здоровых индивидуумов (контрольные выборки) в популяциях сибирских татар и русских, среди изученных высокополи морфных систем не показано отклонений в распределении наблюдаемых генотипов от ожидаемых при РХВ для большинства исследованных полиморфизмов (за ис ключением VNTR и 894G/T полиморфизмов гена NOS3 и полиморфизма 1465 85G/A гена NRAMP1) как у русского населения (табл. 3), так и у сибирских татар (табл. 4). Для VNTR полиморфизма гена NOS3 показано отклонение распределений генотипов от ожидаемых при РХВ за счет недостатка гетерозиготных носителей в обеих этнических группах. Для полиморфизма 1465-85G/A гена NRAMP1 отмечено отклонение распределений генотипов от ожидаемых при РХВ также в обеих этниче ских группах, однако, если у русских имел место недостаток гетерозигот, то у пред ставителей татарского этноса наблюдался избыток гетерозиготных носителей. Для полиморфизма 894G/T гена NOS3 показано отклонение распределений генотипов от ожидаемых при РХВ только у татар за счет избытка гетерозигот.
Распределение частот аллелей полиморфных вариантов -308G/А гена TNF, D543N гена NRAMP1 и всех исследованных полиморфизмов гена NOS3 как у сибир ских татар, так и у русских находится в границах частот аллелей, полученных для других изученных популяций (Коршунова с соавт., 2004;
Хуснутдинова с соавт., 2003;
Bellamy et al., 1998;
Huang et al., 1997;
Mkel et al., 2001;
Yip et al., 2003).
Таблица Распространенность легочной патологии у родственников пробандов, больных ХОБЛ, и здоровых индивидуумов Родственники пробандов Русские 1-ой степени родства 2-ой степени родства 3-ей степени родства Больные Контроль Больные Контроль Больные Контроль р р р N (%) N (%) N (%) N (%) N (%) N (%) Всего человек 310 534 414 500 115 Частота легоч ной патологии (кроме ХБ) у 5 (1,6) 17 (3,2) 0,2 7 (1,7) 5 (1,0) 0,5 0 1 (0,6) 0, родственников –N Наличие ХБ у родственников 18 (3,4) 2 (0,4) 8 (1,6) 0 1 (0,6) 0 0, 0,00001 0, -N Татары 1-ой степени родства 2-ой степени родства 3-ей степени родства Больные Контроль Больные Контроль Больные Контроль р р р N (%) N (%) N (%) N (%) N (%) N (%) Всего человек 340 875 481 979 134 Частота легоч ной патологии 9 (2,6) 22 (2,5) 0,9 9 (1,9) 9 (0,9) 0,2 3 (0,4) 4 (0,6) 0, (кроме ХБ) у родственников Наличие ХБ у 16 (1,8) 2 (0,2) 1 (0,1) 3 (0,3) 0,8 0 0 0, родственников Примечание: N – абсолютное число больных;
p – достигнутый уровень значимости для точного теста Фишера Таблица Изменчивость полиморфных вариантов исследуемых генов-кандидатов в обследованных группах русской национальности Контроль Больные Поли- Гено 2 Частота 2 Частота hо hо Ген морфизм типы N.O. N.O.
he he d.f.=1 аллеля d.f.=1 аллеля GG 133 1,18 0,251 0,49 0, TNFA -308G/A AG А=0,16 А=0, 47 p0,05 0,273 p0,05 0, AA 7 AA 36 0,37 0,520 0,002 0, IL8 -251A/T AT А=0,46 А=0, 93 p0,05 0,497 p0,05 0, TT 50 CC 69 0,01 0,475 1,51 0, C/T Т=0,38 Т=0, CT 86 NOS p0,05 0,471 p0,05 0, TT 26 AA 19 0,219 3,12 0, 21, NOS3 VNTR AB А=0,21 А=0, 41 0,333 p0,05 0, p0, BB 127 CC 117 2,94 0,291 0,17 0, NOS3 774C/T CT Т=0,21 Т=0, 53 p0,05 0,334 p0,05 0, TT 12 CC 124 0,54 0,301 1,19 0, NOS3 -691C/T CT Т=0,17 Т=0, 55 p0,05 0,285 p0,05 0, TT 4 GG 61 894G/ 1,61 0,450 2,88 0, Т=0,45 Т=0, GT 85 NOS T p0,05 0,496 p0,05 0, TT 43 GG 170 0,42 0,091 0, 11, NRAMP1 D543N GA А=0,05 А=0, 17 p0,05 0,087 0, p0, AA 0 GG 124 469+14 2,69 0,312 0,02 0, С=0,17 С=0, GC 57 NRAMP G/C p0,05 0,278 p0,05 0, CC 2 GG 98 1465-85 0,341 0,35 0, 5, А=0,29 А=0, AG 62 NRAMP G/A 0,413 p0,05 0, p0, AA 22 Примечание: здесь и в табл. 4: N.O. – наблюдаемая численность генотипов;
крите рий 2 использован для оценки соответствия наблюдаемого распределения геноти пов ожидаемому исходя из равновесия Харди-Вайнберга;
d.f. – число степеней сво боды;
ho и he – соответственно наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность.
