Биохимическое обоснование применения антиоксидантов и пробиотиков в комплексной терапии больных метроэндометритом
На правах рукописи
Мелконян Карина Игоревна БИОХИМИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ АНТИОКСИДАНТОВ И ПРОБИОТИКОВ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ МЕТРОЭНДОМЕТРИТОМ 03.00.04 биохимия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Краснодар 2009
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (ГОУ ВПО КГМУ Росздрава) доктор медицинских наук, профессор Научные руководитель:
Быков Илья Михайлович
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Нагиев Эйзудин Рамазанович доктор медицинских наук, профессор Чередник Ирина Леонидовна Ведущее организация: Федеральное государственное учреждение «Росто вский научно исследовательский институт акушерства и педиатрии Фе дерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» (г. Ростов на Дону)
Защита состоится «» декабря 2009 г. в 10 часов на заседании дис сертационного совета Д 208.038.02 при ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (350063, г.Краснодар, ул.Седина, 4, тел. (861) 262 73 75).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава Автореферат разослан « » ноября 2009 г.
Ученый секретарь диссертационного совета Д 208.038. профессор Л.А.Скорикова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Основная масса воспалительных заболе ваний связана с повышением фона активных форм кислорода (АФК), ко торые являются причиной всплеска реакций свободнорадикального окисления (СРО) и перекисного окисления липидов (ПОЛ) как на мест ном уровне, в очаге воспаления, так и на уровне организма в целом, что приводит к формированию такого общепатологического состояния как окислительный стресс (ОС). Состояние ОС характерно для большинства болезней человека [Ю.А. Владимиров, А.И.Арчаков, 1972;
Л.М. Агаджа нова, 1998;
Р.Г. Мокацян, 1998;
М.И. Балаболкин, Е.М. Клебанова, 2000;
B. Halliwell, J.M.C. Gutteridge, 1999;
J.W. Heinecke, 2003], в связи с чем разработка методов диагностики, изучения механизмов его разви тия и коррекции в условиях острой и хронической патологии представля ется важнейшей задачей современной науки и здравоохранения. У боль ных с воспалительными заболеваниями возникает замкнутый порочный круг: активация СРО вызывает дисбаланс в иммунной системе, а актива ция иммунных реакций способствует повышенной генерации АФК, что приводит к поддержанию незатухающего воспалительного процесса.
Дисфункция иммунной системы является причиной многих заболе ваний, в том числе и репродуктивной системы у женщин, в частности та кого распространенного заболевания как метроэндометрит (МЭМ).
Лечение МЭМ невозможно без применения антибиотиков. Однако, на основании имеющихся в литературе сообщений, можно сделать вывод, что лечение антибактериальными препаратами не всегда приводит к пол ному выздоровлению, а увеличение дозировок и продолжительности ле чения способствуют развитию дисбактериозов. Поэтому проведение толь ко антибиотикотерапии зачастую не достаточно эффективно и в компле ксное лечение больных с МЭМ необходимо включать пробиотики, имму номодуляторы и антиоксиданты, учитывая наличие у пациентов дисба ланса в системе про /антиоксиданты [И.B. Зарубина,П.Д. Шабанов, 2004;
С.В. Оковитый, С.Н. Шуленин, А.В. Смирнов, 2005, Н.М. Победи нский, М.В. Беришвили, 2007].
В настоящее время в медицине используются пробиотики отечествен ного и зарубежного производства, в частности, такие как Аципол и Бион 3.
Пробиотик III поколения Бион 3 с антиоксидантными свойствами способ ствует нормализации естественной микрофлоры влагалища и желудочно кишечного тракта, а так же коррекции про /антиоксидантного баланса.
Для достижения аналогичных показателей при использовании пробиоти ков индивидуального типа действия целесообразно использование комби нированной терапии: пробиотики плюс антиоксиданты (например, аципол в сочетании с аскорбиновой кислотой) [Н.М. Пасман, Р.С. Логинова, 2006].
Однако эффекты различных вариантов комбинированного лечения МЭМ в литературе практически не описаны.
В связи с вышеизложенным, актуальным в настоящий момент явля ется вопрос изучения на клеточном уровне молекулярных механизмов развития и течения МЭМ. Необходимо, уточнение степени оксидативных изменений в эритроцитах и плазмы крови у женщин с этой патологией с выявлением биохимических маркеров ОС, отражающих клиническую картину болезни и позволяющих выявлять на ранних этапах дисфунк цию системы антиоксидантной защиты (АОЗ). Изучение в динамике этих показателей на фоне проводимой комплексной терапии послужит осно вой разработки эффективных схем лечения МЭМ с учетом про— /антиок сидантного статуса больных.
Цель работы: изучить характер оксидативных изменений в эритроци тах и плазме крови у женщин с МЭМ и определить возможности коррек ции этих процессов путем включения в схемы лечения препаратов проби отической и антиоксидантной направленности.
Задачи исследования:
1. Изучить состояние системы про /антиоксиданты эритроцитов и плазмы крови у женщин с МЭМ на различных этапах течения заболева ния.
2. Оценить in vivo антиоксидантную активность современных проби отических и антиоксидантных препаратов, используемых при лечении МЭМ.
3. Провести сравнительную оценку эффективности различных компле ксных и индивидуальных пробиотических средств в плане коррекции мик рофлоры и дисбаланса в системе про /антиоксиданты у больных с МЭМ.
4. Предложить наиболее эффективные схемы комплексной терапии МЭМ с использованием Бион 3 и комплекса пробиотика и антиоксиданта.
Новизна исследования.
Впервые с помощью интегральных методов исследования доказано наличие и определена выраженность ОС у женщин с МЭМ.
Установлено, что проводимая традиционная терапия купирует воспа лительный процесс, но не обеспечивает полную стабилизацию системы про /антиоксиданты у больных с МЭМ.
Впервые проведено всестороннее исследование влияния комбиниро ванных пробиотических средств (бион 3), индивидуальных пробиотиков (аципол), а также комбинации пробиотик и антиоксидант прямого действия (аципол+аскорбиновая кислота) на различные показатели сис темы про /антиоксиданты у больных МЭМ.
Впервые (на большом клиническом материале) с использованием би офизических и биохимических методов исследования подобранны наибо лее эффективные схемы пробиотической и антиоксидантной коррекции ОС у больных с МЭМ.
Практическая ценность.
Внедрение материалов исследования позволит: проводить своевре менную диагностику и медикаментозную коррекцию ОС у женщин с МЭМ на клиническом этапе или на стадии стационарного лечения;
сокра тить сроки стационарного лечения или предотвратить госпитализацию больных;
получить экономический и социальный эффект;
улучшить ка чество жизни больных с МЭМ.
Внедрение в практику результатов исследования.
Предложенный метод лечения внедрен в практику лечебных учреж дений: МУЗ Роддом г.Краснодара, женская консультация №4;
МУЗ ГБ № 2 «КМЛДО» Перинатальный центр, женская консультация №5 г. Крас нодара.
Результаты работы используется при обучении студентов, интернов, ординаторов, аспирантов на кафедре фундаментальной и клинической биохимии ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.
Основные положения, выносимые на защиту 1. У женщин страдающих МЭМ, нарушается функциональное состоя ние антиоксидантной системы в связи с интенсивно протекающими сво бодно радикальными процессами.
2. Используемая традиционная терапия у больных МЭМ купирует проявления воспалительных реакций, но не оказывает влияния на имею щийся дисбаланс в системе про / антиоксиданты, кроме того вызывает явления дисбиоза.
3. Применяемые в комплексном лечении МЭМ пробиотический пре парат 1 го поколения (аципол) способствует восстановлению естественно го состава микрофлоры, но так же не нормализует полностью баланс в системе про / антиоксиданты.
4. Включение в схемы традиционной терапии пробиотических препара тов 1 го поколения (аципол) в комплексе с пероральной формой Vit.C и III поколения (бион 3) — как средств направленной фармакологической кор рекции окислительного гомеостаза способствует как восстановлению нор мальной микрофлоры, так и стабилизации дисбаланса в системе про /анти оксиданты, что позитивно сказывается и на состоянии иммунной системы.
5. Наиболее перспективными и эффективными методами диагности ки и контроля за клиническим течением МЭМ и эффективностью прово димого лечения являются биофизические показатели плазмы крови: ам перометрический метод определения общей антиокислительной актив ности и метод оценки индуцированной хемилюминесценции.
Апробация результатов исследования. Основные положения работы представлялись и обсуждались на XXXIV научной конференции студен тов и молодых ученых вузов Южного федерального округа России (г.Краснодар, 2008);
научно практическая конференции молодых учен ных и студентов Юга России «Медицинская наука и здравоохранение» (Анапа 2008);
IV съезде Российского общества биохимиков и молекуляр ных биологов (Новосибирск, 2008);
VII съезд аллергологов иммунологов СНГ(Санкт Петербург, 2009).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 2 статьи в центральной медицинской печати, рекомен дованной ВАК.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 123страницах машинописного текста, иллюстрирована 17 рисунками, содержит 7таб лицы. Список литературы включает 190 источников, из них 130 отечест венных и 60 иностранных.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Для выявления характера нарушений в системе про /антиоксиданты у женщин с установленным МЭМ, на стадии их обращения к врачу и на фоне различных схем лечения, было проведено изучение основных пока зателей, характеризующих состояние системы антиоксидантной защиты крови и уровень прооксидантной нагрузки. Материалом исследования послужила гепаринизированая кровь пациентов с МЭМ (n=102). Контро лем служили те же показатели крови условно здоровых доноров женско го пола (n=13) той же возрастной группы.
Больные с МЭМ были разделены на следующие группы. Группа №1— женщины, прошедшие лечение по общепринятой схеме МЭМ(n=26), группа №2— женщины с МЭМ (n=26), которым в традиционную схему лечения был включен пробиотический препарат аципол, группа № (n=25) больные с МЭМ, которым в традиционный курс лечения были вве дены пробиотик аципол и витамин С перорально по 500 мг 2 раза в сутки, отдельную 4 ю группу (n=25) составили больные МЭМ, которым в тради ционную схему лечения был введен пробиотик III поколения бион (Рис.1).
Рис. 1. Распределение больных с МЭМ на исследуемые группы.
Примечание:1 традиционная терапия;
2— традиционная тера пия+аципол;
3 традиционная терапия+аципол+ витамин С;
4 традици оная терапия+ бион 3.
При клиническом обследовании больных применялись традиционно используемые в гинекологии инструментальные и общеклинические ме тоды.
Ультразвуковое исследование с использованием трансвагинальных датчиков с частотой 7,5МГц. Эхографическое исследование осуществля ли в условиях наполненного мочевого пузыря. Исследование проводи лось у всех 102 пациенток и включало измерение передне заднего разме ра матки, нахождение участков воспаления — повышенной эхогенности в миометрии, кист анэхогенные включения, неравномерность и зазуб ренность толщины бального слоя.
Таблица Оценка результатов изменений у женщин, больных МЭМ согласно УЗИ (%) Учитывая найденные изменения, была определена стадия заболева ния, обширность поражения, степень хронизации процесса, тяжесть на рушения репродуктивной функции. Также была определена в баллах тя жесть клинической картины заболевания, что представлена в табли це № 2.
При целенаправленно организованном опросе у всех обследованных больных выявились нарушения самочувствия общего характера, кото рые, однако, не всегда можно было с достоверностью объяснить влияни ем основного заболевания или его осложнений.
Общеклинические методы исследования проводились на основании приказа №50 МЗ РФ от 10.02.2003 и в соответствии с отраслевыми стан дартами объемов обследования и лечения (утвержденными Приказом МЗ РФ от 5.11.1998 № 323) в акушерско гинекологических стационарах. Об щеклинические обследования включали: общий анализ крови, биохими ческий анализ крови, исследование коагуляционных свойств крови, об щий анализ мочи, артериальное давление на обеих руках в динамике, контроль концентрационной функции почек.
Таблица Тяжесть клинической картины метроэндометрита, выраженная в баллах (по Mac Laverty C.M., Shaw P.W., 1995) Кроме изучения анамнестических данных пациентов, наблюдения за их состоянием, общепринятых клинических и инструментальных мето дов исследования органов и систем, проводили изучение биохимических параметров, характеризующих выраженность ОС, степень метаболичес ких расстройств и выраженность дисбиоза.
Состояние антиоксидантной системы (АОС) организма больных оценивали по активности антиоксидантных ферментов каталазы (КАТ) и супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов, по основному не ферментному компоненту АОС — по уровню восстановленных тиоло вых групп эритроцитов, а также по антиокислительной емкости плаз мы — отражающей суммарное количество восстановительных эквива лентов. Активность КАТ исследовали по методу R.Beers [R.Beers и др., 1952] в модификации И.И. Павлюченко [И.И. Павлюченко и др., 2006]. Для определения активности СОД использовали методику В.А.
Костюка [В.А.Костюк, А.И.Потапович, Ж.В.Ковалева, 1990] в моди фикации И.И. Павлюченко [И.И.Павлюченко, и др., 2006]. Количест во тиоловых групп определяли с помощью реактива Эллмана [В.Н.Орехович, 1977]. Метод оценки общей антиоксидантной актив ности (АОА) плазмы крови основан на способности ее компонентов при окислении на поверхности рабочего электрода при определенном потенциале изменять силу электрического тока, регистрируемую при помощи аппарата «Яуза 01 ААА». Полученный сигнал сравнивали с калибровочным стандартом — аскорбиновой кислотой [А.А.Басов и др., 2006.]. Состояние прооксидантной системы оценивали в плазме крови по базальному количеству продуктов окислительной модифика ции биомолекул, реагирующих при 100°С с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) [И.Д.Стальная, Т.Г.Гаришвили, 1977]. В эритроцитах опреде ляли базальный и индуцированный уровень ТБК активных продуктов [В.Н.Ушкалова и др., 1993]. Тиобарбитуровое число плазмы (ТБЧпл.), эритроцитов тиобарбитуровое число базальное (ТБЧэр.), индуцированное (ТБЧэр.Ind) и общее (ТБЧобщ.) выражали в оптичес ких единицах. Уровень продуктов СРО в плазме крови оценивали по максимуму индуцированной вспышки хемилюминесценции (МВХЛ) и по площади затухания вспышки хемилюминесценции (ПВХЛ) с по мощью люминотестера LT 01 на основе методики НИИБИ г. Ростова на Дону, в модификации [С.Р.Федосов и др., 2007]. Количество эрит роцитов для расчета активности ферментов и количества ТБК актив ных продуктов в цельной крови определяли фотоколориметрически по методу Ресселя [Л.К. Рессель, И.Тодоров, 1961]. Для многоплано вой диагностики ОС использовали также интегральный показатель состояния про /антиоксидантной системы организма на клеточном уровне — коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов (КОМБэр) по методу И.И. Павлюченко [И.И.Павлючен ко, А.А.Басов, С.Р.Федосов, 2003]. Перекисная модификация белков в настоящее время выдвигается на ведущий уровень проблем ОС, поэ тому мы сочли целесообразным и важным в работе провести также оп ределение уровня карбонильных групп без индукции и с индукцией Fe2+ [Е.Е.Дубинина и др., 2000]. Статистической обработкой массивы данных подвергались проверке нормальности распределения с по мощью W критерия Shapiro Wilk [P.Royston, 1995] с окончательным подтверждением нормальности при визуальном контроле гистограмм.
Для выявления различий между группами применялся тест Манна Уитни [Н. B.Mann, D. R. Whitney, 1947]. Во всех случаях выполнения статистического анализа достоверными считались результаты с уров нем доверительного интервала более 95% (р0,05). С целью объекти визации статистического анализа в работе приведены вычисленные значения уровня важности.
Статистический анализ производился на ЭВМ с использование сво бодного программного обеспечения: системы статистического анализа R [R Development Core Team, 2008], пакета офисных программ OpenOffice.org и операционной системы Kubuntu Linux.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ При комплексном обследовании 102 больных с различной степенью тяжести МЭМ, нами были получены данные, анализ которых показал наличие дисбаланса в системе про /антиоксиданты и окислительного стресса у наблюдаемых женщин с МЭМ средней степени выраженности.
Общая АОА плазмы крови у пациенток с МЭМ до лечения была сниже на в среднем на 28,2% (р0,05), количество сульфгидрильных групп на 23,9% (р0,05), активность КАТ на 32,9% (р0,05), активность СОД на 67,5% (р0,05). Показатели уровня процессов СРО и ПОЛ, отражаю щие состояние прооксидантного звена системы про /антиоксиданты, были в основном повышены, что, по видимому, связано с развиваю щимся состоянием ОС. Амплитуда МВХЛ плазмы крови была выше контрольных цифр на 48,5% (р0,05), ПВХЛ — на 121,4% (р0,05), со держание ТБК активных веществ плазмы на 53,2% (р0,05), эритроци тов на 11,9% (р0,05), а общее ТБЧ, суммарно отражающее изменения в клеточном и внеклеточном звене крови, на 17,5% (р0,05). Содержа ние карбонильных групп без индукции Fe2+ было выше контрольных значений на 83,4%, с индукцией Fe2+ — на 57,2%. Анализ динамики взаимного функционирования основных ферментов системы АОЗ эрит роцитов показал значительный дисбаланс в их работе. Расчетный пока затель КАТ/СОД у женщин, страдающих МЭМ на стадии развития ос новных симптомов заболевания, был сдвинут в сторону повышения бо лее чем в два раза, т.е. был выше аналогичного показателя условно здо ровых женщин контрольной группы на 104,9% (р0,05). Это свиде тельствует о значительном напряжении в функционировании системы АОЗ организма пациенток с МЭМ, и в большей степени отражает состо яние ОС, чем отдельные показатели ферментативной активности КАТ и СОД. Из всех изучаемых показателей ОС у наблюдаемых женщин с МЭМ наиболее выраженное изменение было характерно для интеграль ного показателя КОМБэр, который на момент обращения был повышен у данной категории гинекологических больных практически в 13 раз.
Этот факт подтверждает формирование ОС у больных с воспалительны ми заболеваниями органов половой системы, в частности с МЭМ уже на ранних стадиях болезни, что является отягчающим фактором течения патологии.
Для изучения динамики процессов образования и устранения АФК и продуктов СРО у больных с МЭМ на фоне проводимой традиционной те рапии, включающей в 1) себя антибактериальную терапию (антибиотики широкого спектра действия) комбинированные полусинтетические пени циллины «Амоксиклав» по 1г. 2–3 раза в день, 2) «Метронидазол» 500 мг 3 раз в день, 3) системные антимикотики «Дифлюкан» по 150 мг 1 раз в неделю, 4) нестероидные противовоспалительные средства «Диклофе нак» в/м 1 раз в день, 5) аминогликозиды III поколения «Амикацин» 1г 2 раза в день, 6) инфузионную детоксикационную терапию из 10 мл(NaCl 0,9%) на 1кг массы тела пациентки;
были проведены исследова ния основных параметров системы АОЗ крови и показателей, отражаю щих выраженность ОС.
На рис. 2 приведена динамика изменения изучаемых показателей, которая свидетельствует о тенденции к нормализации баланса в системе про /антиоксиданты у женщин с МЭМ, получающих курс традиционной терапии воспалительного процесса.
Из данных рисунка видно, что в ходе традиционного лечения проис ходит некоторая коррекция и, в определенных случаях, приближение к физиологическому уровня процессов СРО и ПОЛ, активизированных при развитии воспаления, но многие изучаемые показатели системы про— /антиоксиданты остаются вне нормальных значений и к концу ле чения.
Рис. 2. Показатели системы про /антиоксиданты у наблюдаемых больных с МЭМ на фоне проводимого традиционного лечения.
АОА плазмы крови в ходе традиционного лечения без целенаправлен ного использования антиоксидантов остаются на уровне значений до ле чения, что свидетельствует о напряжении в функционировании системы АОЗ у наблюдаемых больных с МЭМ и после курса проведенной традици онной терапии.
Количество сульфгидрильных групп крови у больных с МЭМ несколь ко повышалось в результате лечения, но оставалось ниже значений конт роля на 17,9% (p0,05).
Сниженная активность КАТ также повышалась на 18,2% (p0,05) на фоне традиционного лечения, при этом все же оставаясь ниже конт рольных значений и после проведенного лечения. Активность СОД эритроцитов в ходе лечения практически не изменялась. Показатели интенсивности реакций образования и накопления в биологических жидкостях продуктов СРО, обладающих способностью к возбуждению реактивных оксигенных радикалов, в ходе лечения несколько снизи лись, но оставались значительными. Так, показатель амплитуды МВХЛ был выше показателей контрольной группы на 39,4% (p0,05), а показатель ПВХЛ на 105,3% (p0,05). Такое сохраняющееся в ходе лечения увеличение показателя площади индуцированной вспышки ХЛ свидетельствует о снижении антиоксидантной емкости плазмы крови и организма в целом у больных с МЭМ, что может быть опасным в плане повторных инфекций и дополнительных прооксидантных наг рузок, которые могут вызывать еще более значимое нарастание явле ний ОС.
Показатели уровня образования и увеличения пула ТБК актив ных веществ в плазме крови и эритроцитах претерпевали значитель ные изменения в ходе лечения. Активность ТБЧ плазмы после лече ния оставался повышенным на 17,7% (p0,05), в то время когда до лечения она была повышена на 53,1%, а количество эритроцитов практически возвратился к нормальным значениям. Такая же поло жительная динамика характерна и для ТБЧ общего. Количество кар бонильных групп как с индукцией, так и без нее у больных с МЭМ на фоне проводимого лечения снизилось, но оставался выше величин контрольной группы на 32,1 41,4%% (p0,05), что отражает сохра няющуюся оксидативную нагрузку на углеводородные структуры ор ганизма, прежде всего белковой и липидной природы. Соотношение КАТ\СОД в ходе лечения у наблюдаемых больных с МЭМ еще более выросло, превышая показатель контрольной группы на 138,1% (p0,05). Это, прежде всего, обусловлено тем, что активность КАТ подверглась положительной коррекции, а СОД осталась неизменной.
Коэффициент окислительной модификации биоструктур клеток и тканей — КОМБэр после проведенного лечения несколько снизился, оставаясь выше показателей контрольной группы практически на де сять пунктов, но ниже показателя у этих же пациентов до лечения на 3 пункта.
Для сравнительного анализа эффективности различных схем комби нированного лечения больные с МЭМ были распределены на группы, что описано выше. Включение в схему традиционного лечения комплекс Аципол + витамин С в терапевтических дозировках было обосновано не обходимостью сравнить действие двух пробиотических препаратов в бо лее адекватных условиях, т.к. пробиотический препарат 3 поколения Би он 3 имеет в своем составе и антиоксидантные компоненты.
Анализ полученных результатов показал эффективность включения в комплекс проводимого лечения пробиотиков и антиоксидантов (табл.
№ 3).
Таблица Состояние основных показателей прооксидантно антиоксидантного баланса у пациентов с метроэндометритом и их динамика при использовании различных схем лечения.
Примечание:
* — статистически достоверные различия при сравнении с группой «МЭМ до лечения» ® — статистически достоверные различия при сравнении с группой «МЭМ трад. лечение».
Так, биофизический показатель плазмы крови — общая АОА, значительно сниженный у больных с МЭМ до лечения, при исполь зовании в комплексной схеме лечения аципола несколько увели чился, но оставался гораздо ниже показателей контроля (на 23,0%) и после курса терапии. При добавлении в схему лечения прямого гидрофильного антиоксиданты — вит. С в терапевтической дози ровке вместе с ациполом, как описано ранее, установлен более зна чимый подъем общей АОА плазмы крови после лечения. Однако этот показатель оставался ниже контрольных значений группы ус ловно здоровых доноров на 14,4%. Наиболее выраженное позитив ное корригирующее действие на показатель АОА плазмы крови оказало использование в схемах лечения комплексного пробиотика бион 3. На фоне его применения общая АОА плазмы крови выросла на 12,1% по отношению к уровню этого показателя до лечения, но оставалась все же на 12,9% ниже показателей контрольной груп пы.
Рис. 3. Показатель максимальной амплитуды вспышки ХЛ плазмы крови у больных МЭМ на фоне различных схем лечения.
Биофизические показатели хемилюминесцентного анализа при использование комплексного лечения имели также позитив ную динамику. В сравнении с исходным уровнем амплитуда МВХЛ у больных с МЭМ снизилась, но оставалась выше контроль ных значений на 26,4% (p0,05), 24,1%(p0,05), и 14,9% (p0,05) у женщин 2 й, 3 й и 4 й наблюдаемых групп соответ ственно (рис.3).
Показатель ПВХЛ имел следующие значения на фоне проводимо го лечения: у женщин 2 й группы он снизился (по отношению к ис ходному уровню на момент начала терапевтических мероприятий) на 16,9% (р0,05), у женщин 3 й группы на 27,2 % ( р0,05)и на фо не использования Биона 3, у женщин 4 й группы, на 28,9%( р0,05). При этом необходимо отметить, что данный показатель хоть значительно и снизился, отражая восстановление антиоксида нтных ресурсов организма у выздоравливающих женщин с МЭМ, все же оставался весьма высоким и после проведенного традиционного лечения.
У больных с МЭМ показатели ТБК активных веществ плазмы крови и эритроцитов подверглись в ходе проводимого лечения кор рекции, и в разной степени в зависимости от схемы проводимого лечения. ТБЧ плазмы крови снизился у больных 2 й группы на — 14,5%, у больных 3 й группы на — 28,9% и у женщин 4 й группы на — 40,2%. При этом необходимо отметить, что данный показа тель, отражающий уровень образования и накопления в биологи ческих жидкостях промежуточных и конечных продуктов СРО, на фоне комплексного лечения у женщин 3 й и 4 й групп возвратился к нормальным значениям, так как они получали направленную ан тиоксидантную терапию. Показатель ТБЧ эритроцитов снизился на фоне лечения у больных 2 й группы на 7,9%, у больных 3 й группы и 4 й групп он полностью нормализовался. Аналогичные изменения были характерны и для общего ТБЧ. Аципол проявляет такие свойства только в комплексе с прямым антиоксидантом — аскорбиновой кислотой. Уровень карбонильных групп, определяе мых с индукцией и без индукции, на фоне применения пробиотика бион 3 к концу лечения при нормализации клинической картины заболевания возвращался к нормальным значениям контрольной группы.
Реакция отдельных изучаемых показателей системы АОЗ крови на проводимую терапию у женщин наблюдаемых групп была неоднознач ной. На фоне применения комплексной терапии у пациенток 2 й груп пы показатель тиоловых групп эритроцитов повысилось на — 16 %, у женщин 3 й группы на — 22,4% и у женщин 4 й группы на — 23,2%.
Наиболее значимые изменения произошли у пациенток, получающих в комбинированном лечении пробиотические и антиоксидантные препа раты.
Активность каталазы на фоне терапии пробиотиками и антиок сидантами повышалась и к концу лечения у больных 4 й группы да же несколько превышала величины контрольной группы условно здоровых женщин. У больных 3 й группы этот показатель был всего на 10,6% ниже показателя контроля, в то время как в начале лече ния активность КАТ у них была ниже контрольных значений на 33%. У женщин 2 й группы, получающих аципол, активность ката лазы практически не менялась в ходе лечения. Активность СОД эритроцитов у больных 2 й группы увеличилась после лечения от носительно величин до лечения на 50%, а у больных 3 й и 4 й групп на 104,2% и 118,01% соответственно. При этом, несмотря на такую позитивную динамику, активность СОД к концу наблюдения, после проведенного курса терапии, оставалась ниже контрольных значе ний.
Интегральные показатели ОС — коэффициент КАТ/СОД и КОМБэр отражали позитивную динамику восстановления физиологического ба ланса в системе про /антиоксиданты. Наиболее значимое и практически равнозначное снижение показателя КОМБэр. произошло у женщин с МЭМ 2 й и 3 й групп, получающих аципол с аскорбиновой кислотой в до полнении к основным схемам лечения и бион 3. У больных данных групп коэффициент окислительной модификации или гиперкатаболизма сни зился до 3, что может свидетельствовать о практически полной нормали зации процессов СРО и ПОЛ, а также о восстановлении функции системы АОЗ.
Так же у наблюдаемых женщин с МЭМ, получавших традиционное лечение и пробиотик бион 3 в комплексной терапии заболевания, было проведено изучение таких инфекций как Gardnerella vaginalis, Mycoplasma hominis, Candida albicans;
Ureaplasma биовары, Staphylococcus aureus, Candida spp. Проводилась оценка содержания лей коцитов в крови и мазке из влагалища, состояния эпителия, общая оцен ка флоры, наличие трихомонад, степень чистоты влагалища. Оценка па тологической микрофлоры проводилась методом ПЦР и А.F. Genital sys tem.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что женщины, больные МЭМ, являлись носительницами инфекций Gardnerella, Candida, Ureaplasma, Staphylococcus, Candida. Кроме того, при прове дении исследований методом ПЦР у 89% обследованных была выявле на Mycoplasma, которая также обнаруживалась при анализе на бакте риальный вагиноз. Оценка эффекта традиционного лечения в комп лексе с пробиотическим препаратом «Бион 3» показала, что носитель ство всех инфекций по окончанию полного курса лечения было исклю чено, что подтверждено обоими методами диагностики. Анализ на бак териальный вагиноз также показал отсутствие патогенной микрофло ры в матке. Результаты бактериологических исследований представле ны в таблице 4.
Таблица Результаты бактериологических исследований, проведенных до и после лечения, у женщин с МЭМ, получавших традиционное лечение и дополнительно получавших препарат бион 3.
Примечание: GAR — Gardnerella vaginalis, CAN — Candida albicans, UR — Ureaplasma биовары, STF — Staphylococcus aureus, abs — отсут ствие.
Для решения вопросов свидетельствующих о наличии или отсутствии воспалительного процесса был проведен клинический анализ крови. Оп ределяли: СОЭ, содержание лейкоцитов и эозинофилов крови. Показате ли крови при развитии МЭМ резко изменялись, что свидетельствовало о высокой интенсивности воспалительного процесса: так содержание лей коцитов крови повысилось в 1,5 раза, СОЭ — в 2,8 раза, содержание эози нофилов — на 141,4 %. После прохождения курса традиционного лече ния клиническая картина крови значительно улучшалась, но не достига ла уровня нормы. При оценке клинической картины крови на фоне комп лексной терапии, включающей традиционные препараты и дополнитель но пробиотик «Бион 3», было установлено, что исследуемые показатели крови приблизились к нормальному уровню более, чем при традицион ном лечении: содержание лейкоцитов превышало нормальное значение только на 8,7 % и снизилось по сравнению с группой, где был подтверж ден диагноз метроэндометрита, на 137,9 %;
СОЭ снизилась на 280,2 % и превышала нормальное значение на 4 %;
содержание эозинофилов сни зилось на 134,5 % по сравнению с МЭМ и превышало норму на 6,9 %.
Данные результаты по исследованию показателей ОС и воспалительной реакции показали, что эти процессы тесно взаимосвязаны, и коррекция заболеваний гнойно воспалительного генеза невозможна без включения в схемы традиционного лечения препаратов пробиотической, иммуномо дулирующей и антиоксидантной коррекции.
ВЫВОДЫ 1. Проведенными исследованиями установлено, что у гинекологи ческих больных с МЭМ развивается значительный дисбаланс в системе про /антиоксиданты за счет превалирования первого звена данной систе мы. Это проявляется усилением реакций свободно радикального окисле ния, выражающихся увеличением интегрального показателя окисли тельной деструкции (КОМБэр) в 13 раз, интенсивности БВХЛ на 48,6%, ПВХЛ на 121,4% и снижением общей антиоксидантной активности плаз мы крови на 27,7%.
2. Наиболее эффективными методами диагностики и контроля над клиническим течением МЭМ и проводимым лечением, в плане быстроты и экономической целесообразности, являются предлагаемые в работе би офизические показатели оценки окислительного стресса: амперометри ческий способ определения общей антиоксидантной активности плазмы крови и методы индуцированной хемилюминесценции.
3. Применение курса традиционной терапии (с использованием современных антибиотиков) при МЭМ купирует проявления воспа лительной реакции, практически не оказывая влияния на имею щийся дисбаланс в системе про /антиоксиданты (показатель общей антиоксидантной активности плазмы крови остается сниженным на 26,8%, показатель БВХЛ увеличенным на 39,4%, ПВХЛ увеличена 105,4%.
4. Использование в комплексном лечении МЭМ пробиотических препаратов 1 поколения (аципол по 1 капсуле 3 раза в день) способствует восстановлению естественного состава микрофлоры, что подтверждено бактериологическими посевами, но не нормализует баланс в системе про /антиоксиданты (тиоловые группы снижены на 16%, АОА снижена на 23%, уровень ТБК активных продуктов увеличен на 16%, БВХЛ на 26,4%, КОМБэр повышен в 6 раз.).
5. Включение в схемы традиционной терапии комбинированного пробиотического препарата бион 3, обладающего антиоксидантным действием, или пробиотика аципол в комплексе с пероральной формой витамин С в терапевтических дозировках приводит к значительному вос становлению дисбаланса метаболизма и состава микрофлоры у больных с МЭМ.
6. Использование в комплексном лечении больных с МЭМ пробиоти ческого препарата третьего поколения (бион 3) оказалось наиболее эф фективным и перспективным в плане устранения воспалительного про цесса, нормализации микрофлоры и функционирования системы атиок сидантной защиты, так как после курса проведенного лечения все изуча емые показатели практически не отличались от показателей контроль ной группы условно здоровых доноров ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Для оценки функционального состояния организма больных с МЭМ, прежде всего, состояния системы антиоксидантной защиты, тесно взаимосвязанной с системой иммунной защиты, целесообразно использо вать методы выявления дисбаланса в системе про /антиоксиданты, отра жающие уровень окислительного стресса.
2. Наиболее объективным является метод интегрального показате ля КОМБэр, суммарно отражающий степень истощения системы антиок сидантной защиты и уровень прооксидантной нагрузки у больных с вос палительными заболеваниями, который у больных с МЭМ увеличивается более, чем в 10 раз.
3. Для контроля за течением болезни и проводимым лечением, в плане быстроты и экономической целесообразности, наиболее эффектив ными методами являются биофизические показатели оценки окисли тельного стресса — амперометрический способ определения общей анти оксидантной активности плазмы крови и методы индуцированной хеми люминесценции.
4. Для эффективного патогенетического лечения больных с МЭМ не обходимо включать в схемы традиционной терапии пробиотики индиви дуального действия в комплексе с антиоксидантами (аципол по 1 капсу ле 3 раза в день за 30 минут до приема пищи и аскорбиновая кислота до 2г. в сутки) или комбинированные пробиотические средства третьего по коления с антиоксидантным компонентом (бион 3 по 1 капсуле 2 раза в день за 60 минут до приема пищи).
СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:
1. Власов, Р.В. Состояние антиоксидантной системы крови у боль ных метроэндометритом / Р.В. Власов, К.И. Мелконян, В.В. Малышко, И.И. Павлюченко // Современные проблемы науки и образования.— 2008.— №4, прил. № 1.— С.160.
2. Малышко, В.В. Уровень продуктов окислительной модификации биомолекул в крови у больных метроэндометритом / В.В. Малышко, К.И. Мелконян, Р.В. Власов // Современные проблемы науки и образова ния. 2008. — № 4, прил. № 1.— С.172.
3. Быков, И.М. Интенсивность окислительной модификации белков плазмы крови у больных метроэндометритом / И.М. Быков, А.А. Ладуть ко, Е.Е. Есауленко, К.И. Мелконян // 4 съезд Рос. о ва биохимиков и мо лекулярных биологов. — Новосибирск,2008. — С.421.
4. Есауленко, Е.Е. Роль металл катализируемого окисления белков в патогенезе метроэндометрита / Е.Е. Есауленко, К.И. Мелконян, А.А.
Ладутько, И.М. Быков // 4 съезд Рос. о ва биохимиков и молекулярных биологов. — Новосибирск, 2008. — С.448.
5. Павлюченко, И.И. Способ интегральной биохимической оценки уровня окислительного стресса у больных при различных патологичес ких состояниях / И.И. Павлюченко, А.А. Басов, Е.А. Губарева, К.И. Мелконян, М.А. Макарова, Т.В. Еремина, А.Э. Моргоев // 4 съезд Рос. о ва биохимиков и молекулярных биологов. — Новосибирск, 2008. — С.438.
6*. Мелконян, К.И. Возможности коррекции процессов свободнора дикального окисления биомолекул пробиотиками у больных метроэндо метритом / К.И. Мелконян, И.М. Быков // Аллергология и иммуноло гия.— 2009. Т.10, №2. С.251.
7*. Мелконян, К.И. Влияние пробиотиков и на показатели системы про /антиоксиданты у пациентов с метроэндометритом / К.И. Мелконян, И.М. Быков, И.И. Павлюченко, Н.В. Белкина // Кубанский научный ме дицинский вестник.— 2009. №3(108). — С.75 78.
8. Быков, И.М. Роль свободных радикалов в формировании метоэндо метрита / И.М. Быков, И.И. Павлюченко, К.И. Мелконян // Вестник но вых медицинских технологий.— 2009. — Т.— 16, №1.— С. 260.
* Работа, опубликована в журнале, включенном ВАК в перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИИ АОА— антиоксилительная активность, антиоксидантная активность АОЗ— антиоксидантная защита АФК— активные формы кислорода КАТ— каталаза КОМБ коэффициент окислительной модификации биомолекул МВХЛ максимальная вспышка хемилюминесценции МЭМ— метроэндометрит ОС— окислительный стресс ПВХЛ — площадь вспышки хемилюминесценции СОД— супероксиддисмутаза СРО — свободнорадикальное окисление SH сульфгидрильные группы ТБК тиобарбитуровая кислота ТБЧ— тиобарбитуравое число Мелконян Карина Игоревна БИОХИМИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ АНТИОКСИДАНТОВ И ПРОБИОТИКОВ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ МЕТРОЭНДОМЕТРИТОМ 03.00.04 биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Подписано в печать 25.11.2009 г.
Набор компьютерный. Гарнитура Times. Усл.п.л. 1,5.
Тираж 100 экз. Заказ № 25/11/01.
Отпечатано методом ризографии.
Издательство «MD production».
г. Краснодар, ул. Красноармейская, 90, оф. 5.
Тел. (861) 299 97 35.