Морфофункциональное состояние тканевых базофилов при туберкулезе легких
На правах рукописи
Бочкарева Ольга Петровна Морфофункциональное состояние тканевых базофилов при туберкулезе легких 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология 14.00.43 - пульмонология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Томск – 2003
Работа выполнена в Сибирском государственном медицинском университете
Научный консультант:
доктор медицинских наук, профессор Красноженов Евгений Павлович Научный консультант:
член-корр.РАМН, доктор медицинских наук, профессор Стрелис Айвар Карлович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук Козлов Юрий Анатольевич доктор медицинских наук, профессор Зеневич Михаил Викентьевич.
Ведущая организация – Новосибирская государственная медицинская акаде мия
Защита состоится «_» 2003 г. в ч. на заседании диссертаци онного совета Д 208.096.03. в Сибирском государственном медицинском университете (634050, г. Томск, Московский тракт, 2)
С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета (г.Томск, пр. Ле нина, 107)
Автореферат разослан «_»_ 2003 г.
Ученый секретарь диссертационного совета Герасимов А.В.
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы. Тканевые базофилы (тучные клетки, лаброци ты, мастоциты) издавна привлекали внимание исследователей. Они являются обязательным компонентом соединительной ткани, встречаются везде [То милов Ф.А., 1985;
Проценко В.А. и соавт., 1987;
Fernex M., 1986;
Blair R.J.
е.а., 1997;
Fernex M., 1986]. Важнейшей особенностью этих клеток является большое разнообразие продуктов их секреции, что и обусловливает их поли функциональность. Тканевые базофилы (ТБ) участвуют в регуляции микро циркуляции, трофики тканей, в размножении, миграции и функции клеток и поэтому рассматриваются как регуляторы тканевого гомеостаза малого ра диуса действия [Юрина Н.А и соавт., 1990;
Лиднер Д.П. и соавт., 1996;
Коро лев Ю.Н., 1997;
Евтеева М.С. и соавт., 1999].
ТБ способны вырабатывать ряд цитокинов, влияющих на физиологиче ские, иммунологические и патологические процессы [Дыгай А.М. и соавт., 1992;
Ponvert C. е.а., 1993;
Dumitrascu D., 1996]. Активация ТБ осуществля ется как иммунологическими, так и неиммунологическими активаторами.
При этом тучные клетки способны высвобождать как ранее синтезирован ные, так и вновь синтезируемые медиаторы: вазоактивные и хемотаксиче ские вещества, ферменты и протеогликаны [Проценко В.А. и соавт., 1987;
Liauw L. е.а., 1985;
Marone G., 1988].
Многочисленная литература, посвященная тканевым базофилам обоб щена в ряде монографий и обзоров [Чернух А.М., 1979;
Адо А.Д., 1980;
Ус пенский В.И. и соавт., 1980;
Серов В.В. и соавт., 1981;
Гущин И.С., 1983;
Красноженов Е.П., 1996;
Ponvert C. е.а., 1993;
Dumitrascu D., 1996]. Хотя к настоящему времени достаточно хорошо известна их морфология (в том чис ле и ультраструктура и цитохимия), изучены морфологические аспекты функционирования, клетки по-прежнему «загадочны», так как ряд важных вопросов функций тканевых базофилов остается неясным.
Существенный интерес, в настоящее время, представляет получение комплексной морфофункциональной характеристики тканевых базофилов и изучение основных закономерностей их реакций при туберкулезном процес се.
