Влияние литиевых солей оксиглицина и гамма-аминомасляной кислоты на стрессустойчивость, неспецифическую резистентность и продуктивность лабораторных животных и откармливаемых бычков биохимия –

На правах рукописи

Остренко Константин Сергеевич Влияние литиевых солей оксиглицина и гамма-аминомасляной кислоты на стрессустойчивость, неспецифическую резистентность и продуктивность лабораторных животных и откармливаемых бычков Биохимия – 03.00.04

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Боровск – 2009 2 Диссертационная работа выполнена в лаборатории иммунобиотехнологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных» Научный руководитель – доктор биологических наук, профессор Галочкин Владимир Анатольевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Преображенский Сергей Николаевич доктор биологических наук Черепанов Геннадий Георгиевич

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства

Защита диссертации состоится « » 2009 года в _ часов на заседании диссертационного совета Д 006.030.01 во Всероссийском на учно-исследовательском институте физиологии биохимии и питания сель скохозяйственных животных.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сель скохозяйственных животных.

Адрес института: 249013, Калужская область, г. Боровск, пос. Институт, ВНИИФБиП с.-х. животных. Телефон – 8(495)-996-3415, факс 8(48438)- Автореферат диссертации разослан « » 2009 года и разме щен на официальном сайте института www.bifip2006.narod.ru – « » 2009 года.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук В.П. Лазаренко 1.

Общая характеристика работы

.

1.1. Актуальность работы.

Внедрение интенсивных промышленных технологий производства жи вотноводческой продукции связано с возникновением противоречий между биологическими и технологическими аспектами одной и той же проблемы.

Облегчая себе условия работы, человек зачастую делает менее комфортными условия существования животных. Возникает ряд новых стресс-факторов, на зываемых технологическими. Безусловным следствием стрессов любой этио логии является интенсификация процессов липопероксидации и избыточное образование свободных радикалов, что крайне неблагоприятно сказывается на обмене веществ, а, следовательно, на здоровье животных, их продуктив ности и качестве продукции.

Разработка элементов новых биотехнологий производства животно водческой продукции, обеспечивающих повышение стрессустойчивости, не специфической резистентности, продуктивности с.-х. животных, улучшение качества производимой продукции, снижения затрат кормов и труда на ее производство, на основе новых антистрессовых препаратов является акту альным направлением исследований.

В настоящее время известно громадное количество всевозможных нейро тропных веществ и для людей, и для животных. В животноводстве они при званы помочь животному подавить ответные реакции на любые раздражи тели, инициирующие метаболические отклонения, выходящие за пределы колебаний естественных биологических параметров динамического гомео стаза. Наибольшей популярностью пользуются нейролептики, транквилиза торы, снотворные препараты, ганглиоблокаторы, м-холинолитики, централь ные тормозные медиаторы, адреноблокаторы, мембранопротекторы, простаг ландины, активаторы гликолиза, различные эндогенные лиганды, ингиби торы липаз и фосфолипаз, витамины и коферменты, сахара и др (Бузлама В.С. 1996). Эффективным средством борьбы со стрессом в настоящее время признано применение новой группы противострессовых препаратов – ти моизолептиков. Тимоизолептики (нормотимики) — представляют собой группу биологически активных веществ, способных сглаживать расстройства психо-эмоционального состояния, ведущие к патологии, а при профилакти ческом применении способных предотвращать развитие стрессов, ингибируя депрессивные расстройства и хронические нарушения нервной системы (Гу сев Е.И. 1998).

Характерным представителем данной группы веществ служит хорошо известная и глубоко изученная -аминомасляная кислота (ГАМК). Она яв ляется естественным метаболитом в организме всех высших животных, включая человека, и птицу и относится к группе нормотимиков поскольку представляет собой основной тормозной нейропередатчик в ЦНС. Возбуди мость, нервозность, чувствительность к стрессу, в первую очередь, связаны с этой кислотой. Она обладает элементами ноотропной активности, оказывает седативное и центральное миорелаксантное действие. ГАМК принимает са мое активное участие в метаболических процессах в мозге. В головном мозге наиболее представлены глутамат-эргическая нейромедиаторная система (возбуждающие аминокислоты) и ГАМК-эргическая (тормозная) система (Базян Ф.С., 2006). ГАМК увеличивает проницаемость постсинаптической мембраны для ионов К+, что, собственно, и вызывает торможение нервного импульса, повышает дыхательную активность нервной ткани, улучшает кро воснабжение головного мозга (Shields С.R., 2000). Трансаминирование ГАМК с -кетоглутаровой кислотой является основным путем ее метаболи ческой деградации. Альфа-кетоглутарат дегидрогеназный комплекс призна ется критическим контрольным механизмом в центральной нервной системе и ему отводится не только ключевая роль в функционировании цикла Кребса, но и он активно задействован в комплексе антистрессовых реакций.

Сложности, которые данной работой мы решили преодолеть, возникают в связи с тем, что молекула ГАМК - это типичный цвиттерион, и в силу своей выраженной полярности и гидрофильности она в обычных условиях очень слабо проникает через гематоэнцефалический барьер и действует преимуще ственно либо периферически, либо непосредственно в местах синтеза (Сы тинский И.А. 1977.).

Поиску аналогов ГАМК, способных проникать через гематоэнцефаличе ский барьер и оказывать преимущественно центральное действие, в медици не начали обращать самое серьезное внимание еще в шестидесятых годах прошлого столетия. Наиболее перспективной рассматривалась гамма оксимасляная кислота (Закусов В.В., 1968).

Мы обратили внимание на одно, с нашей точки зрения, весьма перспек тивное, но совершенно недостаточно изученное соединение – оксиглицин. В 1986 году в литературе появилось единственное сообщение, что в качестве естественного ингибитора ГАМК-трансаминаз эффективно действует оксиг лицин (ОГ) (Раевский К.С., 1986). Следовательно, мы вправе ожидать, что при введении ОГ, ГАМК должна медленнее деградировать и ее концентрация в мозге возрастет. Это незамедлительно повлечет за собой снижение возбу димости животных. Другой, постулируемый нами аспект проблемы биологи ческой функции оксиглицина, связан с облегчением этой аминокислотой транспорта ГАМК через гематоэнцефалический барьер. Позже появилось еще одно сообщение о том, что оксиформа глицина является нейромедиа торной аминокислотой (Яничак Ф.Дж. 2007).Таким образом, это соединение постепенно занимает все более значимое место в потенциировании физиоло гического эффекта ГАМК. Однако, и по сей день биохимические работы по глубокому изучению этого интереснейшего соединения отсутствуют и в академической, и в медицинской литературе.

Из научной литературы достаточно давно и хорошо известно, что мине ральные соли лития также, обладают ноотропными свойствами, и, при этом, они свободно преодолевают гематоэнцефалический барьер и проникают в головной мозг (Schou M., 1998). Механизм действия Li, заключается в том, что он изменяет уровень К+ и Na+ в крови и внутри клетки. Ионы Li с помо щью Na+,- К+-АТФ-азы входят внутрь клеточной мембраны, вытесняют из клетки К+ и препятствуют вхождению в клетку Na+.. Таким образом блоки руется проведение нервного импульса. Наступает эффект торможения, чем и обусловлены нейролептические свойства элемента.

Минеральные соли лития, обладая свойствами транквилизаторов, ис пользуются в медицине и животноводстве. Однако их введение в организм, как человека, так и животного требует строгого контроля. Как правило, про являемый ими биологический эффект достигается при, многократном приме нении высоких доз, литий очень часто имеет совершенно непредсказуемые последствия (от минимального изменения дозы могут быть получены диа метрально противоположные результаты), его применение требует у испы туемых объектов строгого мониторинга психо-эмоционального и метаболи ческого статуса.

1.2. Цели и задачи исследований.

1.2.1. Народно-хозяйственная цель работы: создание научно технического задела по рационализации биотехнологии производства говя дины.

1.2.2. Научная цель работы: проведение проблемно-ориентированных поисковых исследований, по разработке научных основ повышения стрессу стойчивости, неспецифической резистентности и продуктивности лабора торных животных и растущих, откармливаемых бычков.

1.2.3. Задачи работы:

1. Разработать рабочую концепцию более эффективного и физиологич ного подхода к управлению поведенческими реакциями, здоровьем и продук тивностью животных;

2. Разработать методы синтеза двух новых антистрессовых препаратов органических солей лития с оксиглицином (ОГ-Li) ис гамма аминомасляной кислотой (ГАМК-Li), полученные новые соединения долж ны быть биологически более адекватными, обладать высокой антистрессовой активностью, не уступающей или превосходящей существующие препараты в медицине и ветеринарии, должны быть просты и дешевы в синтезе, легки в применении в производственных условиях с тем, чтобы стать новыми эле ментами форсифицирования и расширения возможностей традиционных технологий производства говядины;

3. Изучить основные физико-химических параметры полученных соеди нений в опытах in vitro;

4. Изучить в опытах in vivo на лабораторных животных основные ток сико-фармакологические свойства;

5. Создать пролонгированные инъекционные формы соединений;

6. Изучить биохимические, физиологические, эндокринологические, морфологические и зоотехнические показатели у лабораторных и сельскохо зяйственных животных.

7. Провести первичную экспериментальную верификацию на лаборатор ных животных и растущих, откармливаемых бычках выдвинутой рабочей ги потезы о биологической и экономической целесообразности использования созданных форм новых препаратов для повышения стрессустойчивости, про дуктивности, неспецифической резистентности животных.

1.3. Научная новизна работы 1. Разработана оригинальная рабочая концепция биологической необхо димости и потенциальной научно-технической возможности создания новых эффективных способов физиологически адекватной фармакологической кор рекции технологических и спонтанных стрессов у лабораторных животных и бычков, откармливаемых на мясо;

2. Разработаны методы синтеза двух новых органических соединений лития: литиевой соли оксиглицина и литиевой соли гамма-аминомасляной кислоты;

3. Изучен комплекс основных физико-химических параметров синте зированных соединений, требуемый для составления идентификационной карты новых веществ: элементный анализ, эмпирическая формула, кривые поглощения в инфракрасном спектре, кривые термогравиметрического ана лиза, температура плавления и разложения, растворимость в воде и органи ческих растворителях;

4. Исследована острая и хроническая токсичность обоих соединений;

5. Созданы пролонгированные инъекционные формы полученных со единений;

6. Получена новая физиолого-биохимическая, эндокринологическая, морфологическая и зоотехническая информация, подтверждающая биологи ческую правомерность и целесообразность применения обоих созданных биологически активных веществ как эффективных антистрессовых препара тов, способных повышать продуктивность и неспецифическую резистент ность у лабораторных животных и бычков на откорме.

Все полученные результаты по методам синтеза и способам использо вания новых антистрессовых препаратов на лабораторных и сельскохозяйст венных животных по изобретательскому уровню и новизне интеллектуаль ной собственности, соответствуют патентной чистоте, о чем в ФИПС РФ по даны соответствующие документы на защиту авторского приоритета.

1.4. Практическая значимость работы 1. Итоги первичной производственной апробации подтверждают, что оба синтезированных антистрессовых препарата в разработанных инъекционных пролонгированных формах, в разработанных дозах, способах и схемах их ис пользования целесообразно применять в качестве новых биотехнологических элементов производственного процесса для физиологически адекватной и эффективной фармакологической коррекции стрессов у откармливаемых на мясо бычков с целью рационализации производства говядины. Все три ком понента, примененные для синтеза новых органических солей, законода тельно разрешены для использования в медицинской практике.

1.5. Положения выносимые на защиту 1. Рабочая концепция – с биологической точки зрения необходимо и с научно-технической точки зрения потенциально возможно создать новые эффективные способы физиологически адекватной фармакологической кор рекции технологических и спонтанных стрессов у лабораторных животных и бычков, откармливаемых на мясо;

2. Рабочая гипотеза - 1) в результате химического соединения мине ральной соли лития с оксиглицином и с гамма-аминомасляной кислотой можно получить две новые органические соли лития, действие которых будет превышать аддитивный эффект взятых для синтеза соединений, и обеспечит получение новых, желательных и отсутствующих у исходных компонентов, биологических свойств;

2) при введении ГАМК и ОГ в соединении с литием, ГАМК будет медленнее метаболизироваться специфической аминотрансфе разой, легче преодолевать гематоэнцефалический барьер и ее концентрация в мозге возрастет, в свою очередь, возрастание концентрации ГАМК, на основе знаний о ее физиологическом действии, повлечет за собой снижение возбу димости животных и повышение стрессустойчивости;

3. Разработаны методы синтеза двух новых эффективных, физиологи чески адекватных антистрессовых препаратов - солей лития с оксиглицином и с гамма-аминомасляной кислотой. Синтезированные соединения и их про лонгированные инъекционные формы с имеющимися физико-химическими параметрами и токсико-фармакологическими характеристиками, просты и дешевы в синтезе, технологичны для применения в производственных усло виях и могут служить новыми элементами рационализации традиционных технологий производства говядины.

4. Проведение первичной экспериментальной верификации разрабо танных доз, схем и способов применения, созданных препаратов и их форм на лабораторных животных и растущих, откармливаемых бычках, по сово купности биохимических, физиологических, эндокринологических, морфо логических и зоотехнических показателей подтвердило справедливость вы двинутой концепции и рабочей гипотезы о создании новых способов эффек тивного и физиологичного управления поведенческими реакциями, неспеци фической резистентностью и продуктивностью животных и о биологической целесообразности использования созданных препаратов.

1.6. Апробация работы.

Основные результаты исследований по диссертационной работе доложе ны на XVI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (апрель 2009 г. Москва, МГУ имени М.В. Ломоносова).

1.7. Публикации результатов исследований.

По материалам диссертационной работы опубликовано 4 научные рабо ты, в том числе имеется три публикации в журналах, включенных в Пере чень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендован ных ВАК РФ, для опубликования материалов кандидатских и докторских диссертаций.

1.8. Структура диссертации. Диссертация изложена на 150 стр. ком пьютерного текста, содержит 12 таблиц, 26 рисунков. Включает следующие разделы: введение, обзор литературы, объекты и методы исследований, ре зультаты собственных исследований и их обсуждение, заключение по ре зультатам исследований, выводы, предложения практике, список литературы, включающий 126 источников, в том числе 63 иностранных, приложение 10 страниц.

2. Объект и методы исследований Экспериментальную часть работы проводили в 2007-2009 годах, на базе лаборатории иммунобиотехнологии Всероссийского научно–исследователь ского института физиологии, биохимии и питания с.-х. животных, совместно с лабораторией токсикологии МРНЦ РАМН и лабораторией углеродных ма териалов при кафедре химических технологий и новых материалов МГУ им.

М.В. Ломоносова.

Схема Схема собственных исследований 1. Синтез новых солей Li и их 3. Антистрессовое действие исследование (физико-химические солей Li на лабораторных жи параметры: термогравиметрия;

ин- вотных (в эксперименте было ис фракрасная спектроскопия;

эле- пользовано 30 мышей и ментный анализ.) крыс.) Были проведены исследо вания эффективности солей, их влияние на гормональный статус и состояние органов после введе ния препаратов.

4. Производственные испыта 2.Токсичность препаратов Li.

ния препаратов Li при стрессах:

Два этапа: 1) определение острой транспортный, иммобилизацион токсичности и ЛД50, (экспери ный, социальный, нарушение сте мент проведен на 150 крысах);

2) реотипа кормления. (Один опыт этап определения хронической проведен на 30 растущих, откарм токсичности (эксперимент про ливаемых бычках на протяжении веден на 100 крысах).

6 месяцев.) На первом этапе проводился синтез новых органических солей лития, описанный в диссертации, по разработанным нами методам, в лаборатории органического синтеза НИИ ФХИ им. Карпова. Синтез проводился согласно Стандартам GMP («Good Manufacturing Practice»). В полученных солях в лаборатории углеродных материалов при кафедре химических технологий и новых материалов МГУ им. М.В. Ломоносова определили основные физико химические параметры: содержание воды, количество лития и элементный состав. Термогравиметрический анализ образцов проводили на приборе фир мы NETZSCH STA Jupiter 449C. Элементный состав образцов изучался с по мощью прибора CHNOS vario MICRO, спектры поглощения – на инфракрас ном спектрометре Фурье – ИК-спектрометре Tensor 27 фирмы “BRUCKER” На втором этапе проводили исследования по изучению токсикологиче ских свойств солей лития: определялась острая и хроническая токсичность. В ходе тестирования учитывалось количество съедаемого корма, потребленной воды, физиологические, биохимические показатели крови, морфологическая структура основных тканей и органов под действием изучаемых солей. На блюдения проводились в динамике и сравнивались с литературными данны ми, полученными при применении других солей лития. Для гистологического исследования взяты: мозг (фронтальный срез через гиппокамп, таламус и ги поталамус), гипофиз, печень, почки, надпочечники, гонады. Кусочки органов фиксировали в 10% растворе формалина, обезвоживали в спиртах возрас тающей крепости, заливали в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, исследовали под микроскопом «Olympus CX 41».

На третьем этапе: определяли стреспротекторное и адаптогенное свой ство исследуемых соединений на крысах линии Вистар. Изучали минимально достаточный комплекс физиолого-биохимических, морфологических и зоо технических показателей. Анализ креатинина и ферментов аспартат- и ала нинаминотрансферазы проводили на автоматическом биохимическом анали заторе Hitachi 917. Гормоны (эстрадиол, тестостерон и кортизол) определяли на жидкостном хроматографе Agilent 1100 (Agilent Technologies, США), снабженном бинарным градиентным насосом, дегазатором подвижной фазы, автосэмплером, термостатом колонок, диодно-матричным и масс спектрометрическим детекторами серии SL с источниками электрораспы лительной и химической ионизации при атмосферном давлении.

На четвертом этапе: изучали стресспротекторные и адаптогенные свой ства синтезированных соединения на растущих, откармливаемых бычках в ОПХ «Ермолино». Было сформировано 5 группы животных по 6 голов в ка ждой. Эксперимент продолжался 6 месяцев. Препараты во 2-ой, 3-ей, 4-ой и 5-ой группах вводили в дозировках 1,5 и 3 мл в разработанной инъекцион ной пролонгированной форме, представляющей собой тонкую суспензию соединений в растворе стеарата алюминия в вазелиновом масле. Животным контрольной группы вводили плацебо (1 группа). Количество вводимых бычкам ГАМК-Li (2-я и 3-я опытные группы) и ОГ-Li (4-я и 5-я опытные группы) составляло 1,5 и 3 мг/кг живой массы для обоих соединений соот ветственно.

Для анализов у бычков брали кровь из яремной вены на 3-ии и 20-ие су тки после введения препарата. Спустя 30 дней после первой инъекции, жи вотным были введены эти же дозы препаратов второй и последний раз. Об разцы крови брали на 2, 10 и 25 сутки. Все взятия крови проводили до утрен него кормления животных. Взвешивание животных проводили ежемесячно.

Статистическая обработка экспериментальных данных проводилась с ис пользованием компьютерной программы Statistica 8, для оценки достоверно сти эффектов применялся критерий Вилкоксона (двухфакторный дисперси онный анализ, множественное сравнение).

Выражаем искреннюю благодарность всем коллегам, оказавшим помощь в выполнении работы на всех ее этапах.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ 3.1. Физико-химическая характеристика солей оксиглицина и -аминобутирата лития.

Физико-химические свойства оксиглицината и -аминобутирата лития:

1. Основные физико-химические параметры оксиглицината лития. Но менклатурное название – литиевая соль аминооксиуксусной кислоты. Эмпи рическая формула – NН2 – СОНLi – СООLi. Брутто-формула NH3C2O3Li2.

Элементный состав в процентах: С – 22.8, Н – 1.9, О – 45.7, N – 13.3, Li – 13.3. Массовая доля основного вещества – 97 %. Молекулярная масса – 101,8. Температура плавления – 201°С. Температура разложения - 234°С.

Растворим в водно-спиртовых смесях и воде.

2. Основные физико-химические параметры ГАМК- Li. Номенклатурное название – литиевая соль гамма-аминомасляной кислоты. Эмпирическая формула – NН2 – СН2 - СН2 - СН2 - СООLi;

Брутто-формула - C4H8O2NLi;

Элементный состав в процентах: С – 42.8, Н – 7.1, О – 28.5, N – 12.4, Li – 6.2. Массовая доля основного вещества – 97 %. Молекулярная масса – 108,9.

Температура плавления – 216°С. Температура разложения – препарат пла вится с разложением. Растворима в водно-спиртовых смесях и воде.

Проведенные исследования по термогравиметрии показали, что литиевая соль -аминомасляной кислоты представляет единое соединение, не содер жащее воды. Постепенно при повышении температуры в азотной среде про исходит плавление вещества при t = 216оС. При дальнейшем нагревании происходит разложение образца на продукты сгорания из которых в тигле остается Li2CO3 (рисунок 1).

Соль оксиглицината лития разлагается многоступенчато и представляет собой кристаллогидрат, содержащий одну молекулу воды на одну молекулу соли. Отщепление воды происходит при температуре 96,6оС. Температура плавления составляет 201,2оС. Пики при t = 234,1о и 446,1о С свидетельству ют о разложение до продуктов сгорания. Данные продукты аналогичны с со лью -аминомасляной кислоты лития (рисунок 2) Рисунок 1. Термогравиметрическая кривая разложения образца соли аминомасляной кислоты лития, где (DSC - Дифференциально-сканирующая калори метрия;

ТG - изменения массы образца как функция температуры или времени, происхо дящие в результате взаимодействия образца с окружающей его атмосферой, Т – измене ние температуры).

Рисунок 2. Термогравиметрическая кривая разложения образца соли оксиг лицината лития (обозначения, что и на рис. 1) 3.2. Фармако-токсикологическая характеристика органических со лей лития на лабораторных животных.

Исследования на крысах позволили определить параметры острой ток сичности солей и определить ЛД50 при однократном внутрижелудочном введении. Расчетная доза ЛД50 для -аминобутирата лития составляет мг/кг массы тела, что превышает эффективную терапевтическую дозу в раз.

При исследовании оксиглицината лития определить ЛД50 не представля ется возможным, так как количества, превышающие в 80 раз максимальную терапевтическую дозу, не приводят к летальному исходу.

По сравнению с известными солями лития можно говорить, что ЛД50 син тезированных нами солей при внутрижелудочном введении выше, чем ЛД лития карбоната (413 мг/кг)(С.Н. Преображенский 2001 г), лития хлорида ЛД50 (970 мг/кг)(Самойлов Н.Н. 1974) и лития цитрата ( мг/кг)(Кривошеев А.В. 2006). Оба соединения относятся к 4-му классу ток сичности (нетоксичные).

Для определения опасности повторного применения препарата, хрониче ской токсичности, изучаемые соли вводили в течение 14 дней. Вводимые дозы - 180 мг/кг живой массы, что составляет 1/10 от ЛД50. Объектом иссле дования были лабораторные 3-х месячные крысы обоего пола линии Вистар, средней массой 150 – 170 гр.

Результаты проведенных гистологических исследований свидетельст вуют о том, что у испытуемых крыс, получавших препараты ОГ-Li и ГАМК Li ежедневно в течение 2-х недель, при сохранении общей гистоструктуры тканей и органов, отмечалось повышенное функциональное напряжение ней роэндокринного аппарата (гетерогенность клеточных элементов, признаки дистрофических изменений в них) и, в меньшей степени, внутренних орга нов. Так как убои животных проводили через 2 недели после окончания вве дения препаратов, то отмечается восстановление нормальной функцио нальной активности ранее напряженно работавших органов. В пользу этого говорит умеренная гиперплазия клеточных элементов пролиферативной зо ны аденогипофиза. Необходимо отметить имевшие место совершенно есте ственные различия индивидуальной реакции животных на вводимые препа раты. Тем не менее, общее заключение вполне определенно сводится к тому, что ОГ-Li активирует нейроэндокринную систему сильнее, чем ГАМК-Li.

Причем у самок эта активация выражена несколько сильнее, чем у самцов.

3.3. Проявление адаптогенных и стресспротекторнгых свойств ок сиглицината лития и -аминобутирата лития на крысах В данном эксперименте определялось влияния разных доз солей лития на изменение активность ферментов в крови. За время эксперимента производи ли 5-кратное взвешивание животный (таблица 1). Отбор проб проводили двукратно, на 3-й и 15-й день после введения.

После введения разных доз солей лития наблюдалось увеличение живой массы. Однако при увеличении мышечной массы увеличивается нагрузка на выделительную систему и печень, для определения состояния данных орга нов проводили исследование активности ферментов в крови (аланинами нотрансферазы и аспартатаминотрансферазы).

Таблица Динамика изменение массы тела у крыс опытной и контрольной групп, г (М±m), n= Изменение Время после введения препарата, сутки массы тела в группы % относи До введе- тельно кон 2 9 11 ния троля 1 143,6 ± 26,7 140,5 ± 29,7 203,7± 36,8 205,5± 35,8 234,6± 46,7 2 144,6± 24,3 159,5±23,2 220,7± 37,9* 224,7± 34,7* 307,5± 43,9* 31 % 3 146,5±27,6* 155,7±21,5* 222,7± 29,5 217,2± 32,1 265,8± 47,8* 10 % 4 143,6± 21,9 156,7± 27,4 208, 2± 34,5 211,8± 36,0* 272,7± 45,3* 16 % 5 148,0±30,2* 137,3±24,6* 194,8± 33,3 204,0± 32,6 237,5± 39, 3* 1% (*р 0,05при сравнении по t-критериию с контролем.) 1 группа – контроль;

2 – в/б введе ние 40 мг оксиглицина Li /кг;

3 – в/б введение 120 мг оксиглицината Li /кг;

4 – в/б введение 40 мг ГАМК-Li /кг;

5 – в/б введение 120 мг ГАМК-Li /кг ) У крыс, которым вводили оба препарата в меньших дозировках (40 мг/кг) наблюдается большее увеличение массы тела животного. Максимально раз ница увеличения массы по сравнению с контролем составила 31 %. В ходе эксперимента кровь брали двукратно – на 3-й и 15-й день. Определяли в кро ви подопытных животных каталитическую активность двух ферментов (ала нинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы) и концентрацию креа тинина. Эти две аминотрансферазы и содержание креатинина в повсеместной клинической практике по сей день считаются удовлетворительными тесто выми критериями, характеризующими структурно-функциональное состоя ние печени и почек (таблица 2).

После завершения эксперимента было установлено, что данные соли, в испытывавшихся дозах, не вызывали токсического эффекта: активность в крови ферментов и содержание метаболита было в пределах естественных биологических колебаний. Препараты вводились внутрибрюшинно. Такие факторы как формирование групп, внутрибрюшинное введение являются стресс-факторами для животных. Первое взятие крови проводилось на третий день после проведённых манипуляций. На протяжении 15-ти дней после введения обоих препаратов существенных и достоверных различий между животными контрольной группы и опытными группами отмечено не было.

Это свидетельствует о том, что оба препарата не влекут за собой каких-либо значимых отклонений в функционировании тканей печени и почек, что под тверждается также и проведенными морфологическими исследованиями.

Таблица Влияние однократного введение солей лития на активность ами нотрансфераз и концентрацию креатинина в крови, (М±m), n= АЛТ (мкМ) АСТ (мкМ) Креатинин (мкМ) Группы 3 день 15 день 3 день 15 день 3 день 15 день Контроль 0,19 ± 0,02 0,30 ± 0,04 0,15 ± 0,07 0,11 ± 0,04 27,3 ± 4,4 26,9 ± 3, 2 0,22 ± 0,04 0,27 ± 0,02 0,14 ± 0,02 0,17 ± 0,04 30,2 ± 4,3 25,4 ± 1, 3 0,25 ± 0,02 0,26 ± 0,02 0,17 ± 0,04 0,17 ± 0,03 39,3 ± 3,8 30,5 ± 5, 4 0,23 ± 0,06 0,24 ± 0,04 0,13 ± 0,02 0,13 ± 0,02 36,7 ± 4,5 27,8 ± 4, 5 0,24 ± 0,01 0,28 ± 0,03 0,25 ± 0,05 0,18 ± 0,04 31,5 ± 4,1 36,9 ± 0, 1 группа – контроль;

2 – внутрибрюшинное введение 40 мг оксиглицината Li /кг;

– в/б введение 120 мг оксиглицината Li /кг;

4 – в/б введение 40 мг ГАМК-Li /кг;

5 – в/б вве дение 120 мг ГАМК-Li /кг ) 3.4. Влияние солей лития на содержание в крови крыс адреналина, и норадреналина Продолжительность и эффективность действия солей лития определяли по концентрации гормонов в крови. При первичном взятии крови в первые сутки после введения препаратов наблюдался резкий выброс гормонов в кон трольной группе и опытной (где использовалась пролонгированная форма). В группах, где препарат растворили в воде уровень адреналина и норадрена лина находится в пределах нормы. В группах с пролонгированной формой происходит увеличение гормонов, но их концентрация была ниже, чем в кон троле. Это говорит, о различной скорости действия водной и пролонгирован ной формы. На 4-е сутки после введения уровень гормонов сохранялся на уровне интактных животных. Концентрация гормонов в контрольной группе превышала в 2 раза уровень у опытных групп. На 7 сутки после введения, картина была противоположна первым суткам. Концентрация адреналина и норадреналина в опытных группах, где была пролонгированная форма, оста валась в пределах нормы, в контрольной группе и группе с водным раство ром гормональный статус изменился в сторону повышения.

После воздействия стресса различной этиологии у крыс происходил рез кий выброс в кровь «гормонов стресса» (адреналина и норадреналина). Од нако у животных, которым вводили соли в пролонгированной форме, уро вень гормонов в крови приближался к уровню у контрольных животных, и был выше, чем у животных, которым вводили соли в виде водных растворов (таблица 3). При повторном взятии крови на 4-е сутки у контрольных живот ных уровень гормона в крови был увеличен и составил 27,1 мкг/л по сравне нию с первым взятием крови и составлял 24,4 мкг/л. У опытных групп на блюдаются результаты сходные с результатами у интактных животных, ко торые не подвергались стресс воздействию. При последнем отборе крови, на 7-е сутки наблюдалась обратная картина, по сравнению с первыми сутками.

У животных, которым вводили водный раствор, увеличивался уровень гор монов, но при этом он оставался ниже контрольных животных (16,6 мкг/л относительно 28,7 мкг/л). При этом в группах с введенной пролонгирован ной формой уровень гормонов существенно не менялся, оставался равным предыдущему взятию и приближался к уровню у интактных животных, что говорит об эффективности использования солей ОГ-Li и ГАМК-Li именно из разработанных пролонгированных форм.

Таблица Влияние введения препаратов в водном растворе и в пролонгированной форме на концентрацию адреналина и норадреналина у крыс линии Вистар под воздействием стресса, (М±m), n= Адреналин, Норадренали, Группы мкг/л мкг/л Время после введения (сутки) Интактные животные 6,8 ± 0,65 18,6 ± 1, 1 24,4 ± 6,2 57,4 ± 14, 2 7,1 ± 0,47* 18,2 ± 2,59* 1 3 15,9 ± 4,73 37,0 ± 10, 4 6,9 ± 0,77* 21,0 ± 3,54* 5 17,8 ± 5,26 42,8 ± 12, 1 27,1 ± 6,91 63,5 ± 14, 2 6,9 ± 0,29 17,6 ± 1, 4 3 7,0 ± 0,43* 19 ± 3,08* 4 6,7 ± 0,38 19,8 ± 1, 5 7,4 ± 0,68* 21,8 ± 4,97* 1 28,7 ± 7,1 69,38 ± 16, 2 16,6 ± 3,99 41,8 ± 5, 7 3 7,2 ± 0,78* 18,6 ± 2,51* 4 10,8± 1,24 31,6 ± 7, 5 7,3 ± 0,73* 17,6 ± 2,07* (*р 0,05при сравнении по t-критериию с контролем.) 1 группа – контроль;

2 – в/б введе ние 40 мг оксиглицината Li /кг;

3 – в/б введение 120 мг оксиглицината Li /кг;

4 – в/б введе ние 40 мг ГАМК-Li /кг;

5 – в/б введение 120 мг ГАМК-Li /кг ) 3.5. Стандартные тесты, подтверждающие эффектвность солей оксигли цината лития и гамма-аминомасляной кислоты лития на крысах 1. Тест на физическую выносливость.

Изучение адаптогенных свойств проводили с использованием самцов лабораторных крыс линии Вистар. С этой целью было сформировано четыре группы крыс-аналогов, по 10 голов в группе. Крысы опытной группы полу чили внутрибрюшинно одну инъекцию оксиглицината лития в дозе 15 мг/кг веса и такую же дозу ГАМК-Li. За 30 минут до опыта, животным контроль ной группы вводили плацебо. Третья группа была интактной – не подверга лась никаким обработкам.

Всех животных подвергли стандартному тесту на общую физическую вы носливость путём длительного принудительного плавания в воде при темпе ратуре 200С до полного утомления, для чего требовалось около 1 часа. После завершения теста всех животных усыпили эфиром и подвергли декапитации.

Провели подсчёт эозинофилов по Дунгеру. (методы. лаб. анализа. АзССР 1968). Эозинофилы представляют собой информативный косвенный показа тель изменения в крови кортикостероидов, которые, в свою очередь, являют ся косвенными показателями воздействия стрессора. Повышение в крови «гормонов стресса» вызывает понижение эозинофилов к крови.

Таблица Количество эозинофилов и изъявлений желудка крыс при проведении теста на физическую выносливость (плавание) с применением оксигли цината Li и ГАМК-Li, (М±m), n= (15 мг оксиг- (15 мг ГАМК Контроль Интактные лицинат Li /кг) Li /кг ) Кол-во эозинофи 435 ± 26 747 ± 41 793 ± 38 974 ± 47* лов (в 1 мм3) Кол-во язв 15 ± 4 3 ± 1* 4 ± 1,5 (*р 0,05 при сравнении по t-критерию с контролем.) После вскрытия у опытной группы наблюдалось в пять раз меньшее коли чество язв, чем в контрольной группе, см. таблицу 4.

1.2. Общая физическая выносливость. Тест на подвешивание.

Использовали также как и в предыдущем эксперименте 4 аналогичные группы мышей по 10 голов в каждой. Доза оксиглицина лития и гамма аминомасляной кислоты лития в опытных группах также была 15 мг/кг жи вой массы и вводилась внутрибрюшинно за 30 минут до начала теста. По ис течении 30 минут мыши подвешивались за передние конечности и в таком положении оставались на протяжении 24 часов. После завершения теста жи вотных снимали, усыпляли эфиром, декапитировали, затем вскрывали и под считывали количество язв в желудке. Количество язв в контрольной группе было 19 ± 4,6, что в 3,2 - 3.8 раза больше, чем в опытных группах (6 ± 2.2, 5±1.9 соответств.). У интактной группы изъязвления желудка отсутствовали.

Вся совокупность полученной в этих опытах информации подтверждает вывод о том, что испытанная соль оксиглицина лития обладает ярко выра женными стресспротективным и адаптогенным свойствами. Данные приве дены ниже в таблице 5.

Таблица 5.

Количество изъявлений желудка крыс при проведении теста на адапто генность с применением оксиглицината-Li и ГАМК-Li, (М±m), n= 1 группа 2 группа Контроль Интактные (15 мг/кг оксиглицинат Li) (15 мг/кг ГАМК Li) Кол-во язв 19 ± 7,6 6 ± 2,2* 5 ± 1,9* (*р 0,05при сравнении по t-критерию с контролем.) 3.6. Определение стресспротекторного и адаптогенного действия орга нических солей лития у откармливаемых бычков В данном эксперименте определялась эффективность солей гамма аминомасляной кислоты и оксиглицина лития у бычков на откорме. Продол жительность эксперимента составила 6 месяцев. Для проведения экспери мента было подобрано 30 голов бычков с начальной живой массой от 110 до 117 кг. Было сформировано 5 групп животных по 6 голов в каждой. Группы формировали по принципу парных аналогов. Препараты вводили подкожно в дозировках 1,5 и 3 мг/кг живой массы, в виде тонкой суспензии в стеарате алюминия, растворенного в вазелиновом масле. Контрольным животным вводили плацебо.

Эксперимент проводили в два этапа. На каждом этапе определяли весо вые показатели бычков и их гормональный статус. На основании проведен ных исследований было установлено, что различные стрессы, вызванные технологическими причинами при откорме бычков (перевозка животных на автотранспорте, смена помещения, смена рациона и распорядка дня, перевод животных с группового содержания на привязное) влияют на изменения уровня гормонов в крови (адреналина, норадреналина, кортизола).

Таблица Концентрация адреналина и норадреналина в плазме крови бычков, (М±m), n= Время после введения Группы Адреналин мкг/л Норадреналин мкг/л препарата (сутки) 1 20,3 ± 7,71 47,56 ± 24, 2 0,9 ± 0,37* 2,0 ± 0,86* 3 3 2,6 ± 1,32* 9,0 ± 3, 4 0,9 ± 0,53* 2,1 ± 0,71* 5 1,8 ± 1,99 4,3 ± 2, 1 27,1 ± 9,7 57,9 ± 21, 2 1,3 ± 0,87* 2,6 ± 1,69* 20 3 8,5 ± 5,01 17,5 ±8, 4 2,9 ± 0,76* 6,9 ± 1,98* 5 2,9 ± 2,59 7,2 ± 5, (*р 0,05 при сравнении по t-критериию с контролем.) 1 – контроль;

2-я группа – доза 1, мг ГАМК-Li /кг, 3-я группа – доза 3 мг ГАМК-Li /кг, 4–я группа - 1,5 мг ОГ-Li /кг, группа – доза 3 мг ОГ-Li /кг.

Опытные группы животных гораздо быстрее адаптировались к новым условиям содержания, легче перенесли транспортировку, иммобилизацию и нарушение распорядка кормления. Характерными показателями влияния стресса на животных является уровень адреналина и норадреналина в крови.

У опытных групп бычков уровень гормонов был в несколько раз ниже, по сравнению с контрольной группой, что говорит об уменьшении ответной реакции на стрессовые воздействия на организм животных (Таблица 6).

В ходе эксперимента определяли весовые показатели бычков. При рав ных условиях содержания и кормления животных в эксперименте, у опытных групп наблюдалась повышение живой массы относительно контроля. Таким образом, после воздействия различных стресс-факторов не наблюдалось по тери живой массы. В таблице 7 приведены весовые данные за первый месяц опыта на бычках.

Таблица Прирост живой массы за первый месяц опыта, (М±m), n= Группы Живая масса, кг Среднесуточ ный прирост % к контро Постановочная Через 1 месяц по- живой массы, г лю сле 1-ой инъекции препаратов 1 114 ± 4,8 146,5 ± 7,6 1049±109,1 100, 2 113 ± 5,6 149,6 ± 8,7 1181±148,0* 112, 3 115 ± 4,4 150,4 ± 7,3 1129±116,4 107, 4 117 ± 2,9 152,2 ± 3,3 1136±93,4* 108, 5 111 ± 6,4 145,3 ± 8,9 1137±98,2 108, (*р 0,05 при сравнении по t-критерию с контролем.) 1 – контроль;

2-я группа – доза 1, мг ГАМК-Li /кг, 3-я группа – доза 3 мг ГАМК-Li /кг, 4–я группа - 1,5 мг ОГ-Li /кг, группа – доза 3 мг ОГ-Li /кг.

У бычков, которым вводили соли -аминобутирата лития и оксиглици ната лития в дозировках 1,5 мг/кг живой массы среднесуточный прирост был на 8% выше относительно контрольных животных. В группе с оксиглици натом лития в этой же дозировке привес превышал на 12,5% контрольную группу. В дозировках 3 мг/кг живой массы прибавка прироста в обеих груп пах составила 7,6% и 8,4% соответственно. Уровень же адреналина и норад реналина оставался в норме, тогда как в контрольной группе после первого взятия крови он в 20 раз превышал норму. После второго взятия крови кон центрация гормонов в крови опытных животных осталась на уровне преды дущего взятия, однако произошло существенное, но недостоверное увеличе ние в 3-ей группе на 8 абсолютных единиц. При этом по весовым показате лям привес в данной группе составил 107% относительно контроля. В кон трольной группе произошло повторное резкое увеличение концентрации в крови адреналина и норадреналина даже по сравнению с первым взятием крови (на 7 абсолютных единиц), что вновь подтверждает отрицательное влияние стресса на организм бычков.

Второй этап эксперимента проводился спустя 30 дней после первой инъ екции препаратов. По истечении трех суток после повторного введения, произошло резкое понижение температуры окружающей среды до – 25оС. В связи с этим произошло понижение температуры и в помещении, где содер жались животные. Вследствие резкого понижения температуры, нарушилась подача воды на сутки и в течение суток животные не получали также и кор ма. Под действием сложившихся негативных спонтанных стрессовых воздей ствий у животных изменилось содержание изучаемых гормонов. У контроль ной группы наблюдался резкий скачок концентрации адреналина и кортизо ла, относительно опытных групп (32,8 ± 14,48 мкг/л относительно 9,4 ± 2, мкг/л). Изменение содержания гормонов в крови у опытных групп так же происходило не синхронно. В группах, где вводили дозы 1,5 мг/кг выброс адреналина был меньше на 12 % по сравнению с дозировкой 3 мг/кг (таблица 8).

Таблица Изменение уровня адреналина, норадреналина и кортизола после вто рого введения пролонгированных форм солей гамма-аминобутирата и оксиглицина лития, (М±m), n= Время после Адреналин, Норадренали, Кортизол, введения Группы препарата мкг/л мкг/л мкг/л (сутки) 1 29,4 ± 13,14 86,64 ± 42,43 19,1 ± 9, 2 7,5 ± 2,25* 16,7 ± 5,18* 4,14 ± 1,48* 2 3 8,4 ± 2,89 20,7 ± 8,13 6,8 ± 2, 4 8,0 ± 3,53* 15,7 ± 2,68* 7,42 ± 2, 5 9,4 ± 2,66 20,8 ± 6,70 6,0 ± 2, 1 32,8 ± 14,48 98,26 ± 46,39 20,74 ± 9, 2 1,1 ± 0,72* 2,2 ± 0,71 2,04 ± 0,78* 10 3 1,6 ± 0,74 3,2 ± 1,12* 2,58 ± 0, 4 1,8 ± 1,99* 4,1 ± 2,04* 1,9 ± 1,38* 5 2,3 ± 0,83* 4,3 ± 2,95 3,22 ± 0, 1 30,6 ± 12,43 92 ± 41,23 18,6 ± 8, 2 1,5 ± 0,83* 3,0 ± 1,65 2,58 ± 0,81* 25 3 2,08 ± 0,79 6,18 ± 2,92 3,12 ± 0, 4 2,7 ± 0,57* 6,62 ± 2,04 2,72 ± 0,40* 5 3,74 ± 0,92 9,10 ± 2,19 3,92 ± 0, (*р 0,05 при сравнении по t-критерию с контролем.) 1 – контроль;

2-я группа – доза 1, мг ГАМК-Li /кг, 3-я группа – доза 3 мг ГАМК-Li /кг, 4–я группа - 1,5 мг ОГ-Li /кг, группа – доза 3 мг ОГ-Li /кг.

После спонтанных стрессовых воздействий опытные и контрольные жи вотные находились в одинаковых условиях. На десятые сутки провели по вторное взятие крови. У всех опытных животных уровень адреналина, но радреналина и кортизола был ниже, чем при первом взятии крови, что гово рит о продолжительном действии препарата. В группах, где дозировки со ставляли 1,5 мг/кг живой массы, эти различия были достоверны, относи тельно величин контрольной группы. У контрольных животных уровень гор монов в крови повысился на 4,5% относительно предыдущего взятия. На 25-е сутки после повторного введения вновь взяли кровь у всех подопытных жи вотных. Содержание адреналина, норадреналина и кортизола было выше, чем при предыдущем взятии крови на 36 %. В группе, где вводили препараты в дозировках 1,5 мг/кг отмечалось также повышение концентрации гормонов, но оно было значительно меньше (на 9%). Полученные данные свидетельст вуют о том, что даже по истечении недели после стрессового воздействия контрольные животные еще не смогли прийти в физиологически нормальное состояние.

Результаты ежемесячного взвешивания животных показали, что измене ния живой массы между группами происходило неодинаково (рисунок 3).

В итоге, за 6-ти месячный период эксперимента, группы животных, по лучавшие литиевую соль гамма-аминомасляной кислоты в дозах 1,5 и 3, мг/кг живой массы, дали дополнительный прирост живой массы 7.0 и 21.0 % относительно контрольной группы, соответственно по дозам. Две опытных группы бычков, получавших в этих же количествах литиевую соль оксигли цина, по живой массе в конце эксперимента превышали животных контроль ной группы на 7 и 20 %, по двум испытывавшимся дозам соответственно.

Эти результаты были получены на вполне удовлетворительном зоотех ническом фоне. Среднесуточный прирост живой массы животных контроль ной группы за весь эксперимент составил 775 граммов, в то время как жи вотные с введением малых доз литиевых солей ГАМК и оксиглицина имели приросты 1056 и 1042 граммов в среднем в сутки. Бычки, инъецированные высокими дозами обеих солей, имели среднесуточные приросты живой мас сы 873 и 935 граммов, т.е. также выше контрольных животных, но в несколь ко меньших абсолютных величинах.

309,6 305, Живая масса (кг) 273,6 268, 254, 238 238,4 222,7 219,6 213, 209, 199,2 184,4 182, 180,7 169, 163,3 157, 152, 150, 149, 146,5 145, 114 113 Контроль 2 группа 3 группа 4 группа 5 группа начало 1 месяц 2 месяц 3 месяц 4 месяц 5 месяц 6 месяц Контроль;

2-я группа – доза 1,5 мг ГАМК-Li /кг, 3-я группа – доза 3 мг ГАМК-Li /кг, 4–я группа - 1,5 мг ОГ-Li /кг, 5 группа – доза 3 мг ОГ-Li /кг.

Рисунок 3. Динамика изменения живой массы откармливаемых быч ков после введения ОГ-Li и ГАМК-Li (n=30) 4. Заключение Таким образом, на настоящем этапе проникновения в изучаемую пробле му можно резюмировать нижеследующее:

1. У синтезированных нами литиевых солей оксиглицина и аминомасляной кислоты изучен комплекс физико-химических парамет ров, позволяющий составить идентификационные карты новых веществ:

элементный состав, эмпирическая формула, кривые поглощения в инфра красном спектре, кривые термогравиметрического анализа, температура плавления и разложения, растворимость в воде и органических раствори телях;

2. Новые соли лития относятся к 4 классу токсичности (не токсичные со единения), обладают разносторонним фармакологическим действием. В рекомендуемых дозах использования не вызывают острого и хроническо го отравления;

3. При длительном применении высоких доз (в 10 раз превышающих ре комендуемые дозы) не вызывают в тканях и органах выраженных дест руктивных морфологических изменений, свидетельствующих о серьез ных аномалиях их гистоструктуры и функции;

4. При моделировании экспериментов, с воздействием различных стрессо ров на организм лабораторных и сельскохозяйственных животных, про являют ярко выраженные адаптогенные и стресспротекторные свойства;

5. Изучено влияние различных стресс-факторов на изменение уровня адре налина, норадреналина и кортизола у лабораторных животных и расту щих, откармливаемых бычков. Применение исследованных солей под воздействием стрессоров предотвращает резкий выброс данных гормо нов, что и рассматривается как первичная ответная реакция организма на стрессы любой этиологии;

6. Созданные пролонгированные формы введения обоих препаратов по зволяют увеличить срок действия активных начал и снижают воздействие стресс-факторов на животных. Обеспечивают постепенный и продол жительный выход препаратов из депо в кровоток животного.

7. Соли лития способствуют коррекции поведения, повышению неспеци фической резистентности, интенсивности роста животных, являются про текторами в отношении технологических и спонтанных стрессоров. Оп тимальные схемы применения полученных солей лития: 1- кратное вве дение до, иди 2-кратное введение - до и после воздействия стресс фактора. Примечательно, что применение более высоких доз обоих пре паратов приводит к более низкому продуктивному ответу у бычков на от корме. В течение шести месяцев проведения откорма растущих бычков, животные контрольной группы имели среднесуточный прост живой мас сы 775 г, животные с инъекцией 1,5 и 3.0 г ГАМК-Li/кг живой массы – соответственно 1056 и 873 грамма. Животные с инъекцией 1,5 г ОГ-Li /кг живой массы давали в сутки по 1042 г, а введение 3,0 г/кг живой массы этой соли дало 935 граммов. Таким образом, имеющиеся первые данные свидетельствуют о том, что литиевая соль оксиглицина и у лабораторных животных, и у откармливаемых бычков по большинству параметров бо лее эффективна, чем литиевая соль гамма-аминомасляной кислоты.

5. Выводы 1. Разработана рабочая концепция, согласно которой современные на учные знания и технические возможности позволяют реализовать биологиче скую необходимость создания новых высокоэффективных способов физио логически адекватной фармакологической коррекции технологических и спонтанных стрессов у лабораторных и сельскохозяйственных животных.

2. Сформулирована рабочая гипотеза, в соответствии с которой: 1) про дуктами химического соединения минеральной соли лития с оксиглицином и с гамма-аминомасляной кислотой можно получить две новые органические соли лития, действие которых будет превышать аддитивный эффект взятых для синтеза соединений, и обеспечит получение новых, желательных и от сутствующих у исходных компонентов, биологических свойств 2) при вве дении литиевых солей гамма-аминомасляной кислоты и оксиглицина, ГАМК будет медленнее метаболизироваться специфической аминотрансферазой, легче преодолевать гематоэнцефалический барьер и ее концентрация в мозге возрастет, в свою очередь, возрастание концентрации ГАМК, на основе зна ний о ее физиологическом действии, повлечет за собой повышение стрессу стойчивости животных;

3. Разработаны методы синтеза двух новых эффективных, физиологиче ски адекватных антистрессовых препаратов - солей лития с оксиглицином и с гамма-аминомасляной кислотой. Синтезированные соединения и их про лонгированные инъекционные формы с изученными физико-химическими параметрами и токсико-фармаколгическими характеристиками, просты и де шевы в синтезе, технологичны для применения в производственных условиях и могут служить новыми элементами рационализации традиционных биотех нологий производства говядины, повышающими на 7 – 21 % их критические выходные параметры.

4. Проведение первичной экспериментальной верификации разработан ных доз, схем и способов, созданных препаратов и их инъекционных пролон гированных форм на лабораторных животных и на растущих, откармливае мых бычках, по совокупности биохимических, физиологических, эндокри нологических, морфологических и зоотехнических показателей подтвердило справедливость выдвинутой концепции и рабочей гипотезы о возможности создания новых способов эффективного и физиологичного управления пове денческими реакциями, неспецифической резистентностью и продуктивно стью животных и о биологической целесообразности использования создан ных препаратов.

6. Предложения практике Синтезированные соли лития с гамма-аминомасляной кислотой и оксиглицином целесообразно вводить подкожно в разработанной пролонгированной форме, в дозах 1,5 мг на 1 кг живой массы откармливаемых бычков для рационализации биотехнологии производства говядины.

Список опубликованных работ по теме диссертации 1. Остренко К.С. Разработка теоретических основ и создание антистрессо вых препаратов нового поколения. Сельскохозяйственная биология, 2009, №2 стр. 43-55 / Галочкин В.А., Галочкина В.П.

2. Остренко К.С. Механизмы проявления физиологических функций гам ма-аминомасляной кислотой, оксиглицином и солями лития в связи со стрессустойчивостью животных. Проблемы биологии продуктивных жи вотных, 2009, №1, стр. 5- 15./ Галочкин В.А., Галочкина В.П..

3. Остренко К.С. Продуктивность и концентрация адреналина и норадре налина у бычков при инъекции пролонгированных форм литиевых солей оксиглицина и гамма-аминомасляной кислоты. Проблемы биологии про дуктивных животных, 2009, №2, стр. 95-99.

4. Остренко К.С. Определение параметров токсичности солей гамма аминомасляной кислоты лития и оксиглицината лития на крысах линии Вис тар. Тезисы международной научной конференции «Ломоносов 2009», 2009, стр. 25.

Поданы 4 заявки на патенты.