авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Структурные особенности генов пендрина (slc26a4) и престина (slc26a5) у больных наследственной несиндромальной сенсоневральной глухотой

На правах рукописи

ЛОБОВ СЕМЕН ЛЕОНИДОВИЧ СТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ГЕНОВ ПЕНДРИНА (SLC26A4) И ПРЕСТИНА (SLC26A5) У БОЛЬНЫХ НАСЛЕДСТВЕННОЙ НЕСИНДРОМАЛЬНОЙ СЕНСОНЕВРАЛЬНОЙ ГЛУХОТОЙ 03.02.07 – генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

УФА – 2013 2

Работа выполнена в лаборатории молекулярной генетики человека Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН

Научный консультант: Джемилева Лиля Усеиновна доктор медицинских наук, доцент

Официальные оппоненты: Викторова Татьяна Викторовна доктор биологических наук, профессор ГБОУ ВПО Башкирский Государственный Медицинский Университет, заведующая кафедрой биологии Спицин Виктор Алексеевич доктор биологических наук, профессор ФГБУ «Медико-генетический научный центр» РАМН, заведующий лабораторией экологической генетики

Ведущая организация: ГБОУ ВПО Российский национальный медицинский университет им. Н.И.

Пирогова

Защита диссертации состоится «_» мая 2013 г. в «» часов на заседании Диссертационного совета Д 002.133.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте биохимии и генетики УНЦ РАН по адресу: 450054, Уфа, Пр. Октября, 71. ИБГ УНЦ РАН

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, Уфа, Пр. Октября, 71 и на сайтах ВАК РФ и ИБГ УНЦ РАН:

e-mail: [email protected]

Автореферат разослан «_» апреля 2013г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.б.н С.М. Бикбулатова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. По статистическим данным ВОЗ на сегодняшний день в мире насчитывается около 300 млн. человек, страдающих нарушением слуха различной этиологии (III-IV степени тугоухости) (www.genetests.org). В Российской Федерации эта цифра превышает 13 млн. человек, из которых более 1 млн. - это дети в возрасте до 18 лет. По прогнозам ВОЗ к 2020 году более 30% всей популяции земного шара будут иметь нарушения слуха (Загорянская и др., 2003). Наиболее частая форма наследственной глухоты – несиндромальная сенсоневральная тугоухость/глухота (НСНТ) (Nance, 2003;

Cryns et. al., 2004;

Morton et. al., 2006;

Chalestori et. al., 2007;

Batissoco et al., 2009;

Bhalla et al., 2011). Среди всех идентифицированных генов, вовлеченных в функционирование системы звуковосприятия, наиболее значимыми являются гены белков-коннексинов 26 (GJB2), 30 (GJB6), 31 (GJB3), и гены митохондриальной ДНК 12SrRNA и tRNASER(UCN), вклад которых в развитие несиндромальных и некоторых синдромальных форм, по данным различных авторов, достигает 20-80% в различных этнических группах (Friedman et al., 2000;

Petit et al., 2001;

Cryns et. al., 2004;

Smith et al., 2005;

Petersen et. al., 2006, Джемилева с соавт., 2009;

Барашков с соавт., 2009;

Dzhemileva et al., 2010;

Barashkov et al., 2011). Однако у довольно большого числа семей, которые обращаются к врачу генетику по поводу определения риска врожденных наследственных форм потери слуха у потомства, при проведении молекулярного исследования генов коннексинов и генов митохондриальной ДНК, не удается выявить генетический дефект, приводящий к потере слуха.

Поскольку наследственная несиндромальная сенсоневральная тугоухость и глухота относятся к заболеваниям с выраженной генетической гетерогенностью (Cryns et. al., 2004;

Smith et al., 2005;

Petersen et. al., 2006), то можно предположить, что мутации, приводящие к нарушению процесса звуковосприятия у части пробандов из семей высокого риска, могут затрагивать и другие гены, вовлеченные в функционирование процесса звуковосприятия.

По имеющимся литературным данным известно, что вклад мутаций в генах пендрина (SLC26A4) и престина (SLC26A5) составляет от 5 до 12% всех несиндромальных наследственных форм глухоты и тугоухости в различных популяциях мира (Hutchin et al., 2005;

Azaiez et al., 2007;

Dai et al., 2008;

Wu et al., 2008;

Kahrizi et al., 2009;

Yang et al., 2007, 2009).

Мутации в гене SLC26A4 являются причиной как синдромальной потери слуха (синдром Пендреда), дисплазии Мондини (дисплазия улитки в сочетании с деформацией преддверия и системы полукружных каналов), EVA (расширенный водопровод преддверия), так и несиндромальной формой тугоухости и глухоты (DFNB4) (Takahashi et al., 2006;

Pourova et al., 2010), тогда как мутации в гене SLC26A5 вызывают только несиндромальные формы потери слуха (DFNB61) (Liu et al., 2003).

Известно более 160 мутаций в гене SLC26A4 (Dai et al., 2008). Мутации p.Thr416Pro и c.1001+1GA - две наиболее частые мутации у глухих и тугоухих пациентов из популяций Северной Европы (Albert et al., 2006). У больных из Японии, Кореи и Китая преобладающими являются мутации p.His723Arg и c.919-2AG, которые обнаруживаются у 45,5% пациентов с синдромом Пендреда и дисплазией Мондини (Park et al., 2003;

Pourova et al., 2010). В гене SLC26A5 мажорной для большинства пациентов из евразийских популяций является мутация c.-53-2AG (IVS2-2AG), выявляемая у 4 % больных с нарушениями слуха (Tang et al., 2005).

Таким образом, учитывая существование выраженных межпопуляционных различий в частоте и спектре мутаций генов SLC26A4 и SLC26A5, анализ их генетической гетерогенности при несиндромальной аутосомно-рецессивной глухоте и тугоухости в отдельных регионах и этнических группах является актуальной проблемой медицинской генетики, необходимым условием при разработке оптимальных для данного региона подходов ДНК-диагностики наследственных форм потери слуха.

Целью исследования является изучение структурных особенностей генов (пендрина) и (престина) у больных наследственной SLC26A4 SLC26A несиндромальной глухотой из Республики Башкортостан и оптимизация подходов ДНК-диагностики заболевания.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Провести скрининг мажорной мутации р.H723R в гене SLC26A4 у пациентов с наследственными формами потери слуха из РБ.

2. Определить спектр и частоту мутаций в гене пендрина (SLC26A4) у больных несиндромальной наследственной глухотой и у членов их семей из РБ.

3. Определить спектр и частоту мутаций в гене престина (SLC26A5) у больных несиндромальной наследственной глухотой и у членов их семей из РБ.

4. Определить частоту мажорной для стран Западной Европы мутации c.-53 2AG (IVS2-2AG) в гене SLC26A5 в популяциях Евразии.

5. Оптимизировать подходы молекулярно-генетической диагностики наследственной несиндромальной глухоты и тугоухости у пациентов из РБ.

Научная новизна исследования. Анализ мутаций генов SLC26A4 (пендрина) и SLC26A5 (престина) у больных наследственной несиндромальной глухотой из Башкортостана позволил установить, что к мутациям, приводящим к глухоте, относятся: c.85GC (p.Glu29Gln) (0,2%), с.149TG (p.Leu50Arg) (0,2%), g.919-2AG (0,2%), g.29607delA (0,2%) в гене SLC26A4 (пендрина) и с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) (1,42%), p.Asn330Ser (c.989AG) (0,2%) в гене SLC26A5 (престина).

Впервые изучена частота гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG (IVS2 2AG) в гене SLC26A5 в 16 популяциях Евразии. Выявлена существенная гетерогенность по частоте гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG (IVS2 2AG) в гене SLC26A5 между славянскими, финно-угорскими и тюркскими этносами.

Впервые обнаружены две новые мутации в генах SLC26A4 (g.29607delA) и в SLC26A (p.Asn330Ser).

Научно-практическая значимость работы. В рамках работ по государственному контракту № 16.512.11.2047 «Разработка постгеномных методов для молекулярно-генетической диагностики соматических заболеваний» (Федеральная целевая научно-техническая программа «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники на 2009-2013 годы») создана уникальная патентно-чистая тест-система экспресс-ДНК-диагностики НСНТ на основе определения мажорной мутации с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гене SLC26A5.

Полученные данные о частоте и спектре мутаций и полиморфных вариантах в генах SLC26A4 (пендрина) и SLC26A5 (престина) вносят определенный вклад в познание фундаментальных механизмов функционирования процесса звуковосприятия, являясь необходимым условием для повышения эффективности работы медико-генетического консультирования в РБ.

Публикации и апробация работы: по теме диссертации опубликовано печатных работ, из которых 4 в журналах из Перечня ВАК.

Результаты исследования были представлены на международных и российских конференциях: Human Genome Meeting (Dubai, UAE, 2011);

European Human Genetics Conference (Amsterdam, the Netherlands, 2011);

Вторая и Третья школа-конференция по физико-химической биологии и биотехнологии «Биомика наука XXI века» (Уфа, 2011, 2012);

European Human Genetics Conference (Nrnberg, Germany, 2012);

International Polar Year 2012 (Montral, Canada, 2012);

Congress of the European Academy of Paediatric Societies (Istanbul, 2012);

V Всероссийская конференция с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт - основа профилактической медицины в век нанотехнологий» (Санкт-Петербург, 2012);

Всероссийской школы-конференции молодых ученых «Актуальные проблемы генетики человека, животных, растений и микроорганизмов» (Уфа, 2012).

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 172 страницах машинописного текста, содержит 9 таблиц и 25 рисунков. Список литературы включает 319 источников.

*** Автор данной работы выражают глубочайшую благодарность заведующей отделом Геномики Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук, доктору биологических наук, профессору Эльзе Камилевне Хуснутдиновой за выбор направления исследования и постоянную помощь при обсуждении и интерпретации полученных результатов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. Критерием включения в исследование был диагноз «Наследственная сенсоневральная тугоухость/глухота» (НСНТ) (G11 по МКБ-10), установленный на основании клинических и лабораторно-инструментальных методов исследований в соответствии с современными диагностическими критериями, предлагаемыми Институтом глухоты и коммуникативных расстройств (г. Омаха, США) и рекомендованных в 2003 г. Европейской рабочей группой по наследственным нарушениям слуха GENDEAF (Stephens et al., 2001;

Mazzoli et al., 2003). В ходе исследования уточнялись данные об этнической принадлежности больных путем опроса и выяснения национальной принадлежности родителей до третьего поколения.

Особое внимание уделялось установлению места рождения пробандов, их родителей и прародителей;

выявлению кровнородственных браков в семьях обследованных пациентов.

Согласно первичному анализу данных, и, исходя из диагностических критериев НСНТ, из общего числа случаев изолированной тугоухости/глухоты, были выделены несиндромальные сенсоневральные нарушения слуха с отягощенным по нарушенному звуковосприятию семейным анамнезом. Таким образом, в исследование вошли 246 семей пациентов с НСНТ из РБ.

Популяционная выборка включает 1310 образцов ДНК, полученных от здоровых неродственных индивидов – представителей 16 различных этнических групп, проживающих на территории России и стран бывшего Советского Союза, у которых проводился скрининг частоты гетерозиготного носительства мутации с.-53 2AG в гене SLC26A5.

Для настоящего исследования все образцы ДНК были анонимизированы. Забор крови производили после медицинского осмотра у взрослых жителей, принадлежащих к разным семьям, что позволяет рассматривать выборки случайными для популяций. Данная научно-исследовательская работа была одобрена локальным этическим комитетом по биомедицинской этике при ИБГ УНЦ РАН. Образцы крови были взяты с информированного письменного согласия пациентов и их родителей.

Молекулярно-генетические исследования проведены с использованием стандартных методов: выделения ДНК;

полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР);

анализа полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) и полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ), гибридизации на чипах (APEX) фирмы Asper Biothech;

конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SSCP) и ресеквенирования.

Статистический анализ полученных данных проведен с использованием стандартных для популяционно-генетических и медицинских исследований методов и соответствующего программного обеспечения (Statistica 5.5, GenePop 3.3, Genetic Data Analysis 1.0).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Для проведения молекулярно-генетического анализа мы сформировали выборку из 246 семей с 424 больными с наследственной формами тугоухости и глухоты. Рецессивный тип наследования предположительно определен в 220 семьях (385 больных), доминантный - 26 семьях (39 больных). Х-сцепленный тип наследования не был обнаружен ни в одной семье с наследственными формами тугоухости и глухоты из Республики Башкортостан (РБ).

Скрининг мутации р.H723R в гене SLC26A4 у пациентов с наследственными формами потери слуха из РБ Учитывая высокую частоту встречаемости мутации р.H723R не только у пациентов из азиатских популяций, но и в других этносах Европы и Сев. Америки (Pera et al., 2008;

Dossena et al., 2009), был проведен скрининг мутации в выборке больных из РБ. Для детекции мутации р.H723R был использован метод идентификации данной аминокислотной замены с помощью ПЦР с последующим ПДРФ–анализом (Scott et al., 2000). При использовании данного метода теряется 1 из двух сайтов рестрикции для эндонуклеазы Fat1 (Рис. 1), что позволяет выявлять гомозиготных и гетерозиготных носителей этой мутации.

Результаты скрининга показали, что мутация р.H723R, выявленная ранее в некоторых популяциях в ассоциации (или без) с мутациями в гене GJB2 (Tsukamoto, et al., 2003;

Choi et al., 2009), не была зарегистрирована ни у одного пациента из РБ.

187 п.н.

112 п.н.

38 п.н.

37 п.н.

1 3 5 6 2 4 7 9 10 Рис. 1. Идентификация мутации р.H723R в гене SLC26A4 с помощью ПДРФ–анализа (Fat1): электрофореграмма 1-5 и 7-11 – образцы, не содержащие мутацию, 6 контрольный образец.

Таким образом, данная мутация не является причиной потери слуха среди пациентов с несиндромальной сенсоневральной глухотой в РБ. Следовательно, можно предполагать, что причиной тугоухости и глухоты у пациентов из РБ, наравне с мутацией с.35delG в гене GJB2 (Джемилева, 2011), являются мутации в других генах, участвующих в процессе звуковосприятия, тем более что спектр и частота мутаций гена SLC26A4 во многих азиатских и европейских популяциях достаточно скудны (Coyle et al., 1998;

Campbell et al., 2001;

Pryor et al., 2005;

Albert et al., 2006).

Анализ мутаций c.85GC (p.Glu29Gln) и с.149TG (p.Leu50Arg) в гене пендрина (SLC26A4) Мутация c.85GC (p.Е29Q) была идентифицирована с помощью глубокого ресеквенирования в компаунд гетерозиготном состоянии с мутацией с.149TG у пробанда с НСНТ (глухота) в семье башкирской этнической (p.L50R) принадлежности (Рис. 2).

КТ-визуализация пирамиды височной кости обследованного пациента представлена на рисунке 2Б (1 и 2). На серии томограмм (1, 2) визуализируется наружный слуховой проход, размеры и форма которого не изменены. На КТ-снимках цепь слуховых косточек не изменена. Также у пациента не выявлено изменений со стороны сосцевидного отростка, однако при этом видны выраженные изменения со стороны улитки – ее дисплазия и резко расширенный водопровод преддверия.

Мутация c.85GC (р.E29Q) в гетерозиготном состоянии была впервые описана в 2001 году в семье с мальформацией Мондини у пробанда из Айовы (США) (Campebell et al., 2001). Позднее, в 2003 году при исследовании 55 пациентов с синдромом Пендреда из Англии и Бельгии, частота c.85GC в выборке больных составила 0,9% (Prasad et al., 2004).

Рис. 2. Фрагмент родословной семьи Д башкирской этнической принадлежности с НСНТ из РБ. Пробанд III-1 – пациент с генотипом c.85GC / с.149TG (А). Анализ пирамиды височной кости. Фотографии 1 и 2 – мальформация Мондини, фотография 3 – норма. (Б). Последовательность участка 2 экзона гена SLC26A4, содержащего мутации c.85GC / с.149TG в компаунд-гетерозиготном состоянии (В).

В 2004 году мутация c.85GC была также выявлена в семье французов в гетерозиготном состоянии у пробанда и одного сибса (Blons et al., 2004). При анализе 8 образцов ДНК из 2-х семей с наследственной формой несиндромальной сенсоневральной глухоты из Англии, мутация c.85GC была обнаружена в компаунд гетерозиготном состоянии с мутацией c.2TC (р.M1T) (Shears et. al., 2004), вызывающей синдром Пендреда в гомозиготном состоянии (Prasad et al., 2004;

Shears et. al., 2004).

Мутация с.149TG (p.L50R) в гене SLC26A4 была описана у пробанда с глухотой, француза по этнической принадлежности, как патологическая мутация, вызывающая замену лейцина на аргинин в пендрине и приводящая к синдрому Пендреда (Prasad et al., 2004). Известно, что лейцин в 50–ом положении аминокислотной последовательности пендрина является абсолютно консервативным как среди всех видов белков – сульфатных транспортеров у человека, так и среди таковых у различных видов организмов (Romero et al. 2009), и обладает способностью образовывать прочные ковалентные связи с другими аминокислотами, благодаря чему может участвовать как в образовании локальной структуры, так и в доменной укладке белковой молекулы (Wangemann et al., 2009;

Sun et al., 2009). Считается, что второй, третий и четвертый трансмембранные домены пендрина участвуют в обмене ионов, при этом наибольший вклад вносит третий трансмембранный домен (Romero et al., 2009). Мутантный пендрин, по-видимому, теряет способность к осуществлению ионного транспорта, что выражается в повреждении мембранного и костного лабиринтов органа Корти, что, в свою очередь, приводит к стойкому повреждению процесса звуковосприятия (Grimaldi et al., 2007;

Hughey et al., 2007;

Sindic et al., 2007;

Wall et al., 2008;

Kopp et al., 2008;

Dossena et al., 2009;

Ito et al., 2011).

Таким образом, частота мутации c.85GC составила 0,2%, как и частота мутации с.149TG в общей выборке неродственных больных НСНТ, а в выборке больных НСНТ башкирской этнической принадлежности – по 1,35 % для обеих мутаций.

Анализ мутации c.919-2AG в гене пендрина (SLC26A4) В татарской семье у пробанда с глухотой мутация с.167delT в гене GJB выявлена в сочетании с мутацией с.919-2AG, расположенной в 7 интроне в сайте сплайсинга 8 экзона в гене SLC26A4. У пробанда четверо детей с глухотой, родители пробанда слышащие. К сожалению, образцы ДНК детей, жены и родителей пробанда оказались недоступны для исследования (родители пробанда, а также его жена и дети отказались от генетического тестирования по религиозным причинам). Подобное сочетаниe мутаций g.-3179GA и с.35delG в гене GJB2 и g.2-2AG в гене SLC26A обнаружено в двух эстонских семьях с нарушением слуха (Teek et al., 2009). У пробанда, китайца по этнической принадлежности, мутация с.919-2AG была выявлена в гомозиготном состоянии, тогда как у его жены и двух дочерей, имеющих тугоухость IV степени, данная мутация выявлялась в компаунд-гетерозиготном состоянии с другой мутацией p.H723R (Yong et al., 2001;

Prasad et al., 2004), наиболее частой для пациентов с синдромом Пендреда и синдромом расширенного водопровода преддверия (EVA) из Китая, Монголии, Японии и Кореи (Iwasaki et al., 2006;

Cho et al., 2006;

Dai et al., 2008;

Guo et al., 2010;

Wang et al., 2011).

Анализ варианта нуклеотидной последовательности g.29607delA (IVS9+43delA) в гене пендрина (SLC26A4) При молекулярном анализе 9 экзона и протяженного участка 9 интрона гена у пробанда с тугоухостью степени башкирской этнической SLC26A4 IV принадлежности было обнаружено ранее неописанное в литературе изменение нуклеотидной последовательности g.29607delA (IVS9+43delA) (Рис. 3). Из всей выборки больных (N=246) данная делеция в гетерозиготном состоянии была выявлена только у 1 пациента (0,2%). В связи с этим мы провели поиск данного изменения в контрольной выборке (150 неродственных индивидов с нормальным слухом), представленной тремя наиболее многочисленными этническими группами региона (русскими, татарами и башкирами). Делеция g.29607delA (IVS9+43delA) в контрольной выборке не обнаружена. Сделать какое-либо предположение о функциональной роли найденного изменения нуклеотидной последовательности достаточно трудно.

Б) A) Рис. 3. Идентификация мутации g.29607delA (IVS9+43delA) в гетерозиготном состояниях в гене SLC26A4 с помощью ресеквенирования 9 экзона и протяженного участка 9 интрона (A). Нормальная последовательность участка 9 интрона гена SLC26A4 (Б).

Вполне возможно, данная делеция в 9 интроне гена SLC26A4 оказывает влияние на процесс сплайсинга первичного РНК транскрипта, поскольку ее локализация совпадает с одним из сайтов альтернативного сплайсинга (по данным программы Splice Prediction using Consensus Sequences (WebGene):

http://www.itba.mi.cnr.it/webgene). Однако о каких-то функциональных особенностях подобных последовательностей, локализованных в интронных областях гена SLC26A4, прилегающих к 10-му экзону, пока ничего не известно. Также у данного индивида была выявлена мутация с.35delG в гене GJB2 в компаунд гетерозиготном состоянии с мутацией с.235delC.

Анализ полиморфного варианта rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) в гене пендрина (SLC26A4) На хромосомах больных несиндромальной сенсоневральной глухотой и тугоухостью из Республики Башкортостан в 19 экзоне гена SLC26A4 был выявлен вариант нуклеотидной последовательности – rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA), описанный в литературе как нейтральный полиморфизм. По данным литературы, идентифицированные полиморфные варианты гена SLC26A4 не приводят к образованию дефектного белка и не влияют на процесс звуковосприятия. Тем не менее, патогенетическая значимость данных нуклеотидных замен рядом авторов трактуется неоднозначно и носит дискуссионный характер (Everett et al., 1999;

Borck et al., 2003).

Полиморфный вариант rs17154353 в гене был выявлен в SLC26A гетерозиготном состоянии у одного пациента с мутациями c.333_335delAA и с.35delG в компаунд гетерозиготном состоянии в гене GJB2 и у его двоюродного брата с нормальным слухом (Рис. 4).

Рис. 4. Последовательность участка 19 экзона гена SLC26A4, содержащего полиморфный вариант rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) в гетерозиготном состоянии (A), и нормальная последовательность участка 19 экзона гена SLC26A4 (Б).

Таким образом, частота полиморфного варианта rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) составила 0,2% в выборке больных с наследственной глухотой и тугоухостью из РБ.

Анализ мутации c.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гене престина (SLC26A5) При оценке географического ареала распространения c.-53-2AG у пациентов с НСНТ из различных популяций мира, следует отметить, что данная мутация является достаточно частой и в большинстве случаев повреждений слуха регистрируется только в сочетании с мутациями в генах GJB2 (Tang et al., 2005;

Yuan et al., 2009) и SLC26A4 (Rodriguez-Paris et al., 2010). Единичные случаи гомозигот по этой мутации были обнаружены в США у переселенцев европейского происхождения (Liu et al., 2003). Трансверсия c.-53-2AG повреждает сайт сплайсинга 3 экзона гена SLC26A (Liberman et al., 2002). При изучении уровня экспрессии престина с аберрантным сплайсингом в 3 экзоне и функционировании ионного транспорта в клетке Кортиева органа мыши было показано, что мутация c.-53-2AG выражено нарушает ионный транспорт через мембрану волосковой клетки по сравнению с клетками с нормальным уровнем престина (Toth et al., 2007;

Schaechinger et al., 2007;

Rybalchenko et al., Romero et al., 2009;

Wangemann et al., 2010). Таким образом, функциональная значимость данной замены на сегодняшний день спорна – ряд исследователей считает, что c.-53-2AG - полиморфный вариант (Tang et al. 2005;

Minor et al., 2009), а другие же придерживаются мнения, что c.-53-2AG - мутация с аутосомно рецессивным типом наследования (Liberman et al., 2002;

Teek et al, 2009;

Rodriguez Paris et al., 2010).

На первом этапе исследований был проведен скрининг мутации c.-53-2AG в гене престина (SLC26A5) у 246 неродственных пациентов из Республики Башкортостан. У 8 пациентов (7 неродственных) данная мутация была выявлена в гетерозиготном состоянии, что составляет 3,25% всех обследованных семей с НСНТ (Рис. 5).

По этнической принадлежности пациенты с мутацией c.-53-2AG распределились следующим образом: 6 русских и 1 татарин. У пяти пациентов с НСНТ русской этнической принадлежности мутация c.-53-2AG (IVS2-2AG) в гене SLC26A5 сочеталась с мутациями с.35delG (p.Gly12fs) и p.M34T в гене GJB2. У трех пациентов мутация с.35delG была идентифицирована в гомозиготном состоянии, и у одного – в гетерозиготном.

Б) A) Рис. 5. Последовательность участка 2 интрона гена SLC26A5, содержащего мутацию c.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гетерозиготном состоянии (A), и нормальная последовательность участка 2 интрона гена SLC26A5 (Б).

У пациента татарской этнической принадлежности мутация c.-53-2AG в гене SLC26A5 была выявлена с компаунд гетерозиготным состоянием мутаций с.235delС (p.L79fs) и c.314_327del14 (p.K105fs) в гене GJB2. Следовательно, частота мутации c. 53-2AG в выборке больных из РБ составляет 1,42%, а среди пациентов, русских по этнической принадлежности, частота данной мутации – 3%. Таким образом, учитывая высокую частоту ассортативных браков между глухими индивидами (до 45%) (Джемилева, 2011), достаточно легко объяснить сегрегацию мутантных аллелей в генах GJB2 и SLC26A5 среди больных из Республики Башкортостан.

Анализ мутации p.N330S (с.989GA) в гене престина (SLC26A5) У пробанда с глухотой из семьи с НСНТ, русского по этнической принадлежности, была идентифицирована замена аденина на гуанин в 989 положении (с.989GA), которая ведет к замене аминокислоты аспарагин на серин в положении (p.N330S) (Рис. 6 А и Б).

Рис. 6. Последовательность участка 10 экзона гена SLC26A5, содержащего мутацию p.N330S (c.989AG) в гетерозиготном состоянии (A), и нормальная последовательность участка 2 интрона гена SLC26A5 (Б).

Данная мутация была выявлена у индивида, имеющего мутацию c.35delG в гомозиготном состоянии. Частота мутации в общей выборке больных НСНТ из РБ составила 0,2%. Данная мутация была выявлена нами впервые и в литературе не описана.

Анализ полиморфного варианта rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) в гене престина (SLC26A5) Вариант нуклеотидной последовательности rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) в гене SLC26A5 был выявлен у 106 пациентов с НСНТ (Рис. 7). В гетерозиготном состоянии rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) был выявлен у 80 больных (17 башкир, 32 русских, 20 татар, украинцев и у 9 метисов).

В гомозиготном состоянии rs7779997 был обнаружен у 26 глухих пациентов (у 5 башкир, 9 русских, 4 татар, 8 метисов) из РБ. Таким образом, частота полиморфного варианта rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) в гене SLC26A5 у пациентов из РБ составила 43%.

В группе контроля полиморфный вариант rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) был выявлен у 43% индивидов, из них у 77 в гетерозиготном и у 10 – в гомозиготном состоянии.

Проведенный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта rs7779997 у пациентов с НСНТ и в контрольной выборке не выявил статистически значимых различий.

В) Б) A) Рис. 7. Последовательность участка 5 интрона гена SLC26A5, содержащего полиморфный вариант rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) в гетерозиготном (А) и гомозиготном (Б) состоянии, нормальная последовательность гена SLC26A5 (В).

Отсутствие достоверных различий в распределении частот аллелей и генотипов rs7779997 в гене SLC26A5 у пациентов НСНТ и в контрольной выборке из РБ, свидетельствует о нейтральности данной трансверсии, что также подтверждено исследованиями частот аллелей rs7779997 в различных популяциях по данным проекта «1000 геномов» (http://www.1000genomes.org/).

Анализ полиморфного варианта rs72655380 (c.1302AG g.60740AG p.Ser434Ser) в гене престина (SLC26A5) Вариант нуклеотидной последовательности rs72655380 (c.1302AG g.60740AG p.Ser434Ser) в гене SLC26A5 был выявлен в гетерозиготном состоянии у двух пациентов с IV степенью тугоухости из РБ, у татарина и башкира по этнической принадлежности (0,4%) (Рис. 8). У пациента татарской этнической принадлежности данный полиморфный вариант в гене SLC26A5 сочетался с мутацией c.35delG в гетерозиготном состоянии в гене GJB2.

Полиморфный вариант rs72655380 (c.1302AG g.60740AG p.Ser434Ser), в результате которого аминокислота серин в 434 положении сохраняется, и строение белка остается неизменным, является достаточно редкой нейтральной трансверсией, не влияющей на процесс звуковосприятия, и встречается, в основном, у представителей азиатских популяций с частотой около 1% (http://www.1000genomes.org/).

A) Б) Рис. 8. Последовательность участка 12 экзона гена SLC26A5, содержащего полиморфный вариант rs72655380 (c.1302AG g.60740AG p.Ser434Ser) в гетерозиготном состоянии (А) и нормальная последовательность гена SLC26A5 (Б).

Таким образом, частота полиморфного варианта rs72655380 среди пациентов с наследственной потерей слуха из РБ составила 0,4%.

Анализ частоты гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5 в некоторых популяциях Евразии Полученные значения частоты мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5 среди больных наследственной несиндромальной глухотой в Республике Башкортостан подтверждают важность изучения распространенности этой трансверсии в гене престина (SLC26A5) в различных популяциях Волго-Уральского региона, Восточной и Северной Европы, Средней Азии, Северного Кавказа и Восточной Сибири. Новые данные, полученные в данной работе, позволяют, до некоторой степени, закрыть существующие пробелы в информации о распространенности мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5 на территории Евразии. Данные о частотах и географическом ареале распространения мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5, несомненно, очень важны для разработки стратегии молекулярной диагностики наследственных нарушений слуха в различных этнических группах, проживающих как в Республике Башкортостан, так и, в целом, на территории Российской Федерации, а также могут послужить в решении вопроса о возможной роли эффекта основателя в происхождении данной трансверсии.

