Микробиологическая характеристика археологических памятников на территории республики татарстан
На правах рукописи
Тухбатова Резеда Ильгизовна МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА АРХЕОЛОГИЧЕСКИХ ПАМЯТНИКОВ НА ТЕРРИТОРИИ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН 03.00.07 - микробиология 03.00.04 – биохимия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Казань - 2008 2
Работа выполнена на кафедре микробиологии биолого-почвенного факультета ГОУ ВПО «Казанский государственный университет им. В.И.Ульянова-Ленина»
Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Алимова Фарида Кашифовна
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, в. н. с.
Марфенина Ольга Евгеньевна (Московский государственный университет им. М. Ю.
Ломоносова, г. Москва) доктор биологических наук, профессор Багаева Татьяна Вадимовна (Казанский государственный университет им.
В.И.Ульянова-Ленина, г. Казань)
Ведущая организация: Академия наук Республики Татарстан
Защита состоится 30 октября 2008 г. в 1300 часов на заседании диссертационного Совета Д 212.081.08. при Казанском государственном университете по адресу: 420008, г.Казань, ул. Кремлевская, д.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке им. Н.И.Лобачевского Казан ского государственного университета
Автореферат разослан «29» сентября 2008 г.
Ученый секретарь диссертационного Совета доктор биологических наук, профессор З.И.Абрамова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. В последние десятилетия происходит значи тельное усиление процессов техногенной деградации естественных экоси стем, которые сопровождаются изменениями и разрушением почв, а вме сте с тем трансформацией или потерей выполняемых ими биосферных и биогеоценотических функций, что может привести к труднопрогнозируе мым последствиям (Добровольский, Никитин, 1990, 2000;
Соколов и др., 2004). Проблема сохранения и восстановления почв, подвергающихся все большей антропогенной и техногенной нагрузке, является на сегодня од ной из приоритетных в рамках защиты окружающей среды.
Чтобы оценить масштабы и спрогнозировать последствия современ ных форм деградации естественных экосистем, необходимо изучать про цессы их реградации или восстановления – как в целом, так и отдельных их компонентов. Среди компонентов экосистем почвенная составляющая является одной из наиболее важных, будучи связующим звеном их функ ционирования. В зависимости от способности почв восстанавливать свой исходный облик, и, следовательно, выполнять свои функции, будет зави сеть регенерационная способность экосистем в целом.
Для изучения восстановительной способности почв за длительные промежутки времени археологические памятники оказались наиболее под ходящим объектом. Наши предки дали начало уникальному природному эксперименту, длящемуся уже несколько сотен и даже тысяч лет, позво ляющему оценить скорость и особенности восстановления почв. На сего дня считается, что в рамках генетического почвоведения процесс станов ления и эволюции профиля экспериментально практически не изучаем (Соколов, 2004). Почвообразование же на обнаженных породах разновоз растных археологических памятников может служить такой эксперимен тальной моделью, что имеет большое значение в рамках экологических ис следований.
Современные нарушения почвенного покрова намного более мас штабны и разнообразны, чем древние. Особую тревогу вызывает глобаль ное уменьшение запасов органического вещества в почвах (Русский черно зем, 1983;
Пузаченко и др., 2006;
Adams, 2004 и др.). В связи с этим остро встают вопросы о скорости гумусонакопления и направленности процес сов восстановления почв при разных типах нарушений в долгосрочном прогнозе, а также принципиальной возможности почв достигать своего первоначального состояния.
Известно, что почвенные микроорганизмы являются неотъемлемой составной частью почвы. Практически все процессы, протекающие в ней, в той или иной степени связаны с жизнедеятельностью микроорганизмов (Звягинцев, 2005). Поэтому характеристика микробного сообщества отно сится к числу важнейших диагностических показателей, отражающих ус ловия почвообразования (Демкин, 1997).
Цель настоящей работы – оценка степени измененности биологиче ской активности в местах проживания древнего населения в условиях ле состепной зоны Волжско-Камской лесостепи через 1000 - 3000 лет после их нарушений в результате деятельности древнего человека.
Основные задачи исследования:
1. Оценить биологическую активность современных выщелоченных черноземов Алексеевского и Камско - Устьинского районов в местах со оружения археологических памятников, незатронутых деятельностью че ловека.
2. Исследовать биологическую активность древних черноземов Кам ско – Устьинского района, погребенных под периферийным валом, транс формировавшихся в гидроморфных и автоморфных условиях в течении 1000 лет на примере Больше – Кляринского городища (VIII – X вв. н. э.).
3. Определить характер и особенности нарушений биологической ак тивности новообразованных в гидроморфных и автоморфных условиях почв за период 1000 лет на поверхности вала в результате антропогенной деятельности при формировании древнего городища.
4. Определить характер и особенности нарушений биологической ак тивности палеопочв за период 3000 лет в местах сооружения захоронений на примере Мурзихинского II могильника (VIII – VI вв. до н. э.).
5. Изучить изменение видового состава, популяционной структуры и стратегии жизни рода Trichoderma новообразованных, погребенных и фо новых почв за период 1000 -3000 лет.
6. Определить возможности использования биологических методов изучения почв в решении археологических задач.
Научная новизна работы. Впервые исследована биологическая ак тивность черноземов, погребенных под периферийным валом, трансфор мировавшихся в гидроморфных и автоморфных условиях в течение лет Больше - Кляринского городища Камско – Устьинского района Рес публики Татарстан.
Впервые исследована биологическая активность погребенных черно земов в останках человеческих захоронений Мурзихинского II могильника Алексеевского района Республики Татарстан.
Впервые дана оценка степени сохранности плодородия в пределах почвенного профиля лесостепной зоны Волжско-Камской лесостепи через 1000-3000 лет после ухода человека на основе комплексного детального сравнительного изучения состояния биохимической и микробиологиче ской активности древних памятников.
Впервые выявлены сукцессионные изменения состава микромицетно го сообщества рода Trichoderma и его популяционной структуры в палео почвах в результате действия древнего человека. Показано, что характер ным для погребенных почв Мурзихинского II могильника был вид H.
schweinitzii/ T. citrinoviride, для Больше – Кляринского городища и совре менных горизонтов – T. asperellum, для последнего отмечены различия в ITS последовательности при расщеплении на клоны, а также аналогичны ми видами, но выделенных из современных горизонтов.
Практическая значимость работы. Полученные результаты по поч венному мониторингу могут быть использованы в учебном процессе, для реконструкции динамики палеоклиматических условий лесостепной зоны Волжско-Камской лесостепи за последние 3000 лет, для прогнозирования изменения микробных сообществ в природном и антропогенном трендах развития почв.
Рассмотрена роль микроорганизмов и биологической активности почв в формировании гумусового слоя в ходе эволюции новообразования и кон сервации в условиях погребенных почв.
Показана возможность восстановления биологической активности и видового разнообразия современных антропогенно нарушенных почв за счет интродукции почвенных микроорганизмов палеопочв. Получены по ложительные отзывы от предприятий по предварительным опытам по ис пользованию штаммов Trichoderma из погребенных почв в сельскохозяй ственной биотехнологии.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Погребенные почвы в местах проживания древнего населения ( - 3000 лет назад) характеризуется достоверными изменениями биологиче ской активности, определяемых характером деятельности древнего чело века.
2. В новообразованных гидроморфных горизонтах отмечено полное восстановление содержания гумуса и биологической активности в отличие от слабовосстановленных автоморфных горизонтов.
3. Древние горизонты характеризуются большим видовым разнообра зием, меньшей гетерогенностью популяций рода Trichoderma по сравне нию с современными видами микромицета.
4. Популяционная структура видов Trichoderma характеризуется тен денцией к увеличению клонов с меньшей скоростью роста и большей кон курентоспособностью в ходе эволюции.
5. Наиболее типичным видом Мурзихинского II могильника был вид H. schweinitzii/ T. citrinoviride, Больше – Кляринского городища и совре менных горизонтов – T. asperellum.
6. Выявлены изоляты секции Longibrachiatum из погребенных почв, которые по данным молекулярно-генетического анализа могут распола гаться в основе филогенетического древа и являться предковым для совре менных видов.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены на итого вых научно-образовательных конференциях Казанского государственного университета (Казань, 2004 - 2008), «Ферменты микроорганизмов: струк тура, функции, применение» (Казань, 2005), «Грибы и водоросли в биоце нозах» (Москва, 2006), «Итоги и перспективы научных исследований по проблеме экологии человека и гигиены окружающей среды» (Москва, 2006), «9th International Workshop on Trichoderma and Gliocladium» (Vienna, 2006), «Symposium of Biology Students (Ancona, 2006), «Экология и биоло гия почв» (Ростов-на-Дону, 2006), «Биология- наука 21 века» (Пущино, 2006, 2007), «Ломоносов – 2007» (Москва, 2007), «International Mycological SymBioSE» (2006), «Успехи медицинской микологии» (Москва, 2007), «Межвузовская конференция молодых ученых и студентов (Казань, 2007), «Научно-техническое творчество молодежи» (Москва, 2007), «Микроорга низмы и биосфера» (Москва, 2007), «XV Congress of European Mycologists» (Saint Petersburg, 2007), «Симбиоз» (Казань, 2008).
Публикации. По результатам диссертации опубликовано 50 научных работ, в том числе 3 статьи в реферируемых журналах, рекомендуемых ВАК, и 1 учебное пособие.
Структура и объем работы. Общий объем диссертации 150 страниц.
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материа лов и методов, результатов исследований, обсуждения результатов, выво дов, заключения, списка литературы, приложения. Работа содержит 13 таб лиц и 50 рисунков. Список литературы включает 196 источников, в том числе 160 иностранных.
Место проведения работы и благодарности. Работа выполнена на кафедрах микробиологии и биохимии ГОУ ВПО КГУ. Автор выражает глубокую признательность научному руководителю д.б.н., доц. Алимовой Фариде Кашифовне за внимательное отношение к работе;
д.б.н., проф.
Ильинской О.Н. за возможность проведения микробиологических иссле дований на базе кафедры микробиологии;
к.х.н., к.б.н. Мельникову Л. В. за помощь при отборе и физико-химическом анализе образцов почв;
с.н.с Га русову А.В. за помощь при хроматографических исследованиях азотфик сации и респираторной активности почв;
инж. Мочаловой Н.К. и инж. По номаревой А.З. за консультации при проведении микробиологического мониторинга почв;
к.б.н., асс. Зеленихину П.В. за помощь при проведении микрофотосъемки грибов;
к.б.н., асс. Кравцовой О.А. и к.б.н., доц. Ризва нову А.А., аспиранту Ибрагимовой И. И. за помощь в проведении молеку лярно-генетических исследований штаммов Trichoderma;
к.б.н., с.н.с. Ак беровой Н.И. за консультации по статистической обработке данных;
аспи ранту Морозову М.В. за помощь в проведении АСМ-микроскопии;
д.б.н.
Дружининой И. С. (Vienna University of Technology, Австрия) за помощь при проведении секвенирования изолятов Trichoderma;
к.б.н., н.с. Сквор цову (ВНИИВИ) и инж. Мельниковой Т.А. (ОАО «Холод») за помощь в проведении исследований ферментативной активности;
с.н.с. Глушко Н.И.
и к.б.н., с.н.с. Куликову С.Н. (ФГУН КНИЭМ) за помощь в получении и изучении свойств грибных антигенов;
аспирантам и студентам лаборато рии сельскохозяйственной биохимии и биотехнологии кафедры биохимии.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследований Отбор образцов почвы из Мурзихинского II могильника Алексеевско го района РТ.
Мурзихинский II могильник расположен в 3-3,5 км к востоку от быв шего с. Мурзиха, в 5 км к северо-западу от с. Алексеевск. Образцы почвы были отобраны из внутренней части 2 человеческих черепов, обнаружен ных во время археологических раскопок на Мурзихинском II могильнике.
Первый череп был найден в погребении 196, принадлежал мужчине 30 лет, представителю постмаклашеевской культуры (8-6 вв. до н.э., ранний же лезный век). Второй был извлечен из погребения 162, пол его не опреде лен.
Как было показано почвоведами, образцы почвы попали в погребения при захоронении из верхней части горизонта [А1] старопахотного выщело ченного чернозема. Структурно-агрегатный анализ показал, что, несмотря на весьма низкое для данной разновидности по гранулометрическому со ставу содержание гумуса в сравнении с собственно целинными аналогами (6,6% при содержании физической глины 65% и илистой фракции 45%), почва характеризуется хорошим структурным состоянием. Распределение гумуса во фракциях однородное (Мельников, 2005).
Отбор образцов почвы из Больше-Кляринского городища.
Создание Больше-Кляринского городища относится к булгарскому раннему периоду. Расположено оно в 1 км к северо-западу от с. Большие Кляри Камско-Устьинского района РТ на левом берегу речки Сухой Уле мы. Площадь 33 000 м2.
Больше-Кляринское городище - характерное для данной культуры го родище-убежище, представляющее собой комплекс сопряженных валов и рвов (рис. 1). Время строительства объекта относится ориентировочно к VIII-X вв. Почвенный покров при формировании древнего городища имел уклон, вследствие чего одна часть вала располагалась выше, а другая ниже уровня моря с различными условиями увлажненности атмосферными осадками. Тип почвы в исследуемом районе отнесен к среднемощному среднегумусному тяжелосуглинистому выщелоченному чернозему. По гребенная почва под периферийным валом представляет собой гумусовый слой, трансформировавшийся в гидроморфных (Гп) и автоморфных (Ап) условиях, вследствие чего сформировались различные условия консерва ции гумусового горизонта. Почвенный покров над погребенной почвой представлен периферийным валом и представляет собой новообразован ный гумусовый слой, также трансформировавшийся в гидроморфных (Гн) и автоморфных (Ан) условиях.
Отбор образцов проводили при полевом обследовании фортификаци онных сооружений городища в 2004-2005 гг. Пробы отбирали из 1) погре бенной почвы под периферийным валом, 2) новообразованного в течение тыс. лет чернозема в верхней части толщи вала, 3) целинного чернозема, располагавшегося в стороне от городища, незатронутого деятельностью человека (табл. 1).
Рис. 1. 1 – археологический раскоп и разрез черноземной почвы, испытывающей сезонный гидроморфизм, 2 – фоновый разрез выщелоченного чернозема, 3 - разрез на сыпи вала и черноземной почвы в автоморфных условиях.
Образцы почвы (табл. 1) отобраны в соответствии с правилами отбора проб для микробиологического анализа с соблюдением условий стериль ности из нескольких точек каждого слоя насыпи или выборочных слоев и гор. А1 погребенных почв и их современных аналогов.
В дальнейшем образцы для каждого слоя/горизонта усредняли (Мето ды …, 1991).
Почвенные микробные сообщества исследованных объектов характе ризовали по численности и активности.
Таблица Характеристика чернозема в районе Больше-Кляринского городища и Мурзихинского II могильника Варианты опыта Горизонт Мощность, Гумус, pH C, C:N Валовое см % % содержание N, % Мурзихинский II могильник Мк-контроль [A1] 0 – 10 6,37 6,2 4,8 12,3 0, (целина) Мн- [A1] 0-35 6,5 6,3 3,4 11,5 0, новообразован ная почва Мп1 - погребен- [A1] 70-110 6,6 6,6 3,7 11,8 0, ная почва Мп2 - погребен- [A1] 80-120 6,6 6,7 3,8 12,2 0, ная почва Больше – Кляринское городище Ц – контроль 10 – 40 7,72 6,9 4,5 13,7 0, [A1] (целина) автоморфные горизонты Гн - новообра- [A1] 20 – 40 8,0 6,4 4,6 13,2 0, зованная почва Гнк - новообра- [ЕА1] 122-130 3,75 6,4 2,2 11,6 0, зованный ко ричневый слой Гп1 - погребен- [A11] 130-148 7,9 6,3 4,6 10,9 0, ная почва Гп2 - погребен- [A12] 148-158 7,86 6,3 4,5 12,3 0, ная почва гидроморфные горизонты Ан - новообра- [A1] 20-52 5,6 6,2 3,2 14,7 0, зованная почва Ап1 - погребен- [A11] 52-77 6,45 7,9 2,1 16,9 0, ная почва Ап2 - погребен- [A12] 77-89 6,7 8,3 3,7 17,2 0, ная почва Определение численности микроорганизмов в почве проводили мето дом прямого счета в люминесцентном микроскопе по Звягинцеву и Коже вину и посева на питательные среды (Головченко и др., 1995;
Кожевин, 1989;
Методы …, 1991). Количественный учет грибов проводился методом Хансена в модификации Мирчинк (1988).
Активность азотфиксации в почве измеряли методом Харди в моди фикации Умарова [Гарусов с соавт., 2006], определение активности поч венного дыхания осуществляли на газовом хроматографе [Гарусов с соавт., 2006].
Углерод микробной биомассы рассчитывали по скорости субстрат индуцированного дыхания с использованием коэффициента пересчета 40,04 (Anderson, Domsch, 1978).
Выделение Trichoderma из образцов почвы проводили методом се рийных разведений с последующим высевом на среду с пароморфогенным веществом (Бенкен, Хацкевич, 1972).
Моноспоровые культуры грибов получали методом разведения кони диальной суспензии в различных модификациях (Васин, 1966;
Кузнецов и др., 1968), (Лихачев, 1994).
Идентификация по морфологическим признакам проводилась по клю чу Александровой (Александрова с соавт., 2001), Samuels (2003) и Chaverri (2003), молекулярно-генетическим методом и методом ООП (объектно ориентированный подход) по Тарасову (2006).
Изучение морфологии поверхности спор Trichoderma проводили при помощи атомно-силового микроскопа NTEGRA Prima (NT-MDT). Изобра жения были получены полуконтактным методом [Миронов, 2004;
Бухараев с соавт., 2006].
Выделение ДНК, ПЦР-анализ, секвенирование. ДНК было выделено из свежего мицелия фенол/хлороформным методом (Druzhinina et al., 2005).
Участки ядерной рДНК, содержащие ITS1 и 2 и ген tef1, были ампли фицированы в реакции ПЦР и секвенированы с использованием комбина ции праймеров: SR6R (5’-AAG TAG AAG TCG TAA CAA GG-3’) и LR (5’-GGT TGG TTT CTT TTC CT-3’);
EF1-728F (5’-CAT CGA GAA GTT CGA GAA GG-3’) и EF1-986R (5’-TAC TTG AAG GAA CCC TTA CC-3’).
Молекулярную идентификацию нуклеотидных последовательностей проводили с использованием программы Tricho Mark – TrichoBLAST.
Результаты секвенирования фрагмента гена tef1 обрабатывали при помощи пакета программ Lasergene 5.03 (DNASTAR, Inc., США). Про грамма SeqMan использовалась для анализа сиквенсных хроматограмм.
Программа MegAlign использовалась для выравнивания последовательно стей и экспорта их в формате GCG.
Вегетативную совместимость моноспоровых клонов изучали по Дья кову и Долговой (1995).
Антагонистическую активность и конкурентоспособность изоля тов Trichoderma определяли методом встречных культур на среде Ча пека (Симонян и Мамиконян, 1982).
