Роль генов белков сурфактанта, цитокиновой сети и ренин-ангиотензиновой системы в формировании дыхательных расстройств у новорожденных
На правах рукописи
Данилко Ксения Владимировна
РОЛЬ ГЕНОВ БЕЛКОВ СУРФАКТАНТА,
ЦИТОКИНОВОЙ СЕТИ И РЕНИН-АНГИОТЕНЗИНОВОЙ
СИСТЕМЫ В ФОРМИРОВАНИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ
РАССТРОЙСТВ У НОВОРОЖДЕННЫХ
Специальность 03.00.15 – генетика
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
УФА-2007
2
Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН доктор медицинских наук, профессор
Научный руководитель:
Викторова Татьяна Викторовна доктор биологических наук, профессор
Официальные оппоненты:
Хуснутдинова Эльза Камилевна доктор медицинских наук, профессор Файзуллина Резеда Мансафовна Медико-генетический научный
Ведущая организация:
центр РАМН, г. Москва
Защита диссертации состоится « 18 » апреля 2007 г. в « 14 » часов на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.133.01 при Институте биохимии и генетики УНЦ РАН по адресу: 450054, Уфа, просп.
Октября, 71.
С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, Уфа, просп.
Октября, 71 и на сайте Института биохимии и генетики http://www.anrb.ru./molgen/dissov.html Автореферат разослан « 17 » марта 2007 г.
Ученый секретарь С.М. Бикбулатова Регионального диссертационного совета
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы.
Несмотря на значительные достижения неонатологии последних десятилетий, проблема дыхательных расстройств у новорожденных по прежнему актуальна. Патологии легких остаются самыми частыми причинами развития критических состояний у новорожденных, особенно недоношенных [Дементьева Г.М., 2002;
Nogee L., 2004].
Среди всех дыхательных нарушений новорожденных одно из ведущих мест принадлежит респираторному дистресс-синдрому (РДС). Считается, что РДС встречается повсеместно у 1-2% всех живорожденных и у 14% детей, родившихся с массой тела менее 2500 грамм. Частота развития РДС обратно пропорциональна степени недонашивания беременности [Strandjord T.P. et al., 2000;
Hacking D. et al., 2001;
Haataja R., 2001;
Grafoor et al., 2003]. В структуре причин неонатальной смертности в России на долю РДС и его осложнений приходится 17.5%. По данным на 1996 г., распространенность РДС в Российской Федерации составляла 197.6 на 10 000 родившихся живыми [Шабалов Н.П., 2004]. За последние годы не наблюдалось тенденции уменьшения количества заболевших [Дементьева Г.М., 2002].
Наряду с РДС, внутриутробная пневмония (ВП) также остается одной из важных проблем неонатальной пульмонологии в связи с ухудшением состояния здоровья матерей. Более того, нередко заболевание протекает по схеме: РДС пневмония-сепсис [Шабалов Н.П., 2004]. Пневмонию диагностируют примерно у 0.5-1% доношенных и 10-15% недоношенных новорожденных. По данным литературы, на секции пневмонию выявляют у 15-38% мертворожденных и 20 32% умерших живорожденных детей [Бойко Т.В. и др., 2000].
В основе респираторного дистресс-синдрома (РДС) лежит нарушение функции сурфактанта – поверхностно-активного вещества протеолипидной природы, выстилающего поверхность альвеол. Патологические изменения могут быть обусловлены дефицитом или иным дефектом продукции, инактивацией или усилением деградации сурфактанта. Нарушение состава и количества сурфактанта легких приводит к ухудшению его поверхностно активных свойств и снижению защитной функции, возникновению воспаления и дезадаптации сердечно-сосудистой системы [Архипов В.В. и др., 2002].
Хотя воспалительный процесс в ткани легкого может быть изначально и неинфекционной этиологии, ВП всегда рассматривают как инфекционный процесс, инициирующий, в свою очередь, вторичный дефицит сурфактанта [Фомичев М.В., 2004].
Для лечения и профилактики дыхательных нарушений в настоящее время активно применяются препараты сурфактанта и различные способы дотации кислорода. Однако на фоне лечения часто возникают осложнения, приводящие позднее к хроническим заболеваниям органов дыхания и даже летальным исходам. Механизм действия сурфактанта остается во многом неясным, кроме того, искусственная вентиляция легких сама по себе может вызвать патологические изменения в легких новорожденного [Apisarnthanarak A. et al., 2003;
Jobe A., 2006].
В связи с вышесказанным, проблемы прогнозирования и профилактики РДС и ВП новорожденных остаются в центре внимания исследователей во всем мире.
Подобно другим многофакторным заболеваниям, развитие респираторного дистресс-синдрома новорожденных и врожденной пневмонии контролируется множественными взаимодействующими факторами экзогенного и эндогенного характера, в том числе генетическими. [Makri V. et al., 2000;
Haataja R., 2001;
Van Sonderen L. et al., 2002;
Marttila R. et al., 2003;
Floros J. et al., 2005;
Аульченко Ю.С., Аксенович Т.И., 2006]. Одним из методов генетики многофакторных заболеваний является исследование ассоциации полиморфных вариантов генов, продукты которых предположительно задействованы в развитии и регуляции тех или иных звеньев патогенеза заболевания [Silverman E., Palmer L., 2000;
Lomas D., Silverman E., 2001;
Hall I., 2002]. Поскольку важными факторами развития таких признаков дыхательных расстройств, как повреждение сурфактантной системы и нарушение легочного кровообращения, являются разнообразные медиаторы воспаления и регуляторы сосудистого тонуса, целесообразным представляется комплексный анализ соответствующих генетических систем, эффект которых может быть модифицирован экзогенным влиянием.
Цель работы: оценить роль полиморфных вариантов генов белков сурфактанта, цитокинов и ангиотензин-превращающего фермента в формировании наследственной предрасположенности к дыхательным расстройствам у новорожденных.
Задачи исследования:
1. Сформировать выборки и создать коллекцию ДНК новорожденных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.
2. Проанализировать полиморфизм генов белков сурфактанта SFTPB, SFTPC, SFTPD и гаплотипы генов SFTPB, SFTPD у больных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.
3. Провести анализ полиморфных локусов генов цитокинов TNF, LTA, IL1B, IL1RN, IL6, IL8, IL10, а также гаплотипов генов TNF-LTA и IL1B-IL1RN у больных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.