Таблица Изменчивость полиморфных вариантов исследуемых генов-кандидатов в обследованных группах татарской национальности Контроль Больные Поли- Гено hо hо 2 Ген Частота Частота морфизм типы N.O. N.O.
he he аллеля d.f.=1 аллеля d.f.= GG 107 0,15 0,187 2,41 0, TNFA -308G/A А=0,11 А=0, AG 25 p0,05 0,193 p0,05 0, AA 2 AA 26 1,20 0,443 2,36 0, -251A/T А=0,43 А=0, AT 54 IL p0,05 0,491 p0,05 0, TT 42 CC 32 0,75 0,537 2,8 0, C/T Т=0,49 Т=0, CT 72 NOS p0,05 0,500 p0,05 0, TT 30 AA 8 22, 0,128 0, 7, VNTR p0,00 А=0,12 А=0, AB 17 NOS 0,217 0, p0, BB 108 CC 89 3,65 0,269 0,12 0, 774C/T Т=0,20 Т=0, CT 36 NOS p0,05 0,322 p0,05 0, TT 9 CC 78 0,03 0,358 0,55 0, NOS3 -691C/T Т=0,24 Т=0, CT 48 p0,05 0,364 p0,05 0, TT 8 GG 44 0,560 0,74 0, 4, 894G/T Т=0,39 Т=0, GT 75 NOS 0,477 p0,05 0, p0, TT 15 GG 113 0,88 0,150 1,06 0, NRAMP1 D543N А=0,08 А=0, GA 20 p0,05 0139 p0,05 0, AA 0 GG 79 469+14 6,43 0,403 1,15 0, С=0,21 С=0, GC 54 NRAMP G/C p0,05 0,331 p0,05 0, CC 1 GG 49 1465-85 0,552 0,27 0, 5, AG 74 А=0,36 А=0, NRAMP G/A 0,460 p0,05 0, p0, AA 11 Распространенность аллелей других исследованных полиморфизмов у русских и татар отличается от полученных данных для представителей иных этнических групп. Частоты аллелей 469+14С и 1465-85А гена NRAMP1 как у сибирских татар, так и у русских выше по сравнению с представителями монголоидной и негроидной рас (Bellamy et al., 1998;
Maliarik et al., 2000;
Yang et al., 2000;
Yip et al., 2003). Рас пространенность аллеля -251А гена IL8 у русских и татар совпадает с частотой алле ля у европейцев (англичан), но в то же время статистически значимо ниже по срав нению с жителями Африки (Hull et al., 2001). Частота аллеля Т полиморфизма С/Т гена NOS1 у русских совпадает с частотой данного аллеля у французов (Levecque et al., 2003), в то время как у сибирских татар – существенно выше. Специфика в час тотах аллелей изученных сибирских популяций может объясняться как особенно стями этногенеза, так и значимостью факторов популяционной динамики.
Ассоциация полиморфных вариантов исследованных генов-кандидатов с развитием ХОБЛ. С целью исключения больных с врожденной ААТН из выборки пациентов, страдающих ХОБЛ, было проведено генотипирование двух наиболее распространенных дефицитных аллелей гена PI (S и Z). Выявлено 2 гетерозиготных носителя по аллелю S, что позволило оставить выборки больных без изменений, по скольку при данном генотипе (MS) количество синтезируемого 1-протеиназного ингибитора достаточно для защиты легочной ткани от воздействия эндогенных эла стаз (Гембицкая, 1976;
Cox, 1989).
Анализ по всем высокополиморфным вариантам исследованных генов (за ис ключением VNTR полиморфизма гена NOS3 у татар) среди больных ХОБЛ не вы явил отклонения распределений наблюдаемых генотипов от ожидаемых при РХВ у представителей обеих этнических групп (табл. 3, 4). У татар по VNTR полиморфиз му наблюдалось отклонение от РХВ за счет недостатка гетерозиготных носителей.
Как у русских, так и у татар не установлено статистически значимых различий в распределении генотипов и частот аллелей между группами больных ХОБЛ и пред ставителями контрольных выборок (р0,1) по аллельным вариантам генов NOS1, IL8, NRAMP1, а также полиморфизмам -691С/Т и 774С/Т гена NOS3. Статистически значимые различия (р0,05) были установлены для полиморфизмов -308G/A гена TNF и VNTR гена NOS3 у татар и полиморфизма 894G/T гена NOS3 у русских. По полиморфизму -308G/A гена TNF у больных ХОБЛ татарской национальности пре обладали гетерозиготные носители (AG) по сравнению с контрольной группой. При анализе аллельных вариантов гена NOS3 (894G/T у русских и VNTR у татар) уста новлены достоверные различия в распределении генотипов и аллелей между боль ными и индивидуумами контрольных групп: более высокие частоты 894Т аллеля (ТТ генотипа) у русских больных и А аллеля (АА и АВ генотипов) VNTR полимор физма у больных татарской национальности. С учетом того, что T аллель полимор физма 894G/Т (Kharitonov et al., 2001;
Ricciardolo et al., 2003) и А аллель VNTR по лиморфизма (Wang et al., 1997) связаны с более низким синтезом оксида азота, иг рающего роль эндогенного бронходилататора, можно сделать вывод о функцио нальной значимости данных аллелей в развитии ХОБЛ.
