Генетический контроль устойчивости образцов d-геномной группы рода aegilops l. к листовым болезням (листовая ржавчина, септориоз, темно-бурая листовая пятнистость)
На правах рукописи
КОЛЕСОВА Мария Анатольевна ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ УСТОЙЧИВОСТИ ОБРАЗЦОВ D-ГЕНОМНОЙ ГРУППЫ РОДА AEGILOPS L. К ЛИСТОВЫМ БОЛЕЗНЯМ (ЛИСТОВАЯ РЖАВЧИНА, СЕПТОРИОЗ, ТЕМНО-БУРАЯ ЛИСТОВАЯ ПЯТНИСТОСТЬ) Специальности: 03.00.15 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Санкт-Петербург - 2007 Диссертационная работа выполнена в отделе иммунитета Государственного научного центра Российской Федерации Всероссийском научно-исследовательском институте растениеводства им.
Н.И. Вавилова в 2003 – 2006 гг.
Научные руководители: кандидат биологических наук Тырышкин Лев Геннадьевич кандидат сельскохозяйственных наук Чикида Надежда Николаевна
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Пыженков Владимир Ильич доктор биологических наук Кутузова Софья Николаевна Ведущее учреждение: Институт биохимии и генетики УНЦ РАН
Защита диссертации состоится «27» апреля 2007 г. в 14 часов на заседании Диссертацион ного совета Д 006.041.01 при Государственном научном центре Российской Федерации Всерос сийском научно-исследовательском институте растениеводства им. Н.И. Вавилова по адресу:
190000, Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 44;
факс (812) 571-87-28.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНЦ РФ Всероссийского научно исследовательского института растениеводства им. Н.И. Вавилова.
Автореферат разослан «23» марта 2007 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор Э.А. ГОНЧАРОВА ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТКА РАБОТЫ Актуальность темы. Один из важнейших факторов, снижающий урожайность и ка чество зерна мягкой пшеницы Triticum aestivum L. – поражение посевов культуры гриб ными болезнями, в том числе листовой ржавчиной, септориозом, темно-бурой листовой пятнистостью и обыкновенной корневой гнилью. Так, ежегодные потери урожая пшени цы от поражения листовой ржавчиной в нашей стране достигают 4,5% (Чумаков, 1964;
Пруцков, 1970), в эпифитотийные годы потери возрастают до 50-70% (Русаков, 1938;
Степанов, Чумаков, 1960);
потери от септориоза могут достигать 50% (Eyal, 1981;
Ba badoost, Herbert, 1984), от темно-бурой листовой пятнистости в эпифитотийные годы 30 100% (Villareal et al., 1985;
Hetzler, 1992);
ежегодные потери урожая зерна пшеницы от обыкновенной корневой гнили составляют более 10-20% (Хасанов, 1992). Наиболее эко номически эффективным и экологически безопасным способом защиты пшеницы от грибных болезней является выращивание устойчивых сортов (Рассел, 1982). Создание та кого рода сортов на первом этапе включает поиск доноров новых эффективных генов ус тойчивости.
Коллекция мягкой пшеницы Всероссийского института растениеводства им. Н.И.
Вавилова бедна по эффективным генам устойчивости к вышеперечисленным болезням (Тырышкин, 2002;
Tyryshkin, Tyryshkina, 2003;
Тырышкин, Ершова, 2004;
Тырышкин, 2006а). В связи с этим актуальной задачей является расширение генетического разнообра зия T. aestivum по устойчивости к болезням за счет интрогрессивной гибридизации, ин дукции сомаклональной изменчивости, прямого переноса генов устойчивости с помощью методов генной инженерии. Для интрогрессивной гибридизации особый интерес пред ставляют виды D-геномной группы рода Aegilops L. (Наврузбеков, 1990;
Cox et. al., 1994), благодаря их относительно легкой скрещиваемости с T. aestivum и полной гомологии ге номов D этих видов и мягкой пшеницы (Конарев, 1980;
Gill, Raupp, 1987).
При изучении коллекции эгилопсов ВИР ранее были выделены формы, устойчивые к листовой ржавчине (Михайлова, Наврузбеков, 1997;
Mikhailova et al., 2000;
Михайлова, 2003), темно-бурой листовой пятнистости (Тырышкин и др., 1997;
Страхова и др., 2001;
Михайлова и др., 2004), септориозу (Ямалеев и др., 1990б;
Максимов, 1994;
Страхова и др., 2001), обыкновенной корневой гнили (Тырышкин и др., 1997;
Страхова и др., 2001).
Следует отметить, что в этих работах оценена относительно небольшая часть коллекции;
вследствие изменения генотипического состава популяций патогенов (в первую очередь возбудителя листовой ржавчины) образцы, ранее выделенные как устойчивые, могут ока заться восприимчивыми в настоящее время. Кроме того, часто используемый метод оцен ки ювенильной устойчивости при инокуляции отрезков листьев в бензимидазоле может приводить к ошибочной классификации образцов по устойчивости (Тырышкин, Соловье ва, 2001;
Колесова, Тырышкин, 2004;
Тырышкин и др., 2005).
Рациональное использование выделенных устойчивых форм предполагает изуче ние аллельных отношений генов резистентности, поскольку, если разные образцы защи щены идентичными генами, то привлечение каждого из них в интрогрессивную гибриди зацию с целью создания устойчивых генотипов мягкой пшеницы нецелесообразно. Так, например, ген устойчивости к листовой ржавчине Lr39 (Lr41) передан в геном мягкой пшеницы, по крайней мере, 6 раз (Singh et al., 2004). Исследования по генетике устойчи вости Aegilops к вредоносным болезням крайне малочисленны (Singh et al., 2004;
Murphy et al., 2005), а в нашей стране работы такого рода не проводились.
Таким образом, изучение устойчивости образцов видов Aegilops D-геномной группы к вышеперечисленным болезням и генетического контроля признака является актуальной задачей.
Цель работы – выявление генетического разнообразия D-геномной группы рода Ae gilops по эффективной устойчивости к листовой ржавчине (возбудитель Puccinia recondita Rob. ex Desm. f.sp. tritici), септориозу (Stagonospora nodorum Berk.), темно-бурой листовой пятнистости и гельминтоспориозной корневой гнили (Bipolaris sorokiniana Shoem.).
Для достижения данной цели необходимо решить следующие задачи:
– изучить образцы Aegilops D-геномной группы и диплоидных видов, участвовавших в происхождении данной группы, по устойчивости к 4 болезням;
– выделить образцы Aegilops D-геномной группы с высоким уровнем устойчивости к болезням;
– изучить наследование устойчивости к болезням у выделенных форм эгилопсов;
– определить аллельные отношения генов высокоэффективной ювенильной устой чивости у выделенных образцов.
Научная новизна. Впервые изучена большая часть коллекции ВИР эгилопсов D геномной группы, а также диплоидных видов, участвовавших в происхождении данной группы, по устойчивости к листовой ржавчине, септориозу, темно-бурой листовой пятни стости и обыкновенной корневой гнили. Выделены 8 образцов Ae. tauschii Coss. (кк-79, 249, 427, 428, 624, 729, 1959, 3299) и 2 – Ae. cylindrica Host. (кк-1214, 3058), устойчивые в ювенильной стадии к листовой ржавчине;
два образца Ae. tauschii (кк-1804, 3683), устой чивые к темно-бурой листовой пятнистости;
семь образцов Ae. tauschii (кк-285, 296, 1098, 1124, 1202, 1804, 1954) – к септориозу. Выделены 4 образца Ae. cylindrica (кк-34, 173, 473, 1753), обладающие взрослой устойчивостью к ржавчине, и 7 образцов Ae. tauschii (кк-291, 293, 369, 477, 616, 1959, 3299) – к септориозу.
Выделены устойчивые к листовой ржавчине образцы диплоидных видов Ae. aucheri Boiss. (кк-22, 49, 68 и др., всего 18), Ae. caudatа L. (кк-647, 648, 1001 и др., 10), Ae. comosa Sm. in Sibth. et Sm. (кк-642, 2046), Ae. heldreichii (Boiss.) (кк-1600, 1601, 2272 и 2432), Ae.
longissima Schweinf. et Muschl. (к-209), Ae. speltoides Tausch (кк-2, 12, 21 и др., 82), Ae.
uniaristata Vis. (к-1590) и Ae. umbellulata Zhuk. (кк-816, 1461, 1766 и др., 13). К обыкно венной корневой гнили устойчивы 6 образцов Ae. caudatа (кк-647, 1798, 2254, 2255, 2709 и 2777) и 1 – Ae. bicornis (Forssk.) Jaub. et Spach (к-1311).
Впервые изучено наследование ювенильной устойчивости к болезням у образцов Ae.
tauschii и Ae. cylindrica из коллекции ВИР. С помощью гибридологического анализа опре делено, что образцы кк-79, 249, 427, 428, 624, 729, 1959 и 3299 Ae. tauschii и кк-1214, Ae. cylindrica имеют по одному доминантному гену устойчивости к листовой ржавчине.
Методами гибридологического анализа и фитопатологического теста доказано, что эти образцы имеют один и тот же ген устойчивости Lr41. Показано, что микросателлитный маркер Xgdm35, тесно сцепленный у мягкой пшеницы с геном Lr41, не может быть ис пользован для идентификации этого гена у Ae. tauschii.
Определено, что образцы Ae. tauschii кк-285, 296, 1098, 1124, 1202, 1804 и 1954 име ют по одному рецессивному гену ювенильной устойчивости к S. nodorum;
гены устойчи вости всех форм неидентичны.
Образец Ae. tauschii к-3683 защищен двумя рецессивными генами устойчивости про тив сборной популяции возбудителя темно-бурой листовой пятнистости, один из которых экспрессируется и против агрессивного изолята патогена. Образец к-1804 имеет один ре цессивный ген устойчивости, экспрессирующийся как против популяции, так и изолята возбудителя. Гены устойчивости 2-х образцов Ae. tauschii неидентичны.
Практическая ценность результатов исследований.
Выделены образцы Ae. tauschii, которые могут быть вовлечены в интрогрессивную гибридизацию с целью создания форм мягкой пшеницы, устойчивых к темно-бурой лис товой пятнистости и септориозу. Выделены образцы Ae. tauschii и Ae. cylindrica – потен циальные источники новых генов взрослой устойчивости к септориозу и листовой ржав чине, соответственно. Идентифицированы образцы диплоидных видов Aegilops, которые после генетического изучения могут быть рекомендованы в качестве источников устойчи вости к листовой ржавчине и обыкновенной корневой гнили.
Апробация работы. Результаты исследований доложены или представлены на кон ференции, посвященной 85-летию кафедры микологии и альгологии МГУ им. М.В. Ломо носова (Москва, 2004);
конференциях профессорско-преподавательского состава СПбГАУ (Санкт-Петербург, 2004, 2005, 2006);
международной конференции по защите растений «Вопросы менеджмента в защите растений и устойчивом земледелии: исследования, раз витие и информационные системы» (Санкт-Петербург, 2005);
конференции молодых уче ных и аспирантов Северо-Западного научно-методического центра Россельхозакадемии (Санкт-Петербург, 2005);
Всероссийском съезде по защите растений (Санкт-Петербург, 2005);
научной конференции «Стратегия и тактика защиты растений» (Минск, 2006);
международной конференции молодых ботаников (Санкт-Петербург, 2006).
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликова но 13 работ.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 105 страницах, содержит рисунков, 13 таблиц. Состоит из введения, четырех глав, выводов, практических рекомен даций, приложения. Список литературы включает 158 наименований, в том числе 82 на иностранных языках.
УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Экспериментальная работа выполнена в 2003-2006 гг. в отделе иммунитета ГНУ ГНЦ ВНИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова (Санкт-Петербург, Пушкин) и на Даге станской опытной станции ВИР (ДОС ВИР, Дагестан, Дербентский район, с. Вавилово).
Материалом для изучения ювенильной устойчивости к болезням служили 1359 об разцов 17 видов рода Aegilops различного эколого-географического происхождения из коллекции ВНИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова, в том числе:
– 1146 образцов 6 видов эгилопсов D-геномной группы: Ae. tauschii (геном DD), Аe.
r crassa (DDD2D2McrMс, DDMcrMcr), Ae. vavilovii (DDMcrMcrSlSl), Ae. ventricosa (DDNN), Ae.
juvenalis (DDMjMjUU) – секция Vertebrata Zhuk. и Ae. cylindrica (CCDD) – секция Cylin dropyrum (Jaub. et Spach) Zhuk.;
– 213 образцов 11 диплоидных видов: Ae. speltoides (SS), Ae. aucheri (SS), Ae. longis sima (SlSl), Ae. sharonensis (SshSsh), Ae. bicornis (SbSb), Ae. searsii (SsSs) – секция Sitopsis (Jaub. et Spach) Zhuk.;
Ae. caudata (CC) – секция Cylindropyrum;
Ae. heldreichii (MhMh), Ae.
comosa (MM), Ae. uniaristata (NN) – секция Comopyrum (Jaub. et Spach) Zhuk.;
Ae. umbellu lata (UU) – секция Polyeides (Zhuk.) Kihara, геномы которых участвовали в возникновении полиплоидного ряда эгилопсов D-геномной группы.
Устойчивость в стадии флаг-листа к листовым болезням оценили у 721 образца Ae gilops D-геномной группы.
Оценку устойчивости образцов эгилопсов к болезням проводили по стандартным ме тодикам. Для инокуляции использовали сборную популяцию возбудителя листовой ржав чины (смесь изолятов из Дагестана, Северо-Западного региона и Поволжья), сборную по пуляцию B. sorokiniana (смесь изолятов из Дагестана и Северо-Западного региона России), высокоагрессивный штамм «Т» (Тырышкин, Михайлова, 1993), высокоагрессивные изо ляты S. nodorum.
Учет поражения образцов возбудителем листовой ржавчины проводили по общепри нятой шкале, где 0 - отсутствие симптомов, 3 – крупные пустулы без некроза (Mains, Jack son, 1926);
учет поражения возбудителями септориоза, темно-бурой листовой пятнисто сти, обыкновенной корневой гнили – по 7-балльной шкале, где 0 – отсутствие симптомов поражения, 6 – гибель растений (Тырышкин и др., 2004).
Генетический контроль устойчивости образцов эгилопсов к листовой ржавчине изу чали с помощью гибридологического и SSR анализов, а также фитопатологического теста;
к S. nodorum – с помощью гибридологического анализа и фитопатологического теста;
к B.
sorokiniana – с помощью гибридологического анализа.
Для проведения скрещиваний колосья материнских растений кастрировали вручную, опыление проводили с помощью твелл-метода (Мережко и др., 1973).
Соответствие между фактическими и теоретически ожидаемыми расщеплениями по устойчивости в гибридных комбинациях F2 и F3 оценивали по критерию 2 (Доспехов, 1979).
УСТОЙЧИВОСТЬ ОБРАЗЦОВ AEGILOPS D-ГЕНОМНОЙ ГРУППЫ И РОДИТЕЛЬСКИХ ДИПЛОИДНЫХ ВИДОВ К БОЛЕЗНЯМ Устойчивость образцов эгилопсов к листовой ржавчине Среди 463 образцов Ae. tauschii в ювенильной стадии и стадии флаг-листа устойчивы к листовой ржавчине 8 форм: к-79 (Дагестан), кк-249, 427, 428 (Туркмения), кк-624, к- (Азербайджан), к-1959 (Иран), к-3299 (Турция). Из 491 изученного образца Ae. cylindrica устойчивы к болезни в стадии флаг-листа 6 форм: к-1214 (Армения), к-3058 (Украина), кк 183, 473 (Азербайджан), к-34 (Туркмения), к-1753 (Узбекистан). Образцы к-1214 и к- устойчивы к листовой ржавчине также и в ювенильной стадии.
Все изученные образцы видов Ae. crassa, Ae. vavilovii, Ae. juvenalis и Ae. ventricosa восприимчивы к листовой ржавчине в ювенильной стадии и стадии флаг-листа.
Все образцы диплоидных видов Ae. bicornis, Ae. searsii и Ae. sharonensis восприим чивы к листовой ржавчине в ювенильной стадии. Из 7-ми образцов Ae. longissima выделен один устойчивый к P. recondita (к-209, Израиль). Все 18 образцов Ae. aucheri устойчивы к болезни. Из 85 образцов Ae. speltoides восприимчивы к сборной популяции P. recondita в стадии 1-2 листьев 3 формы: к-1596 (Ирак), ии-578037, 0108470. Среди 21 образца Ae. um bellulata устойчивы к листовой ржавчине 13 форм: кк-816, 1461, 2199, 2306 (Азербай джан), кк-2244, 3032, 3287, 3289, 3294, 3296, 3312 (Турция) и кк-1746, 2745 (Иран).
Из 6 образцов Ae. heldreichii устойчивы к болезни кк-1600, 1601, 2432 (Греция), к 2272;
из 5 образцов Ae. uniaristata – к-1590 (Греция). Оба образца Ae. comosa (кк-642, 2046, Турция) устойчивы к листовой ржавчине. Среди 22 образцов вида Ae. caudata ус тойчивы к листовой ржавчине 10 форм: 1598, 2039, 2253 (Турция), кк-1796, 1797, (Греция) и кк-647, 648, 1001, 1277.
В нашей работе среди образцов всех диплоидных видов, за исключением Ae. bicornis, Ae. searsii и Ae. sharonensis, выделены формы, устойчивые к листовой ржавчине. Если предположить, что именно устойчивые формы дали начало аллополиплоидным видам с геномом D, то восприимчивость полиплоидов, скорее всего, связана с супрессией генов устойчивости одного родителя геномом/геномами другого. Известны случаи как супрес сии устойчивости к листовой ржавчине генома Ae. tauschii геномами A и/или B мягкой пшеницы (Assefa, Fehrmann, 2000), так и супрессии устойчивости геномом D Ae. tauschii генома B твердой пшеницы (Bai, Knott, 1992). Вторым возможным объяснением воспри имчивости аллополиплоидных видов эгилопсов D-геномной группы к болезни является возникновение их в результате гибридизации восприимчивых форм родительских видов.
Ювенильную устойчивость к листовой ржавчине образцов эгилопсов D-геномной группы из коллекции ВИР ранее изучали неоднократно (Михайлова, Наврузбеков, 1997;
Mikhailova et al., 2000;
Страхова и др., 2001;
Михайлова, 2003). Наши данные существен ным образом отличаются от полученных в предыдущих исследованиях. Так, например, мы изучили устойчивость 463 образцов Ae. tauschii и идентифицировали только 8 форм, вы сокоустойчивых к болезни;
по данным Л.А. Михайловой (2003) из 360 изученных образ цов устойчивы 65. Различия в результатах оценки могут объясняться следующими причи нами:
1. Различиями в методике проведения лабораторных экспериментов. В нашей работе ювенильную устойчивость изучали при инокуляции интактных растений, тогда как в пре дыдущих работах авторы использовали метод, при котором инокулируют возбудителем отрезки листьев в бензимидазоле (Михайлова, Квитко, 1970;
Михайлова, Афанасенко, 2005). Ранее выявлена индукция устойчивости к листовой ржавчине под действием данно го химического вещества у ячменя (Тырышкин, Соловьева, 2001), эгилопсов (Колесова, Тырышкин, 2004) и пшеницы (Тырышкин и др., 2005).
2. Различиями в генетической структуре популяций P. recondita, использованных для заражения образцов в нашей работе и работах других исследователей. Поскольку цель нашей работы – выявление генетического разнообразия образцов Aegilops D-геномной группы по высокоэффективной устойчивости, мы использовали для инокуляции сборную популяцию патогена, представляющую смесь нескольких сборов P. recondita из 3-х гео графически удаленных регионов.
Устойчивость образцов эгилопсов к Stagonospora nodorum К септориозу в ювенильной стадии устойчивы только 7 форм Ae. tauschii: кк-285, 1098, 1124 (Азербайджан), кк-296, 1202 (Армения), к-1804 (Узбекистан), к-1954 (Иран);
причем у этих образцов отмечена устойчивость флаг-листьев и колосьев.
Устойчивы к S. nodorum в стадии флаг-листа только семь образцов Ae. tauschii: кк 291, 293, 369, 477, 616 (Азербайджан), к-1959 (Иран), к-3299 (Турция). В ювенильной ста дии данные образцы поражаются на 6 баллов. Образцы остальных 16 видов Aegilops вос приимчивы к болезни в ювенильной стадии и стадии флаг-листа.
Все полиплоидные виды с геномом D восприимчивы к септориозу, что, скорее всего, связано с восприимчивостью к болезни видов, участвовавших в становлении аллополип лоидов. Редкая частота встречаемости устойчивых форм среди образцов Ae. tauschii (1,5%) указывает на низкую вероятность возникновения полиплоидных видов в результате гибридизации их с устойчивыми к септориозу растениями Ae. tauschii;
если все же устой чивые формы являются родителями каких-либо полиплоидов, очевидно происходит су прессия генов устойчивости Ae. tauschii геномами других диплоидных видов рода Aegilops.
Необходимо отметить, что наши данные отличаются от полученных в предыдущих исследованиях устойчивости к септориозу образцов эгилопсов из коллекции ВИР (Ямале ев и др., 1990б;
Страхова и др., 2001). Так, например, по данным А.М. Ямалеева с соавто рами (1990б) высокоустойчивы к септориозу образцы Ae. speltoides;
по нашим данным все 85 изученных образцов данного вида поражаются на балл 5 (высокая восприимчивость).
Различия в полученных данных могут быть связаны с различиями в методах оценки резистентности. Мы изучали устойчивость к болезни при опрыскивании суспензиями спор возбудителя (конц. 10 млн. спор/мл) интактных растений, в то время как А.М. Ямалеев с соавторами (1990б) инокулировали каплями суспензии (конц. 1 млн. спор/мл) отрезки ли стьев в бензимидазоле. Индукция ювенильной устойчивости к септориозу под действием бензимидазола ранее была выявлена у эгилопсов (Колесова, Тырышкин, 2004) и мягкой пшеницы (Тырышкин и др., 2005). Помимо этого, различия в пораженности образцов мо гут быть обусловлены большей агрессивностью изолятов S. nodorum, используемых для инокуляции растений в нашей работе.
Устойчивость образцов эгилопсов к темно-бурой листовой пятнистости Среди образцов эгилопсов D-геномной группы устойчивы к сборной популяции и штамму «Т» B. sorokiniana в ювенильной стадии только 2 образца Ae. tauschii: к- (Узбекистан) и к-3683 (Иран). Эти же образцы устойчивы к болезни и при заражении флаг-листьев с использованием метода микрокамер (балл поражения 2).
Среди образцов диплоидных видов устойчивых к болезни форм не выявлено. В свя зи с этим, восприимчивость всех образцов аллополиплоидных видов эгилопсов с гено мом D связана, вероятнее всего, с тем, что в их возникновении участвовали восприимчи вые к темно-бурой листовой пятнистости диплоидные виды. Если же в качестве родителя выступала устойчивая к болезни форма Ae. tauschii, то восприимчивость аллополиплои дов может быть связана с супрессией генов устойчивости D генома геномом/геномами второго родителя. Известен пример такой супрессии устойчивости Ae. squarrosa (Ae.
tauschii) к темно-бурой листовой пятнистости в геноме мягкой пшеницы (Dhaliwal et al., 1986).
Таким образом, в нашей работе по изучению эгилопсов из коллекции ВИР выделено всего 2 устойчивых к болезни образца, тогда как во всех ранее известных исследованиях доля устойчивых форм была значительно выше (Тырышкин и др., 1997;
Михайлова и др., 2004). Основной причиной несоответствия в полученных результатах являются различия в методике оценки устойчивости. Мы оценивали устойчивость к темно-бурой листовой пятнистости при инокуляции интактных растений суспензиями конидий B. sorokiniana с концентрацией 50 тысяч спор в миллилитре воды, в то время как другие авторы проводи ли инокуляцию отрезков листьев в бензимидазоле суспензиями с меньшей концентрацией конидий. Индукция устойчивости к данной болезни бензимидазолом ранее показана для ячменя (Тырышкин, Соловьева, 2001) и мягкой пшеницы (Тырышкин и др., 2005). Высо кие концентрации спор патогена ранее уже были предложены для надежной идентифика ции высокоустойчивых форм мягкой пшеницы (Rahiba et al., 2004a;
Rahiba et al., 2004b).
Устойчивость образцов эгилопсов к обыкновенной корневой гнили Изучили ювенильную устойчивость к обыкновенной корневой гнили 1215 образцов 17 видов эгилопсов из коллекции ВИР. Во взрослом состоянии изучено 69 образцов дип лоидных видов Ae. caudata, Ae. bicornis, Ae. longissima и Ae. heldreichii.
Все изученные образцы эгилопсов D-геномной группы восприимчивы к болезни.
Среди образцов диплоидных видов выделено 6 форм Ae. caudata – к-1798 (Греция), кк 2254, 2255, 2709 (Турция), к-647, 2777 и 1 образец Ae. bicornis – к-1311 (Израиль), которые слабо поражались болезнью в ювенильной стадии при выращивании растений в песке, инфицированном конидиями B. sorokiniana, и во взрослом состоянии при искусственном заражении в теплице.
Наши данные отличаются от полученных в предыдущих исследованиях (Тырышкин и др., 1997;
Страхова и др., 2001). Во всех этих работах устойчивость к болезни оценивали при выращивании растений в инфицированном песке, а для заражения использовали один и тот же изолят возбудителя. Однако для выделения высокоустойчивых генотипов мы ис пользовали более высокую инфекционную нагрузку (20 тыс. спор/г). Это, по нашему мне нию, является основной причиной различий в полученных результатах изучения устойчи вости коллекционных образцов к болезни.
ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ УСТОЙЧИВОСТИ ОБРАЗЦОВ AEGILOPS D-ГЕНОМНОЙ ГРУППЫ К БОЛЕЗНЯМ Генетический контроль устойчивости образцов Ae. tauschii и Ae. cylindrica к листовой ржавчине Генетический контроль устойчивости к листовой ржавчине изучали у 8-и образцов Ae. tauschii (кк-79, 249, 427, 428, 624, 729, 1959 и 3299) и 2-х – Ae. cylindrica (к-1214 и к 3058). В F1 10 комбинаций скрещивания этих форм с восприимчивыми гибридные расте ния устойчивы к сборной популяции P. recondita, что указывает на доминантный характер наследования признака у всех образцов.
Расщепление по устойчивости в F2 во всех комбинациях не противоречило теорети чески ожидаемому при контроле признака одним доминантным геном (табл. 1). Для ком бинаций скрещиваний образцов к-624 и к-3299 с восприимчивыми расщепление не проти воречило и теоретически ожидаемому при контроле признака двумя генами – рецессив ным и доминантным (табл. 1).
Соотношение семей F3 во всех гибридных комбинациях с участием Ae. tauschii соот ветствовало теоретически ожидаемому 1R : 2RS : 1S, что подтверждает гипотезу о моно генном контроле признака у 8 образцов Ae. tauschii (табл. 2). В комбинациях скрещиваний к-624 к-414 и к-3299 к-617, у устойчивых компонентов которых на основе анализа F нельзя было исключить наличия 2-х генов устойчивости (рецессивного и доминантного), анализ F3 опроверг эту гипотезу (табл. 2).
Для определения идентичности генов устойчивые образцы внутри видов скрещивали между собой.
В комбинациях скрещиваний устойчивых к ржавчине образцов Ae. tauschii в F2 во всех случаях расщепление по устойчивости отсутствовало, что указывает на идентичность либо тесное сцепление локусов устойчивости 8 образцов.
Таблица 1. Расщепление по устойчивости к сборной популяции P. recondita в F от скрещивания устойчивых образцов Ae. tauschii и Ae. cylindrica с восприимчивыми Комбинация Соотношение фенотипов R : S* Р скрещивания ожидаемое фактическое Ae. tauschii к-79 к-285 3:1 66 : 27 0,81 0,25-0, к-249 к-296 3:1 145 : 56 0,88 0,25-0, к-427 к-296 3:1 136 : 48 0,16 0,50-0, к-428 к-296 3:1 128 : 52 1,45 0,10-0, к-624 к-414 3:1 157 : 45 0,78 0,25-0, 13 : 3 157 : 45 1,65 0,10-0, к-729 к-341 3:1 82 : 35 1,51 0,10-0, к-1959 к-296 3:1 75 : 31 1,01 0,25-0, к-3299 к-617 3:1 110 : 36 0,01 0, 13 : 3 110 : 36 3,34 0,05-0, Ae. cylindrica к-1214 к-596 3:1 52 : 21 0,55 0,25-0, к-3058 к-596 3:1 195 : 72 0,55 0,25-0, Примечание. Здесь и далее: * R – устойчивость, S – восприимчивость.
Таблица 2. Расщепление по устойчивости к сборной популяции P. recondita в F3 от скрещивания устойчивых образцов Ae. tauschii с восприимчивыми Комбинация Соотношение семей 2 Р R : RS : S* скрещивания ожидаемое фактическое к-79 к-285 1: 2 : 1 18 : 48 : 22 1,08 0,50-0, к-249 к-296 1: 2 : 1 28 : 65 : 26 1,13 0,50-0, к-427 к-296 1: 2 : 1 25 : 45 : 19 0,82 0,50-0, к-428 к-296 1: 2 : 1 20 : 55 : 23 1,64 0,25-0, к-624 к-414 1: 2 : 1 15 : 34 : 17 0,18 0,75-0, 7 : 8: 1 15 : 34 : 17 255,1 0, к-729 к-341 1: 2 : 1 23 : 35 : 19 1,04 0,50-0, к-1959 к-296 1: 2 : 1 25 : 45 : 21 0,34 0,75-0, к-3299 к-617 1: 2 : 1 17 : 35 : 20 0,14 0,75-0, 7 : 8: 1 17 : 35 : 20 274,5 0, Примечание. Здесь и далее: *R – нерасщепляющиеся устойчивые, RS – расщепляющиеся по устойчи вости, S – нерасщепляющиеся восприимчивые семьи.
В F2 комбинации к-3058 к-1214 Ae. cylindrica расщепление также отсутствовало, что указывает на идентичность генов устойчивости этих образцов.
Десять образцов Ae. tauschii и Ae. cylindrica, в ювенильной стадии устойчивых к сборной популяции патогена, инокулировали клоном P. recondita, вирулентным к образцу мягкой пшеницы KS90WGRC10 (ген Lr41) (Тырышкин, 2006а). Все образцы поражались данным клоном (тип реакции 3), что свидетельствует о генетическом контроле устойчиво сти у 10 форм эгилопсов геном Lr41. Ранее было показано широкое распространение гена Lr41 в генофонде Ae. tauschii и его присутствие, по крайней мере, у одного образца Ae. cylindrica (Singh, 2004).
Для изучения генетического контроля устойчивости образцов Ae. tauschii к листовой ржавчине мы применили также SSR анализ. Микросателлитный маркер Xgdm35 у мягкой пшеницы тесно сцеплен с геном Lr41 (Singh, 2004). В нашей работе был выявлен поли морфизм по длине продуктов амплификации ДНК, как у устойчивых, так и восприимчи вых форм. Наличие продуктов амплификации у восприимчивых форм, а также отсутствие фрагментов амплификации у 2-х устойчивых образцов (табл. 3) указывает на невозмож ность использования данного маркера для идентификации гена Lr41 у образцов Ae.
tauschii.
Таблица 3. Характеристика образцов Ae. tauschii по устойчивости к листовой ржавчине и длине амплифицированного фрагмента микросателлитного локуса Xgdm Тип реакции на заражение, № по Подвид, инокулюм Длина каталогу Происхождение разновидность фрагмента клон, ВИР популяция вирулентный амплификации к гену Lr 79 Дагестан 0 3 typica 249 Туркмения 0 3 strangulata 427 Туркмения 0 3 meyeri 428 Туркмения 0 3 meyeri 624 Азербайджан 0 3 нет strangulata 729 Азербайджан 0 3 strangulata 1959 Иран 0 3 strangulata 3299 Турция 0 3 нет typica 771 Азербайджан 3 3 strangulata 1099 Азербайджан 3 3 нет strangulata 1218 Грузия 3 3 нет meyeri 1954 Иран 3 3 нет typica 2377 Азербайджан 3 3 нет strangulata 3683 Иран 3 3 нет strangulata 3697 Армения 3 3 typica 3700 Армения 3 3 typica 3708 Турция 3 3 meyeri 4056 Иран 3 3 strangulata Таким образом, при изучении образцов эгилопсов из коллекции ВИР мы идентифи цировали только один доминантный ген высокоэффективной ювенильной устойчивости к листовой ржавчине – Lr41.
Ген Lr41 уже используется в селекционных программах по созданию устойчивых к ржавчине сортов пшеницы и, следовательно, его перенос в геном мягкой пшеницы от вы деленных в данной работе образцов Ae. tauschii и Ae. cylindrica нецелесообразен.
Генетический контроль устойчивости образцов Ae. tauschii к S. nodorum Взаимодействие устойчивых к септориозу в ювенильной стадии образцов Ae. tauschii и изолятов S. nodorum Семь устойчивых к септориозу образцов Ae. tauschii (кк-285, 296, 1098, 1124, 1202, 1804, 1954) инокулировали 7-ю изолятами S. nodorum. Реакция на заражение изолятами не совпадала ни у одного образца Ae. tauschii (табл. 4). Так например, образцы к-1098 и к 1124 различались по устойчивости к 2-м изолятам (МН2 и МН7), образцы к-1098 и к- – к 3-м изолятам (МН1, МН2 и МН3). Различие в баллах поражения указывает на неиден тичность генетического контроля устойчивости у выделенных форм.
Таблица 4. Балл поражения отрезков листьев образцов Ae. tauschii изолятами S. nodorum.
Образец (№ по Изолят каталогу ВИР) МН1 МН2 МН3 МН4 МН5 МН6 МН 285 2 1 1 1 1 5 296 6 6 5 5 3 1 1098 5 2 5 1 1 1 1124 5 6 5 2 1 1 1202 5 6 5 2 1 1 1804 1 6 1 1 1 1 1954 6 6 1 1 2 1 Ленинградка 6 6 6 6 6 6 Гибридологический анализ устойчивости образцов Ae. tauschii к S. nodorum В F1 7 комбинаций скрещиваний устойчивых образцов Ae. tauschii с восприимчивы ми растения сильно поражались S. nodorum (балл поражения 5), что свидетельствует о ре цессивном характере устойчивости. Расщепление по фенотипу в F2 всех комбинаций не противоречит теоретически ожидаемому при контроле признака одним рецессивным ге ном (табл. 5). Поскольку количество восприимчивых растений превосходило количество устойчивых, мы проверяли также гипотезу о возможном контроле устойчивости двумя комплементарными рецессивными генами (соотношение фенотипов 1R : 15S), однако ни для одной комбинации фактическое расщепление не соответствовало теоретическому.
Таблица 5. Расщепление по устойчивости к S. nodorum в F2 от скрещивания устойчивых образцов Ae. tauschii с восприимчивыми Комбинация Соотношение фенотипов R:S P скрещивания ожидаемое фактическое к-285 к-901 1:3 26 : 95 0,78 0,25-0, к-296 к-249 1:3 32 : 109 0,13 0,50-0, к-1098 к-729 1:3 27 : 91 0,27 0,50-0, к-1124 к-341 1:3 32 : 109 1,39 0,10-0, к-1202 к-341 1:3 34 : 123 0,93 0,25-0, к-1804 к-2337 1:3 35 : 135 0,26 0,50-0, к-1954 к-2337 1:3 24 : 93 1,76 0,10-0, Кроме того, можно было бы предположить, что полученное расщепление соответст вует теоретическому 3R : 13S (один доминантный ген устойчивости и один доминантный ген-супрессор).
Соотношение семей в F3 во всех гибридных комбинациях соответствовало теорети чески ожидаемому 1R : 2RS : 1S, что подтверждает гипотезу о моногенном контроле при знака у 7 образцов Ae. tauschii (табл. 6).
Таблица 6. Расщепление по устойчивости к S. nodorum в F3 от скрещивания устойчивых образцов Ae. tauschii с восприимчивыми Комбинация Соотношение семей R : RS : S P скрещивания ожидаемое фактическое к-285 901 1:2:1 26 : 65 : 30 1,03 0,50-0, к-296 к-249 1:2:1 27 : 62 : 33 0,61 0,50-0, к-1098 к-729 1:2:1 32 : 70 : 37 0,37 0,75-0, к-1124 к-341 1:2:1 21 : 46 : 25 0,18 0,75-0, к-1202 к-341 1:2:1 32 : 85 : 40 1,09 0,50-0, к-1804 к-2337 1:2:1 37 : 95 : 34 3,59 0,10-0, к-1954 к-2337 1:2:1 33 : 85 : 39 1,52 0,25-0, Ни в одном случае полученное расщепление не соответствовало теоретически ожи даемому 1R : 8RS : 7S (один доминантный ген устойчивости и один доминантный ген супрессор) (табл. 6).
В F2 от скрещивания устойчивых образцов между собой во всех комбинациях наблю дали расщепление по устойчивости, что подтверждает неидентичность генов резистентно сти у всех выделенных образцов Ae. tauschii. Фактическое расщепление во всех случаях соответствовало теоретически ожидаемому 7R : 9S, что подтверждает гипотезу о наличии у каждого образца одного рецессивного гена устойчивости (табл. 7).
Таблица 7. Расщепление по устойчивости к S. nodorum в F2 от скрещивания устойчивых образцов Ae. tauschii между собой Комбинация Соотношение фенотипов R:S P скрещивания ожидаемое фактическое к-296 к-285 7:9 55 : 91 1,42 0,10-0, к-1098 к-285 7:9 61 : 103 2,86 0,05-0, к-1098 к-296 7:9 65 : 102 1,58 0,10-0, к-1124 к-285 7:9 65 : 98 0,99 0,25-0, к-1124 к-296 7:9 73 : 115 1,84 0,10-0, к-1124 к-1098 7:9 59 : 85 0,44 0,50-0, к-1954 к-1098 7:9 55 : 91 2,15 0,10-0, к-1202 к-285 7:9 75 : 105 0,32 0,50-0, к-1202 к-296 7:9 55 : 105 2,10 0,10-0, к-1202 к-1098 7:9 66 : 98 0,81 0,25-0, к-1202 к-1124 7:9 64 : 105 2,33 0,10-0, к-1804 к-285 7:9 81 : 125 1,64 0,10-0, к-1804 к-296 7:9 65 : 101 1,42 0,10-0, к-1804 к-1098 7:9 55 : 88 1,62 0,10-0, к-1804 к-1124 7:9 60 : 98 2,14 0,10-0, к-1804 к-1202 7:9 65 : 102 1,58 0,10-0, к-1954 к-285 7:9 70 : 104 0,87 0,25-0, к-1954 к-296 7:9 56 : 92 2,10 0,10-0, к-1954 к-1124 7:9 64 : 100 1,49 0,10-0, к-1954 к-1202 7:9 60 : 92 1,13 0,25-0, к-1954 к-1804 7:9 65 : 95 0,63 0,25-0, Таким образом, при изучении генетического разнообразия по устойчивости к S.
nodorum вида Ae. tauschii мы идентифицировали 7 рецессивных генов ювенильной рези стентности.
Генетический контроль устойчивости образцов Ae. tauschii к темно-бурой листовой пятнистости В результате проведенной работы по оценке устойчивости образцов Aegilops D геномной группы к темно-бурой листовой пятнистости выделили 2 образца Ае. tauschii (к 1804 и к-3683). Для определения количества генов, контролирующих устойчивость к бо лезни, эти образцы скрестили с восприимчивыми формами.
Растения F1 к-1804 к-2337 и к-3683 к-2337 восприимчивы при инокуляции ин тактных растений штаммом «Т» и сборной популяцией В. sorokiniana, что свидетельству ет о рецессивном характере устойчивости у обоих образцов.
В F2 к-3683 к-2337 расщепление по устойчивости к сборной популяции (46R : 75S) соответствовало теоретически ожидаемому 7R : 9S (2 = 0,04, P 0,75), что свидетельству ет о возможном контроле признака двумя рецессивными генами. В F2 этой комбинации фактическое расщепление по устойчивости к штамму «T» (35R : 82S) не противоречило ожидаемому при контроле признака одним рецессивным геном (2 = 0,51, 0,25 P 0,50).
При одновременном изучении наследования устойчивости к сборной популяции воз будителя темно-бурой листовой пятнистости и штамму «Т» использовали методику, кото рая позволяет учесть реакцию индивидуального растения F2 на заражение разными иноку люмами (Михайлова, Тырышкин, 1988). Все растения гибридной комбинации к-3683 к 2337, устойчивые к штамму «Т», были устойчивы и к популяции В. sorokiniana, а все вос приимчивые к популяции патогена растения были восприимчивы и к штамму «Т». Факти ческое расщепление (16 растений, устойчивых к обоим инокулюмам : 16 растений, устой чивых к популяции, но восприимчивых к штамму : 45 растений, восприимчивых к обоим инокулюмам) не противоречит гипотезе о наличии у образца к-3683 двух рецессивных ге нов резистентности, экспрессирующихся против популяции патогена;
один из них эффек тивен против штамма «Т» (2 = 0,78, 0,50 P 0,75).
Расщепление в F3 комбинации к-3683 к-2337 по устойчивости к штамму «Т» 39R :
75RS : 42S подтверждает гипотезу о моногенном контроле признака (2 = 0,35, 0,75 P 0,95);
фактическое расщепление по устойчивости к популяции патогена 21R : 30RS : 5S не противоречит гипотезе о дигенном контроле признака (2 =1,28, 0,50 P 0,75).
Фактические расщепления по устойчивости в F2 к-1804 к-2337 к популяции (18R :
63RS) и штамму (23R : 75S) В. sorokiniana согласуются с гипотезой о контроле устойчиво сти одним рецессивным геном к каждому инокулюму (2 = 0,33, 0,50 P 0,75 и 2 =0,12, 0,50 P 0,75, соответственно). При инокуляции отрезков листьев F2 разными инокулю мами наблюдали совпадение реакции индивидуальных растений, т.е. устойчивость образ ца к-1804 к популяции и штамму «Т» В. sorokiniana детерминируется одним и тем же ге ном.
Гипотеза о моногенном рецессивном контроле устойчивости подтверждается анали зом F3 к-1804 к-2337: фактическое расщепление по устойчивости к популяции 18R :
48RS : 22S (2 = 1,09, 0,50 P 0,75), к штамму «Т» – 25R : 65RS : 35S (2 = 1,35, 0,50 P 0,75). Очевидно, ген устойчивости образца к-1804 не может быть идентичен гену устой чивости к-3683, детерминирующему резистентность только к популяции патогена.
Для определения идентичности генов, контролирующих устойчивость к штамму «Т» возбудителя темно-бурой листовой пятнистости образцы к-1804 и к-3683 скрестили меж ду собой.
Растения F1 восприимчивы к штамму «Т», что указывает на неидентичность рецес сивных генов устойчивости 2-х образцов. Анализ гибридов F2 этой комбинации выявил расщепление по устойчивости 56R : 75S, что согласуется с теоретически ожидаемым при 2-х независимых рецессивных генах устойчивости (7R : 9S) (2 = 0,04, P 0,75).
Таким образом, при изучении генетического разнообразия по устойчивости к темно бурой листовой пятнистости вида Ae. tauschii мы идентифицировали 3 гена ювенильной резистентности.
ВЫВОДЫ 1. Образцы видов Ae. ventricosa, Ae. juvenalis, Ae. crassa и Ae. vavilovii из коллекции ВИР восприимчивы к возбудителям темно-бурой листовой пятнистости, септориоза, лис товой ржавчины и обыкновенной корневой гнили;
Ae. cylindrica – к возбудителям септо риоза, темно-бурой листовой пятнистости и обыкновенной корневой гнили.
2. В результате изучения видов D-геномной группы рода Aegilops L. из коллекции ВИР выделены образцы с ювенильной устойчивостью:
– к листовой ржавчине – Ae. tauschii к-79 (Дагестан), кк-249, 427, 428 (Туркмения), кк 624, 729 (Азербайджан), к-1959 (Иран), к-3299 (Турция);
Ae. cylindrica – к-1214 (Армения) и к-3058 (Украина);
– к септориозу – Ae. tauschii кк-285, 1098, 1124 (Азербайджан), кк-296, 1202 (Арме ния), к-1804 (Узбекистан) и к-1954 (Иран);
– к темно-бурой листовой пятнистости – Ae. tauschii к-1804 (Узбекистан) и к- (Иран).
3. Образцы Ae. cylindrica к-34 (Туркмения), кк-173, 473 (Азербайджан), к-1753 (Узбе кистан) обладают взрослой устойчивостью к листовой ржавчине;
Ae. tauschii кк-291, 293, 369, 477, 616 (Азербайджан), к-1959 (Иран) и к-3299 (Турция) – взрослой устойчивостью к септориозу.
4. Образцы видов, геномы которых участвовали в становлении полиплоидного ряда эгилопсов D-геномной группы, восприимчивы к септориозу и темно-бурой листовой пят нистости. К листовой ржавчине устойчивы образцы Ae. aucheri (всего 18) кк-22, 49, 68 и другие;
Ae. caudata (всего 10) кк-647, 648, 1001 и др.;
Ae. comosa: кк-642, 2046 (Турция);
Ae. heldreichii кк-1600, 1601, 2432 (Греция), к-2272;
Ae. longissima – к-209 (Израиль);
Ae.
speltoides (всего 82) кк-2, 12, 21 и др.;
Ae. umbellulata (всего 13) кк-816, 1461 (Азербай джан), 1766 (Иран) и др. и Ae. uniaristata – к-1590 (Греция). К обыкновенной корневой гнили устойчивы образцы Ae. caudatа кк-2254, 2255, 2709 (Турция), к-1798 (Греция), кк 647, 2777 и Ae. bicornis к-1311 (Израиль).
5. Устойчивые к листовой ржавчине в ювенильной стадии образцы Ae. tauschii (кк-79, 249, 427, 428, 624, 729, 1959, 3299) и Ae. cylindrica (кк-1214, 3058) имеют по одному доми нантному гену устойчивости Lr41.
6. Образцы Ae. tauschii кк-285, 1098, 1124, 296, 1202, 1804 и 1954 имеют по одному рецессивному гену устойчивости к септориозу. Гены устойчивости этих образцов неиден тичны.
7. Образец Ae. tauschii к-1804 имеет один рецессивный ген устойчивости к темно бурой листовой пятнистости, образец к-3683 защищен двумя рецессивными генами. Гены устойчивости этих образцов неидентичны.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Для селекции пшеницы на устойчивость к болезням предлагается использовать:
– устойчивые к темно-бурой листовой пятнистости в ювенильной стадии образцы Ae.
tauschii кк-1804 и 3683;
– устойчивые к септориозу в ювенильной стадии образцы Ae. tauschii кк-285, 296, 1098, 1124, 1202, 1804 и 1954.
2. После изучения генетического контроля устойчивости предлагается использовать для селекции пшеницы на иммунитет:
– устойчивые к листовой ржавчине в ювенильной стадии образцы Ae. aucheri (кк-22, 49, 68 и др., 18), Ae. caudatа (кк-647, 648, 1001 и др., всего 10), Ae. comosa (кк-642, 2046), Ae. heldreichii (кк-1600, 1601, 2272 и 2432), Ae. longissima (к-209), Ae. speltoides (кк-2, 12, 21 и др., 82), Ae. umbellulata (кк-816, 1461, 1766 и др., 13) и Ae. uniaristata (к-1590);
– устойчивые к обыкновенной корневой гнили в ювенильной стадии образцы Ae.
caudatа кк-647, 1798, 2254, 2255, 2709, 2777 и Ae. bicornis к-1311;
– устойчивые к листовой ржавчине в стадии флаг-листа образцы Ae. cylindrica кк-34, 183, 473 и 1753;
– устойчивые к септориозу в стадии флаг-листа образцы Ae. tauschii кк-291, 293, 369, 477, 616, 1959 и 3299.
CПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Тырышкин Л.Г., Колесова М.А. Образцы Aegilops tauschii для дифференциации изолятов Stagonospora nodorum // Микология и фитопатология. – 2006. – Т.40. – Вып.4.
– С.344-345.
2. Колесова М.А. Устойчивость коллекционных образцов рода Aegilops L. к болезням // Материалы конференции-школы молодых ученых и аспирантов Северо-Западного науч но-методического центра Россельхозакадемии. – СПб. – 2006. – С.24.
3. Колесова М.А., Тырышкин Л.Г. Влияние бензимидазола на ювенильную устойчи вость эгилопсов к листовым болезням // Материалы юбилейной конференции посвящен ной 85-летию кафедры микологии и альгологии МГУ им. М.В. Ломоносова «Микология и Альгология-2004». – М. – 2004. – С.75.
4. Колесова М.А., Тырышкин Л.Г., Чикида Н.Н. Устойчивость коллекционных об разцов Aegilops tauschii Coss. к грибным листовым болезням // Тезисы докладов III съезда ВОГиС. – М. – 2004. – Т.1. – С.198.
5. Колесова М.А., Тырышкин Л.Г., Чикида Н.Н. Устойчивость образцов Aegilops tauschii Coss. к темно-бурой листовой пятнистости и обыкновенной корневой гнили // Ма териалы VIII молодежной конференции ботаников в Санкт-Петербурге. – СПб. – 2004. – С.67.
6. Колесова М.А., Тырышкин Л.Г., Чикида Н.Н. Ювенильная устойчивость образцов Aegilops vavilovii (Zhuk.) Chennav к болезням // Материалы межвузовской конференции молодых ученых 13-16 апреля 2004. – СПб. – 2004. – Вып.4. – С.19.
7. Колесова М.А., Тырышкин Л.Г., Чикида Н.Н. Ювенильная устойчивость образцов рода Aegilops L. к бурой ржавчине // Материалы I (IX) Международной конференции мо лодых ботаников в Санкт-Петербурге. – СПб. – 2006. – С.292.
8. Колесова М.А., Тырышкин Л.Г., Чикида Н.Н. Ювенильная устойчивость образцов Aegilops aucheri и A. sharonensis Eig к листовым болезням // Материалы международной конференции посвященной 75-летию Биологического факультета МГУ им. М.В. Ло моносова «Грибы и водоросли в биоценозах-2006». – М. – 2006. – С.78-79.
9. Тырышкин Л.Г., Колесова М.А., Гашимов М.Э. Взрослая устойчивость образцов Aegilops L. D-геномной группы к листовым болезням // Материалы научной конфе ренции «Стратегия и тактика защиты растений». – Минск. – 2006. – С.333-335.
10. Тырышкин Л.Г., Колесова М.А., Гашимов М.Э., Белоусова Н.Х., Чикида Н.Н., Ан филова Н.А., Алпатьева Н.В. Устойчивость образцов рода Aegilops L и Triticum L. к бо лезням // Материалы второго Всероссийского съезда по защите растений «Фитосани тарное оздоровление экосистем». – СПб. – 2005. – Т.1 – С.568-570.
11. Тырышкин Л.Г., Колесова М.А., Чикида Н.Н. Aegilops tauschii Coss. Каталог миро вой коллекции ВИР. – СПб. – Вып.763. – 2004. – 15с.
12. Kolesova M.A., Tyryshkin L.G., Chikida N.N. Juvenile resistance of Aegilops umbellu lata Zhuk. collection samples to fungal foliar diseases // Abstracts of the crop protection confer ence «Management aspects of crop protection and sustainable agriculture: research, development and information systems». – St. Petersburg. – 2005. – P.49-51.
13. Tyryshkin L.G., Kolesova M.A., Chikida N.N., Ibragimova M.H. Juvenile resistance to diseases in Aegilops tauschii Coss. samples // Cereal Research Communications. – 2006. – V.34.
– №2-3. – P. 1067-1072.