Медицинский универстет удк 611.814.1–018.82:616.36–008.811.4/.5)–092.9 барабан ольга викторовна структурно-метаболические изменения в гистаминергических нейронах гипоталамуса крысы при холестазе и пот

УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ «БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСТЕТ» УДК 611.814.1–018.82:616.36–008.811.4/.5)–092.9 БАРАБАН Ольга Викторовна СТРУКТУРНО-МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ГИСТАМИНЕРГИЧЕСКИХ НЕЙРОНАХ ГИПОТАЛАМУСА КРЫСЫ ПРИ ХОЛЕСТАЗЕ И ПОТЕРЕ ЖЕЛЧИ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.25 – гистология, цитология, клеточная биология Минск 2008 1 Работа выполнена в УО «Гродненский государственный медицин ский университет», УО «Гродненский государственный университет име ни Я. Купалы» на базе межвузовской лаборатории «Биомед» Научные руководители: Зиматкин Сергей Михайлович, доктор биоло гических наук, профессор, заведующий кафед рой гистологии, цитологии и эмбриологии УО «Гродненский государственный медицин ский университет» Емельянчик Сергей Владимирович, кандидат медицинских наук, доцент кафедры зоологии и физиологии человека и животных УО «Грод ненский государственный университет имени Я. Купалы» Официальные оппоненты: Руденок Василий Васильевич, доктор меди цинских наук, профессор кафедры нормальной анатомии, проректор по международным связям УО «Белорусский государственный медицин ский университет» Глушен Сергей Витальевич, кандидат биоло гических наук, доцент кафедры генетики УО «Белорусский государственный университет» Оппонирующая организация: Институт физиологии Национальной акаде мии наук Республики Беларусь Защита состоится 18 июня 2008 г. в 15.00 на заседании совета по защите диссертаций Д 03.18.03 при УО «Белорусский государственный медицинский университет» по адресу: 220116, г. Минск, пр-т Держинско го, 83, тел. 272-55-98. E-mail: [email protected] С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке УО «Белорусский государственный медицинский университет».

Автореферат разослан «» мая 2008 года.

Учёный секретарь совета по защите диссертаций кандидат медицинских наук Ю. А. Гусева ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ В последние десятилетия неуклонно возрастает число заболеваний желчевыделительной системы. Существенную лепту в эту патологию вносит желчнокаменная болезнь: от 10 до 15% людей в промышленно раз витых странах, 20% европейцев и около 50% американских индейцев страдают этим заболеванием [Konikoff F.M., 2003;

Lammert F., 2007].

В условиях холестаза отмечаются функциональные и морфологические изменения во многих органах и системах организма, в том числе и в ЦНС [Furukawa Y., 1991;

Swain M.G. et al., 1996;

Rioux K.P. et al., 2001;

Поды мова С.Д., 1998;

Чепур С.В., 2003]. При оказании хирургической помощи группе больных с обтурацией желчных путей, иногда производят деком прессию желчных протоков путем дренирования, что создает условия для временной потери желчи организмом [Мандрик К.А. и др. 2001;

Козырев М.А., 2002;

Кизюквич Л.С., 2005]. Вовлекается в этот процесс и ЦНС [Malavolti M. et al., 1991].

Вместе с тем при этой патологии совершенно не изучены гистаминер гические нейроны заднего гипоталамуса. Можно лишь предполагать их изменения, поскольку при холестазе и потере желчи нарушаются многие реакции, процессы и системы, контролируемые гистаминергической ней ронной системой мозга: локомоторная активность, состояние сна–бодр ствования, пищевое и питьевое поведение, артериальное давление и др.

Поэтому экспериментальное исследование гистаминергических ней ронов мозга при моделировании подпечёночного холестаза и потери желчи представляется весьма интересным и значимым не только для теоретиче ской, но и практической биологии и медицины. Это поможет выяснить роль желчи в регуляции структурно-метаболического состояния гистами нергических нейронов мозга и участие последних в адаптационных изме нениях в организме при нарушении энтерогепатической циркуляции желчи.

Связь работы с крупными научными программами и темами Работа выполнялась в рамках Государственной научной программы фундаментальных исследований «Изучение этиопатогенеза наиболее рас пространенных и вновь возникающих заболеваний человека и разработка на их основе новых медицинских технологий» по теме: «Изучение пато генетических механизмов хронизации воспалительных процессов печени, формирования холестаза и разработка способов их профилактики и лече ния» (2002–2005 гг., № гос. регистрации 20021640) и «Современные клеточные и молекулярно-генетические технологии в медицине;

новые подходы к регуляции коррекции (реабилитации) и профилактике патоло гических состояний человека» по теме: «Разработка критериев оценки степени патофизиологических и патоморфологических нарушений при заболеваниях внутренних органов на основе анализа метаболитов белко вого и аминокислотного обменов и создание новых методов диагностики, профилактики, лечения и реабилитации больных» (2006–2009 гг., № гос. регистрации 20065772).

Цель и задачи исследования Целью исследования была оценка структурно-метаболического со стояния гистаминергических нейронов гипоталамуса крыс при нарушени ях энтерогепатической циркуляции желчи.

В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи:

1. Выявить структурно-метаболические изменения в гистаминерги ческих нейронах гипоталамуса крыс в динамике подпечёночного холеста за (на 2, 5, 10, 20 сутки после перевязки общего желчного протока).

2. Дать электронно-микроскопическую характеристику нарушениям в гистаминергических нейронах ядра Е2 гипоталамуса крыс при 10-суточ ном холестазе.

3. Выяснить возможности коррекции нарушений состояния гиста минергических нейронов мозга, вызванных холестазом, урсодезоксихоле вой кислотой.

4. Оценить структурно-метаболические изменения в гистаминерги ческих нейронах гипоталамуса крыс в отдаленные сроки (45 и 90 суток) после перевязки общего желчного протока.

5. Установить структурные и метаболические изменения в гистами нергических нейронах ядра Е2 мозга крыс в условиях полного наружного отведения желчи (на 1, 3 и 5 сутки).

6. Определить влияние 5-суточного полного наружного отведения желчи на ультраструктуру гистаминергических нейронов ядра Е2 гипота ламуса.

Объектом исследования служили беспородные белые крысы-самцы.

Выбор экспериментальных животных был обусловлен простотой и эко номичностью содержания в условиях вивария, сходной организацией гистаминергических нейронов гипоталамуса крысы и человека [Зиматкин и др. 2003]. Предметом исследования явились гистаминергические ней роны ядра Е2 заднего гипоталамуса.

Положения диссертации, выносимые на защиту 1. При подпечёночном холестазе у крыс развиваются нарушения структуры (размеров и формы), ультраструктуры и метаболизма (актив ности ключевых цитоплазматических ферментов) гистаминергических нейронов мозга. Эти изменения носят динамический, волнообразный характер: они появляются через 5 суток холестаза, через 10–20 суток достигают максимума, при восстановлении тока желчи уменьшаются (через 45 суток), а через 90 суток полностью исчезают.

2. Урсодезоксихолевая кислота оказывает защитное действие, преду преждая и коррегируя структурные и метаболические нарушения в гиста минергических нейронах мозга при 20-суточном подпечёночном холестазе.

3. Полное наружное отведение желчи у крыс вызывает транзиторные изменения размеров и формы перикарионов гистаминергических нейро нов мозга. Метаболические нарушения нарастают во времени: они выяв ляются уже через сутки отведения желчи, через трое суток становятся более выраженными и достигают максимума через пять суток. При этом в гистаминергических нейронах развиваются значительные ультраструк турные нарушения.

Личный вклад соискателя Патентно-информационный поиск по изучаемой проблеме, экспери ментальная и методическая части работы выполнены лично диссертантом.

Данные, полученные при гистологических, гистохимических, иммуноги стохимических, морфометрических, цитофотометрических и электронно микроскопических исследованиях обрабатывались соискателем самостоя тельно. Оперативное моделирование полного наружного отведения желчи и холестаза проводилась совместно с научным руководителем – канд. мед.

наук, доцентом кафедры зоологии и физиологии человека и животных Гродненского государственного университета им. Я. Купалы – С.В. Емель янчиком. Биохимические показатели сыворотки крови и желчи определя лись лабораториями УЗ «Гродненская областная детская клиническая больница» и УЗ «Гродненская клиническая больница № 1». Выбор темы, постановка задач, планирование экспериментов, обсуждение результатов исследования проводилось совместно с научными руководителями. Вы ражаем искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории электронной микроскопии ЦНИЛ, профессору кафедры гистологии, цитологии и эм бриологии Гродненского государственного медицинского университета Я.Р. Мацюку, НИИ физиологии НАН Беларуси за помощь при проведе нии электронно-микроскопических исследований, а также профессору Перрти Панюла (университет Хельсинки) за предоставленные антитела и реактивы для иммуногистохимического исследования гистамина.

Апробация результатов диссертации Фрагменты работы обсуждались на заседаниях кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии ГрГМУ, научно-практической конференции студентов и молодых учёных, посвящённой памяти проф. С.И. Гельберга (Гродно, 2004), I международной научной конференции «Актуальные проблемы экологии» (Гродно, 2004), конференции студентов и молодых учёных посвящённой памяти проф. И.Я. Макшанова (Гродно, 2006), меж дународной научно-практической конференции, посвящённой 85-летию БГМУ (Минск, 2006), конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в ВУЗе» посвящённой 100-летию со дня рождения проф. Л.И. Фалина (Москва, 2007), конференции студентов и молодых учёных, посвящённой памяти проф. Т.В. Кулаго (Гродно, 2007), международном Фальковском симпозиуме № 161 «Будущие пер спективы гастроэнтерологии» (Дрезден, 2007).

Опубликованность результатов диссертации По теме диссертации опубликовано 17 печатных работ (из них еди нолично – 4): 7 статей (6 из них в журналах, включенных в перечень на учных изданий Республики Беларусь и Российской Федерации для опуб ликования результатов диссертационного исследования) и 10 тезисов.

Объём в авторских листах – 3,0.

Структура и объём диссертации Диссертация состоит из введения, общей характеристики работы, глав 1 – 4 (обзор литературы, материал и методы исследования, две главы собственных исследований), заключения, библиографического списка и приложения. Работа изложена на 136 страницах, включая 28 таблиц и 59 рисунков. Список использованных источников литературы включает 263 источника, из них 175 зарубежных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования Работа выполнена на 184 беспородных белых крысах-самцах массой 230 ± 30 г. Животных содержали в условиях вивария Гродненского госу дарственного медицинского университета на полноценном стандартном рационе. Соблюдались все правила гуманного обращения с животными.

Моделирование холестаза у опытных животных проводили путем пере вязки общего желчного протока на 3–5 мм ниже места слияния долевых протоков печени по методике Кизюкевича Л.С. [Кизюкевич Л.С., 2005].

Моделирование полного наружного отведения желчи у опытных живот ных осуществляли наложением фистулы общего желчного протока по ме тодике Василевской Л.С. [Василевская Л.С., 1965]. Животным контроль ных групп производили ложную операцию. То есть выполняли все те же манипуляции, что и у опытных, за исключением перевязки желчного про тока или надреза желчного протока и отведения желчи соответственно.

При этом в течение всего эксперимента у контрольных животных сохра нялся физиологический отток желчи.

Спустя срок, запланированный экспериментом, забой животных осуществляли стандартно во всех сериях. Декапитацию проводили под глубоким эфирным наркозом в утренние часы. Кровь собирали в пробир ки с последующим получением сыворотки. В сыворотке крови определя ли содержание ряда биохимических показателей (уровень общего холе стерина, общего, связанного и несвязанного билирубина, активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ), аланинаминотрансферазы (АлАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ)) кинетическими методами, основанными на изменении оптической плотности инкубаци онной среды с использованием спектрофотометра при соответствующих длинах волн.

Затем быстро вскрывали черепную коробку, извлекали головной мозг и выделяли из него гипоталамус, замораживали в парах жидкого азота с последующим погружением в него. До начала исследования образцы моз га хранили в жидком азоте. В криостате готовили серийные фронтальные срезы гипоталамуса толщиной 20 мкм при температуре –15 С, монтиро вали их на предметные стекла. Криостатные срезы окрашивали по методу Ниссля (0,1 % водным раствором тионина) и на выявление активности моноаминооксидазы типа Б (МАО Б) [Зиматкин С.М., Цыдик В.Ф., 1994], сукцинатдегидрогеназы (СДГ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), НАДН дегидрогеназы (НАДН-ДГ), глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы (Г-6-Ф-ДГ), НАДФН-дегидрогеназы (НАДФН-ДГ) и кислой фосфатазы (КФ) [Пирс Э., 1962].

Для количественной оценки размеров и формы нейронов измеряли следующие параметры: минимальный и максимальный диаметры, пери метр, площадь, объем, форм-фактор и фактор элонгации перикарионов нейронов на препаратах, окрашенных на МАО Б и по методу Ниссля.

Количественную оценку активности изучаемых ферментов проводили цитофотометрически, определяя оптическую плотность полученного осадка хромогена в цитоплазме нейронов, на максимуме поглощения окрашенных продуктов реакций. Для удобства относительную активность ферментов выражали в единицах оптической плотности, умноженных на 1000. В каждой экспериментальной группе оценивалось 150–200 нейро нов. Данные морфометрических и цитофотометрических исследований были получены при помощи компьютерного анализатора изображения Bioscan NT 2.0 (ItLab, Беларусь) при увеличении микроскопа (Carl Zeiss Jena, Германия) в 40 раз и цифровой видеокамеры (Panasonic Colour CCTV Camera WV-CP410/G, Япония) в 7 раз.

Полученные цифровые данные обрабатывали методами непарамет рической статистики с помощью лицензионной компьютерной программы Statistica 6.0 для Windows. Результаты исследования представлены в виде Me ± IQR, где Me – медиана, IQR – интерквартильный размах. Сравнение групп по одному признаку проводили с помощью критерия Манна-Уитни для независимых выборок. Определение статистически значимых отличий в зависимых выборках выполняли с помощью критерия Вилкоксона. Для анализа влияния фактора времени перевязки общего желчного протока или наружного отведения желчи на изучаемые параметры применялся дисперсионный анализ – однофакторный ранговый метод Краскела– Уоллиса [Реброва О.Ю., 2003]. Различия между группами считали стати стически значимыми, если вероятность ошибочной оценки не превышала 5 % (p 0,05).

Определение содержания гистамина в нейронах ядра Е2 гипоталаму са крысы осуществляли с помощью непрямого иммуногистохимического флуоресцентного и авидин-биотинового метода. Для этого гипоталамус фиксировали в 4 % растворе EDAC (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide), замораживали, изготавливали серийные фронтальные срезы гипоталамуса толщиной 20 мкм при температуре – 15 С, монтировали их на предметные стекла. Для флуоресцентного анализа использовали инку бационный раствор кроличьих антител против гистамина HA 19C в разве дении 1:1000 с 1 % нормальной свиной сывороткой и раствор свиных антикроличьих антител меченых FITC в разведении 1:40. Полученные препараты заключали в PBS-глицерол в тот же день изучали и фотогра фировали на микроскопе Axioskop 2 plus (Ziess, Германия) с помощью цифровой видеокамеры (Panasonic Colour CCTV Camera WV-CP410/G, Япония) при УФ-освещении в темном помещении. Для авидин-биоти новой реакции срезы инкубировали с раствором кроличьих антител против гистамина HA 19C в разведении 1:5000 и 2 % нормальной козьей сывороткой. После этого стекла со срезами обрабатывали раствором био тинизированных козьих антикроличьих антител в разведении 1:600 с 2 % нормальной козьей сывороткой и авидин-биотиновым комплексом. Далее срезы помещали в раствор буфера с 3,3'-диаминобензидином, сульфатом никеля и Н2О2 [Panula P. et al., 1984]. Полученные препараты изучали и фотографировали на микроскопе Axioskop 2 plus (Ziess, Германия) с по мощью цифровой видеокамеры (Sony DFW-X710, Япония) и программы Image Warp (Bit Flow, США).

Электронно-микроскопическое изучение гистаминергических нейро нов ядра Е2 проводили у животных после 10-суточного подпеченочного холестаза, а также полного наружного отведения желчи в течение 5 суток.

После моделирования холестаза и полной потери желчи, опытных и кон трольных крыс соответственно забивали декапитацией под эфирным нар козом, быстро вскрывали черепную коробку, извлекали головной мозг, выделяли гипоталамус и прицельно вырезали заднелатеральную его часть, в области расположения ядра Е2. Взятый материал фиксировали в 1 % растворе Os-фиксатора, промывали в смеси буфера Миллонига и сахаро зы, обезвоживали в этиловом спирте. Далее образцы выдерживали в 2 % растворе уранилацетата на 70 этиловом спирте. Обезвоживание осущест вляли этиловыми спиртами возрастающей концентрации, смесями этило вого спирта и ацетона, ацетоном. Затем материал проводили через смеси смол (аралдит М + аралдит Н + дибутилфталат + ДМР-30) и ацетона, и за ключали в заливочную смолу. Полутонкие срезы (около 350 нм) изготав ливали на ультрамикротоме МТ-7000 (США). Их окрашивали метилено вым синим для уточнения локализации изучаемой структуры – гистами нергического ядра Е2. Ультратонкие срезы (около 35 нм) контрастирова ли уранилацетатом [Watson M.L., 1958] и цитратом свинца [Reynolds E.S., 1963]. Полученные препараты изучали и фотографировали в электронном микроскопе JEM-100 CX (Япония) в Центре электронной микроскопии Института физиологии НАН Беларуси.

Структурные и метаболические изменения в гистаминергиче ских нейронах гипоталамуса крыс в динамике подпечёночного холестаза В нашем исследовании моделирование подпечёночного холестаза привело к гибели 18 из 64 оперированных крыс. При этом суммарная смертность опытных животных равна 67,2 %, что связано с разной продолжительностью отдельных экспериментов и согласуется с литера турными данными о смертности в 55–65 % после билиарной обструкции [Giacometti A. et al., 2003;

Castro V., Muriel P., 1996].

Подпеченочный холестаз вызывает изменение массы тела опытных крыс. У контрольных животных после ложной операции наблюдается прирост массы тела, а у опытных крыс после перевязки общего желчного протока отмечается снижение массы тела по сравнению с контрольными животными и по сравнению с их весом до операции. На 45 и 90 сутки после моделирования холестаза наблюдается значительный прирост массы тела опытных животных, однако она не достигает массы контроль ных крыс.

В сыворотке крови крыс с перевязкой общего желчного протока отмечается гипербилирубинемия, гиперхолестеринемия и гиперфермен темия, что свидетельствует о правильности проведения операции и нали чии холестаза.

Содержание билирубина увеличивается уже на 2 сутки после обтура ции желчного протока. Через 5 суток уровень билирубина значительно превышает норму, при этом отмечается увеличение как конъюгирован ной, так и неконъюгированной формы. К 20 суткам у опытных животных происходит снижение содержания билирубина, но нормализуется только количество неконъюгированного билирубина, а содержание связанного и общего билирубина остается повышенным. Увеличение содержания холестерина в сыворотке крови отмечается с 5 по 20 сутки, максимум приходится на 10 сутки после проведения операции, что подтверждает развитие холестаза [Камышников В.С., 2002].

В результате смоделированного холестаза уже на 5 сутки идет рост активности ЩФ, максимум приходится на 10 сутки и только к 90 суткам значение активности этого фермента приходит к норме. У опытных животных возрастает активность ЛДГ в сыворотке крови. Статистически значимые различия между опытными и контрольными значениями наблюдаются на 10–45 сутки, при этом пик активности приходится на 10 сутки. В сыворотке крови увеличивается содержание аминотрансфераз.

Рост активности АлАТ наблюдается с 5 по 45 сутки, наибольшее увеличе ние отмечается на 20 сутки после операции. Статистически значимое увеличение активности АсАТ отмечается на 10 сутки. К 90 суткам у вы живших животных, с исчезновением холестаза, содержание АлАТ и АсАТ приходит к норме, что может быть критерием выздоровления [Камышни ков В.С., 2002]. На активность изучаемых сывороточных ферментов оказывает влияние фактор времени перевязки общего желчного протока.

Самопроизвольное разрешение холестаза может быть обусловлено постепенным восстановлением гепато-дуоденальной циркуляции желчи за счёт образования дополнительных желчевыводящих коллатеральных протоков [Кизюкевич Л.С., 2005;

Можейко Л.А., 2001;

Максимова Л.А.

и др., 1974].

Изменения размеров и формы гистаминергических нейронов наблю даются на препаратах окрашенных по методу Ниссля. Отмечается удли нение тел гистаминергических нейронов: за счёт уменьшения их мини мального диаметра на 4,0 % (Z = 2,36;

p = 0,018) на 10 сутки, а также увеличения максимального диаметра на 5,5 % (Z = 2,78;

p = 0,005) на 20 сутки подпечёночного холестаза. Статистически значимая зависимость изменений значений размеров и формы гистаминергических нейронов от времени эксперимента выявляется только для максимального диаметра (H = 12,98;

p = 0,043) и периметра (H = 15,06;

p = 0,020). Изменения размеров и формы гистаминергических нейронов гипоталамуса при холе стазе, возможно, происходит из-за нарушения водно-электролитного и кислотно-щелочного равновесия в организме. Холестаз приводит к су щественному снижению содержания K+ в плазме крови из-за увеличения его экскреции с мочой, а экскреция Na+ с мочой уменьшается. При этом в крови накапливаются пировиноградная и молочная кислоты, что приво дит к развитию метаболического ацидоза [Дедерер Ю.М. и др., 1990].

Обнаруженные отклонения размеров гистаминергических нейронов гипоталамуса от нормы имеют не большие числовые значения и колеб лются в пределах 4–5 %. Большая устойчивость размеров и формы гиста минергических нейронов гипоталамуса к изменениям внутренней среды организма, вероятно, связана с относительной филогенетической древно стью гистаминергической нейронной системы, которая обнаруживается у низших позвоночных и даже некоторых насекомых и моллюсков [Airaksinen M.S., Panula P., 1990;

Brodin L. et al., 1990;

Inogaki N., 1990;

Peitsaro N. et al., 2003].

Для разных цитоплазматических ферментов гистаминергических нейронов гипоталамуса динамика и направленность изменений активно сти, выявленные при холестазе, не одинаковы (рисунок 1). Так активность СДГ во все сроки снижается, а активность ЛДГ, НАДН-ДГ, НАДФН-ДГ и, особенно, КФ увеличивается. Изменения активности Г-6-Ф-ДГ и МАО Б носят волнообразный характер: активность МАО Б на 10 и 20 сутки по сле перевязки общего желчного протока уменьшается, а на 45 сутки – увеличивается, а Г-6-Ф-ДГ, наоборот, на 10 и 20 сутки холестаза возрас тает, а на 45 сутки – снижается. Через 90 суток от начала эксперимента активность всех изученных ферментов нормализуется. Однофакторный дисперсионный анализ выявляет статистически значимую зависимость значений активности исследуемых ферментов гистаминергических нейронов от фактора времени перевязки желчного протока: МАО Б (H = 32,17;

p 0,001), СДГ (H = 48,06;

p 0,001), НАДН-ДГ (H = 31,42;

p 0,001), ЛДГ (H = 29,09;

p 0,001), НАДФН-ДГ (H = 40,08;

p 0,001), Г-6-Ф-ДГ (H = 43,11;

p 0,001) и КФ (H = 45,59;

p 0,001).

Ультрамикроскопическое исследование гистаминергических нейро нов ядра Е2 гипоталамуса крыс с 10-суточной перевязкой общего желчно го протока выявляет: повреждение ядерной оболочки, начальные призна ки отека ядра;

выраженный отёк цитоплазмы, фрагментацию гранулярной эндоплазматической сети;

набухание большинства митохондрий, частич ную редукцию их крист, что соответствует состоянию сниженной выра ботки АТФ;

увеличение размеров и количества вторичных лизосом (при знак повышенной аутофагии);

расширение цистерн комплекса Гольджи.

МАО Б НАДФН-ДГ ** 0 * ед. опт. пл. х ед. опт. пл. х ** ** * * 0 0 10 20 45 90 сутки 45 90 сутки 2 5 2 5 1 0 СДГ Г-6-Ф-ДГ 450 ** ед. опт. пл. х ед. опт. пл. х ** •• ** ** ** ** 300 ** 150 10 20 45 90 сутки 2 5 10 20 45 90 сутки 2 НАДН-ДГ КФ 900 ** ** ** * ** ед. опт. пл. х •• ** 750 ед. опт. пл. х * 600 450 300 150 90 сутки 10 20 2 5 2 5 10 20 45 90 сутки ЛДГ выраженность метаболических ** 550 ** изменений, % ед.опт.пл. х 2 5 10 20 45 10 20 45 90 сутки 2 5 сутки – контроль;

– холестаз;

– холестаз + урсофальк * – p 0,05, ** – p 0,01 по сравнению с контролем, •• – p 0,01 по сравнению с опытом (Me ± IQR) Рисунок 1 – Изменение активности изучаемых ферментов в цитоплазме гистаминергических нейронов ядра Е гипоталамуса крыс в динамике подпечёночного холестаза Отмечаются также изменения в структурах нейропиля гистаминерги ческого ядра Е2: отёк дендритов и аксоплазмы миелиновых волокон, деформация их миелиновой оболочки;

отёк цитоплазмы астроцитов и олигодендроцитов, снижение в них количества органелл. Выявленные метаболические и ультраструктурные изменения отражают токсическое воздействие компонентов желчи, а также адаптационные изменения в гистаминергических нейронах гипоталамуса при резком нарушении печёночно-кишечной циркуляции желчи. Нарушение транспорта нейротрансмиттеров подтверждается накоплением гистамина в перика рионах гистаминергических нейронов ядра Е2.

Использование урсофалька (препарата урсодезоксихолевой кислоты (УДХК)) при перевязке общего желчного протока в течение 20 суток предупреждает и коррегирует изменения в организме, вызванные непо ступлением желчи в 12-перстную кишку и накоплением компонентов желчи в крови. При этом УДХК нормализует изучаемые биохимические показатели сыворотки крови. Содержание билирубина, холестерина, и ферментов (АсАТ, АлАТ, ЛДГ и ЩФ) в этой группе статистически значимо не отличается от контрольных значений.

УДХК оказывает благоприятное действие на размеры, форму и мета болизм гистаминергических нейронов гипоталамуса при холестазе. Если размеры тел нейронов холестатических животных статистически значимо отклонялись от контрольных, то у опытных животных с коррекцией урсофальком изменения статистически значимо не отличаются от кон трольных значений. Активность изучаемых метаболических ферментов в цитоплазме холестатических животных, которым вводили урсофальк, в меньшей степени отличаются от контрольных показателей, по сравне нию с таковыми значениями животных без коррекции. Известно, что УДХК способна регулировать процессы апоптоза как в гепатоцитах, так и в других клетках, включая нервные [Rodrigues С.M.P. et al., 1998].

Структурно-метаболические изменения в гистаминергических нейронах гипоталамуса крыс при полном наружном отведении желчи Результаты нашего исследования показали, что полная наружная потеря желчи организмом приводит к гибели части опытных животных 5 из 29. Общий процент смертности равняется 37,7 %, т. к. эксперименты имели разную продолжительность. Гибель оперированных крыс начина ется со вторых суток и с увеличением протяженности эксперимента нарастает. Известно, что к 7–8 дню после начала наружного отведения желчи все опытные животные погибают [Емельянчик С.В., Зимат кин С.М., 2005].

Потеря желчи организмом приводит к уменьшению массы крыс.

Если у контрольных животных на 3–5 сутки отмечается небольшой при рост массы тела, то опытные животные теряют вес к 3 суткам на 14,8 %, а к пятым – на 16,9 % по сравнению с их весом до начала эксперимента.

Это связано с потерей самой желчи и нарушением процессов пищеваре ния и всасывания из-за непоступления желчи в 12-перстную кишку [Дедерер Ю.М. и др., 1990].

В результате моделирования ахолии с использованием наружной билиарной фистулы в сыворотке крови уровень холестерина статистиче ски значимо увеличивается на 3 и 5 сутки. Конъюгированный билирубин в сыворотке крови у опытных и контрольных животных не обнаруживает ся. Уровень неконъюгированного и соответственно общего билирубина немного увеличивается, статистически значимые различия появляются только на 5 сутки отведения желчи. Статистически значимое увеличение активности ЛДГ сыворотки крови крыс с желчной фистулой свидетельст вует о протекании в организме процессов цитолиза. Активность ЩФ спустя сутки после начала отведения желчи снижается, через 3 суток возрастает, а к 5 суткам достигает контрольных значений. Статистически значимое увеличение активности АсАТ у опытных животных на 5 сутки после начала эксперимента может быть связано как с повреждением кардиомиоцитов, так и гепатоцитов [Камышников В.С., 2002], что наблю дается при потере желчи организмом [Попов А.Н. и др., 1997;

Турев ский А.А., Лискович А.Л., 1984;

Туревский А.А. и др., 1983]. Значение активности АлАТ у опытных животных статистически значимо не отли чается от контрольных значений.

У выживших опытных животных выявляется проходящее нарушение размеров и формы гистаминергических нейронов ядра Е2. Спустя сутки от начала отведения желчи из организма крыс уменьшается периметр тел нейронов на 4,4 % (Z = 2,11;

p = 0,035). На третьи сутки отведения желчи отмечается статистически значимое увеличение значения форм-фактора на 8,3 % (Z = 2,63;

p = 0,008) и тенденция к снижению значения фактора элонгации, что свидетельствует об округлении нейронов. Известно, что полная потеря желчи приводит к нарушению водно-электролитного равновесия и в первую очередь содержания ионов калия, кальция, магния, хлора [Дедерер Ю.М. и др., 1990]. Эти сдвиги могут привести к отёку цитоплазмы и к набуханию гистаминергических нейронов. Однако на пятые сутки наружной потери желчи изменения в форме и размерах тел гистаминергических нейронов не выявляются. Приближение изучаемых параметров нейронов у опытных животных к контрольным значениям не может свидетельствовать о нормализации структуры этих клеток, т. к.

метаболические сдвиги, обнаруженные в данный период, напротив, еще больше возрастают. Вероятно, характер изменений меняется, и они пере стают выявляться использованным методом морфометрии. Это может быть связано с массовой гибелью органелл, что компенсирует увеличение размеров нейронов в результате отёка цитоплазмы. Выявляется статисти чески значимое влияние фактора времени потери желчи организмом на максимальный диаметр (H = 7,86;

p = 0,049) и форм-фактор (H = 13,45;

p = 0,004).

Изменения активности ферментов в цитоплазме гистаминергических нейронов ядра Е2 при наружном отведении желчи нарастают во времени (рисунок 2). Наиболее чувствительными к односуточной потере желчи в цитоплазме нейронов являются СДГ, Г-6-Ф-ДГ и КФ. Их изменения характеризуют угнетение цикла Кребса, пентозофосфатного пути и акти вацию лизосом. Отведение желчи в течение трех суток вызывает даль нейшее угнетение СДГ и Г-6-Ф-ДГ, а также снижение активности МАО Б, НАДН-ДГ, НАДФН-ДГ т.е. ещё больше тормозятся митохондриальные энергетические процессы и пентозофосфатный путь. При этом наблюда ется рост активности ЛДГ, что отражает компенсаторную активацию гликолитических процессов в цитоплазме. Активность КФ ещё больше возрастает, что свидетельствует о дальнейшей активации лизосом.

Пятисуточное полное наружное отведение желчи из организма угнетает активность всех изучаемых ферментов за исключением КФ. Содержание гистамина в гистаминергических нейронах ядра Е2 гипоталамуса также снижается.

Ультрамикроскопическое исследование подтверждает глубокие нарушения этих нейронов. Наблюдается отек цитоплазмы, просветление митохондрий с частичным разрушением крист, фрагментация эндоплаз матической сети, уменьшение содержания рибосом на мембранах грану лярной эндоплазматической сети, расширение цистерн комплекса Голь джи, увеличение количества и размеров вторичных лизосом. На 5 сутки опыта в гистаминергических нейронах гипоталамуса подавляются все пути энергетического метаболизма, что должно приводить при дальней шей потере желчи к гибели нейронов мозга и всего организма.

Дисперсионный анализ обнаруживает влияние фактора времени потери желчи организмом на значения активности изучаемых ферментов в цитоплазме гистаминергических нейронов ядра Е2. Отмечается стати стически значимое влияние на активность МАО Б (H = 26,04;

p 0,001), СДГ (H = 31,98;

p 0,001), НАДН-ДГ (H = 21,74;

p 0,001), НАДФН-ДГ (H = 32,07;

p 0,001), Г-6-Ф-ДГ (H = 29,57;

p 0,001), КФ (H = 33,87;

p 0,001).

МАО Б НАДФН-ДГ ед. опт. пл. х ед. опт. пл. х 750 ** ** *** ** 250 150 1 сутки 3 суток 5 суток 1 сутки 3 суток 5 суток СДГ Г-6-Ф-ДГ ед. опт. пл. х ед. опт. пл. х 400 350 * 350 *** * ** ** ** 150 1 сутки 3 суток 5 суток 1 сутки 3 суток 5 суток НАДН-ДГ КФ 650 ** *** ** ед. опт. пл. х ед. опт. пл. х * ** 1 сутки 3 суток 5 суток 1 сутки 3 суток 5 суток ЛДГ выраженность метаболических *** ед. опт. пл. х изменений, % ** 350 0 1 3 1 сутки 3 суток 5 суток сутки – контроль, – отведение желчи * – p 0,05;

** – p 0,01;

*** – p 0,001 по сравнению с контролем (Me ± IQR) Рисунок 2 – Изменение активности изучаемых ферментов в цитоплазме гистаминергических нейронов ядра Е2 гипоталамуса крыс в динамике полного наружного отведения желчи ЗАКЛЮЧЕНИЕ 1. Подпечёночный холестаз, вызванный перевязкой общего желчно го протока, приводит к нарушениям биохимических показателей сыво ротки крови (билирубина, холестерина, печёночных ферментов), а также структуры и метаболизма гистаминергических нейронов гипоталамуса крыс. Эти изменения не выявляются на 2-е сутки холестаза, обнаружива ются через 5 суток, а через 10–20 суток достигают максимума. При этом в гистаминергических нейронах снижается активность сукцинатдегидро геназы (СДГ) и моноаминооксидазы типа Б (МАО Б) и увеличивается активность дегидрогеназ восстановленного НАД (НАДН-ДГ), НАДФ (НАДФН-ДГ), лактата (ЛДГ), глюкозо-6-фосфата (Г-6-Ф-ДГ) и кислой фосфатазы (КФ), а также накапливается гистамин [2, 4, 7, 10, 11, 15].

2. Через 10 суток подпеченочного холестаза в гистаминергических нейронах мозга крыс наблюдаются глубокие ультраструктурные наруше ния, соответствующие выявленным гистохимическим сдвигам: поврежде ние ядерной оболочки, отек ядра, и особенно цитоплазмы, фрагментация гранулярной эндоплазматической сети, расширение цистерн комплекса Гольджи, набухание митохондрий с частичной редукцией их крист, увеличение количества и размеров фаголизосом [17].

3. Лекарственный препарат урсодезоксихолевой кислоты (урсо фальк) оказывает защитное действие, ослабляя изменения биохимических показателей сыворотки крови, а также структурные и метаболические нарушения в гистаминергических нейронах гипоталамуса крыс при 20-суточном подпеченочном холестазе. При этом в меньшей степени изменяются размеры, форма и изученные показатели их метаболизма:

активность МАО Б и СДГ снижается, а активность НАДН-ДГ, Г-6-Ф-ДГ, НАДФН-ДГ и КФ повышается в меньшей степени, по сравнению с неле ченными холестатическими животными [3, 14, 16].

4. В случае самопроизвольного восстановления оттока желчи и исчезновения холестаза животные выживают и у них постепенно нормализуются изучаемые биохимические показатели сыворотки крови, а также структура и метаболизм гистаминергических нейронов гипотала муса. Так, через 45 суток после операции происходит нормализация размеров и формы тел гистаминергических нейронов мозга, а также активности в них ЛДГ и НАДФН-ДГ;

при этом активность СДГ остаётся низкой, активность Г-6-Ф-ДГ резко падает, а МАО Б возрастает. Через 90 суток происходит полная нормализация в них всех изученных показа телей структуры и метаболизма [2, 4, 10, 11, 15, 16].

5. Полное наружное отведение желчи вызывает транзиторные изме нения размеров и формы перикарионов гистаминергических нейронов гипоталамуса (на 1-3 сутки). При этом метаболические изменения в их цитоплазме прогрессивно нарастают;

они выявляются уже через сутки после операции (активность СДГ падает, а ЛДГ, Г-6-Ф-ДГ и КФ возраста ет). Через трое суток изменения в гистаминергических нейронах нараста ют (снижается активность всех изученных ферментов, за исключением ЛДГ и КФ). Спустя пять суток нарушения достигают максимума: в гиста минергических нейронах гипоталамуса значительно снижается актив ность всех изученных ферментов за исключением КФ, активность кото рой ещё больше возрастает. Содержание гистамина в гистаминергических нейронах при этом снижается. Вместе с тем изменяется содержание били рубина, холестерина, печёночных ферментов в сыворотке крови, а также билирубина, холестерина и желчных кислот в желчи [1, 5, 6, 8, 9, 12, 13].

6. Ультраструктурные изменения в гистаминергических нейронах при 5-суточном наружном отведении желчи характеризуются нарушением структуры ядра, локальным расширением перинуклеарного пространства, отёком цитоплазмы, уменьшением количества органелл (за исключением фаголизосом) и нарушением их строения. Наблюдается фрагментация эндоплазматической сети, снижение количества связанных с ней рибосом, расширение цистерн комплекса Гольджи, просветление матрикса и уменьшение числа крист митохондрий. Характер ультраструктурных нарушений соответствует выявленным гистохимическим изменениям [5, 6, 17].

Рекомендации по практическому использованию результатов Полученные результаты могут быть использованы для расширения фундаментальных знаний студентов вузов медико-биологического профиля при изучении роли желчи в организме и изменениях в мозге при нарушении энтерогепатической циркуляции желчи. Результаты работы внедрены в учебный процесс в УО «ГрГМУ», УО «ВГМУ» и УО «ГрГУ им. Я. Купалы». Эти данные могут быть также учтены при проведении дальнейших научных исследованиях мозга при нарушениях гепато дуоденальной циркуляции желчи.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ СОИСКАТЕЛЯ Статьи в журналах 1. Емельянчик, С.В. Некоторые биохимические показатели желчи и сыворотки крови у крыс при трехсуточном полном наружном отведении желчи / С.В. Емельянчик, Е.Л. Красницкая, С.М. Зиматкин О.В. Барабан // Веснік ГрГУ ім. Я. Купалы. – 2005. – № 1 (31). – С. 135–141.

2. Барабан, О.В. Состояние гистаминергических нейронов мозга крысы на поздних сроках холестаза / О.В. Барабан // Вес. Нац. акад. навук Беларусi. Сер. біял. навук. – 2006. – № 5. – С. 17–19.

3. Барабан, О.В. Структурно-метаболические нарушения в гистами нергических нейронах гипоталамуса крыс при 20-суточном подпеченоч ном холестазе и их коррекция урсофальком / О.В. Барабан, С.В. Емельян чик, С.М. Зиматкин // Журнал ГрГМУ. – 2007. – № 1. – С. 103–106.

4. Зиматкин, С.М. Метаболические изменения в гистаминергиче ских нейронах мозга крысы в динамике подпеченочного холестаза / С.М. Зиматкин, О.В. Барабан, С.В. Емельянчик // Морфология. – 2007. – Т. 132, № 4. – С. 27–30.

5. Барабан, О.В. Морфо-функциональные изменения в гистаминер гических нейронах ядра Е2 заднего гипоталамуса крыс при потере желчи в течение пяти суток / О.В. Барабан, С.В. Емельянчик, С.М. Зиматкин // Веснік ГрГУ ім. Я. Купалы. – 2007. – № 3 (57). – С. 109–113.

6. Зиматкин, С.М. Структурно-метаболические изменения гистами нергических нейронов гипоталамуса крысы при потере желчи / С.М. Зи маткин, О.В. Барабан, С.В. Емельянчик // Морфология. – 2007. – Т. 132, № 6. – С. 22–25.

Статьи в сборниках научных работ 7. Барабан, О.В. Морфо-функциональные изменения гистаминерги ческих нейронов гипоталамуса крысы на ранних сроках холестаза / О.В. Барабан // Труды молодых ученых – 2006: сборник научных работ посвященный 85-летию БГМУ / Бел. гос. мед. ун-т;

под общ. ред. проф.

С.Л. Кабака. – Минск, 2006. – С. 17–20.

Тезисы докладов и материалы конференций 8. Барабан, О.В. Изменения в сыворотке крови крыс после трехсу точного полного наружного отведения желчи / О.В. Барабан, Л.С. Оль шевская // Научно-практическая конференция молодых ученых и студен тов, посвященная памяти С.И. Гельберга, Гродно, 15–16 апреля 2004 / Гродн. гос. мед. ун-т;

редкол.: М.И. Бушма. – Гродно, 2004. – С. 23–24.

9. Емельянчик, С.В. Показатели желчи после полного наружного отведения ее в течение пяти суток в эксперименте / С.В. Емельянчик, С.М. Зиматкин, Е.Л. Красницкая, О.В. Барабан, Л.С. Ольшевская // Акту альные проблемы экологии: материалы I междунар. конф. Гродно, 6–8 ок тября 2004 г. / Гродн. гос. ун-т им. Я. Купалы, 2005. – С. 243–245.

10. Барабан, О.В. Метаболизм гистаминергических нейронов ядра Е гипоталамуса крысы при экспериментальном холестазе / О.В. Барабан, С.В. Емельянчик // Актуальные проблемы морфологии: сб. тр. междунар.

науч.-практ. конф., посвящ. 85-летию БГМУ / Бел. гос. мед. ун-т;

под общ.

ред. проф. П.Г. Пивченко. – Минск, 2006. – С. 18–19.

11. Барабан, О.В. Структурно-метаболическая характеристика гиста минергических нейронов ядра Е2 гипоталамуса крысы при холестазе / О.В. Барабан // Тезисы докладов конференции студентов и молодых ученых, посвященной памяти профессора И.Я. Макшанова. Гродно, 12– апреля 2006 г. / Гродн. гос. мед. ун-т;

редкол.: П.В. Гарелик [и др.]. – Гродно, 2006. – С. 43–44.

12. Емельянчик, С.В. Морфометрические параметры нейронов коры мозжечка и гистаминергического ядра Е2 гипоталамуса крыс в динамике полного наружного отведения желчи / С.В. Емельянчик, С.Л. Андреева, О.В. Барабан, С.М. Зиматкин // VIII конгресс междунар. ассоциации мор фологов / Морфология. – 2006. – Т. 129, № 4. – С. 49.

13. Емельянчик, С.В. Метаболические нарушения в нейронах темен ной коры мозга и ядре Е2 гипоталамуса крыс при моделировании ахолии / С.В. Емельянчик, О.В. Барабан, С.М. Зиматкин // XI съезд белорусского общества морфологов, Минск, 21–22 сентября 2006 г. / Минск, 2006. – С. 41–42.

14. Барабан, О.В. Структурно-метаболические изменения гистами нергических нейронов ядра Е2 гипоталамуса крыс при 20-суточном под печеночном холестазе и их коррекция урсофальком / О.В. Барабан // Тези сы докладов конференции студентов и молодых ученых, посвященной памяти профессора Г.В. Кулаго / Отв. ред. П.В. Гарелик [и др.]. – Гродно:

ГрГМУ, 2007. – С. 40–41.

15. Зиматкин, С.М. Структурно-метаболические изменения нейронов головного мозга при подпеченочном холестазе у крыс / С.М. Зиматкин, С.В. Емельянчик, О.В. Барабан // Современные аспекты гистогенеза и во просы преподавания гистологии в вузе: конф., посвящ. 100-летию со дня рождения проф. Л.И. Фалина / Морфология. – 2007. – Т. 131, № 3. – С. 71.

16. Zimatkin, S.M. Structural and metabolic disturbances in rat brain his taminergic neurons under cholestasis and their correction with Ursofalk / S.M. Zimatkin, O.V. Baraban, S.V. Yemelyanchik // Falk Symposium 161 Fu ture perspectives in gastroenterology. Dresden (Germany), 11–12 october 2007 / Falk Foundation e.V., 2007. – P. 110.

17. Барабан, О.В. Ультрамикроскопические изменения в гистаминер гических нейронов ядра Е2 заднего гипоталамуса крыс при 10-суточном подпеченочном холестазе / О.В. Барабан, С.М. Зиматкин, С.В Емельян чик // Актуальные проблемы экологии: материалы III междунар. науч. практ. конф. Гродно, 21–23 ноября 2007 г. / ГрГУ им. Я. Купалы;

редкол.:

Н.П. Канунникова (отв. ред.) [и др.]. – Гродно, 2007. – С. 90–91.

РЭЗЮМЭ Барабан Вольга Віктараўна Структурна-метабалічныя змяненні ў гістамінергічных нейронах гіпаталамуса пацука пры халестазе і страце жоўці Ключавыя словы: галаўны мозг, гістамінергічныя нейроны, ультраструктура, гістахімія, морфаметрыя, падпячоначны халестаз, страта жоўці.

Мэта даследавання: ацаніць структурна-метабалічны стан гістамінергічных нейронаў гіпаталамуса пацукоў пры парушэннях энтэра гепатычнай цыркуляцыі жоўці.

Метады даследавання: гісталагічныя, біяхімічныя, гістахімічныя, цытафотаметрычныя, морфаметрычныя, імунагістахімічныя, электронна мікраскапічны і статыстычныя. Апаратура: крыастат Leica CM (Германія), мікраскопы (Carl Zeiss Jena, Германія) і Axioskop 2 plus (Ziess, Германія), лічбавыя відэакамеры (Panasonic Colour CCTV Camera WV-CP410/G, Японія і Sony DFW-X710, Японія), ультрамікратом МТ-7000 (США), электронны мікраскоп JEM-100 CX (Японія).

Атрыманыя вынікі і іх навізна. Упершыню ўстаноўлена, што падпячоначны халестаз, выкліканы перавязкай агульнага жоўцевага пратока, прыводзіць да парушэнняў структуры і метабалізму гістамінергічных нейронаў гіпаталамуса пацукоў. Гэтыя змяненні не выяўляюцца на 2-я суткі халестазу, выяўляюцца праз 5 сутак, а праз 10–20 сутак дасягаюць максімуму. У выніку самавольнага аднаўлення адтоку жоўці і знікнення халестазу, жывёліны выжываюць і ў іх паступова нармалізуюцца структура і метабалізм гістамінергічных нейронаў гіпаталамуса (праз 90 сутак усе вывучаныя паказчыкі структуры і метабалізму не адразніваюцца ад кантролю).

Поўнае вонкавае адвядзенне жоўці выклікае транзіторныя змены памераў і формы перыкарыёнаў гістамінергічных нейронаў гіпаталамуса (1–3 суткі). Пры гэтым метабалічныя змяненні ў іх цытаплазме прагрэсіўна нарастаюць: яны выяўляюцца ўжо праз суткі пасля аперацыі, праз трое сутак становяцца больш выразнымі, а праз пяць сутак дасягаюць максімуму.

Рэкамендацыі па выкарыстанні. Атрыманыя вынікі можна выкарыстаць для выкладання студэнтам медыка-біялагічнага профілю і пры правядзенні далейшых навуковых даследаванняў мозгу пры парушэннях пячоначна-кішэчнай цыркуляцыі жоўці.

Галіна выкарыстання: гісталогія, цыталогія, клеткавая біялогія, нейрахімія, нейрамарфалогія, неўралогія, гепаталогія.

РЕЗЮМЕ Барабан Ольга Викторовна Структурно-метаболические изменения в гистаминергических нейронах гипоталамуса крысы при холестазе и потере желчи Ключевые слова: головной мозг, гистаминергические нейроны, ультраструктура, гистохимия, морфометрия, подпечёночный холестаз, потеря желчи.

Цель исследования: оценить структурно-метаболическое состояние гистаминергических нейронов гипоталамуса крыс при нарушениях энте рогепатической циркуляции желчи.

Методы исследования: гистологические, биохимические, гистохи мические, цитофотометрические, морфометрические, иммуногистохими ческие, электронно-микроскопический и статистические. Аппаратура:

криостат Leica CM 1850 (Германия), микроскопы (Carl Zeiss Jena, Герма ния) и Axioskop 2 plus (Ziess, Германия), цифровые видеокамеры (Panasonic Colour CCTV Camera WV-CP410/G, Япония и Sony DFW-X710, Япония), ультрамикротом МТ-7000 (США), электронный микроскоп JEM-100 CX (Япония).

Полученные результаты и их новизна. Впервые установлено, что подпечёночный холестаз, вызванный перевязкой общего желчного прото ка, приводит к нарушениям структуры и метаболизма гистаминергиче ских нейронов гипоталамуса крыс. Эти изменения не выявляются на 2-е сутки холестаза, обнаруживаются через 5 суток, а через 10–20 суток дос тигают максимума. В случае самопроизвольного восстановления оттока желчи и исчезновения холестаза животные выживают и у них постепенно нормализуются структура и метаболизм гистаминергических нейронов гипоталамуса (через 90 суток все изученные показатели структуры и метаболизма не отличаются от контроля).

Полное наружное отведение желчи вызывает транзиторные измене ния размеров и формы перикарионов гистаминергических нейронов гипо таламуса (на 1–3 сутки). При этом метаболические изменения в их цито плазме прогрессивно нарастают: они выявляются уже через сутки после операции, через трое суток становятся более выраженными, а спустя пять суток достигают максимума.

Рекомендации по использованию. Полученные результаты можно использовать для преподавания студентами медико-биологического про филя и при проведении дальнейших научных исследованиях мозга при нарушении печёночно-кишечной циркуляции желчи.

Область применения: гистология, цитология, клеточная биология, нейрохимия, нейроморфология, неврология, гепатология.

SUMMARY Baraban Olga Viktorovna Structural-metabolic Changes in the Histaminergic Neurons of the Rat’s Hypothalamus in Cholestasis and Loss of Bile The keywords: brain, histaminergic neurons, ultrastructure, histochemis try, morphometry, subhepatic cholestasis, loss of bile.

The aim of the study: to evaluate structural and metabolic state of the histaminergic neurons of the rat’s hypothalamus in disturbances of entero hepatic circulation of bile.

The methods of the study: histological, biochemical, histochemical, cy tophotometrical, morphometrical, immunohistochemical, electron microscopi cal, statistical. Apparatuses: cryostat Leica CM 1850 (German), microscopes (Carl Zeiss Jena, German) and Axioskop 2 plus (Ziess, German), digital video cameras (Panasonic Colour CCTV Camera WV-CP410/G, Japan and Sony DFW-X710, Japan), ultramicrotome МТ-7000 (USA), electron microscope JEM-100 CX (Japan).

The received results and their novelty. It has been determined for the first time that subhepatic cholestasis, caused by common bile duct legation, re sults in the disturbance of the structure and metabolism in the histaminergic neurons of the rat’s hypothalamus. These changes are not revealed on the 2nd day, but they are determined on the 5th day and within 10–20 days they achieve the maximum. In case of self-arbitrary recovery of bile outflow and disappear ance of cholestasis, animals survive;

the structure and metabolism of the hista minergic neurons of the rat’s hypothalamus are gradually normalized (in days all studied parameters of the structure and metabolism don’t differ from the control).

Total outside bile abduction is the cause of temporary alteration of the size and the shape of the histaminergic neurons of hypothalamus (on 1–3 days).

Metabolic changes in the cytoplasm progressively increase: they become visi ble over 1 day after the operation, and in 3 days they become more expressed, and reach the maximum in 5 days.

The recommendation for use. These results may be used for teaching of students of medical and biological departments and for the future scientific studies of brain in disturbances of enterohepatic circulation of bile.

The field of application: histology, cytology, cellular biology, neuro chemistry, neuromorphology, neurology, hepatology.

Подписано в печать 13.05.08. Формат 6084/16. Бумага писчая «КюмЛюкс».

Печать офсетная. Гарнитура «Times».

Усл. печ. л. 1,39. Уч.-изд. л. 1,31. Тираж 60 экз. Заказ 231.

Издатель и полиграфическое исполнение Белорусский государственный медицинский университет.

ЛИ № 02330/0133420 от 14.10.2004;

ЛП № 02330/0131503 от 27.08.2004.

220030, г. Минск, Ленинградская, 6.