4. Изучить особенности распределения частот аллелей и генотипов инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ у больных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.
5. Определить генетические маркеры предрасположенности и устойчивости новорожденных к дыхательным расстройствам, врожденной пневмонии, респираторному дистресс-синдрому и его инфекционным осложнениям.
Научная новизна.
Впервые в России у новорожденных с дыхательными расстройствами и здоровых детей проведен анализ полиморфизма генов белков сурфактанта (SFTPB, SFTPC, SFTPD), цитокинов (TNF, LTA, IL1B, IL1RN, IL6, IL8, IL10) и ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ). Впервые показана взаимосвязь аллелей и генотипов полиморфных локусов генов SFTPD, цитокинов и ACE с развитием РДС, врожденной пневмонии и риском возникновения инфекционных осложнений у новорожденных с РДС.
Практическая значимость работы.
Результаты исследования могут быть использованы для прогнозирования развития дыхательных расстройств у новорожденных и инфекционных осложнений у детей с РДС.
Материалы работы применимы в учебном процессе на биологических и медицинских факультетах ВУЗов, а также на курсах последипломного образования врачей.
Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на European Human Genetics Conference (ESHG, Prague, 2005, Amsterdam, 2006);
3rd Lung Science Conference (Taormina, Italy, 2005);
The XIXth international congress of allergology and clinical immunology (ICACI, Munich, Germany, 2005), European Respiratory Society Annual Congress (Copenhagen, 2005, Munich, 2006);
The 72nd annual international scientific assembly of the American College of Chest (CHEST, 2006);
V Съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, 2005);
Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Москва, 2005, Санкт-Петербург, 2006);
III Российском конгрессе «Педиатрическая анестезиология и интенсивная терапия» (Москва, 2005);
Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2005, 2006);
Международной конференции «Генетика в России и мире», посвященной 40-летию Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (Москва, 2006);
межлабораторном семинаре Института биохимии и генетики (Уфа, 2007).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ, в том числе 1 статья.
Положения, выносимые на защиту:
1. По распределению частот гаплотипов гена SFTPB, гаплотипов генов семейства IL1 и генотипов гена ACE выборка новорожденных с дыхательными расстройствами достоверно отличается от группы здоровых новорожденных.
2. Генетическими маркерами предрасположенности к расстройствам дыхания в первые сутки после рождения являются аллельные варианты генов SFTPD и ACE.
3. Риск развития РДС у новорожденных маркируется генами SFTPB, IL1B, IL1RN 4. Полиморфные варианты генов SFTPD, TNF, IL1RN, IL ассоциированы с развитием инфекционных осложнений у новорожденных с РДС.
5. Важной составной частью генетической структуры подверженности к РДС и ВП новорожденных являются полиморфные варианты генов SFTPB, SFTPD, TNF, IL1B, IL1RN, IL10, АСЕ.
Благодарности. Автор выражает глубокую признательность заведующей ОРИТН ГКБ № 17 г.Уфы Фатыховой А.И. и врачу-реаниматологу Богдановой Р.З., а также сотрудникам РД № 8 за содействие в организации формирования выборки и клиническое обследование больных.
Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов и приложения. Библиографический список включает 254 источника, из них 30 – отечественных и 224 – зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 17 таблицами и 23 рисунками.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объектом исследования служили 108 новорожденных детей с дыхательными расстройствами, в том числе с клиническим диагнозом респираторный дистресс-синдром и врожденная пневмония. Все дети проходили лечение в ГКБ № 17 г. Уфы в период с 2003 по 2005 гг. Все новорожденные нуждались в интенсивной дыхательной терапии продолжительностью не менее 48 часов.
В контрольную группу случайным образом вошли 104 практически здоровых новорожденных, родившихся в РД № 8 г. Уфы в 2003 – 2005 гг.
Материалом для исследования служили образцы ДНК, выделенной из лимфоцитов периферической венозной крови больных с дыхательными расстройствами (N=108) и пуповинной крови здоровых новорожденных (N=104).
Методы исследования. Постановка клинического диагноза проводилась врачами-неонатологами ГКБ № 17.
Для выделения ДНК использовали стандартный метод фенольно хлороформной экстракции. Полиморфизм генов SFTPB (VNTR интрона 4), IL1RN (VNTR интрона 2), АСЕ (инсерция-делеция) изучали методом ПЦР. Для детекции полиморфизм гена SFTPD использована амплификация рефрактерной мутационной системы (ARMS). Методом ПДРФ-анализа изучен полиморфизм генов SFTPC (128TA), TNF (-308GA), LTA (252AG), IL1В (-511CT, 3953CТ), IL6 (-174GC), IL8 (-251ТA), IL10 (-627СA). Амплифицированные фрагменты ДНК разделялись электрофоретически (ЭФ) в полиакриламидном неденатурирующем геле (ПААГ) и визуализировались в проходящем УФ-свете после окрашивания гелей бромистым этидием. Исследование промоторной области и экзона 4 гена SFTPB проводили с помощью анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SSCP) и последующего секвенирования. Визуализация однонитевых фрагментов ДНК после щелочной денатурации и электрофореза в ПААГ осуществлялась путем окрашивания гелей нитратом серебра.
Статистический анализ. Математическую обработку результатов исследования проводили на IBM Pentium IV, используя пакеты статистических программ: STATISTICA v.6.0, BIOSTAT, а также программы Microsoft: Excel и Access. Частоты гаплотипов рассчитывали в программе «The EH software program». Разницу в распределении частот аллелей, генотипов и гаплотипов между группами рассчитывали, применяя точный критерий Фишера или критерий 2 с поправкой Йетса на непрерывность [Животовский Л.А., 1991].
Статистически значимыми различия считали при р0.05. Силу ассоциаций генотипических характеристик c риском развития ДР и клиническими особенностями РДС оценивали по значениям показателя отношения шансов (odds ratio, OR) [Schlesselman J., 1982].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ Анализ анкет послужил основой для разделения общей выборки новорожденных с дыхательными расстройствами на три условные группы, исходя из поставленных диагнозов. Дальнейший анализ проводился по следующей схеме: 1. Общую выборку новорожденных с дыхательными расстройствами (ДР, N=108) сравнивали с контрольной группой здоровых новорожденных (контроль, N=104) для выявления маркеров повышенного и пониженного риска формирования дыхательных расстройств. 2. Условные группы новорожденных с респираторным дистресс-синдромом (РДС, N=71) и врожденной пневмонией (ВП, N=37) сопоставляли с контрольной группой с целью выявления маркеров повышенного и пониженного риска формирования РДС и ВП. 3. С целью выявления маркеров повышенного и пониженного риска развития инфекционных осложнений у новорожденных с РДС подгруппу детей с РДС без врожденной пневмонии (РДС без ВП, N=24) сопоставляли с подгруппой детей с РДС, осложненным вторичной пневмонией (РДС+ВП, N=47).
Анализ полиморфизма генов белков сурфактанта Важную роль в патогенезе многих заболеваний легких у новорожденных играют качественные и количественные изменения компонентов сурфактантного комплекса, в том числе специфичных белков (SP). SP-В и SP-С непосредственно взаимодействуют с липидами сурфактанта. Обусловленное генетически снижение их синтеза приводит к тяжелым (хроническим или летальным) дыхательным нарушениям у человека [Haataja R. et al., 2002;
Nogee L.M., 2004]. SP-А и SP-D участвуют, в основном, в защитных реакциях организма [Pantelidis P.et al., 2002]. В литературе есть сообщения об ассоциации генов SP-А и SP-В с РДС [Haataja R. et al., 2000;
Floros J. et al., 2001].
Изучено 6 полиморфных локусов генов белков сурфактанта SFTPB, SFTPC и SFTPD.
Известно, что мутации, заключенные в промоторной области, могут значительно влиять на уровень экспрессии гена. Экзон 4 гена SFTPB некоторые исследователи считают «горячей точкой» мутаций [Lin Z. et al., 1998]. Для выявления возможных мутаций у больных с дыхательными расстройствами нами проведен SSCP-анализ промоторной 5'-области и экзона 4 гена гена SFTPB. Секвенирование фрагментов ДНК промоторной области гена SFTPB, соответствующих трем вариантами подвижности однонитевых цепей, и последующий ПДРФ-анализ позволили детектировать замену аденина (А) на цитозин (С) в положении -18 гена у больных с ДР и в контроле (рис. 1).
-18 п.н.
SSCP D F F F E D F D D Е а) D SSCP FF E F FF E DDF ПДРФ М АС АС СС АС АС АС СС АА АА АС б) в) Рис.1. Поиск изменений последовательности ДНК промоторной области гена SFTPB у новорожденных в изучаемых группах: а) SSCP-анализ: дорожки D, E, F– варианты подвижности цепей ДНК;
б) ПДРФ-анализ (рестриктаза Bsc4I);
в) фрагмент сиквенса образцов ДНК – вариантов подвижности Е и D SSCP- и ПДРФ-анализ экзона 4 гена SFTPB выявил наличие замены цитозина (С) на тимин (Т) в положении 1580 гена, встречающейся во всех группах (рис. 2).
Оба полиморфизма были ранее описаны в литературе [Lin Z. et al., 2000].
SSCP А А В А С ПДРФ ТТ ТТ СС ТТ СТ SSCP В С А В С Рис.2. Поиск изменений последовательности ДНК экзона 4-гена SFTPB у новорожденных в изучаемых группах: а) SSCP-анализ: дорожки A, B, C варианты подвижности цепей ДНК;
б) ПДРФ-анализ (рестриктаза Bst4CI) Идентификация SSCP-полиморфизма промоторной области и экзона 4 гена SFTPB позволила провести анализ частот генотипов и аллелей по данным локусам в группах сравнения.
Сравнение групп больных с ДР, РДС и ВП с контролем по частотам аллелей и генотипов полиморфных локусов -18AC и 1580СТ гена SFTPB, а также 32СТ гена SFTPD существенных различий не выявило.
Отмечена тенденция повышения частоты гетерозиготного генотипа СТ полиморфного локуса 1580СТ гена SFTPB в подгруппе РДС+ВП (59.57% против 37.50% у больных РДС без ВП) (р=0.087). При этом генотип СС чаще встречался у детей с РДС без ВП – 33.33% против 19.15% в подгруппе РДС+ВП (р=0.24) (рис.3).
59, 37, 33, 40 29, 30 19,15 21, СС СТ ТТ РДС – ВП РДС + ВП Рис. 3. Частоты генотипов полиморфного локуса 1580СТ гена SFTPB у больных с разным течением РДС Анализ VNTR-локуса интрона 4 гена SFTPB показал, что гетерозиготные по делециям генотипы Inv/Del достоверно реже встречались у больных с ДР (0.93%) (р=0.011) и в группе с РДС (0%) (р=0.0089), по сравнению с контролем (8.65%). По-видимому, они являются маркерами устойчивости к развитию РДС (OR=0.099, 95%CI 0.0050-0.78) и ДР в целом (OR=0.071, 95%CI 0.004-0. соответственно) (рис. 4).
DelDel 04 1, 0, 0, 11 2, InvDel 8, 7, 7, 8, 0, InsIns 4,,, InvIns,, 75 InvInv РД В К бо П он ль С тр н ы ол е ь Д Р Рис. 4. Распределение генотипов полиморфного VNTR-локуса гена SFTPB в анализируемых группах больных с ДР и в контроле Большинство носителей делеционных аллелей в контроле (8.65%) оказалось гетерозиготами, с размером одного из ПЦР-фрагментов около 330 п.н. (Inv/330).
В группе РДС этот аллель не встречался (0%). Таким образом, именно генотип Inv/330 обуславливает достоверную разницу в распределении генотипов между группой РДС и контролем (р=0.042;
OR=0.091, 95%CI 0.0048-0.67). Почти двукратное увеличение частоты гетерозиготных по инсерциям генотипов у больных с ДР по сравнению контролем оказалось недостоверным.
Поскольку три описанных выше полиморфных локуса находятся в одном гене, мы провели анализ гаплотипов по локусам: SFTPB:-18АС, SFTPB:1580СТ, SFTPB:VNTR. Инсерционные аллели VNTR локуса интрона гена SFTPB суммировались, также как делеционные, и образовали группы аллелей Ins и Del.
Распределение частот гаплотипов в группе больных с ДР значительно отличалось от такового в контроле (=17.99, р0.001) (табл. 1). По данному параметру достоверные отличия обнаружены также между группой РДС и контролем (=18.65, р0.001). При этом в группе РДС была существенно повышена частота гаплотипа А-С-Inv (29.85% против 18.69% в контроле) (=4.98, р=0.026) и, напротив, снижена частота гаплотипа А-Т-Inv (26.12% против 39.39% соответственно) (=5.27, р=0.017).
Таблица Распределение частот гаплотипов локусов 18АС, 1580СТ и VNTR экзона 4 гена SFTPB у больных с ДР, РДС и в контроле ДР РДС Контроль ni ni ni Гаплотипы р* pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp,CI % 208 134 N 0 0 0 0 - 0 A-C-Ins 1.44±0.83 1.49±1.05 0.51±0. 3 2 0.73 A-C-Del (0.30-4.16) (0.18-5.29) (0.01-2.78) 50 24.04±2.96 40 29.85±3.95 18.69±2. 0.026 A-C-Inv (18.40-30.43) (22.26-38.36) (13.51-24.83) 1.92±0.95 1.49±1.05 2.02±1. 4 2 0.95 A-T-Ins (0.53-4.85) (0.18-5.29) (0.55-5.09) 2.53±1. 0 0 0 0 0.163 A-T-Del (0.82-5.79) 30.77±3.20 35 26.12±3.79 39.39±3. 64 0.017 A-T-Inv (24.57-37.52) (18.92-34.41) (32.54-46.57) 1.52±0. 0 0 0 0 0.40 C-C-Ins (0.31-4.36) 0.51±0. 0 0 0 0 0.84 C-C-Del (0.01-2.78) 22.60±2.90 26 19.40±3.42 17.17±2. 47 0.71 C-C-Inv (17.10-28.89) (13.08-27.12) (12.19-23.16) 1.44±0.83 1.49±1. 3 2 0.32 0 C-T-Ins (0.30-4.16) (0.18-5.29) 0 0 0 0 - 0 C-T-Del 17.79±2.65 20.15±3.47 17.68±2. 37 27 0.67 C-T-Inv (12.84-23.68) (13.72-27.95) (12.63-23.72) Примечание: здесь и далее * - различия с контролем, серым цветом выделены достоверные различия при р0.05.
Основываясь на полученных данных, можно заключить, что гаплотип А-С-Inv является маркером предрасположенности к развитию РДС (OR=1.85, 95%CI 1.07-3.12). В то же время гаплотип А-Т-Inv является маркером устойчивости к развитию РДС (OR=0.54, 95%CI 0.32-0.90). Вероятно, наибольшее значение для формирования РДС имеет присутствие того или иного аллеля локуса 1580СТ гена SFTPB, связанного с заменой 131ThrIle в пропротеине SP-B, но только в сочетании с более распространенными аллелями 5'-области и интрона 4, участвующими в определении транскрипционной активности гена и процессе сплайсинга мРНК.
ПДРФ-анализ экзона 4 гена SFTPC не выявил ни одного случая замены 128TA ни среди больных, ни в контрольной группе.
В ходе сравнительного анализа распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера 32СТ гена SFTPD выявлены достоверные отличия между подгруппами новорожденных с РДС (=9.329, р=0.0090) (рис.5).
70 60,87 60 52, 47, 30 21, 17, CC CT TT C T РДС – ВП РДС + ВП Рис. 5. Распределение генотипов и аллелей полиморфного локуса 32CT гена SFTPD в подгруппах больных РДС Генотип СС не встречался в подгруппе РДС+ВП, тогда как у больных РДС его частота составила 17.39% (р=0.011). Мы полагаем, что генотип СС является маркером устойчивости к развитию инфекционных осложнений РДС, поскольку снижает их риск почти в 17 раз (OR=0.048, 95% CI 0.0026-0.39). В то же время, генотип ТТ оказался более частым в подгруппе РДС+ВП (40.0% против 21.74% при РДС без ВП), но различия оказались достоверны (р=0.18).
Сопоставление выборок новорожденных с ДР и контроля в ходе изучения полиморфного локуса 478AG гена SFTPD продемонстрировало лишь тенденцию к увеличению доли аллеля G среди больных (58.88% против 50.00%).
При гаплотипическом анализе полиморфных локусов 32CT и 478AG, расположенных в одном гене SFTPD, выяснилось, что указанные локусы сцеплены между собой только в группе здоровых индивидов, и пары аллелей T + A и C + G встречаются значительно чаще (=28.28, р0.001).
Показано также, что доля гаплотипа Т-G гена SFTPD существенно увеличена в группе больных с ДР по сравнению с контролем (=5.50, р=0.019), в то время как доли гаплотипов Т-А и С-А незначительно уменьшены (табл. 2).
Сходное распределение частот гаплотипов наблюдалось в группах с РДС и ВП, однако различия с контролем по частоте гаплотипа Т-G сохранили значимость лишь в группе с ВП (=4.80, р=0.028). Кроме того, гаплотип Т-G почти в 2 раза чаще встречался в подгруппе РДС+ВП (32.74% против 16.47% у больных РДС без пневмонии), а С-G – в 1.5 раза реже (26.15% против 42.22% соответственно).
По-видимому, гаплотип Т-G является маркером предрасположенности к развитию ДР (OR=1.77, 95%CI 1.09-2.86), особенно связанных с ВП (OR=2.06, 95%CI 1.07-3.9) (табл. 2). Наши результаты согласуются с данными литературы о важной роли SP-D в реализации защитных механизмов врожденного иммунитета в легких [Crouch E.C., 2000].
Таким образом, в нашем исследовании не только подтверждена связь гена SFTPB с развитием РДС, но и показана ассоциация разных аллельных и гаплотипических вариантов гена SFTPD с развитием ВП, в том числе у новорожденных с РДС.
Таблица Распределение частот гаплотипов локусов 32CT и 478AG гена SFTPD у новорожденных с ДР и в контроле Гапло Больные с ВП РДС РДС без ВП РДС+ВП Контроль типы ДР pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp,CI % 206 70 136 46 90 N 5.83±1.63 5.71±2.77 5.15±1.89 6.52±3.64 4.44±2.17 8.17±1. C - A (3.05-9.95) (1.58-13.99) (2.09-10.32) (1.37-17.90) (1.22-10.99) (4.83-12.76) 29.61±3.18 27.14±5.32 31.62±3.99 41.30±7.26 26.67±4.66 30.77±3. C - G (23.47-36.35) (17.20-39.10) (23.92-40.14) (27.00-56.77) (17.89-37.03) (24.57-37.52) 34.95±3.32 34.29±5.67 36.03±4.12 34.78±7.02 36.67±5.08 41.83±3. T - A (28.46-41.89) (23.35-46.60) (27.98-44.70) (21.35-50.25) (26.75-47.49) (35.04-48.85) 29.61±3.18 32.86±5.61 27.21±3.82 17.39±5.59 32.22±4.93 19.23±2. T - G (23.47-36.35) (22.09-45.12) (19.93-35.50) (7.82-31.42) (22.75-42.90) (14.11-25.25) Анализ полиморфизма генов цитокинов Исследования разных авторов свидетельствуют о многообразном влиянии медиаторов воспаления и компонентов сурфактанта легких друг на друга.
[Gardai S. et al., 2003;
Ikegami M. et al., 2005]. Показано, что ранний воспалительный ответ, включающий активацию нейтрофилов, тканевых макрофагов и цитокинов, играет важную роль в патогенезе РДС, а также других хронических и острых заболеваний легких у детей [Ozdemir A. et al., 1997;
Sarafidis K. et al., 2001;
Nupponen I. et al., 2002].
В нашем исследовании изучено 8 полиморфных маркеров генов цитокинов (TNF, LTA, IL1B, IL1RN, IL6, IL8, IL10).
Достоверных различий в распределении генотипов и аллелей полиморфных локусов генов TNF (-308GA), LTA (252AG), IL1B (-511CT), IL1B (3953CТ), IL1RN (VNTR), IL6 (-174GC), IL8 (-251ТA), IL10 (-627СA) между группами новорожденных с ДР и контролем не обнаружено.
При сопоставлении двух подгрупп новорожденных с разными формами РДС по частотам генотипов полиморфного локуса -308GA гена TNF гомозиготный генотип АА не встретился ни разу в подгруппе РДС+ВП (0%), в отличие от подгруппы РДС без ВП (12.5%) (р=0.035) (табл. 3). Следовательно, этот генотип является маркером устойчивости к развитию инфекционных осложнений РДС (OR=0.06, 95%CI 0.0033-0.55). Генотип АА не встречался и среди больных с ВП.
В ходе сравнительного анализа подгрупп с разным течением РДС показаны значительные отличия в распределении частот генотипов полиморфного локуса -511CT гена IL1B (=7.01, р=0.03) (табл.3). Однако, наблюдалась лишь тенденция увеличения доли гетерозиготного генотипа СТ в подгруппе РДС+ВП (51.06% против 26.09% при РДС без ВП) (р=0.071) и уменьшения доли генотипа ТТ (6.38% против 26.09% соответственно) (р=0.050).
Проанализировав распределение частот аллелей и генотипов VNTR-локуса гена IL1RN в подгруппах новорожденных с РДС, выявлены существенные различия в распределении аллелей и генотипов (=11.062, р=0.014) (табл.3).
Это обусловлено достоверным снижением частоты аллеля *А2 в подгруппе РДС+ВП (18.09%), по сравнению с подгруппой РДС без ВП (37.50%) (р=0.014) и существенным повышением частоты аллеля *А1 (56.25 против 80.85% соответственно) (р=0.0028) и генотипа А1А1 в подгруппе РДС+ВП (р=0.023).
Таблица Распределение частот аллелей и генотипов генов цитокинов у больных РДС в зависимости от наличия инфекционного осложнения заболевания РДС без ВП РДС + ВП Генотипы (N=24) (N=47) р и аллели ni pi±sp,CI % ni pi±sp,CI % 70.83±9.28 74.47±6. 17 35 0. GG (48.91-87.38) (59.65-86.06) -308GA TNF 16.67±7.61 25.53±6. 4 12 0. GA (4.74-37.38) (13.94-40.35) 12.50±6. 3 0 0 0. AA (2.66-32.36) 47.83±10.42 42.55±7. 11 20 0. CC (26.82-69.41) (28.26-57.82) -511CT 26.09±9.16 51.06±7. IL1B 6 24 0. CT (10.23-48.41) (36.06-65.92) 26.09±9.16 6.38±3. 6 3 0. TT (10.23-48.41) (1.34-17.54) 33.33±9.62 63.83±7. 8 30 0. A1A1 (15.63-55.32) (48.52-77.33) 45.83±10.17 31.91±6. 11 (25.55-67.18) 15 0. A1A2 (19.09-47.12) 2.13±2. 0 0 1 0. A1A VNTR 86 п.о. IL1RN (0.05-11.29) 12.50±6.75 2.13±2. 3 1 0. A2A (2.66-32.36) (0.05-11.29) 4.17±4. 1 0 0 0. A2A (0.11-21.12) 4.17±4. 1 0 0 0. A3A (0.11-21.12) 56.25±7.16 80.85±4. 27 (41.18-70.52) 76 0. *A1 (71.44-88.24) 37.50±6.99 18.09±3. 18 17 0. *A2 (23.95-52.65) (10.90-27.37) 6.25±3.49 1.06±1. 3 1 0. *A3 (1.31-17.20) (0.03-5.79) Установлено, что маркером предрасположенности к развитию инфекционных осложнений у больных РДС является аллельный вариант *А гена IL1RN (OR=3.28, 95%CI 1.43-7.61) и генотип А1А1 (OR=3.53, 95%CI 1.12 11.41), а аллель *А2 является маркером устойчивости (OR=0.37, 95%CI 0.16 0.87).
Поскольку гены TNF и LTA сцеплены, располагаются на коротком плече хромосомы 6, мы провели анализ гаплотипов TNF:-308GA, LTA:252AG у больных с ДР, РДС и в контроле. В группе больных с ДР и в контроле отмечено неравновесие по сцеплению указанных генов (р0.001). Выявлена тенденция к уменьшению частоты гаплотипа А-А в подгруппе с РДС+ВП (=3.36, р=0.067).
Следовательно, гаплотип А-А является маркером устойчивости к развитию ВП у больных РДС новорожденных (OR=0.069, 95%CI 0.0035-0.57) (табл. 4).
Таблица Частоты гаплотипов локусов -308GA гена TNF, 252AG гена LTA у новорожденных с ДР и в контроле Гапло Больные с ВП РДС РДС без ВП РДС + ВП Контроль типы ДР pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp,CI % 216 74 142 48 94 N 72.69±3.03 77.03±4.89 70.42±3.83 68.75±6.69 71.28±4.67 69.42±3. G-A (66.23-78.51) (65.79-86.01) (62.19-77.78) (53.75-81.34) (61.02-80.14) (62.64-75.63) 13.43±2.32 10.81±3.61 14.08±2.92 10.42±4.41 15.96±3.78 16.99±2. G-G (9.18-18.71) (4.78-20.20) (8.82-20.91) (3.47-22.66) (9.22-24.95) (12.13-22.83) 1.39±0.80 2.11±1.21 6.25±3.49 1.94±0. 0 A -A (0.29-4.01) (0.44-6.05) (1.31-17.20) (0.53-4.90) 12.50±2.25 12.16±3.80 13.38±2.86 14.58±5.09 12.77±3.44 11.65±2. A -G (8.40-17.66) (5.71-21.84) (8.25-20.10) (6.07-27.76) (6.77-21.24) (7.61-16.84) По данным литературы аллель -308А гена TNF и аллель 252G гена LTA ассоциированы с повышенной экспрессией генов в разных клетках [Messer G.
et al., 1991;
Hajeer A.H., Hutchinson I.V., 2001]. Протективная роль гаплотипа А-А в нашем исследовании, возможно, связана с относительно высокой продукцией TNF при низком уровне LTA при его наличии, что обеспечивало адекватную острую защитную реакцию организма новорожденного от инфекции, и умеренное повреждающее действие на сурфактант в условиях его первичной недостаточности.
Так как семейство IL-1 кодируется генами, расположенными в непосредственной близости друг от друга, целесообразным представлялось проведение анализа гаплотипов по трем локусам IL1B:-511CT, IL1B:3953CТ, IL1RN:VNTR. Показано, что только в контрольной группе данные локусы находились в неравновесии по сцеплению (р0.001).
Распределение частот гаплотипов в группе больных с ДР и в контроле существенно различалось (=18.68, р0.001). Однако, статистически значимые различия с контролем обнаружены лишь в группе больных с РДС, где доля гаплотипа T-Т-*A2 повышена (р=0.0098), и снижена доля гаплотипа T-Т-*A (р=0.0070) (табл.5). Мы полагаем, что аллель *А2 гена IL1RN является маркером предрасположенности к возникновению РДС, но только в сочетании с двумя аллелями Т локусов -511CT и 3953CТ гена IL1B (OR=17.13, 95% CI 2.28-361.60). Напротив, аллель *А1 гена IL1RN в сочетании с теми же аллелями гена IL1B ассоциирован со сниженным риском развития РДС и является маркером устойчивости (OR=0.068, 95% CI 0.038-0.47).
Таблица Распределение частот гаплотипов локусов IL1B:-511CT, IL1B:3953CТ, IL1RN:*A1*A2 у новорожденных с ДР, РДС и контроле ДР РДС Контроль Гаплотипы р* р* pi±sp,CI % pi±sp,CI % pi±sp, CI % 204 132 N 37.75±3.39 39.39±4.25 47.47±3. C-C-*A1 0.061 0. (31.07-44.78) (31.01-48.27) (40.35-54.68) 5.88±1.65 5.30±1.95 2.02±1. C-C-*A2 0.085 0. (3.08-10.05) (2.16-10.62) (0.55-5.09) 16.67±2.61 16.67±3.24 12.63±2. C-T-*A1 0.32 0. (11.83-22.50) (10.75-24.14) (8.34-18.07) 3.92±1.36 3.79±1.66 3.03±1. C-T-*A2 0.83 0. (1.71-7.58) (1.24-8.62) (1.12-6.48) 21.08±2.86 20.45±3.51 14.65±2. T-C-*A1 0.12 0. (15.69-27.32) (13.93-28.35) (10.03-20.35) 11.27±2.21 10.61±2.68 15.15±2. T-C-*A2 0.31 0. (7.28-16.44) (5.92-17.15) (10.46-20.92) 1.47±0.84 5.05±1. T-T-*A1 0.081 0 0. (0.30-4.24) (2.45-9.09) 1.96±0.97 3.79±1. T-T-*A2 0.14 0.022 (0.54-4.94) (1.24-8.62) В ходе попарного сравнения частот гаплотипов в подгруппах РДС показано отсутствие гаплотипа С-T-А2 (=8.77, р=0.004) в подгруппе с РДС+ВП (0% против 12.5% при РДС без ВП). Следовательно, гаплотип С-T-*А2 является маркером устойчивости к развитию инфекционных осложнений у больных РДС (OR=0.035, 95% CI 0.0021-0.27).
Накоплены противоречивые сведения о связи различных аллельных вариантов генов семейства IL1 с уровнями кодируемых белков в плазме и изменениями продукции отдельными клетками. Показана ассоциация разных аллелей и гаплотипов со многими заболеваниями человека или тяжестью их течения [Dinarello C., Wolff S., 1993;
Arend W.P., Guthridge C.J., 2000]. Все они свидетельствуют, в целом, о важном значении, баланса про- и противовоспалительных цитокинов (IL1, IL1 и IL1Rа) в развитии или прогрессировании того или иного заболевания.
В результате сравнения информации о частотах аллелей и генотипов полиморфного локуса -174GC гена IL6 нами отмечено несущественное повышение частоты генотипа СС в группе больных с ВП (22.22%), по сравнению с контролем (9.62%) (р=0.079). Генотип GC встречался значительно реже в этой группе больных (27.78% против 48.08% в контроле, р=0.049), однако риск развития пневмонии у носителей генотипа GC оказался несущественно снижен (OR=0.42, 95%CI 0.17-1.01).
Анализ полиморфного локуса -627СA гена IL10 показал, что аллель А достоверно чаще встречается в подгруппе РДС+ВП (38.30%), чем у больных РДС без ВП (20.83%) (р=0.039). Несмотря на это, отмечалась только тенденция повышения риска развития инфекционных осложнений у больных РДС новорожденных при наличии аллеля А (OR=2.36, 95% CI 0.98-5.77). (рис. 6).
79, 70 61, 58, 40,43 41,67 42, 38, 30 20, 17, 10 СС СА АА С А РДС – ВП РДС + ВП Рис.6. Распределение частот аллелей и генотипов локуса -627СA гена IL10 в подгруппах разного течения РДС Поскольку известно, что аллель А полиморфизма – 627СA гена IL ассоциирует с резким снижением уровня экспрессии гена [Grove G. et al., 2000], мы не исключаем возможности ассоциации данного аллеля с развитием пневмонии в легком больного РДС ребенка, так как снижение уровня противовоспалительных цитокинов, приводит к усилению провоспалительных реакций.
Резюмируя вышеизложенные результаты, можно заключить, что генетические варианты цитокинов могут занимать определенную место не только в структуре механизмов определения фенотипических вариантов РДС у новорожденных, но и играть важную роль в формировании предрасположенности к развитию РДС и ВП. Согласно современным данным, воспалительные реакции в легких, во многом опосредованные цитокинами, могут быть как причиной, так и следствием повреждения альвеолярного сурфактанта и способствуют повреждению эпителиального слоя и эндотелия сосудов легких. Указанные механизмы принимают участие в процессах формирования признаков как РДС, так и ВП.
Анализ полиморфизма гена ангиотензин-превращающего фермента ACE является ключевым звеном в поддержании равновесия между факторами вазоконстрикции и вазодилатации. Во время внутриутробного развития и в перинатальном периоде система ренин-ангиотензин находится в состоянии гиперактивности и служит поддержанию сердечно-сосудистого гомеостаза в условиях начинающегося легочного кровообращения [Hattory M.A. et al., 2000].
Группа больных с ДР достоверно отличалась от контрольной группы по распределению генотипов инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ (=8.95, p=0.011) за счет снижения частоты генотипа II у новорожденных с ДР (17.76% против 35.92% соответственно;
=7.95, p=0.0057) (рис. 7). Аллель D существенно преобладал в группе больных с ДР (53.27%) по сравнению с контролем (40.78%) (=6.08, р=0.014).
Таким образом, генотип II снижает риск возникновения дыхательных расстройств в 2 раза и может служить маркером устойчивости (OR=0.38, 95%CI 0.19-0.76). Аллель D гена АСЕ является маркером предрасположенности к развитию ДР у новорожденных (OR=1.65, 95%CI 1.10-2.48).
40, D 53, 59, I 46, 17, DD 24, 46, ID 57, 35, II 17, 0 10 20 30 40 50 Больные с ДР Контроль Рис. 7. Распределение частот аллелей и генотипов I/D локуса гена АСЕ среди больных с ДР и в контроле Ассоциированный с аллелем D повышенный уровень АСЕ может приводить к ухудшению адаптационных возможностей дыхательной системы только что рожденного ребенка, с одной стороны, и препятствовать адекватному снижению резистентности легочных сосудов – с другой, что приводит к развитию респираторных нарушений. Это, возможно, объясняет выявленную ассоциацию гена АСЕ с РДС и ВП новорожденных.
Таким образом, наличие определенных генотипов и гаплотипических вариантов по полиморфным локусам генов белков сурфактантного комплекса легких, цитокинов и ренин-ангиотензиновой системы может оказать существенное влияние на формирование предрасположенности к дыхательным расстройствам (РДС и ВП) и инфекционным осложнениям РДС.
Полученные результаты раскрывают некоторые аспекты генетики дыхательных расстройств у новорожденных и свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения полиморфизма генов, вовлеченных в патогенез заболевания.
ВЫВОДЫ 1. Установлено, что генетическими маркерами предрасположенности новорожденных к дыхательным расстройствам являются гаплотип 32Т/478G гена SFTPD (OR=1.77), аллель D полиморфного локуса гена ACE (OR=1.65).
Маркерами устойчивости к развитию дыхательных расстройств являются генотип Inv/Del минисателлитного локуса гена SFTPB (OR=0.099) и генотип II инсерционно-делеционного полиморфизма гена ACE (OR=0.38).
2. Предрасположенность к развитию респираторного дистресс-синдрома маркируют гаплотипы -18А/1580С/VNTR:Inv гена SFTPB (OR=1.85) и -511Т/3953Т/VNTR:*A2 генов IL1B и IL1RN (OR=17.13). Маркерами устойчивости к развитию респираторного дистресс-синдрома являются генотип Inv/330 минисателлитного локуса гена SFTPB (OR=0.042), а также гаплотипы -18А/1580T/VNTR:Inv гена SFTPB (OR=0.54) и -511Т/3953Т/VNTR:*A1 генов IL1B и IL1RN (OR=0.068).
3. Установлено, что маркером предрасположенности к развитию врожденной пневмонии является гаплотип 32Т/478G гена SFTPD (OR=2.06).
4. Предрасположенность к инфекционным осложнениям респираторного дистресс-синдрома маркируют аллель *А1 (OR=3.38) и генотип А1А минисателлитного локуса гена IL1RN (OR=3.53) и аллель А локуса -627СА гена IL10 (OR=2.36). Маркерами устойчивости к возникновению инфекционных осложнений респираторного дистресс-синдрома являются генотипы СС локуса 32ТС гена SFTPD (OR=0.048), АА локуса -308GA гена TNF (OR=0.06), а также гаплотипы -308A/252A генов TNF и LTA (OR=0.069) и -511С/3953Т/VNTR:*A2 генов IL1B и IL1RN (OR=0.035) и аллель *А минисателлитного локуса гена IL1RN (OR=0.37).
5. Установлено, что полиморфные варианты генов протеинов сурфактанта-В SFTPB и -D SFTPD, фактора некроза опухоли TNF, интерлейкина 1 IL1B, рецепторного антагониста интерлейкина 1 IL1RN, интерлейкина 10 IL10 являются важными генетическими компонентами мультифакторной структуры респираторного дистресс-синдрома и врожденной пневмонии новорожденных.
Практические рекомендации. При обнаружении генетических маркеров риска полиморфных локусов генов белков сурфактанта (SFTPB, SFTPD), цитокинов (TNF, IL1B, IL1RN, IL10) и ангиотензин-превращающего фермента АСЕ можно прогнозировать развитие дыхательных расстройств и инфекционных осложнений респираторного дистресс-синдрома у новорожденных.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ 1. Корытина Г.Ф., Янбаева Д. Г., Ахмадишина Л.З., Данилко К.В., Викторова Т.В. Полиморфизм генов про- и противовоспалительных цитокинов у больных хроническими заболеваниями дыхательной системы // Материалы V Съезда Российского общества медицинских генетиков. Медицинская генетика.
Т. 4. №5. 2005. С.210.
2. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Викторова Т.В., Викторов В.В. Поиск генов-кандидатов дыхательных расстройств новорожденных // Материалы V Съезда Российского общества медицинских генетиков. Медицинская генетика. Т. 4. №4.2005. С.177.
3. Корытина Г.Ф., Янбаева Д. Г., Ахмадишина Л.З., Данилко К.В., Викторова Т.В. Ассоциация полиморфизмов генов про- и противовоспалительных цитокинов (TNFA, LTA, IL1B, IL8, IL6, IL1RN, IL10) с развитием хронических заболеваний дыхательной системы // Материалы IХ Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». Медицинская Иммунология. 2005. Т.7. №2-3. С.305.
4. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Викторова Т.В., Викторов В.В. Роль полиморфизма генов интерлейкинов 8 и 10 в развитии синдрома дыхательных расстройств и новорожденных // Материалы IХ Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». Медицинская Иммунология. 2005. Т.7. №2-3. С.183-184.
5. Корытина Г.Ф., Янбаева Д.Г., Ахмадишина Л.З., Данилко К.В., Викторова Т.В. Полиморфизмов генов цитокинов и риск развития хронических бронхолегочных заболеваний у детей // Всероссийский научный симпозиум с международным участием «Цитокины. Стволовая клетка. Иммунитет», Новосибирск. Цитокины и воспаление. 2005. Спец. вып. 1. С.27.
6. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Викторова Т.В., ВикторовВ.В. Полиморфизм 4 интрона гена протеина В сурфактанта у новорожденных с дыхательными расстройствами // 15 национальный конгресс по болезням органов дыхания, Москва. Пульмонология. 2005. Спец. вып. 1.
С.18.
7. Фатыхова А.И., Богданова Р.З., Викторов В.В., Викторова Т.В., Данилко К.В. Роль генов-цитокинов (TNFA, LTA, IL1B, IL1-RN, IL10) в развитии респираторного дистресс-синдрома новорожденных // Материалы III Российского конгресса "Педиатрическая анестезиология и интенсивная терапия". Москва. 2005. С.262-263.
8. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Викторова Т.В., Викторов В.В. Легочные нарушения у новорожденных и полиморфизм интрона 4 гена протеина В сурфактанта // Материалы Международной конференции «Генетика в России и мире», посвященной 40-летию Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН. Москва. 2006. С.58.
9. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Ахмадишина Л.З., Викторова Т.В., Викторов В.В. Генетические варианты интерлейкинов 6,1 и рецепторного антагониста интерлейкина 1: ассоциация с дыхательными расстройствами у новорожденных // Материалы Х Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». Медицинская Иммунология. 2006. Т.8. №2 3. С.309.
10. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Корытина Г.Ф.Викторова Т.В., Викторов В.В.Генетические варианты АСЕ: ассоциация с дыхательными расстройствами у новорожденных // 16 национальный конгресс по болезням органов дыхания, Санкт-Петербург. Пульмонология. 2006. Спец.
вып. 1. С.177.
11. Данилко К.В., Корытина Г.Ф., Ахмадишина Л.З., Янбаева Д.Г., Загидуллин Ш.З., Викторова Т. В. Ассоциация полиморфных маркеров генов цитокинов с развитием хронической обструктивной болезни легких // Молекулярная биология. 2007. Т. 41. №.1. С.26-36.
12. Фатыхова А.И., Богданова Р.З., Данилко К.В., Викторов В.В., Идрисова А.Ф. Прогнозирование и диагностика синдрома дыхательных расстройств у новорожденных // Харисова И.М., Мурзабаева С.Ш., Викторов В.В. и др. Актуальные проблемы перинатологии и неонатологии/ Международный опыт: Материалы школы-семинара по неонатологии. – Уфа:
Издательство «Здравоохранение Башкортостана». 2006. С.192-193.
13. Korytina G.F., Yanbaeva D.G, Akhmadishina L.Z., Danilko K.V., Victorova T.V. Polymorphisms in promotor region of IL10 gene and susceptibility to chronic airway inflammation at children with severe chronic bronchitis // The XIXth international congress of allergology and clinical immunology (ICACI). Munich, Germany. (2005).
14. Korytina G.F., Yanbaeva D.G, Akhmadishina L.Z., Danilko K.V., Zagidullin Sh.Z., Victorova T.V. Genetic polymorphisms in IL10 gene and susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease and severe chronic lung disease in children // 3rd Lung Science Conference. Taormina. Italy. (2005).
15. Danilko K.V., Bogdanova R.Z., Fatyihova A.I., Victorova T.V., Viсtorov V.V. The role of ACE insertion/deletion polymorphism in RDS development in neonates from Russia (Роль инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ в развитии РДС у новорожденных из России) // European Respiratory Society 15 th annual congress, Copenhagen // European Respiratory Journal. 2005. Vol.26.
Supl.49. P.393.
16. Danilko K., Victorova T., Bogdanova R., Fatyihova A., Viсtorov B.
Interleukin-1 and its receptor antagonist gene polymorphism and the risk of respiratory distress syndrome in neonates from Russia // European Human Genetics Conference, Prague, Czech Republic. European Journal of Human Genetics. 2005.
Vol.13. Supl.1. Р.117.
17. Danilko K.V., Bogdanova R.Z., Victorova T.V., Fatyihova A.I., Viсtorov V.V. Surfactant protein B polymorphism in infants with lung failure from Russia. // European Human Genetics Conference, Amsterdam // European Journal of Human Genetics. 2006. Vol.14. Supl.1. Р.158.
18. Danilko K.V., Yanbaeva D.G., Bogdanova R.Z., Fatyihova A.I., Victorova T.V. The risk of respiratory distress syndrome (RDS) in neonates from Russia and IL-1 genotyping // European Respiratory Society 16-th annual congress, Munich // European Respiratory Journal. 2006. Vol. 28. Sup.50. P.492-493.
19. Danilko K.V., Bogdanova R.Z., Fatyihova A.I., Victorova T.V., Victorov V.V. Angiotensin сonverting enzyme insertion/deletion polymorphism is associated with congenital pneumonia susceptibility // Chest. 2006. Vol.130 (4). Sup.1. P.140 141.
ДАНИЛКО КСЕНИЯ ВЛАДИМИРОВНА РОЛЬ ГЕНОВ БЕЛКОВ СУРФАКТАНТА, ЦИТОКИНОВОЙ СЕТИ И РЕНИН-АНГИОТЕНЗИНОВОЙ СИСТЕМЫ В ФОРМИРОВАНИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ РАССТРОЙСТВ У НОВОРОЖДЕННЫХ Специальность 03.00.15 – генетика Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук