Гены синтаз оксида азота: полиморфизмы в сибирских популяциях и их функциональное значение
На правах рукописи
КОСЯНКОВА ТАТЬЯНА ВЛАДИМИРОВНА ГЕНЫ СИНТАЗ ОКСИДА АЗОТА: ПОЛИМОРФИЗМЫ В СИБИРСКИХ ПОПУЛЯЦИЯХ И ИХ ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ЗНАЧЕНИЕ 03.00.15 – генетика
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Томск – 2002 2
Работа выполнена в лаборатории популяционной генетики НИИ медицинской генетики Томского научного центра Сибирского отделения РАМН, г. Томск
Научный консультант: академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Пузырев Валерий Павлович
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Назаренко Сергей Андреевич кандидат медицинских наук Салюкова Ольга Александровна
Ведущая организация: Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск
Защита состоится 11 июня 2002 года на заседании диссертационного совета К 001.045.01 при НИИ медицинской генетики Томского научного центра СО РАМН по адресу: 634050 г. Томск, Набережная р. Ушайки,
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г. Томск.
Автореферат разослан «_» «» 2002 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук А.Н. Кучер ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы.
В настоящее время в научном мире отмечается большой интерес к группе генов синтаз оксида азота (NOS). Это обусловлено той биологической ролью, ко торую молекула оксида азота (NO) играет в функционировании различных систем организма человека. Установлено ее участие в регуляции центральной нервной и иммунной систем, в работе желудочно-кишечного тракта, органов дыхания и мо чеполовой системы [Волин и др., 1998;
Зенков и др., 2000;
Luscher, 1994, 1999;
Zini et al., 1996;
Rudic et al., 1999]. Присутствие оксида азота в высоких концентрациях в организме человека обнаруживает цитостатическую/цитотоксическую актив ность этой молекулы [Hausladen et al., 1998]. Кроме того, показано влияние NO на инициирование и протекание процесса апоптоза [Wang et al., 1997].
Регуляторное действие этой молекулы в организме обеспечивается тремя изоформами синтаз оксида азота (NOS): нейрональной (nNOS), индуцибельной (iNOS) и эндотелиальной (eNOS). Основное различие между изоформами состоит в количестве синтезируемого NO, продолжительности синтеза, индуцируемости и тканевой специфичности [Sessa, 1994;
Fostermann et al., 1998;
Fischmann et al., 1999]. Ферменты семейства NOS являются продуктами экспрессии соответст вующих генов NOS1, NOS2 и NOS3. Продуцируемый геном NOS1 оксид азота из вестен как нейротрансмиттер нервных синапсов, а также как регулятор физиоло гических процессов дыхания [Lundberg et al., 1996]. Генетические данные показы вают значимость гена NOS1 в генезисе бронхиальной гиперчувствительности при астме [Grasemann et al., 1999]. Полиморфные варианты гена NOS2 рассматрива ются в патогенезе сахарного диабета [Warpeha et al., 1999], аутоиммунных и не опластических заболеваний [Nussler et al., 1993], а также подверженности к ин фекции [Adler et al., 1995;
Lundberg et al., 1996;
Kelly et al., 1999;
Хи et al., 2000].
NO, вырабатываемый эндотелиальной синтазой оксида азота – eNOS, кодируемой геном NOS3, является самым мощным из известных эндогенных вазодилятаторов [Ванин, 1998;
Гомазков, 2000;
Wilcox et al.,1997] и его связь с сердечно сосудистой патологией не вызывает сомнений [Степанов и др., 1998;
Чистяков и др., 2000;
Ковалев, 2001;
Sessa, 1994;
Warpeha et al., 1999;
Hingorani et al., 1999;
Guzic et al., 2001].
Таким образом, пожалуй, ни одно из достижений фундаментальной биоло гии не нашло столь быстрого приложения к практической медицине, как резуль таты исследований NO. Однако, анализ литературы показывает множество пробе лов в наших современных знаниях по некоторым аспектам исследований генов NOS. В частности, в литературе практически отсутствуют данные о популяцион ном распространении полиморфизмов генов NOS, их эволюционной специфике, временной динамике и географической изменчивости. Кроме того, данные о роли полиморфизмов генов NOS для сердечно-сосудистых заболеваний представлены лишь ассоциациями на уровне некоторых нозологических форм, а не отдельных патогенетически значимых признаков.
Цель исследования: Охарактеризовать популяционно-генетическую из менчивость аллельных вариантов генов синтаз оксида азота и их патогенетиче скую значимость для сердечно-сосудистых заболеваний человека.
Задачи исследования:
1. Изучить генетическое разнообразие населения Сибири (русские, буряты, ту винцы, якуты) по полиморфным вариантам генов NOS1, NOS2, NOS3.
2. Оценить межпопуляционную и межэтническую гетерогенность по полиморф ным вариантам генов NOS народонаселения Сибири.
3. Изучить полиморфизмы генов NOS1, NOS2 и NOS3 у больных с сердечно сосудистой патологией (коронарный атеросклероз, эссенциальная гипертензия, идиопатическая гипертрофическая кардиомиопатия, патология проводящей системы сердца).
4. Исследовать ассоциации полиморфных вариантов генов синтаз оксида азота с клиническими проявлениями сердечно-сосудистой патологии.
5. Оценить роль генов NOS в фенотипической изменчивости количественных при знаков у здоровых жителей Сибири и больных сердечно-сосудистой патологи ей.
Научная новизна: Впервые на территории Сибири проведено исследова ние генетического разнообразия генов синтаз оксида азота в расово и этнически различных популяциях. Получены новые знания об особенностях структуры ге нофонда коренных (тувинцы, буряты, якуты) и пришлых (русские жители Том ской области) популяций Сибири. Впервые оценена роль генов NOS в изменчиво сти комплекса количественных, патогенетически значимых признаков у жителей г. Томска. Исследованные в работе полиморфизмы C/T NOS1, G954C NOS2, C691T и С774Т гена NOS3 ранее не были изучены в мировом народонаселении в связи с их ролью в детерминации сердечно-сосудистой патологии.
Впервые в России проведено исследование взаимосвязи полиморфных ва риантов генов NOS с распространенными формами сердечно-сосудистой патоло гии (коронарный атеросклероз, эссенциальная гипертензия, идиопатическая ги пертрофическая кардиомиопатия и патология проводящей системы сердца). Уста новлена взаимосвязь полиморфных вариантов генов NOS с клиническими прояв лениями сердечно-сосудистой патологии.