При исследовании индивидов с нормальным слухом, было показано, что средняя частота гетерозиготного носительства мутации среди c.-53-2AG нормальнослышащих индивидов составляет 2,6 % (1/37), с вариацией от 1,3% у испанцев до 4% у венгров, французов и метисов европейского происхождения из США (Tang et al., 2005).

Нами была изучена частота гетерозиготного носительства c.-53-2AG среди различных популяций коренного населения Волго-Уральского региона (башкиры, татары, чуваши, мордва, удмурты, коми-пермяки), а также в выборке русских из города Екатеринбурга и Пинежского района Архангельской области. В тюркоязычных популяциях Волго-Уральского региона мутация c.-53-2AG обнаружена с частотами 2,5% и 2,6%, у татар, и чувашей, соответственно.

Скрининг частоты гетерозиготного носительства c.-53-2AG, выполненный нами в двух восточно-европейских популяциях (украинцы и белорусы), выявил достаточно высокие частоты c.-53-2AG - 2.5% у украинцев (1/40) и 1.3% у белорусов (1/80), соответственно.

Среди финно-угорских популяций Волго-Уральского региона мутация c.-53 2AG была выявлена с высокой частотой 6% у коми (1/16), с частотой 5,4% у мордвы (1/19) и отсутствует у удмуртов. Ранее, высокая частота c.-53-2AG (4.1%) была обнаружена у выходцев из Европы, живущих в США (венгров, испанцев и французов) (Tang et al., 2005). Частота гетерозиготного носительства c.-53-2AG, выявленная нами в смешанной выборке русских – 2,3%. Таким образом, частота гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG, выявленная в популяциях мордвы и коми, близка к частоте носительства этой мутации в популяции Эстонии (Teek et al., 2009), где на сегодняшний день наиболее высока частота гетерозиготного носительства c.-53 2AG.

В среднем же, распространенность гетерозигот по мутации c.-53-2AG в популяциях Волго-Уральского региона составляет 0,0275, что несколько ниже частоты гетерозиготного носительства c.-53-2AG в популяциях Северной Европы, и белых представителей Америки европейского происхождения (4%) (Tang et al., 2005).

Частота гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG в исследованных нами популяциях Восточной Европы составила 0,011. Отсутствие мутации в популяциях башкир, объединяющих четыре этногеографические группы, вероятнее всего, объясняется преобладанием в структуре их генофонда монголоидного компонента, являющегося основой генофондов популяций Азии, где частота мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5 крайне низка (0/230), а среди больных с несиндромальной аутосомно рецессивной глухотой из-за повреждения гена SLC26A4 преобладают мутации р.H723R (c.2168AG) и c.766-2AG (IVS7-2AG) (Dai et al., 2008;

Yuan et al., 2009;

Guo et al., 2010;

Wang et al., 2011).

В исследованных тюркоязычных популяциях Центральной Азии (казахи, узбеки) мутация c.-53-2AG с достаточно высокой частотой обнаружена у казахов (2,5%) и не выявлена у узбеков. В тюркоязычных популяциях Сибири (якуты, алтайцы) мутация c.-53-2AG с относительно низкой частотой (1,3%) была выявлена нами только в популяции алтайцев и не обнаружена в популяции якутов.

Мутация c.-53-2AG была выявлена у абхазов с частотой 1,3% (1/80).

Таким образом, ареал распространения мутации c.-53-2AG демонстрирует наибольшую частоту в популяциях Северной и Восточной Европы с постепенным снижением градиента частоты с севера на юг и с запада на восток. Характер распространения мутации c.-53-2AG в изученных нами этнических группах соответствует их географическому расположению и вписывается в географический градиент снижения частоты с запада на восток, что дает основание предполагать, что она распространилась по Евразии в результате смешения с европейцами, мигрировавшими из Северной Европы.

Полученные данные о распространенности мутации c.-53-2AG среди различных популяций, располагающихся на обширных территориях Евразии, позволят, до некоторой степени, уточнить или, возможно, пересмотреть современные представления о центре происхождения, возрасте, и механизмах распространенности мутации c.-53-2AG. Таким образом, полученные нами данные показали градиент снижения частоты гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG с запада на восток: высокая частота c.-53-2AG в популяциях Восточной Европы (белорусы, украинцы) и в финно-угорских популяциях (коми и мордва), промежуточные частоты c.-53-2AG - в некоторых популяциях Волго-Уральского региона, Средней Азии и Северного Кавказа, и минимальная частота c.-53-2AG у алтайцев в Восточной Сибири.

Характер распространенности мутации c.-53-2AG в изученных этнических группах может служить свидетельством предполагаемой роли эффекта основателя в происхождении и распространенности этой мутации в популяциях мира.

В отношении некоторых рецессивных мутаций в гене GJB2 были предложены оригинальные гипотезы о возможных механизмах поддержания высокой частоты их гетерозиготного носительства (Common et al., 2004) в контексте их возможной повышенной резистентности носителей к инфекциям. Вполне вероятно, что гетерозиготные носители мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5 также имеют определенное адаптивное преимущество, поскольку в ряде работ обсуждается роль престина как белка-модификатора, влияющего на ионный гомеостаз в клетке и взаимодействующего с CFTR-белком (Rybalchenko et al., 2008;

Dallos et al., 2008;

Sun et al., 2009;

Homma et al., 2010).

В заключение необходимо отметить важность проводимых исследований в разработке стратегий скрининга мутаций в гене SLC26A5 и SLC26A4 в различных этнических группах для более раннего выявления и профилактики наследственных форм тугоухости и глухоты, учитывая высокую распространенность данного заболевания.

Оптимизация подходов ДНК-диагностики наследственных форм тугоухости и глухоты у пациентов из Республики Башкортостан У пациентов с НСНТ из Республики Башкортостан было выявлено 4 мутации c.85GC (p.Glu29Gln), с.149TG (p.Leu50Arg), g.919-2AG, g.29607delA и полиморфный вариант rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) в гене SLC26A4 и мутации - с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG), p.Asn330Ser (c.989AG) и полиморфных варианта rs7779997 (c.403+14TC, IVS5+14TC, g.38190TC), rs72655380 (c.1302AG, g.60740AG, p.Ser434Ser) в гене SLC26A5.

В изученной выборке больных наследственной глухотой из Республики Башкортостан наиболее распространенной мутацией в гене SLC26A5 оказалась мутация с.-53-2AG (1,42%), остальные мутации генов SLC26A5 и SLC26A4, в общей сложности, составили менее 1 %.

Следует отметить, что мутации c.85GC (p.Glu29Gln) и с.149TG (p.Leu50Arg) в компаунд-гетерозиготном состоянии в гене SLC26A4 были выявлены у пациента с несиндромальной формой тугоухости и рентгенологической картиной мальформации Мондини, что позволило верифицировать диагноз и провести проспективное медико генетическое консультирование для членов данной семьи.

Относительно высокая частота сочетания мутаций с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гене SLC26A5 и c.35delG в гене GJB2 у больных в РБ предполагает возможность проведения прямой ДНК–диагностики. Учитывая этнический состав населения РБ, в котором преобладающим является европеоидный компонент, можно отметить, что молекулярно-генетическое тестирование на данные мутации является обоснованным и необходимым условием при проведении дифференциальной и пренатальной ДНК–диагностики наследственной несиндромальной глухоты в Республике Башкортостан.

На основании полученных результатов исследований о спектре и частоте мутаций в генах GJB2 (Джемилева, 2011), SLC26A5 и SLC26A4 нами были оптимизированы подходы ДНК-диагностики наследственных несиндромальных форм тугоухости/глухоты в Республике Башкортостан. Обследование следует начинать с прямой диагностики на наличие мажорной для популяций Башкортостана и Западной Европы мутации c.35delG гена GJB2, а также с рецессивной мажорной для некоторых популяций из Европы и Азии мутации с.-53-2AG в гене SLC26A5. Наравне с прямой диагностикой мутаций, также обязательно проведение компьютерной томографии височной кости, на основании которой следует проводить прямое глубокое ресеквенирование всех экзонов гена SLC26A4. В случае полной информативности семьи ДНК-диагностика ограничивается прямым методом. В случае частичной информативности или абсолютной неинформативности должен проводиться поиск мутаций в генах GJB2, GJB3, GJB6 и генах мтДНК 12SrRNA и tRNASer(UCN), согласно алгоритму, предложенному ранее (Джемилева, 2011) (Рис. 9).

Рис. 9. Алгоритм ДНК-диагностики наследственных форм тугоухости и глухоты в РБ (желтым обозначены новые позиции, которые не применялись в ранее предложенном алгоритме (Джемилева, 2011)).

ВЫВОДЫ 1. Мутация p.H723R в гене пендрина (SLC26A4) у больных наследственной несиндромальной сенсоневральной глухотой из Республики Башкортостан не обнаружена.

2. В гене пендрина (SLC26A4) у больных наследственной несиндромальной сенсоневральной глухотой из Республики Башкортостан выявлены 4 мутации c.85GC (p.Glu29Gln) (0,2%), с.149TG (p.Leu50Arg) (0,2%), g.919-2AG (0,2%), g.29607delA (0,2%) и 1 полиморфный вариант rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) (0,2%). Мутации c.85GC (p.Glu29Gln), с.149TG (p.Leu50Arg), g.919-2AG, g.29607delA в гене пендрина (SLC26A4) выявлены только у больных – башкир и татар по этнической принадлежности. Мутация g.29607delA обнаружена впервые.

3. В гене престина (SLC26A5) у больных наследственной несиндромальной сенсоневральной глухотой из Республики Башкортостан обнаружены 2 мутации с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) (1,42%), p.Asn330Ser (c.989AG) (0,2%) и полиморфных варианта rs7779997 (c.403+14TC, IVS5+14TC, g.38190TC) (43%), rs72655380 (c.1302AG, g.60740AG, p.Ser434Ser) (0,8%). Мутации с.-53 2AG (g.24586AG, IVS2-2AG), p.Asn330Ser (c.989AG) в гене престина – преимущественно у пациентов, русских по этнической (SLC26A5) принадлежности. Мутация p.Asn330Ser (c.989AG) выявлена впервые.

4. Мутация с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гене престина (SLC26A5) выявлена в популяциях финно-угорского происхождения с частотой 2,95%, в популяциях славянской группы - в 2,0%, у тюркских народов в 1,3% случаев, соответственно. Обнаружен градиент снижения частоты мутации с.-53-2AG с запада на восток и севера на юг, что дает основание предполагать о ее распространенности в популяциях Центральной Евразии из Западной Европы.

5. Оптимизирован алгоритм ДНК-диагностики наследственной несиндромальной глухоты для Республики Башкортостан.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ 1. Dzhemileva, L.U. Carrier frequency of GJB2 gene mutations c.35delG, c.235delC and c.167delT among the populations of Eurasia / L.U. Dzhemileva, N.A.

Barashkov, O.L. Posukh, R.I. Khusainova, V.L. Akhmetova, I.A. Kutuev, I.R.

Gilyazova, V.N. Tadinova, S.A. Fedorova, I.M. Khidiyatova, S.L. Lobov, E.K.

Khusnutdinova // Journal of human genetics – 2010.- V.55. – P.749–754.

2. Barashkov, N.A. Autosomal recessive deafness 1A (DFNB1A) in Yakut population isolate in Eastern Siberia: extensive accumulation of the splice site mutation IVS1+1GA in GJB2 gene as a result of founder effect / N.A. Barashkov, L.U.

Dzhemileva, S.A. Fedorova, F.M. Teryutin, O.L. Posukh, E.E. Fedotova, S.L. Lobov, E.K. Khusnutdinova. // Journal of Human Genetics. – 2011. – V.56(9). - P.631–639.

Джемилева, Л.У. Оценка гаплотипического разнообразия и реконструкция 3.

предкового гаплотипа хромосом с мутацией с.35delG гена GJB2 (сх26) в популяциях Волго-Уральского региона / Л.У. Джемилева, О.Л. Посух, Н.А.

Барашков, С.А. Федорова, Ф.М. Терютин, В.Л. Ахметова, И.М. Хидиятова, Р.И.

Хусаинова, С.Л. Лобов, Э.К. Хуснутдинова // Acta Naturae (русскоязычная версия). – 2011. – Т.3. - №3. – С.17-27.