Полученные данные свидетельствуют о межэтнических различиях в структуре предрасположенности к ХОБЛ. Отсутствие статистически значимой ассоциации с ХОБЛ других полиморфизмов исследованных генов, тем не менее, не исключает возможного вклада данных полиморфных вариантов в особенности течения заболе вания, а также их связь с наличием и сроками появления осложнений.
Ассоциация генов-кандидатов с клиническими особенностями ХОБЛ. В ис следование были включены следующие клинические характеристики течения ХОБЛ:
возраст начала заболевания, степень тяжести, этиология обострения ХОБЛ. Установ лена ассоциация срока манифестации ХОБЛ с полиморфизмом 1465-85G/A гена NRAMP1 в обеих этнических группах. При этом у русских, являющихся носителями генотипа GG в среднем возраст начала заболевания - 34 года, в то время как у лиц с генотипами GA и AA наблюдается более поздний срок манифестации ХОБЛ – в сред нем в 43 года. У татар, наоборот: у носителей GG генотипа – 44 года, AA и АG гено типов – 32 года. Кроме того, у татар возраст начала ХОБЛ связан с полиморфизмом С/Т гена NOS1: у носителей СС генотипа данного гена средний возраст начала забо левания 28 лет, а СТ и ТТ генотипов – 43 года.
Как у русских, так и у татар установлена связь полиморфизма D543N гена NRAMP1 с ОФВ1 (р0,05), который, являясь одним из основных спирометрических показателей, отражает степень обструкции бронхов и, следовательно, степень тяже сти ХОБЛ. Более низкие значения показателя (средний ОФВ1 около 50%) ассоции руются с A аллелем в гомо- и гетерозиготном состоянии данного полиморфного ва рианта гена NRAMP1 (рис. 1).
РУССКИЕ ТАТАРЫ GG AA+GG GG AA+GG * * ОФВ1 (%) ОФВ1 (%) 20 10 0 Генотипы Генотипы Рис. 1. Ассоциация показателей функции внешнего дыхания (ОФВ1) с полиморфиз мом D543N гена NRAMP1 у больных ХОБЛ (*- р0,05).
Не установлено ассоциации аллельных вариантов исследованных генов с нали чием инфекционного агента как причины обострения ХОБЛ (согласно данным бак териологического исследования мокроты) у больных русской национальности.
Связь генов-кандидатов ХОБЛ с количественными признаками, патогене тически значимыми для развития заболевания. Патогенетически обоснованным является изучение ассоциации генов-кандидатов со следующими биохимическими и иммунологическими показателями сыворотки крови и мокроты у пациентов, стра дающих ХОБЛ: протеиназы (эластаза (Э), трипсиноподобные протеиназы (ТПП));
ингибиторы протеиназ (1-протеиназный ингибитор (1-ПИ), 2-макроглобулин (2-МГ), кислотостабильные ингибиторы (КСИ));
цитокины (ФНО- и ИЛ8).
Установлена связь полиморфизма -308G/A гена TNF с активностью протеиназ, протеиназных ингибиторов и уровнем ФНО- у больных ХОБЛ русской националь ности. Аллель А в гомо- и гетерозиготном состоянии ассоциируется с более низки ми средними показателями активности протеиназ в период обострения ХОБЛ: ТПП в сыворотке крови (80,36 нмоль х мин./мл*) и мокроте (0,76 нмоль х мин./мл) и Э в мокроте (0,64 нмоль х мин./мл). Кроме того, с этим же аллелем связана более низкая активность ингибиторов протеиназ 1-ПИ (0,25 иЕ/мл) и 2-МГ (0,03 иЕ/мл) в мок роте в период обострения заболевания (рис. 2). Полученные данные свидетельству ют об отсутствии компенсаторных механизмов адекватного ответа на повреждение в дыхательных путях, что приводит к затяжному течению воспалительного процесса.
Повышенный уровень ФНО- в сыворотке крови как в период обострения (193,80 пг/мл), так и в период ремиссии ХОБЛ (370,34 пг/мл) ассоциируется с гомо зиготным генотипом GG (p0,05). Суммируя, полученные результаты можно сде лать вывод, что полиморфизм -308G/А гена TNF у русских играет значимую роль в формировании ХОБЛ у русских.
GG AA+AG GG AA+AG 4 0, 3,5 0, нмоль х мин / мл 3 0, 2,5 0, иЕ / мл 2 0, 1,5 0, * 1 0, * 0,5 0, 0 Эластаза ТПП 1-ПИ 2-МГ Рис. 2. Средние уровни активности протеиназ и их ингибиторов в мокроте в период обострения ХОБЛ у русских с разными генотипами по гену TNF (полиморфизм -308G/A) (*- р0,05).
У татар-носителей GG генотипа гена TNF установлено статистически значимо (р0,05) более высокая активность протеиназ ТПП (99,51 нмоль х мин./мл) и Э (102,88 нмоль х мин./мл) в сыворотке крови в период ремиссии заболевания, что свидетельствуют о сохраняющейся системной воспалительной реакции организма.
Однако однозначно утверждать о функциональной значимости GG генотипа поли морфного варианта -308G/A гена TNF в отношении ХОБЛ в данной ситуации нель зя, так как показатели мокроты (Э и ТПП) в период клинической ремиссии болезни, которые более достоверно отражают течение воспалительного процесса в бронхи альном дереве (Дементьева, 2004), находятся в пределах нормальных показателей**.
Сходная картина у татар наблюдается и для полиморфизма -251А/Т гена IL8:
ТТ генотип ассоциируется с повышенной активностью ТПП в сыворотке крови в период ремиссии заболевания (108,11 нмоль х мин./мл);
p0,05 и не повышенным уровнем в мокроте (0,68 нмоль х мин./мл);
p0,05, что также позволяет предполо жить невысокую функциональную значимость аллельного варианта -251А/Т в пато генезе ХОБЛ у сибирских татар.
* - здесь и далее в скобках указаны средние значения показателя ** - здесь и далее за нормальные приняты показатели здоровых индивидуумов Связь С/Т полиморфизма гена NOS1 с количественными признаками, а именно, с показателями активности протеиназ в мокроте установлена только в русской этни ческой группе (табл. 5). У носителей СС генотипа отмечается в среднем более высо кая (p0,05) активность Э и ТПП в мокроте в период обострения заболевания. При этом, хотя полученные данные статистически незначимы (p0,05), необходимо при нять во внимание тот факт, что у носителей СС генотипа в период обострения ХОБЛ активность ингибиторов протеиназ 1-ПИ и 2-МГ остается практически без изме нений (не повышается), что позволяет сделать вывод, что С/Т полиморфизм гена NOS1 играет роль в патогенезе ХОБЛ у русских, ассоциируясь с дисбалансом в сис теме протеиназы/антипротеиназы за счет повышенной активности первых.
Таблица Средние уровни биохимических показателей в мокроте у русских, страдающих ХОБЛ, с разными генотипами по гену NOS1 (полиморфизм С/Т) Генотип CC CT+TT p Признак n M m n M m 1-ПИ_M1 15 0,37 0,18 26 0,31 0,23 0, 1-ПИ_M2 21 0,39 0,04 29 0,30 0,04 0, 2-МГ_M1 11 0,020 0,002 18 0,022 0,001 0, 2-МГ_M2 11 0,024 0,002 15 0,022 0,001 0, TПП_M1 14 2,45 2,17 23 1,04 0,77 0, TПП_M2 21 1,88 0,55 27 0,74 0,07 0, Э_M1 13 0,78 0,12 17 0,49 0,05 0, Э_M2 21 0,57 0,09 27 0,89 0,49 0, Примечание: здесь и в табл. 6-7: n – число обследованных;
M – среднее значение показателя;
m – стандартное отклонение. р – достигнутый уровень значимости для теста Манна-Уитни. М1 – мокрота при обострении;
М2 – мокрота вне обострения.
Все исследованные полиморфизмы гена NOS3 так или иначе оказались связаны с активностью протеиназ и их ингибиторов, как в сыворотке крови, так и в мокроте, не только при обострении, но и в период ремиссии ХОБЛ у представителей обеих этнических групп. Большее число полиморфизмов оказалось вовлечено в процесс регуляции у русских, меньшее - у татар.
У представителей русской этнической группы установлена ассоциация поли морфизмов VNTR (ВВ генотип), 774C/T (СТ и ТТ генотипы) и -691C/T (СТ и ТТ ге нотипы) с повышенными показателями активности протеиназы ТПП в мокроте в пе риод обострения заболевания (рис. 3), что является крайне неблагоприятным факто ром, так как повышенная активность протеиназ приводит к большему повреждению бронхиального дерева при ХОБЛ. У носителей альтернативных аллельных вариан тов данных полиморфизмов гена NOS3 активность ТПП в мокроте приближена к нормальным показателям. Кроме того, отмечается в среднем более высокая актив ность ТПП в сыворотке крови (p0,05) у носителей СТ и ТТ генотипов -691С/Т по лиморфизма и более низкая активность ингибитора протеиназ (КСИ) у носителей ВВ генотипа VNTR полиморфизма (p0,05) в период клинической ремиссии ХОБЛ.
Рис. 3. Средние уровни активности AA+AB (VNTR), CC (774C/T и -691C/T) ТПП в мокроте в период обострения BB (VNTR), CT+TT (774C/T и -691 C\T) заболевания ХОБЛ у русских с разны * ми генотипами по гену NOS3 (поли 3, * морфизмы VNTR, 774С/Т, -691С/Т) нмоль х мин / мл (*- р0,05).
2, * 1, На основании полученных данные можно сделать вывод о значимой роли 0, аллельных вариантов VNTR, 774C/T и -691C/T гена NOS3 в патогенезе ХОБЛ VNTR 774C/T –691C/T у русских.
Антипротеиназная активность сыворотки крови у представителей обеих этни ческих групп связана с 894G/T полиморфизмом гена NOS3 (p0,05). У русских гено тип ТТ данного полиморфизма ассоциируется с повышенной активностью протеи назного ингибитора 2-МГ в сыворотке крови в период ремиссии заболевания (3,68 иЕ/мл);
p0,05, но в мокроте уровень активности 2-МГ, тем не менее, сохра няется в пределах нормальных показателей (0,06 иЕ/мл);
p0,05, что на первый взгляд ставит под сомнение функциональную значимость 894G/T полиморфизма ге на NOS3 в отношении ХОБЛ у русских. Однако, совокупный анализ всех получен ных данных (в частности, ассоциация ТТ генотипа с развитием ХОБЛ) позволяет предположить значимую роль данного аллельного варианта гена NOS3 в формиро вании ХОБЛ у представителей русской этнической группы.
У татар носителей 894Т аллеля в гомозиготном состоянии отмечается повы шенная активность 2-МГ в период обострения ХОБЛ как в сыворотке крови (3,95 иЕ/мл);
p0,05, так и в мокроте (0,16 иЕ/мл);
p0,05. Высокая активность 2 МГ в данном случае является повреждающим фактором, так как избыток этого ин гибитора повышает пролиферативную активность клеток, приводя в итоге, к плос коклеточной метаплазии бронхиального эпителия (Binder et al., 2002). Кроме того, 894T аллель гена NOS3 у татар ассоциируется с более низкими показателями актив ности протеиназы ТПП, как в сыворотке крови, так и в мокроте, в период обостре ния ХОБЛ и вне его (рис. 4), отражая низкую ответную реакцию организма, что в данной ситуации также свидетельствует об аномальном течении воспалительного процесса. Таким образом, можно сделать вывод о функциональной значимости ал лельного варианта 894G/T гена NOS3 в патогенезе ХОБЛ у сибирских татар.
Ген NRAMP1 играет роль в изменении биохимических показателей, как у рус ских, так и у татар. Полиморфизм D543N ассоциируется с изменением активности ингибиторов протеиназ в период клинической ремиссии ХОБЛ в обеих этнических группах (1-ПИ в мокроте у русских и 2-МГ в сыворотке крови у татар) (табл. 6). У носителей аллеля А в гомо- и гетерозиготном состоянии данного полиморфного ва рианта гена NRAMP1 русской национальности отмечается статистически значимо более высокий уровень (p0,05) активности 1-ПИ в мокроте вне обострения, по сравнению с данными показателями мокроты у носителей GG генотипа, свидетель GG+GT TT GG+GT TT 110 1, 1, * нмоль х мин / мл нмоль х мин / мл 80 0, 50 0, 0, 0, 0 ТПП (обострение) ТПП (ремиссия) ТПП (обострение) ТПП (ремиссия) сыворотка мокрота Рис. 4. Средние уровни активности ТПП в сыворотке крови и мокроте при обостре нии и в период ремиссии ХОБЛ у татар с разными генотипами по гену NOS3 (поли морфизм 894G/T) (*- р0,05).
ствующее о продолжающемся местном воспалительном процессе на фоне клиниче ской ремиссии заболевания (Barnes, 1999), что также является неблагоприятным фактором течения ХОБЛ. У татар АА и AG генотипы полиморфизма D543N ассо циируются с повышенной активностью 2-МГ в сыворотке крови вне обострения (p0,05), указывая на сохраняющуюся системную воспалительную реакцию орга низма в период клинической ремиссии (табл. 6). Однако, в данной ситуации сложно судить о функциональной значимости полиморфизма D543N гена NRAMP1 в отно шении ХОБЛ, так как отсутствуют сведения об активности 2-МГ в мокроте.
Таблица Активность 1-ПИ и 2-МГ у русских и татар, страдающих ХОБЛ с раз ными генотипами по гену NRAMP1 (полиморфизм D543N) GG AG+AA Признак p n M m n M m Русские 1-ПИ M2 45 0,32 0,03 5 0,54 0,00 0, Татары 2-МГ_C2 38 3,01 0,17 8 3,98 0,40 0, Примечание: С2 – сывороточный показатель вне обострения.
Полиморфный вариант 469+14G/C гена NRAMP1 также ассоциируется с актив ностью антипротеиназ, как у русских, так и у татар, но с некоторыми межэтниче скими различиями. Носители GC и CC генотипов русской национальности в период обострения имеют в среднем более низкую активность ингибиторов протеиназ 1-ПИ в сыворотке крови и КСИ в мокроте (табл. 7). Принимая во внимание тот факт, что параллельно у носителей этих генотипов отмечается повышенная актив ность протеиназ (ТПП и Э) в мокроте (p0,05), что свидетельствует о наличии дис баланса в системе протеиназы/антипротеиназы, можно предположить высокую функциональную значимость полиморфизма 469+14G/C гена NRAMP1 в патогенезе ХОБЛ у русских (табл. 7).
Таблица Средние уровни показателей активности протеиназ и их ингибиторов у рус ских, страдающих ХОБЛ с разными генотипами по гену NRAMP (полиморфизм 469+14G/C) Признак GG GC+CC p n M m n M m 1-ПИ_C1 30 26,62 1,99 10 13,36 3,07 0, KСИ_M1 41 6,04 0,02 10 2,65 0,36 0, Э_M1 22 0,51 0,05 7 0,80 0,18 0, TПП_M1 24 1,15 0,175 7 2,38 0,661 0, У татар установлена ассоциация GG генотипа данного полиморфного варианта с более высокими показателями активности КСИ в сыворотке крови в период обост рения заболевания (515,56 миЕ/мл);
p0,05, свидетельствующими о системной вос палительной реакции организма. Однако, учитывая, что КСИ мокроты в период обо стрения сохраняется в пределах нормальных показателей (9,08 миЕ/мл);
p0,05, можно сделать вывод об отсутствии значимой роли полиморфизма 469+14G/C гена NRAMP1 у сибирских татар в патогенезе ХОБЛ.
Таким образом, полученные данные позволяют сделать вывод, что, хотя в ре зультате исследования было показано достаточно большое количество связей генов кандидатов ХОБЛ с различными биохимическими и иммунологическими маркерами заболевания, функциональное значение в отношении развития ХОБЛ имеют лишь некоторые аллельные варианты исследованных генов: у русских - полиморфизм -308G/A гена TNF, полиморфизм С/Т гена NOS1, аллельные варианты D543N, 469+14G/C гена NRAMP1 и VNTR, 774C/T, -691C/T, 894G/T гена NOS3;
у татар – полиморфизмы D543N гена NRAMP1 и 894G/T гена NOS3.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ Настоящее исследование посвящено изучению роли наследственной компонен ты патогенеза хронической обструктивной болезни легких. Установлена более час тая заболеваемость хроническим бронхитом родственников пробандов, страдающих ХОБЛ, у представителей обеих этнических групп, что подтверждает семейное нако пление заболевания, согласуясь с данными предыдущих исследований (Мостовой и др., 1987, 1988;
Khoury et al., 1985;
Panhuysen et al., 1998;
Silverman, 2002).
В обеих этнических группах выявлены различия по частотам аллелей изучен ных полиморфных вариантов генов NOS1, IL8 и NRAMP1 в сравнении с другими ра нее изученными популяциями (по данным литературы). Это может быть обусловле но многими факторами, в том числе, особенностями этногенеза популяций, что, в конечном итоге, может объяснять формирование межэтнических различий в пред расположенности к некоторым заболеваниям и, в частности, к ХОБЛ.
Имеют место различия значимости исследованных генов-кандидатов в форми ровании ХОБЛ у русских и татар. У русских на развитие заболевания влияет поли морфизм 894G/T гена NOS3, в то время как у татар - полиморфизм -308G/A гена TNF и VNTR полиморфизм гена NOS3. Связь гена TNF с ХОБЛ была показана ранее в исследованиях, проведенных на других популяциях (Huang et al., 1997;
Keicho et al., 1999;
Sakao et al, 2002).
В настоящем исследовании установлена связь изученных генов-кандидатов ХОБЛ с некоторыми качественными и количественными признаками заболевания.
Показано влияние аллельных вариантов полиморфизма 1465-85G/A гена NRAMP на сроки начала ХОБЛ как у русских, так и у татар, и полиморфизма С/Т гена NOS - только у татар. Выявлена достоверная ассоциация степени обструкции дыхатель ных путей (по данным спирографии) c полиморфизмом D543N гена NRAMP1 у представителей обеих национальностей.
При анализе ассоциаций полиморфных вариантов генов-кандидатов с биохими ческими и иммунологическими показателями сыворотки крови и мокроты установ лено наличие межэтнических особенностей в регуляции уровня провоспалительных и защитных механизмов, патогенетически значимых в формировании хронического воспаления при ХОБЛ. Полученные данные уже сейчас позволяют сделать первые выводы о генетических основах регуляции активности протеиназной и антипротеи назной систем организма, а также эндогенных регуляторах уровня провоспалитель ных цитокинов. Можно предположить, что изначальный (врожденный?) дисбаланс в системе протеиназы/антипротеиназы связан со следующими аллельными варианта ми исследованных генов-кандидатов ХОБЛ: полиморфизмом -308G/A гена TNF;
по лиморфизмом С/Т гена NOS1;
VNTR, -691С/Т, 774С/Т и 894G/T полиморфизмами гена NOS3, а также аллельными вариантами D543N и 469+14G/C гена NRAMP1.
Уровень провоспалительных цитокинов (ФНО-) ассоциируется только с полимор физмом одноименного гена TNF.
Таким образом, показана вовлеченность большого числа изученных аллельных вариантов генов-кандидатов ХОБЛ в регуляцию активности биохимических и им мунологических показателей, играющих роль в патогенезе заболевания. При этом, более лабильными являются биохимические показатели (а именно, протеиназы), в регуляции которых принимают участие несколько генов: один ген может оказывать влияние на несколько показателей и один показатель детерминируется несколькими генами, что является более благоприятной ситуацией. Поскольку изученные поли морфизмы в популяции встречаются с высокой частотой, при различном сочетании генотипов у больного может наблюдаться «нивелирование» неблагоприятных эф фектов отдельных аллельных вариантов или генотипов. Уровень же провоспали тельного цитокина ФНО- связан только с геном TNF, что с большей вероятностью может привести к развитию дисбаланса между провоспалительными и защитными механизмами, хронизации течения воспалительного процесса в бронхиальном дере ве и формированию ХОБЛ при носительстве неблагоприятного аллеля или генотипа.
