Лаборатории молекулярной диагностики и геномной дактилоскопии фгуп “государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов” (фгуп “госнии генетика”). научны
На правах рукописи
Работа выполнена в лаборатории молекулярной диагностики и геномной дактилоскопии ФГУП “Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов” (ФГУП “ГосНИИ генетика”).
Научный консультант: доктор биологических наук
, профессор Носиков Валерий Вячеславович.
ШЕСТАКОВ АЛЕКСЕЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ
Научный консультант: кандидат биологических наук Савостьянов Кирилл Викторович ИССЛЕДОВАНИЕ АССОЦИАЦИИ РЯДА ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТОМ
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Фаворова Ольга Олеговна кандидат биологических наук 03.00.03 – молекулярная биология Бабенко Ольга Владимировна
Ведущая организация: Институт Молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардта РАН.
Защита состоится «21» декабря 2006г. в часов на заседании Диссертационного совета Д.217.013.01 при Государственном научно
АВТОРЕФЕРАТ
исследовательском институте генетики и селекции промышленных диссертации на соискание ученой степени микроорганизмов по адресу: 117545, Москва, 1-й Дорожный проезд, 1.
кандидата биологических наук
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «ГосНИИ генетика».
Реферат разослан « » ноября 2006.г.
Ученый секретарь Диссертационного совета, Москва – кандидат биологических наук Заиграева Г.Г.
1
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
осложнений в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного больного.
Актуальность проблемы. Прогрессирование хронических заболеваний Цель и задачи работы. Целью данной работы явилось изучение ассоциации почек и поиск способов предотвращения их развития, а также замедления ряда полиморфных маркеров генов-кандидатов с развитием хронического прогрессирования остается одной из наиболее актуальных проблем нефрологии. гломерулонефрита. Это были полиморфные маркеры внутри генов, кодирующих В общей сложности, по данным крупных европейских медицинских центров, подоцин (NPHS2), нефрин (NPHS1), антагонист рецептора интерлейкина наследственные гломерулопатии занимают от 6,5 до 15% среди патологий, (IL1RN), интерлейкин 4 (IL4), интерлейкин 13 (IL13), поверхностный антиген ведущих к хронической почечной недостаточности (ХПН). Связь той или иной цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA4), ген–супрессор опухолей (TP53), главный патологии почек с генетическими дефектами может помочь выработать тактику регулятор супрессора опухолей р53 (MDM2) и поли(ADP-рибозил)полимеразу терапии этих заболеваний. (ADPRT1). Кроме того использовались микросателлитные маркеры D6S2414 и Роль генетики в развитии нефрологии состоит не только в выявлении D6S1271, расположенные рядом с генами HLA класса II.
генетической компоненты заболевания, но и в изменении представлений о так Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
называемых приобретенных заболеваниях, появлении новых концепций 1. Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов механизмов развития болезни, дополнении информации о предохраняющих и NPHS2, NPHS1, IL1RN, IL4, IL13, CTLA4, TP53, MDM2 и ADPRT1, а также, предрасполагающих факторах в развитии заболеваний, а также формировании полиморфных микросателлитов D6S2414 и D6S1271 в группе больных ХГН и в гипотезы о совокупности экзогенных и эндогенных факторов, приводящих к группе здоровых доноров.
болезни. 2. Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов Для многофакторных заболеваний характерен сложный механизм полиморфных маркеров, расположенных в вышеуказанных генах–кандидатах, и формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических двух полиморфных микросателлитов в области HLA в исследованных выборках факторов с факторами внешней среды. Однако для каждого конкретного для выявления их ассоциации с развитием ХГН и определения вклада данных заболевания можно выделить группу, так называемых генов-кандидатов, продукты генов в наследственную предрасположенность к патологии.
которых могут быть прямо или косвенно вовлечены в развитие данной патологии. Научная новизна работы. В этой работе впервые в мире исследована Одним из наиболее перспективных направлений в современной ассоциация полиморфных маркеров A(–601)G и Arg229Gly гена NPHS2, Glu117Lys молекулярной генетике заболеваний является поиск полиморфных маркеров в гена NPHS1, VNTR во втором интроне гена IL1RN, С(-590)Т гена IL4, G4257A гена генах-кандидатах и выявление их ассоциации с наследственными заболеваниями. IL13, Ala17Thr гена CTLA4, Pro72Arg гена TР53, G(–309)T гена MDM2, Val762Ala и При исследовании ассоциации сравнивают распределение частот аллелей Leu54Phe гена ADPRT1, полиморфных микросателлитов D6S2414 и D6S1271 у и генотипов полиморфного маркера, расположенного внутри или рядом с геном- русских пациентов с ХГН, проживающих в г. Москве.
кандидатом, в группах больных и здоровых доноров. Наличие достоверных Практическая ценность работы. Выявление аллельных вариантов различий в распределении аллелей и генотипов свидетельствует об ассоциации полиморфных маркеров различных генов-кандидатов, обуславливающих полиморфного маркера с заболеванием. повышенный генетический риск развития хронического гломерулонефрита, создает базу для разработки диагностических методов прогнозирования течения Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка заболевания.
индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии и ее 3 Апробация работы. Диссертационная работа была представлена на Идентификация аллелей полиморфных маркеров проводилась с заседании Секции молекулярной биологии Ученого Совета ФГУП «ГосНИИ использованием полимеразной цепной реакции, дальнейшего расщепления Генетика» 25 Октября 2006 г. фрагментов ДНК рестриктазами и электрофоретического разделения фрагментов Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, ДНК в 8-12%-ном полиакриламидном геле или в 2-3% -ном агарозном геле.
включая 3 статьи, а также тезисы докладов и сообщений на конференциях. 2. Изучение ассоциации полиморфных маркеров A(–601)G и Arg229Gly гена Структура диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: NPHS2 с ХГН.
