Клиническая значимость матриксной металлопротеиназы 2 типа и ангиогенных факторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников
На правах рукописи
Крюк Юлия Васильевна Клиническая значимость матриксной металлопротеиназы 2 типа и ангиогенных факторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников 03.01.04 – биохимия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва – 2011 2
Работа выполнена на кафедре клинической биохимии и лабораторной диаг ностики ФПДО ГОУ ВПО «Московский государственный медико стоматологический университет» Росздрава Научные руководители:
кандидат биологических наук, доцент О.М.Кузнецова доктор медицинских наук С.Н.Блохин
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор В.Л. Козельцев доктор биологических наук, профессор Н.С.Сергеева
Ведущая организация: ГОУ ВПО Российский Государственный медицин ский университет Росздрава
Защита диссертации состоится «18» марта 2011г. в «14.00» часов на за седании Диссертационного совета Д.212.203.13 при Российском университе те дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского уни верситета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо Маклая, д. Автореферат разослан «»2011г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор Е.В.Лукашева Введение Актуальность темы. Рак яичников (РЯ) составляет около 4-6% всех злокаче ственных новообразований у женщин, но по показателям смертности занимает первое место среди всех гинекологических опухолей в России и экономически раз витых западных странах (А.Ф.Урманчеева и соавт., 2008;
В.В.Кузнецов и соавт., 2009;
Shahabi S et al., 2011). В России ежегодно выявляют более 11000 больных РЯ, что составляет 10,2:100000 женщин (В.И.Чиссов и соавт., 1998). За последние лет прирост заболеваемости РЯ в России составил 8,5%.
Этиология РЯ не известна, патогенез изучен не до конца. При этом РЯ пред ставляет гетерогенную группу новообразований (Shahabi S. et al., 2011), а поверх ностный эпителий, строма и первичные половые клетки дают начало различным по гистогенезу опухолям, проявляющимся одним или одновременно несколькими гис тотипами (Ozlos R., 2003).
Рак яичников считают одной из наиболее агрессивных опухолей и у большин ства пациенток заболевание диагностируется на достаточно поздних стадиях, когда опухоль уже распространена по брюшине (М.И.Давыдов и соавт., 2007). Опухоле вых маркеров для выявления ранних стадий РЯ не существует, за исключением СА-125, уровень которого в сыворотке крови пропорционален объему поражения, а стало быть, характерен для более запущенных стадий болезни. Поэтому, повышен ный уровень СА-125 до операции может служить существенным показателем для контроля над течением болезни в период лечения и последующего наблюдения (Spriggs D., 2003).
В последние годы большой интерес привлекает исследование матриксных ме таллопротеиназ (ММП), которые считают одним из наиболее перспективных на правлений в области изучения механизмов инвазии и метастазирования различных опухолей. И среди них ММП-2 - наиболее известна как протеаза, гидролизующая коллаген IV типа – основной компонент базальной мембраны эпителиальных опу холей, при этом она также разрушает другие существенные компоненты внекле точного матрикса и обладает желатинолитической активностью. Регуляция актив ности ММП является сложным и до сих пор до конца не изученным процессом, важную роль в котором играют их тканевые ингибиторы (ТИМП). В эксперимен тальных исследованиях продемонстрирована важная роль ММП-2 в формировании инвазивного потенциала клеток РЯ (Kenny H.A. et al., 2008, 2009), причем индук ция ММП является одним из ключевых механизмов проявления проинвазивных эффектов эпидермального (EGF) (Ellerbroek S.M. et al., 2001a, 2001b) и трансформирующего (-TGF) факторов роста (Lin S.W. et al., 2000;
Nishikawa A. et al., 2000;
Rodriguez G.C. et al., 2001). Показано также, что ММП-2, наряду с ММП- находятся в комплексном взаимодействии с ключевым активатором ангиогенеза – фактором роста эндотелия сосудов (vascular endothelial growth factor – VEGF). С одной стороны, коллагеназы индуцируют секрецию VEGF опухолевыми клетками, что способствует образованию асцита (Belotti D. et al., 2003;
Manenti L. et al., 2003;
Zhang A. et al., 2006), а, с другой - секретируемый опухолью VEGF регулирует экс прессию коллагеназ в строме, влияя на инвазивную способность опухоли (Wang F.Q. et al., 2006;
Belotti D. et al., 2008).
Представленные данные современной литературы указывают на актуальность проведения одновременного сравнительного исследования содержания VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2 и ММП-2 в сыворотке крови и ткани опухоли больных злока чественными и доброкачественными новообразованиями яичников. Трудности ранней диагностики, высокий метастатический и инвазивный потенциал РЯ опре деляют необходимость углубленного изучения механизмов распространения опу холи, знание которых могло бы стать основой для создания новых препаратов, це ленаправленно воздействующих на процессы метастазирования и инвазии. В этой связи исследование ММП при РЯ – одно из наиболее перспективных направлений в области изучения роли этой протеолитической системы в клиническом течении заболевания.
Вместе с тем, уже не вызывает сомнения тот факт, что опухоль не может раз виваться и расти без образования в ней разветвленной сети сосудов, обеспечиваю щих снабжение клеток кислородом и питательными веществами (Folkman J., 1985;
Salven et al., 1997;
Piccino R. et al., 2002). Изучение молекулярных механизмов ан гиогенеза позволило перейти от микроскопической оценки плотности сосудов в опухоли к исследованию конкретных молекул, участвующих в регуляции образо вания и роста новых сосудов в опухолевой ткани. Ведущая роль среди таких регу ляторов, безусловно, принадлежит VEGF (С.В.Луценко и соавт., 2005;
Ferrara et al., 1995;
Donovan et al., 1997). Ряд фактов указывает на то, что VEGF не только обла дает проангиогенной активностью, но может и непосредственно участвовать в ре гуляции пролиферации клеток опухоли (SpannuthW.A. et al., 2009).
Известно, что эффекты VEGF опосредованы специфическими мембранными рецепторами и в процессах опухолевого ангиогенеза принимают участие два типа рецепторов VEGF - VEGFR-1/Flt-1 и VEGFR-2/Flk-1/KDR. Биологическая роль VEGFR-1 и VEGFR-2, по-видимому, различна: VEGFR-1 индуцирует протеазную активность в эндотелиальных клетках и стимулирует миграцию в опухолевую ткань макрофагов, а VEGFR-2 вызывает дифференцировку, пролиферацию и ми грацию клеток эндотелия (Е.С.Герштейн и соавт., 2010б). Различаются ли функции двух типов рецепторов VEGF в опухолевых клетках, пока неясно.
Исследования последних лет позволили по-новому взглянуть на процессы протеолиза и неоангиогенеза в репродуктивной системе женщин, как при физиоло гических изменениях, так и при различных патологических состояниях, в том чис ле и РЯ (Artini P.G. et al., 2008;
Sher I. et al., 2009). Показана роль ангиогенных фак торов в процессе васкуляризации опухолей, взаимосвязь экспрессии VEGF и его рецепторов с прогнозом заболевания и эффективностью лечения, намечены новые направления терапевтических воздействий на злокачественный процесс. Все выше указанное определило актуальность проведения данного исследования.
анализ клинических перспектив – Цель настоящего исследования исследования матриксной металлопротеиназы 2 типа (ММП-2), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и его рецепторов (VEGFR-1, VEGFR-2) в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Иммуноферментным методом определить содержание ММП-2 в сыворотке кро ви и ткани опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными ново образованиями яичников.
2. Проанализировать соотношение концентрации ММП-2 в сыворотке крови с его содержанием в первичной опухоли больных раком, пограничными и доброкаче ственными новообразованиями яичников.
3. Исследовать содержание ММП-2 в сыворотке крови и ткани опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников с учетом основных клинических (возраст, стадия заболевания, наличие асцита, ре продуктивный статус) и морфологических (гистологическое строение и степень дифференцировки опухоли) характеристик заболевания и сопоставить с таковы ми показателями при пограничных и доброкачественных опухолях яичников.
4. Изучить взаимосвязь содержания MMП-2, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2 в сыво ротке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников с уровнем сывороточного опухолевого маркера СА-125.
5. Изучить возможность комплексного использования клинических, морфологиче ских факторов и биохимических маркеров (ММП-2, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2, СА-125) в диагностике, оценке инвазивного и метастатического потенциала но вообразований яичников.
Научная новизна исследования Впервые в отечественной практике проведено одновременное сравнительное иммуноферментное определение содержания нескольких биохимических маркеров (ММП-2, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2, СА-125) в сыворотке крови и опухоли боль ных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников с учетом их связи с основными клинико-морфологическими характеристиками опу холи.
Показано, что уровни ММП-2 в сыворотке крови практически здоровых жен щин, больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников достоверно не различалось. При этом концентрация ММП-2 в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников не отражала ос новные клинические факторы заболевания: возраст, данные гинекологического анамнеза, состояние репродуктивной функции, гистологическое строение, размер опухоли и не была связана с сопутствующими соматическими заболеваниями.
Обнаружено, что содержание ММП-2 в опухолях больных раком, погранич ными и доброкачественными новообразованиями яичников не различалось досто верно. При этом в группе больных раком яичников установлена прямая достовер ная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли (rs=0,43;
p=0,01), тогда как у больных доброкачественными и погранич ными новообразованиями яичников этой зависимости не выявлено.
Выявлены достоверно высокие уровни ММП-2 в сыворотке крови больных с двусторонним РЯ, которые положительно коррелировали с содержанием маркера в первичной опухоли (rs=0,64;
p=0,001).
Наиболее высокие показатели ММП-2 обнаружены в сыворотке крови и опу холи при серозном РЯ, умеренной и низкой степени дифференцировки опухоли, при распространенных III и IV стадиях заболевания, при метастазах опухоли в пе чени, при диссеминации процесса по брюшине и при наличии асцита.
Показано, что содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли не зависело от гистологического строения пограничных и доброкачественных новообразований яичников. При этом, у больных раком, пограничными и доброкачественными но вообразованиями яичников сывороточные уровни СА-125 и ММП-2 не были связа ны корреляционной зависимостью, а высокие концентрации СА-125 независимо от значений ММП-2 указывали на наличие РЯ и чаще при распространенном процес се.
Содержание VEGF в сыворотке крови практически здоровых женщин было достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников (ме дианы соответственно 201 и 318 пг/мл;
р=0,001), при этом более высокие медианы VEGF выявлены в сыворотке крови больных раком, чем доброкачественными и по граничными опухолями яичников (соответственно 428, 289 и 167 пг/мл). Кроме то го, обнаружено усиление обратной связи между уровнями ММП-2 и VEGF в ткани первичной опухоли по мере увеличения содержания СА-125 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников.
Не установлено достоверных различий в содержании VEGFR-1 и VEGFR-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными опухолями яичников. Однако медиана концентрации VEGFR-1 в сыворотке крови практически здоровых женщин была достоверно выше по сравнению с больными РЯ, при этом у последних обнаружена достоверная прямая корреляционная зави симость между ММП-2 и VEGFR-1 в сыворотке крови (rs=0,4;
p=0,017), которая отсутствовала у больных доброкачественными и пограничными опухолями яични ков.
У больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 и VEGF в ткани опухоли (rs=-0,44;
p=0,0001), которая усиливалась по мере увеличения концентрации СА 125 в сыворотке крови.
Практическая значимость исследования Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение VEGF/VEGFR-1 менее 5 и уровни ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% больных доб рокачественными, у 28,6% пограничными и только у 16,1% больных РЯ (р=0,003), что может быть использовано для выявления пациенток с высоким риском злока чественного характера новообразования в яичниках (чувствительность теста 83,9%;
специфичность - 73,6%). Диагностическая ценность определения только СА-125 в сыворотке крови больных РЯ и доброкачественными новообразованиями яичников недостаточна (чувствительность теста - 89,2%;
специфичность - 35,0%).
Высокие показатели ММП-2 и VEGF выявлены в сыворотке крови у больных РЯ с ранним прогрессированием заболевания, чем у пациенток без такового.
Основные положения, выносимые на защиту 1. Уровни ММП-2 в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников достоверно не различалось, а концентрация ММП-2 в сыворотке крови боль ных доброкачественными новообразованиями яичников не отражала основные клинические характеристики заболевания (возраст, данные гинекологического анамнеза, состояние репродуктивной функции, гистологическое строение, раз мер опухоли) и не связана с сопутствующими соматическими заболеваниями.
2. Содержание ММП-2 в опухолях больных раком, пограничными и доброкачест венными новообразованиями яичников не различалось достоверно.
3. Наиболее высокие показатели ММП-2 выявлены в сыворотке крови и опухоли при серозном РЯ, умеренной и низкой степени дифференцировки опухоли, III IV стадиях заболевания, при наличии асцита. Достоверно высокие уровни ММП-2 обнаружены в сыворотке больных с двусторонним РЯ.
4. Содержание VEGF в сыворотке крови практически здоровых женщин было достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников.
При этом, не установлено достоверных различий в содержании VEGFR-1 и VEGFR-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доб рокачественными опухолями яичников 5. Медиана концентрации VEGFR-1 в сыворотке крови практически здоровых женщин была достоверно выше по сравнению с больными РЯ, при этом у по следних обнаружена достоверная прямая корреляционная зависимость между ММП-2 и VEGFR-1 в сыворотке крови, которая отсутствовала у больных доб рокачественными и пограничными опухолями яичников.
6. У больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная кор реляционная зависимость между содержанием ММП-2 и VEGF в опухоли, ко торая усиливалась по мере увеличения концентрации СА-125 в сыворотке кро ви.
7. Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение VEGF/VEGF-R1 менее 5 и уровни ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% больных доброкачественными, у 28,6% пограничными и только у 16,1% больных РЯ (р=0,003), что может быть использовано для выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках. При этом, высокие показатели ММП-2 и VEGF выявлены у больных РЯ с ранним про грессированием заболевания фоне проводимой химиотерапии.
Апробация работы Основные результаты диссертации доложены на: Российском XVI Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 6-10 апреля 2009г.);
научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 28-30 сентября 2009г.);
международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 10-11 ноября 2009г.);
XVII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 12-16 апреля 2010г.).
Материалы диссертации доложены на совместной научной конференции сотрудников кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики Московского Государственного медико-стоматологического университета, лаборатории клинической биохимии НИИ клинической онкологии РОНЦ им.
Н.Н.Блохина РАМН и кафедры биохимии Российского университета дружбы народов 12 февраля 2011 г.
Публикации результатов исследования По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, 3 из них в журналах, рекомендованных ВАК.
Структура и объем работы Диссертация изложена на 156 страницах машинописного текста, включает введение, обзор данных литературы, главу «Материалы и методы исследования», главу «Результаты собственных наблюдений», обсуждение полученных данных, выводы, список цитируемой литературы, который состоит из 52 работ отечествен ных и 215 работ зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 18 таблицами и рисунками.
Материалы и методы исследования В настоящее исследование включены 64 больных с новообразованиями яич ников, проходивших обследование и лечение в Российском онкологическом науч ном центре им. Н.Н.Блохина РАМН в период с 2008 по 2009 гг. Из них 38 (59,4%) больных РЯ, 7 (11,0%) пациенток с пограничными новообразованиями яичников и 19 (29,6%) больных с доброкачественными новообразованиями яичников. Группу контроля составили 20 практически здоровых женщин.
Всем пациенткам выполняли УЗИ малого таза, брюшной полости и забрю шинного пространства, а также допплеровское трансвагинальное УЗИ. С целью уточнения распространенности опухолевого процесса больным выполняли колоно скопию, гастроскопию и маммографию. Больным проводили также КТ и МРТ ис следование для анализа распространенности опухолевого процесса и связи опухоли с окружающими кровеносными сосудами, мочеточниками и органами малого таза.
У некоторых больных выполняли экскреторную урографию, сцинтиграфию скелета и лапароскопию для уточнения распространенности опухолевого процесса. Стади рование РЯ проводили после хирургического удаления первичной опухоли и тща тельного обследования органов малого таза, брюшной полости и забрюшинного пространства. У всех больных клинико-рентгенологический диагноз новообразова ниями яичников подтвержден данными гистологического исследования удаленной опухоли.
Характеристика больных раком яичников. В исследование включено больных РЯ в возрасте от 17 до 72 лет, средний возраст составил 51,0±2,2 года из них 16 (42,1%) в репродуктивном возрасте, 22 (57,9%) пациентки – в постменопау зе. Распределение 38 больных РЯ с учетом стадии заболевания по FIGO представ лено в таблице 1.
Таблица 1.
Распределение больных раком яичников с учетом стадии FIGO Стадия по FIGO Частота (абс. число) Частота (отн. число) 4 10,5% Ia 7 18,4% Ic 2 5,3% IIa 1 2,6% IIb 1 2,6% IIIa 2 5,3% IIIb 15 39,5% IIIc 6 15,8% IV 38 100% Всего При гистологическом исследовании опухолей яичников выявлены следующие их варианты: серозная (25/65,8%), эндометриоидная (7/13,7%) и муцинозная (2/5,2%) аденокарциномы, светлоклеточный (1/2,6%) и смешанный (3/7,8%) рак.
У 9 из 20 (45%) первичных больных опухоль имела низкую степень диффе ренцировки. Частота выявления низкой степени дифференцировки составила 2 из (18,2%) у больных с I-II стадиями и 7 из 11 (63,6%) у больных с III-IV стадиями РЯ (р=0,066). Высокая и умеренная степень дифференцировки РЯ выявлена в 7/35% и 9/45% наблюдений соответственно. У 18 больных степень дифференцировки опу холи не определена ввиду проведения неоадъювантной химиотерапии.
У 24 из 38 (63,1%) больных выявлен двусторонний РЯ, который имел строе ние серозной аденокарциномы (84,0%).
У 9 (23,7%) больных выявлен асцит объемом от 2 до 10 л (все 9 пациенток с серозной аденокарциномой яичников, у 29 (76,3%) - асцит не выявили.
Всем 38 больным РЯ было проведено стандартное хирургическое лечение:
удаление матки с придатками и резекция большого сальника. В послеоперацион ном периоде все они получали адъювантную химиотерапию. У 18 больных прове дена неоадъювантная химиотерапия.
Характеристика больных пограничными опухолями яичников. Возраст больных пограничными опухолями яичников колебался от 23 до 63 лет, составляя в среднем 42,0±9,5 лет, из них у 4 (57,1%) была сохранена репродуктивная функция и 3 (42,9%) были в постменопаузе. У 1 пациентки (14,3%) опухоль имела серозный вариант строения, у 5 (71,4%) – муцинозный, у 1 (14,3%) – эндометриоидный. Всем больным проведено хирургическое удаление опухоли.
Характеристика больных доброкачественными новообразованиями яичников. Возраст больных доброкачественными новообразованиями яичников колебался от 17 до 78 лет, составляя в среднем 51,4±4,6 лет. 10 больных этой груп пы были в репродуктивном периоде и 9 – в постменопаузе. У 6 (31,5%) больных выявлена доброкачественная эндометриоидная опухоль яичников, у 5 (26,3%) – се розная аденома, у 4 (21%) – гранулезоклеточная опухоль, у 3 (15,7%) – дермоид, по 1 (5,2%) наблюдению выявлены муцинозна аденома и тератома. 7 (36,8%) больным доброкачественными новообразованиями яичников выполнена односторонняя ад нексэктомия, 1 (5,2%) – резекция одного яичника, 11 (57,8%) – аднексэктомия с ре зекцией контрлатерального яичника.
Таблица 2.
Содержание Са-125 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников разных групп Новообразования Кол-во СА-125, Ед/мл, Р медиана (квартили) яичников больных Доброкачественные1 19 69,0 (14,0-140) Пограничные2 7 98,1 (21,1-447) 1vs3=0, Злокачественные3 38 236,0 (70,9-414) Содержание СА-125 в сыворотке крови было достоверно ниже при доброкаче ственных новообразованиях яичников и повышалось у больных пограничными опухолями и РЯ (р=0,005) (табл. 2). Высокие значения СА-125 (100 Ед/мл) обна ружены у 71% больных РЯ (чаще при серозной аденокарциноме яичников).
Специальные биохимические методы исследования Специальные биохимические исследования опухолевых маркеров (ММП-2, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2) проводили в сыворотке крови до лечения. Для полу чения сыворотки венозную кровь, взятую в чистую сухую пробирк, оставляли на 30 мин при комнатной температуре для формирования сгустка, затем центрифуги ровали в течение 30 мин на холоду при 4оС при 3500 об/мин при комнатной темпе ратуре. Надосадочную фракцию (сыворотку) разливали на аликвоты по 0,5 мл и хранили при -70оС до проведения иммуноферментного анализа.
Для проведения иммуноферментного анализа в опухолях и неизмененных тканях яичников получали их экстракты как описано ранее (Е.С.Герштейн и соавт., 2007). Образцы тканей лизировали в соотношении 1:3 в буфере следующего соста ва: 20 мМ Трис-НСl (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ ЭГТА, 1% Тритон X-100, 2,5 мМ пирофосфат натрия, 1 мМ -глицерофосфат, 1 мМ ортованадат на трия, 1 мкг/мл леупептина. Полученные лизаты центрифугировали в течение мин при 20000 об/мин, 4°С (центрифуга OptimaTM TLX, Beckman, США).
ММП-2 определяли с помощью стандартного набора реактивов для прямого иммуноферментного анализа: «Human/Mouse/Rat MMP-2 (total)», (Quantikine®, «R&D; Systems», США) в соответствии с инструкциями производителя. Измерения проводили на автоматическом универсальном ридере для микропланшет ELX (Bio-Tek Instruments, Inc., США). Концентрацию ММП-2 в сыворотке крови выра жали в нг/мл, в тканях опухолей – в нг/мг общего белка, определенного по методу Лоури.
Концентрацию VEGF, VEGFR-1 и VEGFR-2 определяли в сыворотке крови и опухолях яичников с помощью стандартных наборов реактивов для прямого им муноферментного анализа: «Human VEGF Immunoassay», «Human VEGFR1 Immu noassay», «Human VEGFR2 Immunoassay» (Quantikine®, R&D; Systems, США) в со ответствии с инструкциями производителя. Концентрацию исследованных показа телей выражали в сыворотке крови: VEGF - в пг/мл, VEGFR-1 – в нг/мл, VEGFR- – в нг/мл;
в ткани опухолей: VEGF – в пг/мг общего белка, VEGFR-1 – нг/мг обще го белка;
VEGFR-2 – в пг/мг общего белка, определенного по методу Лоури.
Концентрацию опухолевого маркера СА-125 проводили иммуноферментным методом (ELISA) в сыворотке крови до лечения и в процессе проводимой терапии с помощью стандартных наборов реактивов фирмы («Roche», Швейцария). Измере ния проводили на электрохемилюминисцентном анализаторе «ЕС-300» фирмы («Roche», Швейцария).
При подозрении на гранулезоклеточную опухоль яичника у больных иммуно ферментным методом определяли концентрацию ингибина В в сыворотке крови реактивами фирмы («Diagnostic Systems Laboratories, Inc.» «DSL», США).
Статистические методы исследования При выборе статистических процедур учитывали методологические требова ния Международного конгресса по гармонизации GGP «Статистические принципы для клинических исследований». Все вычисления проводили на персональном компьютере с помощью пакета статистических программ «Statistica для Windows» и SPSS.
Результаты собственных исследований Содержание ММП-2 в сыворотке крови оценено у 64 больных новообразова ниями яичников, а также у 54 пациенток в опухоли (табл. 3).
Таблица 3.
Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразования ми яичников и в контроле Обследованные группы ММП-2 Новообразования яичников Контроль Доброкачественные Пограничные Злокачественные ММП-2 в сыворотке крови, нг/мл 8 19 7 N 256 229 244 Медиана 190-281 188-245 189-355 172- Квартили 161-303 102-265 182-484 105- Пределы ММП-2 в опухоли, нг/мг белка - 19 7 N - 28,4 19,2 15, Медиана - 15,3-42,1 14,3-45,6 10- Квартили - 8,6-106 4,8-49,7 2,9-86, Пределы Примечание: в опухоли РДНЯ-РЯ=0,06.
Следует указать, что распределения обоих показателей отличались от распре деления Гаусса, поэтому в качестве центральной характеристики применяли ме диану, а при сравнении использовали непараметрические критерии. Содержание ММП-2 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников разных групп и в контроле не различалось достоверно (р0,05) (табл. 3). Установлено, что у больных пограничными опухолями и РЯ чаще выявляли значения ММП-2 в сыворотке кро ви более 303 нг/мл (то есть были выше, чем в контроле), соответственно 3 из 7/42,9% (р=0,006) и 10 из 38/15,8% (р=0,07), по сравнению с группой больных доб рокачественными новообразованиями яичников (0%).
Кроме того, значения ММП-2 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников были ниже таковых в контроле (менее 161 нг/мл): у 22,6% больных РЯ, у 5,3% больных доброкачественными новообразованиями и у 0% больных погранич ными опухолями яичников.
Эти данные показывают, что значения ММП-2, отличные от нормы, достовер но чаще выявляли у больных РЯ (38,7%) и пограничными опухолями (42,9%), реже при доброкачественных новообразованиях яичников (5,3%) (р=0,02).
частота выявления 100% ММП-2 вне пределов 16,1% нормы в сыворотке 42,9% 80% крови, % 60% 303 нг/мл 61,3% 94,7% 161-303 нг/мл 40% 161 нг/мл 57,1% 20% p=0,02 22,6% 5,3% 0% 2 доброкачественные пограничные РЯ первичные группы больных новообразованиями яичников Рис. 1. Частота выявления уровней ММП-2 выше пределов нормы в сыворот ке крови больных новообразованиями яичников разных групп.
Содержание ММП-2 в опухоли больных новообразованиями яичников коле балось в широких пределах от 2,9 до 115 нг/мг белка и было наибольшим у боль ных доброкачественными новообразованиями яичников и наименьшим у больных РЯ (медианы соответственно 28,4 и 15,5 нг/мг белка;
p=0,06 - тенденция к разли чию).
Определили коэффициент соотношения содержания ММП-2 в сыворотке кро ви к ММП-2 в опухоли. Так, у 18 больных доброкачественными новообразования ми яичников медиана соотношения равнялась 7,9, у 7 больных пограничными но вообразованиями яичников была выше и составила 13,2, а у 28 первичных больных РЯ медиана соотношения равнялась 11,3. Различия выше указанного коэффициента во всех группах больных были статистически недостоверными.
В группе больных РЯ установлена прямая достоверная корреляционная зави симость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли (rs=0,43;
p=0,01). Тогда как в группе больных доброкачественными и пограничными ново образованиями яичников этой зависимости не выявлено (rs=-0,31;
p=0,13). Следо вательно, у больных РЯ высоким значениям ММП-2 в опухоли чаще соответство вали высокие показатели фермента в сыворотке крови.
Подводя итоги проведенному анализу содержания ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников разных групп, отметим, что ме диана содержания ММП-2 в сыворотке крови больных РЯ была наименьшей, а в контроле – наибольшей. При этом, медиана содержания ММП-2 в опухоли боль ных доброкачественными новообразованиями яичников была наибольшей, а при РЯ - наименьшей (тенденция к различию). Вместе с тем, только в группе больных РЯ установлена прямая достоверная корреляционная связь между содержанием ММП-2 в опухоли и сыворотке крови (rs=0,43;
p=0,01).
Таблица 4.
Содержание ММП-2 в сыворотке крови больных новообразованиями яични ков с учетом максимального размера опухоли Размер, см Доброкачественные Пограничные Злокачественные n ММП-2, n ММП-2, N ММП-2, нг/мл нг/мл нг/мл (медиана- (медиана- (медиана квартили) квартили) квартили) 5 7 229 (190-245) 2 248 (182-313) 4 197 (164-212) 4 143 (105-155) 5-9 6 241 (208-254) 1 223* 10 4 212 (186-238) 4 300 (217-420) 6 209 (172-235) 24 232 (192-270) Двустороннее 2 146 (102-189) - Примечание: *абсолютное значение;
p1-2=0,01.
Содержание ММП-2 как в сыворотке крови, так и в опухоли не было связано значимо с возрастом больных новообразованиями яичников всех обследованных групп, а также с наличием сопутствующих соматических заболеваний. Вместе с тем, отмечена тенденция к повышению ММП-2 в сыворотке крови с увеличением размера первичной опухоли у больных доброкачественными и пограничными но вообразованиями яичников, а в группе больных с двусторонним РЯ отмечено дос товерно высокие уровни ММП-2 в сыворотке крови (табл. 4). При этом выявленная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли усиливалась у больных РЯ с двусторонним опухолевым поражением до значения (rs=0,65;
p=0,001).
Анализ уровней ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных доброкачест венными и пограничными новообразованиями яичников с учетом гистологического строения опухоли не выявил достоверных различий в выше указанном маркере.
Вместе с тем отмечены высокие значения ММП-2 в опухоли больных серозным РЯ (табл. 5).
Таблица 5.
Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных РЯ с учетом его гистологического варианта строения ММП-2 ММП- Гистологический в сыворотке крови, в опухоли, вариант строения нг/мл нг/мг белка РЯ Медиана, квартили Медиана, квартили n n Серозный 25 232 (191-270) 23 22,7 (13,6-45,8) Эндометриоидный 7 185 (164-248) 3 6,3 (5,0-7,9) Муцинозный 2 198* 1 11,9* Смешанный рак 3 203* (126-204) 1 37,0* Светлоклеточный рак 1 212* - Примечание: *абсолютное значение;
все различия недостоверны.
При этом, в сыворотке крови 40% больных серозной аденокарциномой яични ков выявлены значения ММП-2, отличные от таковых в контроле.
Отметим, что прямая корреляционная зависимость между ММП-2 в сыворот ке крови и опухоли больных РЯ была характерна только для поздних IIIb-IV стадий (r=0,68;
p=0,001). Тогда как у больных I-II стадий РЯ зависимость была недосто верной, как и у больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников.
Наибольшее содержание ММП-2 обнаружено при IV стадии РЯ как в сыво ротке крови (медиана 285 нг/мл), так и в опухоли первичных больных (медиана 22,9 нг/мг белка) (табл. 6).