Результаты настоящей работы, проведенной на ранее неисследованных в отно шении ХОБЛ этнических группах, вносят определенный вклад в общую картину понимания наследственной компоненты ХОБЛ и предопределяют направления бу дущих исследований, которые позволят полностью понять эндогенные механизмы формирования заболевания.
ВЫВОДЫ 1. У больных ХОБЛ русской и татарской национальностей, проживающих на тер ритории Томской области, клинико-генеалогический анализ показал статисти чески значимо более частую (p0,05) регистрацию случаев хронического брон хита у родственников (1-й 2-й степени родства у русских и только 1-ой степени родства у сибирских татар) по сравнению с родственниками соответствующих по национальности здоровых индивидуумов. Распространенность других брон хо-легочных болезней в семьях пробандов сравниваемых выборок существенно не различалась.
2. Русские и татары Томской области по частотам аллелей полиморфных вариан тов генов NRAMP1, NOS1 и IL8 отличаются от других этнических групп. Часто та редких аллелей 1465-85A, 469+14С гена NRAMP1 как у русских (0,29 и 0, соответственно), так и у татар (0,60 и 0,21) выше по сравнению с представите лями монголоидной и негроидной рас. Распространенность аллеля -251А гена IL8 близка у русских (0,46) и татар (0,43) с европейцами, однако существенно ниже, чем у африканцев. Частота аллеля Т полиморфизма С/Т гена NOS1 у рус ских (0,38) близка к европейцам и ниже, чем у сибирских татар (0,49).
3. Установлена функциональная значимость аллельных вариантов генов TNF (по лиморфизм -308G/A), NOS1 (полиморфизм С/Т), NOS3 (полиморфизмы VNTR, 774C/T, -691C/T и 894G/T) и NRAMP1 (полиморфизмы 1465-85G/A, D543N и 469+14G/C) в патогенезе ХОБЛ. У сибирских татар и русского населения име ется ряд межэтнических различий в структуре генетической предрасположен ности к ХОБЛ и формировании клинических особенностей заболевания.
4. У русских риск развития ХОБЛ связан с геном NOS3 (полиморфизм 894G/T).
Уровень активности протеиназ ассоциируется с генами NOS1 (C/T полимор физм), NOS3 (полиморфизмы VNTR, 774C/T, -691C/T) и TNF (полиморфизм 308G/A). Активность ингибиторов протеиназ связана с аллельными вариантами 469+14G/C гена NRAMP1 и VNTR гена NOS3. Уровень провоспалительного ци токина ФНО- детерминирован одноименным геном TNF (полиморфизм 308G/A).
5. У татар генетическими факторами риска развития ХОБЛ являются аллельные варианты гена TNF (полиморфизм -308G/A) и NOS3 (VNTR полиморфизм);
бо лее ранний возраст начала заболевания связан с полиморфизмом С/Т гена NOS1;
уровень активности протеиназ ассоциируется с аллельными вариантами гена NOS3 (полиморфизм 894G/T).
6. Общим для русских и татар является участие гена NRAMP1 в формировании клинических особенностей течения ХОБЛ: 1465-85G/A полиморфизм связан с возрастом начала болезни (GG генотип ассоциируется с более ранним сроком манифестации ХОБЛ у русских и, наоборот, более поздними сроками начала болезни у татар);
D543N полиморфизм играет значимую роль в степени об струкции дыхательных путей: носительство редкого аллеля А обусловливает большую степень обструкции бронхиального дерева. Степень активности инги биторов протеиназ ассоциируется с генами NRAMP1 (полиморфизм D543N) и NOS3 (полиморфизм 894G/T).
СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Сеитова Г. Н., Букреева Е. Б. Гены – кандидаты хронического обструктивного бронхита // Генетика человека и патология: Сб. науч. тр. – Томск: Печатная ма нуфактура, 2002. – Вып. 6. – С. 189-191.
2. Сеитова Г. Н., Богушевич С. А., Дементьева Е. А., Нестерович С. В., Букреева Е.Б. Клинико-генеалогическое исследование больных хронической обструктив ной болезнью легких // Бюл. сиб. медицины. – 2002. - № 4. – С. 38-40.
3. Dementieva E.A., Nesterovich S.V., Seitova G.N., Bukreeva E.B., Schevtcova N.M., Gudcova L.V. Exacerbation aetiology and inflammation markers in chronic obstruc tive bronchitis // Eur. Respir. J.: Abstracts ERS Ann. Congr. – Stockholm, 2002. – Vol. 20, Suppl. 38. – P. 1625.
4. Букреева Е. Б., Мельник Т. Г., Дементьева Е. А., Нестерович С. В., Сеитова Г.
Н. Биологические маркеры при инфекционной и неинфекционной этиологии обострения ХОБЛ // Сб. науч. тр. 13-го Нац. Конгресса по болезням органов дыхания. – СПб, 2003. – С. 323.
5. Сеитова Г. Н., Косянкова Т. В., Букреева Е. Б., Дементьева Е. А., Нестерович С.
В., Пузырев В. П. Полиморфизм генов TNFA и NOS3 у больных ХОБЛ // Сб.
науч. тр. 13-го Нац. Конгр. по болезням органов дыхания. – СПб, 2003. – С. 339.
