Морфо-функциональное состояние эритроцитов и гемоглобина лабораторных животных при анемиях и действии экдистероидсодержащей субстанции серпистен
На правах рукописи
Иванкова Жанна Евгеньевна МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ЭРИТРОЦИТОВ И ГЕМОГЛОБИНА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ АНЕМИЯХ И ДЕЙСТВИИ ЭКДИСТЕРОИДСОДЕРЖАЩЕЙ СУБСТАНЦИИ СЕРПИСТЕН 03.00.13 – физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Ярославль 2007
Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных ГОУ ВПО “Сыктывкарский государственный университет”
Научный консультант:
Кандидат биологических наук, доцент Мойсеенко Н.А.
Официальные оппоненты:
Доктор биологических наук, доцент Мельников А.А.
Доктор биологических наук, профессор Хомутов А.Е.
Ведущая организация:
Институт физиологии природных адаптаций УрО РАН, г.
Архангельск
Защита состоится “_” 2007г. в “_” часов на заседании диссертационного совета Д 212..307.02 при ГОУ ВПО “Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д.
Ушинского” по адресу: 150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, д.
108.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО “Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д.
Ушинского”
Автореферат разослан “_”2007г.
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент Тихомирова И.А.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. В природных и производственных условиях нашего времени организм нередко испытывает влияние необычных, чрезмерных и жестких факторов среды. Адаптация к ним может носить самый различный характер и затрагивать все стороны организации и жизнедеятельности человека и животных (Н.А.
Агаджанян и соавт., 1997;
Н.А. Агаджанян, Н.А. Ермакова, 1997).
Неспецифическую сопротивляемость организма можно повысить с помощью физиологически активных соединений природного происхождения - адаптогенов. В качестве наиболее перспективных из них в настоящее время исследуют фитоэкдистероиды. Актуальной задачей современной физиологии является выяснение роли этих веществ в обменных процессах животных. Для теплокровных животных экдистероиды не являются эндогенными. Тем не менее, многие стороны обменных процессов в клетках и органах высших животных восприимчивы к действию экдистероидов в большей степени, чем ко многим другим веществам растительного происхождения (А.А. Ахрем, Н.В. Ковганко, 1989), в то время как сравнительные эксперименты с кортизолом млекопитающих не показали его активности у насекомых. Известно, что фитоэкдистероиды оказывают анаболическое, адаптогенное, антиоксидантное действие (А.П. Азизов, 1997;
Р.Д. Сейфулла, 1998;
И.Н. Тодоров и соавт., 2000;
R. Lafont, L. Dinan, 2003). Однако многие стороны действия этих веществ, в частности, на систему крови, остаются либо не изученными, либо носят отрывочный, эпизодичный характер. Выяснение влияния этих веществ на систему крови очень важно, так как кровь является интегральной системой, связывающей воедино и затрагивающей все органы и ткани, поэтому изменение её состояния может сказаться на работе функциональных систем организма в целом (Г. И. Козинец, 1990).
Цель исследования. Целью настоящей работы является исследование морфо-функциональных свойств эритроцитов и гемоглобина лабораторных животных при действии экдистероидсодержащей субстанции Серпистен в норме и в условиях анемии.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Охарактеризовать параметры крови лабораторных животных после развития экспериментальной гемолитической фенилгидразиновой анемии и при введении ЭС Серпистен.
2. Исследовать особенности развития гемолитической анемии на фоне предварительного курсового введения ЭС Серпистен.
3. Исследовать динамику и характер восстановления параметров крови млекопитающих в условиях постгеморрагической анемии и при действии ЭС Серпистен.
4. Изучить влияние режима и дозы введения ЭС Серпистен на показатели и свойства Эр и Hb, в зависимости от пола и возраста животного, сезона исследования.
5. Исследовать в опытах in vitro щелочерезистентность (ЩР) и электрофоретические свойства Hb эритроцитарной массы и Hb гемолизата крови животных при действии ЭС Серпистен.
Научная новизна. Впервые показано стимулирующее эритропоэз действие ЭС Серпистен, что выражается в увеличении относительного и абсолютного количества ретикулоцитов (Rt), ускорении созревания циркулирующих в русле крови Rt, сопровождающегося уменьшением количества в клетках ретикуло-филаментозной субстанции, что является отражением процесса стимуляции биосинтеза Hb.
Впервые показано стабилизирующее действие фитоэкдистероидов на мембрану эритроцитов (Эр) в реакциях осмотического и кислотного гемолиза, и опосредованное мембраной стабилизирующее действие их на содержащийся в клетках Hb. Морфология Эр крыс, мышей и кроликов модифицируется при введении ЭС Серпистен. Впервые показано нормализующее действие ЭС Серпистен на кислотно основное состояние крови (КОС) лабораторных животных.
Впервые показан защитный эффект вещества на Эр при экспериментальных постгеморрагической (кролики) и гемолитической (фенилгидразин (ФГ), крысы) анемиях: уменьшение уровня Эр с тельцами Гейнца у животных с вызванной гемолитической анемией как при предварительном введении препарата, так и на фоне развивающейся анемии.
В опытах с кровопусканием на кроликах показан антистрессовый и адаптогенный эффекты ЭС Серпистен. Ретикулоцитоз (один из показателей стресса) наименее выражен у животных, получавших ЭС Серпистен.
Научно-практическая значимость. В результате проведенного исследования расширено представление о влиянии фитоэкдистероидов на кровь млекопитающих, предложен возможный механизм действия этих веществ. Полученные результаты найдут своё место в понимании физиолого-биохимических механизмов действия вещества в организме млекопитающих, а также при разработке лекарственных препаратов и (или) биологически активных пищевых (кормовых) добавок. На основании проведенного исследования ЭС Серпистен можно рассматривать как гематопротекторное средство при приобретенной гемолитической анемии и острой кровопотере Основные положения, выносимые на защиту:
1. Усиление и ускорение регенерации крови в условиях анемии может быть достигнуто введением ЭС Серпистен.
2. При анемиях и в норме ЭС Серпистен оказывает мембраностабилизирующее действие на поверхностную мембрану Эр лабораторных животных. Эффект зависит от вида, пола и возраста животного, от дозы вводимого вещества, а так же сезона, в котором проводилось исследование.
3. В условиях in vitro и iv vivo изменяются физико-химические свойства Hb: фракционный спектр, относительная электрофоретическая подвижность отдельных фракций Hb (ОЭФП) и щелочерезистентность Hb при влиянии ЭС Серпистен. Эффект опосредован поверхностной мембраной Эр, зависит от вида, пола животных и сезона исследования.
Апробация работы. Результаты исследований были доложены и обсуждены на XVIII Съезде физиологического общества (г. Казань, 2001);
научной конференции «Экологическая ботаника: наука, образование, прикладные аспекты» (г. Сыктывкар, 2002);
Симпозиуме с международным участием «Актуальные проблемы адаптации к природным и экосоциальным условиям среды» (г. Ульяновск, 2002);
XIX Съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (г.
Екатеринбург, 2004);
IV Молодежной научной конференции Института физиологии Коми НЦ УрО РАН «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (г. Сыктывкар, 2005);
IX Международном Съезде «Фитофарм 2005» (г. Санкт Петербург, 2005);
IV Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (г. Сыктывкар, 2006).
По теме диссертации опубликовано 18 печатных работ, из них статей.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов, списка литературы, включающего отечественных и 62 иностранных источников. Работа иллюстрирована 43 таблицами и 64 рисунками.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалом исследования служила смешанная кровь крыс линии Wistar (n=427, m=200,9±13,9г) и нелинейных белых (n=233, m=191,21±11,4г), мышей линии СВА (n=78, m=20,6±0,3г), мышей альбиносов (n=172, m=24,6±2,4г), венозная кровь кроликов (n=59, m=3,38±0,03кг).
Выделение ЭС Серпистен из надземной части растений серпухи венценосной (Serratula coronata L.) проведено в лаборатории биохимии и биотехнологии растений Института биологии Коми НЦ УрО РАН (зав. лаб., д.б.н., проф. В.В. Володин). В состав препарата входят фитоэкдистероиды: 20-гидроксиэкдизон – 80%, 25S инокостерон – 11%, -экдизон – 5%.
Схема эксперимента Кровь крыс и мышей получали методом тотального обескровливания декапитацией после легкого хлороформного наркоза;
у кроликов - пункцией краевой вены уха в объеме 1-1,25 мл, стабилизировали гепарином.
I. Вызванная гемолитическая (фенилгидразиновая) анемия. Анемию вызывали 2-3 кратными подкожными инъекциями 2,5% фенилгидразина (ФГ). Проведены семь серий эксперимента с использованием крыс линии Wistar (самцы и самки). Крыс делили на четыре группы: опытную (ЭС), контрольную №1 (0,9% NaCl), контрольную №2 (ФГ) и интактную. В разных сериях ЭС вводили как до введения ФГ (в дозах 5 и 20 мг/кг), так и после (в тех же дозах).
II. Кровопускание. Проведены две серии эксперимента на кроликах породы Шиншилла. Кроликов делили на три группы: опытную (ЭС), контрольную №1 (0,9% NaCl) и №2 (только кровопускание, без введения каких либо веществ). В первой серии животным опытной группы вводили п/к раствор ЭС в дозе 2,5 мг/кг в день кровопускания, затем на 3,6,9,12 дни после. Кровь для анализа брали до эксперимента (за 5-14 дней), в день кровопускания и на 3,6,9,12,15 дни после. При кровопускании забирали 20% от общего объёма крови, который рассчитывали как 5,4% от массы тела (И.П. Западнюк и соавт.,1974).
Во второй серии кроликам в течение 5 дней вводили растворы ЭС (по 2,5мг/кг). На 6-й день - кровопускание. Отслеживали восстановление параметров крови в течение 14 дней, кровь для анализа брали до кровопускания (фоновые исследования), в день кровопускания, и на 3, 6, 9, 12 и 14 дни.
III. Однократное введение ЭС Серпистен. Эксперимент проводили на нелинейных белых крысах, мышах линии СВА, нелинейных белых мышах и кроликах породы Шиншилла. На нелинейных белых крысах проведены четыре серии эксперимента. Крыс делили на три группы:
опытную (ЭС), контрольную (0,9% NaCl) и интактную. Крысам опытных групп однократно вводили ЭС в дозе 20 мг/кг, декапитировали через: 1 (n=31);
2 (n=65);
12 (n=37) и 24 (n=51) часа.
Кроме опытов in vivo на крови белых нелинейных крыс проводили опыты in vitro. Кровь крыс делили на четыре пробы: 1 – опыт №1 (к эритроцитарной массе (ЭрМ) добавляли ЭС в объеме 0,007 мл на 1 мл ЭрМ);
2 – контроль №1 (к ЭрМ добавляли соответствующий объем 0,9% NaCl);
3 – опыт №2 (к Hb гемолизата крови добавляли ЭС в объеме 0,007 мл ЭС на 1 мл гемолизата);
4 – контроль №2 (к гемолизату добавляли 0,9% NaCl). Все пробы инкубировали в течение 60 минут при 37С. Мышей СВА (5- (n=39) и 12-месячных (n=39)) делили на пять групп: интактная;
опытные №1 и 2 (вводили ЭС в дозе 5 и 20 мг/кг, соответственно);
контрольные №1 и 2 (вводили 0,9% NaCl). На белых мышах проведены две серии эксперимента (первая - в зимний период года, вторая - в летний). Мышей делили на 5 групп:
интактная, опытные №1 и 2 (вводили ЭС в дозах 5 и 20 мг/кг, соответственно), контрольные №1 и 2 (получали 0,9% NaCl).
Методы исследования крови Показатели крови определяли по общепринятым методам (В.В.
Меньшиков, 1987). Параметры КОС крови определяли с помощью анализатора фирмы «Ciba Corning» 288 Blood Gas System (Англия).
Осмотическую резистентность Эр (ОРЭ) определяли унифицированным методом с помощью растворов NaCl убывающей концентрации от 0,9% до 0,2% с шагом в 0,05% в модификации Л.И.
Идельсона (Руководство к …, 1988).
Кислотный гемолиз Эр (КРЭ) проводили по методу И.А. Терскова и И.И. Гительзона с помощью 0,002 н HCl и отслеживанием процесса гемолиза Эр каждые 15 сек (И.И. Гительзон, И.А. Терсков,1957).
Щелочерезистентность (ЩР) Hb определяли по Зингеру (Й.
Тодоров, 1968) в нашей модификации: прослеживание процесса денатурации белка в динамике на 1,3 и 5 минутах действия щелочи (NaOH) и использование гемолизатов с концентрацией Hb 5 г/%.
Электрофорез в полиакриламидном геле проводили по Г. Мауреру (1971) в системе буферных растворов и гелей №1.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Морфо-функциональное состояние крови крыс при развитии гемолитической анемии и влиянии ЭС Серпистен Показано (табл.1), что у крыс контрольной группы №2 (вводили только ФГ) снижены концентрация Эр и показатель Гт по сравнению с интактной группой;
увеличена абсолютная и относительная концентрации Rt, появляются Rt II стадии зрелости по Гейльмейеру, отсутствующие в норме у интактных крыс. Кроме того, появляются Эр, содержащие тельца Гейнца, характерные для гемолитических анемий, доля которых является индикатором глубины анемии (Я.Г.
Ужанский, 1968).
Таблица Параметры крови крыс Wistar при различных воздействиях (M±m) Группы Интакт- Опыт Контроль №1 Контроль ная (ФГ+ЭС) (ФГ+0,9%NaCl) №2 (ФГ) Показатели n=8 n=10 n=9 n= Hb, г/л 117,5±2,9 107,0±1,9 115,3±1,2* 109,8±2,5* Гт, % 39,2±0,7 33,5±0,8 33,7±0,6 31,9±0,8*** Эр, 1012/л 4,62±0,11 3,53±0,07 3,54±0,04** 3,39±0,06*** СрОЭ, мкм3 85,1±1,1 95,0±1,3 95,2±2,3 94,3±1,9*** ССЭ, пг 25,5±0,3 30,4±0,4* 32,7±0,4 32,3±0,6*** СКГ, % 29,9±0,3 32,0±0,5** 34,5±0,7 34,3±0,2*** Диаметр 6,77±0,03 7,16±0,02 7,12±0,01 7,14±0,03*** Эр, мкм Вязкость 3,6 0,2 3,7±0,1*** 3,3±0,1** 2,8±0,1*** крови СОЭ, мм/ч 1,2±0,1 1,2±0,1 0,9±0,01** 1,4±0, Rt, ‰ 15,5±0,7 67,2±5,3** 73,6±5,9** 106,1±9,4*** Rt, 1012/л 0,07±0,01 0,24±0,02* 0,24±0,01*** 0,37±0,04*** II, % - 1,1±0,01 0,8±0,01 1,6±0, III,% 5,0±0,2 4,8±0,5 4,5±0,5** 5,4±0, IV,% 20,6±1,7 15,1±1,1** 16,5±2,0 20,9±2, V,% 73,6±1,7 79,9±1,4** 78,7±2,9* 71,5±2, Тельца - 64,1±2,7** 61,3±1,3* 71,2±1, Гейнца,% Примечание: здесь и далее * - разница достоверна при p0,1 (с пониженной надежностью);
** - p0,05;
*** - p0,01. Для контрольной группы №2 достоверность разницы оценена по сравнению с интактной группой, для опытной и контрольной №1 групп по сравнению с контрольной №2.
Отмечено увеличение среднеклеточного диаметра Эр характерный признак макроцитарной анемии, когда в мазках крови присутствуют (9% и более от общего числа клеток) Эр большого диаметра (8,1 мкм). Уменьшена вязкость крови крыс. Известно (Л.Н.
Катюхин, 1995), что она зависит от концентрации в ней Эр и Hb.
Снижение этих показателей в наших экспериментах и повлекло за собой уменьшение вязкости крови и некоторое увеличение СОЭ крови крыс контрольной группы №2 по сравнению с интактной (p0,1).
Однократное введение ЭС на 4-й день развития анемии практически не сказалось на форме клеток. В ответ на введение 0,9% NaCl (контроль №1) Эр увеличились в объеме и среднеклеточной толщине, на фоне тенденции к уменьшению среднеклеточного диаметра, по сравнению с контролем №2. Это свидетельства сферуляции клеток. У крыс опытной и контрольной №1 групп достоверно снижено содержание в крови Rt по сравнению с крысами контрольной группы №2. При этом снижение в ответ на ЭС более выражено, чем на 0,9% NaCl. При этом ретикулоцитарная формула по Гейльмейеру сдвинута влево, в сторону более зрелых форм, так что доля Rt V стадии зрелости оказывается выше (p0,2), чем у животных контрольной группы №2. Вероятно, ускоренное созревание Rt привело к более быстрому накоплению в циркуляции Эр и, соответственно, к увеличению показателя Гт. Всё это свидетельства ускоренного выхода организма крыс опытной и контрольной №1 групп из состояния анемии. Однако, насыщенность Эр Hb (среднеклеточные концентрация и содержание) у крыс опытной группы и, соответственно, общее содержание Hb в крови оказывается несколько ниже, чем у крыс контрольных групп №1 и №2. У крыс контрольной группы № насыщенность Эр Hb соответствует уровню её у крыс контрольной группы №2, а общее содержание Hb в крови увеличивается соответственно увеличению концентрации Эр. То есть, в ответ на введение ЭС на фоне развивающейся гемолитической анемии в циркуляцию поступают качественно иные (менее насыщенные Hb) Rt, что может быть отражением более быстрого их созревания, которое в конечном итоге должно привести к более быстрому восстановлению организма животных. У крыс опытной и контрольной №1 групп значительно уменьшается доля Эр с тельцами Гейнца (p0,1 и 0,05, соответственно), что можно также рассматривать как свидетельство нормализации структуры эритроцитарных мембран более быстрой, чем у крыс контрольной группы №2. У крыс опытной группы возвращается к норме (уровень у интактных животных) СОЭ и почти возвращается вязкость крови, видимо, прежде всего, за счет увеличения концентрации Эр в крови, поскольку вязкость плазмы остается пониженной.
2. Характер восстановления крови крыс при гемолитической анемии под влиянием предварительного введения ЭС Серпистен В данном эксперименте ФГ вводили после курсовой дачи препарата. Исследование проведено в летний и зимний периоды года с использованием крыс линии Wistar.
Показано, что у крыс контрольной группы №2 (ФГ) уменьшается концентрация Hb на 18,4% (p0,01) и Эр на 30,1% (p0,01), показатель Гт на 12,8% (p0,01), СКГ на 5,7% (p0,01), увеличивается СрОЭ на 25,4% (p0,01) и ССЭ на 18,9% (p0,01) по сравнению с интактной. В крови животных появляются тельца Гейнца (67,1%) и ретикулоцитоз (67,8‰) (табл.2).
Таблица Показатели крови крыс Wistar при различных воздействиях (M±m) Группы Интактная Опытная Контроль №1 Контроль (ЭС+ФГ) (0,9% NaCl+ФГ) №2 (ФГ) Показатели n=12 n=12 n=13 n= Hb, г/л 119,2±1,6 106,6 ±3,9** 104,7±1,8** 97,2±1,2*** Гт, % 38,1±0,7 35,2±0,4** 34,9±0,5* 33,3±0,7*** Эр, 1012/л 4,52±0,07 3,76±0,11** 3,61±0,10** 3,16±0,1*** СрОЭ, мкм3 84,3±1,2 95,0±3,7** 97,4±2,2** 105,8±2,1*** ССЭ, пг 26,4±0,4 28,9±1,7 29,3±0,9 31,4±1,2** СКГ, % 31,3±0,3 30,2±0,9 30,0±0,4 29,5±0,6** 2,3±0,3*** СОЭ, мм/ч 0,9±0,1 1,4±0,1** 2,0±0, 3,4±0, Вязкость 3,5±0,1 3,2±0,1* 3,3±0, крови 1,4±0,03** 1,6±0, Вязкость 1,6±0,7 1,5±0, плазмы 6,81±0,01 6,82±0, Диаметр Эр, 6,85±0,03 6,82±0, мкм 2,53±0,04*** 2,83±0,07*** Толщина Эр, 2,29±0,04 2,64±0,05** мкм 2,96±0,06 2,70±0,04*** 2,39±0,06*** Индекс 2,59±0,086** сферичности 29,3±1,6* Rt, ‰ 21,5±0,1 37,9±4,6 36,3±3,3*** Rt, 1012/л 0,10±0,002 0,11±0,01*** 0,14±0,02 0,13±0,01** Rt III, % 4,67±0,7 2,4±0,2* 2,5±0,6 2,1±0,3** Rt IV,% 18,5±1,5 10,0±0,9 7,8±1,2 8,2±0,7*** Rt V,% 76,9±1,5 87,5±1,2 89,7±1,8 89,7±1,0*** Тельца - 44,4±1,1*** 63,3±3,7 67,1±3, Гейнца, % Среднеклеточный диаметр Эр практически не изменяется, однако увеличивается толщина и уменьшается индекс сферичности Эр, то есть Эр становятся более круглыми (сфероциты - терминальная стадия трансформации эхиноцитов, акантоцитов и стоматоцитов при необратимых повреждениях и естественном старении) (В.М.
Погорелов, Г.И. Козинец, 2005). Все эти изменения в параметрах крови указывают на наличие в крови анемии (Г.Н. Зюзьков и соавт., 2004).
Вязкость крови и плазмы соответствует уровню у интактных животных. У крыс опытной группы показатели крови также снижены, но приближены к фоновым значениям у интактных животных. У них же отмечена минимальная доля Эр содержащих тельца Гейнца.
Вязкость крови и плазмы, СОЭ (p0,05) снижены по сравнению с контрольной группой №2. Менее выражен ретикулоцитоз (29,3 ‰).
Такие изменения могут указывать на стабилизацию мембран Эр, соответственно меньшее разрушение их под действием ФГ, и меньшее напряжение эритропоэза, который может стимулироваться продуктами деструкции Эр (Д.И. Бельченко, 1992;
А.Д. Павлов, Е.Ф. Морщакова, 1999). КРЭ увеличивается у всех исследуемых групп крыс с вызванной гемолитической анемией (рис.1).
Эр, % Опытная (Серпистен+ФГ) Контрольная №1 (0,9% NaCl+ФГ) 16 Контрольная №2 (ФГ) Интактная **b **b ***a ***a ***a ***a **b ***a 4 a *** ***a ***a ***a 2 ***a **b ***a **b **a ***a **b **b мин **b 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 8 8, Рис. 1. Кислотный гемолиз Эр крови крыс Wistar. По оси абсцисс – время в мин;
по оси ординат - % гемолизировавших Эр. Примечание: a – по сравнению с интактными;
b – с контрольной №2.
У крыс контрольной №2 группы (ФГ) отмечена максимальная резистентность Эр, но уменьшено время начала гемолиза (1,81 мин, против 2,23 у интактных (p0,05)), размах кривой увеличивается до мин (p0,05), и уменьшается амплитуда кривой до 13,1 % (p0,3).
Эритрограммы крыс опытной группы наиболее приближены к кривой интактных крыс, время полураспада Эр практически такое же, как и у интактных животных (4,3 мин).
Показано, что у крыс контрольной группы №2 (ФГ) достоверно уменьшается рСО2, рО2, концентрация карбонатов, буферных оснований, повышается рН, что характерно для анемий с интенсивным гемолизом Эр и усиленным эритропоэзом. В крови этих животных наблюдается респираторный алкалоз. Предварительное введение ЭС привело к сохранению рСО2 и рО2 почти на уровне интактных животных. рН крови повышен, но организм крыс компенсирует это повышение с помощью бикарбонатов и буферных оснований.
У крыс-самцов контрольной группы №2 отмечена минимальная ОРЭ по сравнению с другими экспериментальными группами (рис.2) осмотического гемолиза Эр крыс-самцов. У крыс опытной группы отмечено увеличение ОРЭ в области 0,4-0,2 % NaCl по сравнению с интактными и контрольными животными.
Эр, % Опытная (Серпистен+ФГ) Контрольная №1 (0,9% NaCl+ФГ) Контрольная №2 (ФГ) Интактные 30 a *** b *** a *** b ** a *** b ** NaCl, % 0,9 0,85 0,8 0,75 0,7 0,65 0,6 0,55 0,5 0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 0, Рис. 2. Кривые осмотического гемолиза Эр крови крыс-самцов линии Wistar. По оси абсцисс –% NaCl;
по оси ординат – гемолизировавшие Эр, %. Примечание: a – по сравнению с интактными;
b – с контрольной №2.
Показано, что под влиянием ФГ количество ЩР Hb у самцов крыс снижается через 1 мин действия щелочи по сравнению с уровнем у интактных, однако через 3 мин оказывается несколько выше (p0,01), а через 5 мин вновь ниже (p0,05) уровня у интактных.
Предварительные инъекции 0,9% NaCl делают снижение ЩР Hb макимальным, а ЭС несколько уменьшают его эффект. Показано, что количество ЩР Hb в норме у самок выше, чем у самцов. Под действием ФГ эта разница нивелируется. Более того, количество ЩР Hb у самок оказывается даже чуть ниже, чем у самцов. У животных, которым гемолитическую анемию вызывали на фоне предварительных инъекций 0,9% NaCI, половая разница в количестве ЩР Hb сохраняется, причем становится более ярко выраженной, чем у интактных.
Во всех группах крыс ОЭФП фракций Hb самок оказывается ниже, чем у самцов (однако разница достоверна лишь в контрольной группе №2 для фракции I - p0,01, для II и III - p0,05). Исключение составляют только VI, VII фракции интактной и контрольной № групп, а также VII – опытной, где ОЭФП Hb самцов и самок не различаются. Показано, что инъекции ФГ приводят к достоверному и высоко достоверному снижению по сравнению с интактными ОЭФП быстрых минорных фракций Hb у самок: I (p0,05), II;
основной фракции III (p0,05);
медленных минорных VI и VII (p0,1 и 0,05).
ОЭФП фракции IV и V испытывают выраженную тенденцию (p0,2) к снижению. У самцов это снижение выражено слабее и оказывается достоверным только для фракций IV, VI (p0,1) и VII (p0,05), тогда как остальные испытывают лишь тенденцию к снижению, хотя и достаточно выраженную для основной III фракций (p0,2). ОЭФП фракции II у самцов вовсе не изменяется. Предварительные инъекции ЭС сохраняют ОЭФП фракций практически на уровне у интактных, хотя и с некоторым превышением этого уровня, особенно у самцов, так что ОЭФП I минорной фракции Hb и фракции IV у них оказывается выше (p0,1), чем у интактных. Эффект превышения оказывается более выражен в ответ на предварительные инъекции 0,9% NaCl. ОЭФП фракций Hb крыс опытной группы, которым предварительно вводили ЭС, оказалась ближе к уровню у интактных.
Таким образом, профилактические инъекции ЭС удерживают ОЭФП фракций Hb крыс на уровне у интактных животных при действии гемолитического яда ФГ, что обеспечивается, по-видимому, опосредованно через стабилизацию поверхностной мембраны клетки.
3. Динамика восстановления параметров крови кроликов после кровопускания и при влиянии ЭС Серпистен В первой серии эксперимента установлено, что в ответ на кровопускание у кроликов всех трех подопытных групп отмечена типичная со стороны крови реакция организма на кровопотерю:
снижение концентрации Эр, Hb, показателя Гт на фоне увеличения относительной и абсолютной доли Rt. Однако, степень и динамика снижения разных концентрационных показателей у животных разных подопытных групп разная (табл.3). Минимальные значения концентрации Эр, Hb, показателя Гт найдены на 3-й день после кровопотери, что соответствует данным литературы (Б.Г. Юшков и соавт., 1999).
Показано, что на 3-й день после кровопотери у всех групп кроликов снижается концентрация Hb (на 30,3% у опытной, 12,5% у контрольной №1 и 27,9% у контрольной №2), показатель Гт (на 20,2%;
13,7% и 11,6%, соответственно). У кроликов опытной и контрольной №1 групп отмечено, кроме того, уменьшение ССЭ (на 11,3% и 19,3%, соответственно) и СКГ (на 13,5% и 20,2%). В связи со снижением уровня Эр в крови у кроликов опытной и контрольной № групп уменьшается вязкость крови. У этих же групп животных отмечено появление в крови Rt II стадии зрелости, увеличивается доля Rt III и уменьшается V стадии зрелости.
Таблица Показатели крови кроликов опытной группы (M±m) Показа- Дни после кровопускания тели Фон 3-й день 6-й день 9-й день 12-й день 15-й день Hb, г/л 124,1±2,9 86,0±8,1 94,0± 3,8 111,0±2,8 111,3±13,1 109,7±5, *** *** *** ** Гт, % 34,7±0,8 27,7±2,5** 30,7±2,8* 33,7±3,1 35,9± 1,7 36,3±1, Эр, 4,26±0,11 3,27±0,21 3,93± 0,50 4,46± 0,11 4,69± 0,23 4,63± 0, 1012/л *** ** ** СрОЭ, 82,02±2,4 84,6±11,2 79,8±13,6 75,9±10,1 76,7±3,7 77,9±4, мкм ССЭ, пг 29,6±0,9 26,2±2,1 24,5±3,4 23,2±2,7 23,6±2,2 23,7±1, ** ** *** ** *** СКГ, 36,4±1,6 31,4±4,2 30,9± 0,2 30,6± 0,6 30,8±2,9 30,5±1, г/дл ** ** ** Вяз- 1,9±0, 2,4±0,04 1,6± 0,15 1,4± 0,2 2,0±0,1 2,1± 0, кость ** *** *** ** *** Диаметр 7,11±0,02 7,26± 0,13 7,21± 0,11 7,23±0,11 7,17± 0,01 7,21± 0, Эр, мкм ** ** *** Rt, ‰ 23,6±3,3 30,6± 6,9 40,5±3,5 32,8± 5,3 24,9±7,9 19,2±5, *** * Rt, II % — — — — 0,4± 0,2 0,4± 0, III, % 4,9±0,6 5,7± 0,2 4,2± 0,5 2,7± 1,7** 3,5± 1,3 2,6± 0,4** IV, % 22,4±0,8 23,7± 2,3 26,5±5,0 18,1±1,2 20,4± 2,9 16,6± 0, *** *** V, % 72,6±1,18 70,5± 3,3 68,9±5,5 79,2±1,4 76,0± 4,2 80,9± 0, *** *** Rt, 1012/л 0,07±0,02 0,1± 0,03 0,16±0,04 0,15±0,03 0,12±0,04 0,08±0, ** ** Примечание: достоверность разницы оценивали по отношению к фоновому исследованию.
На 6-й день после кровопотери картина крови кроликов в принципе сохраняется, но в крови всех групп животных отмечено достоверное увеличение относительной (а для опытной и контрольной №1 и абсолютной) концентрации Rt. Отмечено наличие Rt II, а у контрольных (№1) даже I стадии зрелости. У всех групп животных снижена вязкость крови по сравнению с фоновым уровнем. У кроликов опытной и контрольной №1 групп увеличен диаметр Эр. На 9-й день после кровопотери у всех групп кроликов остаются сниженными концентрация Hb, ССЭ, СКГ, у опытной и контрольной №1 групп вязкость крови также понижена, сохраняется ретикулоцитоз а диаметр Эр увеличен. Концентрация Эр у кроликов опытной группы уже превышает фоновое значение.
На 12-й день после кровопотери отмечены иные изменения со стороны крови. Концентрация Hb и Rt, показатель Гт всех групп животных практически совпадают с таковыми в фоновом исследовании. Выше фонового уровня концентрация Эр, при сниженных ССЭ, СКГ у кроликов опытной и контрольной №2 групп.
У кроликов опытной группы наблюдается увеличение диаметра и толщины Эр. На 15-й день исследования у кроликов контрольной группы №2 увеличен показатель Гт, при сниженной СКГ. В крови кроликов опытной группы продолжает увеличиваться концентрации Эр. Вязкость крови у кроликов опытной и контрольной №1 групп все так же снижена. У животных опытной и контрольной №2 групп наблюдается уменьшение долей Rt III и IV, увеличение V стадии зрелости.
Во второй серии эксперимента с кровопотерей кроликам вводили ЭС и 0,9% NaCl в течение 5 дней перед кровопусканием. В отличие от первой серии отмечен больший дисбаланс во всех показателях крови во все дни эксперимента. Особенно большой при введении кроликам 0,9% NaCl. В принципе же, отмечены те же изменения в показателях крови: уменьшение концентраций Hb, Эр и повышение Rt. Но, один из наиболее важных показателей в условиях кровопотери, свидетельствующий о запуске компенсаторных механизмов – вязкость крови – увеличивается у всех групп животных. Только у контрольной группы №2 отмечено её снижение на 3-й и 6-й дни после кровопотери.
Возможно, постоянное добавление дополнительных порций ЭС и 0,9% NaCl в первой серии эксперимента, как биологически активного вещества) способствовало компенсации гиповолемии, которая наблюдается при кровопотере, что положительно сказалось в целом на регенерации крови.
У кроликов опытной группы на 3-й день развития анемии снижается рН крови (p0,05), рСО2 увеличивается, в крови обнаруживается дефицит буферных оснований, обусловленный избытком нелетучих кислот. Сатурация, или насыщение Hb О2 и рО2, несколько снижаются. На основании указанных сдвигов основных параметров КОС можно говорить о наличии в крови частично компенсированного дыхательного ацидоза. У группы кроликов, предварительно получавших 0,9% NaCl, наблюдается уменьшение рН крови и рСО2, на фоне дефицита буферных оснований. Параметр рО практически не изменяется, а насыщение Hb О2 снижается на 3,5% (p0,1). Это указывает на возможность наличия частично компенсированного недыхательного ацидоза. Таким образом, у двух групп кроликов наблюдается ацидоз, как компенсаторная реакция на недостаток в крови Эр и Hb, который компенсируется разными путями: у опытной группы за счет повышения уровня бикарбонатов в крови, у контрольной №1 - за счет увеличения выведения СО легкими. Величина рН и рСО2 у кроликов опытной группы на 9-й день после кровопускания остаются сниженными, а рО2 наоборот повышено, в крови всё так же дефицит буферных оснований. Это говорит о наличии в крови недыхательного ацидоза, частично компенсированного выведением СО2 через легкие. У животных контрольной №2 группы (только кровопускание) наблюдаются совершенно иные изменения КОС крови в ответ на кровопускание:
увеличение рН крови, уменьшение рСО2, избыток буферных оснований, повышенная сатурация Hb. Такие сдвиги в КОС крови наблюдаются при некомпенсированном дыхательном алкалозе. К 12 му дню величины КОС практически такие же у опытной и контрольной №1 групп кроликов. У контрольной группы №2 отмечен более сильный, по сравнению с 9-м днем после кровопотери, дефицит буферных оснований, что наблюдается при дыхательном алкалозе, частично компенсированном. Компенсация нарушенных функций возможно обусловлена частичным возвращением к норме концентраций Эр и Hb. Некоторыми изменениями КОС характеризуется 14-й день. У опытной и контрольной №1 групп величина рН ниже, чем у интактной пробы, рСО2 повышено, в крови дефицит буферных оснований, все ещё низкая сатурация Hb. Такие сдвиги в КОС крови наблюдаются при дыхательном ацидозе, частично компенсированном. У контрольной группы №2 на 14-й день после кровопускания КОС так же не пришло в норму, в крови наблюдается некомпенсированный недыхательный алкалоз.
4. Состояние эритроцитов и гемоглобина крови лабораторных животных при однократном введении ЭС Серпистен Показано, что через 1 ч после введения ЭС и 0,9% NaCl рН крови самцов и самок крыс практически не изменяется, рСО2 и рО2 в крови, сатурация Hb О2 повышаются у самцов. При этом в крови самцов опытной группы наблюдается дефицит буферных оснований и некоторое увеличение концентрации бикарбонатов в крови. Возможно – это механизм поддержания на должном уровне величины рН и в этом выражается адаптогенный эффект ЭС. У самцов контрольной группы отмечено повышение концентрации бикарбонатов, при неизменном уровне буферных оснований, что, при повышенном рСО2 в крови, может указывать на начало постепенного развития дыхательного алкалоза. У самок отмечено некоторое снижение рСО2 и сильное снижение рО2 в крови (особенно у крыс контрольной группы). Это характерно для гипокапнии при усиленном выведении из крови СО2. У самок опытной группы концентрация карбонатов в крови повышается, возможно, компенсаторно, при неизменном уровне буферных оснований, что тоже направлено на поддержание уровня рН.
Через 2 часа после введения ЭС у самцов увеличивается общая концентрация Hb в крови (p0,2) и насыщенность им Эр (среднеклеточные: содержание и концентрация (p0,05)), на фоне тенденции к снижению концентрации Эр и Гт (p0,05). У самок повышается концентрация Эр, на фоне уменьшения Гт. Увеличивается вязкость крови. Повышается доля Rt III и уменьшается V стадии зрелости. Через 24 часа у самцов имеется тенденция к увеличению концентрация Эр и Hb без адекватного увеличения показателя Гт, что может быть обусловлено некоторым снижением СрОЭ (с 89,9 до 87, мкм3) и диаметра Эр с 7,05 мкм до 7,02 мкм. В циркулирующей крови крыс-самцов наблюдается перераспределение Rt по стадиям зрелости по Гейльмейеру – высоко достоверно (p0,01) увеличивается доля Rt IV и уменьшается доля Rt V (p0,01) стадии зрелости.
Показано, что ЩР Hb самцов достоверно ниже, чем у самок. В результате введения ЭС и 0,9% NaCl количество ЩР Hb у самцов оказывается достоверно увеличено через 1 минуту действия щелочи по сравнению с интактными. При этом изменения ярче выражены у крыс опытной группы (увеличивается количество ЩР Hb на 25,4%).
В серии опытов in vitro, на крысах, диск-электрофорезом из Hb эритроцитарной массы (ЭрМ), получено 8 фракций, из Hb гемолизатов – 7 (табл.4). В обоих случаях: III фракция - основная, остальные минорные. В опытах in vivo также получено 7 фракций Нb, что соответствует данным литературы (Н.Ф. Стародуб, В.И. Назаренко, 1987;
Н.А. Мойсеенко и соавт., 1998). Появление дополнительной фракции из гемолизатов ЭрМ, обработанных ЭС или 0,9% NaCl, может свидетельствовать о структурных изменениях поверхностной мембраны Эр и (или) мембрано-Hb комплекса Эр. Часть молекул Нb могла изменить свой суммарный электрический заряд вследствие конформационных перестроек или взаимодействия с компонентами поверхностной мембраны.
Таблица ОЭФП Нb крыс (опыты in vitro) (M±m) № Опыт №1 Контроль №1 Опыт №2 Контроль № фра (ЭрМ +ЭС) (ЭрМ+0,9% NaCl) (гемолизат+ЭС) (гемолизат+0, кци % NaCl) и самцы самки самцы самки самцы самки самц самки ы I 0,55± 0,52± 0,53± 0,50± 0,51± 0,40± 0,52± 0,45± 0,01*b 0,01***b 0,01 0,01 0,01 0,01 0,02 0, II 0,48± 0,46± 0,50± 0,44± 0,45± 0,42± 0,46± 0,41± 0,01**b 0,01**b 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0, III 0,44± 0,42± 0,44± 0,41± 0,42± 0,38± 0,43± 0,38± 0,003***b 0,01**b 0,003 0,01 0,01 0,01 0,01 0, IV’ 0,42± 0,39± 0,41± 0,37± нет нет нет нет 0,003*a 0,01 0,004 0, IV 0,34± 0,31± 0,33± 0,30± 0,34± 0,32± 0,34± 0,30± 0,003*a 0,01 0,004 0,01 0,003 0,01 0,004 0, V 0,28± 0,25± 0,28± 0,24± 0,28± 0,26± 0,28± 0,24± 0,003 0,01 0,004 0,004 0,004 0,01 0,01 0, VI 0,23± 0,21± 0,22± 0,19± 0,23± 0,20± 0,23± 0,18± 0,01*a 0,003 0,01 0,003 0,003 0,01 0,004 0, VII 0,18± 0,15± 0,16± 0,13± 0,17± 0,15± 0,17± 0,13± 0,004*a 0,01*a 0,004*b 0,01 0,004 0,01 0,004 0, Примечание: a по сравнению с контрольной пробой №1;
b – с опытной №1.
