Микробиологическая характеристика археологических памятников на территории республики татарстан
На правах рукописи
Тухбатова Резеда Ильгизовна
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
АРХЕОЛОГИЧЕСКИХ ПАМЯТНИКОВ
НА ТЕРРИТОРИИ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН
03.00.07 - микробиология
03.00.04 – биохимия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Казань - 2008
2
Работа выполнена на кафедрах микробиологии и биохимии биолого-почвенного факультета ГОУ ВПО «Казанский государственный университет им. В.И.Ульянова-Ленина»
Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Алимова Фарида Кашифовна
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, в. н. с.
Марфенина Ольга Евгеньевна (Московский государственный университет им. М. Ю. Ломоно сова, г. Москва) доктор биологических наук, профессор Багаева Татьяна Вадимовна (Казанский государственный университет им. В.И.Ульянова Ленина, г. Казань)
Ведущая организация: Казанский институт биохимии и биофизики КазНЦ РАН
Защита состоится 11 декабря 2008 г. в 1300 часов на заседании диссертационного Совета Д 212.081.08. при Казанском государственном университете по адресу: 420008, г.Казань, ул. Крем левская, д.18.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке им. Н.И.Лобачевского Казанского госу дарственного университета.
Автореферат разослан «10» ноября 2008 г.
Ученый секретарь диссертационного Совета доктор биологических наук, профессор З.И.Абрамова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. В последние десятилетия происходит значительное уси ление процессов техногенной деградации естественных экосистем, которые сопро вождаются изменениями и разрушением почв, а вместе с тем трансформацией или потерей выполняемых ими биосферных и биогеоценотических функций, что может привести к труднопрогнозируемым последствиям (Добровольский, Никитин, 1990, 2000;
Соколов и др., 2004). Проблема сохранения и восстановления почв, подвер гающихся все большей антропогенной и техногенной нагрузке, является на сегодня одной из приоритетных в рамках защиты окружающей среды.
Чтобы оценить масштабы и спрогнозировать последствия современных форм деградации естественных экосистем, необходимо изучать процессы их реградации или восстановления – как в целом, так и отдельных их компонентов. Среди компо нентов экосистем почвенная составляющая является одной из наиболее важных, бу дучи связующим звеном их функционирования. В зависимости от способности почв восстанавливать свой исходный облик, и, следовательно, выполнять свои функции, будет зависеть регенерационная способность экосистем в целом.
Для изучения восстановительной способности почв за длительные промежут ки времени археологические памятники оказались наиболее подходящим объектом.
Наши предки дали начало уникальному природному эксперименту, длящемуся уже несколько сотен и даже тысяч лет, позволяющему оценить скорость и особенности восстановления почв. На сегодня считается, что в рамках генетического почвоведе ния процесс становления и эволюции профиля экспериментально практически не изучаем (Соколов, 2004). Почвообразование же на обнаженных породах разновозра стных археологических памятников может служить такой экспериментальной моде лью, что имеет большое значение в рамках экологических исследований.
Современные нарушения почвенного покрова намного более масштабны и разнообразны, чем древние. Особую тревогу вызывает глобальное уменьшение за пасов органического вещества в почвах (Пузаченко и др., 2006;
Adams, 2004 и др.).
В связи с этим остро встают вопросы о скорости гумусонакопления и направленно сти процессов восстановления почв при разных типах нарушений в долгосрочном прогнозе, а также принципиальной возможности почв достигать своего первона чального состояния.
Известно, что почвенные микроорганизмы являются неотъемлемой составной частью почвы. Практически все процессы, протекающие в ней, в той или иной сте пени связаны с жизнедеятельностью микроорганизмов (Звягинцев, 2005). Поэтому характеристика микробного сообщества относится к числу важнейших диагностиче ских показателей, отражающих условия почвообразования (Демкин, 1997).
Цель настоящей работы – оценка степени измененности биологической ак тивности почвы через 1000 - 3000 лет после их нарушений в результате деятельно сти древнего человека в условиях лесостепной зоны Волжско-Камской лесостепи.
Основные задачи исследования:
1. Оценить биологическую активность в профиле современных выщелоченных черноземов Алексеевского и Камско-Устьинского районов в местах сооружения ар хеологических памятников и целинных почв, незатронутых деятельностью челове ка.
2. Исследовать биологическую активность древних черноземов Камско– Устьинского района, погребенных под периферийным валом, трансформировавших ся в гидроморфных и автоморфных условиях в течении 1000 лет на примере Боль ше–Кляринского городища (VIII – X вв. н. э.).
3. Определить характер и особенности нарушений биологической активности новообразованных в гидроморфных и автоморфных условиях почв за период лет на поверхности вала в результате антропогенной деятельности при формирова нии древнего городища.
4. Определить характер и особенности нарушений биологической активности палеопочв за период 3000 лет в местах сооружения захоронений на примере Мурзи хинского II могильника (VIII – VI вв. до н. э.).
5. Изучить изменение видового состава, популяционной структуры и страте гии жизни грибов рода Trichoderma в новообразованных, погребенных и фоновых почвах разного возраста.
6. Определить возможности использования биологических методов изучения почв в решении археологических задач.
Научная новизна работы. Впервые исследована биологическая активность черноземов, погребенных под периферийным валом 1000 лет назад на Больше Кляринском городище Камско–Устьинского района Республики Татарстан, транс формировавшихся в гидроморфных и автоморфных условиях.
Впервые исследована биологическая активность погребенных черноземов в останках человеческих захоронений Мурзихинского II могильника Алексеевского района Республики Татарстан.
Впервые дана оценка состояния биологической активности в почвенном про филе лесостепной зоны Волжско-Камской лесостепи через 1000-3000 лет после пре кращения деятельности человека.
Впервые выявлены сукцессионные изменения состава микромицетного сооб щества рода Trichoderma и его популяционной структуры в черноземных палеопоч вах. Показано, что характерным для погребенных почв Мурзихинского II могильни ка был вид H. schweinitzii/ T. citrinoviride, для Больше – Кляринского городища и со временных горизонтов – T. asperellum, для последнего отмечены различия в ITS по следовательностях при расщеплении на клоны.
Практическая значимость работы. Полученные результаты по почвенному мониторингу могут быть использованы в учебном процессе, для реконструкции ди намики палеоэкологических условий лесостепной зоны Волжско-Камской лесостепи за последние 3000 лет, для прогнозирования изменения микробных сообществ в природном и антропогенном трендах развития почв.
Показана возможность восстановления биологической активности и видового разнообразия современных антропогенно нарушенных почв за счет интродукции почвенных микроорганизмов палеопочв. Получены положительные отзывы от пред приятий по предварительным опытам по использованию штаммов Trichoderma из погребенных почв в сельскохозяйственной биотехнологии.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Погребенные почвы в местах проживания древнего населения (1000 3000 лет назад) характеризуются достоверными изменениями биологической актив ности.
2. В новообразованных гидроморфных горизонтах показано соответствие уровня содержания гумуса и биологической активности уровню современных це линных почв в отличие от новообразованных автоморфных горизонтов.
3. Исследованные палеопочвы характеризуются большим видовым разно образием и меньшей гетерогенностью популяций рода Trichoderma по сравнению с современными видами микромицета.
4. Наиболее типичными видами были: в почвах Мурзихинского II могиль ника - вид H. schweinitzii/ T. citrinoviride, Больше–Кляринского городища и совре менных горизонтов – T. asperellum.
5. Из погребенных почв выявлены изоляты секции Longibrachiatum, кото рые располагаются ближе всех к основанию филогенетического древа и могут яв ляться предковыми для современных видов грибов рода Trichoderma.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены на итоговых на учно-образовательных конференциях Казанского государственного университета (Казань, 2004 - 2008), «Ферменты микроорганизмов: структура, функции, примене ние» (Казань, 2005), «Грибы и водоросли в биоценозах» (Москва, 2006), «Итоги и перспективы научных исследований по проблеме экологии человека и гигиены ок ружающей среды» (Москва, 2006), «9th International Workshop on Trichoderma and Gliocladium» (Vienna, 2006), «Symposium of Biology Students (Ancona, 2006), «Эколо гия и биология почв» (Ростов-на-Дону, 2006), «Биология- наука 21 века» (Пущино, 2006, 2007), «Ломоносов – 2007» (Москва, 2007), «International Mycological SymBioSE» (2006), «Успехи медицинской микологии» (Москва, 2007), «Межвузов ская конференция молодых ученых и студентов (Казань, 2007), «Научно техническое творчество молодежи» (Москва, 2007), «Микроорганизмы и биосфера»
(Москва, 2007), «XV Congress of European Mycologists» (Saint Petersburg, 2007), «Симбиоз» (Казань, 2008).
Публикации. По результатам диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК, и 1 учебное пособие.
Структура и объем работы. Общий объем диссертации 178 страниц. Диссер тация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, ре зультатов исследований, обсуждения результатов, выводов, заключения, списка ли тературы. Работа содержит 14 таблиц и 32 рисунка. Список литературы включает 200 источников, в том числе 80 иностранных.
Место проведения работы и благодарности. Работа выполнена на кафедрах микробиологии и биохимии ГОУ ВПО КГУ. Автор выражает глубокую признатель ность научному руководителю д.б.н., доц. Алимовой Фариде Кашифовне за внима тельное отношение к работе;
д.б.н., проф. Ильинской О.Н. за возможность проведе ния микробиологических исследований на базе кафедры микробиологии;
к.х.н., к.б.н. Мельникову Л. В. за помощь при отборе и физико-химическом анализе образ цов почв;
с.н.с Гарусову А.В. за помощь при хроматографических исследованиях азотфиксации и респираторной активности почв;
инж. Мочаловой Н.К. и инж. По номаревой А.З. за консультации при проведении микробиологического мониторинга почв;
к.б.н., асс. Зеленихину П.В. за помощь при проведении микрофотосъемки гри бов;
к.б.н., асс. Кравцовой О.А. и аспиранту Ибрагимовой И. И. за помощь в прове дении молекулярно-генетических исследований штаммов Trichoderma;
к.б.н., с.н.с.
Акберовой Н.И. за консультации по статистической обработке данных;
аспиранту Морозову М.В. за помощь в проведении АСМ-микроскопии;
д.б.н. Дружининой И.
С. (Vienna University of Technology, Австрия) за помощь при проведении секвениро вания изолятов Trichoderma;
к.б.н., н.с. Скворцову (ВНИИВИ) и инж. Мельниковой Т.А. (ОАО «Холод») за помощь в проведении исследований ферментативной актив ности;
аспирантам и студентам лаборатории сельскохозяйственной биохимии и био технологии кафедры биохимии.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследований Отбор образцов почвы из Мурзихинского II могильника Алексеевского района РТ.
Мурзихинский II могильник расположен в 3-3,5 км к востоку от бывшего с.
Мурзиха, в 5 км к северо-западу от с. Алексеевск. Образцы почвы были отобраны из внутренней части 2 человеческих черепов, обнаруженных во время археологических раскопок на Мурзихинском II могильнике. Первый череп был найден в погребении 196, принадлежал мужчине 30 лет, представителю постмаклашеевской культуры (8 6 вв. до н.э., ранний железный век). Второй был извлечен из погребения 162, пол его не определен.
Как было показано, образцы почвы попали в погребения при захоронении из верхней части горизонта (А1) старопахотного выщелоченного чернозема. Структур но-агрегатный анализ показал, что, несмотря на весьма низкое для данной разно видности по гранулометрическому составу содержание гумуса в сравнении с собст венно целинными аналогами (6,6% при содержании физической глины 65% и или стой фракции 45%), почва характеризуется хорошим структурным состоянием. Рас пределение гумуса во фракциях однородное (Мельников, 2007).
Отбор образцов почвы из Больше-Кляринского городища.
Создание Больше-Кляринского городища относится к булгарскому раннему периоду. Расположено оно в 1 км к северо-западу от с. Большие Кляри Камско Устьинского района РТ на левом берегу речки Сухой Улемы.
Больше-Кляринское городище - характерное для данной культуры городище убежище, представляющее собой комплекс сопряженных валов и рвов. Время строительства объекта относится ориентировочно к VIII-X вв. Почвенный покров при формировании древнего городища имел уклон, вследствие чего одна часть вала располагалась выше, а другая ниже уровня моря с различными условиями увлаж ненности атмосферными осадками. Тип почвы в исследуемом районе отнесен к среднемощному среднегумусному тяжелосуглинистому выщелоченному чернозему.
Погребенная почва под периферийным валом представляет собой гумусовый слой, трансформировавшийся в гидроморфных (Гп) и автоморфных (Ап) условиях, вслед ствие чего сформировались различные условия консервации гумусового горизонта.
Почвенный покров над погребенной почвой представлен периферийным валом и представляет собой новообразованный гумусовый слой, также трансформировав шийся в гидроморфных (Гн) и автоморфных (Ан) условиях.
Отбор образцов проводили при полевом обследовании фортификационных сооружений городища в 2004-2005 гг. Пробы отбирали из 1) погребенной почвы под периферийным валом, 2) новообразованного в течение 1 тыс. лет чернозема в верх ней части толщи вала, 3) целинного чернозема, располагавшегося в стороне от горо дища, незатронутого деятельностью человека (табл. 1).
Образцы почвы (табл. 1) отобраны в соответствии с правилами отбора проб для микробиологического анализа с соблюдением условий стерильности из не скольких точек каждого слоя насыпи или выборочных слоев и гор. А1 погребенных почв и их современных аналогов.
В дальнейшем образцы для каждого слоя/горизонта усредняли (Методы …, 1991).
Таблица Характеристика чернозема в районе Больше-Кляринского городища и Мурзи хинского II могильника Варианты опыта Горизонт Глубина от- Гумус, pH C, C:N Валовое бора, см % % содержание N, % Мурзихинский II могильник Мк-контроль A1 0 – 10 6,37 6,2 4,8 12,3 0, (целина) Мн- A1 0-35 6,5 6,3 3,4 11,5 0, новообразован ная почва Мп1 - погребен- [A1] 70-110 6,6 6,6 3,7 11,8 0, ная почва Мп2 - погребен- [A1] 80-120 6,6 6,7 3,8 12,2 0, ная почва Больше – Кляринское городище Ц – контроль 10 – 40 7,72 6,9 4,5 13,7 0, A (целина) гидроморфные горизонты Гн - новообра- A1 20 – 40 8,0 6,4 4,6 13,2 0, зованная почва Гнк - новообра- [ЕА1] 122-130 3,75 6,4 2,2 11,6 0, зованный ко ричневый слой Гп1 - погребен- [A11] 130-148 7,9 6,3 4,6 10,9 0, ная почва Гп2 - погребен- [A12] 148-158 7,86 6,3 4,5 12,3 0, ная почва автоморфные горизонты Ан - новообра- A1 20-52 5,6 6,2 3,2 14,7 0, зованная почва Ап1 - погребен- [A11] 52-77 6,45 7,9 2,1 16,9 0, ная почва Ап2 - погребен- [A12] 77-89 6,7 8,3 3,7 17,2 0, ная почва Почвенные микробные сообщества исследованных объектов характеризовали по численности и активности. Определение численности микроорганизмов в почве проводили методом прямого счета в люминесцентном микроскопе по Звягинцеву и Кожевину и посева на питательные среды (Головченко и др., 1995;
Кожевин, 1989;
Методы …, 1991). Количественный учет грибов проводился методом Хансена в мо дификации Мирчинк (1988).
Активность азотфиксации в почве измеряли методом Харди в модификации Умарова (Гарусов с соавт., 2006), определение активности почвенного дыхания осуществляли на газовом хроматографе (Гарусов с соавт., 2006).
Углерод микробной биомассы рассчитывали по скорости субстрат - индуци рованного дыхания с использованием коэффициента пересчета 40,04 (Anderson, Domsch, 1978).
Выделение Trichoderma из образцов почвы проводили методом серийных раз ведений с последующим высевом на среду с пароморфогенным веществом (Бенкен, Хацкевич, 1972).
Моноспоровые культуры грибов получали методом разведения конидиальной суспензии в различных модификациях (Васин, 1966;
Кузнецов и др., 1968), (Лиха чев, 1994).
Идентификация по морфологическим признакам проводилась по ключу Алек сандровой (Александрова с соавт., 2001), Samuels (2003) и Chaverri (2003), молеку лярно-генетическим методом и методом ООП (объектно-ориентированный подход) по Тарасову (2006).
Изучение морфологии поверхности спор Trichoderma проводили при помощи атомно-силового микроскопа NTEGRA Prima (NT-MDT). Изображения были полу чены полуконтактным методом (Миронов, 2004;
Бухараев с соавт., 2006).
Выделение ДНК, ПЦР-анализ, секвенирование. ДНК было выделено из свеже го мицелия фенол/хлороформным методом (Druzhinina et al., 2005).
Участки ядерной рДНК, содержащие ITS1 и 2 и ген tef1, были амплифициро ваны в реакции ПЦР и секвенированы с использованием комбинации праймеров:
SR6R (5’-AAG TAG AAG TCG TAA CAA GG-3’) и LR1 (5’-GGT TGG TTT CTT TTC CT-3’);
EF1-728F (5’-CAT CGA GAA GTT CGA GAA GG-3’) и EF1-986R (5’-TAC TTG AAG GAA CCC TTA CC-3’).
Идентификацию нуклеотидных последовательностей проводили с использо ванием программы TrichoMark – TrichoBLAST.
Результаты секвенирования фрагмента гена tef1 обрабатывали при помощи пакета программ Lasergene 5.03 (DNASTAR, Inc., США). Программа SeqMan ис пользовалась для анализа сиквенсных хроматограмм. Программа MegAlign исполь зовалась для выравнивания последовательностей и экспорта их в формате GCG.
Вегетативную совместимость моноспоровых клонов изучали по Дьякову и Долговой (1995).
Антагонистическую активность и конкурентоспособность изолятов Tricho derma определяли методом встречных культур на среде Чапека (Симонян и Мами конян, 1982).
Гетерогенность популяций выделенных изолятов оценивали по их разделению на культурально-морфологические типы (КМТ) и появлению секторов при росте на чашках Петри (Дьяков, 1998).
Определение ксиланазной, протеазной и целлюлазной активностей изолятов Trichoderma проводили по Кониг и Скворцову (Konig, 2002, Скворцов, 2007).
Определение фитотоксичности культуральной жидкости и почвы проводили на семенах растений (Методы …, 1991).
Статистическую обработку результатов проводили с помощью электронных таблиц Microsoft Excel, Statgraphics plus 2.1.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Микробиологическая характеристика выщелоченных черноземов в районе расположения археологических памятников: 1) Больше-Кляринского городища (Камско-Устьинский район) и Мурзихинского II могильника (Алексеевский район) Нами были исследованы такие показатели как численность и микробная био масса, количественная и функциональная структура сообщества микроорганизмов, респираторная активность и интенсивность азотфиксации.
1.1. Оценка биологической активности современных горизонтов в районе рас положения археологических памятников: 1) Больше-Кляринского городища (Кам ско-Устьинский район) и Мурзихинского II могильника (Алексеевский район) До описания погребенных почв нами были охарактеризованы современные фоновые почвы в районе расположения памятников: 1) Больше-Кляринского горо дища (Камско-Устьинский район) и Мурзихинского II могильника (Алексеевский район) (табл. 1).
Сравнительный микробиологический анализ современных горизонтов фоно вых почв показал, что выщелоченные черноземы Камско-Устьинского района ха рактеризуются более высоким уровнем интенсивности дыхания (в 3 раза выше), азотфиксации (в 2 раза), биомассы и численности отдельных групп микроорганиз мов: гетеротрофов (в 2 раза), бактерий, потребляющих минеральные формы азота (в 1,5 раза) и олиготрофов (в 1,5 раза) по сравнению с исследованными почвами в Алексеевском районе. Микроорганизмов - педотрофов и спорообразующих бакте рий, численно преобладавших в последнем районе, в 2 и 5 раз выше, соответствен но, чем в черноземах Камско-Устьинского района. Наблюдаемые нами различия ве роятно связаны с физико-химическими параметрами почв и географическим распо ложением исследуемых объектов (Звягинцев, 2005;
Марфенина, 2001;
Мирчинк, 1988) (табл. 1).
Таким образом, при равных одинаковых типах черноземов (выщелоченных) в современных целинных почвах нами отмечается различие в содержании гумуса, что коррелирует с активацией различных групп микроорганизмов.
1.2. Микробиологический анализ погребенных и новообразованных почв в районе Больше-Кляринского городища 1.2.1. Микробиологическая характеристика почв Больше-Кляринского городища, трансформировавшихся в гидроморфных условиях водного режима Сравнительный анализ современной фоновой, новообразованной на поверхности вала и погребенной почв городища, трансформировавшихся в гидроморфных условиях водного режима, показал, что в погребенной почве возрастает численность спорообразующих, сульфатредуцирующих бактерий, бактерий рода Azotobacter и Clostridium на фоне увеличения респираторной активности и процессов минерализации органического вещества.
По данным Заварзина (2003) активность микроорганизмов может возрастать при уменьшении размера структурных агрегатов почвы и увеличении их поверхно сти. Структурно-агрегатный состав является одним из важных показателей, характе ризующих состояние почвы, и может служить важным признаком при выявлении изменений, которым подверглась почва, погребённая под толщей вала, главным об разом, её верхний горизонт (А1) (Копосов, 2004, Мельников, 2007). Показано, что на территории городища со временем в результате диагенеза, происходит изменение структурного состава в сторону укрупнения структурных отдельностей (глыбистый состав). Отмечено некоторое уменьшение содержания фракций среднего размера в образцах погребённой почвы в пользу фракций более крупного размера. Анализ же состава водопрочных агрегатов показал резкое уменьшение содержания крупных фракций и увеличения более мелких, что особенно заметно в гидроморфном образ це. Наблюдаемое нами возрастание потенциальной респираторной активности мож но объяснить уменьшением размеров структурных агрегатов в палеопочве (Мельни ков, 2007).
В погребенном слое количество микроорганизмов - активных гумусообразова телей ниже, чем в новообразованном (на 20%). В новообразованной по сравнению с погребенной почвой отмечено возрастание гетеротрофных, потребляющих мине ральные формы азота и денитрифицирующих микроорганизмов и увеличение мета болического коэффициента. Можно отметить возрастание жизнеспособности и ак тивности в новообразованной почве и снижение активности в палеопочве автохтон ной микрофлоры, участвующей в процессе гумусоразложения.
По данным численности микроорганизмов «коричневый слой» характеризует ся наименьшей напряженностью процессов, за исключением молочно - кислых бак терий – деструкторов, кислотообразователей. По данным коэффициентов педотроф ности, олиготрофности в коричневом слое отмечена и слабая функциональная ак тивность. Выявлена также тенденция к снижению интенсивности азотфиксации и дыхания в коричневом слое по сравнению с современной и погребенной почвами.
Этой слой можно рассматривать как промежуточный от стадии разрушения и обра зования минералов к накоплению органического вещества с последующим форми рованием гумусового слоя.
1.2.2. Микробиологическая характеристика почв Больше-Кляринского городища, трансформировавшихся в автоморфных условиях водного режима Сравнительный анализ погребенной и новообразованной на валу почвы, трансформировавшейся в автоморфных условиях водного режима, показал, что в условиях консервации в погребенной почве сохранилось более высокое содержание гумуса - 6,4-6,7% против 5,6%. В автоморфном новообразованном слое отмечено увеличение численности автохтонной и олиготрофной микрофлоры, бактерий, по требляющих минеральные формы азота, участвующих в процессах разложения гу муса, гетеротрофов на фоне возрастания метаболического коэффициента. При их высокой активности в почве создается низкий поток доступных питательных ве ществ, что является стимулирующим фактором для олиготрофов, способных разви ваться только в таких условиях.
Показателем активности почвенных гетеротрофных микроорганизмов являет ся дыхание, а азотфиксирующих бактерий - интенсивность азотфиксации. В погре бенной почве нами отмечено возрастание потенциальной активности газообмена и численности бактерий рода Azotobacter. Аналогичная картина описана для светло каштановой почвы Ипатовского кургана-могильника степного Предкавказья (Цхов ребов, Каргалев, 2000).
Сравнительный анализ гидроморфных и автоморфных почв, погребенных в течение 1000 лет и новообразованных в результате деятельности древнего человека, показал, что в гидроморфной новообразованной почве содержание гумуса соответ ствует уровню погребенной, а в автоморфной новообразованной почве – ниже на 1%. Эти данные полностью коррелируют с биологической активностью в исследо ванных районах. Предполагается, что гидроморфные условия способствуют консер вации гумуса при погребении почв и увеличению его при новообразовании (Мель ников, 2007).
Новообразованные автоморфные и гидроморфные горизонты характеризуются тенденцией к восстановлению общей биологической активности и содержания гу муса, однако полное восстановление гумусового горизонта и сходство с целинными аналогами, где наблюдались естественные эволюционно - сукцессионные измене ния, отмечено только в последнем случае, что вероятно связано со степенью струк турированности, биологической активностью и комплексом физико-химических факторов, наибольшее значение среди которых имеет фактор увлажнения.
Выявлены новообразованные гидроморфные горизонты, характеризующиеся тенденцией к восстановлению по данным общей биологической активности, а также новообразованные автоморфные горизонты, характеризующиеся более медленной тенденцией к восстановлению активности и содержания гумуса.
1.3. Микробиологический анализ погребенных и новообразованных почв в районе Мурзихинского II могильника (Алексеевский район) Сравнительный анализ современной и погребенной почв в районе могильника показал увеличение в последних численности спорообразующих бактерий, педотро фов, олиготрофов, денитрификаторов и клостридий на фоне увеличения содержания биомассы и метаболического коэффициента. В современной почве отмечена более высокая интенсивность дыхания и азотфиксации (на 15 – 20%). Новообразованная и погребенная почвы схожи по содержанию гумуса и структуре микробного сообще ства, что позволяет сделать выводы о полном восстановлении биологической актив ности почвы.
Сравнительный анализ погребенного чернозема Алексеевского района с поч вами Камско - Устьинского района показал, что в гидроморфной почве выше чис ленность гетеротрофов, бактерий, потребляющих минеральные формы азота, суль фатредукторов, олиготрофов и бактерий рода Azotobacter, а также интенсивность азотфиксации и дыхания;
в автоморфной - больше денитрификаторов и клостридий.
В почве могильника выше численность спорообразующих и молочно-кислых бакте рий, педотрофов. По содержанию гумуса почвенные горизонты схожи с автоморф ной почвой (6,6%), в гидроморфной - на 1% больше. Таким образом, описана общая биологическая активность почв в районе расположения археологических памятни ков – Больше-Кляринского городища и Мурзихинского II могильника. Биологиче ская активность убывает в ряду гидроморфные почвы городища – почвы могильни ка – автоморфные почвы городища.
1.4. Микологическая характеристика выщелоченных черноземов в районе рас положения археологических памятников Информативным биотическим носителем почвенной памяти обоснованно мо жет служить почвенная микобиота (Таргульян, 2005). Нами было проведено иссле дование численности и биомассы микроскопических грибов в современной фоно вой, новообразованной и погребенной почвах в районе расположения археологиче ских памятников.
Анализ численности грибов в изученных почвах выявил тенденцию к увели чению числа КОЕ в ряду от современных к погребенным почвам. По данным прямо го учета были отмечены отличия в распределении содержания биомассы грибов. В почвенных образцах в районе городища эти показатели ниже в 3-4 раза. Как прави ло, между показателями численности КОЕ грибов и содержанием грибной биомассы наблюдается прямая положительная корреляция (Терехова, 2007). Это явление было характерно и для наших почв (рис. 1).
На основании численности КОЕ исследованные почвы (кроме образцов Ц, Гн и Гнк городища) могут быть отнесены к умеренно заселенным грибами. А образцы современной фоновой почвы (Ц), новообразованной почвы на поверхности вала (Гн) и новообразованного коричневого слоя (Гнк) – к мало заселенным грибами.
Рис. 1. Численность и биомасса микроскопических грибов в почвах археологических па мятников.
Индексы видового разнообразия грибных комплексов (H’) в погребенных поч вах имели наибольшие значения (3,1-3,3), максимум отмечен в погребенной почве могильника (3,3). Самыми скудными оказались современные фоновые и новообра зованные почвы: здесь выделено меньше видов микромицетов. Увеличение видово го разнообразия грибных комплексов может быть связано с физико-химическими свойствами почвы, некоторые из которых, например такие, как нейтрализация почв, способствуют увеличению грибного биоразнообразия (Марфенина, 2001).
При изучении видового состава микроскопических грибов выщелоченного чернозема было обнаружено 42 вида грибов. Современные почвы характеризуются снижением видового разнообразия микроскопических грибов, частоты встречаемо сти грибов рода Trichoderma и увеличением частоты встречаемости фитопатогенных грибов таких, как Aspergillus, Fusarium, Penicillum. Кластерный анализ комплексов микромицетов исследованных почв, проведенный на основании представленности и частоты встречаемости видов, показал существенные отличия современных почв от погребенных. Наибольшим сходством характеризовались комплексы грибов погре бенной почвы могильника и гидроморфной почвы городища. В другой крупный кластер были объединены комплексы микроскопических грибов, выделенные из со временных фоновых и новообразованных почв. Комплекс микромицетов, выделен ный из новообразованного коричневого слоя почвы в толще вала, наиболее отличал ся от всех исследованных: здесь было выделено меньше всего видов грибов и часто та встречаемости их была ниже, чем в других образцах.
Известно, что ответственными за плодородие и супрессивность почв являются представители рода Trichoderma (Kubicek et al., 2001;
Bentez et al., 2004;
Ленглер, 2005;
Алимова и др., 2007). Погребенные почвы являются природными резервуара ми сохранения численности и видового разнообразия видов рода Trichoderma, где частота встречаемости составляет более 60% (Алимова, 2006).
2. Характеристика Trichoderma из погребенных почв 2.1. Видовое разнообразие почвенных грибов рода Trichoderma из погребен ных черноземов Камско-Устьинского и Алексевского районов Из исследованных образцов погребенных почв нами было выделено 135 изо лятов рода Trichoderma. Из погребенных почв было выявлено 17 видов Trichoderma, идентифицированных по морфологическим признакам, молекулярно-генетическому анализу и с использованием объектно-ориентированного подхода (Тарасов, 2006).
Наиболее распространенным и часто встречающимся оказался вид T. citrino viride. На втором месте по распространенности стоит T. longibrachiatum, на третьем – T. atroviride. Далее следуют T. harzianum, T. hamatum, T. oblongisporum, T. viride, T.
koningii, T. asperellum, T. saturnisporum, T. spirale (табл. 2). Также нами была выде лена группа новых, неидентифицируемых изолятов (19 изолятов), отнесенных по данным молекулярно-генетического анализа к одному виду.
Изоляты Trichoderma, выделенные из погребенных почв, отличались от со временных более высокой интенсивностью окраски колоний;
более пышным ростом воздушного мицелия;
наличием у представителей секции Longibrachiatum способно сти выделять ярко-желтый пигмент в среду и сильно выраженного кокосового запа ха. Для экстипов этих изолятов было отмечено явление фотопериодизма (спороно шение концентрическими кругами).
Морфологические исследования конидий с использованием АСМ микроскопии позволили выделить изоляты одного вида (T. asperellum) с разными по структуре поверхностями спор: от гладкой из гидроморфного горизонта до шерохо ватой из автоморфного (рис. 2).
2.2. Систематика с помощью объектно-ориентированного подхода (ООП) Нами совместно с Тарасовым Д. С. была предпринята попытка построения систематики рода Trichoderma из палеопочв по формализованным морфологическим и фенотипическим признакам с помощью объектно-ориентированного подхода (ООП). ОО-подход предоставляет классификационные средства, для которых в био логических систематиках нет аналогов (например, множественное наследование).
Такие классификационные средства позволяют в явном виде указать известные за кономерности признаков, либо использовать автоматический алгоритм поиска зако номерностей.
Таблица Список видов и количество изолятов грибов рода Trichoderma, обнаруженных в районе археологических памятников Вид Количество изолятов (могиль ник/городище) 10/ T. citrinoviride sect. Longibrachiatum 7/ T. longibrachiatum sect. Longibrachiatum 6/ T. atroviride sect. Trichoderma 5/ T. harzianum sect. Pachybasium 5/ T. hamatum sect. Trichoderma 5/ T. oblongisporum 5/ T. viride sect. Trichoderma 6/ T. koningii sect. Trichoderma 12/ T. asperellum sect. Trichoderma 2/ T. saturnisporum sect. Longibrachiatum 0/ T. spirale sect. Pachybasium 4/ T. spp. 2/ T. spp. 3/ T. spp. 3/ T. spp. 2/ T. spp. 1/ T. spp. Сумма Рис. 2. Конидии T. asperellum: А – изолят, выделенный из погребенной гидроморфной поч вы Больше-Кляринского городища;
Б – изолят, выделенный из погребенной автоморфной почвы Больше-Кляринского городища (атомно-силовой микроскоп).
Основными сущностями, с которыми оперируют предлагаемые описания, это клетки, способные делиться в различных направлениях, специализироваться в клет ки гифы, конидиеносцы, фиалиды и споры, а также обладающие различными свой ствами – размерами, цветом, способностью к выделению пигмента и т.п. Таким об разом, мы перепроверили изоляты, идентифицированные по морфологическим при знакам.
2.3. Молекулярно-генетический анализ изотятов Trichoderma Изоляты, выделенные из погребенных почв, были идентифицированы с помо щью молекулярно-генетических методов. Для идентификации использовались праймеры к гену tef1 (EF1-728F и EF1-986R) и ITS 1 и 2 (SR6R и LR1), как наиболее отвечающие требованиям идентификации (Druzhinina et al., 2005). Полученные по следовательности были идентифицированы в Базе данных нуклеотидных последова тельностей TrichoBLAST с 98-100% гомологией. На основе полученных последова тельностей методом Bayesian анализа было построено древо, отражающее филоге нетическое положение исследованных изолятов (рис. 3). Ближе всех к основанию филогенетического древа находились представители секции Longibrachiatum (T.
longibrachiatum и T. citrinoviride). Кругом на рис. 3 обозначен изолят с уникальной последовательностью, неимеющей гомологов в базе данных. Он располагается меж ду H. strictipilis и H. lutea.
Нами была исследована внутривидовая изменчивость изолятов Trichoderma при расщеплении гетероспоровой популяции на моноспоровые клоны на примере T.
asperellum 204 (сравнивались нуклеотидные последовательности ITS 1 и 2 «родите ля» - 204(0) и его «клонов» - 204(1) и 204(2)).
Рис. 3. Древо, построенное с использованием Bayesian анализа, изолятов Trichoderma, вы деленных из погребенных почв, основанное на сиквенсах ITS 1 и 2.
Обнаружена невысокая изменчивость между основными исследуемыми ДНК различных изолятов, относящихся к одному виду. Полученные последовательности были гомологичны друг другу на 92-98%, а значимой считается разница в 20% и бо лее внутри одного вида (Druzhinina, 2007).
2.4. Характеристика структуры природных популяций Trichoderma Природные популяции грибов представляют собой мозаику клонов, одним из изолирующих механизмов которых являются различные культурально морфологические типы колоний, реакции вегетативной совместимости и гетерока риоз (Лихачев, 1998;
Дьяков, 2005;
Алимова, 2006). Нами были исследованы гетеро генные популяции Trichoderma, выделенные из погребенных почв в районе распо ложения археологических памятников, и их расщепление на клоны.
Показано, что в большинстве случаев исследованные изоляты представлены агрегатами гетерогенных популяций. Сравнение общих частот реакций совместимо сти (63%) и несовместимости (37%) указывает на наличие тенденции относительно го сдвига в сторону реакций смешанного типа и вегетативной совместимости. В со став аборигенных изолятов Trichoderma, входят гетерогенные и моноспоровые кло ны, представленные двумя культурально – морфологическими типами (II, IV).
2.5. Прорастание конидий изолятов Trichoderma Прорастание спор является первым и важным этапом жизненного цикла гри бов и во многом определяет возможность развития популяции грибов в почвах. В результате исследования прорастания спор изолятов, выделенных из погребенных почв в воде, в опытах in vitro, мы выявили время, необходимое для образования рос товой трубочки, которое составило от 12 до 16 ч в зависимости от вида Trichodermа (рис. 4). Для прорастания конидий изолятов, выделенных из современной почвы, необходимо было от 6 до 12 ч. Видимо, фунгистатический эффект связан с тем, что грибные споры находились в погребенной почве в неактивном состоянии (Марфе нина, 2008;
Демкин, 2007).
Рис. 4. Прорастание конидий микромицетов рода Trichoderma в зависимости от времени (А - начало опыта;
Б - прорастание спустя 15 часов;
В – дальнейший рост). Увеличение 100.
2.6. Скорость роста, изменение скорости роста при расщеплении Для большинства изолятов Trichoderma, выделенных из погребенных почв, оптимальной является температура 28°С. Из могильника были выявлены изоляты, оптимум роста которых приходился на 37°С. Среди исследованных изолятов, выде ленных из погребенной почвы городища, нами были выявлены несколько психрото лерантных видов с Т0опт - 150С (изоляты T. asperellum 204, T. asperellum 204(1), T.
asperellum 204(2), T. spirale 215). Наибольшая скорость роста (1,2 – 1,4 мм/час) от мечена у изолятов T. citrinoviride и T.atroviride на среде КГА. Исходные штаммы со стояли из клонов, неоднородных по скорости роста. В составе гетероспоровых по пуляций были изоляты как с меньшей, так и большей скоростью роста, по сравне нию с родительским изолятом.
2.7. Интенсивность спороношения Trichoderma Исследования интенсивности спороношения выявили как видовую дифферен циацию, так и клональную изменчивость. Наибольшая интенсивность спороноше ния характерна для T. asperellum и T. longibrachiatum (110-140*105 конидий/мл), во вторую группу были отнесены T. koningii и T. harzianum (90-110*105 и 80-90*105 ко нидий/мл), а в третью - T.hamatum и T. citrinoviride – 60-80*105 конидий/мл.
При расщеплении на клоны отмечено увеличение или уменьшение интенсив ности спороношения у клонов по сравнению с родительским изолятом. Увеличение отмечено у 41% исследованных изолятов, уменьшение – у 59%.
2.8. Антагонистическая активность изолятов Trichoderma по отношению F. ox ysporum Нами рассматривалась внутривидовая и видовая дифференциация по признаку взаимоотношения с фитопатогенным грибом F. oxysporum в опытах in vitro. По ли тературным данным Fusarium является наиболее сложным для подавления Tricho derma фитопатогеном (Gutierrez et al., 2006;
Алимова с соавт., 2007).
Т. 326 Т. 326(1) 326 326(1) 326 опыт 326(1) опыт F. Опыт F. Опыт F. Конт. F. Конт.
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0, Скорость роста (мм/час) Скорость роста (мм/час) Рис. 5. Антагонистическая активность изолята T. saturnisporum 326 и его клона T. saturnis porum 326(1) по отношению к Fusarium oxysporum на среде Чапека при 15С.
Для 23,4% исследуемых изолятов характерен В-тип антагонистической актив ности (обоюдное подавление при контакте). С-тип антагонистической активности (обоюдное подавление на расстоянии) характерен для 8,6% исследованных штам мов. В1-тип реакции (обоюдное подавление при контакте с дальнейшим переходом к паразитизму) выявлен у 5,6% изолятов. Менее всего выражена антагонистическая активность при 150С. Психотрофные антагонисты фитопатогенов составили менее 3% от общего числа исследованных изолятов. Выявлены конкурентоспособные хо лодостойкие (10-150С) и мезофильные виды (25-280С) с высокой антагонистической активностью к фитопатогенам.
При изучении антагонизма биопрепарата важен так же механизм взаимодейст вия с возбудителем, показателем которого является индекс антагонизма. Среди ге тероспоровых штаммов преобладает В тип антагонистической активности. Только изолят Т. asperellum 303 характеризуется высокой антагонистической активностью по отношению к F. oxysporum при 150С.
Нами было проведено сравнительное исследование изменения антагонистиче ской активности при расщеплении гетероспорового комплекса на моноспоровые клоны (рис. 5).
У моноспоровых изолятов T. citrinoviride 320(1) и T. citrinoviride 320(2) вид антагонистической активности соответствует виду исходного гетерогенного штамма T. citrinoviride 320 – В тип. Степень колонизации (С%) у моноспоровых клонов уве личивается в 15 и 10 раз, соответственно, скорости роста антагонистов и фитопато гена в опыте уменьшаются незначительно (на 1%).
Большинство моноспоровых изолятов рода Trichoderma, выщепляющихся из гетерогенных популяций (65%), характеризуются более высокой антагонистической активностью по отношению к F. oxysporum.
2.9. Стратегии жизни изолятов Trichoderma Изучение интенсивности спороношения, вегетативной совместимости, конку рентоспособности, кинетических параметров, антагонистической активности позво лило выявить стратегии жизни изолятов Trichoderma из погребенных почв.
Анализ выделенных изолятов Trichoderma по стратегии жизни показал, что среди изолятов современных горизонтов преобладали виды с r-типом стратегии (до 75%), а в погребенных почвах городища и могильника - с rK – типом стратегии: из них 54% тяготеет к r–стратегам, 20% - переходные формы между r- и K-, 25% - тяго теет к K-стратегам. Популяционная структура видов характеризовалась тенденцией к увеличению клонов с r-стратегией от палеопочв к современным горизонтам.
2.10. Ферментативная активность изолятов Trichoderma Изоляты рода Trichoderma, выделенные из палеопочв, характеризуются высо кой целлюлазной, протеазной и ксиланазной активностями. Максимальная целлю лазная активность установлена у изолята T. asperellum 328 и составила 1,1986 IUml 1, максимальная протеазная активность у изолята T atroviride 323 и соответствует 229,7508 IUl-1. Ксиланазная активность превышала активность промышленного продуцента ксиланаз и составила для изолятов Т. asperellum 302, Т. asperellum 303 и T. asperellum 328 8,8172 IUml-1, 8,2469 IUml-1 и 5,0275 IUml-1, соответственно. Та ким образом, в результате проведения скрининга грибов Trichoderma выявлены про дуценты гидролаз из современных и погребенных почв в районе расположения ар хеологических памятников.
2.11. Фитотоксичность изолятов Trichoderma Биотический аспект изучения Trichoderma предполагает обязательное изуче ние её взаимоотношения с эдификаторами, которыми являются фототрофные орга низмы. При изучении взаимоотношений с растениями выявлены хозяин специфичные и органотропные виды с различной степенью положительного и отри цательного воздействия на растение. При исследовании влияния культуральной жидкости различных изолятов Trichoderma на рост и развитие проростков и корней пшеницы сорта «Люба» отмечена следующая закономерность: наибольшее количе ство фитотоксических видов выделено для изолятов из могильников (53% токсич ные, 34% - стимуляторы, 13% - нейтральный тип воздействия), затем – из погребен ных почв городища (42% - токсичные, 38% - стимуляторы, 20% - нейтральный тип воздействия). Среди изолятов современных горизонтов почв обнаружены виды, как со стимулирующим (55%), так и нейтральным (16%) и отрицательным (31%) типами воздействия на растения (Алимова, 2006). Главным регулирующим фактором типа взаимоотношений является спектр метаболитов, выделяемых растением, вид расте ния, стадия онтогенеза, физико–химические свойства почв, а также спектр возбуди телей внутренней инфекции (Алимова, 2006). Отмечена зависимость типа воздейст вия на растение от концентрации метаболитов Trichoderma и типов источника азота и углерода в питательной среде. Эффект разведения вызывал разнонаправленный эффект на растения от стимуляции до ингибирования роста и развития.
Исследование различных субстратов, используемых для культивирования изо лятов Trichoderma показало, что состав сред определяет фитотоксичность экзомета болитов. Использование в составе питательной среды при культивировании T.
аsperellum 302 источников азота NaNO2 и KNO3 оказало стимулирующее действие на рост корней и проростков (длина, сырая и сухая масса) и KNO3 на прорастание семян пшеницы сорта «Люба», а использование (NH4)2SO4 – ингибирующее. Ис пользование в составе питательной среды при культивировании T. аsperellum источников углерода маннита и этилового спирта оказало стимулирующее действие на рост корней и проростков (длина, сырая и сухая масса) и прорастание семян пше ницы сорта «Люба», а использование сахарозы – ингибирующее.
Фитотоксическое действие изолятов из погребенных почв, вероятно, связано с активацией токсинообразования у эндогенных фитопатогенных микроорганизмов семян, сортовыми особенностями современных зерновых культур и конкуренцией с растением за питательные вещества в почве или с наличием в составе метаболитов изученных штаммов виридиола (дигидропроизводное виридина), который является слабым антибиотиком, но сильным гербицидом.
2.12. Влияние Trichoderma на жизнедеятельность почвенных микроорганизмов Интродукция природных изолятов Trichoderma в почву вызывает достоверное увеличение интенсивности азотфиксации, что согласуется с ранее отмеченной дру гими авторами ролью микромицетов в азотном обмене почв (Умаров, 1986, Мир чинк,1998;
Добровольский и Умаров, 2004). Отмечена зависимость интенсивности влияния на азотфиксирующую активность почв от вида микромицета. Так, при ис следовании интродукции природных видов Trichoderma в выщелоченный чернозем было показано, что наибольшее достоверное влияние на азотфиксирующую актив ность почвы оказывают T. asperelum и T.citrinoviride (увеличение в 3 раза по сравне нию с контролем) на 14 день после интродукции. Расщепление природных изолятов на клоны сопровождается изменением у последних способности к участию в азот ном обмене. Изменение может быть как в сторону увеличения, так и уменьшения.
Для отдельных видов (T. koningii, T. asperellum, T. harzianum) отмечено поло жительное влияние на респираторную активность (в 2,5-3 раза относительно кон троля).
Таким образом, нами охарактеризованы изоляты рода Trichoderma, выделен ные из погребенных почв Больше-Кляринского городища (Камско-Устьинский рай он) и Мурзихинского II могильника (Алексеевский район). Изоляты Trichoderma, выделенные из погребенных почв, отличались от современных более высокой ин тенсивностью окраски колоний;
более пышным ростом воздушного мицелия;
нали чием у представителей секции Longibrachiatum способности выделять ярко-желтый пигмент в среду и сильно выраженного кокосового запаха;
высокой гетерогенно стью популяций, антагонистической активностью по отношению к F. oxysporum и ферментативной активностью, фитотоксичностью по отношению с современным сортам культурных растений.
ВЫВОДЫ:
1. Биологическая активность современного выщелоченного чернозема Камско – Устьинского района характеризуется большей напряженностью и функциональной активностью микроорганизмов, что коррелирует с содержанием гумуса (8%) по сравнению с Алексеевским районом (6,5%).
2. В ряду от погребенных гидроморфных и автоморфных до новообразован ных гидроморфных и автоморфных горизонтов отмечена тенденция к увеличению биологической активности и содержания гумуса.
3. В антропогенно - нарушенных почвах могильника отмечено полное восста новление биологической активности и содержания гумуса за период 3 тыс. лет.
4. Отмечено преобладание в палеопочвах T. citrinoviride и T. longibrachiatum sect. Longibrachiatum, в отличие от современных, где больше T. asperellum.
5. Представители секции Longibrachiatum можно рассматривать как одни из биоиндикаторных организмов в исследованных погребенных черноземных почвах.
6. Микробиологический мониторинг целесообразно использовать для оценки степени восстановленности почв археологических памятников и выявления измене ния свойств микроорганизмов за определенный период времени.
Основные работы, опубликованные по теме диссертации:
Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК:
1. Тухбатова, Р.И. Микроорганизмы палеопочв Республики Татарстан / Р.И. Тухбатова, Д.И. Тазетдинова, Ф.К. Алимова, Л.В. Мельников // Ученые записки Казанского государственного университета. – 2008. –Т. 150, кн. 2. – С. 225-230.
2. Тарасов Д. С. Применение принципов объектно-ориентированного про граммирования к описанию и классификации биологических объектов на примере грибов рода Trichoderma / Д. С. Тарасов, Р. И. Тухбатова, Н. И. Акберова, Ф. К.
Алимова // Ученые записки Казанского государственного университета. – 2006. – Т.
148, кн. 3, - С. 133-154.
Статьи в других изданиях:
3. Рафаилова, Э.А. Влияние активированной воды на микромицеты рода Trichoderma / Э.А. Рафаилова, Р.И. Тухбатова, Д.И. Тазетдинова, Ф.К.Алимова // Вода: химия и экология. – 2008. - №2. – С. 35-40.
Тезисы конференций:
4. Karimova L.Yu. Biodiversity and ecophysiology of Trichoderma/Hypocrea strains isolated from the human skull dated as VIII-VI B.C. discovered in the Murzichinsk II Tomb (Republic Tatarstan, Russia) / F.K. Alimova, I. Druzhinina, R.I. Tukhbatova, D.I. Tazetdinova, C.P. Kubicek // 9th International Workshop on Trichoderma and Glio cladium, April 6-8, 2006, Vienna, Austria. 2006. – P. 42.
5. R. I. Tukhbatova. The Hypocrea/Trichoderma strains isolated from ecosys tems in Tatarstan Republic (Russia) / R. I. Tukhbatova, D. I. Tazetdinova, F. K. Alimova, I. S. Druzhinina // XV Congress of European Mycologists, Saint Petersburg, 2007, P. 152 154.
6. Рафаилова Э.А. Молекулярно-генетический анализ изолятов рода Trichoderma, выделенных из различных экологических ниш / Э.А. Рафаилова, Д.И.
Тазетдинова, Р.И. Тухбатова // Материалы 3 международной молодежной конфе ренции “Актуальные аспекты современной микробиологии”, Москва, 2007 г., C. 94 95.
7. Тухбатова Р.И. Характеристика потенциально патогенных видов Trichoderma, выделенных на территории республики Татарстан / Р.И. Тухбатова, Д.И. Тазетдинова, Ф.К. Алимова // Пятый Всероссийский конгресс по медицинской микологии “Успехи медицинской микологии“. Том X., Глава I. Современная эпиде миология микозов человека. Организация борьбы с массовыми грибковыми инфек циями. – С. 31.
8. Cabrera F.H.A. Interaction of fungi genus Trichoderma from the Republic of Tatarstan with microorganisms and plants / R.T. Mukhametshina, R.I. Tukhbatova, D.I.
Tazetdinova, F.K. Alimova // 10th annual Symposium of Biology Students in Europe, An cona, 2-10 August, 2006 – P. 125.
9. Тухбатова Р.И. Характеристика грибов Trichoderma из захоронений на территории Республики Татарстан / Ф.К. Алимова, Д.С. Тарасов, Д.М. Абузярова, А.К. Халилуллина, И.Р. Газимзянов, А.А. Чижевский // тезисы докладов ХII между народной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов – 2005», Москва, 2005, C.107.
10. Тухбатова Р.И. Идентификация и классификация грибов рода Tricho derma из древних почв / Ф.К. Алимова, А.А. Чижевский, И.Р. Газимзянов, Д.С. Та расов, Д.М. Абузярова, А.К. Халилуллина, // тезисы 9-ой Международной Пущин ской школы-конференции молодых ученых «Биология- наука 21 века», Пущино, 2005, C.153.
11. Тухбатова Р.И. Язык представления описаний морфологии грибов на примере Trichoderma / Д.С. Тарасов // тезисы 9-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология- наука 21 века», Пущино, 2005, С.276.
12. Тухбатова Р.И. Морфологические и молекулярно-генетические подхо ды для характеристики грибов рода Trichoderma из почв и тепличных грунтов рес публики Татарстан / А.К. Халилуллина, Д.М. Абузярова, Ф.К. Алимова // тезисы 8 ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология наука 21 века», Пущино, 2004, С.141.
13. Алимова Ф.К. Биотехнология. Промышленное применение грибов рода Trichoderma: учебно-методическое пособие / Ф.К.Алимова, Д.И. Тазетдинова, Р.И.
Тухбатова. – Казань: УНИПРЕСС ДАС, 2007. – 234 стр.
Просьба отзывы отправлять по факсу: (843) 238-71-21 или на e-mail: