Канаткызы о с о бе н н о с т и а гре га ц и и бе л к о в в а сп екта х в л и я н и я н а их ге м а т о л и м ф а т и ч е с к у ю ц и р к у л я ц и ю

На правах рукописи

/

Даржуман Гульсара Канаткызы

О С О БЕ Н Н О С Т И А ГРЕ ГА Ц И И БЕ Л К О В

В А СП ЕКТА Х В Л И Я Н И Я Н А ИХ

ГЕ М А Т О Л И М Ф А Т И Ч Е С К У Ю Ц И Р К У Л Я Ц И Ю

03.00.13 - физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Республика Казахстан Алматы 2002

Работа выполнена в Институте физиологии человека и животных МО РК;

в Павлодарском государственном университете им. С. Торайгырова

Научный руководитель: - доктор биологических наук, профессор Р.А. Гареев

Официальные оппоненты: - доктор биологических наук, профессор Л.Э. Булекбаева - кандидат биологических наук, доцент Н.С. Байжанова

Ведущая организация: - Казахский национальный университет им. аль - Фараби

Защита состоится «Л /5 декабря 2002 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 53.26.01 в Институте физиологии человека и животных МОН РК по адресу: Алматы, 480060, пр. аль-Фараби, 93.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института физиологии человека и животных МОН РК.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

А ктуальность проблем ы. Лимфатической системе принадлежит большая роль в водно-солевом обмене, иммунологических и защитно­ барьерных процессах, а также в очищении тканей от крупномолекулярных соединений, клеток, агрегатов и клеточных метаболитов /Русньяк, Фельди, Сабо, 1957;

Булекбаева, 1985;

Гареев,1989;

Мурзамадиева,1995;

Кольбай, Сейткулова, 2000;

Мырзаханов и др., 2000;

Абилкасимов и др., 2000;

Бородин и др., 2002/.

Предполагается, что при отравлениях, ожогах, травмах и ряде других патологий в организме образуются и поступают в лимфу белковые и белково-липидные агрегаты, а также нередко продукты распада эритроцитов. При дренаже грудного протока у больных часто наступает «блокада лимфотока». Синусы лимфатических узлов таких больных с летальным исходом обычно были заполнены агрегатами эритроцитов и белка/Панченков и др., 1986;

Буянов, Алексеев, 1990/.

Появление белковых агрегатов в крови ухудшает микроциркуляцию, что, возможно, обусловливает часть клинической картины ожоговой болезни, капилляротоксикоза, тяжелых форм отравлений, воспалений и травм, а также появления на концах пальцев утолщений («барабанных палочек») у больных с выраженным распадом тканей (гнойное воспаление, злокачественные образования и др.). Структуры ретикулоэндотелиальной системы в норме лизируют и утилизируют стареющие белки до наступления стадии агрегации. При экспериментальной блокаде ретикулоэндотелиальной системы наступает отравление организма вплоть до летального исхода подопытных животных /Байдалина, 2002/.

Считается, что в организме человека и животных агрегация белков в норме отсутствует. Это мнение обосновывается также тем, что белки на начальных стадиях денатурации стабилизируются некоторыми веществами плазмы крови /Мурзамадиева, 1995/. Поэтому, а также из-за технических сложностей агрегаты непосредственно в крови и лимфе практически не определялись и не изучались. Остался открытым вопрос о возможности поступления таких агрегатов с лимфой в кровоток.

Защитно-барьерная (задержка злокачественных клеток, агрегатов, инфекционных начал и т.д.) и транспортная функции лимфоузлов нередко противодействуют друг другу, что требует поиска препаратов и воздействий, стимулирующих или подавляющих одну из функций. В механизмах регуляции этих функций внимание привлекают даб^дйиры тучные клетки, в наибольшем количестве находящ игёс^4 вокруг кровеносных и лимфатических капилляров. При деrpai-piяцйи'этих клеток в окружающее интерстициальное пространства,.#алее -в кровь и лимфу ' поступает комплекс биологически активны^х'ш^щёств, средиукокф ы х наиболее действенными в отношение*'' траисадкллярнопз^обм ена макромолекул являются гистамин, гсйрин, сердгошйіС-;

Гипотетически реальной, но практически не изученной являлась возможность изменения агрегации белка под действием этих веществ, а также задержка агрегатов в интерстиции. Не было данных также о том, как влияет гемолизат эритроцитов на агрегацию белка.

Актуальность вышеуказанных проблем для теоретической и практической лимфологии определяет цель и задачи данной работы.

Цель и задачи исследования. Цель работы - выявление поступления белковых агрегатов в центральную лимфу и регуляции этого процесса при моделировании ряда условий гематолимфатической циркуляции белков.

В соответствии с целью поставлены следующие задачи:

1. Исследовать содержание белковых агрегатов в лимфе из грудного протока при введении в кровь белков с различным уровнем денатурации.

2. Выявить действие биологически активных веществ тучных клеток и гемолизата эритроцитов на агрегацию сывороточных белков с различным уровнем денатурации.

3. Изучить фильтрацию через пупочный канатик растворов белков с различным уровнем денатурации.

Н аучная новизна. Впервые выявлено наличие белковых агрегатов в лимфе из грудного протока. Многократное увеличение количества белковых агрегатов отмечено после внутривенной инфузии денатурированной (температурным воздействием) плазмы крови. Введение в кровь обезжиренных сывороточных белков, подвергнутых тепловой денатурации и ультразвуковому воздействию с модификациями (добавлением глюкозы, пальмитиновой кислоты, гемолизата эритроцитов) вызывали разнообразные, а по величине более умеренные изменения количества агрегатов в лимфе. Показано, что гистамин с гепарином, а также серотонин в целом уменьшают агрегацию обезжиренного альбумина.

Подвергнутые тепловой денатурации белки под действием гистамина, а также димедрола проявляют тенденцию к укрупнению белковых агрегатов.

Выявлено, что при прохождении через Вартонов студень растворов с агрегирующими белками, часть агрегатов задерживается в соединительной ткани пупочного канатика.

Теоретическая и п р ак ти ческая ценность диссертации.

Выявлено, что по отношению к агрегатам возможны проявления недостаточности защитно-барьерной функции лимфоузлов - при поступлении повышенного количества агрегатов в периферическую лимфу лимфоузлы не полностью их задерживают (известное увеличение размеров узлов при ряде патологий - результат относительно медленной мобилизации барьерной функции). Установлена возможность изменения агрегации денатурированных белков при действии комплекса веществ, поступающих в интерстиции, кровь и лимфу при дегрануляции тучных клеток. Показана возможность задержки в интерстиции белковых агрегатов, а также влияние на образование агрегатов в крови, интерстиции и лимфе ультразвуковых воздействий и комплекса веществ, выделяющихся при распаде эритроцитов. Известное положительное действие ультразвуковых процедур при терапии ряда воспалительных процессов, вероятно, связано также с разрушением агрегатов и ускоренным выведением дезагрегированного белка из интерстиция. Терапевтический эффект аутогемотерапии, по-видимому, в определенной степени обусловлен влиянием гемолизата эритроцитов на агрегацию сывороточных белков.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Поступление в кровоток большого количества денатурированных белков ведет к увеличению лимфотока и числа белковых агрегатов в центральной лимфе.

2. Обезжиривание сывороточных белков, обезжиривание с последующей тепловой денатурацией;

ультразвуковое воздействие и добавление стабилизаторов (глюкозы и пальмитиновой кислоты) в растворы этих белков меняют их способность (при внутривенном введении) влиять на лимфоток и содержание агрегатов в центральной лимфе.

3. Агрегации дестабилизированных (обезжиренных) сывороточных белков in vitro противодействует комплекс гистамина с гепарином.

Таким же эффектом обладает гемолизат эритроцитов.

4. Агрегаты денатурированных сывороточных белков in vitro имеет тенденцию укрупнения при добавлении гистамина, димедрола, гемолизата эритроцитов.

5. Белковые агрегаты, попадая в интерстиций, частично могут там задерживаться.

Апробация работы. Основные положения доложены и обсуждены на Семинаре-конференции «Температурный мониторинг функционального состояния организма» (Алма-Ата, 1991), на международной научной конференции «Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии»

(Новосибирск, 1992), на II съезде физиологов Казахстана (Караганда, 1992), на IV съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002), на V международной научной конференции «Наука и образование - ведущий фактор стратегии «Казахстан-2030» (Караганда, 2002), на международной научной конференции «Экология и здоровье человека» (Павлодар, 2002), на заседаниях кафедры анатомии, физиологии и БЖ Д ПТУ им.

С.Торайгырова (Павлодар, 2002), межлабораторном теоретическом семинаре Института физиологии человека и животных МОН РК (Алматы, 2002).

Публикации. Основные результаты исследования освещены в 11-ти публикациях. -• Связь работы с другими Н И Р и разли ч н ы м и государственными и международными програм м ам и. Работа выполнена в рамках программы фундаментальных исследований Института физиологии человека и животных МОН РК (государственный регистрационный номер 01860024770).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах, состоит из введения, обзора данных литературы, раздела с описанием методов исследования, трех разделов с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 223 работ. Диссертация содержит 14 рисунков и таблиц.

1 Б Е Ж И ПЛАЗМЫ И ИХ ГЕМАТОЛИМФАТИЧЕСКАЯ ЦИРКУЛЯЦИЯ (Обзор данных литературы) В литературном обзоре приводятся данные, освещающие современное состояние вопроса о циркуляции белков в крови, в интерстиции и в лимфе, а также отражаются нерешенные вопросы, обосновывающие необходимость проведения настоящей работы.

1.1 Белки плазм ы : структура и свойства Представлены данные о структуре и свойствах белков. Освещены данные о различных группах белков. Отмечены особенности процессов денатурации и агрегации белков и причины их образования в организме.

Приводятся сведения об патогенных белках, способных вызывать агрегацию белков в организме. Приведены данные о взаимодействии денатурированных протеинов и белковых агрегатов с веществами белковой и небелковой природы при различных патологиях в организме.

Рассмотрены причины гемолиза эритроцитов. Кратко изложены сведения о веществах, способствующих стабилизации и дестабилизации сывороточных белков.

1.2 Белки плазмы и интерстиции Приведены сведения о структуре интерстициального пространства, о его свойствах, связанных с водно-солевым и белковым обменом. Указаны данные о возможности задержки белка и белковых агрегатов в интерстиции, вероятных механизмах самоочищения от них интерстиция и организма в целом. Описаны особенности и свойства таких биологически активных веществ тучных клеток, как гистамин, гепарин и серотонин.

Приведена гипотеза (Гареев, 1989) об агрегации денатурированных и постаревших макромолекул в интерстиции.

1.3 Б елки плазм ы и лимфа Изложены теории лимфообразования и имеющиеся данные о механизмах рециркуляции и удаления денатурирующихся протеинов.

Приведены данные об изменении состава лимфы при воздействии биологически активных веществ, различных факторов внутренней и внешней среды. Описываются данные об изменении состава белков в лимфе. Рассматривается лимфатическая система как дренажно детоксикационная. Отмечается нарушение барьерной функции лимфатических узлов. В конце обзора обосновывается необходимость проведения исследования гематолимфатической циркуляции белковых агрегатов.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Для решения поставленных задач были выполнены исследования, включающие как эксперименты in vivo на собаках, так и in vitro на пупочных канатиках, плазме крови собак, растворах альбумина.

2.1 О п ы ты на собаках Опыты in vivo выполнены на 26 взрослых беспородных собаках обоего пола массой от 7 до 12 кг, наркотизированных тиопенталом натрия ( мг/кг) /Батрак, Кудрин, 1979/. Для оценки общего состояния регистрировали артериальное давление. Для предотвращения свертывания крови в бедренную вену вводили гепарин из расчета 500 ME на 1 кг массы животного.

В опытах при введении в бедренную вену растворов белка с различным уровнем денатурации определяли объемный лимфоток, количество белка и белковых агрегатов в лимфе.

Концентрацию белка в лимфе определяли унифицированным биуретовым методом /Делекторская, 1971/. Для инфузии использовали плазму: денатурированную, обезжиренную, обезжиренную и подвергнутую тепловому, а также ультразвуковому воздействию, к которым в ряде серий добавлялись белковые стабилизаторы и гемолизат эритроцитов. В экспериментах инфузировали изогенную плазму.

Денатурацию белков плазмы и альбумина проводили с использованием стандартного /Ж оли,1968/ теплового воздействия (60°С, 45 мин). Белки обезжиривали по методике R.Chen /1976/. Ультразвуковое воздействие производили дезинтегратором UD-11 (усиление 2) в течение 30 секунд. В качестве стабилизаторов белков использовали пальмитиновую кислоту (Змг/мл) и глюкозу (4 мг/мл). Гемолизат эритроцитов получали при 10 кратном замораживании и размораживании эритроцитов. Отмывку’ эритроцитов для соответствующего гемолизата производили в физиологическом растворе (25 мг/мл НЬ). Концентрацию гемоглобина определяли унифицированным гемоглобинцианидным методом /Пименова, Дервиз, 1974/.

Сбор лимфы осуществляли в течение 65 минут (первые 5 минут - фон), каждая проба набиралась в течение 5 минут. Количество белковых агрегатов в лимфе подсчитывали на кондуктометрическом счетчике форменных элементов крови «Пикоскель» (Венгрия). Предварительно в пробе определяли общее количество всех частиц размером 2-20 мкм.

Разрушали эритроциты стандартным раствором сапонина и подсчитывали оставшиеся частицы (разница первых двух подсчетов - количество эритроцитов). В следующем этапе белковые агрегаты в растворе пробы разрушали ультразвуковым воздействием (15 секунд). Оставшиеся частицы в пробе представлены в основном лимфоцитами, а разница последних двух из трех определений частиц с помощью «Пикоскеля» - количество белковых агрегатов.

Транспорт белковых агрегатов с лимфой определяли умножением объемного лимфотока на количество агрегатов в лимфе.

2.2 О пы ты in vitro При моделировании in vitro фильтрации растворов белка с различным уровнем денатурации через интерстиций использовали Вартонов студень (пупочный канатик человека). Свежие пупочные канатики (п=70) получали из родильного дома. Хранились они при температуре 4°С не более суток.

Для эксперимента пупочные канатики разрезали на доли длиной 3,5 (±0,1) см. Эксперименты проводили на специальной установке, с помощью которой создавали постоянное фильтрационное давление в 30 см вод. ст.

Набухание пупочного канатика измеряли гравиметрией, для чего были предусмотрены съёмность соответствующей части и кран. Для фильтрации через Вартонов студень использовали физиологический раствор, физиологический раствор с гистамином 10'9 М, растворы нативных, обезжиренных, денатурированных, обезжиренных и денатурированных с добавленным гистамином белков. Определяли объем фильтрата на его выходе, а также количество белковых агрегатов в белковых растворах до и после прохождения их через канатик.

В исследованиях по изучению влияния биологически активных веществ на агрегацию белков in vitro использовали плазму собак и коммерческий альбумин («Reanal»). Количество агрегатов подсчитывали с помощью счетчика форменных элементов крови «Пикоскель». Определяли тенденцию изменения размеров белковых агрегатов нефелометрией соответствующих растворов с помощью спектрофотометра «Спекорд 40» и «Сумаль» (Германия). Из биологически активных веществ использовали гистамин и серотонин фирмы «Reanal», растворы гепарина и димедрола.

Количество наблюдений и анализов по основным сериям опытов: в опытах на собаках по определению количества агрегатов проведено анализов, белка - 468 анализов;

в исследованиях in vitro при воздействии биологически активных веществ на агрегацию белков по определению нефелометрии белков сделано 720 анализов, по определению количества агрегатов- 1800;

в исследованиях in vitro на Вартоновом студне по определению гравиметрии сделано 180 анализов, по определению количества агрегатов 210 анализов. Всего сделано 4782 анализов.

Полученные цифровые данные подвергали статистической обработке с вычислением средней арифметической и ее ошибки (М±м).

Достоверными результаты признавались при коэффициенте достоверности Р0,05.

3 ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ И ГЕМОЛИЗАТА ЭРИТРОЦИТОВ НА АГРЕГАЦИЮ БЕЛКОВ С РАЗЛИЧНЫМ УРОВНЕМ ДЕНАТУРАЦИИ 3.1 Влияние гистам ина на агрегацию белков При дегрануляции тучных клеток в интерстиции выделяется комплекс биологически активных веществ, среди которых наиболее известны и достаточно изучены по их действию - гепарин, гистамин, серотонин.

Содержание серотонина в тучных клетках варьирует у различных животных, а у человека он фактически в вышеуказанном комплексе веществ отсутствует. Дегрануляция тучных клеток усиливается при непосредственном действии молекул с повышенной химической активностью, среди которых заметное место принадлежит денатурированным белкам. Это позволяло предполагать, что имеется «обратная связь» - гистамин, гепарин и серотонин влияют на эти белки.

В связи с этим предположением были проведены in vitro исследования по изучению влияния гистамина, гепарина и серотонина на агрегацию белка с различными уровнями денатурации. Предварительно было проверено, что гистамин, гепарин и серотонин при добавлении к нативным белкам плазмы, а также к исходным растворам альбумина не приводили к появлению агрегатов.

Для суждения об общей тенденции сдвигов в соотношении числа крупных и мелких агрегатов в растворе использовали нефелометрический показатель отражения раствором света длиной Х350 нм и 850 нм.

На рисунке 1 представлены кривые влияния гистамина различной концентрации на нефелометрический показатель белкового раствора, подвергнутого тепловому воздействию. Средняя ошибка средней (±ш) колебалась от 0,004 до 0,1. Из рисунка видно, что расхождение кривых отражения света при длинах волн Х350 нм и Х850 нм начинается с концентрации гистамина 10'12 М и становится устойчивым и равномерным с Ю’1 М. Имеется биофизическая закономерность, что более крупные агрегаты лучше отражают свет большей длины волны (в данном случае А.850 нм). Поэтому вышеуказанное «расхождение» указывает на увеличение (по мере повышения концентрации гистамина) числа крупных и уменьшения мелких агрегатов в растворах денатурированных сывороточных белков.

Нефелометрия денатурированных белков плазмы через 2 часа после добавления гистамина Ось абсцисс - концентрации гистамина, М;

ось ординат - показатель светорассеяния (отн. ед.): 1 - X 850 нм, 2 - Х 350 нм.

Рисунок 1.

Однако данные по количеству агрегатов в этих экспериментах не были столь же однозначными (таблица 2). Из таблицы видно, что по сравнению с контролем (0,9% NaCl) достоверного увеличения числа агрегатов нет. Более того, при концентрации гистамина 10-4 М наблюдалось уменьшение их числа. Такой «эффект», вероятно, связан с тем, что увеличение числа крупных агрегатов шло в основном за счет «объединения» более мелких.

Добавление димедрола в раствор подвергнутых тепловому воздействию сывороточных белков и последующая инкубация растворов при t 37°С в течение суток показало, что он не блокирует образование белковых агрегатов. Чтобы выяснить вопрос, не вызван ли разброс данных и в ряде серий экспериментов различиями агрегационных возможностей фракций белков плазмы, многие последующие исследования проведены на альбумине. В растворе денатурированного альбумина при добавлении димедрола от 10'" М до концентрации 10'5 М происходило увеличение агрегатов альбумина максимально на 44%. При совместном введении димедрола с гистамином в раствор подвергнутого тепловой денатурации альбумина наблюдалось увеличение числа агрегатов белка в исследуемом растворе от 12 до 78 %.

Таблица Влияние гистамина на количество агрегатов в растворе подвергнутых тепловому воздействию белков плазмы_ Количество агрегатов, ед /мкл, Содержание гистамина в белковых через 2часа % до инкубации после инкубации изменений растворах, М при 37°С 127, 125,011, 0,9% NaCl 98,0±1, Ю'!| 129,011, 111,0±0, 10-ш 124,011, 108,011, Ю'у 115,0±1,00 130,011, 10'8 154,011, 130,011, 10-' 165,011, 137,011, 10'6 167,011, 140,012, 166,011, Ю'5 144,011, ю-4 129,011, 132,011, 3.2 Влияние гистам ина с гепарином на агрегацию обезжиренного альбумина Совершенно иное действие оказывали тестируемые биологически активные вещества на агрегацию дестабилизированных (обезжиренных) сывороточных белков. При этом наиболее выраженный эффект изменения числа агрегатов получен при добавлении гистамина с гепарином в раствор обезжиренного альбумина. Исходный раствор гепарина содержал 20 тыс.

ед. его активности в 1 мл, этот раствор разводился в 104— 1 раз (соответственно в обозначении концентрации введен коэффициент к).

Увеличение концентрации внесенных биологически активных веществ выявило общую тенденцию уменьшения количества агрегатов через 2 часа после их введения за исключением наиболее высокой концентрации 10' М (по гистамину). При этом низкие концентрации (10'1 -10'9 М по гистамину) давали эффект сходный с действием соответствующего объема физиологического раствора. Концентрации 10'7- 10'5М увеличивали число агрегатов В момент введения, но снижали их через 2 часа.

Наиболее сопоставимые и наглядные данные выявлялись, когда рассчитывались изменения в % к контролю. На рисунке 2 видно, что по мере увеличения концентрации смеси гистамина (с 1(Г8 до КГ6 М) с гепарином проявлялась достоверная равномерно выраженная тенденция уменьшения числа агрегатов в подсчетах через 2 часа после введения.

Влияние увеличения концентраций гистамина с гепарином на агрегацию обезжиренного альбумина Ось абсцисс: а —введение гистамина с гепарином без инкубации, б инкубация гистамина с гепарином в течение 2 часов, 1-7 - концентрации гистамина с гепарином в белковом растворе от 10'11до 10'5 М;

ось ординат: количество агрегатов в % к контролю.

Рисунок 2.

3.3 Влияние гепарина на агрегацию обезжиренного альбумина На рисунке 3 представлены данные, из которых видно, что по мере увеличения концентрации гепарина от 10'12 до 10'8 к*М имелась общая тенденция снижения числа агрегатов через 2 часа после инкубации при t 37°С, но более высокие концентрации эту тенденцию нарушали. Самое значительное снижение белковых агрегатов (максимально вдвое) наблюдалось при действии гепарина в концентрации 10'9- 10'8к*М.

Анализ этой серии экспериментов показал, что через 2 часа число агрегатов в растворе уменьшилось по сравнению с показателями подсчетов сразу после добавления гепарина.

Влияние увеличения концентраций гепарина на агрегацию обезжиренного альбумина Ось абсцисс: а - данные сразу после введения гепарина;

б - данные через 2 часа;

1-7 - концентрации гепарина в белковом растворе от 10 '12до 10'5 к*М;

ось ординат - количество агрегатов в % к контролю.

Рисунок 3.

3.4 Влияние серотонина на агрегацию белков Серотонин сразу после введения не вызывал увеличения образование белковых агрегатов в растворе обезжиренного альбумина. Через 2 часа число агрегатов существенно не изменились. В этой серии наблюдений подсчеты были сделаны повторно через сутки (раствор хранился в холодильнике,+4°С): число агрегатов при концентрации серотонина 10'6 10‘3 М уменьшилось, а при Ю-3 М - увеличилось.

При концентрациях серотонина 10"9 М, 10'6 М и 10"5 М имелась однонаправленность изучаемых эффектов в течение суток. Кривые изменения светорассеяния указывают на тенденцию уменьшения числа крупных агрегатов по мере увеличения концентрации серотонина (рисунок 4). При этом после начального уменьшения с концентрации Ю‘п М начинает увеличиваться рассеивание света длиной 350 нм, что, вероятно, связано с увеличением числа относительно небольших по размерам агрегатов в первую очередь за счет разрушения более крупных агрегатов.

Нефелометрия раствора обезжиренного альбумина при увеличении Ось абсцисс - концентрации серотонина, М;

ось ординат показатель светорассеяния в отн. ед.: 1 - X 350 нм, 2 -Я, 850 нм.

Рисунок 4.

3.5 Влияние гем олизата на агрегацию белков Влияние гемолизата отмытых эритроцитов с конечной концентрацией гемоглобина в белковых растворах от 0,0018 мкг до 1800 мкг/мл изучали in vitro. Как видно из рисунка 5, увеличение концентрации гемоглобина от 0.018мкг до 1800 мкг/мл давало характерную картину волнообразного увеличения с последующим снижением числа агрегатов обезжиренного альбумина. При этом начальные изменения в целом повторяли наблюдаемый через 2 часа эффект.

В другой серии экспериментов использовали неотмытые эритроциты, но эффект снижения числа белковых агрегатов был схож с указанным на рисунке. Почти во всех подсчетах (исключение - показатели через 2 часа после введения гемолизата с концентрацией гемоглобина 0,1 8 -1,8 мкг/мл) после введения гемолизата количество агрегатов было меньше фонового уровня. Во всех подсчетах агрегатов в растворах обезжиренного альбумина разброс данных (ошибка средней) не превышал 2 % от средней величины.

Отсутствие отличий в эффектах гемолизата отмытых и неотмытых эритроцитов указывает на возможность того, что в процессе блокирования образования белковых агрегатов участвует сам гемоглобин.

Влияние гемолизата эритроцитов на количество агрегатов в растворе обезжиренного альбумина 0,0018 0,018 0,18 1,8 18 180 Ось абсцисс - концентрация гемоглобина в гемолизате эритроцитов, мкг/мл, а - подсчеты агрегатов сразу после введения гемолизата эритроцитов, б — подсчеты через 2 часа после введения гемолизата эритроцитов;

ось ординат - количество агрегатов в % к контролю.

Рисунок 5.

4 ИССЛЕДОВАНИЕ IN VITRO ПРОХОЖДЕНИЯ ЧЕРЕЗ ПУПОЧНЫЙ КАНАТИК РАСТВОРОВ БЕЛКОВ С РАЗЛИЧНЫМ УРОВНЕМ ДЕНАТУРАЦИИ В качестве модели интерстиция использовали Вартонов студень (пупочный канатик). Одним из факторов влияния на пропускную способность Вартонова студня являлась его гидратация по ходу эксперимента и уменьшение сопротивления току фильтрата. По ходу 30 минутной фильтрации физиологического раствора и того же раствора с гистамином (10 М) прохождение растворов через пупочный канатик ускорялось в 5-9 раз. Причем к 30 минуте выявлялось заметное отставание ускорения при фильтрации раствора с гистамином. При сопоставлении растворов белка с различным уровнем денатурации выявилось, что с наибольшей скоростью фильтровалась нативная плазма, с меньшей обезжиренная, медленнее всех (из трех) фильтровалась плазма, подвергнутая стандартному тепловому воздействию. В тоже время масса пупочного канатика (и соответственно площадь фильтрации) к 30 минуте увеличились на 80-90%. Ввиду того, что относительно длительная ( минут) фильтрация многократно увеличивала пропускную способность Вартонова студня, в сериях экспериментов с использованием белковых растворов отбор и подсчет частиц фильтрата на выходе производился каждую минуту. Для уменьшения влияния «побочных» факторов при сопоставлении растворов их перфузия чередовалась на каждом новом препарате Вартонова студня. При такой схеме экспериментов разница между «входящим и выходящим» количеством агрегатов всегда была положительной не только по каждому наблюдению, но и в среднем по группам наблюдений. Однако больше задерживалось агрегатов при пропускании растворов денатурированных и обезжиренных белков. Для того чтобы уравнять «входящие характеристики», количество агрегатов одной и той же плазмы путем разведения физиологическим раствором доводили до уровня 170 ± 5 ед/мкл. В вытекающем фильтрате (в среднем за 10 минут) при пропускании обезжиренных белков было подсчитано 160,0±22,54 ед/мкл агрегатов и почти вдвое меньше (86,0± 11,6 ед./мкл), когда использовали раствор денатурированной (предварительно подвергнутой температурному воздействию, 45 мин, 60°С) плазмы (таблица 3). Добавление гистамина в обезжиренные белки плазмы недостоверно снижало изучаемый показатель на 2,5%. В тоже время добавление гистамина в денатурированные белки плазмы давало более выраженный эффект - снижение на 32,81% с 128,0±8,0 ед./мкл до указанных выше 86,0±11,6 ед./мкл.

Таблица Количество белковых агрегатов на выходе через Вартонов студень при фильтрации растворов сывороточных белков с различным уровнем денатурации_ Растворы Количество агрегатов, в мкл Обезжиренные белки плазмы 160±22, Обезжиренные белки плазмы и 156± 22, гистамин 10~9М Денатурированные белки плазмы 128± 8, Денатурированные белки плазмы и 86± 11, гистамин 10'9 М Таким образом, представленные данные не противоречат другим нашим данным, что гистамин способствует образованию агрегатов у денатурированных белков. Образующиеся агрегаты в интерстиции, вероятно, задерживаются, а мелкие проходят, чем обусловлены различия по числу агрегатов при сравнении растворов нативных и денатурированных белков плазмы. Данные экспериментов позволяют предполагать тенденцию задержки белковых агрегатов в интерстиции и усиление этого эффекта при поступлении гистамина из тучных клеток.

5 АГРЕГАТЫ В ЛИМФЕ ПОСЛЕ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ РАСТВОРОВ БЕЛКОВ С РАЗЛИЧНЫМ УРОВНЕМ ДЕНАТУРАЦИИ 5Л Введение денатурированны х и обезжиренных белков В таблице 4 представлены исходные изучаемые показатели при внутривенном введении белков плазмы крови, подвергнутых тепловой денатурации.

' Таблица Лимфоток из грудного протока, содержание белка и белковых агрегатов в лимфе при введении термически обработанной плазмы.

Агрегаты, Показатели Лимфоток, Белок, г/л мл/мин ед./мкл Фон 439125 35,9515, 0,137±0, 5 566136 38,3617, 0,23810,13* 10 40,8317, 15901125* 0,284±0,16* к к 15 11381148* 2 0,270±0,15* 40,53+7, ю 20 16581205* 0,296+0,19* 40,1816, о а 25 0,424±0,21** а 37311283* 39,7116, « к 23421300* 0,348+,022* 39,8316, « 35 30151315* 39,616, 0,390±0,17** м К 38,916, 21281197* 0,420±,019** S « 45 1164+188* 0,384+0,15** 38,5216, Cl, СО 50 37+6, 974179* 0,137±0, 55 0,23810,14* 680174* 38,5915, 60 0,284±0,15* 560+37 43,216, *- разница с фоном достоверна - Р0.05;

** - Р 0.0 Как видно из таблицы 4, после введения денатурированных белков плазмы количество агрегатов в лимфе увеличивалась максимально на минуте (в 8,5 раза). Несмотря на последующее снижение, число агрегатов по отношению к фону оставалось увеличенным (на 60 минуте на 27%). С учетом того, что на 25-минуте имелся первый пик увеличения лимфотока, транспорт агрегатов с лимфой возрастал многократно, что видно на рисунке 6. После внутривенного введения денатурированных белков плазмы выход агрегатов за единицу времени вместе с лимфой возрастал значительно более резко, чем соответствующие показатели по белку и эритроцитам. Первый пик, вероятно, связан с усилением лимфотока за счет начального стимулирующего эффекта самой инфузии раствора. Второй и третий пики, можно полагать, обусловлены поступлением в лимфу введенного белка сначала из органов с более высокой проницаемостью кровеносных капилляров (печень, кишечник), а затем из регионов «обычной» проницаемости (кожно-мышечные области и многие другие органы). В опытах эритроциты в лимфе определялись как показатель проницаемости гематолимфатического барьера. В обычных условиях количество эритроцитов в лимфе на 3-4 порядка меньше чем в крови. При травмах, увеличении проницаемости кровеносных капилляров (в том числе под действием гистамина) количество эритроцитов в лимфе многократно возрастает, но никогда не достигает уровня их содержания в крови.

Транспорт агрегатов, эритроцитов и белка с лимфой в % к фону Ось абсцисс - время, мин;

ось ординат - транспорт агрегатов в %: 1 - агрегаты, 2 - белок, 3 - эритроциты.

Рисунок 6.

Полученные нами данные указывают на то, что введение белковых растворов фактически не увеличивает число эритроцитов в лимфе, и соответственно нет феномена выраженного повышения проницаемости гематолимфатического барьера.

В отличие от представленных выше опытов после введения обезжиренных белков плазмы объемный лимфоток менялся волнообразно с общей тенденцией уменьшения. Количество агрегатов было выше фонового значения и лишь в 10, 45 и 60 минутах определялось снижение белковых агрегатов в лимфе (таблица 5).

Таблица Лимфоток, содержание белка и агрегатов в лимфе при введении _ обезжиренных белков _ Транспорт Белок, г/л Показатели Лимфоток, Агрегаты, ед./мкл агрегатов мл/мин с лимфой, тыс.ед./мин Фон 53,5015, 71,1122,8 17,9211, 0,252±0, 5 40,35+6,69* 51,7817, 0,26010,121 155,2155, 10 10,0610,83* 51,2117, 0,20210,082 49,8+10, 15 26,0012,80* 51,7316, 121,5+31, 0,21410, 20 106,5125,4 17,36+1,24 53,0615, 0,16310, Время взятия проб, мин 25 11,2210,88* 55,5716, 75,8116, 0,14810, 30 81,8117,2 14,48+1,17 55,0116, 0,17710, 35 103,7141,1 55,0817, 0,144+0,056* 14,9312, 40 100,8127,2 56,7716, 0,15510,047* 15,6211, 45 0,18510,049* 60,9124,2 11,2711,18* 56,0016, 50 192,1+69, 0,18410,035* 35,3512,43* 55,1517, 55 55,1617, 0,19210,053 102,2140,3 19,6212, 60 71,7116,0 57,9618, 0,25210,058 18,0710, В среднем за 30-минутные периоды 0-30 0,194+0,032* 98,43111,6 19,9110,37 53,0612, 35-60 0,18510,018* 105,23116,8* 19,1410,30 56,0213, *разница с фоном достоверна - Р0, Эффект усиления транспорта агрегатов с лимфой в % к фону после внутривенного введения обезжиренных белков плазмы был соответственно слабым (по пику увеличения в начале и в конце 60-минутного наблюдения). Эти «пики» (рисунок 7) несопоставимо малы с показанными на рисунке 6.

Транспорт агрегатов с лимфой в % к фону Ось абсцисс: время, мин;

ось ординат: изменение числа агрегатов в % к фону.

Рисунок 7.

При внутривенной инфузии растворов обезжиренных белков с последующей тепловой денатурацией и перед введением подвергнутых ультразвуковому воздействию отмечалось умеренное временное увеличение лимфотока в первые 15 минут. В последующем лимфоток уменьшался, но оставался выше фонового показателя. Концентрация белка в лимфе постепенно увеличивалась с 43,40±5,42 г/л (фон) до 48,56±5,94 г/л (10 мин). При этом транспорт белковых агрегатов с центральной лимфой увеличился в первый 30-минутный период с 156184,52 тыс.ед./мин до 468±90,48 тыс.ед./мин, снизившись в последующие полчаса до 263±76, тыс.ед./мин.

5.2 Введение обезжиренных сы вороточны х белков вместе со стабилизаторами При введении раствора обезжиренных сывороточных белков (ОБП) смешанных со стабилизатором (СБ), пальмитиновой кислотой (ПК, мг/мл), объемный лимфоток снизился и в течение 60 минут держался ниже фонового уровня (на 55 минуте на 50%). Концентрация белка лимфы удерживалась чуть выше фонового уровня на протяжении всего времени наблюдения. Количество белковых агрегатов в лимфе умеренно увеличивалось на 60% (до 30 мин) с некоторым уменьшением в последующие полчаса (таблица 6).

При введении обезжиренных, термически обработанных белков плазмы совместно с пальмитиновой кислотой, но без ультразвуковой обра­ ботки, концентрация белка в лимфе почти не менялась. Однако объемный лимфоток в первые 10 минут достоверно возрастал (с 0,31 до 0,67 мл/мин), а с 15 минуты имелась тенденция снижения лимфотока. На 25 минуте до 60 минуты уровень объемного лимфотока оставался почти неизменным, незначительно превышая фоновый показатель. До 30 минуты количество агрегатов в лимфе увеличилось до 25 %. В последующий период этот показатель вырос, превысив фоновый уровень в 3 раза. При введении обезжиренных белков, термически обработанных, подвергнутых ультразвуковому воздействию (УЗВ) вместе с пальмитиновой кислотой (ОБПД) наблюдали умеренное увеличение лимфотока в течение минут. Концентрация белка лимфы сохранялась выше фонового уровня также на протяжении всего времени. Однако после 20 минут наблюдалась тенденция снижения концентрации к исходному фоновому уровню. В лимфе число белковых агрегатов по сравнению с фоновым значением значительно снизилось (на 60-70%).

Таблица Транспорт белковых агрегатов с лимфой (тыс.ед./мин) до и после введения в кровоток обезжиренных сывороточных белков вместе с пальмитиновой кислотой Время, мин. ОБП+СБ ОБПД+СБ ОБПД+УЗВ+СБ с пальмитиновой кислотой Фон 113,0±14,0 221,0140,0 109,2117, 0-30 185,0117,4* 277,0151,0 34,917,1* 31-60 160,0120,7* 859,01127,0* 44,9517,9* * - разница с фоном достоверна: Р0,05;

При введении обезжиренных белков вместе с глюкозой (4мг/мл) объемный лимфоток в первые 15 минут снизился по сравнению с фоном.

От 20 до 60 мин объемный лимфоток оставался на одном уровне и был ниже фонового показателя на 70 %. Концентрация белка в лимфе превышала на 20% фоновое значение. Содержание агрегатов в лимфе увеличилось с 163,0± 59,4 ед./мкл (фон) до 165,3±18,4 ед./мкл в первые минут и достоверно в последующие полчаса (357,5±30,2). Сходная картина отмечена при введении обезжиренных «прогретых» белков с глюкозой:

увеличение числа агрегатов в лимфе во второй половине наблюдения с 175,0±37,1 ед./мкл (фон) до 186±21,7 ед./мкл (1-30 мин) и 442,0±27, ед./мкл (31-60 мин).

При инфузии обезжиренных, подвергнутых тепловой денатурации сывороточных белков, которые перед введением подвергались ультразвуковому воздействию и смешивались с глюкозой наблюдалось достоверное уменьшение числа агрегатов в лимфе с 168,3111,32 ед./мкл до 63,5±0,36 ед./мкл (первые 30 минут) и 45,8±0,24 ед./мкл (31- 60 минуты).

5.3 Введение в кро во то к белков с гемолизатом эритроцитов Введение раствора обезжиренных, а затем термически обработанных сывороточных белков вместе с гемолизатом эритроцитов (ГМЭ, 25 мг/мл НЬ) до 35 минуты вызвало тенденцию снижения объемного лимфотока на 20% (6 опытов). В последующее время лимфоток постепенно возвращался к фоновым значениям. Концентрацию белка в лимфе в этой серии не определяли из-за возможной ошибки от присутствия гемоглобина. В первые 30 минут число агрегатов в лимфе увеличилось в 3,8 раза, а в последующие полчаса наблюдалось дальнейшее увеличение их числа в 2, раза (таблица 7).

Несколько иная картина наблюдалась при введении такого же раствора, но с ультразвуковой его обработкой перед введением. Объемный лимфоток в этих опытах (п=6) в первые 30 минут увеличился только на 10%. В последующем лимфоток стал уменьшаться и к 60 минуте по сравнению с фоновым значением стал меньше на 20%. Транспорт белковых агрегатов в лимфе увеличился в первые 30 минут в 1,5 раза, а в последующие 30 минут этот показатель фактически вернулся к фону (121,3 агрегатов в 1 мкл).

Таблица Транспорт белковых агрегатов в лимфе (тыс.ед./мин) до и после внутривенного введения обезжиренных и подвергнутых тепловой Время, мин ОБПД +ГМЭ ОБПД + УЗВ+ГМЭ Фон 29,93±1,08 120,1813, 185,85146,52* 0-30 115,39127,39** 31-60 277,06±51,85** 121,28132, * - разница с фоном достоверна: Р0,05;

** - при Р0, ЗАКЛЮЧЕНИЕ Результаты проведенных исследований указывают на то, что в обычных условиях часть молекул денатурированных сывороточных белков при прохождении через интерстиции, лимфатические сосуды и узлы могут соединяться друг с другом, образуя агрегаты. Удаление из интерстиция белковых агрегатов из-за их размеров возможно только через лимфатические капилляры, межэндотелиальные стыки которых раскрываются при повышении окружающего тканевого давления.

Интерстициальное давление повышается, в частности, при увеличении проницаемости кровеносных капилляров под действием гистамина и других веществ, выделяющихся из тучных клеток. Дегрануляция последних усиливается также и при соприкосновении с денатурированными белками и их агрегатами. Часть агрегатов в интерстиции разрушается макрофагами.

Крупнейшим барьером на пути гематолимфатической циркуляции денатурированных белков и их агрегатов являются лимфатические узлы, морфофункциональные особенности которых (включая макрофаги и комплекс протеолитических ферментов) должны были бы полностью блокировать поступление агрегатов с лимфой в кровоток. Представленные в работе результаты опытов на наркотизированных собаках доказывают, что не все агрегаты задерживаются в лимфоузлах. Вероятно, у человека и теплокровных животных единичные агрегаты (4-20 в 1 мкл) всегда поступают в центральную лимфу. Не исключено, что эти единичные агрегаты являются разрушаемыми ультразвуком липидно-белковыми комплексами. В тоже время, в лимфе собаки с обширным абсцессом в поясничной области (опыт был исключен из представленных данных) в лимфе, взятой сразу после католизации грудного протока, выявлялось 7- тысяч агрегатов в 1 мкл. Возможно, лимфа, поступающая из небольших очагов воспалений и травм, содержит определенное количество агрегатов, и лишь в редких случаях абсолютно здорового организма она свободна от них.

Окончательное удаление денатурированных белков и их агрегатов из крови с участием печени и других структур РЭС требует определенного времени. Часть агрегатов задерживается в интерстиции и по ходу движения лимфы. В проведенных опытах через 3-4 часа после введения в кровь растворов белков с различным уровнем денатурации количество агрегатов в лимфе было в среднем на 20-30% больше, чем в «интактной» лимфе, взятой в начале опыта до воздействий. Но это «превышение»

несопоставимо с почти 30-кратным на пике увеличением транспорта агрегатов с лимфой после введения плазмы, подвергнутой стандартному тепловому воздействию (рисунок 6).

Все остальные растворы обладали явно более слабьм стимулирующим эффектом на поступление белковых агрегатов в центральную лимфу. При этом, на первый взгляд, обезжиренные и подвергнутые тепловой денатурации сывороточные белки должны вызывать поступление в лимфу агрегатов количественно не меньше, чем «прогретая» плазма. Но, видимо, образующиеся при денатурации обезжиренных белков многочисленные агрегаты (оседающие при отстое или центрифугировании помутневшего раствора) при введении в кровь уже не попадали в интерстиции и далее в лимфу.

Обезжиренные (дестабилизированные) белки начинают мутнеть при комнатной температуре. Однако в основной массе белков при этом не происходит тех глубоких функционально-структурных изменений, которые наступают при стандартном (60°С, 45 мин) тепловом прогреве.

Мутность нативной плазмы при ее прогреве усиливается слабо, поскольку белки в ней стабилизированы жирными кислотами, глюкозой и другими веществами. Значительная часть денатурированных, но из-за наличия стабилизаторов не агрегированных сывороточных белков поступают в интерстиций и лимфоузлы, где, не исключено, происходит «отсоединение» стабилизаторов и нарастающая агрегация денатурированных белков.

Гистамин с гепарином и серотонин в определенных концентрациях усиливают агрегацию полностью денатурированных белков. В этом, возможно, заложен механизм защ иты организма от массы химически очень активных «клеткораздражающих» молекул денатурированных белков путем усиления процесса «замыкания белков друг на друге» с образованием агрегатов. Задержка агрегатов в интерстиции, возможно, также входит в этот протекторный механизм. Агрегаты при относительно кратковременном их нахождении в интерстиции не нарушают важнейшие функции организма, а в крови могут существенно осложнять микроциркуляцию. К тому же, агрегатам не всегда удается преодолеть барьер лимфатических узлов.

В то же время гистамин, гепарин и серотонин, видимо, противодействуют агрегации белков при их естественной денатурации.

Гемолизат эритроцитов также влияет на агрегацию денатурированных белков. Механизм этого влияния не ясен. Не исключено, что сам гемоглобин имеет «стабилизирующие» свойства. Нет данных, как гемолизат эритроцитов влияет на функции лимфоузлов. Возможно, в определенных условиях гемолизат эритроцитов усиливает механизмы задержки агрегатов и эритроцитов в узлах.

В совокупности проведенные исследования косвенно подтверждают вероятность того, что при усиленной денатурации сывороточных белков в организме (при интоксикациях и др. патологиях) их агрегация начинается в интерстиции.

Ультразвуковое воздействие н а вводимые растворы уменьшает поступление белковых агрегатов в лим ф у в первый час наблюдения. В ряде серий экспериментов «с ультразвуком» увеличение числа агрегатов в лимфе наступает на 50-60 минутах. Создается впечатление, что дезагрегирующий эффект ультразвукового воздействия начинает ослабевать к концу первого часа.

Какое количество белка в лимфе приходится на агрегаты? В растворах с 1-3 тысячами агрегатов в 1 мкл, после их осаждения центрифугированием содержание общего белка в надосадочной жидкости снижалось на 2-3 г/л.

Это составляет менее 10% от общ его содержания белка в лимфе.

Коэффициенты корреляции между количеством агрегатов и содержанием белка в лимфе по сериям экспериментов с введением в кровоток белковых растворов не были достоверны. Возможно, это связано, также, с одной стороны, с параллельным (к количеству агрегатов) увеличением неагрегированного белка в лимфе, с другой, уменьшением содержания этого белка в связи с тем, что часть белка «уходит» на агрегаты (белок в лимфе определялся после осаждения агрегатов и клеток центрифугированием).

В целом, представленные в работе данные указывают на то, что агрегация денатурированных сывороточных белков в интерстиции и по ходу движения лимфы - процесс, в определенных пределах регулируемый, зависимый от физико-химического состояния внутренней среды организма (крови, интерстиция, лимфоузлов и лимфы) и существенно влияющий на гематолимфатическую циркуляцию макромолекул.

ВЫВОДЫ 1.Количество белковых агрегатов в центральной лимфе и лимфоток увеличиваются после внутривенного введения белков плазмы, подвергнутых тепловой денатурации.

2.Введение в кровоток растворов обезжиренных, обезжиренных и подвергнутых тепловой денатурации сывороточных белков, добавление в них пальмитиновой кислоты, глюкозы или гемолизата эритроцитов вызывает разнообразные (чаще увеличение) изменения скорости лимфотока и содержания в лимфе агрегатов.

3.Ультразвуковая обработка вводимых в кровоток растворов обезжиренных белков (денатурированных и в смеси со стабилизаторами) уменьшает стимулирующее действие этих белков на поступление агрегатов в центральную лимфу.

4. Гистамин с гепарином, а также серотонин и гемолизат эритроцитов in vitro уменьшают агрегацию обезжиренных (дестабилизированных) сывороточных белков.

5.Сывороточные белки, подвергнутые тепловой денатурации, под действием гистамина, димедрола, димедрола с гистамином in vitro проявляют тенденцию укрупнения белковых агрегатов.

6.При прохождении через пупочный канатик (in vitro) агрегаты частично задерживаются в его интерстиции, влияя на скорость фильтрации растворов, в составе которых они находились.

7.Поступление белковых агрегатов в центральную лимфу зависит от физико-химического состояния внутренней среды организма.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Даржуманова Г.К., Гареев Р А. Влияние биологически активных веществ на агрегацию белков // Известия АН Каз. ССР.1991.№ 6.-С.61-64.

2. Мурзамадиева А. А., Даржуманова Г.К., Жансерикова А.Ж., Гареев Р.А. Эффект термически обработанного белка на показатели лимфатической системы // «Температурный мониторинг функционального состояния организма». Материалы Семинара-конференции - Алма ата,1991.-С.19.

3. Мурзамадиева А.А., Даржуманова Г.К., Жансерикова А.Ж.

Механизм поступления конформационно-измененных белков в лимфатическую систему // Материалы II съезда физиологов Казахстана. Караганда,1992.-С.114.

4. Мурзамадиева А.А., Даржуманова Г.К., Жансерикова А.Ж.

Реакция лимфатической системы на инфузию денатурированного и термонестабильного белка // Материалы научной конференции «Проблемы экспериментальной лимфологии». - Новосибирск, 1992. -С.113-114.

5. Даржуман Г.К. Действие гистамина и димедрола на агрегирование денатурированных сывороточных белков // Биологические науки Казахстана. - Павлодар, 2001, № 1.-С.53-56.

6. Даржуман Г.К. Влияние серотонина, гистамина и гепарина на агрегацию сывороточных белков // Материалы IV съезда физиологов Сибири.- Новосибирск, 2002.-С.72.

7. Даржуман Г.К. Воздействие гемолизированных эритроцитов на агрегацию сывороточных белков // Материалы IV съезда физиологов Сибири. - Новосибирск.2002.-С.72.

8. Даржуман Г.К. Белковые агрегаты в лимфе // Материалы V международной конференции «Наука и образование - ведущий фактор стратегии «Казахстан-2030».- Караганда, 2002,- С. 491.

9. Даржуман Г.К., Гареев Р.А. Исследование агрегированных сывороточных белков при прохождении через Вартонов студень // Материалы международной научной конференции «Экология и здоровье человека», посвященной 90-летию со дня рождения акад. Х.Ж. Жуматова Павлодар, 2002.- С. 325-328.

10. Даржуман Г.К. Влияние гемолизата эритроцитов на агрегацию сывороточных белков // Биологические науки Казахстана. -Павлодар, 2002.

№ 1. - С.47-50.

11. Мурзамадиева А.А., Гареев Р.А., Даржуман Г.К. Лимфатический транспорт белка при усилении его денатурации и нарушении катаболизма // Материалы международной научной конференции «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии». Новосибирск, 2002,- С. 274-275.

Д аржман Глсара анатызы А гр егац и я л ан ан ак у ы зд ар д ы е р ек ш ел ек тер ін і асп ектіл ер ін е ге м а то л и м ф а ти к а л ы а й н ал ы с а сер етуі 03.00.13 - ф и зи о л о ги я Тжырым р іттерге ж а с а л а н тж ір и б ел ер д е кеуде л и м ф а аы сы н д а аку ы з агр егаттары а л аш ы р ет ан ы гал д ы. Ізд ен у ж м ы стар ы н д а in vivo и ттер ге, с о н ы м е н атар in vitro к ін д ік т а м ь ф ы н а, кдн п л а зм а с ы м е н ал ьбу м и н ерітінділерін де тж ір и б ел ер ж асал д ы. In vivo т ж ір и б ел ер ін д е а н аы сьш а б ел о к ерітіндісі ен гізіл ген д е л и м ф а а гы с ы н ы к л ем і, л и м ф а д а б ел о к агр егаттар ы н ьщ м л ш ер і ж н е т асы м ал д ан у ы а н ы гал д ы. In vitro ж м ы стары н д а бір к атар б и о л о г й я л ы белсен д і заттар д ы, эр и тр о ц и тте р д і гем о л и заты д ен а ту р а ц и я л а н а н, м а й с ы з б ел о к п л а зм асы м е н ал ьбум и н ге е с е р і зертелді- В ен а іш ін е д ен а ту р а ц и я л ан ан а н п л азм а сь ш е н г ізг е н кезде ауътз агр егаттары с а н ы н ы суі байкдлды. У л ьтр ад ы б ы сты к ж олм ей д ен а ту р а ц и я л а н а н п л а зм а ж не м ай сы з п л а зм а ер ітін д іл ер і, акуы з стаб и л и зато р л ар ы о сы л ан п лазм а (г л ю к о за м ен п а л ь м и т и н ы ш ы л ы ), с о н ы м е н атар эр и т р о ц и т т е р д ін г е м о л и за т ы л и м ф а д а ы б ел о к агр егаттар ы н ы м л ш е р ін д е р трлі ^сне бір а л ы п т ы згер істер туды рды. Ж ьш ы ту ж н е у л ь т р а д ы б ы с т ы к ж о л м е н м ай сы з б ел о к тар ы н а о сы л ан г л ю к о за м е н п а л ь м и т и н ы ш ы л ы а н агы сы н и н ф у зи я л а у к е зін д е о р талы К л и м ф а д а ы б ел о к агр егаттар ы н ьщ саны ны н т м ен д е те тін д ігі а н ы га л д ы. In vitro тж іри б ел ері де г и с т а м и н м е н г е ііа р и н н і б ір л еск ен се р і, се р о то н и н м е н э р и т р о ц и т е р д ін г е м о л и за т ы п л а зм а н ь щ м а й с ы з ау ы зд ары м е н а л ь б у м и н н ін а г р е г а ц и я с ы н тм ен детеді. Ж ы л ы ту ар ы л ы д е н а т у р а ц и я л а н а н а у ы зд а р агр егат м л ш е р і г и с т а м и н с о н ы м е н атар д и м е д р о л с е р ін е Я с іп, іріленетіндігі бай кдлды. А гр е гац и я л ан а н а у ы з ер іт ін д ія е р ін і бір болігі к ін д ік т а м ы р ы ар ы л ы т к е н к е зд е б ай л а н ь іс т ы р у ш ы л п ал ар да ж и н а га л ад ы. ал ы п ты ж а д а й д а акуы з а гр е га т т а р ы н ь щ л п ад ан л и м ф а а, о д ан рі а н а ту ін е л и м ф а ту й ін д ер і ж н е лпа а р а л ы с й ы гы р еттеу м е н к е д е р г іл ік ж й есі эс е р ететіндігі ан ы гал д ы.

D arhum an G u lsara K anatkysy Features of an aggregate of proteins in aspects o f influence on them baem atolym phatic circulation T he dissertation on the searching of scientific degree o f the candidate o f Biology 03.00.13 - physiology S um m ary The protein aggregates in thoracic d u ct lym ph w ere discovered for the first time in experim ents on dogs. Investigation including experim ents in vivo on dogs, in vitro on funiculus um bilicalis, dog blood plasm a, album in solutions have been conducted. T he lym ph flow volume, the protein aggregates quantity an d tra n sp o rts in lym ph w ere m easu red in experim ents in vivo during the pro tein solutions infusing into th e blood stream. Effect of some biologically active substances, erythrocyte hem olisate upon denaturated, defatted plasm a p roteins an d album in was studied in experiments in vitro. T he m ultiple increase of protein aggregates am ount was noted after intravenous infusion of den atu red blood plasm a (exposed to tem peratural treatm ent). Infusion into blood o f defatted blood plasma solutions subjected to u ltraso u n d treatm en t, d en atu red plasm a solutions, plasma with protein sta b iliz a to rs additions ( glucose a n d fatty acid) and with erythrocyte hem olisate caused m ore m oderate an d various changes of protein aggregates am ount in lym ph. I t w as showed th a t during infusion into the blood stream o f defatted u n d er the h eatin g and ultrasound treatm ent plasm a proteins th e am o u n t o f protein aggregates decreases along with palm itin acid an d glucose.

It was shown in experim ents in vitro th a t histam ine with heparin, serotonine decrease the defatted protein an d album in aggregation. Because of heat penetration of the proteins u n d e r the action of these biologically active substances, an d dihed ral m anifest the tendency to increase the am ount and extension o f protein aggregates. I t w as revealed th a t during passing of solution w ith aggregating p roteins th ro u g h funiculus’s umbilical is, the p a rt of aggregates detains in connective tissue o f funiculus’s umbilical is. It has been concluded th a t in o rd in a ry conditions the regulator and b a rrie r system of interstitium and lym ph nodes p rev en t from form ation and passage of protein aggregates from tissues to lym ph and fu rth e r to blood.

П о д п и сан о в п е ч а ть 21.11.2002.

Ф о р м а т 60x84 1/16. Б у м ага о ф с е т № 1. П е ч а т ь RISO.

У сл.п.л. 1,6. Т и р а ж 100 э к з.

О т п е ч а т а н о в т и п о г р а ф и и " К а р а т -Print" г. А лм аты, ул. Ж и б е к Ж о л ы, 112, оф. тел.: 39-52-