Оглы генетические и биологические аспекты гибридизации сельскохозяйственных и диких видов животных

На правах рукописи

НАСИБОВ Шаиг Насир оглы

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ

ГИБРИДИЗАЦИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ И

ДИКИХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ

Специальность: 03.02.07 – Генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Дубровицы - 2010

2

Работа выполнена в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики животных Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук.

доктор биологических наук,

Научный консультант:

член-корреспондент РАСХН Багиров Вугар Алинияз оглы доктор биологических наук, профессор,

Официальные оппоненты:

Букаров Нурмагомед Гаджикулиевич доктор биологических наук, профессор, Ерохин Анатолий Сергеевич доктор биологических наук, профессор, Лебедев Виктор Иванович Ведущее учреждение: ФГОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина.

Защита состоится «28» декабря 2010 года, в 10 часов, на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.013.03 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Россельхозакадемии.

Адрес института: 142132 Московская область, Подольский район, пос. Дубровицы, ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии, т/факс (4967) 65-11-

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГНУ ВИЖ.

Автореферат разослан «_» _ 2010 года.

Ученый секретарь совета И.В. Гусев 1. ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы. Прогресс в животноводстве возможен при нали чии в популяции генетического разнообразия, существования выдающихся генотипов и адаптированных к конкретным условиям животных. Однако его результативность определяется не только этими факторами, но и спросом на продукцию, который не всегда может быть удовлетворен на основе имеюще гося генетического материала. В этой связи в животноводстве стоит задача рационального использования генофонда, а также поиска и создания новых источников животноводческой продукции (Багиров В.А. и др. 2009).

Одним из путей рационального ведения животноводства связан с во влечением в сельскохозяйственное производство ресурсов дикой фауны, в том числе, с использованием межвидовой гибридизации. Отдаленная гибри дизация используется при создании новых селекционных форм сельскохо зяйственных животных, характеризующихся выраженным гетерозисом, соче тающих в себе ценные свойства исходных видов и для реконструкции и вос становления исчезающих видов. Гибридизация является эффективным мето дом, позволяющим обогатить генофонд домашних животных путем внесения в него ценных генетических задатков, присущих диким животным (Эрнст Л.К. и др. 2004., Иолчиев Б.С. и др. 2005, Шайдуллин И.Н., Бин Н.Н. 1991).

Доминирующее значение имеет метод активного сохранения генофон да путем использования в селекционном процессе. Создание новых высоко продуктивных форм, отвечающих требованиям времени, несущих в себе на следственные задатки исходных пород, позволяет на основе генетических механизмов сохранять и совершенствовать генные комплексы бесконечно долго (Фисинин В.И., 2005).

Современные достижения генетики обеспечивают эффективность ин тродукции высокоценного потенциала дикой фауны в селекционный процесс.

Криоконсервация эпидидимального и тестикулярного семени является на дежным методом сохранения генетических ресурсов животных, а также соз дания новых селекционных форм (Эрнст Л.К. 2004, Кленовицкий П.М., Баги ров В.А. 2004).

Целью диссертационной работы является изучение генетических и биологических аспектов создания новых форм с использованием отдаленной гибридизации сельскохозяйственных и диких видов животных на основе раз работки и усовершенствования методов сохранения и рационального исполь зования генетического биоразнообразия.

Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи:

-. унифицировать метод криоконсервации генетического материала, адаптировав его для сохранения биоразнообразия животного мира;

- изучить биологические особенности семени домашних и диких видов животных, полученного разными методами: эякуляцией, электроэякуляцией и извлечением из эпидидимиса до и после глубокого замораживания;

- создать криобанк генетического материала редких и исчезающих видов животных;

-. получить новые формы животных методом отдаленной гибридизации крупного рогатого скота и яка, домашней козы и сибирского козерога, домашней овцы и архара, домашней овцы и снежного барана с использованием замороженно-оттаянного эпидидимального семени;

-.изучить особенности периода плодоношения у исходных видов и гибридов;

- провести мониторинг генетических аномалий у исходных видов и гибридов;

- выполнить сравнительный цитогенетический анализ животных разных видов и их гибридов с использованием прикладных компьютерных программ;

- провести молекулярно-генетический анализ животных разных видов и их гибридов с использованием генетических маркеров;

- изучить хозяйственно-полезные признаки гибридов.

Научная новизна. Установлено, что в процессе глубокого замораживания и оттаивания эпидидимального семени яка, сибирского козерога, архара и снежного барана сохраняется его оплодотворяющая способность и генетическая полноценность. Впервые с использованием замороженно-оттаянного эпидидимального семени получены межвидовые гибриды крупного рогатого скота и яка, домашней козы и сибирского козерога, домашней овцы и архара, домашней овцы и снежного барана.

Впервые дана сравнительная цитогенетическая и молекулярно-генетическая характеристика изучаемых видов и их гибридов. Установлены различия в продолжительности эмбрионального периода онтогенеза у исходных видов и гибридов.

Практическая значимость. Унифицирован метод криоконсервации генетического материала от диких видов и сельскохозяйственных животных.

Создан криобанк генетического материала архара памирской популяции, снежного барана якутской популяции, сибирского козерога алтайской попу ляции, яка памирской, алтайской популяций и зубра алтайской популяции.

Получены межвидовые гибриды, которые являются основой создания новых высокоэффективных селекционных форм сельскохозяйственных животных.

Проведен генетический мониторинг изучаемых животных на носительство наследственных аномалий. Адаптирован метод криоконсервации эпидиди мального семени архара, снежного барана, сибирского козерога, яка и зубра.

Модифицирован метод искусственного осеменения овец и коз как элемент рационального использования генетических ресурсов.

Положения, выносимые на защиту:

- унифицированный и адаптированный метод глубокого замораживания эпидидимального семени архара, снежного барана, сибирского козерога, яка и зубра, позволяющий сохранять его биологическую полноценность и оплодотворяющую способность, как метод сохранения и рационального использования генетических ресурсов диких видов животных;

- криобанк генетического материала диких животных - архара, снежного барана, сибирского козерога, яка, и зубра и домашних овец;

- новые формы животных, полученные с использованием межвидовой гибридизации крупного рогатого скота и яка, домашней козы и сибирского козерога, домашней овцы и архара, домашней овцы и снежного барана;

- технология рационального использования генетических ресурсов овец и коз на основе модифицированного метода искусственного осеменения и внутритрубного осеменения микродозами семени;

- молекулярно-генетические и цитогенетические профили гибридов как критерии отбора генетически полноценных особей при сохранении генетических ресурсов животных;

- биологические и хозяйственно-полезные особенности гибридов.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ВНИИ животноводства (2003 2010гг.), на 15 научных конференциях (Москва 2004, 2006, Санкт-Петербург 2004, 2007, 2009, Дубровицы 2003-2009, Боровск 2005, Гаага 2005, Рим 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 31 научная работа, из них 8 в журналах, рекомендуемых ВАК Российской Федерации и монографии.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований и обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы. Материал изложен на страницах компьютерного текста, содержит 25 таблиц и 32 рисунков. Список литературы включает 284 источника, в т.ч. 156 - на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Работа выполнена в 2003-2010 гг. в ГНУ Всероссийском научно исследовательском институте животноводства, в экспериментальном хозяй стве ФГУП «Кленово-Чегодаево». Для получения генетического материала проведены экспедиции в Черекский район Кабардино-Балкарской Республи ки, Горно-Бадахшанскую Автономную область Таджикской Республики, п.