6. Косянкова Т. В., Кучер А. Н., Пузырев В. П., Ковалев И. А., Тарасенко Н.В., Сеитова Г. Н. Гены синтаз оксида азота: полиморфизмы в сибирских популяци ях и их функциональное значение // Вопр. сохр. и развития здоровья населения Севера и Сибири: Сб. науч. тр. – Красноярск, 2003. – С. 79-81.
7. Дементьева Е. А., Сеитова Г. Н. Нейтрофильные протеиназы и их ингибиторы в оценке бронхиального воспаления при хронической обструктивной болезни легких // Науки о человеке: Сб. ст. 4-го конгр. молодых ученых и специалистов, г. Томск, 15-16 мая 2003 г. - Томск, 2003. - С. 13-14.
8. Сеитова Г. Н., Буйкин С. В., Косянкова Т. В., Дементьева Е.А.Полиморфизмы генов PI и NOS3 у больных хронической обструктивной болезнью легких // Науки о человеке: Сб. ст. 4-го конгр. молодых ученых и специалистов, г. Томск, 15-16 мая 2003 г. - Томск, 2003. - С. 119.
9. Бычкова О. Ю., Богушевич С. А., Сеитова Г. Н. Роль эндогенных и экзогенных факторов в развитии хронической обструктивной болезни легких // Науки о че ловеке: Сб. ст. 4-го конгр. молодых ученых и специалистов, г. Томск, 15-16 мая 2003 г. - Томск, 2003. - С. 7-8.
10. Букреева Е. Б., Богушевич С. А., Дементьева Е. А., Черногорюк Г. Э., Нестеро вич С. В., Сеитова Г. Н., Буйкин С. В. Экзогенные и эндогенные факторы в формировании хронической обструктивной болезни легких // Бюл. сиб. меди цины. – 2003. - № 1. – С. 75-77.
11. Bukreeva E. B., Nesterovich S. V., Dementieva E. A., Melnik T.G., Gudkova L. V., Seitova G. N. Infection and bronchial obstruction in COPD exacerbation // Eur. Res pir. J.: Abstracts ERS Ann. Congr. – Vienna, 2003. – P. 2682.
12. Bukreeva E. B., Dementieva E. A., Nesterovich S. V., Akbasheva O.E., Seitova G. N.
Influence of infection and 1-proteinase inhibitor on inflammatory response in COPD exacerbation // Eur. Respir. J.: Abstracts ERS Ann. Congr. – Vienna, 2003. – P. 2680.
13. Seitova G. N., Buikin S. V., Dementieva E. A., Nesterovich S. V., Bukreeva E.B. S and Z alleles of PI gene among chronic obstructive lung disease patients and their relatives // Conf. ESHG. – Birmingham, 2003. – P. 115.
14. Seitova G. N., Buikin S. V., Bukreeva E. B., Dementieva E. A., Nesterovich S.V., Akbasheva O. E. S and Z alleles of PI gene in chronic obstructive pulmonary disease patients // Eur. Respir. J.: Abstracts ERS Ann. Congr. – Vienna, 2003. – А. 253751.
15. Seitova G. N., Bukreeva E. B., Kosynkova T. V., Dementieva E. A., Nesterovich S.
V., Puzyrev V. P. VNTR polymorphism NOS3 gene among chronic obstructive pul monary disease patients // Eur. Respir. J.: Abstracts ERS Ann. Congr. – Vienna, 2003. – P. 2541.
16. Букреева Е. Б., Нестерович С. В., Дементьева Е. А., Плешко Р. И., Акбашева О.
Е., Суханова Г. А. Мельник Т. Г., Сеитова Г. Н., Березко И. В. Применение эреспала у больных хронической обструктивной болезнью легких // Пульмоно логия. – 2004. - № 2. – С. 102-108.
17. Сеитова Г. Н., Букреева Е. Б., Буйкин С. В., Бычкова О. Ю., Дементьева Е.А., Нестерович С. В., Пузырев В. П. Роль полиморфизма в промоторной области гена TNF в развитии хронической обструктивной болезни легких // Бюл. сиб.
медицины. – 2004. - № 2. – С. 29-33.
18. Сеитова Г. Н., Буйкин С. В., Бычкова О. Ю.Роль полиморфизмов гена эндотели альной синтазы оксида азота в развитии хронической обструктивной болезни легких // Науки о человеке: Сб. ст. 5-го конгр. молодых ученых и специалистов, г. Томск, 20-21 мая 2004 г. - Томск, 2004. - С. 216-218.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 1-ПИ – альфа1-протеиназный ингибитор 2-МГ – альфа2-макроглобулин ААТН – альфа1-антитрипсиновая недостаточность ИЛ – интерлейкин ИТ – индекс Тиффно КСИ – кислотостабильные ингибиторы ОФВ1- объем форсированного выдоха за 1 с ПЦР – полимеразная цепная реакция РХВ – равновесие Харди-Вайнберга ТПП – трипсиноподобные протеиназы ХБ – хронический бронхит ХОБЛ – хроническая обструктивная болезнь легких ФВД – функция внешнего дыхания ФЖЕЛ – форсированная жизненная емкость легких ФНО- – фактор некроза опухолей-альфа Э – эластаза NO – оксид азота NOS – синтаза оксида азота