Гетерогенность популяций выделенных изолятов оценивали по их разделению на культурально-морфологические типы (КМТ) и появле нию секторов при росте на чашках Петри (Дьяков, 1998).
Определение ксиланазной, протеазной и целлюлазной активно стей изолятов Trichoderma проводили по Кониг и Скворцову (Konig, 2002, Скворцов, 2007).
Определение фитотоксичности культуральной жидкости и почвы про водили на семенах растений (Методы …, 1991).
Статистическую обработку результатов проводили с помощью элек тронных таблиц Microsoft Excel, Statgraphics plus 2.1.
Результаты исследований и их обсуждение 1. Биологическая активность выщелоченных черноземов в районе ар хеологических памятников 1.1. Оценка биологической активности современных горизонтов в районе расположения памятников.
В процессе комплексного почвенно-археологического изучения Больше – Кляринского городища было установлено, что система фортифи кации, состоящая из кольцевых линий, рвов и валов, после своего создания в VIII – X вв. н. э. оказалась накопительным коллектором атмосферных осадков. В результате, погребенные черноземные почвы, под периферий ным валом, главным образом, в нижней части склона стали испытывать воздействие инфильтрационного стока поверхностных вод (гидроморфные горизонты), почвы, приуроченные к верхней части склона, не испытывали в процессе трансформации влияние избыточного переувлажнения (авто морфные горизонты). В их морфологическом облике признаков гидромор физма не обнаруживали (Мельников, 2005). В толще насыпи вала была выделена новообразованная черноземная почва. За предполагаемый пери од гумификации (около 1 тыс. лет) содержание гумуса в верхней части профиля достигло такой же величины, как и в фоновой целинной или за лежной почве (около 8%).
Сравнительный микробиологический анализ современных горизонтов почв, неподверженных антропогенному воздействию, показал, что выще лоченные черноземы Камско-Устьинского района (место расположения городища) характеризуются увеличением интенсивности дыхания (в 3 раза выше), азотфиксации (в 2 раза) и численности отдельных групп микроор ганизмов: гетеротрофов (в 2 раза), актиномицетов (в 1,5 раза) и олиготро фов (в 1,5 раза) по сравнению с Алексеевским районом (место расположе ния могильника). Микроорганизмов - педотрофов и спорообразующих бак бактерий, численно преобладавших в последнем районе, в 2 и 5 раз выше, соответственно, чем в черноземах Камско-Устьинского района.
Наблюдаемые нами различия вероятно связано с физико-химическим параметрами почв и географическим расположением исследуемых объек тов (Звягинцев, 2005).
В почве могильника отмечено возрастание гумусразлагающих микро организмов (более чем в 5 раз) по сравнению с почвой Камско Устьинского района, чем объясняется более низкое содержание гумуса в этом регионе (6,3%), в то время как почва в районе городища на 1 % боль ше.
Таким образом, при равных одинаковых типах черноземов (выщело ченных) нами отмечается различие в содержании гумуса, что коррелирует с активацией различных групп микроорганизмов и подтверждает ранее от меченную рядом авторов роль микроорганизмов в разложении гумуса (За варзин, 2003, Звягинцев, 2005).
1.2. Микробиологический анализ погребенных и новообразованных почв в районе Больше-Кляринского городища.
Рассматривались горизонты чернозема, погребенного под периферий ным валом, и новообразованного в толще вала, а также новообразованный коричневый слой (табл. 1).
По данным численности микроорганизмов коричневый слой характе ризуется наименьшей напряженностью процессов, за исключением молоч но - кислых бактерий – деструкторов, кислотообразователей. Коричневый слой характеризуется вкраплениями кремния, что может подтверждать ак тивность молочно - кислых бактерий и их участие в минералообразовании.
Ранее было отмечено, что результатом деятельности кислотообразующих микроорганизмов является накопление кремния и других минералов (Не трусов, 2004, Бабьева, 2005). Присутствие кремнеземистой присыпки так же может быть результатом повышенной интенсивности промывания ат мосферными осадками (Копосов, 2004).
По данным коэффициентов минерализации, олиготрофности в корич невом слое отмечена также и слабая функциональная активность. Выявле на также тенденция к снижению интенсивности азотфиксации и дыхания в коричневом слое по сравнению с черноземами (во сколько). Вероятным объяснением более низкого содержания гумуса (3,75%, что в 2 раза ниже, чем в черноземах) в коричневом слое является отмеченная нами низкая ко личественная характеристика и напряженность микробиологических про цессов. Этой слой можно рассматривать как промежуточный от стадии разрушения и образования минералов к накоплению органического веще ства с последующим формированием гумусового слоя. Вероятно, это свя зано с попаданием в этот слой минерального вещества при сооружении го родища древним человеком.
Сравнительный анализ гидроморфных и автоморфных участков, по гребенных в течение 1000 лет и новообразованных в результате деятельно сти человека, показал, что в гидроморфной новообразованной почве со держание гумуса восстанавливается до уровня погребенной, а в атоморф ной новообразованной почве – снижается на 1%. Эти данные полностью коррелируют с биологической активностью в исследованных районах.
Предполагается, что гидроморфные условия способствуют консервации гумуса при погребении почв (Мельников, 2005) и увеличению его при но вообразовании.
При исследовании пула микроорганизмов черноземов нами отмечено в погребенных почвах возрастание численности сульфатредуцирующих и спорообразующих бактерий (в 2 и 3 раза, соответственно) на фоне сниже ния метаболического коэффициента. Показана высокая потенциальная ак тивность гетеротрофного блока микроорганизмов по уровню интенсивно сти дыхания в опытах in vitro. По данным Демкина (2007) актуальная ин тенсивность в палеопочвах должна снижаться, однако по данным Заварзи на (2003) активность микроорганизмов может возрастать при уменьшении размера агрегатов и увеличении их поверхности. Структурно-агрегатный состав является одним из важных показателей, характеризующих состоя ние почвы и может служить важным признаком при выявлении изменений, которым подверглась почва, погребённая под толщей вала;
главным обра зом, её верхний горизонт (А 1). Показано, что на территории городища со временем в результате диагенеза, происходит изменение структурного со става в сторону укрупнения структурных отдельностей (глыбистый состав) (Мельников, 2005). Отмечено некоторое уменьшение содержания фракций среднего размера в образцах погребённой почвы в пользу фракций более крупного размера. Анализ же состава водопрочных агрегатов показал рез кое уменьшение содержания крупных фракций и увеличения более мел ких, что особенно заметно на гидроморфном образце (Мельников, 2005).