Показано, что у интактных 5 мес мышей достоверно ниже вязкость крови (на 12%), увеличен среднеклеточный диаметр Эр (на 1,5%) по сравнению с 12 мес. Кроме того, больше относительная и меньше абсолютная доля Rt (на 97 и 115%, соответственно). Введение им ЭС (5 мг/кг) вызывает повышение концентрации Hb (p0,2) и Эр (p0,01), однако Эр эти более мелкие по диаметру (на 2,5%) и СрОЭ (на 22,5%) и поэтому содержат меньше Hb (ССЭ уменьшено на 14,5%) по сравнению с интактными. Это привело к увеличению вязкости крови у мышей получавших ЭС. Доза 20 мг/кг вызывает уменьшение концентрации Hb (на 12,3%) и СКГ в Эр (на 10,3%), Эр имеют больший диаметр и толщину по сравнению с интактными. У мышей 12 мес ЭС в дозе 5 мг/кг вызывает уменьшение концентрации Эр, без изменения насыщенности их Hb и морфологии, в отличие от 5 мес мышей. Концентрация общего Hb и Гт не изменяются. Доза ЭС мг/кг приводит к уменьшению вязкости крови, в отличие от 5 мес толщины Эр и увеличение среднеклеточного диаметра Эр (на 10,6%;
14,7% и 2,5%, соответственно).
Обнаружена более высокая КРЭ интактных самок мышей альбиносов по сравнению с самцами. Разные дозы ЭС по-разному изменяют КРЭ самок мышей: меньшая доза (5 мг/кг) уменьшает КРЭ у 63% самок, и увеличивает её у 37%. Возможно это связанно с тем, что в популяции мышей присутствуют два типа особей по-разному реагирующих на ЭС в дозе 5мг/кг. Доза ЭС в 20 мг/кг увеличивает КРЭ. У самцов меньшая доза (5 мг/кг) уменьшает КРЭ у 25% самцов и увеличивает КРЭ у 75% самцов (рис. 3). Большая доза вещества однозначно увеличивает КРЭ самцов.
Опытная №1 (Серпистен (5 мг/кг) (25%)) Эр, % Опытная №1 (Серпистен (5 мг/кг) (75%)) *a *a Опытная №2 (Серпистен (20 мг/кг)) 14 Контрольная №1 (0,9% NaCl (5 мг/кг)) Контрольная №2 (0,9% NaCl (20 мг/кг)) Интактные *a **b *a *a **b **a,b **a,b *a,b a 8 * **b *a **a,b **a,b **b *a **a,b *a **a,b *a,b **b **a,b a a,b **b * **a,b * **b *a,b **a,b **b **b **a,b *a,b a,b * мин 0 1,25 2,5 3,75 5 6,25 7,5 8,75 Рис. 3. Кислотный гемолиз Эр крови белых мышей-самцов. По оси абсцисс – время в мин;
по оси ординат - % гемолизировавших Эр.
Примечание: a по сравнению с интактными;
b – с контрольной №1.
При сравнении морфо-функциональных показателей Эр белых нелинейных мышей и крыс, мышей СВА при влиянии ЭС (доза мг/кг) показано, что у крыс-самцов увеличивается концентрация Hb, и наблюдается перераспределение Rt по стадиям зрелости, в отличие от мышей. В ответ на введение ЭС у самок крыс и мышей линии СВА показаны схожие изменения в показателях крови: уменьшение концентрации Hb и увеличение Rt;
диаметр увеличивается, толщина клеток уменьшается (уплощение Эр), при этом такие Эр менее насыщены Hb (снижение ССЭ).
ВЫВОДЫ 1. В условиях фенилгидразиновой анемии, развивающейся после предварительного введения субстанции Серпистен, показано ослабление признаков гемолитической анемизации: уменьшение количества эритроцитов с тельцами Гейнца в среднем на 13%;
увеличение концентрации гемоглобина (на 11%) и эритроцитов (на 11%) по сравнению с контролем.
2. На фоне уже развившейся анемии инъекции субстанции Серпистен вызывают эффекты, направленные на нормализацию показателей:
ускорение созревания ретикулоцитов;
увеличение осмотической и кислотной резистентности эритроцитов.
3. Восстановление показателей крови после кровопотери у кроликов происходит в более короткие сроки и более полно под влиянием экдистероидсодержащей субстанции Серпистен: концентрация эритроцитов, гематокрит востанавливаются быстрее;
концентрация ретикулоцитов максимальна на 3-й день после кровопускания (на 77% выше исходного), затем плавно возвращается к фоновому уровню на 12-й день;
у контрольных она также максимальна на 3-й день (на 80% выше исходного), с фазными изменениями в последующие дни (варьируя от 5 до 80%) и на 15-й день после кровопускания ещё отлична от нормы.
4. Физико-химические свойства гемоглобина изменяются в зависимости от пола животного и условий эксперимента в ответ на введение экдистероидсодержащей субстанции Серпистен:
щелочерезистентность уменьшается;
относительная электрофоретическая подвижность отдельных фракций белка увеличивается.
5. В опытах in vitro впервые обнаружено, что изменения электрофоретической подвижности фракций гемоглобина после инкубации эритроцитов с препаратом Серпистен сильнее выражены, чем после инкубации с ним гемолизатов. Появляется дополнительная перед IV фракция гемоглобина. Электрофоретическая подвижность I, II и III (основной) фракций гемоглобина из эритроцитарной массы выше (на 19%, 8%, 8%, соответственно), чем гемоглобина из гемолизатов.
6. Свойства эритроцитов (размер, осмотическая и кислотная резистентность) индивидуальны для каждого животного, зависят от пола и сезона исследования, что особенно отчетливо выявляется при действии малых доз (5 мг/кг) субстанции экдистероидов Серпистен.
7. Выявлены различные возрастные особенности в реакции эритроцитов мышей на введении субстанции Серпистен. Мыши в возрасте 5 месяцев сильнее и отчетливее реагируют изменением формы эритроцитов (уменьшение среднеклеточного объема на 25% и толщины клеток на 55%, увеличение индекса сферичности на 130%, увеличением осмотической резистентности) на введение Серпистен, особенно в дозе 5 мг/кг, в отличие от мышей в возрасте 12 месяцев.
8. Выявлены половые и видовые реакции на Серпистен лабораторных животных. Концентрация гемоглобина и ретикулоцитов разных стадий зрелости у мышей самцов в ответ на субстанцию Серпистен (в дозе мг/кг) не изменяется, у самцов крыс концентрация гемоглобина повышается (на 4%) и наблюдается перераспределение ретикулоцитов по возрастным группам (на 45% увеличивается доля клеток IV, на 15% уменьшается доля ретикулоцитов V стадии зрелости). Самки исследованных видов реагируют на введение субстанции Серпистен однозначно: как у крыс, так и у мышей уменьшаются концентрация гемоглобина (в среднем на 11%), толщина клеток (на 10%);
увеличивается концентрация ретикулоцитов (на 70%).
9. Кислотно-основное состояние крови (рН, рСО2, рО2) животных, нарушенное инъекциями 0,9% NaCl и фенилгидразина, возвращается к уровню интактных при введении экдистероидсодержащей субстанции Серпистен.
10. Ацидоз, развивающийся в ответ на кровопускание, частично компенсируется при введении субстанции Серпистен сначала за счет повышения уровня бикарбонатов в крови, а затем за счет интенсивного выведения углекислоты.
Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Иванкова Ж.Е, Мойсеенко Н.А., Моисеенко С.А. Влияние 20 гидроксиэкдизона на восстановление показателей красной крови после постгеморрагической анемии у кроликов // Материалы XVIII Съезда физиологического общества им И.П. Павлова. - Казань, 2001. - С.391.
2. Иванкова Ж.Е., Мищенко А.А., Мойсеенко Н.А., Петрова Н.Б. 20 гидроксиэкдизон выделенный из серпухи венценосной (Serratula coronata L.) и параметры крови крыс // Актуальные проблемы адаптации к природным и экосоциальным условиям среды: Материалы симпозиума с международным участием. - Ульяновск, 2002. - С. 75-76.
3. Иванкова Ж.Е., Людинина А.Ю., Мойсеенко Н.А. Физиологические аспекты действия 20-гидроксиэкдизона из растений Serratula coronata L. in vitro на кровь белых мышей // Экологическая ботаника: наука, образование, прикладные аспекты: Тезисы докладов международной конференции посвященной 25-летию кафедры ботаники Сыктывкарского университета. - Сыктывкар, 2002.- С. 155-156.
4. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А., Петрова Н.Б., Эффекты 20 гидроксиэкдизона из растений Serratula coronata L. на эритроциты крыс // Актуальные проблемы экологии человека: Труды VIII международного конгресса. – Самара, 2002. - С.156-157.
5. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А., Петрова Н.Б., Репина Е.Н. 20 гидроксиэкдизон из растений Serratula coronata L. как адаптоген // Эколого-физиологические проблемы адаптаци: Материалы XXI международного симпозиума. - М.: РУДН, 2003. - С.368-369.
6. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А. Влияние 20-гидроксиэкдизона на регенерацию красной крови крыс линии Вистар на фоне фенилгидразиновой анемии // Вестник СГУ. - Сыктывкар, 2003. Серия 4 «Биология». - С. 61-65.
7. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А., Цветкова А.С. Влияние 20 гидроксиэкдизона на свойства компонентов красной крови крыс через 24 часа после инъекции // Радиоэкологические и биологические последствия низкоинтенсивных воздействий: Труды Коми научного центра УрО Российской АН. - Сыктывкар, 2003. - №27. - С. 242-256.
8. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А., Моисеенко С.А. Роль 20 гидроксиэкдизона в развитии постгеморрагической анемии у кроликов // Радиоэкологические и биологические последствия низкоинтенсивных воздействий: Труды Коми научного центра УрО Российской АН. - Сыктывкар, 2003. - №27. - С. 257-273.
9. Иванкова Ж.Е. Влияние режима введения 20-гидроксиэкдизона на показатели красной крови крыс // Молодежный вестник. - Сыктывкар, 2004. - В.2. - С. 25-28.
10. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А. Кислотно-основное состояние крови кроликов после кровопускания на фоне 20-гидроксиэкдизона // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2004. – Приложение. - Т.90. - №8. - Ч.2. - С.194.
11. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А., Репина Е.Н. Влияние 20 гидроксиэкдизона на параметры красной и белой крови при гемолитических анемиях // Экология человека. - 2004. – Приложение. – Т.1. - С.327-329.
12. Иванкова ЖЕ., Мойсеенко Н.А., Петрова Н.Б., Репина Е.Н.
Фитоэкдистероиды и кровь млекопитающих в норме и патологии // Экология и здоровье человека: Труды IX Всероссийского конгресса. – Самара, 2004. - С. 188-190.
13. Иванкова Ж.Е., Пономарёв М.Б. Влияние экдистероидов серпухи венценосной (Serratula coronata L.) на некоторые реологические параметры крови крыс линии Вистар при гемолитической анемии // Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике: Тезисы докладов IV Молодежной научной конференции Института физиологии Коми НЦ УрО РАН. - Сыктывкар, 2005. - С.
102-104.
14. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А. Кислотно-основное состояние крови лабораторных животных при воздействии экдистероидов Serratula coronata L. // Бюллетень сибирской медицины. - 2005. Приложение 1. - Т.4 - С. 37.
15. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А., Репина Е.Н., Володин В.В. Роль 20-гидроксиэкдизона растений Serratula coronata L. в развитии вызванной гемолитической анемии крыс Wistar // Фитофарм 2006:
Материалы IX международного Съезда. - Санкт-Петербург, 2005. - С.
179-184.
16. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А., Давыдова А.Р., Дунаева Е.Г.
Влияние 20-гидроксиэкдизона растений Serratula coronata L. на физико-химические свойства гемоглобина крыс Wistar // Научные труды I Съезда физиологов СНГ. - М.: Медицина-Здоровье, 2005. - С.
244.
17. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А., Давыдова А.Р. Влияние 20 гидроксиэкдизона растений Serratula coronata L. на электрофоретические характеристики гемоглобина лабораторных животных в опытах in vivo и in vitro // Химия и технология растительных веществ: Тезисы докладов IV Всероссийской научной конференции. - Сыктывкар, 2006. - С. 262.
18. Иванкова Ж.Е., Мойсеенко Н.А., Петрова Н.Б., Репина Е.Н.
Действие фитоэкдистероидов на количественные и качественные показатели крови млекопитающих в норме и при экспериментальных воздействиях // Вестник Сыктывкарского университета. - 2006. - Серия 2 «Физика, химия, биология». - Выпуск 1. - С. 122-137.
Список сокращений Гт – показатель гематокрита КОС – кислотно-основное состояние крови КРЭ – кислотная резистентность эритроцитов ОРЭ – осмотическая резистентность эритроцитов ОЭФП – относительная электрофоретическая подвижность фракций гемоглобина СКГ – средняя концентрация гемоглобина в эритроците СОЭ – скорость оседания эритроцитов СрОЭ – средний объем эритроцита ССЭ – среднее содержание гемоглобина в эритроците ФГ – фенилгидразин ЩР – щелочерезистентность гемоглобина Эр – эритроциты ЭС – экдистероидсодержащая субстанция Серпистен Hb – гемоглобин Rt - ретикулоциты