Практическая значимость: Полученная информация о популяционном разнообразии полиморфизма генов NOS может быть использована в эволюцион ной геномике для анализа структуры, состояния и тенденции развития генофон дов коренных и пришлых популяций Сибири, а также в генетической эпидемио логии широко распространенных заболеваний. Сведения о вкладе молекулярно генетических маркеров в формирование клинического полиморфизма сердечно сосудистых заболеваний и их осложнений могут быть учтены при формировании групп риска, организации профилактических мероприятий. Анализ прогностиче ской значимости полиморфных вариантов генов в семьях может быть основой для осуществления молекулярно-генетического тестирования подверженности к дан ным группам патологии, служить ориентиром в выборе вида лекарственной тера пии (генотип-специфическая терапия).
Положения, выносимые на защиту:
1. Для этнических групп Сибири характерен широкий диапазон изменчивости частот аллельных вариантов С691Т, G894C гена NOS3, транзиции C/T в гене NOS1 и полиморфизма G954C гена NOS2. Наибольшая гетерогенность по часто там проанализированных полиморфизмов генов NOS показана для пришлого рус ского населения Сибири (г. Томск, пос. Каргала).
2. По полиморфизму генов NOS среди изученных этно-территориальных групп наиболее близки друг к другу оказались тувинцы с бурятами и русскими, наибо лее отдалены друг от друга буряты и якуты.
3. Полиморфизмы G894T гена NOS3, G954C гена NOS2 и транзиция C/T в гене NOS1 могут служить генетическими маркерами развития дислипидемий у боль ных коронарным атеросклерозом.
4. Генетическими маркерами подверженности к эссенциальной гипертензии могут быть полиморфные варианты C/T гена NOS1, G954C гена NOS2 и С774Т гена NOS3.
Апробация работы: Основные материалы диссертационной работы доло жены и обсуждены на V научной конференции НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, 2000 г.), конференции молодых ученых СО РАМН «Фунда ментальные и прикладные проблемы современной медицины» (Новосибирск, 2000 г), международной конференции «Биоразнообразие и динамика экосистем в Северной Евразии» (Новосибирск, 2000 г.), межлабораторном научном семинаре НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, 2001 г., 2002 г.), Втором конгрессе молодых ученых и специалистов "Науки о человеке" (Томск, 2001 г.), межрегиональной научно-практической конференции "Здоровье детей - наше бу дущее" (Томск, 2001 г.), региональной научно-практической конференции "Про блемы детской кардиологии" (Томск, 2001 г.), 10 международном конгрессе по генетике человека ICHG (Вена, Австрия, 2001 г.), научно-практической конфе ренции "ДНК-диагностика в медицине" (Новосибирск, 2001 г.), Второй Всерос сийской школе по экологической генетике "Симбиогенетика и эволюция" (Санкт Петербург, 2001 г.), IV Международном Всесибирском инновационном форуме (Томск, 2001 г.), Третьем конгрессе молодых ученых и специалистов "Науки о че ловеке" (Томск, 2002 г.), конференции молодых ученых СО РАМН (Новосибирск, 2002 г.).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ.
Структура и объем диссертации: Диссертационная работа изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их об суждения, заключения и выводов. Данные проиллюстрированы 26 таблицами, рисунками. Библиографический указатель включает 212 источников, из них работ отечественных авторов.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Исследование проведено в популяциях разного этнического состава и в раз личных группах больных сердечно-сосудистой патологии (ССП). Коренное насе ление Сибири представлено тремя этническими группами (тувинцы, буряты, яку ты), в то время как пришлое - русскими жителями Томской области: г.Томск и пос.Каргала (табл. 1). В Республике Туве проведено популяционно-генетическое изучение населения двух поселков: Кунгуртуг - расположен на юго-востоке Тувы и Тоора-Хем – на северо-востоке. В Республике Бурятии - трех популяций: одна городская (Улан-Удэ) и две сельские – Хурамша, Курумкан. Якутский этнос представлен жителями пос. Чэриктэй Усть-Алданского улуса.
Таблица 1.
Этнолингвистическая и антропологическая характеристика исследованных популяционных выборок Расовая Антропо Националь- Географическая Языковая Языковая N принадлеж- логический ность локализация семья группа ность тип г.Томск 134 Восточно- Индо Русские, Европеоиды европей- европей- Славянская пос. Каргала, Сибирь ский ская Томская обл.
Буряты, г.Улан-Удэ Республика Монгольская пос.Курумкан Бурятия пос. Хурамша Якуты, 80 Монголоиды Централь- Алтай Республика пос. Чэриктэй но- ская Саха, Тюркская Азиатский (Якутия) Тувинцы, пос. Кунгуртуг Республика пос.Тоора-Хем Тува Примечание. Данные приведены по: Народы России: энциклопедия, 1994. N- количество об следованных.
Для оценки функциональной значимости генов NOS были изучены группы больных с эссенциальной гипертензией (ЭГ (n=130)), идиопатической гипертро фической кардиомиопатией (ИГКМП (n=25)), коронарным атеросклерозом (КА (n=50)) и пациенты с нарушением проводимости сердца (НПС (n=158)). Клинико генеалогическое обследование пациентов с ЭГ, ИГКМП, КА было проведено в НИИ Кардиологии ТНЦ СО РАМН (директор – академик РАМН Р.С.Карпов). Па циенты с НПС были обследованы на кафедре внутренних болезней №1 Краснояр ской Государственной медицинской академии (ректор – академик РАЕН В.И.
Прохоренков). Генеалогические данные больных устанавливали на основании оп росника, антропометрические и клинические показатели - по истории болезни.
Для всех обследуемых с НПС проводился стандартный набор общеклиниче ских исследований, а также электрокардиографию и эхокардиоскопию. У боль ных с ЭГ было проведено суточное мониторирование артериального давления, на основе которого определяли средние, максимальные и минимальные параметры систолического и диастолического АД (САД, ДАД), гипертоническую нагрузку в различное время суток, пульсовое давление, суточный индекс АД, скорость и ве личину утреннего подъема САД и ДАД. Наличие атеросклероза коронарных ар терий у пациентов с КА было подтверждено ангиографическим обследованием. У большинства больных минимальная степень сужения артерий соответствовала II степени поражения по общепринятой классификации стенозов. Больные диабетом и пациенты, получавшие липид-понижающие препараты в исследование не вклю чались. Средний возраст больных в обследованных группах составил 48,7±8,9 го да.
Контрольную группу (n=130) составляли индивиды, сходного с больными возраста, которые не имели клинических проявлений сердечно-сосудистых нару шений. Данная выборка была сформирована в ходе эпидемиологических исследо ваний факторов риска развития ишемической болезни сердца (ИБС) в г.Томске, проводимых совместно с кафедрой факультетской терапии СГМУ (ректор – член корр. РАМН, профессор В.В. Новицкий). Для анализа ассоциаций использовали количественные признаки, включая антропометрические показатели, биохимиче ские, показатели липидного спектра крови и уровня артериального давления (АД).
Для исследования использовали образцы ДНК-банка НИИ МГ.