Таким образом, наблюдаемое нами возрастание потенциальной респира торной активности можно объяснить уменьшением размеров агрегатов.
В гидроморфном погребенном слое количество микроорганизмов - ак тивных гумусообразователей ниже, чем в новообразованном (на 20%), что привело к консервации в данном слое процентного содержания гумуса на уровне 7,9% и в аналогичной почве мы, наоборот, наблюдаем возрастание гумуса при интенсификации процессов. В новообразованном по сравнению с погребенным гидроморфным слоем отмечено возрастание гетеротроф ных, разлагающих минеральные формы азота и денитрифицирующих мик роорганизмов (в 5, 7 и 6 раз, соответственно) на фоне снижения количества спорообразующих и сульфатредуцирующих бактерий (3 и 7 раз, соответст венно). Одновременно с отсутствием разницы в численности автохтонной микрофлоры, участвующей в процессе гумусоразложения, можно отметить возрастание жизнеспособности и активности в новообразованном горизон те, и снижение их активности в палеопочве, чем вероятно вызвана некото рая незначительная тенденция к увеличению содержания гумуса до 8,0% по сравнению с погребенной.
Перегруппировка в соотношении биомасс бактерий и грибов происхо дит за счет увеличения численности бактерий в гидроморфной почве, что вероятно связано с увеличением содержания гумуса в новообразованной почве.
Сравнительный анализ автоморфных погребенных и новообразован ной почвы на валу показал, что в условиях консервации в автоморфных погребенных горизонтах отмечена разница в содержании гумуса от 6,4 6,7% до 5,6%. Таким образом, в новообразованной почве мы наблюдаем тенденцию к разрушению гумуса.
Показателем активности почвенных гетеротрофных микроорганизмов является дыхание, а азотфиксирующих бактерий - интенсивность азотфик сации. В автоморфной погребенной почве нами отмечено возрастание как численности, так и потенциальной активности газообмена и азотфикси рующей активности (Цховребов, Каргалев, 2000).
В автоморфном новообразованном слое отмечено увеличение числен ности молочно - кислых бактерий, автохтонной микрофлоры, бактерий, потребляющих минеральные формы азота, участвующих в процессах раз ложения гумуса. При их высокой активности в почве создается низкий по ток доступных питательных веществ, что является стимулирующим фак тором для олиготрофов, способных развиваться только в таких условиях.
Вероятно следствием возрастания численности и жизнедеятельности мо лочно - кислых бактерий, автохтонной микрофлоры является снижение со держания гумуса.
Таким образом, в автоморфных горизонтах в ряду от погребенных к новообразованной почве отмечена тенденция к снижению содержания гу муса на фоне изменения напряженности микробиологической активности.
Микроорганизмами-индикаторами являются молочно - кислые бакте рии, автохтонная микрофлора и потребляющие минеральные формы азота.
Таким образом, описана общая биологическая активность исследо ванных районов. Она характеризуется большей напряженностью в районе расположения городища.
1.3. Микробиологический анализ погребенных и новообразованных почв в районе Мурзихинского II могильника.
Сравнительный анализ современного горизонта и погребенных почв в районе могильника показал увеличение в последних численности спорооб разующих бактерий, педотрофов, олиготрофов, денитрификаторов и кло стридий (в 5, 10, 11, 3 и 7 раз, соответственно). В современных горизонтах отмечено увеличение интенсивности дыхания и азотфиксации (на 15 – 20%).
Сравнительный анализ погребенного чернозема Алексеевского района с почвами Камско - Устьинского района показал, что в гидроморфном го ризонте выше численность гетеротрофов, бактерий, потребляющих мине ральные формы азота, сульфатредукторов, а также интенсивность азотфик сации и дыхания;
в автоморфных горизонтах выше денитрификаторов, клостридий, чем в могильнике (в 3 и 6 раз, соответственно).
В могильнике выше численность педотрофов, олиготрофов (на 17 и 13%, соответственно).
По содержанию гумуса почвенные горизонты схожи с автоморфным горизонтом (6,6%), в гидроморфном - на 1% больше.
Новообразованные автоморфные и гидроморфные горизонты характе ризуются тенденцией к восстановлению общей биологической активности и содержания гумуса, однако полное восстановление гумусового горизонта и сходство с целинными аналогами, где наблюдались естественные эволю ционно - сукцессионные изменения, отмечено только в последнем случае, что вероятно связано со степенью структурированности, биологической активностью и комплексом физико - химических факторов, наибольшее значение среди которых имеет фактор увлажнения.
Выявлены новообразованные гидроморфные горизонты, характери зующиеся тенденцией к восстановлению по данным общей биологической активности, а также новообразованные автоморфные горизонты характе ризующиеся более медленной тенденцией к восстановлению активности и содержания гумуса.
2. Характеристика Trichoderma из погребенных почв Известно, что ответственными за плодородие и супрессивность почв являются представители рода Trichoderma. Погребенные почвы являются природными резервуарами сохранения численности и видового разнообра зия видов рода Trichoderma, где частота встречаемости составляет более 60%. Современные горизонты характеризуются снижением частоты встре чаемости (0-7%) и видового разнообразия (менее 4-5 видов) (Алимова, 2006). Из исследованных образцов почв нами было выделено 135 изолятов рода Trichoderma.
Выделенные изоляты были идентифицированы по морфологическим признакам, молекулярно-генетическому анализу ITS-областей рДНК и с использованием объектно-ориентированного подхода - новый формат опи сания морфологических признаков (Тарасов, 2006). Нами была предприня та попытка построения новой систематики рода Trichoderma по формали зованным морфологическим и фенотипическим признакам. Иерархическая систематическая модель при использовании в практических целях облада ет рядом преимуществ: ее использование ускоряет процесс идентификации изолятов и уменьшает число ошибок. Программа была использована нами, наряду с морфологическими, культуральными и молекулярно – генетиче скими признаками, для построения классификации изолятов Trichoderma, выделенных из погребенных почв.
В погребенных почвах было выделено 17 видов Trichoderma. Наибо лее распространенным и часто встречающимся оказался вид T.
citrinoviride. На втором месте по распространенности стоит T. longibrachia tum, на третьем – T. atroviride. Далее следуют T. harzianum, T. hamatum, T.
oblongisporum, T. viride, T. koningii, T. asperellum, T. saturnisporum, T. spi rale. Также нами была выделена группа новых, неидентифицируемых изо лятов. Морфологический анализ с использованием АСМ-микроскопии по зволил выделить изоляты одного вида (T. asperellum) с разными по струк туре поверхностями: от гладкой из гидроморфного горизонта до шерохо ватой из автоморфного.