Следует указать, что уровни ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных РЯ были наиболее низкими при высокодифференцированных новообразованиях.
Таблица 6.
Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных РЯ с учетом стадии заболевания по FIGO Стадия ММП-2 в сыворотке крови, ММП-2 в опухоли, нг/мг белка РЯ нг/мл N n Медиана, квартили Медиана, квартили 4 192 (168-213) 2 11,3 (7,9-14,6) Ia 7 155 (143-202) 7 11,9 (6,3-26,6) Ic 2 204 (203-204) 1 37, IIa 1 160* 1 15,4* IIb 1 269* - IIIa 2 281 (195-366) 2 18,7 (9,0-28,4) IIIb 15 235 (187-270) 12 17,9 (12,1-50,1) IIIc 6 285 (211-359) 3 22,9 (13,4-76,9) IV Примечание: *абсолютное значение;
в сыворотке крови р2vs7,8=0,036.
Наименьшие значения ММП-2 в сыворотке крови установлены у больных РЯ без асцита и достоверно более высокие при наличии такового (медианы 197 и нг/мл соответственно;
р=0,006). Также заметно выше было содержание ММП-2 в опухоли больных РЯ с асцитом (медианы 23,7 и 15,0 нг/мг белка соответственно).
Установлена тенденция к более высоким значениям ММП-2 в сыворотке кро ви больных РЯ при выявлении опухолевых клеток в асцитической жидкости или в смывах из брюшной полости (р=0,05 Mann-Whitney U test). При этом, корреляци онная зависимость между ММП-2 в опухоли и сыворотке крови усиливалась у больных РЯ с выявленными опухолевыми клетками в смывах из брюшной полости до значения (rs=0,6;
p=0,004).
На рисунке 2 представлена частота выявления значений ММП-2 в опухоли больных РЯ, лежащих вне пределов условной нормы при различных признаках процесса. При неблагоприятных факторах чаще выявляли высокие значения ММП 2.
100% 9,5% 13,6% 13,2% 14,3% 15,4% 22,2% 25,0% 33,3% 33,3% 80% ММР2303 пг/мл 60% ММР2 161-303 пг/мл 40% ММР2160пг/мл 20% 30,7% 28,6% 30,7% 24,1% 22,7% 14,3% 10,3% 6,3% 0% нет есть нет есть нет есть высокая умер./низк. I-II III-IV Опухолевые клетки асцит диссеминация степень стадия РЯ дифференцировки Рис. 2. Частота выявления ММП-2 в сыворотке крови больных РЯ вне преде лов условной нормы при различных клинических признаках.
У больных новообразованиями яичников всех групп значения СА-125, опре деленные в сыворотке крови, не были связаны со значениями ММП-2 в сыворотке крови и опухоли корреляционной зависимостью. Однако, несмотря на то, что дис персионный анализ не обнаружил связи СА-125 с содержанием ММП-2 в сыворот ке крови и опухоли, в то же время, одновременное определение СА-125 и ММП-2 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников разных групп выявило оп ределенные закономерности. Так, для больных РЯ поздних III-IV стадий и погра ничными новообразованиями яичников могут быть характерны при относительно невысоких значениях СА-125 в сыворотке крови (200 Ед/мл) высокие уровни ММП-2 (303 нг/мл). Очень высокие показатели СА-125 в сыворотке крови неза висимо от уровня ММП-2 указывают на наличие РЯ (чаще у пациенток с распро страненным процессом).
Связь показателей ММП-2 с уровнями VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2 в сы воротке крови и опухоли больных новообразованием яичников.
Проведен анализ содержания VEGF и его рецепторов 1 и 2 типа в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников разных групп (табл. 7).
Содержание VEGF в сыворотке крови больных РЯ было недостоверно, а в ткани опухоли достоверно выше, чем у больных доброкачественными новообразования ми яичников. Содержание рецепторов (VEGFR-1, VEGFR-2) в указанных группах статистически не различалось. При этом, уровни VEGF в сыворотке крови в группе контроля были достоверно ниже, чем у больных РЯ (p0,001), и достоверно ниже, чем у больных доброкачественными новообразованиями яичников (p0,01).
Таблица 7.
Содержание VEGF и его рецепторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников разных групп Новообразования яичников (группы) Доброкачественные Пограничные Злокачественные Показатели Медиана, Медиана, Медиана, n N n квартили, квартили, квартили, пределы пределы пределы В сыворотке крови 289 167 VEGF* 19 168-465 7 135-273 38 252- (пг/мл) 68-872 129-365 16- 86 99,7 VEGFR- 17 80,2-108 7 76,2-113 36 76,8- (нг/мл) 60,4-118 69,1-153 44,3- 10,2 12,3 9, VEGFR- 19 5,8-11,3 7 12-13,3 38 8,2-10, (нг/мл) 0-16,2 5,5-15,5 6,5-15, В ткани опухоли 2,3 208 VEGF** 18 0-31 7 140-780 34 9,9- (пг/мг белка) 0-646 23-2459 0- 751 707 VEGFR- 17 549-864 7 254-805 34 527- (нг/мг белка) 248-1260 121-951 301- 171 184 VEGFR- 18 98-254 7 74,3-234 35 105- (пг/мг белка) 39,9-735 0-413 4,1- Примечание: *р1-3=0,06 Median test;
**р1-2,3=0,004 Kruskal-Wallis test.
Показатели VEGFR-1 в сыворотке крови женщин группы контроля составили по медиане 97,1 нг/мл, (нижняя и верхняя квартили равнялись соответственно 69, и 118 нг/мл, пределы колебания составили 50-130 нг/мл) и были достоверно выше по сравнению с группой больных РЯ (р0,01).
Концентрация VEGFR-2 в сыворотке крови женщин группы контроля не раз личалась достоверно по сравнению с группами больных новообразованиями яич ников. Не выявлено корреляционной зависимости между ММП-2 и VEGF, опреде ленными в сыворотке крови больных новообразованиями яичников разных групп.
В то же время, у больных новообразованиями яичников всех групп обнаруже на обратная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 и VEGF, определенными в опухоли (rs=-0,44;
p=0,0001). Эти данные показывают, что в опу холи больных новообразованиями яичников независимо от характера новообразо вания при высоких значениях одного из выше указанных маркеров чаще выявляли низкие значения другого. Выявленная закономерность отсутствовала у больных новообразованиями яичников всех групп с концентрациями сывороточного СА- менее 35 Ед/мл (r=0,1), была слабой и недостоверной у больных со значениями СА 125 от 35 до 100 Ед/мл (rs=-0,27;
p=0,4) и была наиболее выраженной у больных с повышенными значениями СА-125 (от 100 Ед/мл и более) (rs=-0,59;
p=0,001). Стало быть, обратная связь между содержанием ММП-2 и VEGF в опухоли усиливалась по мере увеличения концентрации СА-125 в сыворотке крови больных новообразо ваниями яичников.
У больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яични ков не выявлено линейной зависимости между показателями ММП-2 и VEGFR-1, определенными в сыворотке крови (r=0). В то же время в группе больных РЯ обна ружена достоверная прямая корреляционная зависимость между этими показате лями (rs=0,4;
p=0,017). Зависимость была выражено линейной у больных с I стади ей РЯ (rs=0,88;
p=0,0016), но отсутствовала у пациенток с IV стадией (r=-0,2;
p=0,8).
Зависимость между ММП-2 и VEGFR-1 также была более тесной у больных без асцита, без метастазов в большом сальнике, при отсутствии опухолевых клеток в смывах из брюшной полости, что вероятно, указывает на компенсаторный характер данной зависимости.
Не выявлено корреляционной зависимости между содержанием ММП-2 и VEGFR-2, определенными в сыворотке крови и опухоли больных новообразова ниями яичников всех групп.
Диагностическая ценность и коэффициентов соотношений VEGF VEGF/VEGFR-1, VEGF/VEGFR-2, определенных в сыворотке крови больных ново образованиями яичников, оказалась недостаточной (точность распознавания менее 70%). Отметим, что частота выявления сывороточного маркера СА-125 выше нор мы (более 35 Ед/мл) составила 65,0% у 20 больных доброкачественными, 71,4% - у 7 больных пограничными и 89,2% - у 37 больных РЯ (р=0,08). Таким образом, ди агностическая ценность одного СА-125 при новообразованиях яичников также ока залась недостаточной.
Эти данные указывают, что все рассматриваемые показатели (СА-125, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2), по отдельности не могут однозначно характеризовать какую либо группу больных новообразований яичников. Тем не менее, использование 3-х маркеров, определенных в сыворотке крови до лечения (VEGF, VEGFR-1, MMП-2) повышает в дополнение к СА-125 вероятность выявления злокачественного харак тера новообразования яичников. Так, благоприятные значения СА-125 менее Ед/мл, VEGF/VEGFR-1 менее 5 и ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выяв лены у 73,3% (11 из 15) больных доброкачественными, у 28,6% (2 из 7) погранич ными и только у 16,1% (5 из 31) больных РЯ (р=0,003).
Полученные данные позволяют разработать решающее правило для определе ния злокачественного характера выявленного новообразования яичника, а опреде ление маркеров в сыворотке крови можно проводить в 2 этапа: обязательный этап определение СА-125 и VEGF/VEGFR-1, а при их благоприятных уровнях – допол нительное определение и ММП-2.
Подводя итоги анализа связи ММП-2 с VEGF и его рецепторами VEGFR-1 и VEGFR-2, отметим: у больных новообразованиями яичников всех групп обнаруже на обратная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 и VEGF, определенными в ткани опухоли (rs=-0,44;
p=0,0001);
у больных новообразования ми яичников всех групп с повышенными уровнями СА-125 в сыворотке крови (бо лее 100 Ед/мл) зависимость между ММП-2 и VEGF в ткани опухоли усиливалась, но отсутствовала у больных с концентрациями СА-125 в пределах нормы;
для больных раком яичников с I-II стадиями характерна прямая корреляционная зави симость между содержанием ММП-2 и VEGFR-1 (rs=0,88;
p=0,0016) в сыворотке крови;
диагностическая ценность определения СА-125 в сыворотке крови больных злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников недоста точна (чувствительность - 89,2%;
специфичность - 35,0%);
совместное определение СА-125, VEGF и VEGFR-1, а также ММП-2 в сыворотке крови больных новообра зованиями яичников позволяют дифференцировать злокачественный характер но вообразования в яичнике от доброкачественного (чувствительность - 83,9%, спе цифичность - 73,6%).
Выводы Уровни ММП-2 в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных 1.
раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников не раз личалось, их медианы составили соответственно 256, 229, 244 и 208 нг/мл. Досто верно высокие уровни сывороточного ММП-2 обнаружены при двустороннем раке яичников.
Показатели ММП-2 в опухолях больных раком, пограничными и доброкаче 2.
ственными новообразованиями яичников не различались. При этом в группе боль ных раком яичников установлена прямая достоверная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли (rs=0,43;
p=0,01), у боль ных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников этой за висимости не выявлено.
Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли не зависело от гистологи 3.
ческого строения пограничных и доброкачественных новообразований яичников и было наиболее высоким при серозном раке яичников с умеренной и низкой степе нью дифференцировки опухоли, при III-IV стадиях заболевания и наличии асцита.
Показатели ММП-2 в сыворотке крови больных доброкачественными новообразо ваниями яичников не отражали основные клинико-морфологические характеристи ки заболевания: возраст, состояние репродуктивной функции, гистологическое строение и размер опухоли.
У больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями 4.
яичников уровни СА-125 и ММП-2 в сыворотке крови не были связаны корреляци онной зависимостью, а высокие концентрации СА-125 независимо от значений ММП-2 указывали на наличие рака яичников.
Содержание VEGF в сыворотке крови практически здоровых женщин было 5.
достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников (ме дианы соответственно 201 и 318 пг/мл;
р=0,001), при этом более высокие медианы VEGF выявлены в сыворотке крови больных раком, чем доброкачественными и по граничными опухолями яичников (соответственно 428, 289 и 167 пг/мл). У боль ных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная корреляцион ная зависимость между содержанием VEGF и ММП-2 в опухоли (rs=-0,44;
p=0,0001), которая усиливалась по мере увеличения концентрации сывороточного СА-125.
Не установлено достоверных различий в содержании VEGFR-1 и VEGFR-2 в 6.
сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными опухолями яичников. Однако медиана концентрации VEGFR-1 в сыворотке крови практически здоровых женщин была достоверно выше, чем у больных раком яич ников, при этом у последних обнаружена достоверная прямая корреляционная за висимость между ММП-2 и VEGFR-1 в сыворотке крови (rs=0,4;
p=0,017), которая отсутствовала у больных доброкачественными и пограничными опухолями.
Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение VEGF/VEGFR-1 менее 5 и 7.
уровни ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% больных доб рокачественными, у 28,6% пограничными и только у 16,1% больных раком яични ков (р=0,003), что может быть использовано для выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках (чувствитель ность теста - 83,9%, специфичность - 73,6%).
Печатные работы 1. Дигаева М.А., Высоцкий М.М., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Аббасова С.Г., Манухин И.Б., Тулеуова А.А., Липкин В.М. Сравнительный анализ уровней рас творимого Fas у больных раком и доброкачественными новообразованиями яични ков // В материалах XVI Российского национального конгресса «Человек и лекар ство» (Москва, 6-10 апреля 2009г.).-2009.-с.86.
2. Герштейн Е.С., Левкина Е.С., Дигаева М.А., Крюк Ю.В., Кушлинский Д.Н.
Фактор роста эндотелия сосудов и его рецепторы 1 и 2 типа в опухолях и сыворот ке крови больных новообразованиями яичников / Труды научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохране ния России до 2020 года» (Москва, 28-30 сентября 2009г.) // М.-«Лабора».-2009. с.31-32.
3. Дигаева М.А., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Высоцкий М.М., Аббасова С.Г., Кузнецов В.В. Фактор роста эндотелия сосудов и растворимый Fas в сыворотке крови больных новообразованиями яичников // В материалах Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва 10-11 ноября 2009г.).-М.-ММА им. Сеченова И.М.-2009.-с.81-82.
4. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Кушлинский Д.Н., Аббасова С.Г., Кузнецов В.В., Лактионов К.П. Маркеры ангиогенеза, Fas зависимого апоптоза и лептин в сыворотке крови больных раком и доброкачест венными новообразованиями яичников // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.-2009.-№6.-с.25-29.
5. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Кушлинский Д.Н., Аббасова С.Г., Лактионов К.П., Ермилова В.Д., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Манухин И.Б. sFas, лептин и VEGF в сыворотке крови больных раком и доброкачественными новообразованиями яич ников // Бюлл. Экспер. Биол. Мед.-2009.-том 148, №11.-с.564-568.
6. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Крюк Ю.В., Шарашинидзе О.А., Бахоева К.А., Кушлинский Д.Н., Галдава Д.Г., Манухин И.Б., Адамян Л.В. Сывороточные маркеры у больных новообразованиями яичников // В материалах XVII Российско го национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 12-16 апреля 2010г.). М.-2010.-с.70.
7. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Терешкина И.В., Крюк Ю.В., Кушлинский Д.Н., Лактионов К.П., Кузнецов В.В., Манухин И.Б. Сывороточные молекулярно биологические маркеры у больных новообразованиями яичников // Вопросы био логической, медицинской и фармацевтической химии.-2010.-№4.-с.20-26.
Аннотация Проведено сравнительное иммуноферментное определение содержания био химических маркеров (ММП-2, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2, СА-125) в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообра зованиями яичников. Уровни ММП-2 в опухоли и сыворотке крови больных раком, пограничными, доброкачественными новообразованиями яичников и у здоровых женщин достоверно не различалось. Концентрация ММП-2 в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников не отражала основные клинико-морфологические факторы заболевания. Выявлены достоверно высокие уровни ММП-2 в сыворотке крови больных с двусторонним раком яичников. Наи более высокие показатели ММП-2 обнаружены в сыворотке крови и опухоли при серозном раке яичников, умеренной и низкой степени дифференцировки опухоли, III-IV стадиях и при наличии асцита. Содержание VEGF в сыворотке крови здоро вых женщин достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников, а более высокие медианы VEGF выявлены у больных раком, чем добро качественными и пограничными опухолями яичников. Не установлено достовер ных различий в содержании VEGFR-1 и VEGFR-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников, однако медиана концентрации VEGFR-1 в сыворотке крови здоровых женщин достоверно выше, чем у больных раком яични ков. Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение VEGF/VEGFR-1 менее 5 и уровни ММП-2 в пределах 160-303 нг/мл выявлены у 73,3% больных доброкачест венными, у 28,6% пограничными и у 16,1% больных раком яичников, что может быть использовано для выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках (чувствительность теста - 83,9%;
специ фичность - 73,6%).
Summary Comparative immunoenzymatic determination of biochemical markers (MMP-2, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2, СА-125) was performed in blood serum and tumors of pa tients with malignant, borderline and benign ovarian neoplasms. No differences were found between MMP-2 levels in the tumors and sera of cancer, benign or borderline tu mor patients, and in control group. MMP-2 concentration in the serum of benign ovarian tumor patients was not associated with the main clinico-pathologic features of the dis ease. Significant increase of MMP-2 levels was revealed in the sera of patients with bi lateral ovarian cancer. The highest MMP-2 values were found in blood serum and tumors in serous cancer, moderate and low tumor differentiation grade, stage III-IV disease, and in patients with ascites. VEGF concentration in the serum of healthy women was signifi cantly lower than in the combined group of ovarian neoplasms patients, and higher me dian VEGF level was revealed in ovarian cancer than in benign and borderline tumor pa tients. No significant differences were found for serum and tumor VEGFR-1 and VEGFR-2 between patients with various ovarian neoplasms, but median VEGFR-1 con centration was significantly higher in the serum of healthy women as compared to ovar ian cancer patients. СА-125 levels below 100 U/ml, VEGF/VEGFR-1 ratio 5, and MMP-2 levels in the range of 160-303 ng/ml were found in 73.3% of benign tumor pa tients, 28.6% of borderline tumor and 16.1% of ovarian cancer patients. This observation may be applied for discrimination of patients with high risk of malignant character of ovarian lesion (sensitivity – 83.9%;
specificity – 73.6%).