Туберкулез является одной из самых актуальных проблем современно го здравоохранения. В России в период с 1991 по 1996 г.г. заболеваемость всеми формами туберкулеза возросла в 1,5 раза и в 2001 г. составила 85,5 на 10 000 человек [Шевченко Ю.Л. и соавт., 2001]. Напряженная эпидемиологи ческая ситуация по туберкулезу характеризуется ростом числа легочных и внелегочных форм туберкулеза, высокой смертностью (в 2000 г. туберкулез явился основной причиной смерти от инфекционных заболеваний), эпидеми ей полирезистентного туберкулеза, высокой заболеваемостью мигрантов и лиц, находящихся в учреждениях пенитенциарной системы, а так же ежегод ным ростом заболеваемости лиц, контактировавших с больными [Иванова А.А. и соавт., 2002]. Эффективность лечения больных туберкулезом не высо ка, ежегодно остается большое число неизлеченными больных – источников заражения здоровой части населения, не снижается число рецидивов тубер кулеза (10-11 тыс. больных с рецидивом ежегодно) [Шилова М.В., 2001].
Принимая во внимание способность ТБ непосредственно продуциро вать вещества, обладающие широким спектром действия на различные функ ции организма (гистамин, гепарин, серотонин, простагландины и др.), а так же вступать в кооперацию с другими клетками (макрофаги, нейтрофилы, эо зинофилы и др.), исследование ТБ при туберкулезном процессе представляет значительный интерес.
Цель исследования. Изучить морфологию и функциональную активность ткане вых базофилов при туберкулезном процессе.
Задачи исследования:
1. Изучить реакцию тканевых базофилов у больных с множественными туберкулемами легких и фиброзно-кавернозным туберкулезом.
2. Исследовать морфофункциональное состояние тканевых базофилов у больных с кистами легких.
3. Исследовать морфологическую характеристику тканевых базофилов при туберкулезе легких, вызванном лекарственно чувствительными и лекар ственно устойчивыми микобактериями.
4. Определить морфологическую и функциональную активность ткане вых базофилов при указанной патологии в зависимости от удаленности от очага туберкулезного поражения.
5. Изучить показатели противоинфекционной резистентности организ ма при туберкулезном процессе.
Научная новизна работы. В результате проведенных исследований:
впервые показаны различия в морфофункциональных характеристиках ТБ у больных с множественными туберкулемами и фиброзно-кавернозной формой туберкулеза легких;
впервые установлены изменения показателей количественных, морфо логических и функциональных характеристик ТБ у больных с кистами лег ких;
впервые, используя комплекс морфофункциональных методов, прове ден анализ изменений реакции ТБ при туберкулезном процессе, вызванном лекарственно чувствительными и лекарственно устойчивыми микобактерия ми;
впервые показана выраженная реакция ТБ на туберкулин у больных туберкулезом легких, что доказывает участие этих клеток в противотуберку лезной защите.
Практическая значимость. Результаты исследований указывают на су ществование выраженных изменений показателей морфофункционального статуса ТБ у больных туберкулезом легких.
Показана возможность использования морфологических параметров и функциональных характеристик ТБ как критериев оценки состояния проти вотуберкулезной защиты.
Положения, выносимые на защиту. При туберкулезе легких морфо функциональное состояние ТБ характеризуется увеличением количественно го содержания, повышением их функциональной активности вне зависимо сти от лекарственной резистентности возбудителя.
Отмечено, что при множественных туберкулемах легкого изменение морфофункционального состояния ТБ значительнее выражены, чем при фиб розно-кавернозной форме.
Выраженная реакция ТБ на туберкулин у больных туберкулезом дока зывает участие этих клеток в противотуберкулезной защите.
Апробация работы. Основные положения работы докладывались и об суждались на юбилейной научно-практической конференции с международ ным участием «Новые технологии во фтизиатрии», посвященной 30-летию Томской областной туберкулезной клинической больницы и 60-летию со дня рождения член-корреспондента РАМН Стрелиса А.К. (Томск,2002), научно практической конференции «Современные аспекты биологии и медицины» (Томск, 2002), на научных семинарах кафедры микробиологии Сибирского государственного медицинского университета (2000-2002).
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, характери стики материала и методов исследований, описания результатов и их обсуж дения, выводов, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 12 рисунками. Список литературы включает 94 отечествен ных и 42 зарубежных источников. Результаты исследований получены и про анализированы лично автором.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ СОБСТВЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ Исследование проводились на базе кафедры микробиологии Сибирского государственного медицинского университета, Областной ту беркулезной клинической больницы и Областной клинической больницы.
Обследовалось 53 больных туберкулезом и 10 больных с кистой легко го (группа сравнения).
Все обследуемые были разделены на следующие группы ( табл. 2):
- группа больных с множественными туберкулемами легких с лекар ственно чувствительными микобактериями;
- группа больных с множественными туберкулемами легких с лекар ственно устойчивыми микобактериями;
- группа больных с фиброзно-кавернозным туберкулезом легких с ле карственно чувствительными микобактериями;
- группа больных с фиброзно-кавернозным туберкулезом легких с ле карственно устойчивыми микобактериями;
- группа больных с кистой легкого.
Спектр устойчивости микобактерий к лекарственным препаратам представ лен в таблице 1.
Таблица Спектр лекарственной устойчивости микобактерий у больных различ ными формами туберкулеза легких Больные с множественными Больные с фиброзно туберкулемами легких кавернозным туберкулезом (кол-во человек) (кол-во человек) Моно резистентный возбудитель 6 Поли резистентный возбудитель 6 Возбудитель устойчив к препаратам рифампицину 2 изониазиду 4 стрептомицину 8 этамбутолу 4 канамицину 2 Таблица Характеристика групп больных Больные с множественными Больные с фиброзно туберкулемами легких кавернозным туберкулезом лег- Больные с ких кистами легких С лекарственно С лекарственно С лекарственно С лекарственно чувствительным устойчивым чувствительным устойчивым возбудителем возбудителем возбудителем возбудителем Количество 21 12 9 11 Возраст 19 - 49 24 - 47 28 - 40 18 - 43 31- (лет) Количество 15 9 6 9 мужчин Количество 6 3 3 2 женщин Локализация процес 12 6 5 5 Левое лег- Правое легкое са 10 6 4 6 кое 5 2 3 3 Распространенность процесса Два сегмента Сегмент Доля 11 5 4 2 5 5 2 6 Объектом исследования служили фрагмент кожи с подкожной клетчат кой, весом 5-10 г, взятый во время операции из области хирургического раз реза и 2 фрагмента легкого, весом 5-10 г, один из очага поражения, а другой из зоны перифокального воспаления. Биоптат дермальной и легочной ткани фиксировали в жидкости Карнуа, обезвоживали проводкой по спиртам восходящей концентрации с последующей заливкой в парафин. Из залитых в парафин кусочков готови ли серийные срезы, толщиной 5 – 7 мкм, которые депарафинизировали и окрашивали 0,1% раствором толуидинового синего и гематоксилином и эозином. Исполь зуя гистологические методы, мы изучали морфологию легочной ткани и морфофункциональные характеристики ТБ. Оценивалось количественное со держание, индекс активности (отношение числа дегранулированных клеток к количеству всех интактных) и индекс созревания (отношение количества мо лодых к числу зрелых форм ТБ), показатель степени дегрануляции ТБ в ответ на стимуляцию специфическим активатором секреции туберкулином и не специфическим активатором секреции пирогеналом, а так же определяли со держание биогенных аминов.
Для решения поставленных задач в рамках данной работы проводились также определение показателей периферической крови и иммунного статуса:
содержание иммуноглобулинов А, G, M в сыворотке крови больных методом радиальной иммунодиффузии в геле (по Манчини);
типирование лимфоцитов в лимфотоксическом тесте с помощью моноклональных антител.
Статистическую обработку данных проводили с помощью t-критерия Стьюдента и определяли значимость различий (р). Разницу двух сравнивае мых величин считали достоверной при р0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Нами проведено изучение морфофункционального состояния ТБ легкого и кожи у больных с множественными туберкулемами легких и фиброзно кавернозным туберкулезом. Полученные результаты исследования показали, что при туберкулезной инфекции в организме больных происходило значи тельное увеличение содержания ТБ кожи и легкого, с их выраженной дегра нуляцией.
Количество ТБ легкого в зоне поражения возрастало в 1,5-2 раза по сравнению с группой больных с кистами легких как у больных с множест венными туберкулемами, так и у лиц с фиброзно-кавернозным туберкулезом.
Но у последних содержание ТБ было ниже на 20% по сравнению с группой обследованных, страдающих туберкулемами легких (рис 1). В перифокаль ной зоне у больных туберкулезом также отмечалось увеличение количест венного содержания ТБ на 25-50% по сравнению с кистозной группой, в группе больных фиброзно-кавернозной формой этот показатель был ниже.
При оценке количественного содержания ТБ в коже было выявлено % группа сравнения множественные туберкулемы фиброзно-кавернозный туберкулез количество ТБ индекс созревания Легкое – зона поражения группа сравнения % множественные туберкулемы фиброзно-кавернозный туберкулез количество ТБ индекс созревания легкое – перифокальная зона 100 _группа сравнения % множественные фиброзно-кавернозный туберкулемы туберкулез количество ТБ индекс созревания кожа Рис. 1 Количественное содержание и индекс созревания ТБ у больных ту беркулезом Примечание: здесь и далее символом # обозначается достоверность различий при сравнении со значениями группы больных с кистой легкого (группа сравнения) достоверное увеличение в 1,3 раза этого показателя у больных фиброзно кавернозным туберкулезом.
Повышение содержания ТБ в легочной ткани происходило за счет зрелых форм клеток, количество молодых базофилов было сниженным, в первую очередь в зоне поражения. Можно предположить, что увеличение количест венного содержания ТБ в легком обеспечено стимуляцией гемопоэза и ги перкомпенсаторным генезом ТБ [Рудзит Е.К., 1969;
Дыгай А.М. и др., 1992;
Красноженов Е.П., 1996;
Красноженов Е.П. и др., 2002]. Наличие незрелых форм ТБ создает возможность увеличения их численности не только путем образования из предшественников, но и за счет деления молодых форм [Клименко Н.А., 1992]. В зоне поражения, где незрелые формы клеток прак тически не встречаются, увеличение содержания ТБ может быть связанно с притоком зрелых клеток из перифокальной зоны.
Индекс активности ТБ легкого у больных с множественными туберкуле мами значительно превышал значения группы сравнения: в зоне поражения в 3 раз, тогда как в перифокальной зоне - в 2 раза. У больных с фиброзно кавернозной формой заболевания наблюдалась однотипная динамика изме нений индекса активности по сравнению с больными с кистами легких (БКЛ). Также было выявлено возрастание функциональной активности ТБ кожи как у больных с множественными туберкулемами легких, так и у паци ентов с фиброзно-кавернозным туберкулезом (рис 2).
Показатель степени дегрануляции ТБ легкого на неспецифический актива тор секреции – пирогенал у больных с множественными туберкулемами в зо не поражения почти в двое превышал значения группы сравнения, а в пери фокальной зоне в 1,5 раза. У больных с фиброзно-кавернозной формой сек реторная активность ТБ легкого была значительно выше группы сравнения, но оставалась сниженной по сравнению с группой пациентов, которые боле ли более благоприятной формой туберкулеза (множественные туберкулемы легких).
При активации ТБ легкого специфическим активатором – туберкулином наблюдалось значительное увеличение секреторной активности (в 3,5 - раза) у больных туберкулезом. У больных с фиброзно-кавернозной формой этот показатель был достоверно ниже, чем у больных с туберкулемами лег ких (рис. 2).
ТБ кожи также интенсивно дегранулировали под воздействием стиму лятора пирогенала и, особенно при контакте со специфическим активатором - туберкулином: у больных как с множественными туберкулемами, так и фиброзно-кавернозным туберкулезом показатель степени дегренуляции на введение пирогенала увеличивался в два раза по сравнению с группой боль ных кистами легких, а на туберкулин в 4 раза (рис. 2).
Данные явления сопровождались также накоплением биогенных аминов в ТБ легкого и кожи. У больных с множественными туберкулемами наблюда лось увеличение содержания биогенных аминов в ТБ легкого в % _группа сравнения множественные туберкулемы фиброзно-кавернозный туберкулез легкое – зона поражения % _ группа сравнения множественные туберкулемы фиброзно-кавернозный туберкулез легкое – перифокальная зона % _ _группа сравнения множественные туберкулемы фиброзно-кавернозный туберкулез индекс активности степень дегрануляции тканевых базофилов при активации их пирогеналом степень дегрануляции тканевых базофилов при активации их туберкулином кожа Рис. 2 Функциональная активность тканевых базофилов у больных тубер кулезом легких.
перифокальной зоне в 2,3 раза по отношению с группой сравнения, тогда как в зоне поражения этот показатель был схожим с уровнем группы БКЛ.
В ТБ кожи у этих больных содержание биогенных аминов не отличалось от значения группы БКЛ. У лиц с фиброзно-кавернозным туберкулезом в легком в зоне поражения наблюдалось значительное (на 44%) снижение в ТБ уровня биогенных аминов по сравнению с кистозной группой, в перифокаль ной зоне, наоборот, этот показатель увеличивался в 1,6 раза. В коже отмеча лась схожая тенденция к увеличению содержания биогенных аминов в ТБ.
Таким образом, туберкулезный процесс сопровождается значительным усилением функциональной и секреторной активности. Эти факты согласу ются с литературными данными, свидетельствующими об увеличении со держания в ТБ биогенных аминов и усиленной дегрануляции этих клеток.
Данные, полученные Каминской Г.О. и соавт. (1988) показали возраста ние концентрации гистамина и серотонина в бронхо-альвеолярном лаваже у больных с различными формами туберкулеза. Значительное преобладание показателя степени дегрануляции при контакте со специфическим стимуля тором - туберкулином по сравнению с активацией неспецифическим стиму лятором, может быть обусловлена способностью микобактерий туберкулеза активировать ТБ.
Ключевой особенностью ТБ является способность к активному секретор ному процессу с выделением медиаторов в результате дегрануляции. Дегра нуляция ТБ индуцируется иммунологическими и неиммунологическими фак торами [Красноженов Е.П., 1996;
Проценко В.А. и соавт., 1987;
Peachele P.T., 1987]. ТБ переходят в активное состояние и выбрасывают гранулы под дей ствием продуктов клеток, находящихся в той же микросреде. Наиболее ак тивны цитокины, вырабатываемые Т-лимфоцитами, моноцита ми/макрофагами, эозинофилами, нейтрофилами, тромбоцитами. Также ТБ могут активировать и сами себя, например, такими продуктами как PAF или PGD2 [Маянский Д.Н., 1997].
Комплексный анализ количественных, морфологических и функцио нальных характеристик ТБ у больных с изучаемой патологией выявил изме нение всех параметров морфофункционального статуса этих клеток. Резуль таты проведенного исследования свидетельствуют об отсутствии достовер ных различий в изменении морфофункциональной характеристики ТБ у больных с лекарственно чувствительным и лекарственно устойчивым возбу дителем туберкулеза.
Исследование клеточного состава периферической крови у больных туберкулезом (рис.3) выявило увеличение количества лейкоцитов в 1,5-2 раза по сравнению со значениями группы БКЛ. Причем, у больных с фиброзно кавернозным туберкулезом количество лейкоцитов было на 30% выше, чем у больных с множественными туберкулемами. У больных фиброзно кавернозным туберкулезом отмечалось увеличение количества палочкоядер ных нейтрофилами, в то время как у больных с множественными туберкуле мами содержание этих клеток было снижено. Содержание лимфоцитов у больных туберкулезом возрастало на 1,5 – 2 раза. Также у больных как Г/л группа сравнения множественные туберкулемы фиброзно-кавернозным туберкулез лейкоциты 1, 1, 0, Г/л 0, 0, 0, группа сравнения множественные туберкулемы фибрознокавернозный туберкулез эозинофилы моноциты эозинофилы и моноциты 3, 2, Г/л 1, 0, группа сравнения множественные фиброзно-кавернозный туберкулемы туберкулез лимфоциты Рис. 3 Гематологические показатели у больных туберкулезом туберкулемами легких, так и фиброзно-кавернозным туберкулезом увеличивалось содержание в крови эозинофилов и моноцитов.
Достоверных отличий в содержании эозинофилов в крови больных с различными формами туберкулеза выявлено не было. Содержание мо ноцитов было выше на 1,5 раза в крови пациентов с фиброзно кавернозным туберкулезом.
Интересными представляются данные, свидетельствующие о дисфункции клеточного звена иммунной системы при туберкулезном процессе [Хонина Н.А. и др., 2002] в свете известных фактов о наличии взаиморегулирующих эффектов между ТБ и иммунокомпетентными клетками, в первую очередь Т лимфоцитами [Дыгай А.М. и соавт., 1992;
Красноженов Е.П., 1996;
Маянский Д.Н. и др., 1997;
Yurt R. e.a., 1990;
Amon E.U., 1991;
Cavallo M. e.a., 1994;
Freund M. e.a., 1994;
].
Так, например, интерлейкин-4 секретируемый как ТБ, так и Т лимфоцитами, стимулирует В-клеточную пролиферацию, синтез Ig G, инду цирует экспрессию антигенов гистосовместимости 2 класса, активируют Т хелперы (СD 4) и может проявлять себя как фактор роста для тучных клеток [Суворова К.Н., 1998]. Показано, что гистамин, лейкотриены, простагланди ны и другие медиаторы ТБ вызывают модуляцию функций лимфоцитов [Ma rone G., 1988], а при исследовании дермальных биопсий полученных от па циентов с ревматоидным артритом отмечено наличие корреляции между процентом поврежденных ТБ и уровнем Ig G [Enestrom S. E.a., 1997].
Комплексная оценка клеточного звена иммунной системы проведенная Чукановым В.И. (1996) показала, что для туберкулезного процесса характер но снижение уровня содержания Т-лимфоцитов, изменение субпопуляций иммунокомпетентных клеток и нарушение функции макрофагов. Прогресси рование туберкулеза сопровождается увеличением пула В-лимфоцитов, по вышением продукции Ig А, высоким уровнем циркулирующих иммунных комплексов.
В нашей работе в качестве иммунологического критерия состояния боль ных различными формами туберкулеза использовалось количество Т- и В лимфоцитов и содержание иммуноглобулинов различных классов в сыво ротке крови.
При анализе показателей клеточного иммунитета у лиц с изучаемой пато логией установлено, что количество CD3 и CD8 снижалось у больных с мно жественными туберкулемами (на 8% и 20% соответственно) по сравнению с группой БКЛ (рис. 4), но не выходило за рамки нормальных значений. Ми нимальный уровень CD3 и CD8 был зафиксирован у пациентов с фиброзно кавернозным туберкулезом: был снижен на 35 - 50% по сравнению с группой БКЛ и значительно выходил за рамки нижней границы нормы.
Содержание CD4 в сыворотке крови как больных множественными тубер кулемами, так и фиброзно-кавернозной формой было ниже в 1,5 раза по сравнению с группой БКЛ и выходило за рамки нормальных значений. Ко личество В-лимфоцитов было увеличено в 2-2,5 раза у больных туберкулезом и значительно превышало нормальный уровень (рис. 4).
% _ группа сравнения множественные фиброзно-кавернозный туберкулемы туберкулез CD-3 CD- % группа сравнения множественные фиброзно-кавернозный туберкулемы туберкулез CD-8 CD- Рис. 4. Количество Т- и В-лимфоцитов в сыворотке крови больных тубер кулезом легком Значения показателей гуморального иммунитета в группе лиц с множест венными туберкулемами свидетельствовали о возрастании концентрации Ig G в 1,2 раза и Ig A в 2 раза по сравнению с группой БКЛ. У больных с фиб розно-кавернозной формой заболевания содержание Ig G и Ig A возрастало почти в двое по сравнению со значениями БКЛ. Количество Ig M в сыворотке крови больных туберкулезом не изменялось.
Развитие туберкулезной инфекции сопровождается снижением относи тельного количества Т-лимфоцитов, при этом у больных с фиброзно кавернозной формой заболевания угнетение иммунитета становится более глубоким.
Таким образом, результаты данной работы указывают на участие клеточ ной системы «тканевой базофил» в туберкулезном процессе.
Основную роль в развитии туберкулезного процесса (формировании гра нулемы) играют макрофаги, которые подвергаются стойкому раздражению – длительному персистированию в макрофаге M. tuberculosis в силу незавер шенного фагоцитоза. Такой макрофаг начинает вырабатывать вещества, ак тивирующие прилежащий эндотелий (рис. 5), прежде всего это интерлейкин 1 и фактор некроза опухоли-. Активация эндотелия ведет к экспрессии на мембране адгезивных белков типа ICAM-1 и VCAM-1. С помощью этих бел ков эндотелий вылавливает из крови моноциты и лимфоциты. Активный эн дотелий сокращается и в межэндотелиальные щели проходят моноциты и лейкоциты [Маянский Д.Н.,1997]. Помимо клеток эндотелия Ил-1 активирует лимфоциты, тканевые базофилы, эозинофилы и фибробласты [Дыгай А.М., 1992]. Активированые ТБ начинают высвобождение цитокинов – Ил-3 и TNF, под влиянием которых на мембране эндотелия также возрастает экс прессия ICAM-1 и ELAM-1(притягивает лейкоциты). Помимо цитокинов ТБ выделяют гистамин, который увеличивает проницаемость сосудов. Вокруг сосуда формируется первичное скопление моноцитов, которые превращают ся в макрофаги будущей гранулемы. Макрофаги, выйдя из сосуда, начинают вырабатывать медиаторы воспаления, которые притягиваю новые порции мононуклеаров крови (LTB4, Ил-2 и др.), а также Ил-3, стимулирующий ге нез ТБ, и PAF-активирует ТБ. Также активировать ТБ будут микобактерии туберкулеза, об этом свидетельствует усиление секреторной активности на контакт с туберкулином.
Активированный ТБ активно вырабатывает цитокины (ФНО, Ил-3), а также мембранные медиаторы (PAF, PGD2), влияющие на другие клетки.
Из этого следует, что ТБ участвуют в образовании туберкулезных грану лем, положительным значение которых, заключается, прежде всего в ограни чении возбудителя, что позволяет организму мобилизировать защитные свойства. Также ТБ участвуют в замещении гранулемы фиброзной тканью.
Наличие функциональной связи между ТБ и соединительнотканными клетками установлено в синтезе гликозаминогликанов и межуточного веще ства и стимуляции фибробластов [Gruber B.L., 1997;
Hiragun T., 1998].
Гранулема Тл-СD Ил-2, Иф- Микобактерия МИФ Ил- ФНО ФАТ ТБ Рис.5 Предполагаемая схема взаимодействия клеток при образовании ту беркулезной гранулемы (Ил – интерлейкин, Иф - интерферон, МИФ - фактор, ингибирующий миграцию макрофагов, ФАТ – фактор активации тромбоци ты, ФНО- – фактор некроза опухоли-).
Обнаружена способность ТБ к секреции в межклеточное пространство протеаз, которые оказывают свое действие на мукопротеины, коллагеновый белок соединительной ткани [Серов В.В. и др., 1981] Результаты представленной работы открывают новые перспективы целе направленное воздействие на туберкулезный процесс путем влияния на функциональное состояние ТБ.
ВЫВОДЫ 1. Тканевые базофилы у больных с туберкулезной инфекцией характеризу ются более высоким содержанием, изменением морфологических призна ков и значительной функциональной активностью по сравнению с тако выми показателями у больных с кистами легких.
2. Реакция тканевых базофилов имеет общую направленность у больных с различными формами туберкулеза легких, но отличается интенсивностью.
3. Характер и степень выраженности реакции тканевых базофилов зависят от удаленности от очага туберкулезного поражения: в очаге поражения из менения морфологических и функциональных характеристик этих клеток более выражены, чем в перифокальной зоне.
4. Реакция дегрануляции, отражающая секреторную активность тканевых базофилов, при туберкулезном процессе более выражена при контакте клеток со специфическим агентом (туберкулином), нежели при использо вании неспецифического стимулятора (пирогенала). Выраженная реакция тканевых базофилов на туберкулин у больных туберкулезом доказывает участие этих клеток в противотуберкулезной защите. У больных с кистоз ной патологией легких тканевые базофилы на введение неспецифического и специфического стимулятора реагируют одинаково.
5. Характер и степень выраженности реакции тканевых базофилов при ту беркулезе не зависит от чувствительности микобактерий к лекарственным препаратам 6. Изменение морфофункционального состояния тканевых базофилов при туберкулезе сопровождаются сдвигами показателей иммунологической реактивности: снижением относительного количества CD 3,CD 4,CD 8, значительным увеличением В-лимфоцитов (CD 72), а так же повышен ным содержанием иммуноглобулинов класса G и A.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Препараты бактериального происхождения как индукторы дегрануляции тучных клеток /В соавторстве с Красноженовым Е.П., Чубиком М.П.// Ак туальные вопросы экспериментальной морфологии. Томск, 1999. – С.61 62.
2. Оценка степени устойчивости организма к раздражителям различной при роды по модуляции показателей морфофункционального статуса ткане вых базофилов / В соавторстве с Красноженовым Е.П., Чубиком М.П.// Материалы межрегиональной научной конференции Сибири и Дальнего Востока. Томск, 1999. – С.197-198.
3. Участие клеточной системы «тканевой базофил» в обеспечении клеточной защиты организма от патогенных факторов /В соавторстве с Красножено вым Е.П., Чубиком М.П.// Материалы международной конференции «Ес тествознание на рубеже столетий». Москва, 2001. – С.80.
4. Изменение морфофункциональных характеристик ткеневых базофилов при туберкулезе / В соавторстве с Красноженовым Е.П., Некрасовым Е.В., Муликом Л.И. // Сборник трудов юбилейной научно-практической конфе ренции «Новые технологии во фтизиатрии». Томск, 2002. – С. 117-118.
5. Возбудитель туберкулеза // Сборник трудов юбилейной научно практической конференции «Новые технологии во фтизиатрии». Томск, 2002. – С. 190-194.
6. Морфофункциональный статус тканевых базофилов у больных туберкуле зом / В соавторстве с Красноженовым Е.П., Некрасовым Е.В.//Материалы городской научно-практической конференции «Современные аспекты биологии и медицины». Томск, 2002. – С. 31- 7. Морфофункциональное состояние тканевых базофилов при листериозе у мышей в отдаленные сроки после введения доксорубицина / В соавторст ве с Красноженовым Е.П., Чубиком М.П., Шамис М.В., Ждановой О.С.
// Бюллетень восточно-сибирского научного центра, 2002. - №4. – Т. – С. 75-77.
• Заявка № 2002112380/14 (012 908) на изобретение «Способ количест венной оценки функциональной активности тучных клеток кожи» с приори тетом от 7.05. 2002.