Особенности процессов свободно-радикального окисления в воспалительном очаге и внутренних органах при апикальном периодонтите
На правах рукописи
Осьмуха Ульяна Геннадьевна
ОСОБЕННОСТИ ПРОЦЕССОВ СВОБОДНО-РАДИКАЛЬНОГО
ОКИСЛЕНИЯ В ВОСПАЛИТЕЛЬНОМ ОЧАГЕ И ВНУТРЕННИХ
ОРГАНАХ ПРИ АПИКАЛЬНОМ ПЕРИОДОНТИТЕ
03.01.04 – биохимия
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Тюмень - 2012
1
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Доктор биологических наук, профессор Научные руководители:
Цейликман Вадим Эдуардович Доктор медицинских наук, профессор
Официальные оппоненты:
Вавилова Татьяна Павловна Доктор медицинских наук, профессор Галян Сергей Леонидович
Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И.
Пирогова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Защита состоится 02 марта 2012 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 208.101.02 при ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (625023 г. Тюмень, ул. Одесская, 54).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тюменской государственной медицинской академии Автореферат разослан « » 2012 г.
Ученый секретарь диссертационного совета Орлов С.А.
Актуальность На сегодняшний день заболевания периодонта занимают третье место по частоте обращаемости после кариеса и пульпита (Кузьмина Э.М., 1999;
Максимовский Ю.М., 2002). Острые и хронические очаги инфекции в периапикальных тканях являются наиболее частой причиной потери функционально значимых зубов у людей молодого и среднего возраста (Максимовский Ю.М., 2002;
Боровксий Е.В., 2004). Верхушечные периодонтиты не только осложняются другими, более тяжелыми заболеваниями челюстно-лицевой области (Шаргородский А.Г., 2002;
Агопова В.С., 2004;
Максимовский Ю.М., 2002;
Боровский Е.В., 2004;
Кулаков А.А., 2010), но также могут быть источником интоксикации и сенсибилизации организма с поражением внутренних органов, способствовать прогрессированию патологических процессов в сердце, почках и.т.д. (Тёмкин Э.С., 1997;
Гречишников В.И., 1999;
Митронин А.В., 2004;
Полякова Е.Е., 2004). Поэтому разработка патогенетически обоснованной терапии апикального периодонтита является одной из наиболее актуальных задач современной стоматологии. К сожалению, до сих пор не уделяется должное внимание значению свободно-радикального окисления (СРО) в патогенезе апикального периодонтита. Между тем, именно свободно-радикальное окисление имеет первостепенное значение в развитии вторичной альтерации (Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П., 1999;
Черешнев В.А. и соавт., 2010). Инициация перекисного окисления липидов (ПОЛ) вызывает деструкцию мембран клеток соединительной ткани, а окисление белков резорбцию коллагеновых волокон (Чурилов Л.П. и соавт., 2006).
Кроме того, активация ПОЛ имеет непосредственное отношение к развитию сосудистых нарушений, соответствующих в клинике прогрессирующему воспалению периодонта (Данилина Т.Ф. и соавт., 2006). В свою очередь, прогрессирование периодонтита способствует развитию осложнений системного характера. Не случайно периодонтит ассоциируется с ишемической болезнью сердца, сахарным диабетом, ревматоидным артритом - болезнями для которых характерен дисбаланс между проксидантными и антиоксидантными системами (Chunq H.Y., 2011).
Однако, даже на экспериментальных моделях периодонтита изучение свободно - радикального окисления ограничивается биологическими жидкостями, не затрагивая при этом непосредственно очаг и внутренние органы (Данилина Т.Ф. и соавт., 2006;
Синица В.В., 2003). По-прежнему остаются мало изученными локальные и системные особенности СРО при различных формах апикального периодонтита. К сожалению, не уделяется должного внимания вероятности разнонаправленных изменений между ПОЛ и окислением белков, а также отсутствуют данные по изменениям окисляемости липидов при воспалении периодонта, с помощью которых можно оценить наличие субстратов для переокисления. Решение обозначенных проблем позволило бы адекватно выбрать антиоксидантные препараты, и таким образом оптимизировать патогенетически обоснованную терапию периодонтита.
Цель исследования: определить соотношение между липопероксидацией и окислением белков воспалительном очаге и внутренних органах при апикальном периодонтите.
Задачи исследования 1. Изучить соотношение между липопероксидацией и окислительной модификацией белков в воспалительном очаге при экспериментальном апикальном периодонтите.
2. Изучить соотношение между липопероксидацией и окислением белков в плазме крови при экспериментальном апикальном периодонтите.
3. Изучить соотношение между липопероксидацией и окислением белков в органах системы крови при экспериментальном апикальном периодонтите.
4. Изучить соотношение между липопероксидацией и окислением белков в головном мозге, печени и почках при экспериментальном апикальном периодонтите.
5. Изучить соотношение между липопероксидацией и окислением белков в слюне больных с острым апикальным периодонтитом, с хроническим апикальным периодонтитом и периапикальным абсцессом.
Научная новизна Впервые на экспериментальной модели апикального периодонтита определено соотношение между интенсивностью липопероксидации и окислением белков в воспалительном очаге, крови и внутренних органах.
Установлено, что при экспериментальном периодонтите колонизация лейкоцитарными клетками воспалительного очага синхронизирована с увеличением в тканях периодонта содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов, увеличением окисляемости изопропанол - растворимых продуктов ПОЛ при одновременном снижении их базального уровня. Установлено, что у крыс апикальный периодонтит характеризуется снижением активности ферментов, генерирующих в качестве копродуктов активные формы кислорода - тромбоцитарной моноаминоксидазы – Б и ксантиноксидазы при одновременном увеличении активности антиоксидантного фермента каталазы в крови. Установлено, что при экспериментальном апикальном периодонтите активация свободно радикального окисления в воспалительном очаге преимущественно проявляется в усилении переокисления фракций неполярных липидов, а во внутренних органах - в усилении окисления белков. Обнаружено, что при экспериментальном апикальном периодонтите одной из причин усиления окисления белков в сыворотке крови и во внутренних органах является снижение окисляемости липидов. Впервые установлено, что в костном мозге, в отличие от большинства исследованных органов, происходит снижение окисления белков, синхронизированное со снижением содержания нейтрофильных гранулоцитов. Впервые у пациентов с острым апикальным периодонтитом, а также с хроническим апикальным периодонтитом при обострении и вне обострения определено соотношение между продуктами ПОЛ в полярных и неполярных липидных фракциях, а также соотношение между липопероксидацией и окислением белков в слюне. Установлено, что у пациентов с острым апикальным периодонтитом наблюдается снижение содержания изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов при одновременном увеличении содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов, а также окислительно модифицированных (карбонилированных) белков в слюне. Установлено, что в слюне пациентов с хроническим периодонтитом снижается содержание изопропанол растворимых продуктов ПОЛ. Обнаружено увеличение содержания изопропанол-растворимых Шиффовых оснований в слюне при периапикальном абсцессе. Обнаружено, что хронический периодонтит характеризуется увеличением содержания карбонилированных белков в слюне, а периапикальный абсцесс (обострение хронического периодонтита) снижением их содержания.
Теоретическая и практическая значимость На основании результатов исследования обосновано представление о провоспалительных эффектах продуктов липопероксидация и окисления белков при апикальном периодонтите. Определены механизмы реципрокных отношений между липопероксидацией и окислением белков в воспалительном очаге и внутренних органах при экспериментальном периодонтите. Практическое значение определяется тем, что среди продуктов свободно-радикального окисления определены наиболее информативные для прогнозирования обострения хронического периодонтита, а также для разработки путей коррекции апикального периодонтита, предусматривающего использование антиоксидантных препаратов.
Положения, выносимые на защиту 1. В воспалительном очаге при апикальном периодонтите увеличение содержания продуктов липопероксидации и окислительной модификации белка ассоциируется с развитием лейкоцитарной инфильтрации.
2. Соотношение между уровнем липопероксидации и окислением белков в крови и внутренних органах (в головном мозге, печени, почках, селезёнке, костном мозге) при апикальном периодонтите имеет органо - специфический характер.
3. Соотношение между липопероксидацией и окислительной модификацией белков в слюне пациентов с апикальным периодонтитом специфично изменяется в зависимости от формы заболевания.
Апробация работы Основные положения работы изложены и представлены на Российской конференции, посвящённой 80-летию со дня рождения Р.И. Лифшица «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009), XIV Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина – человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2011).
Публикации По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 5 – в рецензируемых журналах по перечню ВАК Минобразования РФ.
Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, обсуждения результатов, выводов.
Библиографический указатель включает 262 источника: 89 – на русском языке и 173 – иностранных. Работа содержит 19 таблиц, 14 рисунков.
Материалы и методы Экспериментальное моделирование периодонтита Апикальный периодонтит экспериментально моделировался на симметричных зубах одной челюсти у 86 белых беспородных крыс обоего пола. Под ингаляционным (эфирным) наркозом проводили разрез слизистой оболочки десны в проекции верхушки корня первого коренного зуба, затем шаровидным бором №1 перфорировали костную стенку челюсти, тем самым создавали очаг травматического повреждения периапикальной зоны (Наибов О.В., 2009). Животные умерщвлялись под эфирным наркозом на 1,2,3,4,5,6, и 10 сутки от начала экспериментального воздействия.
Характеристика обследованного контингента пациентов На базе лечебно-хирургического отделения Стоматологической клиники Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования ГБОУ ВПО ЧелГМА Минздравсоцразвития России, г. Челябинск и терапевтического отделения Организации арендаторов «Стоматологическая поликлиника № 4» (ОА СП №4, г. Челябинск) за период с 2009 года по 2011 год проведено клинико лабораторное обследование 76 пациентов. Контрольную группу составили 16 клинически здоровых человек, сопоставимых по полу, возрасту, месту проживания, с санированной полостью рта, соответствующим критериям включения: мужской и женский пол;
возраст от 18 до 74 лет;
наличие не более одного очага одонтогенной инфекции, при стоматологически санированной ротовой полости, индекс зубного налета не более 1,5, индекс зубного камня не более 1,0 (критерии индекса Green — Vermillion);
отсутствие в полости рта ортопедических конструкций;
отсутствие острых и обострения хронических заболеваний полости рта и носоглотки в течении 3-х последних месяцев (респираторные инфекции, тонзиллиты, фарингиты, стоматиты, хейлиты, хронический генерализованный пародонтит);
отсутствие общих инфекционных, аллергических, аутоиммунных, психических болезней, злокачественных опухолей и заболеваний крови, эндокринной патологии, заболеваний системы крови, эндокринной патологии (сахарный диабет, аутоиммунный тиреоидит);
отсутствие декомпенсированной и/или некомпенсированной патологии сердечно - сосудистой системы, пищеварительной, бронхолегочной системы, гепатобилиарного и урогенитального тракта;
отсутствие вредных привычек: курения;
информированное согласие больного на проведение обследования.
Руководствуясь задачами исследования, пациенты были разделены на три группы, в зависимости от длительности и тяжести воспалительных явлений в периапикальных тканях причинного зуба.
В 1 группу, n=34 человека (45%) были включены больные с начальными формами («дебютом») апикального периодонтита. Это были пациенты с острым апикальным периодонтитом (К04.4) (МКБ-С, 1997).
2 группа, n=14 человек (18%) – пациенты с хроническим апикальным периодонтитом (К04.5) (МКБ-С, 1997) 3 группа, n=28 (37%) – больные с периапикальным абсцессом без свища – 25 пациентов (89%) и периапикальным абсцессом со свищом – человека (11%) (К04.7) (МКБ-С, 1997) (соответствует обострению хронических форм периодонтитов) (Шаргородский А.Г., 2002;
Митронин А.В. с соавт., 2005). Биохимические исследования проводили в нестимулированной смешанной слюне. Сбор слюны осуществляли до начала лечения, в течение 10 минут с предварительным полосканием полости рта водой (Теплова С.Н., Алексеев А.Д., 2002).
Биохимические методы исследования Содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали спектрофотометрически в липидном экстракте исследуемого материала по методике Волчегорского И.А. и др. (1989). Определение конечных продуктов перекисного окисления липидов и интенсивности аскорбат - индуцированного ПОЛ производилось спектрофотометрическим методом Львовской Е.И. с соавт. (1998). Содержание окислительно модифицированных (карбонилированных) белков определяли по методике Е.Е.Дубининой и соавт. (1995).
В крови определяли каталазную активность по методу М.А. Королюк и соавт. (1988) и ксантиноксидазную активность по методике Hashimoto. В тромбоцитах определяли активность моноаминооксидазы - Б с использованием в качестве субстрата бензиламина гидрохлорида (Волчегорский И.А. и соавт., 2000) Морфологические методы Этот раздел выполнен совместно со старшим преподавателем кафедры патологической анатомии Челябинской государственной медицинской академии к.м.н. О.Н.Егоровым. Гистологические препараты первого коренного зуба готовили по стандартным методикам (предварительно декальцинированные кусочки фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина с последующей проводкой через спирты, заключали в парафин, изготавливали серийные срезы 5-7 мкм, которые после депарафинирования окрашивали гематоксилином и эозином). В переапикальных тканях определяли абсолютное количества лейкоцитарных клеток (нейтрофилов, моноцитов/макрофагов, лимфоцитов) проводили на 1 мм2 среза. Объёмное содержание некоторых исследуемых объектов выполнено с применением планиметрического метода точечного счета (Автандилов Г.Г., 1980).
Гематологические методы Изучение периферической крови проводилось общепринятыми методами (Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П., 1992) и заключалось в подсчете эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева. Лейкоцитарную формулу изучали в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе (проводился подсчет не менее чем 200 клеток).
Статистический анализ результатов Результаты обрабатывались общепринятыми методами вариационной статистики (Лакин Г.Ф., 1990) и выражались в виде среднеарифметической (М) и её стандартной ошибки (m). Применялись критерии непараметрической статистики (Гублер Е.В., Генкин А.А 1969): Манна Уитни (U), Колмогорова-Смирнова () и Вальда-Вольфовица (WW).
Статистические взаимосвязи изучали при помощи непараметрического корреляционного анализа, выполняя расчёт коэффициентов корреляции рангов по Спирмену (rs) и Кенделлу (rk).
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Согласно данным гистологического анализа, в первые сутки после альтерации периапикальных тканей в них уже наблюдалось развитие лейкоцитарной инфильтрации. Это проявлялось в трёхкратном приросте количества моноцитов / макрофагов и пятикратном увеличении лимфоцитов в тканях периодонта по сравнению с контрольными животными. Также отмечается увеличение содержания нейтрофильных гранулоцитов. Со вторых по четвертые сутки развития процесса оставался повышенным уровень моноцитов. На пятые сутки содержание нейтрофилов и мононуклеарных клеток не отличалось статистически значимо от контрольного уровня, а с по 7 сутки содержание мононуклеарных клеток увеличилось на фоне повышенного уровня нейтрофилов (рисунок 1).
Развитию лейкоцитарного инфильтрата соответствовало двукратное увеличение содержания карбонилированных белков на фоне увеличения содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов, а также кетодиенов и сопряжённых триенов.
Рисунок Динамика лейкоцитарной инфильтрации и свободно-радикального окисления в очаге воспаления при экспериментальном периодонтите е.о.и.
Ед/мм 0, * * * 0, * * * * 0, 0, 0, 0 0, Контроль 1 2 3 4 5 6 7 Контроль 1 2 3 4 5 6 Нейтрофилы е.о.и.
Ед/мм Кетодиены и сопряженные триены (гептан) 14 0, * * * * * * 0, * * 0, 0, Контроль 1 2 3 4 5 6 Контроль 1 2 3 4 5 6 Моноциты / макрофаги Ед/мм мкМ/г Шиффовы основания (изопропанол) * * * 0, 60 * * * 0,3 * * 40 0, 0, 0, 0 0, Контроль 1 2 3 4 5 6 7 Контроль 1 2 3 4 5 6 Лимфоциты Окислительная модификация белка Примечание: * - статистически значимые отличия от показателей контрольной группы, Р0,05.
Обработка произведена с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.
При этом наблюдалось снижение содержания изопропанол растворимых диеновых конъюгатов, а также кетодиенов и сопряжённых триенов последующим переходом их во фракции неполярных липидов.
Кроме того, в гептановой фазе детектируются продукты переокисления эйкозаноидов, играющие важную роль в развитии воспалительного инфильтрата. Нельзя не отметить, что среди продуктов липопероксидации присутствуют хемоаттрактанты, обеспечивающие приток лейкоцитарных клеток в воспалительный очаг. В нашем исследовании обнаружена синхронизация между накоплением гептан-растворимых продуктов ПОЛ и поступлением мононуклеарных клеток в воспалительный очаг. Так, для первых суток развития воспалительного очага характерно усиление Fe+2/ аскорбат - индуцированного ПОЛ с 1,25±0,057 у.е.о. (n=7) до 1,58±0, у.е.о. (n=7;
P=0,006U). Для вторых суток характерен повышенный уровень гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов при одновременном увеличении содержания изопропанол - растворимых Шиффовых оснований с 0,054±0,001 у.е.о. (n=7) до 0,14±0,004 у.е.о. (n=7;
P=0,032 U). На третьи сутки в воспалительном очаге зарегистрировано снижение содержание изопропанол - растворимых диеновых конъюгатов с 0,808±0,035 у.е.о. (n=7) до 0,703±0,024 у.е.о. (n=7;
P=0,044 U) и гептан растворимых Шиффовых оснований с 0,015±0,001 (n=7) до 0,012±0, (n=7;
P=0,017U). На 4е сутки содержание гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов было повышено с 0,085±0,0013(n=7) до 0,094±0, (n=7;
P=0,03U).
При этом не наблюдалось снижения содержания изопропанол растворимых продуктов ПОЛ. На пятые сутки от начала воздействия наблюдалось усиление Fe+2/H2O2 - индуцированного карбонилирования белков с 6,23±0,052(n=7) до 7,11± 0,034 (n=7;
P=0,028WW). На шестые сутки экспериментального периодонтита активация липопероксидации проявлялась в увеличении содержания изопропанол - растворимых Шиффовых оснований с 0,0054±0,001(n=7) до 0,022±0,0087 (n=7;
P=0,01 U).
Тем не менее, это усиление ПОЛ компенсировалось одновременным снижением содержания изопропанол - растворимых диеновых конъюгатов с 0,808±0,035 (n=7) до 0,755±0,014 у.е.о. (n=7;
P=0,004 U), а также кетодиенов и сопряжённых триенов с 0,155±0,021 у.е.о. (n=7) до 0,147±0,015 у.е.о. (n=7;
P=0,03 U) на фоне усиления Fe+2 / аскорбат - индуцированного ПОЛ с 1,25±0,057 у.е.о. (n=7) до 1,4±0,015 у.е.о. (n=7, P=0,004 U). Для десятых суток характерно увеличение содержания карбонилированных белков c 7,95±0,33 ммоль/гр.ткани до 8,55±0,64 ммоль/гр.ткани (P=0,028WW) при одновременном снижении содержания гептан-растворимых Шиффовых оснований с 0,0054±0,001у.е.о до 0,0021±0,001у.е.о. (P=0,032 U).
Обращает на себя внимание наличие положительных корреляционных связей между содержанием гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов и количеством моноцитов воспалительного очага (Rs=0,794;
P=0,024) и между содержанием этой же категории продуктов ПОЛ и уровнем лимфоцитов в (Rs=0,689;
P=0,034). Кроме того, отмечено наличие положительной корреляции между содержанием карбонилированных белков и количеством лимфоцитов в лейкоцитарном инфильтрате (Rs=0,756;
P=0,026). Данные корреляционные связи могут отражать способность молекулярных продуктов липопероксидации выступать в роли хемоаттрактантов для лейкоцитарных клеток.
Cоотношение между прооксидантными и антиооксидантными системами в крови в динамике периодонтита Установлено, что уже через 24 часа после повреждения тканей периодонта в крови наблюдалось усиление антиоксидантной защиты, проявлявшееся в двукратном увеличении активности каталазы.
Одновременно наблюдалось двукратное снижение активности тромбоцитарной МАО-Б, что свидетельствует о снижении мощности прооксидантных систем (таблица 1). Сниженный уровень активности тромбоцитарной МАО-Б и повышенный уровень активности каталазы эритроцитов наблюдалось и на вторые сутки после травмы. На 3-4 сутки после воздействия по-прежнему сохранялся повышенный уровень активности каталазы крови, а в период с 5 по 7е сутки активность этого фермента снизилась до контрольного уровня.
Причём на шестые сутки наблюдалось снижение активности ксантиноксидазы в крови. Таким образом, в течение семи суток после травматизирующего воздействия на ткани периодонта так и не удалось зарегистрировать увеличение активности прооксидантных ферментов МАО Б в тромбоцитах и ксантиноксидазы в эритроцитах (таблица 1). Более того, активность этих ферментов периодически понижалась. Напротив, было отмечено устойчивое возрастание активности каталазы, для которой характерно антиоксидантное действие, на ранних этапах после нанесения травмы.
Таблица Активность каталазы и ксантиноксидазы эритроцитов и МАО-Б тромбоцитов в динамике экспериментального периодонтита МАО – Б Каталаза Ксантиноксидаза тромбоцитов Группа (Ед/грHb/мин) (Ед/грHb/мин) (нМ/мл/мин) 0,13±0,014 0,17±0,011 0,41±0, Контроль 0,22±0,02 0,2±0, 1 сутки 0,17±0, P=0,024U P=0,046U n= 0,24±0,016 0,2±0, 2 сутки 0,15±0, P=0,021U P=0,044U n= 0,28±0, 3 сутки 0,14±0,022 0,43±0, P=0,021U n= 0,22±0, 4сутки 0,14±0,037 0,24±0, P=0,032U n= 5 сутки 0,17±0,054 0,14±0,017 0,4±0, n= 0,11±0, 6 сутки 0,13±0,042 0,63±0, P=0,015U n= 7 сутки 0,21±0,082 0,15±0,036 0,34±0, n= Таким образом, при экспериментальном периодонтите наблюдаются признаки активации антиоксидантных систем крови. На этом фоне правомерно ожидать угнетение свободно-радикального окисления. Это предположение оказалось справедливым только по отношению к перекисному окислению липидов. Установлено, что на первые сутки развития воспалительного процесса наблюдалось снижение содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов с 0,539±0,028 (n=7) до 0,471±0,013 (n=7;
P=0,02U), а также кетодиенов и сопряжённых триенов в плазме крови с 0,089±0,004 (n=7) до 0,073±0,001 (n=7;
P=0,02U). При этом, содержание карбонилированных белков не претерпело статистически значимых изменений. На вторые сутки на 12% снижено содержание гептан растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,02U) при одновременном двукратном увеличении содержания Fe+2/аскорбат индуцированного ПОЛ (P=0,028U). Двукратное повышение значения этого показателя наблюдалось и на седьмые сутки экспериментального периодонтита (P=0,023U).
На четвёртые сутки снова наблюдалось снижение содержания гептан растворимых диеновых конъюгатов. Но при этом в отношении Fe+2 / аскорбат - индуцированного ПОЛ отмечена противоположная тенденция, проявлявшаяся в трёхкратном снижении содержания изопропанол растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,032U) после введения в изопропанольные экстракты индуктора липопероксидации. Снижение уровня Fe+2/аскорбат - индуцированного ПОЛ, скорее всего, связано с уменьшением содержания ненасыщенных ацилов, являющихся субстратами для переокисления, что может благоприятствовать окислению белков.
Установлено, что для четвертых суток развития периодонтита характерно увеличение на 37% содержания белков, карбонилированных в результате инкубации плазмы крови с системой Фентона (P=0,02U). Наблюдаемое снижение уровня Fe+2/аскорбат - индуцированного ПОЛ и повышение уровня металл - индуцированного окисления белков имело транзиторный характер.
На шестые сутки экспериментального периодонтита после внесения в изопропанольные экстракты плазмы крови индукторов переокисления в раза повысилось содержание кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,019U).
Кроме того, отмечено снижение на 12% содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,049U) на базальном уровне. Также купировалось характерное для четвертых суток экспериментального периодонтита увеличение содержания карбонилированных белков.
Уровень липопероксидации и карбонилирования белков в иммунных органах в динамике периодонтита Среди исследованных иммунных органов наиболее отчётливое уменьшение количества кариоцитов наблюдалось в костном мозге.
Сниженный уровень миелонуклеаров зарегистрирован в период со вторых по шестые сутки экспериментального периодонтита (рисунок 2). К десятым суткам содержание клеток костного мозга восстановилось до контрольного уровня. Анализ миелограммы показал, что снижение количества миелонуклеаров обусловлено мобилизацией нейтрофильных гранулоцитов.
Причём, их содержание увеличивалось как в циркулирующей крови, так и в селезёнке. Изменение клеточного состава миелограммы ассоциируются с изменениями показателей липопероксидации и окисления белков в органе.
Рисунок Динамика изменения содержания кариоцитов и нейтрофилов костного мозга при экспериментальном периодонтите Примечание: * - статистически значимые отличия от показателей контрольной группы;
** между опытными группами, Р0,05. Обработка произведена с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.
В первые сутки от начала эксперимента в костном мозге наблюдалось снижение на 20% содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов (P=0,032U) при одновременном увеличении содержания Fe+2 / аскорбат индуцированных изопропанол - растворимых диеновых конъюгатов (с 2,77±0,27, n=7 до 3,22±0,46 n=7;
P=0,047WW). На третьи сутки наблюдалось двукратное снижение уровня Fe +2 / аскорбат - индуцированного ПОЛ (P=0,016U). Важно отметить, что одновременно наблюдалось двукратное увеличение содержания изопропанол - растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,033U), а также изопропанол - растворимых Шиффовых оснований (P=0,021U).
При обсуждении полученных данных необходимо учитывать, что изменение липопероксидации на базальном уровне по времени предшествует детекции индуцированного ПОЛ. Поэтому, мы склонны считать, что на третьи сутки экспериментального периодонтита весьма интенсивно проходит переокисление фосфолипидов гемопоэтических клеток, что приводит к снижению содержания в них ненасыщенных жирных кислот. Это, в свою очередь, и обуславливает снижение уровня Fe+2/аскорбат - индуцированного ПОЛ. Данные изменения могут негативно отразиться на физико-химических свойствах мембран клеток костного мозга и их купирование возможно за счёт повышенного поступления ненасыщенных жирных кислот. В итоге уже на четвертые сутки наблюдалось увеличение в 1,5 раза содержания кетодиенов и сопряжённых триенов после внесения в изопропанольные экстракты Fe+2 и аскорбата (P=0,035U). Однако на шестые сутки вновь наблюдалось увеличение в 1,5 раза содержания изопропанол - растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,045U) при одновременном снижении на 37% содержания Fe +2 / аскорбат - индуцированных кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,045U). Полученные результаты позволяют предположить, что на шестые сутки вновь сформировался дефицит субстратов переокисления, что в дальнейшем компенсируется повышенным поступлением в костный мозг ненасыщенных жирных кислот. По – видимому, это обусловливает развитие на седьмые сутки новой волны индуцированного ПОЛ и последующего снижения базального уровня липопероксидации. На десятые сутки вновь наблюдалось снижение содержания гептан-растворимых продуктов ПОЛ в костном мозге.
Важно отметить, что в костном мозге уже на первые сутки, наблюдалось снижение содержания карбонилированных белков. К пятым суткам исчезали статистически значимые по сравнению с контролем различия по уровню окислительно-модифицированных белков (рисунок 3).
В селезёнке на 3 сутки после повреждения переапикальных тканей наблюдалось увеличение содержания кариоцитов с 689±31,2*106 (n=7) клеток до 887,34±41,37*106 клеток (n=7;
P=0,048U). Анализ спленограммы показал, что в динамике экспериментального периодонтита монотонно увеличивалось содержание нейтрофилов. Кроме того, процесс свободно радикального окисления в селезёнке по своему характеру отличался от костного мозга.
На первые сутки в органе на 29% снизился уровень Fe +2/ аскорбат индуцированного ПОЛ (P=0,042U). В это же время в 2 раза снизилось содержание изопропанол-растворимых Шиффовых оснований (P=0,009 WW) и на 26% увеличилось содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,022U). Снижение содержания изопропанол растворимых продуктов ПОЛ и уровня Fe+2 / аскорбат - индуцированного ПОЛ наблюдалось между вторыми и пятыми сутками экспериментального периодонтита. Вероятно, в этот период наблюдался дефицит субстратов переокисления, который купировался к шестым суткам. Поэтому для этого временно интервала характерно увеличение на 37% содержания изопропанол - растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,047U) и снижение на 50% содержания этой категории продуктов ПОЛ при индукции в системе Fe+2 / аскорбат (P=0,022U). На седьмые сутки периодонтита в селезёнке наблюдалось увеличение на 7% (P=0,037U) содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов, а также повысилось на 14% содержание кетодиенов и сопряжённых триенов (P=0,054U).
Таким образом, в селезёнке наблюдалось снижение уровня Fe+2/ аскорбат индуцированного ПОЛ. Этот результат можно рассматривать как следствие дефицита субстратов для переокисления, что создаёт благоприятную ситуацию для свободно-радикального окисления белков.
Поэтому с первых по седьмые сутки развития периодонтита наблюдалось усиление в 1,5 раза окислительной деструкции белков после их инкубации в системе Фентона (рисунок 3).
Рисунок Динамика изменения содержания карбонилированных белков в костном мозге и селезенке при экспериментальном периодонтите Костный мозг Селезенка Примечание: * - статистически значимые отличия от показателей контрольной группы;
** между опытными группами, Р0,05. Обработка произведена с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.
Уровень липопероксидации и карбонилирования белков в головном мозге, печени и почках в динамике периодонтита В динамике развития периодонтита в головном мозге увеличивалась окисляемость липидов. Так, уже на первые сутки после повреждения увеличение Fe+2/аскорбат переапикальных тканей наблюдалось индуцированного ПОЛ с 8,6±0,82 у.е.о. до 14,37±0,52 у.е.о. (P=0,027U). При этом снижалось содержание изопропанол - растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов (с 0,137±0,024 в контрольной группе до 0,101±0, у.е.о. в опытной, P=0,01U, n=8). С четвёртых по седьмые сутки также снижалось содержание гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов. В динамике экспериментального периодонтита наблюдалось снижение уровня карбонилированных белков после индукции в системе Фэнтона (рисунок 4).
Разнонаправленные изменения свободно-радикального окисления белков и липидов наблюдались в печени и в почках. Для печени характерно снижение уровня липопероксидации, проявлявшееся в уменьшении содержания изопропанол - растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов на первые и четвёртые, пятые и шестые сутки развития экспериментального периодонтита (с 0,198±0,007 в контрольной группе до 0,179±0,012, 0,171±0,09, 0,178±0,02 у.е.о. на 4е, 5е и 6е сутки соответственно) при одновременном снижении уровня Fe+2 / аскорбат - индуцированного ПОЛ (с 4,62±0,74 до 2,71±0,24 на 4е сутки, P=0,049U).
Рисунок Изменение содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов и карбонилированных белков в головном мозге при экспериментальном периодонтите Гептан - растворимые кетодиены и сопряжённые триены Окислительная модификация белка (индукция Fe2+ / аскорбат) Примечание: * - статистически значимые отличия от показателей контрольной группы, Р0,05.
Статистическая обработка произведена с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.
Данная тенденция сохранялась на пятые сутки экспериментального воспаления, а на шестые сутки одновременно с восстановлением до контрольного уровня Fe+2 / аскорбат - индуцированного ПОЛ (5,31±1,14) наблюдалось восстановление и базального уровня ПОЛ. На седьмые сутки от начала эксперимента наблюдалось снижение содержания изопропанол растворимых диеновых конъюгатов (с 0,643±0,095 в контрольной группе до 0,597±0,026 на седьмые сутки, P=0,037U).
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о снижении липопероксидации во фракции полярных липидов, представленных преимущественно фосфолипидами. При этом содержание гептан растворимых молекулярных продуктов ПОЛ не отличалось статистически значимо от контрольного уровня.
В почках в первые сутки после нанесения травмы наблюдалось одновременное снижение базального уровня изопропанол растворимых диеновых конъюгатов (с 0,637±0,024 в контрольной группе до 0,546±0,021 в опытной, P=0,037U) и Fe+2/ аскорбат - индуцированных диеновых конъюгатов (с 2,46±0,18 в контрольной группе до 2,06±0,05 в опытной, P=0,045U). На вторые сутки зарегистрировано снижение базального уровня изопропанол - растворимых диеновых конъюгатов (с 0,637±0,024 в контрольной группе до 0,513±0,011в опытной, P=0,007U), а также кетодиенов и сопряжённых триенов (с 0,188±0,017 в контрольной группе до 0,155±0,021 в опытной, P=0,014U). На третьи сутки сохранялся сниженным (0,139±0,048 у.е.о.) уровень этой категории продуктов ПОЛ. Но в отличие от первых суток, данный временной интервал характеризовался повышенным содержанием изопропанол - растворимых Fe+2/ аскорбат - индуцированных диеновых конъюгатов (с 2,46±0,18 в контрольной группе до 3,34±0,65 в опытной, P=0,017U), что свидетельствует об эффективности действия липофильных антиоксидантов.
На пятые и шестые сутки исследованные показатели липопероксидации не характеризовались статистически значимыми различиями по сравнению с контролем. Для седьмых суток характерно незначительное по величине, но, тем не менее, статистически значимое содержания Fe+2 / аскорбат - индуцированных диеновых снижение конъюгатов (до 2,29±0,26, P=0,015 WW), при одновременном снижении содержания этой категории продуктов ПОЛ на базальном уровне (до 0,531±0,017, P=0,016U).
В печени и почках, в отличие от головного мозга в динамике развития периодонтита отмечено усиление окислительной деструкции белков. В печени наиболее отчётливый прирост содержания карбонилированных белков наблюдался в 1 и в 6 сутки, а в почках - на 2, 4 и 7 сутки развития экспериментального периодонтита (рисунок 5).
Рисунок Изменение содержания карбонилированных белков печени и почек в течении 7 суток после индукции периодонтита Печень Почки Примечание: * - статистически значимые отличия от показателей контрольной группы, Р0,05.
Статистическая обработка произведена с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.
Таким образом, в печени и в почках обнаружены разнонаправленные изменения между липопероксидацией и карбонилированием белков. Важно отметить, что в данном случае достаточно часто наблюдалась синхронизация между снижением базального и индуцированного уровней ПОЛ. Это может означать, что в составе фосфолипидов мембран наблюдается дефицит ненасыщенных ацильных радикалов, являющихся эксклюзивными субстратами переокисления липидов. В этих условиях свободные радикалы преимущественно атакуют протеины, что приводит к усилению карбонилирования белков.
Особенности свободно-радикального окисления в слюне больных апикальным периодонтитом Известно, что биохимические показатели в слюне при периодонтите релевантно отражают изменения в апикальных тканях (Su H. et al., 2010). Это позволило сопоставить между собой характер изменений свободно радикального окисления в слюне больных периодонтитом и свободно радикального окисления в тканях периодонта у крыс при экспериментальном моделировании апикального периодонтита. Установлено, что апикальный периодонтит сопровождался разнонаправленными изменениями содержания молекулярных продуктов ПОЛ в слюне. Это проявлялось в увеличении содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов с 0,44±0,027 у.е.о до 0,501±0,078 у.е.о.(Р=0,044U);
кетодиенов и сопряжённых триенов c 0,122±0,028у.е.о. до 0,173±0,018 у.е.о. (Р=0,044U), а также изопропанол растворимых Шиффовых оснований с 0,14±0,017 у.е.о до 0,17±0,012 у.е.о.
(Р=0,027U). Одновременно снижалось содержание изопропанол растворимых диеновых конъюгатов с 0,603±0,06 у.е.о. до 0,507±0,06 у.е.о (Р=0,044U), а также кетодиенов и сопряжённых триенов с 0,402±0,023до 0,3±0,025(Р=0,044U). Разнонаправленные изменения содержания изопропанол - и гептан-растворимых продуктов ПОЛ могут быть связаны с усилением фосфолипазной активности, в частности с активацией фосфолипазы А2, что сопровождается элиминацией из фосфолипидов мембран ацильных радикалов с последующим переходом их во фракции неполярных липидов (Волчегорский И.А. и соавт., 2000). Кроме того, представляется возможным повышение эффективности антиоксидантной защиты фосфолипидов.
В пользу этого свидетельствует факт увеличения содержания Fe2+ / аскорбат - индуцированных изопропанол - растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов с 0,894±0,06 до 0,986±0,02 (P=0,006U).
Представляется важным то, что наблюдалось увеличение содержания именно гептан-растворимых продуктов ПОЛ, так как в ней детектируются продукты переокисления эйкозаноидов, играющие важную роль в развитии воспалительного инфильтрата (Маянский Д.Н.,1991;
Волчегорский И.А. и соавт., 2000).
Следует также отметить, среди продуктов липопероксидации неполярных липидов присутствуют хемоаттрактанты, обеспечивающие приток лейкоцитарных клеток в воспалительный очаг (Волчегорский И.А. и соавт., 2000). Кроме того в слюне больных периодонтитом наблюдалось увеличение содержания карбонилированных белков. Таким образом, воспаление тканей периодонта характеризуется усилением ПОЛ на фоне одновременного увеличения окисляемости липидов. Кроме того, в слюне наблюдалось увеличение содержания карбонилированных белков с 1,47±0, мкмоль/г белка. до 3,2±0,25 мкмоль/г белка (P=0,016U). В группе пациентов с острым периодонтитом также наблюдалось увеличение уровня + Fe /аскорбат - индуцированного ПОЛ и содержания карбонилированных белков. Столь высокая воспроизводимость характерных для общей выборки больных тенденций объясняется тем, что в исследованной когорте больных 44% приходится на группу с дебютом развития хронического деструктивного периодонтита.
Таблица Содержание молекулярных продуктов ПОЛ и карбонилированных белков в слюне больных периодонтитом (M±m) Стоматологическая Показатель Контроль Р патология Острый периодонтит КД иСТ [г] 0,122±0,028 0,173±0,017 0,018U КДиСТ [и] 0,402±0,023 0,276±0,044 0,028U КД иСТ 0,894±0,06 1,057±0,03 0,047U (индукция Fe2+ / аскорбат) 0,018U 1,47±0,19 4,55±0, ОМБ Хронический периодонтит КДиСТ [и] 0,402±0,023 0,32±0,024 0,04U КД и СТ 0,894±0,06 0,94±0,041 0,049U (индукция Fe2+ / аскорбат) 0,038U 1,47±0,19 7,16±0, ОМБ Периапикальный абсцесс 0,97±0, КДиСТ 0,894±0,06 0,028U (индукция Fe2+ / аскорбат) ШО [и] 0,14±0,017 0,185±0,01 0,027U 1,47±0,19 1,03±0,24 0,049U ОМБ Примечания к таблице: ДК - диеновые коньюгаты (первичные продукты ПОЛ), КД и СТ - кетодиены и сопряженные триены (вторичные продукты ПОЛ);
ШО – шиффовы основания (конечные продукты ПОЛ) буквенные подиндексы [г] и [и] обозначают продукты ПОЛ, извлекаемые соответственно гептановой и изопропанольной фазами липидного экстракта;
ОМБ - продукты окислительной модификации белка. Количество продуктов ПОЛ выражено в единицах индекса окисления, продуктов ОМБ – в мкмоль/г белка. U - критерий Манна-Уитни.
Хронический апикальный периодонтит характеризовался различным уровнем свободно-радикального окисления при спокойном течении заболевания и при его обострении. Для периода обострения характерно (таблица 2) увеличение содержания изопропанол растворимых Шиффовых оснований. При этом также наблюдалось повышение уровня Fe2+ / аскорбат индуцированного ПОЛ.
Интересно отметить, что во время обострения обнаружено снижение содержания карбонилированных белков. Но при этом уменьшилось содержание изопропанол растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов на фоне прироста содержания Fe+2/аскорбат - индуцированного ПОЛ. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об усилении липопероксидации в период обострения и об увеличении уровня карбонилированных белков при его отсутствии.
Таким образом, в выполненном экспериментально-клиническом исследовании мы отталкивались от показателей слюны как наиболее неинвазивной биологической жидкости, которая при стоматологической патологии вполне корректно отражает изменения, наблюдаемые в воспалительном очаге. Данные, касающиеся динамики развития воспалительного процесса и состояния свободно-радикального окисления при повреждении периапикальных тканей вполне соотносятся с клиническими данными характеризующими особенности свободно радикального окисления при остром периодонтите, его хроническом течении без обострений и при обострении хронического периодонтита. Так, при обострении периодонтита наблюдалось увеличение содержания гептан растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов при одновременном увеличении содержания окислительно-модифицированных белков. Между тем, в первые - вторые сутки экспериментального деструктивного периодонтита наблюдалось увеличение содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов при росте на первые сутки от начала воздействия содержания окислительно-модифицированных белков.
Важно отметить, что у больных с дебютом периодонтита также, как и в первые двое суток после травмирования периапикальных тканей у крыс, наблюдалось снижение содержания изопропанол – растворимых диеновых конъюгатов, а также кетодиенов и сопряжённых триенов.
Для хронического периодонтита, протекающего без обострения, характерно увеличение содержания карбонилированных белков.
Аналогичные изменения наблюдались у крыс на десятые сутки от травмирования периапикальных тканей, когда в воспалительном очаге увеличивается содержание соединительнотканных элементов. Согласно литературным данным, именно фиброзный периодонтит характеризуется благоприятным исходом без особых осложнений. Интересно отметить, что в этот период в воспалительном очаге наблюдалось не только усиление окислительной деструкции белков, но и снижение содержания молекулярных продуктов ПОЛ.
В отличие от предыдущих исследований, мы не ограничились изучением свободно-радикального окисления в воспалительном очаге. Нами было изучено соотношение между липопероксидацией и окислением белков в крови и внутренних органах. Целесообразность такого подхода определяется наличием у периодонтита осложнений, отражающихся на внутренних органах. Полученные результаты дают основание предполагать, что усиление карбонилирования белков во внутренних органах может быть патохимическим звеном их развития. Экспериментальная проверка этого предположения может быть предметом дальнейших исследований.
ВЫВОДЫ 1. При экспериментальном повреждении периапикальных тканей крыс в воспалительном очаге повышается содержание вторичных гептан растворимых и снижается содержание изопропанол - растворимых продуктов ПОЛ. Усиление окисления белков наблюдается только на начальном (1 сутки) и заключительном (10 сутки) этапах эксперимента.
Повышение содержания гептан-растворимых продуктов ПОЛ синхронизировано с развитием лейкоцитарной инфильтрации.
2. Экспериментальный апикальный периодонтит характеризуется снижением содержания гептан - растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов в плазме крови на 1 и 6 сутки. На четвертые сутки экспериментального периодонтита на фоне снижения уровня + Fe /аскорбат - индуцированного ПОЛ повышается содержание карбонилированных белков.
3. При моделировании апикального периодонтита в костном мозге снижение содержания карбонилированных белков синхронизировано со снижением количества кариоцитов и мобилизацией нейтрофилов. В селезёнке повышенный уровень карбонилированных белков и снижение аскорбат - индуцированного ПОЛ ассоциируется с увеличением содержания нейтрофилов.
4. При экспериментальном апикальном периодонтите в печени и в почках снижение базального уровня ПОЛ при одновременном увеличении карбонилирования белков реализуются на фоне снижения уровня Fe+2 / аскорбат - индуцированного ПОЛ. В головном мозге одновременное ограничение ПОЛ и карбонилирования белков реализуется на фоне увеличения уровня Fe+2 / аскорбат - индуцированного ПОЛ.
5. Для острого и хронического периодонтита характерно усиление окислительной модификации белков и аскорбат – индуцированного ПОЛ в слюне на фоне уменьшения содержания вторичных изопропанол растворимых продуктов ПОЛ. Особенностью острого периодонтита является накопление вторичных гептан-растворимых продуктов липопероксидации в слюне. Для периапикального абсцесса характерно ограничение карбонилирования белков и увеличение содержания конечных изопропанол-растворимых продуктов липопероксидации в слюне.
Практические рекомендации:
1. Для эффективной коррекции окислительного стресса сопровождающего течение острого апикального периодонтита, при на значении антиоксидантных препаратов антиоксидантных препаратов необходимо учитывать как исходное состояние антиоксидантной защиты, так и исходное соотношение между окислением белков и липопероксидацией, а также индуцированный уровень липопероксидации и карбонилирования белков.
2. Для прогнозирования обострения переапикального периодонтита целесообразно в слюне больных с хроническим апикальным периодонтитом необходимо определять содержание изопропанол растворимых Шиффовых оснований и содержание карбонилированных белков.
3. Для предупреждения осложнений ассоциированных с дефицитом ненасыщенных ацилов у больных с апикальным периодонтитом необходимо в их питание включить продукты с высоким содержанием ненасыщенных жирных кислот.
СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ 1. Осьмуха, У.Г. Состояние свободно-радикального окисления во внутренних органах при периодонтите / У.Г. Осьмуха, Е.А. Поздняков // Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии. Российская конференция, посвящённая 80 летию со дня рождения Р.И. Лифшица. Челябинск. – 2009. С.67-68.
2. Осьмуха, У.Г. Особенности провоспалительных изменений в периодонте при стрессорных воздействиях со сниженной чувствительностью к глюкокортикоидам и повышенной к провоспалительным цитокинам / Осьмуха У.Г., Козочкин Д.А., Латюшина Л.С., Вождаев Е.В. // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2010. - №2/1 (29) Тематический выпуск по аллергологии и иммунологии С.203-204.
3. Осьмуха, У.Г. Особенности свободно-радикального окисления в периапикальных тканях при экспериментальном периодонтите / У.Г.Осьмуха // Фундаментальная наука и клиническая медицина – человек и его здоровье: материалы XIV Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей (с международным участием). - Санкт-Петербург. - 2011. - С.211-212.
4. Цейликман, О.Б. Динамика липопероксидации в плазме крови и внутренних органах при периодонтите. / О.Б. Цейликман, У.Г. Осьмуха, Д.А. Козочкин // Вестник ЮУРГУ Серия «Образование, здравоохранение, физическая культура». – 2011. - №20 – С. 82 – 84.
5. Цейликман, В.Э. Динамика формирования лейкоцитарного инфильтрата и особенности свободно-радикального окисления в воспалительном очаге при экспериментальном периодонтите. / В.Э. Цейликман, У.Г. Осьмуха, Л.И.
Крупицкая, А.Л. Цытович, Д.А. Козочкин, М.В. Комелькова // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2011. - №2/1 (35) Тематический выпуск по аллергологии и иммунологии С. 73.
6. Осьмуха, У.Г. Изменение соотношения между различными категориями продуктов перекисного окисления липидов и окислительно модифицированными белками в слюне больных с апикальным периодонтитом. / У.Г. Осьмуха, А.И.Синицкий, Л.С. Латюшина, Д.А.
Козочкин // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2011. №4/1 (38) Тематический выпуск по микробиологии, иммунологии, биотехнологии С.110-111.
7. Латюшина, Л.С. Особенности соотношения локального содержания продуктов ПОЛ и антиоксидантной защиты при апикальном периодонтите / Л.С. Латюшина, В.Э. Цейликман, У.Г. Осьмуха, Ю.В. Павлиенко, А.П.
Финадеев // Вестник ЮУРГУ Серия «Образование, здравоохранение, физическая культура». – 2011. - №39 – С. 61 – 65.
Список использованных сокращений:
ПОЛ – перекисное окисление липидов МАО – моноаминоксидаза U – критерий Манна-Уитни. WW – критерий Вальда - Вольфовица.
СРО – свободно-радикальное окисление