Типирование полиморфизмов генов NOS. Исследовано 6 полиморфных ва риантов 3 генов синтаз оксида азота (табл. 2). Две исследованные мутации лока лизованы в регуляторных областях генов – в промоторах – G-954C (NOS 2), C 691T (NOS 3);
две нуклеотидные замены (C774T, G894T – NOS3), одна транзиция C/T в гене NOS1 и одна – вариабельность по числу тандемных повторов (VNTR) в гене NOS3.
Таблица 2.
Характеристика исследованных полиморфизмов генов NOS Локализация Фермент Ген Полиморфизм в гене рестрикции NOS 1 C/T Экзон 18 BsmF I NOS 2 G-954C Промотор AlwN I C-691T Промотор Вsо I C774T Экзон 6 Fok I NOS G894T Экзон 7 FriO I VNTR Интрон 4 Изучение полиморфных вариантов исследуемых генов проводили с помо щью амплификации соответствующих участков генома методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), используя структуру праймеров и параметры температур ных циклов, описанных в геномной базе данных (GDB) и литературе [Wang et al., 1999;
Grasemann et al., 1999;
Novoradosky et al., 1999;
Guzik et al., 2001]. Геноти пирование полиморфизмов осуществляли путем ПДРФ-анализа продуктов ам плификации соответствующими рестриктазами и последующим разделением про дуктов рестрикции в 3% агарозном или 6% полиакриламидном гелях. Фрагменты ДНК окрашивали бромистым этидием и визуализировали в УФ-свете с примене нием компьютерной видеосъемки на приборе “UV-VIS Imager-II” (США).
Биометрические и генетико-статистические методы. При описании генети ческой структуры использовали следующие методы: тестирование на соответст вие распределения генотипов равновесию Харди-Вайнберга и сравнение частот аллелей между группами проводили точным тестом Фишера [Вейр, 1995];
оценки теоретической гетерозиготности и генетические расстояния между популяциями по методу Nei [1987]. В работе использовали стандартные алгоритмы биометрии, включая расчет и сравнение основных статистик распределений (средние, диспер сии, асимметрии, эксцессы), факторный, дисперсионный и линейный корреляци онно-регрессионный анализ [Лакин, 1968;
Леонов, 1990;
Гланц, 1998]. Для выде ления интегральных факторов, обусловливающих общую изменчивость комплек са анализируемых признаков, использовали метод главных компонент [Ким, 1989].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Популяционно-генетическое разнообразие по полиморфизмам генов NOS Для большинства изученных полиморфизмов распределение генотипов со ответствовало равновесию Харди-Вайнберга (РХВ). Отклонение было показано для варианта G954C гена NOS2 (табл. 3) и С774Т гена NOS3 в пос. Тоора-Хем (2=8,583, р0,01) за счет недостатка гетерозигот (наблюдаемая и ожидаемая гете розиготность составили 0,285 и 0,386 соответственно). Показано отклонение от РХВ для полиморфизма С691Т в Тоора-Хем (2=33,688, р0,001), Кунгуртуге (2=6,537, р0,05), Томске (2=43,758, р0,001) и во всех выборках бурят (р0,001), но за счет избытка гетерозигот. Уровни наблюдаемой и ожидаемой ге терозиготности были соответственно равны у тувинцев в пос. Кунгуртуг – 0,517 и 0,405;
Тоора-Хем – 0,745 и 0,483;
у русских в г.Томске – 0,783 и 0,498;
у бурят в г.
Улан-Удэ – 0,728 и 0,499;
в пос. Хурамша – 0,750 и 0,497 и пос. Курумкан - 0, и 0,490. Наблюдаемые отклонения можно рассматривать как возникшие в силу случайных причин. С другой стороны, случаи достоверного отклонения распре деления от ожидаемого могут отражать специфику популяционно-генетических процессов в популяциях, которые могут быть связаны как с характеристиками генетико-демографической структуры изученных этнических групп, так и с функ циональной значимостью данных локусов – гены NOS вовлечены в патогенез многих заболеваний и полиморфизмы этих генов не могут являться селективно нейтральными вариантами.
Частота аллеля С полиморфизма C/T гена NOS1 была минимальной среди изученных популяций у бурят в г. Улан-Удэ (75%), и максимальной у пришлого населения г.Томска - 93% (табл. 3). Частоты аллеля G полиморфизма G-954C гена NOS2 находились в диапазоне от 73% у бурят до 96% в г. Томске.
Широким диапазоном изменчивости частот аллелей характеризовались по лиморфизмы в гене NOS3. Наибольшее разнообразие показано для полиморфизма промоторной части гена – С691Т (табл. 4). Как было отмечено выше, отклонение от РХВ по данному полиморфизму было показано для всех изученных популяций, кроме сельского населения Томской области (пос. Каргала) и коренных жителей Республики Саха (Якутия) – пос. Чэриктэй. При этом наибольшая частота распро странения аллеля С691 показана в пос. Каргала (85%) и пос. Чэриктэй (93%). В Каргале также показана самая высокая, среди изученных популяций, частота ал леля С774 гена NOS3 - 88%. Наибольшие различия в частоте аллелей показаны между пришлым населением Сибири (г. Томск, пос. Каргала).
Томские популяции (городской и сельский населенные пункты) характери зуются нестабильной популяционной структурой, где ведущим фактором популя ционной динамики выступают миграционные процессы [Кучер и др. 1994, 1999].
При этом среди пришлых популяций пос. Каргала занимает особое место, для ко торого при высоком индексе миграций показаны относительно низкий уровень разнообразия фамилий, высокая случайная изонимия и гетерогенность по нацио нальному составу [Кучер, 2001].
Таблица 3.
Полиморфизм генов NOS1 и NOS2 у населения Сибири 2 hobs+±s.e.
Гено Популяция N.O. N.E. Частота аллеля D hexp±s.e.
тип d.f.= Tранзиция С/Т гена NOS Русские, СС 97 96, hobs=0,109 ±0,029 -0, 0, г.Томск СТ 12 13, C=0, р0,05 hexp=0,119±0, ТТ 1 0, Якуты, СС 54 52, hobs=0,262 ±0, 2, Чэриктэй СТ 21 24,99 -0, C=0, р0,05 hexp=0,312±0, ТТ 5 3, Тувинцы, СС 49 51, hobs=0,400 ±0,053 +0, 1, Тоора-Хем СТ 34 29, C=0, р0,05 hexp=0,347±0, ТТ 2 4, Буряты, СС 34 33, hobs=0,344 ±0,062 -0, 0, Улан-Удэ СТ 20 21, C=0, р0,05 hexp=0,366±0, ТТ 4 3, Полиморфизм G-954C гена NOS GG 119 119, hobs=0,070 ±0,022 +0, 0, Томск GС 9 8, G=0, р0,05 hexp=0,067±0, CC 0 0, GG 67 66, hobs=0,178 ±0, 1, Чэриктэй GС 15 16,85 -0, G=0, р0,05 hexp=0,200±0, CC 2 1, GG 102 98, hobs=0,108 ±0,028 -0, 16, Тоора-Хем GС 13 20, G=0, 1,10 р0,001 hexp=0,173±0, CC GG 30 31, hobs=0,431 ±0,065 +0, 0, Улан-Удэ GС 25 22, G=0, р0,05 hexp=0,391±0, CC 3 4, Примечание. N.O.- наблюдаемая численность генотипов;
N.E. -ожидаемая численность геноти пов;
критерий 2 использован для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому исходя из равновесия Харди-Вайнберга;
d.f. – число степеней свободы;
hobs±s.e. и hexp±s.e.- соответственно наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность с ошибкой;
D - относи тельное отклонение наблюдаемой гетерозиготности от ожидаемой.
На протяжении нескольких поколений в томских популяциях наблюдается определенная динамика в отношении интенсивности и направленности миграци онных процессов, изменении брачной структуры, обусловленные, скорее всего, изменением политической ситуации в России и социально-экономическим разви тием данной территории.
Частоты распространения аллеля В VNTR полиморфизма оказались близки для русских жителей Сибири (84%) и русских Волго-Уральского региона (85%) [Shagisultanova et al., 2001]. Максимальные значения были у бурят в Улан-Удэ 94%. Аллель G894 в изученных популяциях встречался с частотой 57% в г. Том ске и Тоора-Хеме у тувинцев, 65% - в Каргале, Курумкане, Кунгуртуге и Чэрик тэй, достигая максимальных значений в бурятских популяциях – в Улан-Удэ (73%) и Хурамше (76%). Во всех исследованных популяциях преобладал аллель G894 над альтернативным аллелем, что согласуется с данными литературы: его частота в г. Москве составляет 78% [Чистяков и др., 2001].
Таблица 4.
Распределение генотипов и частот аллелей полиморфных вариантов гена NOS3 у населения Сибири Географическая локализация С774Т C-691T G894T VNTR СС СТ ТТ СС СТ ТТ GG GТ ТТ AA AB BB N.O.
60 45 8 18 105 11 44 55 27 5 29 Томск Частота аллеля C=0,73 C=0,53 G=0,57 B=0, 0,012 1,546 1, 43, N.O. 48 14 0 38 12 2 29 28 6 3 15 Каргала Частота аллеля C=0,88 C=0,85 G=0,65 B=0, 1,004 0,671 0,285 1, N.O. 40 31 9 55 8 0 29 41 11 1 16 Частота аллеля C=0,69 C=0,94 G=0,611 B=0, Чэриктэй 0,620 0,146 0,341 0, N.O. 75 36 15 25 85 4 33 45 20 3 19 Тоора- Частота аллеля C=0,74 C=0,59 G=0,57 B=0, Хем 0,416 2, 8,583 33, N.O. 55 32 8 39 44 2 36 27 8 0 12 Кунгур Частота аллеля C=0,75 C=0,71 G=0,70 B=0, туг 2 1,107 6,537 0,701 0, N.O. 33 41 9 14 63 3 32 35 14 1 11 Курум Частота аллеля C=0,64 C=0,57 G=0,61 B=0, кан 2 0,506 0,669 0, 29, N.O. 21 18 11 9 42 5 36 19 5 1 7 Частота аллеля C=0,60 C=0,53 G=0,76 B=0, Хурамша 3,125 1,110 1, 14, N.O. 35 19 5 7 43 9 32 22 5 1 5 Улан-Удэ Частота аллеля C=0,75 C=0,48 G=0,72 B=0, 2 1,017 0,185 3, 12, Примечание. N.O.- наблюдаемая численность генотипов;
критерий использован для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому исходя из равновесия Хар ди-Вайнберга;
d.f.=1 во всех случаях;
0,05;
0,001.
Тувинские популяции можно отнести к числу немногих этнических групп Сибири, которые обследованы в отношении особенностей демографической структуры и большого числа разнообразных маркерных систем – фамилий, имму но-биохимических локусов [Пузырев и др., 1999;
Кучер и др., 2000;
Санчат и др., 2000], молекулярно-генетических маркеров, включая полиморфизм митохондри ального генома [Голубенко, 1998, 2001], ядерных аутосомных локусов [Косянкова и др., 2000;
Одинокова и др., 1997] и Y-хромосомы [Степанов и др., 2000;
2001].
Генетико-популяционные исследования в Бурятии были проведены по из менчивости некоторых аутосомных локусов и мтДНК [Одинокова и др., 1997;
Еремина, 1999;
Голубенко и др., 2000].
Наибольшие межэтнические различия в частоте распространения изучен ных полиморфизмов генов NOS были показаны для варианта С691Т гена NOS (2=101,768) (табл. 5), где коэффициент генной дифференциации составил 14%, а наибольшая гетерогенность по частоте аллеля С691 в пределах этнических групп показана для пришлого русского населения (2 =52,782) (табл. 6). Генетическое разнообразие этнических групп по генам NOS было минимально по VNTR поли морфизму гена NOS3 (0,201) и максимально по варианту G894T этого гена (0,472) (табл. 5).
Таблица 5.
Показатели генного разнообразия в изученных этнических группах 2 (d.f.) Ген Полиморфизм HT Hs GST NOS1 С/Т 0.2962 0.2865 0.0327 31.594 (3) NOS2 G954С 0.2230 0.2083 0.0656 40.557 (3) С774Т 0.3951 0.3941 0.0025 1.4514 (3) 101.768 (3) С691Т 0.4628 0.4000 0. NOS3 VNTR 0.2014 0.1996 0.0087 5.883 (3) 10.723 (3) G894T 0.4720 0.4632 0. 191.979 (18) 0.3419 0.3253 0. Примечание. HT – общее генетическое разнообразие;
Hs – генетическое разнообразие внутри субпопуляций;
GST - коэффициент генной дифференциации;
2 –гетерогенность по частотам аллелей. 0.05;
***0.001.
Среди коренного населения Сибири генное разнообразие внутри этнических групп по полиморфным вариантам гена NOS3 было минимально по VNTR: 0,189 у тувинцев и 0,147 у бурят, а максимально в Туве по варианту G894T (0,046), и в Бурятии – по С691Т (0,498).
Таким образом, из 6 проанализированных полиморфизмов NOS генов не было показано межэтнической гетерогенности для вариантов С774Т и VNTR гена NOS3, а максимальные оценки получены для полиморфизма С691Т этого гена (табл. 5).
При оценке межпопуляционных отличий в пределах этносов, генетические дистанции по Nei показали, что среди изученных групп наиболее отдалены друг от друга по частотам полиморфных вариантов генов NOS оказались буряты и яку ты (0,0671), близки друг к другу были тувинцы с бурятами (0,0108) и русскими (0,0287) (табл. 7). Из этого следует, что генетические дистанции не всегда могут быть однозначно объяснены географической локализацией популяций.
В гаметическом неравновесии находились четыре пары полиморфизмов ге на NOS3: G894T и VNTR в поселках Тоора-Хем, Хурумша и Черектей, С691Т и С774Т в Курумкане, С691Т и VNTR в пос. Каргала и С691Т и G894T в г.Томске (табл. 8).
Таблица 6.
Показатели генного разнообразия в изученных популяциях по полиморфным вариантам гена NOS 2 (d.f.) Популяция Полиморфизм HT Hs GST С774Т 0.309 0.297 0.039 12.915 (1) Пришлые популяции С691Т 0.430 0.379 0.119 37.333 (1) Томской VNTR 0.268 0.268 0.000 0.000 (1) области G894T 0.476 0.472 0.007 2.534 (1) 52.782 (4) 0.371 0.354 0. С774Т 0.382 0.382 0.000 0.046 (1) С691Т 0.452 0.444 0.017 6.761 (1) Тувинцы VNTR 0.189 0.189 0.000 0.013 (1) G894T 0.465 0.456 0.018 6.033 (1) 12.853 (4) 0.372 0.368 0. С774Т 0.444 0.436 0.018 6.588 (2) С691Т 0.498 0.495 0.005 1.984 (2) Буряты VNTR 0.147 0.147 0.000 0.096 (2) G894T 0.420 0.412 0.019 7.979 (2) 16.647 (8) 0.377 0.373 0. С774Т 0.396 0.390 0.014 20.882 (3) С691Т 0.418 0.375 0.104 95.316 (3) тот VNTR 0.201 0.199 0.008 11.790 (3) G894T 0.461 0.459 0.005 8.482 (3) 136.471 (12) 0.369 0.356 0. Примечание. Обозначения см. табл. 5. 0,05;
***0,001.
Таблица 7.
Генетические дистанции по Nei между изученными этническими группами по частотам полиморфных вариантов генов NOS Русские Тувинцы Буряты Якуты 0,0035 0,0239 0,0287 Русские 0,0108 0,0301 Тувинцы 0,0671 Буряты Якуты Гаметическая корреляция между аллелями была положительной в Каргале (+0,1863), Чэриктэй (+0,1563) и Тоора-Хем (+0,2121). Отрицательная связь пока зана в г.Томске (-0,1605), Курумкане (-0,1960) и Хурамше (-0,2020). Соответст вующие (положительные и отрицательные) значения имеет и мера гаметического неравновесия () в изученных популяциях. В большинстве случаев гаметическое неравновесие образует пара маркеров G894T – VNTR. Следует отметить, что дан ные полиморфизмы локализованы в одном гене – NOS3. Если в популяции суще ствует отклонение от гаметического равновесия, то время, за которое будет дос тигнуто равновесие, зависит от степени сцепления: чем теснее сцепление, тем больше времени требуется для достижения равновесия. И оно никогда не будет достигнуто, если определенные комбинации аллелей определяют сниженную или, наоборот, повышенную приспособляемость. Такие ассоциации могут оказаться важными для селекционного процесса. Следует указать еще на одно свойство та ких связей – хаотический характер их при сравнении разных популяций, когда в одной из них «положительным» является один аллель, а в другой - другой. Это позволяет утверждать, что прогностическая ценность таких аллелей варьирует не только от популяции к популяции, но также и от поколения к поколению в одной и той же этнической группе.
Таблица 8.
Гаметическое неравновесие по полиморфизмам гена NOS 2 Популяция Пара маркеров D p Томск С691Т-G894T -0,0398 5,566 0,018 -0, Курумкан C691T-C774T -0,0205 5,767 0,016 -0, Каргала C691T-VNTR +0,0246 3,959 0,046 +0, Тоора-Хем G894T-VNTR +0,0337 7,020 0,008 +0, Хурамша G894T-VNTR -0,0243 4,162 0,041 -0, Чэриктэй G894T-VNTR +0,0237 4,010 0,045 +0, Примечание. D – мера гаметического неравновесия;
- гаметическая корреляция;
критерий использован для оценки уровня значимости корреляционных связей;
р – достоверность крите рия 2.
Таким образом, результаты настоящего исследования показывают, что изу ченные популяции Сибири, несмотря на их географическую близость в пределах этноса, характеризуются различным уровнем генетического разнообразия по группе генов NOS. Эти наблюдения представляются важными для проведения ге нетико-эпидемиологических исследований мультифакториальных заболеваний (МФЗ) в Сибирском регионе.
Полиморфизмы генов NOS у больных сердечно-сосудистой патологией и их ассоциация с клиническими патогенетически значимыми признаками.
Следующим этапом настоящего исследования было изучение взаимосвязи полиморфных вариантов генов NOS с некоторыми формами сердечно-сосудистой патологии: коронарный атеросклероз (КА), эссенциальная гипертензия (ЭГ), идиопатическая гипертрофическая кардиомиопатия (ИГКМП) и нарушения про водимости сердца (НПС).
Частота аллеля С в гене NOS1 варьировала от 82% у больных ЭГ до 94% с НПС, в группе контроля она составила 93% (рис. 1). Частота аллеля G954 гена NOS2 у больных ССП имела пониженные значения по сравнению с контролем, где она составила 94%. Распространение частот аллелей полиморфных вариантов гена NOS3 показало значительное увеличение частот С691, G894 у больных КА, С691 и С774 у пациентов с ИГКМП по сравнению с контролем.
Частота аллеля G954 гена NOS2 Частота аллеля С гена NOS Частоты полиморфных вариантов гена NOS ** RR=5, RR=3,378* RR=3,453** RR=1,716* C691 B VNTR C774 G контроль ЭГ КА НПС ИГКМП ИБС, Москва Рис. 1. Частоты полиморфизмов генов NOS у больных сердечно-сосудистой патологией и в группе контроля На основании частоты встречаемости аллелей в контрольной группе и группе больных был рассчитан относительный риск (RR). Значения RR1 ука зывают на возможную положительную ассоциацию аллеля с заболеванием. Об суждение величин относительного риска проводили при уровне значимости не более 5%.
Высокие значения риска развития патологии были показаны для больных КА по аллелю C691 (RR=5,34) и G894 гена NOS3 (RR=3,45);
положительная ас социация была у больных ЭГ с аллелем С691 (RR=1,71) и у больных ИГКМП (RR=3,37). Полученные результаты указывают на возможную протективную роль данных аллелей в отношении сердечно-сосудистой патологии.
Следующим этапом нашей работы была оценка функциональной значимо сти генов как на уровне отдельных признаков, так и на уровне их совокупно стей, для чего использовали метод главных компонент (ГК).
В контрольной группе не было показано взаимосвязи генов NOS с количе ственными патогенетически значимыми признаками, возможно, в силу сбалан сированного функционирования физиологических систем у здоровых индиви дов. Иная ситуация наблюдается в группе больных ССП.
С помощью однофакторного дисперсионного анализа показано, что с по лиморфными вариантами генов NOS у больных КА ассоциированы следующие патогенетически значимые признаки (табл. 9). Транзиция С/Т гена NOS1 взаи мосвязана с показателями холестерина в составе липопротеинов общей низкой плотности (ХС-ЛПОНП), триглециридов (ТГ);
полиморфизм G954C гена NOS с индексом массы тела (ИМТ) и холестерином в составе липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛПНП);
аллельные варианты полиморфизма С691Т гена NOS3 с активностью каталазы в сыворотке крови больных и полиморфизм G894T гена NOS3 с показателями ХС-ЛПНП и циркулирующими иммунными комплексами (ЦИК) (табл. 9). Для некоторых признаков в таблице приведены логарифмиро ванные показатели, для которых изначально были показаны статистически зна чимые отклонения от нормального распределения, в основном за счет сущест венной правосторонней асимметрии. После логарифмической трансформации (по экспоненциальному основанию) асимметрия практически исчезла, однако нормальное распределение так и не было достигнуто. Поэтому в дальнейших расчетах использовали логарифмически трансформированные значения этих признаков.
Атеросклероз характеризуется нарушением многих процессов, протекаю щих в организме. Учитывая значительную роль липидного обмена, циркули рующих иммунных комплексов в патогенезе и избыточную массу тела – как значимый фактор риска развития атеросклероза, можно предположить сущест вование опосредованных взаимосвязей. Ген NOS3 контролирует активность конститутивной NOS, содержащейся преимущественно в эндотелиальных клет ках. Образующаяся под ее влиянием окись азота вызывает расслабление глад ких мышц сосудов, увеличение кровотока, снижение периферического сопро тивления и системного артериального давления. К наиболее сильным естест венным блокаторам NO-синтазы относится супероксидный радикал, ограничи вающий распространение и снижающий концентрацию оксида азота. При этом потенциирующим эффектом на действие окиси азота обладает супероксиддис мутаза и антиокислительный фермент – каталаза [Cooke et al., 1992]. Кроме то го, мононуклеары также являются источниками окиси азота [Wanf et al., 1997].
Таблица 9.
Средние значения (M±S.D) количественных признаков у носителей разных генотипов по генам NOS в группе больных коронарным атеросклерозом Признак Генотипы F p M±S.D Транзиция С/T гена NOS CC 0,688±0, лог ХС-ЛПОНП 7,235 0, CT+TT 0,846±0, CC 0,740±0, лог ТГ 6,194 0, CT+TT 1,045±0, Полиморфизм G-954C гена NOS GG 6,474±1, ХС-ЛПНП 5,410 0, GC+CC 5,622±1, GG 1,453±0, ИМТ 6,828 0, GC+CC 1,259±0, Полиморфизм С-691Т гена NOS СС 63,507±37, Каталаза 6,031 0, СС+СТ 31,219±28, Полиморфизм G894Т гена NOS GG 4,174±0, ЦИК 7,811 0, GT+TT 4,915±0, GG 1,369±0, ХС-ЛПНП 4,373 0, GT+TT 1,544±0, Примечание. F - статистика Фишера-Снедекора для однофакторного дисперсионного анализа влияния генотипической изменчивости на варьирование количественных признаков;
р - уро вень значимости.
У больных ЭГ обнаружена ассоциация C/T полиморфизма гена NOS1 с максимальными суточными значениями систолического артериального давле ния (САД), G954C полиморфизма гена NOS2 с конечным диастолическим раз мером (КДР) и полиморфных вариантов G894T, С774Т гена NOS3 с площадью тела (S тела), С774Т с разницей диастолического и систолического давления дневного с ночным (табл. 10). Учитывая участие молекулы оксида азота в про цессах вазоконстрикции и вазодилятации, взаимосвязь полиморфизмов генов NOS с тонометрическими признаками является вполне закономерной. Кроме того, полученные ассоциации не противоречат основным концепциям метабо лических нарушений при артериальной гипертензии. Обнаруженная ассоциация VNTR полиморфизма гена NOS3 с индексом гипертрофии левого желудочка (ИГЛЖ), индексом массы миокарда левого желудочка (ИММЛЖ), согласуется с данными литературы [Степанов и др. 1998;
Пузырев, 1999].
Таблица 10.
Взаимосвязь полиморфизма NOS-генов с патогенетически значимыми признаками у больных эссенциальной гипертензией Признак Генотипы F p M±S.D Транзиция С/T гена NOS CC 5,172±0, МСАДС 4,925 0, CT+TT 5,249±0, G-954C NOS GG 49,683±5, КДР 9,222 0, GC+CC 50,383±4, G894Т NOS GG 0,657±0, S тела 5,212 0, GT+TT 0,723±0, С774Т NOS СС 4,789±12, СДСН 4,006 0, СT+TT 15,11±28, СС 7,078±9, ДДДН 4,331 0, СT+TT 14,269±18, СС 0,690±0, S тела 4,453 0, СT+TT 0,654±0, VNTR NOS ВВ 0,452±0, ИГЛЖ 5,686 0, АВ+АА 0,546±0, ВВ 75,978±10, ЧСС в покое 4,489 0, АВ+АА 70,409±9, ВВ 4,882±0, ИММЛЖ 4,252 0, АВ+АА 5,065±0, Примечание. Обозначения см. табл. 9.
Отметим, что в различных группах больных и контроля наблюдали раз личия по структуре главных компонент (рис. 2). В группе контроля в простран стве первых двух ГК расположились три кластера признаков: первый составили показатели атерогенности – коэффициент атерогенности Климова (КК), липид ного обмена – общий холестерин (ОХС), ХС-ЛПНП и холестерин в составе ли попротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП), но с отрицательным значением.
Второй образовали ХС-ЛПОНП, ТГ и в третий вошли показатели уровня АД (САД, ДАД).
У больных коронарным атеросклерозом количественные признаки распо ложились следующим образом: основной кластер составили показатели липид ного обмена (ТГ, ХС-ЛПНП, ХС-ЛПВП и ОХС), во второй вошли значения ар териального давления и состояния иммунитета (IgG и ЦИК) и третий - продукт перекисного окисления липидов – маалоновый диальдегид (МДА) и фермент антиокислительной активности – каталаза.
У больных эссенциальной гипертензией признаки в пространстве первых двух ГК расположились следующим образом: показатели мониторирования АД и патологии миокарда (ИГЛЖ, ММЛЖ, ИММЛЖ, размер задней стенки левого желудочка (ЗСЛЖ)) составили первую группу. Во вторую вошли данные мони торинга АД и в третью - показатели липидного обмена.
Известно, что все вышеперечисленные признаки вовлечены в комплекс метаболических нарушений при АГ и КА. Эпидемиологические исследования показывают растущую тенденцию к полипатии - множественности болезней.
Например, известно, что атеросклероз и артериальная гипертония очень часто сочетаются друг с другом, представляя собой «соседство» болезней, либо «се мейство» болезней - как результат общности этиологии и патогенеза [Пузырев, 2000]. Таким образом, функциональное значение полиморфизмов генов NOS в детерминации одного патологического фенотипа будет оказывать влияние и на развитие другого.
Несмотря на то, что в контрольной группе не было показано взаимосвя зи полиморфизмов генов NOS с отдельными количественными признаками, при их интегральной оценке с вариантом G954C гена NOS2 ассоциировала третья главная компонента, максимальный вклад в которую вносили уровни артери ального давления. В регуляции ритмов АД на уровне центральной нервной сис темы играет роль суточная периодичность возбуждения и торможения в коре головного мозга и клетках ретикулярной формации. NO является одним из важнейших рычагов, с помощью которых нервная система управляет тонусом сосудов, снабжающих кровью все системы организма [Huraux et al., 1999]. Этот рычаг может действовать и через систему трансмиссий, модулируя, например, взаимоотношения в системе гипоталамус-эпифиз-надпочечники или прямо стимулируя высвобождение вазопрессина [Cooke, Dzau, 1997].
У больных КА показана взаимосвязь транзиции С/T гена NOS1 с первой ГК, которую составляют показатели липидного спектра крови (рис. 2). Извест но, что дислипопротеинемия при атеросклерозе вовлечена в общий комплекс метаболических нарушений, при котором липидный обмен, АД и другие атеро генные факторы связаны между собой.
Таким образом, суммируя результаты анализа ассоциаций количествен ных, патогенетически важных для ССЗ признаков и факторов их общей измен чивости с полиморфизмом генов NOS, нужно отметить следующее: очевидно, что исследованные гены вносят определенный вклад в изменчивость комплекса признаков, на основе варьирования которых складывается патогенез ССЗ. В ос нове ассоциаций данных генов с признаками лежит функциональная значи мость молекулы NO, «сфера компетенции» которой затрагивает многие физио логические системы организма.
1, 1, ТГ 1, ЛПОНП ДАД 0, 0, САД 0,6 VLDL IgG 0, ТГ 0, Фактор 0, Фактор КАТАЛ KA 0, ЛПВП 0,2 ДАД KK ОХ 0, ОХ 0,0 МДАи САД ЛПНП -0, ЛПНП -0,2 МДАс ЛПВП -0,4 ЦИК -0, -0, -0, -0,4 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1, -0,6 -0,4 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1, Фактор Фактор G954C – 1 ГК C/T – 3 ГК Контроль Коронарный атеросклероз 1, 1,0 1-разница систолического АД дневного с ночным;
2-среднее днев ное САД;
3-разница диастолического АД дневного с ночным;
4 0,8 процент снижения САД ночного с дневным;
5-процент снижения 0, ДАД ночного с дневным;
6-конечный диастолический размер;
7 индекс гипертрофии левого желудочка;
8-частота сердечных со 0, Фактор кращений в покое;
9- ОХС;
10-ТГ;
11-ХС-ЛПНП;
12-ХС-ЛПВП;
8 11 0, 1713 14 21 13-межжелудочковая перегородка;
14- масса миокарда левого же 9 0,0 лудочка (ММЛЖ);
15-индекс ММЛЖ;
16-разница ХС-ЛПНВ/ХС 26 25 15 ЛПВП;
17- среднее дневное ДАД;
18-среднее ночное САД;
19 -0, 24 среднее суточное САД;
20-среднее суточное ДАД;
21-скорость ут -0, реннего повышения ДАД;
22-максимальное суточное АД;
23 -0, пульсовое АД днем;
24-пульсовое АД ночью;
25- пульсовое АД су -0,4 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1, точное;
26-задняя стенка левого желудочка;
27-площадь тела.
Фактор Эссенциальная гипертензия Рис. 2. Распределение признаков у больных коронарным атеросклерозом, эссенциальной гипертензией и в группе контроля в пространстве первых двух главных компонент.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ В основу проведенного исследования генов NOS был положен комплекс ный подход, заключающийся в характеристике полиморфизмов этих генов как на популяционном уровне, так и на уровне их взаимосвязи с сердечно сосудистыми заболеваниями.
Показано, что изученные полиморфизмы характеризуются широким диа пазоном изменчивости частот аллелей С691Т, G894C гена NOS3, C/T гена NOS1 и G954C гена NOS2 в популяциях разного этнического состава. Результа ты исследования позволяют также заключить, что изученные популяции Сиби ри, несмотря на их географическую близость, характеризуются различным уровнем генетического разнообразия по группе генов NOS.
Наибольшие различия частот аллелей показаны между русским населени ем Сибири (г. Томск, пос. Каргала) (2=52,782), при этом генетические расстоя ния по Nei, оцененные по частотам вариантов генов NOS3, были максимальны ми между жителями г. Томска и пос. Каргала (0,0492). Данные литературы [Chakravarti, 1999] по сравнительным исследованиям внутригруппового и меж группового генетического разнообразия свидетельствуют о том, что более 90% генетической изменчивости приходится на внутрипопуляционный уровень в пределах одного этноса;
таким образом, только малая доля генетического раз нообразия группоспецифична. При сравнении изученных этно территориальных групп наиболее близки друг к другу оказались тувинцы с бу рятами и русским населением Сибири, наиболее отдалены - буряты от якутов.
Эти наблюдения представляются важными с точки зрения проведения возможных параллелей между особенностями распространения в популяциях аллелей генов-кандидатов комплексных заболеваний и закономерностями рас пространения в этих популяциях мультифакториальной патологии – то, что частично составляет содержание современного научного направления – генети ческой эпидемиологии.
Анализ генетической компоненты МФЗ сводится к ряду задач: 1) опреде ление функционально значимых вариантов генов, продукты которых вовлечены в реализацию МФЗ (гены-кандидаты);
2) установление патогенетически значи мых сочетаний этих полиморфизмов у индивидов;
3) оценка их распростране ния в популяциях разного этнического состава.
В рамках решения первых двух задач широко используется анализ ассо циаций аллелей и их сочетаний с заболеваниями и патогенетически важными для них признаками. Проведенное нами исследование в этом отношении вполне традиционно. Установлено, что аллель С691 гена NOS3 является фактором рис ка развития коронарного атеросклероза (RR=5,344), эссенциальной гипертензии (RR=1,716) и идиопатической гипертрофической кардиомиопатии (RR=3,378), аллель G894 NOS3– коронарного атеросклероза (RR=3,453).
Полиморфные варианты генов NOS: G894T NOS3, C/T NOS1, G954C NOS2 взаимосвязаны с показателями липидного спектра крови (холестерин в составе липопротеинов низкой и очень низкой плотности, триглицериды) у больных коронарным атеросклерозом и показателями мониторирования арте риального давления у больных эссенциальной гипертензией.
При интегральной оценке комплекса количественных, патогенетических признаков у больных КА методом главных компонент показана взаимосвязь полиморфизма С/T гена NOS1 с показателями липидного спектра крови. В группе контроля ССП с вариантом G954C гена NOS2 ассоциировала третья главная компонента, максимальный вклад в которую вносили уровни артери ального давления.
Исследованные полиморфизмы – лишь небольшая часть комплекса на следственных факторов, взаимодействующих друг с другом, с факторами ок ружающей среды и обусловливающих развитие КА, ЭГ и других мультифакто риальных заболеваний, генетическая компонента которых представлена не ред кими мутациями, а неблагоприятной комбинацией «нормальных» вариантов ге нов, широко распространенных в популяциях.
ВЫВОДЫ 1. Показано, что изученные полиморфизмы генов NOS характеризуются широ ким диапазоном изменчивости частот аллелей С691Т (53% в г.Томске – 94% у якутов), G894C (57% у русских - 70% у тувинцев) гена NOS3, транзиции C/T в гене NOS1 (75% у бурят - 94% в г.Томске) и G954C гена NOS2 (73% у бурят – 96% у русских) в популяциях разного этнического состава.
2. Обнаружено, что аллельное разнообразие для 6 изученных полиморфизмов среди всех популяций, было минимальным по VNTR полиморфизму гена NOS3 (20%) и максимальным по варианту G894T (47%) этого гена. Макси мальная гетерогенность по частотам аллелей между изученными этнически ми группами показана по варианту С691Т гена NOS3.
3. Установлено, что уровень генной дифференциации изученных этнических групп был минимальным по полиморфизму С774Т гена NOS3 (2%) и макси мальным по варианту С691Т (14%) данного гена, в среднем этот показатель был невысок и составил 5%.
4. Установлено, что изученные полиморфизмы G894T и С691Т гена NOS3 яв ляются факторами риска развития коронарного атеросклероза и эссенциаль ной гипертензии, аллельные варианты С691Т - идиопатической гипертрофи ческой кардиомиопатии.
5. Показано, что полиморфные варианты группы генов NOS: G894T NOS3, C/T NOS1, G954C NOS2 взаимосвязаны с показателями липидного спектра крови (холестерин в составе липопротеинов низкой и очень низкой плотности, триглицериды) у больных коронарным атеросклерозом и показателями мо ниторирования артериального давления у больных эссенциальной гипертен зией.
6. Установлена роль полиморфизмов генов NOS в детерминацию количествен ных, патогенетически значимых признаков: уровень артериального давления у здорового населения г.Томска и липидный спектр крови у больных коро нарным атеросклерозом.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Косянкова Т.В., Пузырев К.В. Исследование некоторых полиморфных вари антов генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний в выборках из популяций Сибири / Фундаментальные и прикладные проблемы современ ной медицины. Материалы молодежной научной конференции СО РАМН.
6-7 июня 2000 г., Новосибирск. – Новосибирск, 2000. – С. 99-101.
2. Puzyrev K.V., Stepanov V., Pavlukova E., Kosyankova T., Spiridonova M., Kar pov R., Puzyrev V. Association of angiotensinogene, angiotensin-I converting en zyme and endothelial cell nitric oxide synthase gene polymorphism with blood pressure and left ventricular hypertrophy // Amer. J. Hypertenison. - 2000. - V. 13.
- P. 73.
3. Puzyrev V.P., Stepanov V., Kosyankova T., Puzyrev K.V., Pavlukova E., Karpov R., Spiridonova M., Saliukov B., Nikitina S.Yu., Eremina E. Analysis of candidate genes for cardiovascular disease and their contribution to the variability of quanti tative traits of pathogenetic importance // Eur. J. Hum. Genet. - 2000. - V.8. Suppl.1. - P. 52.
4. Пузырев В.П., Степанов В.А., Косянкова Т.В., Пузырев К.В., Павлюкова Е.Н., Карпов Р.С., Спиридонова М.Г., Салюков В.Б., Хитринская И.Ю., Ни кулина С.Ю., Еремина Е.Р. Анализ полиморфных ДНК-маркеров кандидат ных генов болезней и их вклада в изменчивость патогенетически значимых признаков / Второй (четвертый) Российский съезд медицинских генетиков, 17-19 мая, Курск. Тезисы докладов, Ч.1. – Курск.- 2000. – С. 184-185.
5. Пузырев В.П., Фрейдин М.Б., Косянкова Т.В., Гусарева Е. С., Салякина Д.
Ю., Белых А.В., Ондар Э.А. Полиморфизм кандидатных генов распростра ненных заболеваний в разных популяциях / Проблемы развития и сохране ния тувинского генофонда: теория и практика / Под ред. В.П. Пузырева, Э.А.Ондар. - Томск: «STT», - 2000.- C.101-109.
6. Пузырев К.В., Павлюкова Е.Н., Степанов В.А., Карпов Р.С., Спиридонова М.Г., Косянкова Т.В. Молекулярно-генетические маркеры подверженности к развитию гипертрофии миокарда левого желудочка / Российский нацио нальный конгресс кардиологов. Кардиология, основанная на доказательст вах. Тезисы докладов. - 2000, Москва. - C.244.
7. Кондратьева Е.И., Кравец Е.Б., Косянкова Т.В., Вылегжанина Е.В., Фрейдин М.Б. Анализ VNTR полиморфизма гена NOS3 у больных сахарным диабетом 1 типа / Бюлл. эксперемент. Биологии и медицины. - 2001, приложение 1. C.60-62.
8. Косянкова Т.В. VNTR полиморфизм гена эндотелиальной синтазы оксида азота (NOS3) в сибирских популяциях и у больных мультифакториальной патологией // Материалы Всероссийской научной конференции с межд. Уча стием "Север-человек: проблемы сохранения здоровья". Красноярск. - 2001.
- C.213-214.
9. Косянкова Т.В., Пузырев К.В., Ковалев И.А. Генетика сердечно-сосудистой патологии / Сборник статей "Молекулярно-биологические технологии в ме дицинской практике", Новосибирск. - 2001. - C. 34-41.