Кош-агач Алтайской Республики, Оймяконский район Республики Саха (Якутия).

Исследования проводили по схеме, представленной на рисунке 1.

Эксперименты проводили на следующих видах животных: зубр (Bos bi son) алтайской популяции, як (Bos mutus) памирской, кабардино-балкарской и алтайской популяции, архар (Ovis ammon) памирской популяции, снежный баран (Ovis nivicola lydekkeri) якутской популяции, козерог (Capra sibirica si birica) алтайской популяции.

Семя от домашних баранов брали традиционным методом, с помощью искусственной вагины (Милованов В.К., 1962), от баранов диких видов мето дом электроэякуляции или извлечением сперматозоидов из эпидидимиса.

Генетические аспекты сохранения диких видов животных и перспективы использование биологических ресурсов Унификация и адаптация метода криоконсервации Методы сохранения и рационального использования эпидидимального семени животных генетических ресурсов животных Оценка биологической полноценности сперматозоидов Морфо-физиологический оценка Комплексная оценка сперматозоидов разных Характеристика биологической и сперматозоидов видов животных с использованием полноценности сперматозоидов разных видов животных прикладных компьютерных технологий до и после криоконсервации Создание криобанка генетического материала животных Получения межвидовых гибридов с использование генетических ресурсов диких видов животных молекулярно-генетическая характе- Сравнительный Изучение хозяйственно ристика геномов исследуемых видов цитогенетический анализ исходных биологических особенностей меж и их гибридов видов и гибридов видовых гибридов Рисунок 1. Схема исследований В ряде случаев для взятия семени от особо ценных козлов производителей, которые не могут давать семя на вагину, рекомендуется ис пользование электроэякулятора (производитель: Minitub, Германия). Подсчи тывали концентрацию сперматозоидов с помощью компьютерных приклад ных программ. Замораживание семени проводили на охлажденной в жидком азоте фторопластовой пластине (Ющенко Н.П., 1968). Оттаивание семени осуществляли сухим методом с помощью оттаивателя, предложенного Коно новым В.П. и Нарижным А.Г. (1986). Морфологическую сохранность акро сом, изучали с использованием видеокамеры и компьютерной программы Image Scope (г. Москва, ООО «Системы для микроскопии и анализа»).

Для проведения цитогенетических исследований, тонких микроскопи ческих исследований использовали микроскоп, оборудованный цифровой камерой и программным обеспечением Image Scope (Производитель ООО «Системы для микроскопии и анализа», г. Москва).

Цитогенетические и молекулярно-генетические исследования проводили на гибридных потомках и исходных видах. Материалом для цитогенетического анализа служили лимфоциты периферической крови, полученные стерильно из яремной вены. В качестве митогена использовали коноковалин А (КоА производства фирмы ПанЭко, Москва).

Для молекулярно-генетического анализа генотипа изучали образцы ДНК у яков разных популяций. Для сравнения частоты встречаемости микро сателлитных маркеров и оценки вариабельности в исследуемых популяциях использовали ДНК.

ДНК выделяли из образцов ткани. Анализ ДНК и постановку полиме разной цепной реакции (ПЦР) выполняли по стандартным методикам.

Выбор микросателлитных локусов осуществляли в соответствии с ре комендациями ISAG. Электрофоретическое разделение фрагментов ДНК ме тодом капиллярного электрофореза проводили на приборе ABI 3130xl Genetic Analyzer. Для идентификации аллелей исследованных микросателлитных ло кусов использовали программу ABI GeneMapper v. 4.0.

Статистическую обработку данных проводили по стандартным мето дикам (10-12), применяя программное обеспечение MS Excel, MSA_WIN v.

2.65, GenAlEx 6.0, Phylip.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Сохранение биоразнообразия животного мира методом криоконсервации генетического материала Унификация и адаптация метода глубокого замораживания эпидидимального семени диких видов животных состояла в создании универсальной криопротективной среды, пригодной для эпидидимального семени, полученного от самцов разных видов.

В результате этих исследований была предложена унифицированная среда с рН 7,0 следующего состава: лактоза - 2,0 г;

лимонная кислота – 1, г;

Трис – 2,5 г;

глицерин – 4,0 мл;

желток куриного яйца – 10 мл;

вода бидистиллированная – 100 мл.

Результаты применения унифицированной среды показали, что она обеспечивает оптимальные условия сохранения биологической полноценности заморожено-оттаянного эпидидимального семени разных видов животных.

3.2. Методы получения семени для сохранения генетических ресурсов С целью создания генетического криобанка нами была дана сравнительная характеристика семени баранов, полученного разными методами. Результаты сравнительного анализа приведены в рисунке 2.

Подвижность после после после оттаивания Сохранность семени разбавления эквилибрации акросом свежевзятого эякулированное электроэякули-рованное эпидиди-мальное Рис. 2. Характеристика семени, полученного разными методами Результаты, приведенные на рисунке 2 показывают, что подвижность эпидидимального семени сразу после получения существенно ниже, чем при других методах взятия. Это объясняется высокой концентрацией сперматозоидов в эпидидимальном семени, не разбавленном секретами добавочных половых желез и накоплением молочной кислоты, которая подавляет подвижность сперматозоидов. После разбавление и эквилибрации семени снимается кислотная инактивация подвижности.

Семя, полученное разными способами по другим биологическим характеристикам не имеет существенных отличий, это указывает на то, что биологическая полноценность семени не зависит от метода его получения.

Проведенные исследования показали, что полученное (постмортально или прижизненно) эпидидимальное семя не уступает эякулированному по биологическим показателям до и после криоконсервации. Этот метод является надежным для сохранения генетических ресурсов редких и исчезающих видов животных.

В наших исследованиях с целью рационального использования и со хранения генетического биоразнообразия одновременно подвергали глубо кому замораживанию сперматозоиды из тела, головки эпидидимиса и тести кулярные, что открывает новые перспективы в направлении сохранения и рационального использования генетических ресурсов редких и исчезающих видов животных.

3.3. Комплексная оценка сперматозоидов с использованием прикладных компьютерных технологий С целью повышения достоверности комплексной оценки качества се мени и ускорения проведения анализа, у разных видов животных нами было адаптировано программное обеспечение Зоосперм 1 фирмы Биотест (Санкт Петербург). Данная программа была использована нами при создании уни кального криобанка семени редких и исчезающих видов животных.

Рис. 3. Оценка и классификация сперматозоидов по подвижности.

Данное програмное обеспечение определяет траектории, скорость продвижении, по средней траектории, скорость движения сперматозоида вдоль прямой линии, % прямолинейного движения и др., а также следующих морфометрических показателей: площадь, периметр, фактор круга, округлость.

По результатам обработанных данных программное обеспечение про водит автоматическую классификацию сперматозоидов и формирует базу данных по оценке резервируемого криобанка семени.

3.4. Сохранение генетических ресурсов животного мира 3.4.1. Создание криобанка эпидидимального семени животных Нами во Всероссийском НИИ животноводства создана уникальная криоколлекция семени редких и исчезающих видов животных. Оригиналь ность данной работы состоит в том, что впервые в создании криобанка семе ни использовали эпидидимальные сперматозоиды не только от хвоста эпиди димиса, а также от головки и тела эпидидимиса и тестикулярные спермато зоиды для дальнейшей интрацитоплазматической инъекции.

Сохранение генетических ресурсов зубра алтайской популяции Несмотря на то, что в последние десятилетия численность зубра посто янно увеличивается по международному статусу зубр все еще относится к категории вида, находящегося в состоянии угрозы исчезновения - «EN» и внесен в Красную книгу.

В нашу задачу входило получение и создание криобанка генетического материала зубра алтайской популяции. Семя было получено прижизненно по методу односторонней кастрации. С этой целью была организована экспедиция в Республику Алтай, в результате которой получено эпидидимальное семя зубра. Семя на месте было подвергнуто криоконсервации, доставлено в ВИЖ и заложено в криобанк.

Количество и оценочные характеристики семени зубра алтайской популяции, заложенного в криобанке приведены в таблице 1.

Таблица Создание криобанка семени зубра алтайской популяции Первая Вторая Показатели фракция фракция Объем чистого эпидидимального семени, мл 7 Объем одной дозы, мл 0,25 0, Общее количество сперматозоидов, млрд. 33,5 Доля фракций в общей сумме эпидидимальных 63 сперматозоидов, % Количества доз замороженного семени 180 Концентрация сперматозоидов после разбавления, 2,9 1, млрд.

Подвижность свежеполученных сперматозоидов 60+1,8 70+2, Подвижность сперматозоидов после разбавления 84+1,4 80+0, Подвижность сперматозоидов после эквилибрации 73+0,9 71+1, Подвижность семени после замораживание 30+2,3 25+1, оттаивания Сохранность акросом, % 64+1,8 57+3, Установлено, что после замораживания-оттаивания сперматозоиды зубра сохраняют свою биологическую полноценность. Получение и создание банка криоконсервированного семени не только надежный метод сохранения генофонда этого вида, но и открывает перспективы для создания в мясном скотоводстве новых селекционных форм с более высоким генетическим по тенциалом.

Сохранение генетических ресурсов памирской и алтайской популяциий яка С целью получения и создания криобанка генетического материала яка алтайской и памирской популяции были организованы экспедиции в Респуб лику Алтай и Горно-Бадахшанскую Автономную область Таджикской Рес публики, в результате которых получено эпидидимальное семя яков. Семя было подвергнуто криоконсервации и заложено в криобанк ВНИИ животно водства. Характеристики семени яков приведены в таблице 2.

Таблица Создание криобанка семени яка памирской и алтайской популяции Первая Вторая Показатели фракция фракция Объем чистого эпидидимального семени, мл 7 Объем одной дозы, мл 0,25 0, Общее количество сперматозоидов, млрд. 23,8 16, Доля фракций в общей сумме сперматозоидов, % 63,2 36, Количество доз замороженного семени 335 Концентрация сперматозоидов после разбавления, млрд. 3,5 1, Подвижность свежеполученных сперматозоидов, % 65+2,1 62+1, Подвижность сперматозоидов после разбавления, % 90+2,4 85+1, Подвижность сперматозоидов после эквилибрации,% 83+2,2 78+2, Подвижность семени после оттаивания, % 35+0,8 32+1, Сохранность акросом, после оттаивания, % 64+2,4 61+3, Показано, что замороженное семя яка сохраняет биологическую пол ноценность и пригодно для плодотворного осеменения самок и может эффек тивно использоваться для улучшения племенных качеств одомашненных яков и отдаленной гибридизации.

Сохранение генетических ресурсов сибирского козерога алтайской популяции Козероги самый крупный представитель рода Capra. С целью получение и создание криобанка генетического материала сибирского козерога алтайской популяции была организована экспедиция в Республику Алтай пос. Кош-Агач.

Таблица Создание криобанка семени сибирского козерога алтайской популяции Первая Вторая Показатели фракция фракция Объем чистого эпидидимального семени, мл 5 Объем одной дозы, мл 0,25 0, Общее количество сперматозоидов, млрд. 41,5 18, Доля фракций в общей сумме сперматозоидов, % 69,3 30, Количества доз замороженного семени 245 Концентрация сперматозоидов после разбавления, млрд. 8,3 2, Подвижность свежеполученных сперматозоидов, % 60+2,4 55+2, Подвижность сперматозоидов после разбавления, % 92+2,1 84+3, Подвижность сперматозоидов после эквилибрации, % 87+1,5 81+2, Подвижность семени после оттаивания, % 55+1,9 43+1, Сохранность акросом, после оттаивания, % 74+1,4 67+2, В результате которой получено эпидидимальное семя и создан крио банк. Количество и характеристики семени сибирского козерога алтайской, заложенного в криобанке приведены в таблице 3.

Результаты исследования показали, что эпидидимальное семя козерога обладает высокой криоустойчивостью. Подвижность сперматозоидов после замораживание-оттаивания по первой фракции составила 55%, а во второй 43%. Показано, что замороженное семя козерога сохраняет биологическую полноценность и пригодно для плодотворного осеменения самок.

Сохранение генетических ресурсов снежного барана якутской популяции Снежный баран якутской популяции Ovis nivicola lydekkeri занесен в Красную книгу и охраняется в рамках различных международных программ.

Была организована экспедиция в Оймяконский район Республики Саха (Якутия) для получения семени и создание криобанка генетического мате риала для сохранения этого вида.

Оценка полученного и заложенного в криобанке семени, приведены в таблице 4.

Таблица Создание криобанка семени снежного барана якутской популяции Первая Вторая Показатели фракция фракция Объем чистого эпидидимального семени, мл 3 Объем одной дозы, мл 0,25 0, Общее количество сперматозоидов, млрд. 23,5 12, Доля фракций в общей сумме сперматозоидов, % 66 Количества доз замороженного семени 273 Концентрация сперматозоидов после разбавления, млрд. 7,8 2, Подвижность свежеполученных сперматозоидов, % 65+1,2 69+2, Подвижность сперматозоидов после разбавления, % 90+1,8 87+1, Подвижность сперматозоидов после эквилибрации, % 86+2,8 83+3, Подвижность семени после оттаивания, % 45+0,8 38+1, Сохранность акросом, после оттаивания % 69+2,4 68+3, Из представленных в таблице 4 результатов исследований видно, что эпидидимальное семя снежного барана, замороженное по унифицированной технологии, характеризируется высокой биологической полноценностью.

Подвижность сперматозоидов после замораживания-оттаивания по первой фракции составила 45%, а во второй 38%.

Сохранение генетических ресурсов архара памирской популяции Архар относится к исчезающим видам животных. Он внесен в Красную книгу и охраняется под эгидой различных международных организаций. В нашу задачу входило создание криобанка генетического материала архара памирской популяции. С этой целью была организована экспедиция в Горно Бадахшанскую Автономную область Таджикской Республики, в результате которой получено эпидидимальное семя архара. Семя было подвергнуто криоконсервации, доставлено во ВНИИ животноводства и заложено в крио банк. Оценка показателей эпидидимального семени архара памирской попу ляции приведена в таблице 5.

Таблица Создание криобанка семени архара памирской популяции Первая Вторая Показатели фракция фракция Объем чистого эпидидимального семени, мл 4 Общее количество сперматозоидов, млрд. 26 12, Объем одной дозы, мл 0,25 0, Доля фракций в общей сумме сперматозоидов, % 67,4 32, Количества доз замороженного семени 223 Концентрация сперматозоидов после разбавления, млрд. 6,5 2, Подвижность свежеполученных сперматозоидов, % 55+1,3 50+2, Подвижность сперматозоидов после разбавления, % 78+2,0 72+1, Подвижность сперматозоидов после эквилибрации, % 73+2,2 68+3, Подвижность семени после оттаивания, % 40+1,8 33+1, Сохранность акросом после оттаивания, % 62+1,1 57+1, Из таблицы 5 видно, что подвижность эпидидимальных сперматозоидов архара памирской популяции после замораживание оттаивания по первой фракции составила 40%, а во второй 33%, при этом сохранность акросом составила 62% и 57% соответственно.

Предложенная нами технология позволила продолжить исследования, начатые нашими предшественниками по отдаленной гибридизации в овце водстве с целью получения новых селекционных форм животных.

Сохранение генетических ресурсов овец разных пород Главная задача создания криобанка семени баранов-производителей заключается в сохранении разнообразия генофонда овец. В последнее время обозначился выраженный поворот к мясному направлению овцеводства.

Гиссарская и эдильбаевская породы обладают ярко выраженными мяс ными качествами и отличаются скороспелостью. Уникальная романовская порода овец отличается высоким многоплодием. Нами создан криобанк се мени баранов-производителей этих пород, характеристика их представлена в таблице 6.

Таблица Криобанк семени баранов разных пород Породы Показатели Романовская Эдильбаевская Гиссарская n=20 n=15 n= Накоплено замороженного 2100 1100 семени, доз Подвижность семени, 95+1,8 88+2,0 93+1, свежевзятого, % Подвижность после 41+1,7 44+1,8 43+2, оттаивания, % Сохранность акросом, % 67+2,4 65+2,8 69+3, Из таблицы 6 видно, что подвижность сперматозоидов баранов производителей этих пород после замораживания-оттаивания находилась практически на одном уровне с колебаниями от 41 до 44%, а сохранность акросом варьировала в пределах от 65 до 69%.

3.5. ОТДАЛЕННАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ 3.5.1. Получение межвидовых гибридов яка и крупного рогатого скота В результате эксперимента по искусственному осеменению заморо женным эпидидимальным семенем яка было осеменено 15 коров. От 8 из них были получено гибридные потомки: 6 телок и 2 бычка (рис. 4), а 3 коро вы абортировали на разных стадиях стельности.

Рис. 4. Гибриды первого поколения - телки, полученные от осеменения коров черно-пестрой породы эпидидимальным семенем яка.

В результате проведенных исследований было показано, что срок пло доношения у коров, осемененных эпидидимальным семенем яка состовляет 255 дней и имеет промежуточный характер между продолжительностью стельности у исходных видов.

3.5.2. Получение межвидовых гибридов сибирского козерога и домашней козы В ходе эксперимента замороженным эпидидимальным семенем сибир ского козерога с использованием модифицированных инструментов было однократно осеменено 10 коз зааненской породы, от 8 из них получили гиб ридное потомство рисунок 5.

Рис. 5. Гибриды F1 козы зааненской породы с сибирским козерогом.

Проведенные исследования по получению гибридов показали, что срок плодоношения у самок, осемененных семенем сибирского козерога соответ ствовал среднестатистическому продолжительности плодоношения у коз.

Результаты проведенных исследований, показали, что гибридные сам цы первого поколения оказались плодовитыми, что является редким случаем при отдаленной гибридизации. Плодовитость гибридных самцов позволить мультитиражировать высокоценных особей, что является основой перспек тивы создания новых высокопродуктивных популяции.

3.5.3. Получение гибридов снежного барана якутской популяции и романовской породы овец Идея создания северных овец с использованием гибридизации с снежным бараном принадлежит профессору Мантейфелю П.А., а 80-годы прошлого столетия Шайдуллиным И.Н. были проведены исследования по получению гибридов с использованием свежеполученного и охлажденного эпидидимального семени снежного барана камчатского подвида.

С целью получения новых селекционных форм приспособленных к условиям севера России, нами было использовано семя снежного барана якутской популяции при осеменении овец романовской породы.

Метод внутритрубного осеменения (рис.6.) овец позволяет визуально контролировать состояния яичников на разных стадиях развития фолликулов, что дает возможность наиболее эффективно использовать уникальный генетический материал.

В отличие от предшественников нами были использованы современные биотехнологические методы. При получении межвидовых гибридов применяли метод внутритрубного осеменения овец, с целью рационального использования генетического материала, который позволяет мультитиражировать уникальные генотипы. Нами было осеменено овцематки - из них одна принесла двух ягнят (рис.7), а одна абортировала двойней на 4-месяце суягности.

Рис. 6. Введение семени в верхушку рога матки.

Рис. 7. Гибриды снежного барана якутской популяции и романовской овцы.

Предложенные нами биотехнологические методы открывают новые перспективы для сохранения и рационального использования генофонда разных видов овец и служат основой при создании новых селекционных форм приспособленных к экстремальным условиям Севера России.

3.5.3. Получение межвидовых гибридов архара и романовской породы овец Другой вид представляющий интерес для получения новых селекционных форм в овцеводстве - это архар (Ovis ammon). В 1934 году под руководством Бутарина Н.С. с использованием свежеполученного семени архара была начата работа по созданию породы тонкорунных овец мясошерстного направления - Казахский архаромеринос.

В отличие от наших предшественников мы использовали замороженное-оттаянное семя Ovis ammon памирской популяции для отдаленной гибридизации с целью получения новых селекционных форм овец мясного направления для альпийского и субальпиского овцеводства. В качестве материнской породы использовали уникальную отечественную породу - романовских овец, отличающихся высоким многоплодием и полиэстеричностью.

Мы применяли метод внутритрубного осеменения овец, что позволяет рационально использовать генетический материал для получения межвидовых гибридов. Были внутритрубно осеменены 3 овцематки романовской породы - одна из них принесла 1 ягненка (рис.8) и одна абортировала 3 ягнят на 5-месяце.

Рис. 8. Гибрид архара и романовской породы овец самец.

Продолжительность плодоношения у овцематок романовской породы осемененных заморожено-оттаянным эпидидимальным семенем архара памирской популяции составила 150 дней. Тогда как у архара варьирует от 155 до 170 дней.

В результате проведенных исследований впервые была показана возможность получения потомства от архара и домашней овцы замороженно оттаянным эпидидимальным семенем. Предлагаемые подходы открывают новые перспективы для сохранения и рационального использования генетических ресурсов овец и являются основой в созданий новых форм овец мясного направления для альпийского и субальпийского овцеводства.

3.6. Генетические и биологические характеристики гибридов 3.6.1. Генетические характеристики гибридов крупного рогатого скота с яком Нами проведены молекулярно-генетические исследования полиморфиз ма по тринадцати микросателлитным маркерам крупного рогатого скота в разных популяциях яков.

Оценка генетической консолидированности изучаемых животных по Peatkau, (рис. 9) показала достаточно небольшой внутрипопуляционный раз брос в генетической типичности особей, обусловленный региональной при надлежностью.

Population Assignment -40,0 -30,0 -20,0 -10,0 0, 0, -5, -10, Pop -15, -20, -25, -30, Pop Алтайская популяция Памирская популяция Кабардино-Балкарская популяция Рис. 9. Результаты анализа принадлежности яков к конкретной популяции (в %) по 13-ти микросателлитам.

Таблица Генетические дистанции различных популяций яков (по Nei, 1983) Популяции Алтай Памир Кабардино-Балкария Алтай * Памир 0,4320 * Кабардино-Балкария 0,3920 0,5231 * Анализируя данные таблицы 7 и рисунка 10 можно сказать, что наи меньшей генетической удаленностью характеризовались яки алтайской и ка бардино-Балкарской популяций (0,3920). Животные, обитающие на Памире, генетически более изолированы от двух предыдущих популяций, что выра жается в более высоких значениях, характеризующих генетические расстоя ния (0,5231).

Памир Кабардино-Балкария Алтай 0. Рис. 10. Филогенетическое древо различных популяций яков.

Анализ индивидуальных различий изученных яков показал, что изу ченный массив животных формирует три четкие ветви, объединенные гео графической общностью происхождения (рис.11).

Памир_ Памир_ Кабардино Алтай_ Балкария_ Алтай_ Кабардино-Балкария_ 0. Рис. 11. Индивидуальное филогенетическое дерево различных попу ляций яков Результаты этого анализа подтверждают отмеченную выше большую генетическую близость яков Алтая с животными Кабардино-Балкарии, что, по всей видимости, связано с их более близким происхождением.

Полученное гибридное потомство было подвергнуто молекулярно генетическому анализу для изучения аллельных вариантов генов каппа казеина и BLAD, а также обследовано на носительство вируса лейкоза круп ного рогатого скота (ВЛКРС). У гибридов и их сверстниц были изучены ка риотипы и основные биохимические и гематологические показатели.

Ни у одной из гибридных телок (F1) не было обнаружено мутации в ге не CD18 в позиции 383АG, обуславливающей в гомозиготном состоянии развитие дефицита лейкоцитарной адгезии или BLAD - синдрома.

Обследованные животные оказались свободными и от носительства ВЛКРС. Кроме того у всех телок был выявлен В-аллель гена каппа-казеина, положительно влияющий на технологические качества молока.

Большую роль в решении ряда теоретических и прикладных вопросов играют цитогенетические исследования. Они получили широкое применение в систематике и при анализе филогенеза млекопитающих (Орлов В.Н. и Бу латова Н.Ш.,1983;

Дзуев Р.И., 1998). А в последние десятилетия они нашли свое место и в решении прикладных задач. В том числе комплекс мероприя тий, связанных с сохранением генетических ресурсов, включает в себя цито генетическую аттестацию самцов, используемых для создания криобанка.

Хромосомный набор домашнего быка (род Bos) состоит из 29 пар ау тосом, образующих по своей величине плавно убывающий ряд, и пары поло вых хромосом. Аутосомы представлены акроцентрическими хромосомами, X-хромосома - крупный субметацентрик, и Y-хромосома - мелкая хромосома субметацентрической формы (рис.12).

Рис.12. Кариотип быка (B. taurus). Окраска по Романовскому-Гимза.

Кариотип яка по числу и морфологии хромосом идентичен кариотипу крупного рогатого скота (рис. 13): содержит 29 пар акроцентрических ауто сом. X- и Y-хромосомы яка по морфологии и размерам сходны с половыми хромосомами у крупного рогатого скота.

Рис. 13. Кариотип самца яка (B. mutus). Окраска по Романовскому-Гимза.

У трех обследованных гибридных телок хромосомный набор содержал 29 пар акроцентриков, образующих по своей величине плавно убывающий ряд, и две крупные метацентрические X-хромосомы (рис.14). Диплоидное число у исследованных гибридов было равно 60. Хромосомы гибридов не имели визуальных отличий от хромосом крупного рогатого скота.

Рис. 14. Кариотип самки (гибрид F1 як х крупный рогатый скот).

Окраска по Романовскому-Гимза.

Сопоставление кариотипов гибридных телок и крупного рогатого скота свидетельствует об их высоком сходстве. Однако, делать вывод о полной идентичности хромосом крупного рогатого скота и яка на основании только одного цитогенетического анализа мы считаем преждевременным.

У обследованных животных не было выявлено каких-либо конститу циональных аномалий хромосомного набора, в том числе встречающихся у домашнего крупного рогатого скота различных вариантов робертсоновских транслокаций. Следовательно, как гибридные телки, так и их черно-пестрые матери свободны от наследственных нарушений хромосомного аппарата.

Нами был исследован уровень основных биохимических показателей у гибридов первого поколения и их сверстниц черно-пестрой породы. Мате риалы биохимического исследования гибридов крупного рогатого скота с яком и контрольных животных приведены в таблице 8.

Таблица 8.

Сравнительная характеристика биохимических показателей крови крупного рогатого скота и его гибридов с яком Группы животных Разность между гибридами и Крупный ро Показатели крупным гатый скот Гибриды рогатым скотом (n=3) (n=3) Общий белок (г/л) 68,85±7,02 66,15±3,06 -2, 6,66* Альбумин (г/л) 23,09±2,18 29,75±0, Глобулин (г/л) 45,59±9,02 31,94±1,31 - 13, Креатинин (мкМ/л) 61,26±2,47 75,75±12,65 14, Мочевина (мМ/л) 2,95±0,75 2,48±0,17 - 0, АЛТ (МЕ/л) 15,66±2,12 24,98±6,39 9, АСТ (МЕ/л) 55,51±5,03 63,54±3,03 8, Холестерин (мМ/л) 2,30±0,28 1,75±0,03 -0, Ca (мМ/л) 2,45±0,13 2,61±0,07 0, 0,95* P (мМ/л) 2,08±0,30 3,03±0, Fe (мкМ/л) 21,22±4,66 26,53±3,55 5, *p0, По большинству изученных биохимических показателей у гибридных телок и их сверстниц достовернее различия отсутствовали. Однако концен трация альбумина и фосфора в сыворотке крови у гибридных телок была достоверно выше, чем у крупного рогатого скота, что объясняется эффектом гетерозиса.

3.6.2. Характеристика хозяйственно-полезных признаков у гибридов F1 як х крупный рогатый скот Результаты наших исследований показали, что гибридные телята по сравнению со своими аналогами по материнской породе имеют существен ное преимущество, начиная с месячного возраста, они превосходят аналогов исходной материнской породы (рис.15). Гибридные животные отличаются более высокой интенсивностью роста до девяти месячного возраста. Высо кая энергия роста гибридных животных обусловлена эффектом гетерозиса, что является основой для производства высококачественной телятины с низ кой себестоимостью.

350 кг мес рожд мес 3 мес 6 мес 12 мес ч/п гибриды Рис.15.Сравнительная динамика живой массы гибридов и их сверстников.

Проведенные нами исследования экстерьерных показателей гибридных животных показали, что они превосходят своих сверстниц по таким про мерам как глубина груди, обхват груди и косая длина туловища (рис.16).

высота в высота в косая длина глубина шрина груди обхват груди обхват пясти холке крест груди гибриды ч/п Рис.16. Промеры экстерьера гибридных первотелок и их сверстниц Нами были проведены исследования молочной продуктивности гибри дов первого поколения яка с черно-пестрой породой. Показатели, характери зующие молочную продуктивность, приведены в таблице 9.

Таблица Показатели молочной продуктивности гибридных первотелок Показатели Гибриды Суточный удой, кг 9, Жир, % 9, Белок, % 5, Лактоза, % 4, Сухое вещество, % 19, Из таблицы 9 видно, что молоко гибридных животных обладает высо кой питательной ценностью и значительно отличается от материнской поро ды жирномолочностью и белковомолочночностью.

Изучение молочной продуктивности гибридов позволило, выявить еще одну особенность характерную для гибридных животных - это очень высо кий коэффициент постоянства лактации. Его минимальное значение у гиб ридных первотелок равно 87%, тогда как у чистопородных аналогов этот по казатель составил 60%.

3.6.3. Генетические характеристики гибридов сибирского козерога с козой зааненской породы Проведенное нами сопоставление кариотипов гибридных животных и домашней козы свидетельствует об их высоком сходстве. Диплоидное число хромосом у домашней козы равно 60. Кариотип этого вида содержит 29 пар акроцентрических аутосом. X-хромосома является крупным акроцентриком, а Y-хромосома метацентрична и является одной из самых мелких хромосом набора (рис. 17).

Рис. 17. Кариотип домашней козы. Окраска по Романовскому-Гимза.

Кариотип сибирского козерога также содержит 29 пар акроцентриче ских аутосом. X-хромосома, как и у всех представителей рода Capra, являет ся крупным акроцентриком, а морфология Y-хромосомы из-за ее малых раз меров не ясна.

У обследованных гибридных козлят хромосомный набор содержал пар акроцентрических аутосом, образующих по своей величине плавно убы вающий ряд, и две половые хромосомы. Фенотипический пол соответствовал генетическому, определенному по половым хромосомам. Диплоидное число у исследованных гибридов было равно 60. На рис.18 и 19 показаны кариоти пы гибридных самца и самки первого поколения.

Рис. 18. Кариотип гибридного козла. Окраска по Романовскому-Гимза.

Рис. 19. Кариотип гибридной козы. Окраска по Романовскому-Гимза.

Хромосомы гибридов не имели визуальных отличий от хромосом до машней козы. Точная идентификация хромосом у этих двух видов и их гиб ридов, за исключением Y-хромосомы, возможна лишь с применение диффе ренциальной окраски. Результаты проведенных исследований свидетельст вуют об отсутствии внешних различий в системе аутосом и половых хромо сом у сравниваемых видов и их гибридов. Однако, делать вывод о полной идентичности хромосом домашней козы и сибирского козерога только на ос новании одного цитогенетического анализа мы считаем преждевременным..

В породах домашних коз, в том числе и зааненской, довольно часто встречаются различные варианты робертсоновских транслокаций. Но ни у одного из обследованных нами животных не было выявлено каких-либо кон ституциональных аномалий хромосомного набора. Следовательно, использо ванные нами в опыте животные свободны от наследственных нарушений хромосомного аппарата.

Мы провели сравнительный анализ основных биохимических показа телей у гибридов первого поколения сибирского козерога с зааненскими ко зами и их чистопородных сверстников. Материалы биохимического исследо вания гибридов и контрольных животных приведены в таблице 10.

Таблица Сравнительная характеристика биохимических показателей крови домашней козы скота и ее гибридов с сибирским козерогом Группы животных Разность между Показатели гибридами и до Козы Гибриды машней козой (n=3) (n=4) Общий белок (г/л) 65,52±3,41 66,31±2,56 0, Альбумин (г/л) 29,93±0,48 32,83±1,17 2, Глобулин (г/л) 35,58±3,01 33,48±1,48 - 1, 47,55** Гемоглобин (г/л) 105,97±3,62 153,52±4, 5,97* АЛТ (МЕ/л) 15,59±1,49 21,26±1, АСТ (МЕ/л) 46,98±5,56 55,20±4,87 8, Креатинин (мкМ/л) 74,66±18,18 128,0±10,32 53, Мочевина (мМ/л) 6,97±0,67 6,46±0,48 - 0, Холестерин (мМ/л) 1,34±0,30 2,16±0,79 0, Ca (мМ/л) 2,56±0,06 2,44±0,03 -0, P (мМ/л) 2,76±0,56 2,27±0,35 -0, Fe (мкМ/л) 23,86±4,08 20,25±3,11 -3, Mg (мкМ/л) 0.97±0.06 0.98±0.04 0. Хлориды (мкМ/л) 110,17±1,96 110,14±0,80 -0, По большинству изученных биохимических показателей у гибридов и их сверстников достоверные различия отсутствовали. Однако активность АЛТ в сыворотке крови у гибридов была достоверно выше, чем у домашних коз (p0,05). Отмечено также достоверное увеличение содержания гемогло бина у гибридных животных (p0,01), что связано с эффектом гетерозиса.

3.6.4. Характеристика хозяйственно-полезных признаков у гибридов F1 сибирский козерог х домашняя коза Результаты проведенных исследований по получению гибридов сибир ского козерога с домашней козой показали, что при рождении гибридные козлята не отличаются по живой массе от домашних. В зависимости от мно гоплодия они рождались с массой тела 2,5-3,5кг.

Нами были изучены промеры тела у гибридов и их сверстников, кото рые приведены в рисунке 20.

Установлено, что гибридные животные превосходят своих аналогов по высоте в холке на 24,3%, в крестце на 22,2%, косой длине туловища 11,11%, по обхвату груди и глубине 14,2% и 16,6% соответственно. Гибридные жи вотные отличаются высокой интенсивности роста и развития. Среднесуточ ный прирост у гибридов составляла 280-320 г.

высота в высота в к.д.т об. груди об. пясти глубина грудиширина груди холке крестце гибриды ч/п Рис.20. Промеры гибридов сибирского козерога и сверстников.

3.6.5. Генетические характеристики гибридов диких баранов и овец романовской породы Род Ovis включает несколько видов, различающихся между собой по диплоидному числу хромосом: у камчатского снежного барана – 2n=52, у снежного барана канадского подвида – 2n=54, у муфлона и домашней овцы – 2n=54, у архара –2n=56 и у уриала – 2n=58.

На рисунке 21 показан кариотип архара (Ovis ammon).

Рис.21. Кариотип архара. Самец. Окраска по Романовскому-Гимза.

Кариотип домашней овцы содержит 27 пар хромосом. Из них 3 пары аутосом метацентрические, а 23 пары акроцентрики. Y-хромосома – метацентрик, X-хромосома – крупный акроцентрик (рис. 22).

Рис.22. Кариотип домашней овцы. Окраска по Романовскому-Гимза.

На основании анализа дифференциальной структуры хромосом овцы считают, что хромосома 1-й пары у O. аries L. соответствует 1 и 3;

2 – 2 и 8;

3 – 5 и 11 парам хромосом B. Taurus L. и C. Hircus L. (Яковлев А.Ф., 1989).

Но проведенный Кленовицким П.М. и др. (2001, 2004) анализ локализации на хромосомах 147 общих для этих видов структурных генов и микросателлитов показал, что у крупного рогатого скота и овец существует 36 общих групп сцепления. Это соответствует 10 межхромосомным перестройкам, связанным с перегруппировкой генетического материала в ходе эволюционного расхождения данных видов.

В литературе по систематике выделяют один вид снежного барана O.

Canadensis. Хромосомный набор O. Canadensis аналогичен кариотипу домашней овцы. Однако известно, что камчатский снежный баран (O.

Nivicola nivicola) отличается от канадского толсторога по числу хромосом:

его кариотип содержит 52 хромосомы, а половые хромосомы идентичны половым хромосомам домашней овцы.

Рис. 24. Кариотип гибрида Рис. 23. Метафаза и кариотип снежного барана и домашней овцы.

снежного барана. Окраска по Окраска по Романовскому-Гимза.

Романовскому-Гимза.

На рисунке 24 показан кариотип гибрида якутского снежного барана и романовской овцы Диплоидный набор гибридной самки содержит по сравнению с исходными видами промежуточное число хромосом равное 53, включающее 7 метацентриков, из них 3 пары двухплечих хромосом, общие для овцы и снежного барана, и одну непарную метацентрическую хромосому, унаследованную от отца, и 44 акроцентрика, образующих плавно убывающий ряд. Плечи дополнительной метацентрической хромосомы гибрида по размерам близки к хромосомам 6 и 7 пар у домашней овцы. Половые хромосомы гибрида Ovis nivicola lydekkeri сходны с половыми хромосомами домашней овцы.

ВЫВОДЫ 1. Для сохранения генетического материала разных видов животных унифицирована и адаптирована среда для глубокого замораживания эпидидимального семени архара, снежного барана, сибирского козерога, яка и зубра, позволяющая сохранить биологическую полноценность и оплодотворяющую способность сперматозоидов.

2. Установлено, что эпидидимальное семя обладает криоустойчивостью при замораживании-оттаивании, сравнимой с эякулированным и электроэякулированным семенем. После криоконсервации и оттаивания подвижность сперматозоидов составила у яков 35%, у зубров 30%, у козерогов - 55%, снежного барана - 45%, у архаров - 40%, а сохранность акросом - 64, 64, 74, 69 и 62%, соответственно.

3. Создан криобанк семени архара, снежного барана, сибирского козерога, яка, зубра и баранов-производителей романовской, эдильбаевской, гиссарской пород.

4. Усовершенствованный метод искусственного осеменения коз замороженным эпидидимальным семенем сибирского козерога позволяет при однократном осеменении получать 80% суягности.

5. Получено полноценное потомство от внутритрубного осеменения домашней овцы заморожено-оттаянным эпидидимальным семенем архара и снежного барана.

6. Методом отдаленной гибридизации с использованием заморожено-оттаянного эпидидимального семени получены гибриды крупного рогатого скота и яка, домашней козы и сибирского козерога, домашней овцы и архара, домашней овцы и снежного барана.

7. Установлен промежуточный характер продолжительности эмбрионального периода онтогенеза у гибридов яка с крупным рогатым скотом составляет 255 дней, у гибридного потомства романовской породы овец снежным бараном - 155 дней и с архаром - 150 дней.

8. На основании анализа полиморфизма 13 микросателлитных локусов установлено, что наиболее близки между собой яки Алтая и Кабардино-Балкарии. Генетическое расстояние составило между ними 0,392, это связано с общим происхождением животных из этих популяций. Между Алтайской и Памирской популяциями генетическая дистанция была равна 0,432, а между Памирской и Кабардино-Балкарской – 0,523.

9. Установлено, что гибриды крупного рогатого скота с яком свободны от носительства BLAD и ВЛКРС, кроме того, все они имеют «желательный» В-аллель гена каппа-казеина. Полученные данные свидетельствуют о том, что эти животные могут быть использованы в дальнейшей селекционной работе.

10. Цитогенетический мониторинг исходных видов и гибридов с использованием прикладных компьютерных программ показал что, исследованные нами виды в пределах родов Bos и Capra характеризуются высокой степенью сходства кариотипов по числу и морфологии хромосом. У всех исследованных животных не было обнаружено конституциональных нарушений в хромосомном наборе.

11. Установлено превосходство гибридов крупного рогатого скота и яка по скорости роста в период от рождения до 6-и месяцев по сравнению аналогами материнской породы. По среднесуточному приросту в месячном возрасте гибриды превосходили своих черно-пестрых сверстников на 260 г, в 6 мес. - на 220 г, в 9 мес. - на 70 г. Аналогичная тенденция прослеживалась и у гибридов сибирского козерога с заанеской породой коз: среднесуточный прирост гибридного молодняка составлял 280-320 г.

12. Показано, что гибриды крупного рогатого скота и яка и зааненской козы и сибирского козерога характеризуются более высокими показателями развития по сравнению с материнскими культурными видами:

у гибридов сибирского козерога с заанеской породой коз высота в холке была на 24,3%, в крестце - на 22,2%, косая длина туловища – на 11,11%, обхват груди – на 14,2% и глубина груди - на 16,6% выше по сравнению с чистопородными козами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. Для повышения эффективности сохранения генетических ресурсов животного мира, предлагаем унифицированную криопротективную среду для глубокого замораживания эпидидимального семени яка, зубра, архара, снежного барана и сибирского козерога, сохраняющую высокую биологическую полноценность сперматозоидов.

2. Для сохранения и рационального использования генетического биоразнообразия и дальнейшего его использования с целью получения новых селекционных форм сельскохозяйственных животных, рекомендуем проводить мониторинг на основе молекулярно-генетических и цитогенетических критериев с использованием прикладных компьютерных программ при отборе генетически полноценных особей.

Список опубликованных работ по теме диссертации В журналах рекомендованных ВАК 1. Насибов Ш.Н. Генетический потенциал дикой фауны в создании новых селекционных форм животных/ Достижения науки и техники АПК-2010. - №8. С.59-62. / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Иолчиев Б.С., Зиновьева Н.А., Воеводин В.А., Амиршоев Ф.С.

2. Насибов Ш.Н. Криосохранение и рациональное использование генетических ресурсов овец и коз./ Насибов Ш.Н., Иолчиев Б.С., Кленовицкий П.М., Багиров В.А., Воеводин В.А., Эрнст Л.К., Зиновьева Н.А., Кононов В.П./ Достижения науки и техники АПК-2010. №9.- С.52-54.

3. Багиров В.А. Сохранение и рациональное использование генетических ресурсов яка (Bos mutus)./ Багиров В.А., Гладырь Е.А., Эрнст Л.К., Кленовицкий П.М., На сибов Ш.Н Зиновьева Н.А./ Сельскохозяйственная биология.- 2009.-№ 2 - С.37-42.

4. Багиров В.А. Сохранение биоразнообразия животного мира и использование отдаленной гибридизации в животноводстве. / Багиров В.А., Эрнст Л.К., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М., Иолчиев Б.С., Зиновьева Н.А./Достижения науки и техники АПК-2009.-№7. - С.54-56.

5. Кленовицкий П.М. Цитогенетический анализ при отдаленной гибридизации поло рогих./ Кленовицкий П.М., Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Иолчиев Б.С., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К./ Достижения науки и техники АПК-2009. - №8. - С.41-43.

6. Насибов Ш.Н.Рациональное использование генетических ресурсов и гибридизация в козоводстве. / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Иолчиев Б.С., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К., Кононов В.П., Гусев И.В./ Сельскохозяйственная биология. - 2009. - № 6, 37-44.

7. Багиров В.А. Сохранение и рациональное использование генофонда животных. / Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М., Лесин С.А., Воеводин В.А., Зи новьева Н.А., Эрнст Л.К., Калашников В.В., Солошенко В.А. / Доклады РАСХН.

– 2009. - №2. – С.37-40.

8. Багиров В.А. Технология криоконсервации семени - метод сохранения и рацио нального использования разных видов животных. / Багиров В.А., Эрнст Л.К. На сибов Ш.Н./ Ветеринарная патология. 2008., № 2, С. 152-154.

Монографии 9. Кленовицкий П.М. Цитогенетика животных. /Кленовицкий П.М., Багиров В.А., Зиновьева Н.А., Насибов Ш.Н., Иолчиев Б.С./Москва.-Россельхозакадемия.– 2008.

10. Ельчанинов В.В. Морфофункциональная асимметрия гонад, е роль в физиологии и паталогии функции размножения. / Ельчанинов В.В., Чомаев А.М., Насибов Ш.Н., Гольдина А.А., Юрин М.И./ ВИЖ п. Дубровицы, 2004 г., стр. В других изданиях 11. Кленовицкий П.М. Изучение и сравнительный анализ кариотипов шести видов семейства полорогих./ Кленовицкий П.М., Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Иолчиев Б.С./ Материалы 6-й международной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» Дубровицы - 2006. С.31-35.

12. Багиров В.А.Новые методы сохранения генетических ресурсов редких, уникальных и исчезающих видов животных. /Багиров В.А.,Эрнст Л.К., Насибов Ш.Н./ Актуальные проблемы биологии в животноводстве. Четвертая Международная конференция. г. Боровск, 2006. стр. 224-225.

13. Насибов Ш.Н. Биотехнологические аспекты сохранения и рационального использования генофонда редких, уникальных и исчезающих видов животных.

/Насибов Ш.Н., Багиров В.А.,Эрнст Л.К. /Материалы 6-й международной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» Дубровицы 2006. С.35-41.

14. Насибов Ш.Н. Криоконсервации семени и его роль в сохранении биоразнообразие животных./ Насибов Ш.Н., Эрнст Л.К., Багиров В.А. / Материалы международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных" / ВИЖ, 2007. - С. 35-40.

15. Багиров В.А. Биологические особенности гибридов крупного рогатого скота с яком. /Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Гладырь Е.А., Гусев И.В., Насибов Ш.Н., Лесин С., Зиновьева Н.А./ Материалы 7-й международной конференции школы «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных: роль нанотехнологии в реализации приоритетных задач биотехноло гии» Дубровицы 2008. — С.120-124.

16. Насибов Ш.Н. Сравнительный анализ сперматозоидов разных видов животных. / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Лесин С.А., Воеводин В.А., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К. / Материалы международной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения». Дубровицы -2008. С.353-356.

17. Насибов Ш.Н. Сравнительная характеристика кариотипов трех видов семейства полорогих (BOVIDAE) / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Иолчи ев Б.С. /Материалы международной конференции «Проблемы увеличения произ водства продуктов животноводства в России и пути их решения». - Дубровицы. 2008. С. 361-364.

18. Багиров В.А. Сохранение генетических ресурсов овцебыков (Ovibos moschatus).

/Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М., Эрнст Л.К/ Материалы между народной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения».Дубровицы-2008.С. 473-475.

19. Багиров В.А. Новые методы в сохранении Сайгака (Saiga tatarica) / Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Арылов Ю.Н., Кленовицкий П.М., Эрнст Л.К. / Материалы меж дународной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения». - Дубровицы. - 2008. С.476-478.

20. Насибов Ш.Н. Криобанк семени редких и исчезающих видов животных. / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Лесин С.А., Кленовицкий П.М., Воеводин В.А., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К. /Материалы международной конференции «Проблемы увеличе ния производства продуктов животноводства в России и пути их решения». Дубровицы. - 2008. С. 479-480.

21. Насибов Ш.Н. Сохранение яков разных популяции. / Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К. /Материалы международной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения». Дубровицы.- 2008.С.480-483.

22. Багиров В.А., Биотехнологические методы сохранения и рационального использования генофонда редких и исчезающих видов животных. / Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Лесин С.А., Кленовицкий П.М. Эрнст Л.К. / Биофизика живой клетки - 2008. - Т.9.- С.21-24.

23. Багиров В.А. Биологические особенности гибридов домашней козы и сибирского козерога./ Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Насибов Ш.Н., Воеводин В.А., Иол чиев Б.С., Гусев И.В., Зиновьева Н.А / 5-я международная научная конференция школа Современные достижения и проблемы генетики и биотехнологии сельско хозяйственных животных «Био ТехЖ-2009» Дубровицы. - 2009. - С 38-42.

24. Насибов Ш.Н. Биотехнологических методы в получении новых селекционных форм сельскохозяйственных животных 5-я международная научная конференция школа / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Эрнст Л.К., Кленовицкий П.М., Зиновьева Н.А., Иолчиев Б.С./ Современные достижения и проблемы генетики и биотехнологии сельскохозяйственных животных «БиоТехЖ-2009» Дубровицы. 2009. - С 108-115.

25. Насибов Ш.Н. Перспективы использования отдаленной гибридизации в животно водстве. / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Иолчиев Б.С., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К./ Материалы международной научной конференции Достижения в генетике, селекции и воспроизводстве сельскохозяйственных жи вотных. С.-П.. - 2009. Ч.1., С. 33-36.

26. Багиров В.А. Создание криобанка семени редких и исчезающих видов млекопи тающих. /Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Насибов Ш.Н., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К., Иолчиев Б.С./ Материалы международной научной конференции Достижения в генетике, селекции и воспроизводстве сельскохозяйственных жи вотных. С.-П.. - 2009. - Ч.1. -, С. 37-41.

27. Багиров В.А.Использование сибирского козерога для получения новых селекци онных форм в козоводстве. / Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Насибов Ш.Н., Эрнст Л.К., Иолчиев Б.С., Зиновьева Н.А., Гусев И.В. /Научное обеспечения по вышения эффективности отрасли животноводства в условиях Евро-Северо Востока России. Сборник материалов научной сессии г. Кострома 2-3 июля г. - С. 18-22.

28. Багиров В.А.Отдаленная гибридизация в скотоводстве / Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М., Эрнст Л.К., Зиновьева Н.А., Иолчиев Б.С., Гладырь Е.А., Гусев И.В. / Научное обеспечения повышения эффективности отрасли жи вотноводства в условиях Евро-Северо-Востока России. Сборник материалов на учной сессии г. Кострома 2-3 июля 2009 г. - С. 34-38.

29. Nasibov Sh. N., Animal Gene Pool Preservation and Conservation / Nasibov Sh. N., Bagirov V.A., Klenovitskii P. М., Lesin 5. А., Voevodin V. А., Zinov'eva, N. А. Ernst L. К., Kalashnikov V. V., Soloshenko V. А../ Russian Agricultural Sciences, 2009, Vol.

35, N2, рр. 112 - 115.

30. Nasibov Sh. N., The comparative analysis of Bovidae karyotypes./ Nasibov Sh. N., Klenovitsky Р.М. Zinoveva N.А. / Book of Abstracts of the 59 Annual Meeting оf the ЕААР NEWSLETTER Мау 2009. Issue.

31. Bagirov V.A. Cryoconservation of sperm as а method of saving and rational use of гаге and disappearing kinds of animals.// Bagirov V.A., Ernst L.К.Nasibov Sh. N., Kleno vitsky Р.М./ Book of Abstracts of the 59 Annual Meeting of the EAAP NEWSLETTER Мау 2009. Issue.