введение, обзор литературы, описание использованных материалов и методов, Интегральный мембранный белок подоцин с молекулярной массой 42 кДа результаты и их обсуждение, а также выводы и список литературы. Материалы относится к стоматиновому протеиновому семейству и на 47% гомологичен диссертации изложены на 94 страницах машинописного текста и содержат стоматину человека. В основном подоцин экспрессируется в гломерулярных таблиц и 11 рисунков. подоцитах и в меньшей степени - в яичках, фетальных тканях сердца и печени (Вoute et al, 2000). Подоцин, подобно «шпильке», замыкает нефрин в подоцитах и СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
тем самым входит в единую структуру щелевой диафрагмы (ЩД) (Roselli et al, 1.Формирование группы больных с хроническим гломерулонефритом и 2002), а также связан с липидными мостиками последней (Schwarz et al, 2001).
методы исследования.
Роль подоцина в формировании гломерулопатий стало возможным изучить после Общеклиническое обследование и формирование выборки больных, идентификации гена, кодирующего этот белок. Ген подоцина (NPHS2) расположен проводилось в клинике нефрологии, внутренних и профессиональных болезней в хромосомной области 1q25-q31 (Huber et al, 2003). В пятом экзоне гена NPHS им. Е.М. Тареева ММА им. И. М. Сеченова, в Детской Городской больнице № расположен однонуклеотидный полиморфизм A/G, в положении 755 от точки им. Н.Ф. Филатова, а также в Научном Центре Здоровья Детей РАМН.
начала транскрипции, которому соответствует полиморфизм аминокислотных Морфологическое исследование ткани почки, полученной с помощью остатков Arg/Gly в положении 229.
чрезкожной биопсии, проводилось на кафедре патологической анатомии ММА им. По данным Перейры и соавторов (2004) носительство гетерозиготного И. М. Сеченова. При определении морфологического варианта ХГН использовали генотипа Arg229Gly коррелирует с микроальбуминурией у людей, не имеющих классификацию В. В. Серова (1977 г.). заболеваний почек (Pereira et al, 2004). В ряде случаев спорадически возникший Обследовано 370 человек: 290 больных ХГН и 80 человек без заболеваний ФСГС во взрослом состоянии был ассоциирован с носительством гетерозиготного почек и артериальной гипертензии, составивших контрольную группу. Оценка генотипа Arg/Gly. Считается, что у этих людей достаточно полно сохранена клинических особенностей ХГН проводилась у больных на основании данных функция подоцина в детском возрасте, но в дальнейшем она утрачивается, анамнеза. Она включала анализ дебюта ХГН, клинических и морфологических приводя к развитию нефротического синдрома.
вариантов нефрита с характеристикой лабораторных показателей на момент В группах ХГН и здоровых доноров частота аллеля Gly резко преобладала первого обследования и на момент биопсии почки, а также анализ течения ХГН. над частотой аллеля Arg. Наиболее распространенным генотипом в обеих группах Анализ нуклеотидных последовательностей интересующих нас хромосомных были гомозиготы Gly/Gly (0,87 и 0,89 в группе больных хроническим областей осуществляли с помощью системы NCBI в сети Интернет гломерулонефритом и здоровых доноров, соответственно). Гомозиготы Arg/Arg не (www.ncbi.nlm.nih.gov), используя при этом следующие разделы: MapView наблюдались ни в группе ХГН, ни в группе здоровых доноров. В группе больных с (расположение этих полиморфных маркеров на хромосоме), dbSNP (информация ХГН было отмечено незначительное увеличение содержания гетерозигот Arg/Gly, об однонуклеотидных полиморфизмах). Для подбора праймеров и рестриктаз однако оно носило недостоверный характер (табл. 1).
использовали пакеты программ DNAStar и VectorNTI 9.0.
5 Таблица 1. Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов выявил как Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Arg229Gly гена снижение доли генотипа A/G, так и возрастание содержания гомозигот G/G в NPHS2 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе группе больных по сравнению с контрольной группой. Эти различия статистически здоровых доноров (ЗД). достоверны и свидетельствуют об ассоциации данного полиморфного маркера с хроническим гломерулонефритом. При этом носительство гетерозиготного Частота аллелей и генотипов генотипа A/G связано с устойчивостью к развитию ХГН (OR = 0,49;
CI 0,27 – 0,88), Аллели и генотипы p ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) тогда как гомозиготность по аллелю G повышает риск развития патологии (OR = Аллель Arg 0,065 0,053 НД 1,99;
CI 1,09-3,63).
Аллель Gly 0,935 0,947 НД 3. Изучение ассоциации полиморфного маркера Glu117Lys гена NPHS1 с ХГН.
Генотип Arg/Arg - - Генотип Arg/Gly 0,130 0,105 НД Нефрин является основным белком щелевой диафрагмы (ЩД), он связывает Генотип Gly/Gly 0,870 0,895 НД два рядом расположенных подоцита (Holzman et al, 1999). Обнаружение нефрина в составе ЩД дало новое понимание клубочкового фильтра и роли ЩД как Полученные данные свидетельствуют об отсутствии ассоциации заключительного фильтрационного барьера для прохождения белка (Kestila et al, полиморфного маркера Arg229Gly гена NPHS2 с развитием ХГН. 1998).
Второй полиморфный маркер расположен в промоторном участке гена Нефрин – это трансмембранный белок, который относится к NPHS2 и также представляет собой однонуклеотидный полиморфизм A/G в суперсемейству иммуноглобулинов с адгезивными функциями. Он состоит из положении –601 п.н. от участка инициации транскрипции. В обеих группах аминокислотного остатка и его молекулярная масса составляет 185 кДа (Lenkkeri отмечено преобладание содержания аллеля G, при этом наиболее частыми et al, 1999). Доказательством важной роли нефрина в клубочковой фильтрации генотипами являлись: в группе больных гомозиготные генотипы G/G, а в группе служат исследования, проведенные на крысах. Инъекция моноклональных контроля гетерозиготные генотипы A/G (0,47 и 0,59 в группах ХГН и здоровых антинефриновых антител, приводила к развитию протеинурии (Orikasa et al, 1988).