Лобов, С.Л. Молекулярно-генетический анализ генов GJB2, SLC26A4 и 4.

SLC26A5 у больных с наследственными нарушениями слуха из Республики Башкортостан / С.Л. Лобов, Л.У. Джемилева, Э.К. Хуснутдинова // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2011. - Т.13 – №5(3).– С.251–255.

5. Barashkov, N.A. Molecular, audiological and population features of autosomal recessive deafness 1A (DFNB1A) in Yakut population isolate from Eastern Siberia / N.A. Barashkov, L.U. Dzhemileva, S.A. Fedorova, F.M. Teryutin, O.L. Posukh, E.E.

Fedotova, S.L. Lobov, and E.K. Khusnutdinova // HUGO Human Genome Meeting 2011. Dubai. – P.218.

6. Barashkov, N. Molecular, audiological and population features of autosomal recessive deafness 1 A (DFNB1A) in Yakut population isolate from Eastern Siberia / N. Barashkov, L. Dzhemileva, S. Fedorova, F. Teryutin, O. Posukh, E. Fedotova, S.

Lobov, E. Khusnutdinova // European Journal of human genetics. - Amsterdam, the Netherlands 2011. -P. 7. Dzhemileva, L.U. Spectrums and frequences of GJB2, GJB6, GJB3, 12SrRNA, tRNASer(UCN), SLC26A4, SLC26A5 и MYO7A mutations among patients with non syndromic hearing loss from Bashkortostan (Russia) / L.U. Dzhemileva, S.L. Lobov, E.K. Khusnutdinova // European Journal of human genetics. - Amsterdam, the Netherlands 2011. - P.312.

Лобов, С.Л. Анализ генов SLC26A4, SLC26A5 и GJB2 у больных с 8.

наследственной несиндромальной тугоухостью/глухотой из Республики Башкортостан / С.Л. Лобов, Л.У. Джемилева, Р.З. Муртазина, Р.Р. Хасанова, Л.Р. Шафикова, А.А. Султанова, Э.К. Хуснутдинова // Биомика. – 2011. – Т.1 №2 - С.72-73.

9. Dzhemileva, L.U. Haplotype diversity and reconstruction of ancestral haplotype associated with the c.35delG mutation in the GJB2 (Cx26) gene among the Volgo Ural populations of Russia / L.U. Dzhemileva, O.L. Posukh, N.A. Barashkov, S.

Lobov, E.K. Khusnutdinova // European Journal of human genetics. - Nrnberg, Germany 2012. – P.254.

10. Barashkov, N.A. Autosomal Recessive Deafness in Yakut Population Isolate in Eastern Siberia: Extensive Accumulation of the Splice Site Mutation IVS1+1GA in GJB2 Gene as a Result of Founder Effect / N.A. Barashkov, L.U. Dzhemileva, S.A.

Fedorova, F.M. Teryutin, O.L. Posukh, A.V. Soloviev, E.E. Fedotova, S.L. Lobov, L.S. Zamorshikova, O.A. Melnitchuk, E.K. Khusnutdinova and E.I. Mikhailova // International Polar Year. - Montral, Canada, 2012.

11. Lobov, S.L. Spectrums and frequencies of SLC26A4 and SLC26A5 genes mutation among patients with inherited hearing loss from different regions of Russia / S.L.

Lobov, L.U. Dzhemileva, E.K. Khusnutdinova // European Journal of human genetics. - Nrnberg, Germany 2012. - P.333.

12. Dzhemileva, L.U. Frequencies of SLC26A4 and SLC26A5 genes mutation among patients with inherited hearing loss from different regions of Russia / L.U.

Dzhemileva, S.L. Lobov, E.K. Khusnutdinova // Congress of the European Academy of Paediatric Societies (EAPS 2012) – 2012. – Istanbul, Turkey – Р. 345.

13. Джемилева, Л.У. Молекулярно-генетический анализ наследственной несиндромальной сенсоневральной тугоухости в различных регионах России / Л.У. Джемилева, С.Л. Лобов, А.С. Мукминов, Э.К. Хуснутдинова // V Всероссийская конференция с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт - основа профилактической медицины в век нанотехнологий»: Материалы конференции. – Санкт-Петербург. – 2012. С.40.

14. Лобов, С.Л. Анализ спектра и частоты мутаций и полиморфных вариантов в генах SLC26A4 и SLC26A5 у больных с наследственными нарушениями слуха из республики Башкортостан / С.Л. Лобов, Л.У. Джемилева, Э.К. Хуснутдинова // Актуальные проблемы генетики человека, животных растений и микроорганизмов: Материалы Всероссийской школы-конференции молодых ученых. – Уфа. – 2012. – С.89.

15. Лобов, С.Л. Анализ частоты гетерозиготного носительства мутации c.-53 2AG в гене SLC26A5 в популяциях Евразии / С.Л. Лобов, Л.У. Джемилева, А.Н. Барашков, О.Л. Посух, Э.К. Хуснутдинова // Биомика. –2012. – Т.3 - №1. С.69-71.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ТЕКСТЕ Ген 12 S субъединицы рРНК 12SrRNA Enlarged vestibular aqueduct (расширенный водопровод преддверия) EVA Gap junction 2 (ген коннексина 26) GJB Gap junction B6 (ген коннексина 30) GJB Митохондриальная ДНК mtDNA Ген миозина VIIA MYO7A Синдром Пендреда PS Solute carrier family 26, member 4 (ген пендрина) SLC26A Solute carrier family 26, member 5 (ген престина) SLC26A Single Strand Conformation Polymorphism (анализ конформационных SSCP полиморфизмов одноцепочечных фрагментов ДНК) tRNASer(UCN) Ген митохондриальной ДНК, кодирующий транспортную РНК серина Аутосомно-доминантная форма заболевания АД Аутосомно-рецессивная форма заболевания АР Всемирная организация здравоохранения ВОЗ Волго-Уральский регион.

ВУР Компьютерная томография КТ Медико-генетическая консультация МГК Магнитно-резонансная томография МРТ Несиндромальная сенсоневральная тугоухость/глухота НСНТ Пар нуклеотидов п.н.

Полиакриамидный гель ПААГ Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов ПДРФ Полимеразная цепная реакция ПЦР Республика Башкортостан РБ

 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.