В большинстве случаев изоляты представлены агрегатами гетероген ных популяций. Сравнение общих частот реакций совместимости (63%) и несовместимости (37%) указывает на наличие тенденции относительного сдвига в сторону реакций смешанного типа и вегетативной совместимости.
Исследование кинетических параметров при различных температурах по зволило выявить изоляты с различной стратегией жизни: r- стратеги и к стратеги. Выявлены конкурентоспособные холодостойкие (10-140С) и ме зофильные виды (25-280С) с высокой антагонистической активностью к фитопатогенам и ростстимулирующей активностью в отношении яровой пшеницы. При изучении взаимоотношений с растениями выявлены хозя ин-специфичные и органотропные виды с различной степенью положи тельного и отрицательного воздействия на растение. Выявлены виды – симбиотрофы бактерий рода Azotobacter. Для отдельных видов отмечено положительное влияние на азотфиксирующую активность чернозема на день после интродукции: максимальное увеличение азотфиксации при вне сении 2 изолятов T. citrinoviride (по сравнению с контролем в 3 раза). По ложительное влияние на респираторную активность показано для T.
koningii, T. asperellum (превышение контроля в 2,5 раза) и T. harzianum (в раза).
Изоляты рода Trichoderma, выделенные из палеопочв, характеризуют ся высокой целлюлазной, протеазной и ксиланазной активностями. Мак симальная целлюлазная активность установлена у изолята T spp.328 и со ставила 1,1986 IUml-1, максимальная протеазная активность у изолята T spp.323 и соответствует 229,7508 IUl-1, максимальная ксиланазная актив ность у T spp.302 и составила 8,8173 IU/ml.
В состав аборигенных изолятов Trichoderma, входят гетерогенные и моноспоровые клоны, представленные двумя культурально – морфологи ческими типами (II, IV). Моноспоровые изоляты рода Trichoderma, выщеп ляющиеся из гетерогенных популяций, характеризуются более высокой антагонистической активностью по отношению к F. oxysporum, преоблада нием вегетативного типа несовместимости и высоким гидролазным ком плексом ферментов.
Изучение вегетативной совместимости, конкурентоспособности, ки нетических параметров, антагонистической активности позволило выявить стратегии жизни изолятов Trichoderma из погребенных почв (рис. 3). По пуляционная структура видов характеризуется тенденцией к увеличению клонов с k-стратегией в ходе эволюции, что указывает на переход в ходе сукцессии от молодых экосистем к более зрелым и снижению видового разнообразия (рис. 2).
Рис 2. Скорость роста изолята T. spp. 311 из погребенной почвы Мурзихинского II могильника на среде КГА при 28С.
Т. 326 Т. 326(1) 326 326(1) 326 опыт 326(1) опыт F. Опыт F. Опыт F. Конт. F. Конт.
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0, Скорость роста (мм/час) Скорость роста (мм/час) Рисунок 3. Антагонистическая активность изолятов T. spp. 326 и T. spp. 326(1) на среде Чапека при 15С.
При исследовании интродукции видов Trichoderma в выщелоченный чернозем было показано, что наибольшее достоверное влияние на азот фиксирующую активность почвы оказывают изоляты видов T. asperellum 211 (из погребенных почв Больше-Кляринского городища) и T.citrinoviride 319 (из погребенных почв Мурзихинского II могильника).
Биотический аспект изучения Trichoderma предполагает обязательное изучение её взаимоотношения с эдификаторами, которыми являются фото трофные организмы.
Главным регулирующим фактором типа взаимоотношений является спектр метаболитов, выделяемых растением, вид растения, стадия онтоге неза, физико–химические свойства почв, а также спектр возбудителей внутренней инфекции. Отмечена зависимость типа воздействия на расте ние от концентрации метаболитов Trichoderma и типов источника азота и углерода в питательной среде. Эффект разведения вызывал разнонаправ ленный эффект на растения от стимуляции до ингибирования роста и раз вития. Использование в составе питательной среды при культивировании T. аsperellum 302 источников азота NaNO2 и KNO3 оказало стимулирующее действие на рост корней и проростков (длина, сырая и сухая масса) и KNO на прорастание семян пшеницы сорта «Люба», а использование (NH4)2SO – ингибирующее. Использование в составе питательной среды при культи вировании T. аsperellum 302 источников углерода маннита и этилового спирта оказало стимулирующее действие на рост корней и проростков (длина, сырая и сухая масса) и прорастание семян пшеницы сорта «Люба», а использование сахарозы – ингибирующее.
При исследовании влияния культуральной жидкости различных изо лятов Trichoderma на рост и развитие проростков и корней пшеницы сорта «Люба» отмечена следующая закономерность: наибольшее количество фи тотоксических видов выделено для изолятов из могильников (53% токсич ные, 34% - стимуляторы, 13% - нейтральный тип воздействия), затем – из погребенных почв городища (42% - токсичные, 38% - стимуляторы, 20% нейтральный тип воздействия). Среди изолятов современных горизонтов почв обнаружены виды, как со стимулирующим (55%), так и нейтральным (16%) и отрицательным (31%) типами воздействия на растения.
Фитотоксическое действие изолятов из погребенных почв, вероятно, связано с активацией токсинообразования у эндогенных фитопатогенных микроорганизмов семян, сортовыми особенностями современных зерно вых культур и конкуренцией с растением за питательные вещества в почве.
Усиление токсинообразования фитопатогенным микроорганизмом Fusa rium spp. при обработке семян микроорганизмами-антагонистами отмечал также Монастырский (2004).
Длительное отсутствие контакта с растениями в глубинных слоях почвы привело к селекции изолятов с К-стратегией жизни, мощным гид ролазным комплексом и отрицательным типом взаимодействия с совре менными сортами растений.
Изучение антигенных свойств при выращивании T. asperellum 302, выделенной из погребенной почвы, и T. asperellum 18, выделенной из со временного горизонта, на жидкой среде Чапека, показало, что при пример но одинаковом выходе сухой биомассы на объем питательной среды, T. as perellum 18 в составе экстрагируемых антигенов содержала большее коли чество белков и углеводов, чем T.asperellum 302. Поскольку именно экст рагируемые антигены грибов содержат наибольшее количество аллерге нов, это позволяет предположить, что потенциально T.asperellum 302 явля ется источником меньшего количества веществ, способных вызывать ал лергические реакции, по сравнению с T. asperellum 18.