доноров, соответственно). Гомозиготные генотипы A/A наблюдались крайне редко Эти данные подтверждают значимость нефрина как обязательного компонента – их доля в выборке больных и здоровых доноров составляла 0,10 и 0,09, щелевой мембраны, формирующей фильтрационный барьер гломерул соответственно (табл. 2). (Tryggvason et al, 1999). Нарушения в структуре как самого нефрина, так и Таблица 2. ассоциированного с ним белкового комплекса приводят к изменениям Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера A(-601)G гена архитектоники подоцита - сглаживанию «ножек» и протеинурии (Вoute et al, 2000).
NPHS2 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе В 1998 г. Кестила и соавт. обнаружили, что ген NPHS1, расположенный на здоровых доноров (ЗД). хромосоме 19, ответственен за развитие врожденного нефротического синдрома финского типа (Kestila et al, 1998). Ген NPHS1 содержит 29 экзонов. В финской Частота аллелей и генотипов Аллели и p CI OR популяции обнаружены две мутации: делеция в экзоне 2 и нонсенс-мутация в генотипы ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) экзоне 26. Обе мутации приводят к нарушению синтеза нефрина.
АллельA 0,31 0,39 НД - В экзоне 3 гена NPHS1 (положение 349) расположен однонуклеотидный Аллель G 0,68 0,60 НД - полиморфизм A/G, которому соответствует полиморфизм аминокислотных Генотип A/A 0,10 0,09 НД - остатков Glu/Lys в положении 117. Ланденкари и соавт. обнаружили, что этот ГенотипA/G 0,41 0,59 0,019 0,49 0,27-0, ГенотипG/G 0,47 0,31 0,027 1,99 1,09-3,63 полиморфный маркер (G349A) ассоциирован как с той формой ХГН, что поддается терапии стероидами при минимальных изменениях нефротического 7 синдрома (форма зависимоя от стероидов), так и с другой формой ХГН, при цитокинов начинается в ответ на проникновение в организм патогенов, антигенное которой стероиды не эффективны (форма устойчивая к действию стероидов) раздражение или повреждение тканей. Согласно данным последних лет, (Landenkari et al, 2004). полиморфизм генов, кодирующих цитокины, оказывает существенное влияние на Таблица 3. предрасположенность к гломерулонефриту и способу его лечения, в частности на Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Glu117Lys гена цитокиновую и антицитокиновую терапию.
NPHS1 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе Антагонист рецептора интерлейкина-1 блокирует связывание интерлейкинов здоровых доноров (ЗД). 1 и 1 (IL-1 и IL-1) с рецептором. Ингибирующее действие антагониста имеет важное физиологическое значение в организации иммунного ответа и в развитии Частота аллелей и генотипов воспалительного процесса при различных патологиях. Ген IL1RN картирован в Аллели и генотипы p ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) хромосомной области 2q14.2 (Patterson et al, 1993). Его продуктами являются две Аллель Lys 0,35 0,39 НД изоформы антагониста, образующиеся в результате альтернативного сплайсинга.
Аллель Glu 0,65 0,61 НД Одна из них остается в цитоплазме, а другая секретируется наружу. Секреция Генотип Lys/Lys 0,11 0,14 НД антагониста осуществляется гепатоцитами, регулируется цитокинами на стадиях, Генотип Lys/Glu 0,47 0,51 НД предшествующих воспалительной реакции и происходит во время острой фазы Генотип Glu/Glu 0,41 0,35 НД воспалительного процесса (Gabay et al, 1997).
В интроне 2 гена IL1RN расположен VNTR, состоящий из тандемных В группах ХГН и здоровых доноров частота аллеля Glu резко преобладала повторов длиной 86 п.н. Минисателлит включает 5 аллелей, из которых наиболее над частотой аллеля Lys, также как и встречаемость гомозигот Glu/Glu - над распространены аллели с четырьмя (IL1RN*4) и двумя (IL1RN*2) повторами встречаемостью генотипа Lys/Lys (табл. 3). При этом различия в распределении (Tarlow et al., 1993). При этом аллель IL1RN*2 является маркером риска многих аллелей и генотипов между двумя группами были незначительными и носили хронических заболеваний, сопровождающихся воспалительным процессом: язвы недостоверный характер.
кишечника (Mansfield et al, 1994), системной красной волчанки (Иллариошкин и Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии ассоциации соавт., 1995), сепсиса (Fang et al, 1999) и других. Противоречивы данные о роли полиморфного маркера Glu117Lys гена NPHS1 с развитием хронического гена IL1RN в развитии таких аутоиммунных заболеваний как ревматоидный артрит гломерулонефрита. Возможно, отсутствие корреляции между нашими данными, и (Tjernstrom et al, 1999) и базедова болезнь (Blakemore et al, 1995). Показана данными, полученными Ланденкари с соавт. (Landenkari et al, 2004), связано с ассоциация аллеля IL1RN*2 с повышенным риском поражения почек при СД типа различиями в формировании группы больных.
1 (Blakemore et al, 1996).
4. Изучение ассоциации полиморфного минисателлита, расположенного в При анализе контрольной выборки (80 человек) было выявлено 3 аллеля интроне 2 гена IL1RN, с ХГН. длиной 240, 410 и 495 п.н. (табл. 5). В группе больных ХГН встречались 4 аллеля Цитокины представляют собой группу полипептидных медиаторов, размером 240, 326, 412, 495 п.н. Наибольшими частотами в группах больных и участвующих в формировании и регуляции защитных реакций организма. В контроля обладали аллели с 2 (0,273 и 0,290) и 4 (0,699 и 0,685) повторами первую очередь они регулируют развитие местных защитных реакций в тканях с соответственно.
участием различных типов клеток крови, эндотелия, соединительной ткани и Из 10 возможных генотипов нам удалось обнаружить 6. В группах больных и клеток эпителия. Гиперпродукция цитокинов ведет к развитию системной здоровых доноров преобладали гетерозиготные генотипы 2/4 (0,481 и 0,419) и воспалительной реакции и может служить причиной развития ряда гомозиготные генотипы 4/4 (0,435 и 0,468), соответственно (табл. 4).
патологических состояний, в частности, гломерулонефрита. Экспрессия генов 9 Таблица 4. В последнее десятилетие большое внимание уделяется изучению участков Распределение аллелей и генотипов полиморфного минисателлита в гене в промоторах, регулирующих экспрессию генов IL4 и IL13. Предполагается, что IL1RN в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе ряд полиморфных маркеров этих генов ассоциирован с некоторыми атопическими здоровых доноров (ЗД). заболеваниями и повышенной концентрацией IgE (Liu et al, 2003). При изучении полиморфных маркеров гена IL4 и его рецептора Кобаяши и соавт. (Kobayashi et Частота аллелей и генотипов al, 2003) обнаружили ассоциацию аллеля С полиморфного маркера С(-590)Т в Аллели и генотипы p ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) промоторной области гена с нефротическим синдромом, чувствительным к Аллель 2 0,273 0,290 НД действию стероидов. Ачэрья и соавт.( Acharya et al, 2005) изучая ассоциацию Аллель 3 0,005 0,000 НД полиморфных маркеров генов IL4 и IL13 получили достоверное увеличение Аллель 4 0,699 0,685 НД частоты встречаемости генотипа ТТ полиморфного маркера С(-590)Т гена IL4 и Аллель 5 0,023 0,024 НД достоверное снижение частоты встречаемости генотипа GG полиморфного Генотип 2/2 0,028 0,065 НД маркера G4257A гена IL13 в группе детей с нефротическим синдромом с Генотип 2/4 0,481 0,419 НД Генотип 2/5 0,009 0,032 НД минимальными изменениями. Однако Пэрри и соавт. (Parry et al, 1999), не Генотип 3/4 0,009 0,000 НД обнаружили никаких ассоциаций между полиморфными маркерами генов IL4, Генотип 4/4 0,435 0,468 НД рецептора интерлейкина 4 и хроническим гломерулонефритом. Столь Генотип 4/5 0,037 0,016 НД разноречивые данные обусловили необходимость нашего исследования по изучению ассоциации полиморфного маркера С(-590)Т гена IL4 и полиморфного Сравнительный анализ с использованием точного критерия Фишера не маркера G4257A гена IL13 с хроническим гломерулонефритом.
выявил достоверных различий в частотах аллелей и генотипов полиморфного минисателлита гена IL1RN между группой здоровых доноров и группой ХГН, При исследовании распределения аллелей и генотипов полиморфного следовательно, полиморфный минисателлит во втором интроне гена, IL1RN, не маркера С(-590)Т гена IL4 статистически достоверных различий между двумя ассоциирован с хроническим гломерулонефритом.
группами обнаружено не было, что свидетельствует об отсутствии ассоциации 5. Изучение ассоциации полиморфных маркеров С(-590)Т гена IL4 и G4257A маркера с заболеванием (табл. 5.).
гена IL13 с ХГН.
Таблица 5.
В настоящее время установлено, что одной из возможных причин развития Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера С(-590)Т гена хронического гломерулонефрита является повышенный синтез интерлейкинов 4 и IL4 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе 13 (Laurent et al, 1987). При этом доказано, что при ХГН уровень экспрессии гена здоровых доноров (ЗД).
IL13 выше уровня экспрессии гена IL4 (Kimata et al, 1995). Оба эти цитокина играют важную роль в развитии атопических заболеваний и определяют высокую Частота аллелей и генотипов Аллели и генотипы p концентрацию IgE в крови. Высокая концентрация IgE и IgG4 у больных выявлена ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) во многих исследованиях и, по мнению Кимата и соавторов (Kimata et al, 1995), Аллель С 0,31 0,26 НД обусловлена повышенной экспрессией в Т-клетках интерлейкинов 4 и 13. Более Аллель Т 0,69 0,74 НД того, обнаружены рецепторы к этим цитокинам на подоцитах. Выраженная Генотип С/С 0,5 0,6 НД экспрессия этих рецепторов при ХГН подтверждает роль последних в патогенезе Генотип С/Т 0,64 0,50 НД Генотип Т/Т 0,31 0,44 НД данного заболевания.
При исследовании распределения аллелей и генотипов полиморфного 11 маркера G4257A гена IL13 было обнаружено как увеличение частоты достоверно большей частоты выявления антигенов HLA AW19, B8, В14, В41 у встречаемости генотипа АА, так и уменьшение частоты встречаемости генотипа больных ХГН, позволяет обсуждать возможный вклад генов МНС класса II в AG у больных ХГН по сравнению с группой здоровых доноров (табл. 6.) возникновение заболевания и в определение особенностей его развития и Таблица 6. течения.
Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера G4257A гена На основании этих исследований можно предполагать, что область HLA IL13 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе вовлечена в развитие хронического гломерулонефрита. Для изучения ассоциации здоровых доноров (ЗД). локуса HLA с ХГН мы использовали тетрануклеотидные полиморфные маркеры, расположенные среди генов МНС класса II. Это микросателлитные маркеры Частота аллелей и генотипов Аллели и p генотипы CI OR D6S2414 и D6S1271. Оба маркера состоят из повторов GATA. При сравнительном ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) Аллель A 0,84 0,75 НД - - анализе распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера D6S2414 в Аллель G 0,16 0,25 НД - - группе больных ХГН и в группе здоровых доноров было обнаружено 6 аллелей ГенотипG/G 0,9 0,6 НД - размером от 164 до 184 п.н., включающих от 6 до 11 повторов (табл. 7).
ГенотипA/G 0,13 0,39 0,0011 0,18 0,06-0, У больных ХГН достоверно повышена частота аллеля 9 по сравнению с Генотип A/A 0,78 0,55 0,0117 3,12 1,28-7, контрольной группой. Этот аллель обладает наибольшим значениям ОR и, таким Данные различия являлись статистически достоверными, что образом, ассоциирован с повышенным риском развития ХГН. В то же время, у свидетельствует об ассоциации полиморфного маркера G4257A гена IL13 с ХГН. больных достоверно снижено содержание аллеля 10, характеризующегося При этом носительство генотипа АА (OR = 3,12) предрасполагает к развитию минимальными значениями ОR, что свидетельствует о связи этого аллеля со заболевания, тогда как носительство генотипа AG (OR = 0,18), напротив связано с сниженным риском развития патологии (табл. 7).
пониженным риском развития патологии. Таблица 7.
Распределение аллелей полиморфного маркера D6S2414 в группе больных 6. Изучение ассоциации полиморфных микросателлитов D6S2414 и D6S1271, хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе здоровых доноров (ЗД).
расположенных в локусе MHC класса II с ХГН.
В настоящее время активно обсуждают значение генетических факторов в Частота аллелей Аллели p CI OR определении особенностей иммунного ответа на те или иные воздействия. В ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) частности, особое внимание уделяют изучению роли полиморфных маркеров, Аллель 6 0,008 0,018 НД - расположенных среди генов главного комплекса гистосовместимости (MHC) Аллель 7 0,025 0,018 НД - класса II. Аллель 8 0,223 0,259 НД - Гены локуса MHC класса II: HLA-DQ, HLA-DR и HLA-DP расположены в Аллель 9 0,541 0,420 0,0396 1,63 1,04-2, хромосомной области 6p21 и экспрессируются в клетках, представляющих Аллель 10 0,157 0,241 0,0366 0,59 0,34-1, Аллель 11 0,045 0,045 НД - антигены. Белковые продукты данных генов участвуют в связывании и экспонировании на поверхности макрофагов фрагментов различных антигенов. В У больных ХГН и здоровых доноров удалось обнаружить 13 генотипов из дальнейшем с участием рецептора Т-клеток происходит распознавание возможного. Наблюдаемое распределение генотипов подчиняется равновесию антигенов и инициируется иммунный ответ (Levine et al, 1984).
Харди-Вайнберга. Однако, достоверных различий в распределении генотипов Гены системы HLA вовлечены в развитие многих аутоиммунных болезней.
локуса D6S2414 не наблюдалось, что, возможно, связано с небольшим размером Обнаружение непосредственного регулирующего влияния антигенов системы выборки по сравнению с большим количеством возможных генотипов (табл. 8) HLA на течение иммунного ответа при ХГН (Kitagava et al, 2005), а также 13 Таблица 8. Таблица 9.
Распределение частот генотипов полиморфного маркера D6S2414 в группе Распределение частот аллелей полиморфного маркера D6S1271 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе здоровых больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе здоровых доноров (ЗД). доноров (ЗД).
Частота аллелей Частота генотипов Аллели p CI OR Генотипы p ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) 0, Аллель10 0,019 0,018 4,12 1,19-14, Генотип 6/6 0,000 0,000 НД 0, Аллель 11 0,063 НД - Генотип 6/7 0,000 0,000 НД 0, Генотип 6/8 0,014 0,036 НД Аллель 12 0,873 НД - Генотип 6/9 0,000 0,000 НД 0, Аллель 13 0,044 0,008 0,09 0,01-0, Генотип 6/10 0,000 0,000 НД Генотип 6/11 0,000 0,000 НД Обнаружены достоверные различия в частотах двух аллелей и двух Генотип 7/7 0,000 0,000 НД генотипов. У больных было увеличено содержание аллеля 10 (табл. 9) и генотипа Генотип 7/8 0,014 0,000 НД 10/12 (табл.10), тогда как доля аллеля 13 (табл. 9) и генотипа 12/13 (табл.10) Генотип 7/9 0,014 0,000 НД существенно снижены. Таким образом, аллель 10 и генотип 10/12 связаны с Генотип 7/10 0,000 0,036 НД повышенным риском развития ХГН, тогда как аллель 13 и генотип 12/13, Генотип 7/11 0,000 0,000 НД напротив, со сниженным.
Генотип 8/8 0,085 0,089 НД Генотип 8/9 0,211 0,161 НД Генотип 8/10 0,063 0,125 НД Таблица 10.
Генотип 8/11 0,007 0,036 НД Распределение частот генотипов полиморфного маркера D6S1271 в группе Генотип 9/9 0,296 0,196 НД больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе здоровых Генотип 9/10 0,176 0,232 НД доноров (ЗД).
Генотип 9/11 0,085 0,036 НД Генотип 10/10 0,021 0,036 НД Частоты генотипов Генотип 10/11 0,014 0,018 НД Генотипы p OR CI ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) Генотип 11/11 0,000 0,000 НД Генотип10/10 0,009 0,000 НД - При сравнительном анализе распределения аллелей и генотипов Генотип10/12 0,130 0,038 0,042 3,80 1,06-13, Генотип11/ полиморфного маркера D6S1271 найдено 4 аллеля размером от 184 до 196 п.н., 0,139 0,127 НД - Генотип12/12 0,713 0,759 НД - причем аллель 12 длиной 192 п.н. встречался наиболее часто (таблица 9). Из Генотип12/13 0,009 0,063 0,040 0,13 0,01-5, возможных вариантов генотипов обнаружили 5 (таблица 10). Наблюдаемое распределение генотипов хорошо подчинялось равновесию Харди-Вайнберга.
Таким образом, оба микросателлита (D6S1271 и D6S2414) ассоциированы с хроническим гломерулонефритом в русской популяции. Поскольку данные микросателлиты расположены в хромосомной области занимаемой генами HLA, 15 то их ассоциация с ХГН косвенно свидетельствует возможной вовлеченности образом, с высокой степенью вероятности можно сделать вывод, что ген CTLA данной области в развитие патологии. не только вовлечен в развитие, но и связан с генетической К сожалению, нет данных о сцепленности конкретных аллелей маркеров предрасположенностью к хроническому гломерулонефриту, так как нами уже была D6S2414 и D6S1271 с генами HLA. В дальнейшем было бы интересно провести обнаружена ассоциация с локусом HLA.
подобный анализ тех же больных непосредственно по генам HLA-DQA1, HLA- У пациентов с хроническим гломерулонефритом наблюдается возрастание DQB1 и HLA-DRB1 с тем, чтобы определить как ассоциацию с заболеванием частоты аллеля Thr, тогда как в выборке здоровых доноров преобладающим конкретных аллелей HLA, так и группы сцепления последних с определенными аллелем являлся аллель Ala. Наиболее распространенным генотипом были аллелями локусов D6S1271 и D6S2414. гетерозиготы Ala/Thr. Гомозиготы Ala/Ala наблюдались редко – их доля в выборке больных ХГН и в контрольной группе составляла 0,13 и 0,17 соответственно. В 7. Изучение ассоциации полиморфного маркера Ala17Thr гена CTLA4 c ХГН.
группе больных ХГН количество гомозигот Thr/Thr было в 6,5 раз больше, чем в Продукт экспрессии гена CTLA4 участвует в активации Т-клеток (Homann et группе здоровых доноров (0,26 и 0,04 соответственно).
al., 2006). Современная модель активации Т-клеток предполагает наличие двух сигналов (Kalergis et al, 2001). Первый специфический сигнал поступает в момент Таблица 11.
связывания комплекса MHC с антигеном, находящимся на поверхности клетки, Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Ala17Thr гена представляющей антиген, c Т-клеточным рецептором (TCR), а второй, CTLA4 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе неспецифический сигнал поступает после соединения другого рецептора Т-клетки здоровых доноров (ЗД).
(CD28) с его лигандами B7-1 (CD80) и B7-2 (CD86), также находящимися на поверхности клетки, представляющей антиген. Часто второй сигнал называют ко- Частота аллелей и генотипов Аллели и p OR CI стимулирующим. Если оба сигнала поступили, то имеет место активация Т-клетки, генотипы ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) секреция цитокинов и дальнейшая пролиферация Т-клетки. Однако ситуация Аллель Ala 0,43 0,56 0,011 0,59 0,39-0, усложнилась после обнаружения другого рецептора (CTLA-4) с противоположным Аллель Thr 0,57 0,43 0,011 1,70 1,12-2, действием, связывающегося с теми же лигандами B7-1 и B7-2, но переводящего ГенотипAla/Ala 0,13 0,17 НД - Т-клетку в состояние “безответности” к данному антигену, называемое анергией, ГенотипAla/Thr 0,60 0,80 0,010 0,41 0,21-0, ГенотипThr/Thr 0,26 0,04 0,000 8,69 2,55-29, за которой следует программируемая смерть Т-клетки (апоптоз) (Ostrov et al, 2000).
Все различия, кроме тех, которые касались генотипа Ala/Ala, были Последовательности рецепторов СTLA-4 и СD28 очень похожи. Нарушения в достоверными (табл.11). Таким образом, из этих данных следует, что тонком взаимодействии этих белков с лигандами B7-1 и B7-2 могут являться полиморфный маркер Ala17Thr гена CTLA4 ассоциирован с развитием ХГН у одной из причин аутоиммунных заболеваний (Schwartz et al, 2001).
русских жителей г. Москвы. При этом аллель Thr и гомозиготность по данному Ген СTLA4 находится в хромосомной области 2q33 и состоит из 3-ех экзонов маркеру связаны с повышенным риском развития патологии (ОR = 1,70 и ОR = (Guzman et al., 2005). Первый экзон кодирует сигнальный пептид и внеклеточный 8,69, соответственно), тогда как носительство аллеля Ala и гетерозигот Ala/Thr белковый домен из 116 аминокислот. В этом экзоне в кодоне 17 расположен связано, напротив, со сниженной вероятностью развития заболевания (ОR = 0, полиморфизм Ala/Thr, сцепленный со многими аутоимунными заболеваниями и ОR = 0,41, соответственно).
(Ikegami et al., 2005). Последние исследования показали, что одни из важнейших локусов предрасположенности к аутоимунным заболеваниям лежат именно в 8. Изучение ассоциации полиморфного маркера Pro72Arg гена TР53 c ХГН.
области генов HLA (6p21) и СTLA4 (2q31-q33) и примерно наполовину определяют Белок р53 играет важную роль в регуляции транскрипции и клеточного цикла, генетическую предрасположенность к патологии (Vaidya et al, 1999). Таким он вовлечен в процесс апоптоза, связан с поддержанием геномной стабильности, 17 взаимодействует со многими клеточными белками. Показано, что повреждение Таблица 12.
ДНК приводит к накоплению p53, который в свою очередь блокирует клеточный Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Pro72Arg гена TР53 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе цикл в фазе G1, таким образом препятствуя репликации ДНК до репарации повреждения. Если повреждение нерепарируемо, p53 запускает механизм здоровых доноров (ЗД).
апоптоза. При стрессах и повреждениях клеток активность и содержание р53 в них Частота аллелей и генотипов повышается. Показано, что активация р53 может происходить на фоне Аллели и генотипы p ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) окислительного клеточного стресса, вызванного NO. При различных стрессах и 0,692 0, Аллель Arg НД внутриклеточных повреждениях происходят пост-трансляционные модификации, в 0,308 0, Аллель Pro НД частности, фосфорилирование и ацетилирование определенных аминокислот 0,463 0, Генотип Arg/Arg НД молекулы р53, определяющие ее переход в так называемую стрессовую 0,458 0, Генотип Arg/Pro НД конформацию. Такой р53 значительно более стабилен (т.е. резко увеличивается 0,079 0, Генотип Pro/Pro НД его количество в клетке) и эффективно транс-активирует и/или транс репрессирует специфические гены-мишени, следствием чего является индукция в Однако различия в распределении аллелей и генотипов между группами аномальных клетках, либо остановки клеточного цикла, либо апоптоза (Копнин, были незначительными и носили недостоверный характер, что 2001). свидетельствовало об отсутствии ассоциации между данным полиморфным Ген TР53, кодирующий белок р53, расположен в хромосомной области маркером гена TP53 и хроническим гломерулонефритом.
17q13.1. В данном гене и его фланкирующих областях обнаружен ряд 9. Изучение ассоциации полиморфного маркера G309T гена MDM2 c ХГН.
полиморфных участков, в том числе однонуклеотидный полиморфизм G/C, Ключевую роль в стабилизации белка p53 и повышении его которому соответствует аминокислотный полиморфизм Pro/Arg в положении транскрипционной активности играют изменения во взаимодействии p53 с полипептидной цепи (Ara et al, 1990). Участок, образованный аминокислотными белком-ингибитором Mdm2, ген которого является потенциальным онкогеном.
остатками с 43-го по 73-ий, образует дополнительный транскрипционный домен Этот белок, представляющий собой специфическую убиквитин-лигазу, (Walker et al, 1996). Участок, обогащенный остатками пролина между связывается с N-концом молекулы p53 и стимулирует его убиквитинирование и, аминокислотами 63 и 97 предположительно вовлечен в процесс апоптоза (Venot как результат, протеасомную деградацию белка p53 (Fry et al, 2005). Кроме того, et al, 1998, Sakamuro et al, 1997).
связываясь с N-концевым участком p53 в районе домена, взаимодействующего с Показано, что при воспалительных процессах в клетках повышается базовыми факторами транскрипции, Mdm2 подавляет способность p содержание р53 (Hofsrth et. al., 2002). Известно, что одной из главных причин трансактивировать гены-мишени (Копнин, 2000). В результате, несмотря на то, развития гломерулонефрита является воспаление почечных клубочков. Это дает что ген, кодирующий p53, постоянно транскрибируется и транслируется, сам основания предполагать вовлеченность продукта гена ТР53 в патогенез белок быстро подвергается деградации зависимой от убиквитина, и при этом, хронического гломерулонефрита.
даже не успевший распасться p53 не проявляет активности (Chan et al., 2006;
При исследовании распределения аллелей и генотипов полиморфного Чумаков, 2000). Ускорение деградации p53 при связывании с Mdm2 происходит за маркера Pro72Arg гена TР53 среди больных ХГН и здоровых доноров обнаружено счет двух процессов. Как p53, так и Mdm2 содержат участки, отвечающие за преобладание частоты аллеля Arg над частотой аллеля Pro, и встречаемость экспорт белка из ядра. Благодаря этим сигналам Mdm2 выводит p53 из ядра и генотипа Arg/Arg над частотой генотипа Pro/Pro в обеих исследованных группах направляет его в протеасомы, где оба белка подвергаются деградации зависимой (таблица 12).
от убиквитина.
Ген MDM2 содержит 12 экзонов и занимает 25 т.п.н. В первом интроне гена 19 MDM2 описан однонуклеотидный полимофизм остатков Т/G в положении 309 от разрыва ДНК. Известны несколько видов PARP, кодируемых разными генами. Из точки инициации транскрипции (Wilkening et al., 2006;
Menin et al, 2006). Бонд и них ассоциации с патогенезом ХГН, прежде всего следует ожидать от PARP-1, так соавт. показали, что этот полиморфизм связан с повышенным уровнем белкового как она ответственна за синтез до 90% поли(ADP-рибозы) в клетке (Суханова и соавт., 2004). Фермент PARP-1 вовлечен в процессы репликации (Cesarone et al, продукта гена в организме, и пониженной активностью белка р53, а также со 1990), транскрипции (Meisterernst et al, 1997) и репарации (Dantzer et al, 1999) спорадичными формами саркомы у людей. При этом частота аллеля G была значительно повышена в группе людей, заболевших саркомой в раннем возрасте. Повышенная активация PARP-1 может приводить к существенному снижению При исследовании распределения аллелей и генотипов полиморфного содержания внутриклеточного NAD+ и, как следствие, к гибели клетки (Skaper et маркера G309T гена MDM2 статистически достоверных различий между двумя al, 2003).
группами обнаружено не было, что свидетельствует об отсутствии ассоциации Ген ADPRT1 локализован в хромосомной области 1q41-1q42. В данной маркера с заболеванием (табл. 13). работе мы исследовали ассоциацию двух однонуклеотидных полиморфных Таблица 13. маркеров гена ADPRT1: Т/С, которому соответствует полиморфизм Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера G309T гена аминокислотных остатков Val/Ala в положении 762 полипептидной цепи и MDM2 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в группе однонуклеотидный полиморфизм C/G, которому соответствует полиморфизм здоровых доноров (ЗД). аминокислотных остатков Leu/Phe в положении 54 полипептидной цепи.
В группе здоровых доноров частота обоих аллелей полиморфного маркера Частота аллелей и генотипов Val762Ala почти одинакова, в то время как в группе ХГН выявлено преобладание Аллели и генотипы p ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) аллеля Val. В группе больных ХГН существенно преобладал гомозиготный Аллель T 0,629 0,642 НД генотип Val/Val, наряду с резким уменьшением встречаемости генотипа Ala/Ala по Аллель G 0,371 0,358 НД сравнению с группой здоровых доноров (табл. 14).
Генотип TT 0,377 0,415 НД Генотип TG 0,503 0,453 НД Таблица 14.
Генотип GG 0,119 0,132 НД Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Val762Ala гена 10. Изучение ассоциации полиморфных маркеров Val762Ala и Leu54Phe гена ADPRT1 в группе больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в ADPRT1 c ХГН. группе здоровых доноров (ЗД).
Показано, что окислительный стресс и апоптоз вносят немалый вклад в патогенез ХГН. На определенном этапе прогрессирования ХГН апоптоз является Частота аллелей и генотипов Аллели и p OR CI одним из механизмов уничтожения гломерулярных клеток при развитии склероза. генотипы ХГН (n = 290) ЗД (n = 80) Апоптоз происходит в мезангиальной зоне клубочка и не наблюдается в Аллель Ala 0,287 0,509 0,00003 0,39 0,25-0, капиллярах. Гибель интерстициальных клеток происходит на высоте активации Аллель Val 0,713 0,491 0,00003 2,57 1,64-4, механизма апоптоза, что доказано в экспериментальных работах. Повреждения ГенотипAla/Ala 0,092 0,316 0,00165 0,22 0,10-0, ДНК, обусловленные генотоксичным действием свободных радикалов, приводят к ГенотипAla/Val 0,390 0,386 НД - активации поли(ADP-рибозил)полимераз (PARP). Эти ферменты участвуют в ГенотипVal/Val 0,518 0,298 0,00032 2,53 1,37-4, репарации ДНК, катализируя поли(АДФ-рибозилирование) белков, связанных с Различия в частотах встречаемости аллелей и генотипов носили ДНК (Новожилова 1996, Oliver et al, 1999). Донором АДФ-рибозы является НАД+.
достоверный характер, что свидетельствует об ассоциации полиморфного Активность PARP возрастает в 500 раз и более при связывании с участками 21 маркера Val762Ala гена ADPRT1 с развитием хронического гломерулонефрита. действие на ДНК и мембранные структуры нейронов, и как следствие приводящих При этом носительство аллеля Val (OR = 2,57) и генотипа Val/Val (OR = 2,53) к гибели клеток и апоптозу.
является фактором повышенного риска развития патологии, а носительство аллеля Ala (OR = 0,39) и генотипа Ala/Ala (OR = 0,22) коррелирует со сниженным ВЫВОДЫ.
риском развития ХГН. 1. Изучено распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров A(-601)G В нашей работе при исследовании распределения аллелей и генотипов и Arg229Gly гена NPHS2, Glu117Lys гена NPHS1, VNTR во втором интроне гена полиморфного маркера Leu54Phe гена ADPRT1 в группе хронического IL1RN, С(-590)Т гена IL4, G4257A гена IL13, полиморфных микросателлитов гломерулонефрита и в группе здоровых доноров наибольшая частота была D6S2414 и D6S1271 расположенных среди генов HLA класса IIрасположенных выявлена у аллеля Phe (0,647 в группе ХГН и 0,603 в группе здоровых доноров). среди генов азличий между двумя группами обнаружено не было, что Наиболее распространенным генотипом были гетерозиготы Leu/Phe. Гомозиготы свидетельствует об отсутствии ассоциации маркера, Ala17Thr гена CTLA4, Leu/Leu встречались наиболее редко – их доля в выборке больных ХГН и в группе Pro72Arg гена TР53, G(-309)T гена MDM2, Val762Ala и Leu54Phe гена ADPRT в здоровых доноров составила 0,076 и 0,098 соответственно. Гомозиготы Phe/Phe группе больных хроническим гломерулонефритом, а также в группе здоровых встречались с частотой 0,370 и 0,304 (табл. 15). доноров.
Таблица 15.
2. Для полиморфных маркеров Arg229Gly гена NPHS2, Glu117Lys гена NPHS1, Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Leu54Phe гена VNTR во втором интроне гена IL1RN, С(-590)Т гена IL4, Pro72Arg гена TР53, ADPRT1 в группе больных хроническим гломерулонефритом и в группе Leu54Phe гена ADPRT1 показано отсутствие ассоциации с ХГН у русских здоровых доноров.
пациентов г. Москвы.
Частота аллелей и генотипов Аллели и генотипы p Здоровые 3. Обнаружена ассоциация полиморфных микросателлитных маркеров D6S ХГН доноры и D6S1271 расположенных среди генов HLA с заболеванием, что косвенно Аллель Leu 0,353 0,397 НД свидетельствует о вовлеченности этой области в развитие ХГН.
Аллель Phe 0,647 0,603 НД Генотип Leu/Leu 0,076 0,098 НД 4. Показана ассоциация полиморфных маркеров A(–601)G гена NPHS2, Ala17Thr Генотип Leu/Phe 0,554 0,598 НД Генотип Phe/Phe 0,370 0,304 НД гена CTLA4, G4257A гена IL13 и Val762Ala гена ADPRT1 с развитием хронического гломерулонефрита у русских пациентов города Москвы.
При исследовании распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера Leu54Phe гена ADPRT1 в группе хронического гломерулонефрита и в группе здоровых доноров статистически достоверных различий обнаружено не было. Таким образом, полиморфный маркер Leu54Phe гена ADPRT не ассоциирован с ХГН у русских пациентов г. Москвы.
Полученные нами результаты коррелируют с ранее полученными данными об ассоциации полиморфного маркера Val762Ala гена ADPRT1 с диабетической полинейропатией (ДПН) при сахарном диабете типа 1 (СД типа 1), при котором одним из патогенетических факторов развития является окислительный стресс и избыточное образование свободных радикалов оказывающих повреждающее 23 СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.
1. Петросян Э.К., Цыгин А.Н., Шестаков А.Е., Носиков В.В. (2006) Роль генетического полиморфизма интерлейкина-4 и интерлейкина-13 в развитии нефротического синдрома с минимальными изменениями у детей и подростков.
Педиатрия. №5, стр 7-10.
2. Шестаков А.Е., Камышова Е.С., Кутырина И.М., Савостьянов К.В., Носиков В.В.
(2006) Ассоциация полиморфных маркеров D6S2414 и D6S1271, расположенных в локусе MHC (6p21.31), с хроническим гломерулонефритом среди русских г.
Москвы. Генетика, 42 (12), стр. 1727-1730.
3. Шестаков А.Е., Камышова Е.С., Петросян Э.К., Кутырина И.М., Савостьянов К.В., Носиков В.В. (2007) Изучение ассоциации полиморфных маркеров Val762Ala и Leu54Phe гена ADPRT1 с хроническим гломерулонефритом у русских пациентов города Москвы. Генетика, 43 (2), в печати 4. Петросян Э.К., Цыгин А.Н., Ильенко Л.И., Врублевский С.Г., Шестаков А.Е.
Генетический полиморфизм антагониста рецептора интерлейкина-1 у больных хроническим гломерулонефритом. Тезисы 10-го конгресса педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии». Вопросы современной педиатрии, 5 (2), стр.
99 (6 – 9 февраля 2006 г.).
6. Петросян Э.К., Ильенко Л.И., Цыгин А.Н., Шестаков А.Е., Носиков В.В.
Полиморфизм гена антигена цитотоксического Т-лимфоцита-4 (CTLA-4) у больных хроническим гломерулонефритом. V-ый Российский конгресс по детской нефрологии, стр. 171, Воронеж, Россия (19-21 сентября 2006 г).
6. K.V. Savost’anov, A.E. Shestakov, E.S. Kamyshova, I.M. Kutyrina, V.V. Nosikov.
Association of CTLA4 gene and polymorphic microsatellite D6S2414 located in HLA region with chronic glomerulonephritis. Nephr. Abstracts of the XLII Congress of the ERA-EDTA, p.V219, Istanbul, Turkey (June 4 - 7, 2005).