Метаболические изменения при токсическом поражении печени и возможности их коррекции (экспериментальное исследование)
На правах рукописи
Хильчук Максим Александрович МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ И ВОЗМОЖНОСТИ ИХ КОРРЕКЦИИ (экспериментальное исследование) 03.01.04 – биохимия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Краснодар - 2013
Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России)
Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Быков Илья Михайлович
Официальные оппоненты:
Курзанов Анатолий Николаевич – доктор медицинских наук, профессор, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра клинической фармакологии и функциональной диагностики ФПК и ППС, профессор кафедры;
Бородулин Владимир Борисович, доктор медицинских наук, профессор, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра биохимии, заведующий кафедрой.
Ведущая организация:
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт питания» Российской академии медицинских наук (г.Москва).
Защита состоится «» февраля 2013 года в _ часов на заседании диссертационного совета Д 208.038.02 на базе ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России (350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4, тел. (861) 262-73-75).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России Автореферат разослан «_» 2013 г.
Ученый секретарь диссертационного совета Д 208.038.02 профессор Скорикова Людмила Анатольевна
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. В настоящее время заболевания, связанные с токсическими поражениями печени, занимают ведущее место среди патологий, вызывающих необратимые нарушения в функционировании всех систем организма.
Это связано с тем, что печень является не только органом, в котором протекают центральные звенья обмена белков, липидов и углеводов, но и барьером на пути всех чужеродных веществ, попадающих в организм человека [И.В.Калинин, Н.А.Петрук, 2011;
С.В.Оковитый и соавт., 2012]. Изменение активности печеночных ферментов ведет к снижению детоксикационной функции печени. На этом фоне ряд веществ различной химической природы могут оказывать значительное воздействие не только на печень, но и на другие органы (например, поджелудочную железу), приводящее к формированию их токсического поражения [Э.Ф.Аглетдинов, А.А.Никоноров, Ф.Х.Камилов, 2009].
Особое место в профилактике и лечении гепатитов занимает использование фосфолипидных концентратов и растительных масел (например, эссенциале, фосфоглив, эссливер, льняное масло, пальмовое масло), обогащенных ненасыщенными жирными кислотами и жирорастворимыми витаминами [И.В.Шилова и соавт., 2008;
В.В.Амосов и соавт., 2009].
Однако, как известные соединения, широко применяющиеся в настоящее время в медицине, так и менее распространенные на российском рынке препараты, изучены не в полной мере. В этой связи представляется актуальным исследование по уточнению биохимических механизмов, лежащих в основе токсического поражения печени, а также поиск и изучение механизма действия новых, наиболее эффективных гепатопротекторов, с выраженными гиполипидемическими и антиоксидантными свойствами.
Цель исследования: изучить особенности изменения липидного и белкового спектров крови, активности пищеварительных протеиназ при токсическом поражении печени у лабораторных животных и разработать возможные пути их коррекции.
В связи с поставленной целью необходимо решить следующие задачи:
Дать биохимическую характеристику выраженности цитолитического 1) синдрома, а также патологии белкового и липидного обменов, изменения активности пищеварительных протеиназ, возникающих у экспериментальных животных (крыс) при создании токсического поражения печени, вызванного воздействием четыреххлористого углерода.
Провести сравнительное изучение химического состава и физико 2) химических свойств различных липофильных продуктов растительного происхождения с известными и предполагаемыми гепатопротективными, гиполипидемическими и антиоксидантными свойствами, используя современные методы количественного анализа.
Оценить в искусственно созданных модельных тест-системах in vitro 3) интенсивность гидролиза липидов, входящих в состав исследуемых продуктов под влиянием ферментов слизистой оболочки кишечника, изучить их антиоксидантную и антирадикальную активность.
Изучить выраженность гепатопротективных свойств исследуемых 4) растительных продуктов у экспериментальных животных, подвергнутых интоксикации четыреххлористым углеродом.
Оценить состояние ферментов антирадикальной защиты, активность 5) процессов перекисного окисления липидов, направленность изменений липидного и белкового спектров сыворотки крови при экспериментальном токсическом гепатите на фоне приема тестируемых растительных продуктов.
Проанализировать изменение активности протеиназ желудочно 6) кишечного тракта крыс, подвергнутых воздействию четыреххлористого углерода, при введении исследуемых продуктов растительного происхождения.
С учетом полученных данных дать рекомендации по эффективному 7) использованию исследуемых продуктов растительного происхождения, обладающих гепатопротективными свойствами, для коррекции метаболических нарушений, возникающих при токсическом поражении печени.
Научная новизна. В рамках представленного исследования впервые проведено сравнительное изучение липидного состава и физико-химических свойств новых и хорошо известных продуктов растительного происхождения (масло черного и грецкого ореха, льняное, подсолнечное, кукурузное, оливковое масла) и гепатопротекторов (фосфоглив, эссенциале, эссливер).
С использованием модельных тест-систем in vitro дана сравнительная характеристика выраженности про-/антиоксидантных свойств и атакуемости липолитическими пищеварительными ферментами различных растительных масел и гепатопротекторов.
Проведен анализ выраженности нарушений липидного и белкового обменов, а также системы про-/антиоксиданты, активности протеолитических ферментов желудка и поджелудочной железы, изменений морфологической структуры печени, возникающих у экспериментальных животных, при моделировании токсического поражения печени вызванного четыреххлористым углеродом.
Впервые на большом экспериментальном материале с использованием интегральных методов диагностики проведено сравнительное изучение гепатопротективных свойств, антиоксидантной активности и гиполипидемических эффектов исследованных продуктов растительного происхождения на доклиническом этапе с применением модели токсического поражения печени.
Научно-практическая значимость работы. В ходе проведенного исследования изучены растительные масла, обладающие выраженными гепатопротективными свойствами, описан их химический состав и основные метаболические эффекты, что позволяет рекомендовать их для клинических исследований возможности применения в комплексном лечении токсического поражения печени у человека.
Основные положения, выносимые на защиту Введение в организм крыс четыреххлористого углерода вызывает 1.
выраженное повреждение мембран гепатоцитов, способствует активации процессов липопероксидации, дисбалансу в работе ферментативного звена антиоксидантной системы организма, снижению образования пищеварительных протеиназ, нарушению метаболизма липидов и белков.
Первичный скрининг липофильных продуктов растительного 2.
происхождения, основанный на анализе их химического состава, способности гидролизоваться под действием липолитических пищеварительных ферментов и антирадикальной активности в опытах in vitro, является эффективным инструментом для поиска новых гепатопротекторов.
Использование льняного масла, масел черного и грецкого орехов, а 3.
также препарата фосфоглив для лечения токсического поражения печени в эксперименте способствует снижению интенсивности процессов липопероксидации, нормализации работы ферментов антирадикальной защиты и протеиназ желудка и поджелудочной железы, восстанавливает нарушения липидного и белкового обменов, что позволяет рекомендовать исследуемые продукты для комплексного лечения токсических поражений печени.
Апробация результатов исследования. Материалы диссертации были представлены и обсуждались на III съезде физиологов СНГ (Ялта, Украина, 2011);
XVII Международном конгрессе «Гепатология сегодня» (Москва, 2012);
XVIII Российской гастроэнтерологической неделе (Москва, 2012).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе 4 статьи в центральной медицинской печати, рекомендованной ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 144 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 32 рисунками, содержит 18 таблиц. Список литературы включает 254 источника, из них 219 отечественных и 35 иностранных.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Для выполнения работы была разработана поэтапная схема исследования (рис.
1).
Общая схема исследования продуктов растительного происхождения с предполагаемыми гепатопротективными, антиоксидантными и гиполипидемическими свойствами Изучение гистологических изменений печени, особенностей протекания белкового и липидного обменов, состояния системы про /антиоксиданты, а также активности протеиназ в гомогенатах желудка и поджелудочной железы у лабораторных животных с моделью острого токсического поражения печени, вызванного введением CCl Изучение химического состава, физико-химических, антиоксидантных свойств и способности к гидролизу продуктов растительного происхождения с предполагаемыми гепатопротективными свойствами в опытах in vitro Оценка выраженности гепатопротективного действия и основных метаболических эффектов изучаемых продуктов в опытах in vivo с использованием крыс с моделью острого токсического поражения печени, вызванного введением CCl Формулирование рекомендаций по дальнейшему использованию наиболее эффективных гепатопротекторов в комплексном лечении токсического поражения печени у человека Рис. 1. Поэтапная схема исследования В экспериментах использовано 175 белых беспородных крыс самцов весом 150 200 г. В каждой опытной и контрольной группе животные были одного возраста и веса. Они содержались в стандартных условиях, с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях [1986].
Для проведения исследований in vivo по влиянию на метаболические процессы и функцию печени крыс, на основании модельных экспериментов, были отобраны четыре наиболее перспективных продукта (масла льна, черного и грецкого орехов, препарат фосфоглив). В связи с чем опытные животные были распределены на следующие группы. Первая группа (25 крыс) – интактные животные. Вторая группа (25 крыс) – животные с моделью токсического поражения печени, вызванного введением CCl4, исследование биохимических параметров у которых производилось на 7 сутки после начала эксперимента. Третья группа (25 крыс) животные с моделью токсического поражения печени вызванного введением CCl4, исследование биохимических параметров у которых производилось на 30 сутки после начала эксперимента. Четвертая группа (100 крыс) - животные с предварительно созданным экспериментальным токсическим поражением печени, которым по гастральному зонду вводили изучаемые гепатопротекторы: масло черного ореха – подгруппа IVА (n=25), масло грецкого ореха - подгруппа IVБ (n=25), фосфоглив - подгруппа IVВ (n=25), льняное масло - подгруппа IVГ (n=25).
Для создания модели острого токсического поражения печени крысам подкожно вводили 50% масляный раствор CCl4 из расчета 0,5 мл на 100 г массы тела животного один раз в сутки в течение трех суток. Забор крови и внутренних органов (печени, желудка, поджелудочной железы) для исследования у животных опытных и контрольной групп проводили на 7 и на 30 сутки после начала эксперимента сразу после декапитации под нембуталовым наркозом (35 мг/кг). Забой крыс производили после их 14 часового голодания, в утренние часы, согласно принятым на этот счет инструкциям и законодательным актам. Все исследования были выполнены в день забора крови и внутренних органов.
Для морфологического подтверждения развития моделируемого патологического процесса проводили патогистологическое исследование печени опытных животных с окраской гематоксилином и эозином по общепринятой методике [Д.Э. Коржевский, 2005].
Биохимическое исследование крови крыс проводилось с использованием готовых наборов реагентов фирмы «Vital Diagnostics SPb», а также по методикам, описанным В.С. Камышниковым [2009] и включало определение активности ряда индикаторных (аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ)) и экскреторных (-глутамилтранспептидазы (-ГТП) и щелочной фосфатазы (ЩФ)) ферментов печени, содержания общего билирубина и его фракций в сыворотке крови. Изучение показателей белкового обмена включало определение:
общего белка, альбумина, -, -, -глобулинов;
липидного - общего холестерина (ОХС), холестерина липопротеидов высокой (ХС ЛПВП), низкой (ХС ЛПНП) и очень низкой (ХС ЛПОНП) плотности, эфиров холестерина (ЭХС), неэтерифицированного холестерина (НЭХС), триацилглицеринов (ТАГ) в сыворотке крови. Об активности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) судили по количеству вторичных продуктов липопероксидации, вступающих в реакцию с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-РП) [И.Д.Стальная, 1977;
В.С.Камышников, 2009].
Активность супероксиддисмутазы (СОД) в гемолизате эритроцитов оценивали по методу В.А. Костюка и соавт. [1990], каталазы - по М.А. Королюку и соавт. [1988].
Содержание гемоглобина (Hb) в гемолизате эритроцитов определяли гемиглобинцианидным методом. Исследование активности пепсина в гомогенатах слизистой оболочки желудка проводили экспресс-методом Н.П. Пятницкого [1968].
Для изучения активности трипсина в гомогенатах поджелудочной железы использовали метод Эрлангера – Шатерникова [А.А. Покровский, 1969], а для определения активности химотрипсина - методику Н.П. Пятницкого, М.Т.
Проскурякова [1969].
Методы извлечения и изучения химических свойств липидов из продуктов растительного происхождения с предполагаемыми гепатопротективными свойствами включали: получение липидных экстрактов, определение йодного числа, массовой доли неомыляемых липидов, жирнокислотного состава липидных экстрактов методом газожидкостной хроматографии [Лабораторный практикум по химии жиров, 2004].
Изучение антиоксидантной активности липофильных продуктов растительного происхождения проводили в экспериментах in vitro с использованием в качестве субстрата ПОЛ мелких моноламеллярных липосом, полученных из яичного фосфатидилхолина методом инжекции этанольного раствора липида в водную фазу.
Уровень ПОЛ в суспензии липосом оценивали по нарастанию ТБК-РП [В.Г. Зайцев, 2001].
Для оценки метаболической доступности исследуемых продуктов растительного происхождения был проведен их ферментативный липолиз in vitro с использованием гидролизной установки П.Г. Сторожука [Свидетельство на полезную модель №17757, 2000]. Количество жирных кислот определяли титрованием 0,05н раствором NaOH в присутствии 0,5% спиртового раствора фенолфталеина [О.Д. Кушманова, Г.М. Ивченко, 1983;
Н.Н. Чернова, 2009].
В работе был произведен анализ 10 растительных продуктов, полученных как экспериментально, так и входящих в состав лекарственных препаратов, с целью отбора наиболее перспективных для использования в качестве гепатопротекторов и антиоксидантов: масло черного ореха (Juglans nigra), масло грецкого ореха (Juglans regia), масло льняное (производство «ИП Цыпляков А.Н.», Россия. Сертификат соответствия № РОСС RU.АЮ44.В03616), масло оливковое («LOWARI», Италия), масло подсолнечное (производство ООО «Родник-98», Россия. ГОСТ 1129-93), масло кукурузное (производство ООО «Кубанская долина», Россия. ГОСТ 8808 2000), Эссенциале форте Н (A. Nattermann & Cie. GmbH, Германия), Эссливер форте (Nabros Pharma, Индия). Фосфоглив (ОАО «Фармстандарт-УфаВИТА», Россия), Ретинола ацетат (АЙ СИ ЭН Октябрь, Россия).
Статистическую обработку экспериментального материала проводили в соответствии с методами, принятыми в вариационной статистике [А.Н. Герасимов, 2007]. За достоверные различия в сравнении средних величин в парных сравнениях брали t-критерий Стьюдента при р0,05. Статистический анализ результатов исследования был проведен с использованием программ: «STATISTIKA 6.0 for Windows» фирмы «Stat Soft, Inc.» и «Microsoft Office Excel 2007».
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В условиях повреждающего действия CCl4 на 7 сутки эксперимента в паренхиме печени крыс на микроскопическом уровне наблюдались следующие патологические процессы (рис. 2Б): дискомплексация печеночных балок, жировая дистрофия гепатоцитов, очаговые некрозы по типу лизиса, кариолизис и кариопикноз гепатоцитов, острая венозная гиперемия междольковых капилляров, лимфостаз и гемостаз, отек стенок кровеносных сосудов, эритродиапедез, местный гемосидероз, периваскулярные инфильтраты из полиморфных лейкоцитов, набухание и десквамация эндотелия сосудов.
А Б В Рис. 2. Микроскопическая картина печени интактных крыс (А) и подвергнутых интоксикации ССl4: 7 сутки эксперимента (Б), 30 сутки эксперимента (В). (Окраска гематоксилин-эозин;
объектив апо- 40х, окуляр К10х) На 30 сутки эксперимента микроструктура печени оставалась неоднородной (рис. 2В). Нарушения гемодинамики и экссудативные процессы на 30 сутки эксперимента, по сравнению с 7 сутками, были выражены слабее, и проявлялись преимущественно в виде хронической венозной гиперемии, не так ярко была выражена дезинтеграция гепатоцитов в печеночных балках, преобладали процессы хронического альтернативного воспаления, преимущественно в виде зернистой и гидропической дистрофии, и атрофии гепатоцитов, а также цианотической и бурой индурации, цирроза.
Для диагностики степени тяжести и глубины повреждения печени в исследовании было использовано определение активности ферментов АЛТ, АСТ, ЩФ, -ГТП в крови крыс (табл. 1). Так на 7 сутки после введения токсина в сыворотке крови животных отмечалось резкое увеличение активности АСТ, АЛТ, ГТП и ЩФ в среднем в 3,7 (р0,001), 6,2 раза (р0,001), 8,3 (р0,001) и 1,2 раза (р0,001) соответственно, по сравнению с данными, полученными в группе интактных крыс. На 30 сутки после введения CCl4 наблюдалась тенденция к снижению активности АСТ, АЛТ, -ГТП и ЩФ в сыворотке крови животных, однако активность ни одного из изучаемых ферментов не достигала значений, сопоставимых с группой здоровых крыс.
Как показали исследования, у крыс с токсическим поражением печени наблюдалось увеличение содержания билирубина в крови. Так, на 7 сутки эксперимента содержание общего билирубина в сыворотке крови животных составило 20,80±0,25 мкмоль/л, что превышало данный показатель в группе интактных крыс в 2,3 раза (р0,001). Увеличение содержания билирубина в крови животных происходило за счет его прямой фракции (концентрация конъюгированного билирубина в 5,7 раза (р0,001) превышала контрольные величины). Тогда как уровень непрямого билирубина статистически не отличался от контроля (р0,5). На 30 сутки эксперимента концентрация общего билирубина в крови крыс III экспериментальной группы снизилась на 14,5% (р0,001), а прямого – на 28,8% (р0,001) по сравнению с данными, полученными во II группе, однако была выше уровня общего и прямого билирубина в 1,9 (р0,001) и 4,0 раза (р0,001) соответственно по сравнению с контролем.
Таблица Активность некоторых ферментов сыворотки крови крыс при моделировании токсического поражения печени, вызванного введением четыреххлористого углерода (М±m) Группы животных Исследуемый I II III показатель (контрольная) (7 суток от начала (30 суток от начала эксперимента) n=25 эксперимента) n= n= АСТ, U/л 8,78±0,27 32,37±0,39 24,06±0, рII-I0,001 рIII-I0,001;
pIII-II0, АЛТ, U/л 8,62±0,25 53,62±0,50 41,19±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, АСТ/АЛТ, усл. ед. 1,02±0,01 0,60±0,01 0,59±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, -ГТП, U/л 16,60±0,48 137,36±1,85 108,67±1, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, ЩФ, U/л 87,51±0,49 102,22±0,72 91,21±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, Повышение активности трансаминаз в сыворотке крови животных, подвергнутых интоксикации CCl4, свидетельствует о повреждении мембран гепатоцитов, повышении их проницаемости, а также гибели клеток печени, вследствие чего наблюдается выход внутриклеточных субстанций в кровь.
Преимущественное увеличение активности АЛТ – цитоплазматического фермента, в отличие от АСТ, имеющего митохондриально - цитоплазматическую локализацию, свидетельствует о преимущественном повреждении внешних мембран гепатоцитов под действием CCl4. Увеличение активности -ГТП и ЩФ в крови лабораторных животных также указывает на массивный некроз гепатоцитов, возникающий под воздействием на организм крыс CCl4. Однако повышение концентрации билирубина, преимущественно за счет его прямой фракции, на фоне высокой активности -ГТП и ЩФ указывает не только на формирование синдрома цитолиза у подопытных животных, но и на развитие синдрома внутрипеченочного холестаза, а также позволяет диагностировать паренхиматозный тип желтухи.
Одним из наиболее вероятных механизмов, позволяющих объяснить биохимические изменения в крови подопытных животных, является активация процессов ПОЛ, что нашло подтверждение в наших исследованиях. Согласно полученным данным, при интоксикации CCl4, в крови животных наблюдалась накопление вторичных продуктов липопероксидации, реагирующих с ТБК (рис. 3).
Свободные радикалы, образующиеся из CCl4, способствуют повреждению мембран клеток, модуляции апоптоза, развитию окислительного стресса.
* 3, Концентрация, 2,5 * мкмоль/л 1, 0, I1 2 группа II группа III группа (контроль) Рис. 3. Содержание ТБК-РП в сыворотке крови крыс при моделировании токсического поражения печени, вызванного введением четыреххлористого углерода Примечание: * - р0,001 в сравнении с контрольной группой В ходе проведенных исследований установлено, что у животных II и III опытных групп на момент обследования наблюдался значительный дисбаланс в работе ферментативного звена антиоксидантной системы (АОС) крови. В гемолизате эритроцитов крыс II группы (7 суток от начала эксперимента), по сравнению с группой интактных животных, наблюдалось снижение активности как СОД (на 37,2%, р0,001), так и каталазы (на 57,1%, р0,001). Вследствие более выраженного ингибирования каталазы, значение коэффициента каталаза/СОД во II группе было ниже на 30,3% (р0,001) по сравнению с контролем. В крови животных больных III группы (30 суток от начала эксперимента) активность СОД снижалась на 56,2% (р0,001) по сравнению с данными в контрольной группе и на 30,2% (р0,01) по сравнению с показателями во II группе. Изменения активности каталазы носили однонаправленный характер по отношению к СОД. Так, в гемолизате эритроцитов крыс III группы активность каталазы снижалась на 60,2% (р0,001) по сравнению с данными в контрольной группе и на 7,0% (р0,001) по сравнению с показателями во группе. Значение коэффициента каталаза/СОД в II III экспериментальной группе составило 2,75±0,08 усл.ед., что на 8,3% (р0,02) ниже по сравнению с данными в контрольной группе (3,00±0,06 усл.ед.) и на 36,1% (р0,001) выше по сравнению с данными во II группе (2,09±0,08 усл.ед.).
Снижение активности СОД и каталазы в крови животных с моделью острого токсического поражения печени, по-видимому, связано с окислительной модификацией функциональных групп ферментов, возникающей под действием избыточного количества активных форм кислорода и свободных радикалов.
Образующиеся при этом конформационные перестройки молекулы фермента, диссоциация белков на субъединицы, а также увеличение скорости их деградации может быть причиной наблюдаемого нами явления. Увеличение коэффициента каталаза/СОД в III группе животных по сравнению со II группой, по нашему мнению, следует рассматривать как положительную тенденцию, направленную на восстановление сбалансированной работы ферментов первой (СОД) и второй (каталаза) линии антирадикальной защиты организма.
Исследование состояния липидного обмена на фоне интоксикации ССl4 (II и III группы) показало увеличение содержания ОХС и ХС ЛПНП, снижение концентрации ХС ЛПВП и ТАГ, а также угнетение процесса этерификации ХС (табл. 2). Следовательно, у подопытных животных наблюдалась выраженная гиперхолестеринемия, которая была связана с увеличением содержания ХС в проатерогенной фракции ЛПНП, при одновременном снижении его содержания в антиатерогенной фракции ЛПВП, что свидетельствует о формировании у лабораторных животных вторичной дислипопротеидемии IIа типа по D.S.Fredrickson [1967]. Вследствие того, что основная масса эфиров ХС образуется в крови под действием фермента лецитинхолестеринацилтрансфераза (ЛХАТ), то по соотношению ЭХС/НЭХС можно судить об активности данного фермента. Низкая активность ЛХАТ обуславливает накопление НЭХС в ЛП частицах крови, изменяя их физико-химические свойства. Так, НЭХС, накапливаясь в ЛПВП, значительно снижает их холестеринакцепторные свойства, а также нарушает обмен ЭХС между ЛП частицами, вследствие чего в комплексе ЛПНП+ЛПОНП возрастает относительное содержание НЭХС [В.С.Камышников, 2009]. Данные процессы нарушают «обратный» транспорт ХС, тем самым, задерживая его в организме животного. Снижение концентрации ТАГ в сыворотке крови подопытных животных, по-видимому, связано с блокированием синтеза эндогенных ТАГ в печени, возникающих при введении токсина в организм. Данное предположение подтверждает также факт снижения концентрации ХС ЛПОНП во II и III опытных группах. Так как ЛПОНП синтезируются в печени, и в их состав входит значительное количество ТАГ, то блокирование синтеза ТАГ приводит к уменьшению образования ЛПОНП.
Таблица 2.
Биохимические показатели липидного обмена в сыворотке крови крыс при острой интоксикации четыреххлористым углеродом (М±m) Группы животных Исследуемый I II III показатель (контрольная) (7 суток от начала (30 суток от начала эксперимента) n=25 эксперимента) n= n= ТАГ, 1,29±0,07 0,55±0,02 0,43±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, ммоль/л ОХС, 2,90±0,08 3,12±0,05 3,77±0, рII-I 0,02 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, ммоль/л ХС ЛПВП, 0,91±0,04 0,68±0,02 0,50±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, ммоль/л ХС ЛПОНП, 0,59±0,03 0,25±0,01 0,20±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, ммоль/л ХС ЛПНП, 1,40±0,08 2,18±0,06 3,08±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, ммоль/л ЭХС, 1,79±0,03 1,39±0,02 1,23±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, ммоль/л НЭХС, 1,11±0,08 1,73±0,05 2,54±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, ммоль/л ЭХС/НЭХС, 1,81±0,14 0,82±0,03 0,49±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, усл. ед.
Согласно результатам проведенного исследования у крыс II и III опытных групп имело место значительное нарушение в метаболизме белков. Так, на 7 сутки эксперимента в сыворотке крови животных, подвергнутых токсическому воздействию CCl4, наблюдалось снижение концентрации общего белка на 20,9% (р0,001) и альбумина на 24,4% (р0,001) по сравнению с контролем. На 30 сутки эксперимента содержание общего белка и альбумина увеличилось на 9,6% (р0,001) и на 15,4% (р0,001) соответственно по сравнению с результатами, полученными во II группе, но было ниже (на 13,3%, р0,001 и на 12,8%, р0,001) контрольных значений. Обращает также на себя внимание снижение концентрации глобулинов в сыворотке крови крыс II и III групп на 19,5% (р0,001) и 15,2% (р0,001) соответственно относительно контроля.
Таким образом, при токсическим воздействии ССl4 на печень крыс, у животных возникала гипопротеинемия, связанная с непосредственным повреждением гепатоцитов свободными радикалами.
При изучении содержания отдельных фракций глобулинов в сыворотке крови животных опытных групп было обнаружено наличие диспротеинемии, о чем свидетельствовало снижение фракции -глобулинов во II группе на 51,4% (р0,001) и в III – на 72,2% (р0,001) по сравнению с данными, полученными в группе интактных животных;
возрастание фракции -глобулинов на 7 сутки эксперимента на 37,0% (р0,001) и на 30 сутки – на 45,3% (р0,001) относительно контроля;
а также снижение содержания -глобулинов в сыворотке крови животных II группы на 32,7% (р0,001) по сравнению с контрольными значениями (в III опытной группе данный показатель статистически не отличался (р0,5) от данных, полученных в группе интактных крыс).
Снижение фракций - и -глобулинов, по-видимому, отражает общую тенденцию к ингибированию синтеза белков печенью под действием CCl4.
Относительное возрастание фракции -глобулинов, по нашему мнению, связано с описанным выше нарушением катаболизма ЛПНП (-липопротеидов), их задержки в кровеносном русле вследствие окисления и снижения аффинности аполипопротеина В100 к клеточным рецепторам. Увеличение содержания рассматриваемых метаболитов в крови крыс в динамике, по-видимому, следует рассматривать как положительный прогностический признак, направленный на восстановление белоксинтезирующей функции печени.
Как показали результаты исследования (табл. 3), под действием CCl4 в организме крыс наблюдалось снижение образования протеолитических ферментов желудка и поджелудочной железы.
На 7 сутки от начала эксперимента активность пепсина снизилась на 51% (р0,001), трипсина – на 77,9% (р0,001), химотрипсина – на 69,9% (р0,001) по сравнению с данными, полученными в контрольной группе. На 30 сутки от начала эксперимента наблюдалось увеличение активности протеиназ по сравнению с данными, полученными во II опытной группе. Так, активность пепсина в III группе была выше соответствующего параметра во II на 62% (р0,001), трипсина – на 54,2% (р0,001), химотрипсина - на 114,6% (р0,001). Однако активность всех изучаемых протеиназ в III экспериментальной группе была ниже контрольных значений.
Таблица Активность протеолитических ферментов слизистой оболочки желудка и ткани поджелудочной железы крыс при острой интоксикации четыреххлористым углеродом (М±m) Группы животных Исследуемый I II III показатель (контрольная) (7 суток от начала (30 суток от начала эксперимента) n=25 эксперимента) n= n= Пепсин, мг/г 1,45±0,06 0,71±0,02 1,15±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, Трипсин, мг/г 22,68±0,22 5,02±0,08 7,74±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, Химотрипсин, 1,36±0,04 0,41±0,01 0,88±0, рII-I 0,001 рIII-I 0,001;
pIII-II 0, ед/г Наиболее вероятной причиной снижения выработки протеолитических ферментов, по нашему мнению, также является свободнорадикальное повреждение органов пищеварительной системы.
Острая интоксикация CCl4 приводила к значительному изменению структуры и функции гепатоцитов, что требовало коррекции. Рядом экспериментальных и клинических работ было показано, что количество и состав липидов крови, а также клеточных мембран определяется количеством и качеством принятых с пищей жирных кислот, входящих в состав продуктов растительного и животного происхождения.
Проведенный анализ жирнокислотного состава изучаемых масел показал, что масла кукурузы и подсолнечника из насыщенных жирных кислот содержат пальмитиновую и стеариновую кислоты. Из ненасыщенных жирных кислот в данных маслах были обнаружены в наибольшем количестве олеиновая и линолевая кислоты. Оливковое масло содержало преимущественно олеиновую жирную кислоту (до 83%). Другие жирные кислоты ненасыщенные – линолевая, линоленовая, пальмитолеиновая и насыщенные – пальмитиновая, стеариновая, арахиновая были представлены в незначительных количествах. Особенностью жирнокислотного состава льняного масла явилось наличие большого количества - жирных кислот. В некоторых образцах этих масел содержание триеновой линоленовой жирной кислоты достигало 57,5%. Особый интерес представляет анализ жирнокислотного состава ранее практически не изученных масел черного и грецкого орехов. К особенностям их состава следует отнести высокое содержание линолевой кислоты (более 60%). Масло черного ореха, по сравнению с маслом грецкого ореха, содержало больше олеиновой жирной кислоты. В отличие от оливкового, масла черного и грецкого орехов содержали в значительно большем количестве полиненасыщенные линолевую и линоленовую кислоты, и значительно уступали в доле мононенасыщенной олеиновой кислоте. По содержанию линолевой жирной кислоты масла черного и грецкого орехов также превосходили масла подсолнечника и кукурузы. Основу используемых в данном исследовании фосфолипидные концентраты (эссенциале форте, эссливер форте, фосфоглив) составляли ФЛ (преимущественно ФХ), получаемые из сои. Их жирнокислотный состав представлен полиненасыщенными жирными кислотами, в основном линолевой кислотой (около 70%).
Изучение особенностей влияния на интенсивность ПОЛ, отобранных для исследования растительных масел и лекарственных препаратов, показало наличие у них антиоксидантных свойств. Исследуемые продукты достоверно снижали содержание ТБК-РП в липосомах в течение первых 12 часов окисления, но при большей длительности процесса ПОЛ выраженность антиоксидантного действия заметно снижалась, а у ретинола проявлялись прооксидантные свойства. Высокая антиоксидантная активность исследуемых продуктов на начальном этапе ПОЛ связана с наличием в структуре их компонентов ненасыщенных связей, которые перехватывают свободные радикалы - инициаторы ПОЛ, конкурируя за них с мембранными липидами и тем самым защищая последние от интенсивного окисления. По-видимому, отсутствие у растительных масел и фосфолипидных концентратов прооксидантных свойств было обусловлено наличием в их составе различных компонентов, обладающих антиоксидантными свойствами. В целом, по величине антиоксидантного эффекта исследуемые продукты можно расположить следующим образом: ретинола ацетат оливковое масло кукурузное масло подсолнечное масло эссливер форте эссенциале форте масло грецкого ореха фосфоглив масло черного ореха льняное масло.
В связи с описанными выше особенностями метаболизма изучаемых продуктов, а также обнаружением у экспериментальных животных, подвергнутых интоксикации CCl4, снижения продукции пищеварительных ферментов, возникла необходимость в изучении способности фосфолипидных и триглицеридных концентратов подвергаться гидролизу под действием липолитических ферментов пищеварительной системы. К концу третьего часа по количеству высвободившихся свободных жирных кислот исследуемые растительные масла расположились следующим образом: кукурузное масло подсолнечное масло оливковое масло масло грецкого ореха = масло черного ореха льняное масло;
фосфолипидные концентраты: эссливер форте эссенциале форте фосфоглив.
На основании изучения антиоксиданных свойств in vitro, а также способности исследуемых продуктов гидролизоваться под действием липолитических ферментов пищеварительной системы для дальнейших исследований in vivo были отобраны четыре наиболее перспективных продукта (льняное масло, масла черного и грецкого орехов, фосфоглив), обладающие наиболее выраженными антиоксидантными свойствами и наибольшей доступностью липолизу и соответственно большей способностью включаться в метаболические процессы.
Согласно проведенным исследованиям, во всех группах животных, получавших лечение растительными маслами и препаратом фосфоглив, наблюдалась положительная динамика морфологической картины печени по сравнению крысами, у которых лечение не проводилось (III опытная группа) (рис. 4).
А Б В Г Рис. 4. Восстановление балочной структуры печени крысы, подвергнутой интоксикации CCl4 под действием масла черного (А), грецкого (Б) орехов, льняного масла (B) и препарата фосфоглив (Г). Окраска гематоксилином и эозином, х Согласно проведенному нами исследованию, на фоне лечебного введения экспериментальным животным изучаемых растительных продуктов, наблюдалась общая тенденция к уменьшению активности индикаторных и экскреторных ферментов печени в сыворотке крови. Несмотря на значительное уменьшение гиперферментемии, обнаруженное во всех группах крыс, получавших лечение изучаемыми продуктами, на 30 сутки эксперимента активность ферментов крови не достигала контрольных значений.
У животных на фоне введения растительных масел и препарата фосфоглив наблюдалось снижение содержания общего билирубина в сыворотке крови преимущественно за счет его прямой фракции. Так, у животных IVА группы концентрация общего билирубина была ниже показателей III группы на 19,3% (р0,001);
IVБ – на 15,9% (р0,001);
IVВ – на 36,2% (р0,001);
IVГ – на 28,8% (р0,001).
Таким образом, все исследуемые масла (черного и грецкого орехов, льна), а также препарат фосфоглив проявили выраженные гепатопротективные свойства, способствовали уменьшению выраженности цитолитического, холестатического и токсического синдромов у лабораторных животных. По степени выраженности гепатопротективных свойств растительные продукты можно расположить в следующем порядке: фосфоглив льняное масло масло черного ореха = масло грецкого ореха.
Согласно полученным данным, в сыворотке крови наиболее выраженное снижение содержания ТБК-РП относительно группы сравнения было зарегистрировано в IVГ группе (на 34,9%, р0,001). В IVА уровень ТБК-РП снизился на 17,6% (р0,001), в IVБ – на 21,9% (р0,001), в IVВ – на 11,1% (р0,001) по сравнению с данными, полученными у крыс III группы. Изменение активности ферментов антирадикальной защиты эритроцитов в группах, IVА, IVБ, IVВ, IVГ носили однонаправленный характер: наблюдалось выраженное увеличение активности как СОД, так и каталазы по сравнению с данными, полученными в группе III.
Биохимические изменения, протекающие в крови, сопоставимы с изменениями в клетках других органов, поэтому снижение содержания ТБК-РП в плазме крови, а также выраженная тенденция к нормализации работы ферментов первой и второй линий антирадикальной защиты эритроцитов во всех опытных группах, получавших лечение растительными продуктами, отражает процесс инактивации процессов ПОЛ в периферических тканях и органах. Наиболее выражен этот эффект был в группе получавшей в качестве лечебного средства льняное масло (IVГ группа).
Согласно проведенному нами исследованию, уровень ТАГ повышался во всех опытных группах по сравнению с группой сравнения (III группа). Однако максимальное увеличение этого показателя наблюдалось в IVА и IVГ группах (в среднем на 195%, р0,001 и 202%, р0,001 соответственно по сравнению с III опытной группой) и статистически не отличались от данных, полученных в контрольной группе.
При анализе содержания ОХС в сыворотке крови крыс опытных групп, обращает на себя внимание значительное его снижение в IVГ группе (на 17,5% по сравнению с группой сравнения). Содержание ОХС в группах IVА, IVБ было сопоставимо друг с другом и ниже, чем в III (на 14,1%, р0,001 и 13,0%, р0, соответственно), однако выше, чем в группе IVГ. Содержание ОХС в IVВ группе было ниже значения данного показателя в III на 6,6% (р0,001), но выше, чем в других опытных группах.
При анализе распределения ХС между ЛП частицами отмечается снижение его содержания в проатерогенной фракции ЛПНП в группах IVА, IVБ, IVВ, IVГ (на 40,6%, р0,001;
36,7%, р0,001;
20,5%, р0,001;
и 47,4%, р0,001 соответственно) по сравнению с группой крыс не получавших лечение. Наиболее выраженный эффект снижения ХС ЛПНП наблюдался в группе IVГ. Наибольшее содержание ХС ЛПОНП было зарегистрировано в IVА (0,59±0,02 ммоль/л) и IVГ (0,59±0,02 ммоль/л) группах, затем, в порядке уменьшения параметра, следовали группы IVБ (0,54±0,02 ммоль/л) и IVВ (0,43±0,02 ммоль/л). Содержание холестерина в антиатерогенной фракции ЛПВП было максимальным в группе IVГ (0,90±0,02 ммоль/л), далее следовали группы IVА (0,83±0,03 ммоль/л), IVБ (0,79±0,02 ммоль/л) и IVВ (0,64±0,02 ммоль/л).
Таким образом, в группах IVА, IVБ, IVВ, IVГ биохимические сдвиги носили противоположный характер, по отношению к крысам с моделью токсического поражения печени, не получавших лечения. Наиболее выраженные эффекты, направленные на восстановление липидного обмена, были в группе животных, получавших в качестве лечебного средства льняное масло (IVГ группа).
Как показали результаты исследования, у экспериментальных животных под действием растительных масел и лекарственного препарата фосфоглив наблюдалось увеличение содержания общего белка в сыворотке крови, как за счет фракции альбуминов, так и за счет глобулинов. Изучение содержания отдельных фракций глобулинов в сыворотке крови животных опытных групп на фоне терапии гепатопротекторами показало увеличение фракции -глобулинов в IVА группе на 54,8% (р0,001), в IVБ – на 47,3% (р0,001), в IVВ – на 69,5% (р0,001), в IVГ – на 100,6% (р0,001) по сравнению с данными, полученными в III группе. Фракция глобулинов на фоне лечения уменьшилась в группе IVВ – на 14,7% (р0,001), в IVГ – на 27,0% (р0,001) по сравнению с данными, полученными в группе сравнения.
Содержание -глобулинов в IVА и IVБ группах статистически не отличалось от III опытной группы. Содержание -глобулинов в сыворотке крови животных IVА группы было выше данных, полученных в группе сравнения на 7,3% (р0,05), в IVВ – на 10,6% (р0,01), в IVГ – на 7,9% (р0,02). В группе IVБ концентрация глобулинов статистически не отличалась от III группы.
Согласно полученным результатам (табл. 4), у животных IVА, IVБ, IVВ, IVГ опытных групп, по сравнению с группой III, наблюдалось увеличение содержания протеолитических ферментов. В группах животных получавших лечение маслом черного ореха и льняным маслом содержание пепсина достигло уровня интактных крыс, под действием льняного масла также нормализовался синтез химотрипсина.
Таблица Активность протеолитических ферментов слизистой оболочки желудка и ткани поджелудочной железы животных с моделью острого токсического поражения печени, находящихся на лечении исследуемыми гепатопротекторами (М±m) Пепсин, Трипсин, Химотрипсин, Группы крыс n мг/г мг/г ед/г 1,33±0,02 18,67±0,13 1,27±0, А рIVA-III0,001 рIVA-III0,001 рIVA-III0, IV (масло черного ореха) рIVA-I0,5 рIVA-I0,001 рIVA-I0, 1,31±0,02 18,95±0,21 1,26±0, Б рIVБ-III0,001 рIVБ-III0,001 рIVБ-III0, IV (масло грецкого ореха) рIVБ-I0,05 рIVБ-I0,001 рIVБ-I0, 1,38±0,02 20,11±0,17 1,28±0, В рIVВ-III0,001 рIVВ-III0,001 рIVВ-III0, IV (фосфоглив) рIVВ-I0,01 рIVВ-I0,001 рIVВ-I0, 1,36±0,01 19,47±0,17 1,29±0, Г рIVГ-III0,001 рIVГ-III0,001 рIVГ-III0, IV (льняное масло) рIVГ-I0,5 рIVГ-I0,001 рIVГ-I0, III (ССl4, 30 суток от 25 1,15±0,02 7,74±0,09 0,88±0, начала эксперимента) I (контрольная) 25 1,45±0,06 22,68±0,22 1,36±0, Таким образом, под действием исследуемых масел и препарата фосфоглив наблюдалась тенденция к восстановлению белоксинтезирующей функции печени, а также продукции протеолитических ферментов ЖКТ. Наиболее выражены обнаруженные изменения были зарегистрированы в группе IVГ, т.е. у крыс с интоксикацией CCl4 получавших льняное масло.
ВЫВОДЫ У крыс, с моделью острого токсического поражения печени, вызванного 1.
воздействием четыреххлористого углерода, наблюдается формирование синдромов цитолиза, внутрипеченочного холестаза, активация процессов перекисного окисления липидов, формирование вторичной дислипидемии и дислипопротеидемии, абсолютной гипопротеинемии, диспротеинемии, а также снижение образования пищеварительных протеаз.
Проведенный анализ химического состава изучаемых липофильных 2.
продуктов растительного происхождения, с известными и предполагаемыми гепатопротективными свойствами, показал наличие в их составе значительного количества моно- и полиненасыщенных жирных кислот, жиро- и водорастворимых витаминов.
Изучение интенсивности высвобождения свободных жирных кислот 3.
под действием липолитических пищеварительных ферментов, а также особенностей влияния на активность свободнорадикального окисления отобранных для исследования растительных масел и лекарственных препаратов в опытах in vitro показало наибольшую способность к гидролизу и наличие выраженных антиоксидантных свойств у льняного масла, масел черного и грецкого орехов, препарата фосфоглив.
Исследуемые масла черного и грецкого орехов, льна, а также препарат 4.
фосфоглив проявили выраженные гепатопротективные свойства, регистрируемые на основании изменения морфологической картины печени, снижения активности ряда индикаторных (АЛТ, АСТ) и экскреторных (-ГТП, ЩФ) ферментов, а также снижения концентрации билирубина в сыворотке крови крыс. Наиболее выраженный гепатопротективный эффект был обнаружен у препарата фосфоглив и льняного масла.
Применение исследуемых липофильных продуктов для лечения 5.
животных с моделью острого токсического поражения печени способствовало снижению интенсивности процессов липопероксидации, нормализации работы ферментов антирадикальной защиты, а также характеризовалось тенденцией к восстановлению выработки пищеварительных протеиназ, нормализации протекания липидного, белкового обменов.
Использование льняного масла, масел черного и грецкого орехов, а 6.
также препарата фосфоглив для комплексного лечения токсического поражения печени является мощным и эффективным патогенетическим фактором в терапии данного состояния.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ В ПРАКТИКУ Определение в сыворотке крови больных токсическим поражением 1.
печени интегральных биохимических показателей ЭХС/НЭХС, каталаза/СОД предлагается использовать в качестве ранних, достоверных диагностических и прогностических тестов для оценки тяжести метаболических нарушений и контроля лечения при остром токсическом поражении печени.
Для комплексного патогенетического лечения больных токсическим 2.
поражением печени целесообразно использовать масла льна, черного и грецкого орехов.
Список научных работ, опубликованных по теме диссертации *1. Оценка степени выраженности окислительного стресса при токсическом поражении печени и методы его коррекции / Е.Е. Есауленко, М.И. Быков, А.А. Ладутько, С.С. Бачко, М.А.
Хильчук, И.М. Быков, Е.В. Щербакова // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т.
XVI, №1. - С.261-262.
*2. Оценка степени выраженности метаболических нарушений в крови при экспериментальном токсическом гепатите и разработка путей их коррекции / И.М. Быков, А.А.
Ладутько, Е.Е. Есауленко, М.И. Быков, С.С. Бачко, М.А. Хильчук // Кубанский научный медицинский вестник. - 2009. - № 3 (108). - С.21-26.
3. Особенности антиоксидантного действия масла ореха черного (Juglands nigra L.) в условиях токсического поражения печени / С.С. Бачко, Е.Е. Есауленко, М.А. Хильчук, М.И.
Быков, А.А. Ладутько // Научные труды III съезда физиологов СНГ. - Ялта, Украина, 2011. - С.
175-176.
4. Особенности изменения липопротеинового спектра эритроцитов при экспериментальном токсическом гепатите / Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, А.А. Ладутько, М.И.
Быков, М.А. Хильчук, О.В. Дьякова // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2010. - Т.XX, № 1. Приложение №35. - С.91.
5. Изменения липидного спектра мембран эритроцитов при остром токсическом поражении печени, вызванном интоксикацией четыреххлористым углеродом / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, А.А. Ладутько // XVII Конгресс "Гепатология сегодня". - Москва, 2012. - С.31.
6. Влияние интоксикации четыреххлористым углеродом на показатели белкового обмена в эксперименте / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, А.А. Ладутько, И.М. Быков // XVII Конгресс "Гепатология сегодня". - Москва, 2012. - С.32.
7. Экспериментальная модель токсического поражения печени и способы ее коррекции / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, А.А. Ладутько, И.М. Быков // Аллергология и иммунология. 2012. - Т. 13, №1. - С.131.
8. Влияние некоторых растительных масел на интенсивность протекания процессов свободнорадикального окисления в крови при моделировании острого токсического поражения печени / И.М. Быков, М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, А.А. Ладутько, М.И. Быков // Аллергология и иммунология. - 2012. - Т. 13, №1. - С.132.
*9. Модификация липидного спектра мембран эритроцитов при экспериментальном токсическом поражении печени и возможности его коррекции растительными маслами / М.А.
Хильчук, Е.Е. Есауленко, А.А. Ладутько, И.М. Быков, Н.Р. Данилова // Кубанский научный медицинский вестник. - 2012. - № 1 (130) - С.177-181.
10. Хильчук, М.А. Влияние растительных масел на активность ряда ферментов пищеварительной системы крыс в условиях острой интоксикации четыреххлористым углеродом / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2012. - Т.XXII, № 5. Приложение №40. С.135.
11. Изменение активности пищеварительных протеиназ в условиях острой интоксикации четыреххлористым углеродом / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков, Н.Р.
Данилова // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2012. Т.XXII, № 5. Приложение №40. - С.135.
*12. Хильчук, М.А. Состояние системы про-/антиоксиданты и активность пищеварительных протеиназ у крыс при острой интоксикации четыреххлористым углеродом до и после коррекции растительными маслами / М.А. Хильчук, Е.Е. Есауленко, И.М. Быков [электронный ресурс] // Современные проблемы науки и образования. - 2013. - №1;
URL:
http://www.science-education.ru/107-8175 (дата обращения: 22.01.2013).
* - работа, опубликована в журнале, включенном Высшей аттестационной комиссией при Министерстве образования и науки Российской Федерации в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий.
Список сокращений – аланинаминотрансфераза – супероксиддисмутаза АЛТ СОД – аспартатаминотрансфераза – триацилглицерины АСТ ТАГ – липопротеиды – тиобарбитуровая кислота ЛП ТБК гаммаглутамиламино – – щелочная фосфатаза -ГТП ЩФ трансфераза лецитинхолестеринацил – – ТБК-реактивные продукты ЛХАТ ТБК-РП трансфераза липопротеиды высокой – – фосфатидилхолин ЛПВП ФХ плотности липопротеиды низкой – – холестерин ЛПНП ХС плотности липопротеиды очень низкой – – эфиры холестерина ЛПОНП ЭХС плотности неэтерифицированный – – гемоглобин НЭХС Hb холестерин общий холестерин ОХС перекисное окисление – ПОЛ липидов полиненасыщенные жирные – ПНЖК кислоты Хильчук Максим Александрович МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ И ВОЗМОЖНОСТИ ИХ КОРРЕКЦИИ (экспериментальное исследование) 03.01.04 – биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Подписано в печать 24.01.2013г.
Набор компьютерный. Гарнитура Times. Усл. П.л. 1, Тираж 100 экз.
Отпечатано на копировально-множительной технике Типография ООО «редакция газеты «Всякая Всячина».
350020, г.Краснодар, ул.Бабушкина, 252, т. 259-41-59.