Выводы 1. Биологическая активность современных выщелоченных черноземов Камско – Устьинского района характеризуется большей напряженностью и функциональной активностью микроорганизмов, отвечающих за плодоро дие, что коррелирует с более высоким содержанием гумуса (8%) по срав нению с Алексеевским районом (6,5%).
2. В ряду от погребенных гидроморфных и автоморфных до новообра зованных гидроморфных и автоморфных горизонтов отмечена тенденция к увеличению биологической активности и содержания гумуса на фоне ак тивации гумусобразующих микроорганизмов и снижение биологической активности и содержания гумуса, соответственно, на фоне активации гу мусразлагающих.
3. В антропогенно - нарушенных почвах могильника отмечено полное восстановление биологической активности и содержания гумуса за период 3 тыс. лет.
4. Отмечена высокая частота встречаемости микромицетов рода Trichoderma, снижающееся в ряду от 60% до 4-5%, и преобладание в па леопочвах T. citrinoviride и T. longibrachiatum sect. Longibrachiatum, в от личие от современных, где больше T. asperellum. Обнаружение микроми цетов секции Longibrachiatum подтверждает их принадлежность к палео почвам, так как именно эта группа представлена в основании филогенети ческого древа.
5. Представители секции Longibrachatum могут являться маркерами древних палеопочв.
6. Микробиологический мониторинг может быть использован для оценки степени восстановленности археологических памятников и выяв ления эволюции рода микроорганизмов за определенный период.
Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Алимова Ф.К. Взаимоотношения Тrichoderma, распространенной на территории республики Татарстан, с микроорганизмами и растениями / Р.И. Тухбатова, Д.И. Тазетдинова, Ф.Э.А. Кабрера, Л.Ю. Каримова. // Грибы и водоросли в биоценозах – 2006: Материалы международной кон ференции, посвященной 75-летию Биологического факультета МГУ им.
М.В. Ломоносова: Москва, 31 января - 3 февраля 2006 г. – М.: МАКС Пресс, 2006. – С. 12-13.
2. Тазетдинова Д.И. Оценка факторов риска, обусловленных загряз нением почв / Р.И. Тухбатова, Ф.Э.А. Кабрера, Ф.К.Алимова, Е.А. Тафее ва // Итоги и перспективы научных исследований по проблеме экологии человека и гигиены окружающей среды. – Москва, 2006. – С. 477-482.
3. Karimova L.Yu. Biodiversity and ecophysiology of Tricho derma/Hypocrea strains isolated from the human skull dated as VIII-VI B.C.
discovered in the Murzichinsk II Tomb (Republic Tatarstan, Russia) / F.K. Ali mova, I. Druzhinina, R.I. Tukhbatova, D.I. Tazetdinova, C.P. Kubicek // 9th International Workshop on Trichoderma and Gliocladium, April 6-8, 2006, Vi enna, Austria. 2006. – P. 42.
4. Cabrera F.H.A. Interaction of fungi genus Trichoderma from the Re public of Tatarstan with microorganisms and plants / R.T. Mukhametshina, R.I.
Tukhbatova, D.I. Tazetdinova, F.K. Alimova // 10th annual Symposium of Bi ology Students in Europe, Ancona, 2-10 August, 2006 – P. 125.
5. Alimova F.K. Trichoderma/Hypocrea from Russia (Tatarstan Republic) – interaction with microorganism and plants / L.Yu. Karimova, R.I. Tukhba tova, F.H.A. Cabrera, D.I. Tazetdinova // 8th International Mycological Con gress, 21-26 August, 2006. Cairns Convention Centre Queensland, Australia. – P. 204.
6. Алимова Ф.К. Использование психрофильного вида Тrichoderma для восстановления супресивности почв республики татарстан / Ф.К. Али мова, Ф.Э.А. Кабрера, Р.И. Тухбатова, Р.Т. Мухаметшина, Д.И. Тазетди нова // Материалы Международной научной конференции «Экология и биология почв», Ростов-на-Дону 19 – 22 апреля 2006г. - Ростов-на-Дону, 2006. – С 10.
7. Шишкин А. В. Кинетическая характеристика изолятов микромице та рода Trichoderma секции: Trichoderma, Pachybasium, Longibrachiatum, выделенных из разных источников местообитания / А. В. Шишкин, Э. А.
Рафаилова, Ф.Э.А. Кабрера, Р.Т. Мухаметшина, Д.И. Тазетдинова, Р.И.
Тухбатова, Ф.К. Алимова. // Сборник тезисов ХIV международной конфе ренции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов – 2007», Москва. – С. 100.
8. Рафаилова Э. А. Морфологическая характеристика изолятов мик ромицета рода Trichoderma секции: Trichoderma, Pachybasium, Longibrachiatum, выделенных из разных источников местообитания / Э.А.
Рафаилова, А.В. Шишкин, Ф.Э.А. Кабрера, Р.Т. Мухаметшина, Д.И. Тазет динова, Р.И. Тухбатова, Ф.К. Алимова // Сборник тезисов ХIV междуна родной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоно сов – 2007» – С. 103.
9. Cabrera F. H. A. Identification and phytotoxical properties of fungi genus Trichoderma from ancient lands / F. H. A. Cabrera, R. T.
Mukhametshina, E. A. Rafailova, A. B. Shishkin, R. I. Tukhbatova,, D. I.
Tazetdinova, F. K. Alimova // Сборник тезисов ХIV международной конфе ренции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов – 2007» – С.
103 - 104.
10.Cabrera F. H. A. Interaction of fungi genus Trichoderma from the Re public of Tatarstan with microorganisms and plants / F. H. A. Cabrera, R. T.
Mukhametshina, R.I. Tukhbatova, D. I. Tazetdinova, F. K. Alimova, // Interna tional Mycological SymBioSE Italy 2006, p. 82-83.
11.Алимова Ф.К.. Биотехнология. Промышленное применение грибов рода Trichoderma: учебно-методическое пособие / Ф.К.Алимова, Д.И. Та зетдинова, Р.И. Тухбатова. – Казань: УНИПРЕСС ДАС, 2007. – 234 стр.
12.Тухбатова Р.И. Характеристика потенциально патогенных видов Trichoderma, выделенных на территории республики Татарстан / Р.И. Тух батова, Д.И. Тазетдинова, Ф.К. Алимова // Пятый Всероссийский конгресс по медицинской микологии. 28–30 марта 2007. “Успехи медицинской ми кологии“. Том X. Глава I. Современная эпидемиология микозов человека.
Организация борьбы с массовыми грибковыми инфекциями. – С. 31.
13.Скворцов Е.В. Использование Тrichoderma в процессе переработки отходов спиртового производства / Е.В.Скворцов, Р.И. Тухбатова, Д.И.
Тазетдинова, Т.А. Мельникова, Ф.К.Алимова / Ученые записки Казанского государственного университета. – в печати.
14.Рафаилова Э.А. УДК 579.64 Сравнительные морфологические ха рактеристики изолятов микромицетов рода TRICHODERMA, выделенных из разных местообитаний и влияние абиотических факторов на рост и раз множение микромицетов / Э.А. Рафаилова, А.В. Шишкин, А.Ф. Кабрера, Д.И. Тазетдинова, Р. И. Тухбатова;
Казанск. Гос. Ун-т. – Казань, 2007. – 14 с.: 7 ил.- Библиогр.: 20 назв. – Рус. – Деп. В ВИНИТИ 07.05.07 № 505 В2007.
15.Рафаилова Э.А. Высокопродуктивный штамм - продуцент ксиланаз для кормопроизводства /Э. А. Рафаилова, Р. И. Тухбатова, Д.И. Тазетди нова // VII Всероссийская выставка научно-технического творчества моло дежи НТТМ–2007, Москва, 26-29 июня 2007 г., 242-243 с.
16.Кабрера Ф.Э.А. Trichoderma koningii в биологическом контроле Fusarium oxysporum / Ф.Э.А. Кабрера, Р.Т. Мухаметшина, Э.А. Рафаилова, Д.И. Тазетдинова, Р.И. Тухбатова // Материалы международной научной конференции “Микроорганизмы и биосфера”, Москва, 2007 г., 48-49 с.
17.Подбор компонентов питательных сред для биотехнологические важных штаммов грибов рода Trichoderma / Ф.Э.А. Кабрера, С.В. Молина, Р.Т. Мухаметшина, Э.А. Рафаилова, Д.И. Тазетдинова, Р.И. Тухбатова // Материалы 3 международной молодежной конференции “Актуальные ас пекты современной микробиологии”, Москва, 2007 г., 42-43 с.
18.Рафаилова Э.А. Молекулярно-генетический анализ изолятов рода Trichoderma, выделенных из различных экологических ниш / Э.А. Рафаи лова, Д.И. Тазетдинова, Р.И. Тухбатова // Материалы 3 международной молодежной конференции “Актуальные аспекты современной микробио логии”, Москва, 2007 г., 94-95 с.
19.Рафаилова, Э.А. Первые находки в гидросфере антропогенного ландшафта Trichoderma brevicompactum на территории РТ. / Э.А. Рафаило ва, Р.И. Тухбатова, Д.И. Тазетдинова, Ф.Э.А. Кабрера, Р.Т. Мухаметшина, Ф.К.Алимова // Вода: химия и экология. – в печати.
20.R. I. Tukhbatova. The Hypocrea/Trichoderma strains isolated from eco systems in Tatarstan Republic (Russia) / R. I. Tukhbatova, D. I. Tatzetdinova, F. K. Alimova, I. S. Druzhinina // XV Congress of European Mycologists, Saint Petersburg, 2007, p. 152-154.
21.Тазетдинова Д.И. Биопрепарат для культивирования безвирусного картофеля / Д.И. Тазетдинова, Р.И. Тухбатова, Э.А. Рафаилова, Ф.К. Али мова // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А.
Овчинникова. – 2008. –Т.3, №3. – С. 18-22.
22.Тазетдинова Д.И. Основы компостирования в сельском хозяйстве / Д.И. Тазетдинова, Ф.К. Алимова, Н.Н. Кузнецова, Р.И. Тухбатова, И.А.
Дегтярева, А.Х. Яппаров // Рекомендации. - Казань, 2008. - 19 c.
23.Тазетдинова, Д.И. Перспективные методы сельскохозяйственной биотехнологии / Д.И. Тазетдинова, Ф.К. Алимова, О.Р. Латыпов, Р.И. Тух батова, А.Х. Яппаров // Рекомендации. - Казань, 2008. - 19 c.
24.Алимова Ф.К., Р.И. Тухбатова, Д.И Тазетдинова. Штамм гриба Trichoderma asperellum и способ его применения. № 2008108035 от 12.05.2008. (Принято к рассмотрению).
25.Алимова Ф.К., Р.И. Тухбатова, Д.И. Тазетдинова, Е.В.Скворцов Штамм гриба Trichoderma asperellum и способ его применения.
№2008108034/13(008691). ( Принято к рассмотрению).
26.Куликов, С.Н. Влияние ионов металлов (Zn2+, Cu2+, Fe2+) на анти генные свойства производственного штамма Trichoderma asperellum Samuels / С.Н.Куликов, С.А.Лисовская, Х.Г. Хиад, Ю.А.Тюрин, Д.И. Та зетдинова, Р.И. Тухбатова, Н.И.Глушко, Ф.К.Алимова // Проблемы Меди цинской Микологии. – Т. 10, № 3 - в печати.
27.Рафаилова, Э.А. Влияние активированной воды на микромицеты рода Trichoderma / Э.А. Рафаилова, Р.И. Тухбатова, Д.И. Тазетдинова, Ф.К.Алимова // Вода: химия и экология. – 2008. - №2. – С. 35-40.
28.Тазетдинова, Д.И. Влияние загрязнения тяжелыми металлами на целлюлазную активность почв Альметьевского района республики Татар стан/ Д.И. Тазетдинова, Р.И. Тухбатова, Э.А. Рафаилова, Ф.К. Алимова // Почвоведение. – в печати.
29. Тухбатова, Р.И. Микроорганизмы палеопочв республики Та тарстан / Р.И. Тухбатова, Д.И. Тазетдинова, Ф.К.Алимова, Л.В.Мельников // Ученые записки Казанского государственного университета. – 2008. –Т.
150, кн.2. – С. 225-230.
30. Рафаилова, Э.А. Влияние абиотических факторов на рост и размножение микромицетов рода Trichoderma / Э. А. Рафаилова, А. В.
Шишкин, Э.А.Ф. Кабрера, Д.И. Тазетдинова, Р.И. Тухбатова, Ф.К.Алимова // Ученые записки Казанского государственного университе та. – 2008. – Т. 150, кн.2. – С.167-175.
Просьба отзывы отправлять по факсу: (843) 238-71-21 или на e-mail: