Спирохетоз кур (морфобиологические аспекты и лечение)
На правах рукописи
Штумпф Дарья Сергеевна СПИРОХЕТОЗ КУР (МОРФОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ И ЛЕЧЕНИЕ) 03.02.11 – паразитология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Ставрополь – 2010
Работа выполнена на кафедре паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»
Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор Луцук Светлана Николаевна
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук Оробец Владимир Александрович кандидат биологических наук Кошкина Наталья Анатольевна
Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»
Защита состоится « » _ 2010 г. в _ часов на заседании диссертационного совета Д 220.062.02 при ФГОУ ВПО «Ставропольский го сударственный аграрный университет» по адресу: 355017, г. Ставрополь, пер.
Зоотехнический, 12, тел./факс: 8(8652)28-67-38.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Ставро польский государственный аграрный университет».
Автореферат размещен на официальном сайте ФГОУ ВПО «Ставрополь ский государственный аграрный университет»: http://www.stgau.ru.
Автореферат разослан «_» 2010 г.
Ученый секретарь диссертационного совета Ю. В. Дьяченко 1.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы исследований. В числе многих отраслей животно водства в нашей стране большое место отводится птицеводству. В настоящее время эта отрасль успешно развивается, обеспечивая население продуктами питания.
Залог успеха современного птицеводства в значительной степени зависит от глубоких знаний паразитарных заболеваний птицы. Среди них наибольший экономический ущерб наносит спирохетоз.
Спирохетоз птиц – весьма распространенное заболевание, которое регистри руют во многих странах Европы, Азии, Африки, Америки. Считают, что болезнь является типичной для тропических и субтропических стран, однако довольно часто она появляется на территории государств с умеренным климатом.
Большой вклад в изучение спирохетоза птиц и в разработку мер борьбы с ним в нашей стране внесли М. П. Якунин (1960), Р. Е. Никитина (1965), Н. П. Крылова (1968), В. З. Решетняк (1971), Г. Ф. Денисенко (1973), В. И. Ситьков (1980), М. А. Островский (1998) и др. авторы.
Заболевание известно уже более 100 лет. За это время накопилось много материала, который необходимо систематизировать и обобщить. В современ ных условиях интенсивного развития птицеводства прежние методы борьбы уже не приносят желаемого результата. Предъявляются новые требования к противоспирохетозным препаратам, а изучение современной ситуации по спирохетозу птиц, определение гематологического, биохимического и иммун ного статуса необходимо для разработки научно обоснованных систем мер борьбы с этим заболеванием.
Цель и задачи исследований. Целью нашей работы являлось изучение рас пространения спирохетоза птиц в Ставропольском крае, некоторых вопросов патогенеза, влияния болезни на гематологические, биохимические, иммунобио логические показатели и испытание новых средств.
В задачи исследований входило изучить:
– неблагополучие районов по спирохетозу птиц в Ставропольском крае;
– течение спирохетоза у птиц различного возраста при эксперименталь ном заражении;
– патоморфологические изменения при спирохетозе у кур;
– динамику изменений гематологических, биохимических и иммунобио логических показателей при экспериментальном спирохетозе;
– эффективность применения окситетрациклина 200 вместе со спирто вым экстрактом из личинок трутней при лечении кур, больных спиро хетозом;
– динамику изменений гематологических, биохимических и иммунобио логических показателей при лечении кур, больных спирохетозом.
Научная новизна. Установлены неблагополучные районы по спирохетозу птиц в Ставропольском крае. Изучено течение спирохетоза кур в возрастном аспекте в зависимости от дозы заражения. Впервые изучены иммунобиоло гические показатели и определены изменения, происходящие в белковой кар тине крови. Определены патоморфологические изменения в месте инъекции при экспериментальном спирохетозе. Установлена терапевтическая эффек тивность окситетрациклина 200 методом группового выпаивания и отмечен положительный результат при использовании данного препарата совместно со спиртовым экстрактом из личинок трутней. Изучена динамика гематоло гических, биохимических и иммунобиологических показателей при лечении кур, больных спирохетозом.
Практическая значимость. Данные, полученные при изучении эффектив ности средств борьбы и профилактических мероприятий при спирохетозе кур, послужили основой для разработки рекомендаций «Биология, диагностика, лечение и профилактика спирохетоза птиц», утвержденных НТС министер ства сельского хозяйства Ставропольского края от 26.03.2010.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и об суждены на научных конференциях СтГАУ 2008–2010 гг.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 2 в изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки РФ.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы и предложения, список литературы. Работа иллюстриро вана 33 таблицами и 24 рисунками. Список литературы включает 112 источ ников, в том числе 15 иностранных авторов.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Данные по проведению вакцинаций против спирохетоза птиц за 2007– 2009 гг., свидетельствующие о наличии неблагополучных по данному заболеванию районов в Ставропольском крае.
2. Клинико-морфологические проявления спирохетоза у кур обусловлены воздействием возбудителя и эндогенной интоксикацией.
3. Динамика параметров гематологических, биохимических и иммуноло гических показателей позволяет указывать и прогнозировать развитие тяжелых клинических форм при спирохетозе у кур.
4. Использование окситетрациклина 200 (в дозе 0,1 мл/кг) совместно со спиртовым экстрактом из личинок трутней пчел (в дозе 1 мл/кг) в те чение 10 дней эффективно при спирохетозе кур и способствует восста новлению гематологических, биохимических и иммунобиологических показателей крови.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований Работа выполнена в 2007–2010 гг. на кафедре паразитологии и ветеринарно санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграр ный университет».
Объектом исследования служили куры русской белой породы в возрасте 12 месяцев и куры породы родонит в возрасте 6 и 12 месяцев. В опытах было использовано 175 птиц.
Для проведения исследований подопытные и контрольные группы отби рали по принципу аналогов по 10–15 птиц, одинаковых по возрасту и живой массе. Во время постановки опытов контрольные и подопытные куры содер жались изолированно до конца наблюдения.
Изучение неблагополучия районов по спирохетозу птиц проводили на осно вании данных Ставропольской краевой станции по борьбе с болезнями живот ных, где нами учитывалось количество вакцинированных птиц из общего по головья по каждому району Ставропольского края.
Для изучения клинико-морфологического проявления спирохетоза кур по допытной и контрольной групп заражали цитратной кровью в дозе 0,5 мл/гол., с содержанием в ней не менее 50 спирохет в поле зрения микроскопа при ис следовании мазков крови.
Клиническое обследование кур при искусственном заражении проводили по общепринятой методике. Отмечали общее состояние, осматривали види мые слизистые оболочки, наблюдали за состоянием опорно-двигательного ап парата, а также измеряли температуру тела и исследовали кровь на наличие спирохет.
Для изучения динамики гематологических, биохимических и иммунобио логических показателей у кур при спирохетозе отбирали кровь из подкрыль цовой вены в утренние часы до опыта и после заражения через 24, 48, 72 и 96 часов.
Для лечения кур, больных спирохетозом, применяли бактериостатиче ский антибиотик длительного действия окситетрациклин 200, произведенный фирмой «Invesa» (Испания), и спиртовой экстракт из личинок трутней пчел.
Группы подопытных птиц, дозы, кратность и способы введения описаны в со ответствующих разделах.
Лечение кур начинали с развития типичных клинических признаков бо лезни при одновременном обнаружении в мазках крови спирохет (не менее экз. в поле зрения). На всем этапе лечения отслеживалась динамика гематоло гических, биохимических и иммунобиологических показателей до начала и через 1, 5 и 10 дней после лечения.
Контроль над количеством спирохет осуществляли путем исследования мазков крови. Для этого надрезали зубец гребешка или мякиш пальца. По лученные мазки окрашивали по методу Бури или Романовского – Гимза. При микроскопии использовали микроскоп «Микромед-5» под иммерсионным объективом х 90, с окуляром х 7.
Количество эритроцитов и лейкоцитов определяли по общепринятой ме тодике с использованием камеры Горяева. Дифференциальный подсчет лей коцитов проводили в окрашенных мазках крови при помощи микроскопа «Микромед-5». Содержание гемоглобина устанавливали колориметрическим методом (Антонов Б. И., 1991).
Параметры фагоцитарной активности определяли по поглотительной спо собности нейтрофилов по отношению к полистирольным частицам латекса (D = 1,5 мкм) после совместной их инкубации (Черкесова А. Н., 2005).
Определение общего белка в сыворотке крови животных осуществляли рефрактометрическим методом в рефрактометре RL 140 (Poland). Содержание белковых фракций в сыворотке крови устанавливали нефелометрическим (тур бидиметрическим) методом (Антонов Б. И., 1991).
Определение Т-лимфоцитов осуществляли методом спонтанного розет кообразования с 1 % раствором эритроцитов барана, В-лимфоцитов с 10 % раствором эритроцитов мыши (Е-РОК). Кровь от белой беспородной мыши получали декапитацией. У барана кровь дефибринировали и трижды отмы вали физиологическим раствором. За розеткообразующую клетку принима ли лимфоцит, присоединивший три и более эритроцитов. После подсчета клеток вычисляли абсолютное количество розеток (Е-РОК). Определение со отношения лимфоцитов с хелперной и супрессорной функциями проводили в теофиллиновом тесте (Гембицкий Е. В., 1987).
Определение концентрации циркулирующих иммунных комплексов в сы воротке крови проводили методом преципитации полиэтиленгликолем моле кулярной массой 6000 (ПЭГ6000)(Даугалиева Э. Х., Филлипов В. В., 1991).
Патологоанатомическое вскрытие проводили по общепринятой мето дике. Для гистологического исследования от кур подопытной и контроль ной групп отбирали грудную мышцу, печень, селезенку, фабрициеву сумку, тимус, пищевод, кишечник, сердце, почки. Материал фиксировали в 10 % нейтральном формалине с последующим обезвоживанием в спиртах воз растающей концентрации, по стандартной методике заливали в парафин.
Из полученных блоков на санном микротоме МС-2 делали срезы толщиной 5–10 мкм, которые затем окрашивали гематоксилином и эозином. Фотогра фирование препаратов проводили с помощью цифровой фотокамеры «Sony» и микрофотонасадки МФН-П.
Статистическую обработку данных проводили с использованием алгорит мов статистического анализа, реализованных в Microsoft Excel 2007, програм ме Primer of Biostatistics (Version 4.03) методом критерия Стьюдента. Различие считалось статистически достоверным начиная со значения Р0,05.
Цифровой материал представлен в единицах СИ, рекомендованных Все мирной организацией здравоохранения и стандартом СЭВ 1062–78.
2.2. Результаты исследований 2.2.1. Районы Ставропольского края, неблагополучные по спирохетозу птиц При изучении ветеринарной отчетности Ставропольской краевой станции по борьбе с болезнями животных нами был проведен анализ вакцинаций птиц против спирохетоза за 2007–2009 годы в общественном и частном секторах с учетом общего числа поголовья в каждом из 26 районов Ставропольского края (табл. 1).
Таблица Количество птиц, вакцинированных против спирохетоза в общественном и частном секторах за 2007–2009 гг.
Общественный сектор Частный сектор 2007 2008 2009 2007 2008 № Наименование района п/п Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во % погол. вакц. погол. вакц. погол. вакц. погол. вакц. погол. вакц. погол. вакц.
Крайне засушливая зона 1 Апанасенковский – – – – – – 116052 0,2 125921 2,1 129101 0, 2 Арзгирский – – – – – – 100000 11,7 100000 7,0 100000 7, 3 Левокумский – – – – – – 68000 17,4 72000 7,2 50000 1, 4 Нефтекумский 101900 – 107820 – 144755 – 69360 – 48420 – 48420 – 5 Туркменский – – – – – – 110072 1,0 111080 2,1 92000 2, Засушливая зона 6 Александровский – – – – – – 45173 – 35650 – 34387 0, 7 Благодарненский 1156231 – 1274647 0,1 1100941 – 91830 24,8 83546 16,1 83106 6, 8 Буденновский – – – – – – 157670 0,2 118570 – 176950 – 9 Ипатовский – – – – – – 156324 – 130500 – 112600 – 10 Курский – – – – – – 122358 – 89740 – 120564 – 11 Новоселицкий – – – – – – 99762 5,2 87811 0,2 75506 1, 12 Советский – – – – – – 135529 17,5 142924 20,4 141734 19, 13 Степновский – – – – – – 47159 – 42396 – 71761 – Продолжение Общественный сектор Частный сектор 2007 2008 2009 2007 2008 № Наименование района п/п Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во % погол. вакц. погол. вакц. погол. вакц. погол. вакц. погол. вакц. погол. вакц.
14 Петровский 15442 – 11479 – 11479 – 150432 – 128456 – 104199 – Зона неустойчивого увлажнения 15 Грачевский 12977 – – – – 46493 – 56711 – 59010 – 16 Изобильненский – – – – – – 145177 3,3 128146 – 141500 – 17 Красногвардейский – – – – – – 117999 8,1 149098 9,5 175119 6, Ново 18 – – – – – – 112522 14,0 128820 5,0 140167 19, александровский 19 Труновский – – – – – – 74500 11,2 48800 11,8 36200 34, 20 Андроповский – – 262 – 300 – 64598 – 60753 – 60496 – 21 Кочубеевский 1031639 – 2182370 – 2903137 – 80248 – 96980 – 69995 – 22 Шпаковский – 494619 – 1134385 – 45000 – 40800 – 35900 – Зона достаточного увлажнения 23 Минераловодский 600 67,5 300 – 300 – 59400 11,0 59400 11,7 80000 12, 24 Кировский 113417 136959 – 126994 – 78950 – 78032 – 67771 – 25 Георгиевский 1170471 1296836 – 1974469 – 170967 – 167073 – 109773 – 26 Предгорный 2138142 2507474 – 2459469 – 53003 – 51423 – 51423 – Всего по краю 5760909 0,02 8012766 0,01 9856229 2518578 5,0 2383050 4,0 2367682 4, – При этом было отмечено, что в Ставропольском крае в 2007 году было вак цинировано 122346 тыс. голов птицы (1,5 %), в 2008 году – 93892 тыс. голов (1,0 %), в 2009 году – 107167 тыс. голов (0,9 %) от общего количества поголо вья. Процент вакцинированной птицы в частном секторе (4,0–4,5 %) был на много выше, чем в общественном (0,01 %). В 2009 году в общественном секторе вакцинация птиц против спирохетоза вообще не проводилась. Среди районов самый высокий процент вакцинированных в Благодарненском (6,3–24,8 %), Со ветском (17,5–20,4 %), Новоалександровском (5,0–19,5 %), Труновском (11,2– 34,8 %), Минераловодском (11,0–12,5 %) районах. Меньший процент вакци нированной птицы отмечался в Арзгирском (7,0–11,7 %) и Красногвардейском (6,8–9,5 %) районах. В Нефтекумском, Буденновском, Курском, Петровском, Кочубеевском, Шпаковском, Кировском, Георгиевском и Предгорном районах вакцинация птиц против спирохетоза не проводилась, что, в свою очередь, дает возможность предполагать – данное заболевание там не встречается.
2.2.2. Симптомы при экспериментальном спирохетозе кур В экспериментальных условиях мы наблюдали за течением спирохетоза у цыплят и кур породы родонит различного возраста.
В опыте было использовано 40 кур, которые были разделены на четыре группы в каждой по 10 голов, приблизительно одинаковой живой массы. Для заражения использовали цитратную кровь, количество спирохет при исследовании данной крови в среднем составляло 50 экземпляров в одном поле зрения микроскопа.
В первой подопытной группе кур в возрасте 12 месяцев и второй подопытной группе цыплят в возрасте 6 месяцев заражали цитратной кровью внутримышечно в дозе 0,5 мл/гол. В третьей и четвертой подопытных группах кур и цыплят такого же возраста заражали цитратной кровью в дозе 0,2 мл/гол. Все четыре подопыт ные группы содержались изолированно до конца наблюдений.
У птиц всех подопытных групп до и после заражения учитывали: общее со стояние организма, температуру, цвет слизистых оболочек, состояние опорно двигательного аппарата. С момента заражения и до конца наблюдений исследо вали мазки крови на наличие спирохет (табл. 2).
Сравнивая клинические признаки болезни у птиц, следует отметить, что течение спирохетоза зависит от введенной дозы. Чем меньше доза крови при заражении птиц, тем длиннее инкубационный период, и болезнь протекает легче. Кроме того на проявление болезни влияет возраст птиц – молодняк тя желее болеет, чем взрослая птица.
2.2.3. Гематологические показатели при спирохетозе кур Изучение гематологических показателей проводили на курах породы родонит в возрасте 12 месяцев. Для этого курам подопытной группы (10 голов) однократ но внутримышечно была введена цитратная кровь в дозе 0,5 мл/гол. Контролем служили клинически здоровые птицы (10 голов) аналогичного возраста и породы.
Кровь для исследования отбирали до опыта и через 24, 48, 72 и 96 часов после заражения (табл. 3).
Таблица Течение спирохетоза у кур различного возраста в зависимости от дозы заражения Результаты исследований, через сутки Кол-во птиц в группе, гол.
Возраст подопытных птиц Доза заражения, мл/кг Инкуб. период, сутки 1 2 3 4 № группы Кол-во спирохет Кол-во спирохет Кол-во спирохет Кол-во спирохет Пало, % С С ТС ТС о о Т Т Куры 3 10 0,2 3 40,5±0,3 – 40,9±0,2 – 41,8±1,2 10 41,5±1,6 13 12 ме 1 10 0,5 2 41,5±0,1 – 42,9±0,2 55 43,3±0,3 61 43,9±0,1 75 сяцев Цы- 4 10 0,2 2 40,9±0,2 – 42,2±0,6 15 42,9±1,2 19 43,5±1,3 27 плята Пало 6 ме 2 10 0,5 2 41,8±0,2 – 43,2±0,2 58 43,8±0,2 100 % кур сяцев Таблица Динамика гематологических показателей кур подопытной и контрольной групп (M±m) Срок исследований, ч Группа До опыта 24 48 72 Эритроциты, 1012 /л Подопытная 2,93±0,06 *1,89±0,1 *1,67±0,1 *1,54±0,1 *1,49±0, Контрольная 3,22±0,2 3,26±0,2 3,31±0,2 3,35±0,1 3,39±0, Гемоглобин, г /л Подопытная 85,5±2,3 *64,2±3,4 *54,5±0,9 *51,6±1,7 *48,6±1, Контрольная 87,5±0,5 87,5±0,5 87,4±0,5 87,4±0,5 87,6±0, Лейкоциты, 109 /л Подопытная 31,9±2,2 *73,4±5,3 *86,3±6,7 *91,3±8,1 *98,8±12, Контрольная 34,3±2,7 32±2,8 32±2,8 32,7±2,4 32,2±2, * Разница достоверна при Р0,05 относительно контроля.
В процессе исследования было отмечено уменьшение числа эритроцитов через 24 часа после заражения на 42,0 % (Р0,05) по сравнению с контролем.
Через 48 и 72 часа после заражения данный показатель стал ниже контроля на 49,5 и 54,0 % соответственно, достигая 56,0 % через 96 часов (Р0,05).
Содержание гемоглобина в крови снижалось параллельно уменьшению количества эритроцитов. Через 24 часа после заражения уровень гемоглобина достиг 64,2±3,4 г/л, что на 26,6 % меньше, чем в контрольной группе. Через 48 и 72 часа после заражения количество гемоглобина в сравнении с контро лем снизилось на 37,6 и 41,0 % соответственно, достигая 48,6±1,1 г/л через 96 часов после заражения, что на 44,5 % меньше аналогичного показателя в контрольной группе (Р0,05).
При подсчете количества лейкоцитов отмечалось увеличение данного пока зателя в 2,2 раза через сутки после заражения по сравнению с контрольной груп пой (Р0,05), достигавшее через 96 часов после заражения 98,8±12,8109/л, что в 3 раза выше аналогичного показателя в контрольной группе (Р0,05). Что каса ется качественного состава лейкоцитов, то через сутки после заражения содер жание псевдоэозинофилов в крови подопытной группы составило 32,0±1,8 %, что на 19,4 % выше аналогичного показателя в сравнении с контрольной груп пой (Р0,05), моноциты увеличились на 47,2 % (Р0,05) (10,9±1,7 %), а количе ство лимфоцитов снизилось на 16,6 % (Р0,05) (46,7±1,8 %).
2.2.4. Биохимические показатели сыворотки крови кур при спирохетозе Биохимические показатели изучали на курах породы родонит в возрасте 12 месяцев. Кровь для исследований отбирали у кур подопытной (10 голов) и контрольной (10 голов) групп до опыта и через 24, 48, 72 и 96 часов после заражения (табл. 4).
Таблица Динамика биохимических показателей крови кур подопытной и контрольной групп (M±m), г/л Срок исследований, ч Группа До опыта 24 48 72 Общий белок Подопытная 47,2±1,1 50,4±1,5 *59,6±1,4 *60,9±0,8 *61,7±0, Контрольная 45,5±1,6 46,3±1,4 47,1±1,1 47,4±0,8 47,4±0, Альбумин Подопытная 16,05±0,7 12,7±3,4 *6,2±0,01 *6,2±0,06 *6,1±0, Контрольная 15,09±0,9 15,4±0,9 15,9±0,7 16,1±0,5 16,1±0, Альфа-глобулин Подопытная 7,5±0,5 3,8±1,4 *2,5±0,4 *2,2±0,01 *2,3±0, Контрольная 7,4±0,1 7,4±0,1 7,3±0,1 7,3±0,1 7,3±0, Продолжение Срок исследований, ч Группа До опыта 24 48 72 Бета-глобулин Подопытная 7,5±0,1 6,2±0,3 6,2±0,5 *6,3±0,01 *6,3±0, Контрольная 7,1±0,5 7,4±0,3 7,5±0,1 7,6±0,1 7,6±0, Гамма-глобулин Подопытная 16,2±0,3 *27,5±6,3 *44,5±1,6 *46,0±0,9 *46,8±0, Контрольная 15,7±0,3 15,9±0,5 16,1±0,5 16,1±0,4 16,1±0, * Разница достоверна при Р0,05 относительно контроля.
Согласно полученным результатам у кур при спирохетозе в сыворотке кро ви отмечается гиперпротеинемия (50,4±1,5–61,7±0,4 г/л). Увеличение общего белка свидетельствует о глубоких нарушениях обмена веществ в организме и происходит преимущественно за счет усиленного синтеза глобулинов.
Высокий уровень гамма-глобулинов (27,5±6,3–46,8±0,5 г/л) сопровождал ся уменьшением фракции альбумина (12,7±3,4–6,1±0,01 г/л), при этом отмеча лось снижение альбумин-глобулинового коэффициента.
2.2.5. Иммунобиологические показатели сыворотки крови кур при спирохетозе Для изучения иммунобиологических показателей использовали те же группы кур, что и при биохимических исследованиях.
Патогенное действие спирохет уже через 24 часа после заражения сопро вождалось общей реакцией иммунитета, при которой отмечено снижение Т- и В-лимфоцитов (36,7±1,7 и 26,7±1,8 % соответственно),что на 10,9 и 10,1 % ниже такового показателя в контрольной группе. Через 96 часов Т- и В-лимфоциты достигли 28,9±2,1 и 17,8±1,3 % соответственно.
Со стороны субпопуляций Т-лимфоцитов отмечено увеличение клеток хелперов, супрессоров. Количество клеток супрессоров в сыворотке крови подопытной группы через 24 часа после заражения составило 10,3±1,2 %, что на 43,0 % (Р0,05) выше аналогичного показателя в контрольной группе, а со держание клеток хелперов наиболее сильно увеличилось через 72 часа после заражения и составило 36,1±1,8 %, что на 17,9 % (Р0,05) выше контроля.
Уровень нулевых клеток в сыворотке крови подопытной группы через 48 часов после заражения составил 25,9±1,1 %, достигая 26,0±1,2 % через 96 часов, что на 40,0 и 43,0 % выше аналогичного показателя в контрольной группе соответственно (Р0,05).
У кур при спирохетозе происходит значительное увеличение в сыворотке крови циркулирующих иммунных комплексов через 48 часов (9,2±1,0 ед.), достигающее через 96 часов 14,8±1,6 ед. Формирование такого количества иммунных комплексов в кровотоке вызвано патогенным действием спиро хет вследствие интоксикации организма птицы продуктами их жизнедея тельности.
Показатель фагоцитарной активности у кур при спирохетозе через 24 часа возрастает на 17,3 % (Р0,05) по сравнению с контролем. Через 48 и 72 часа по сле заражения этот показатель достиг 44,7±2,9 и 58,2±3,1 %, что на 30,3 и 68,2 % соответственно выше контроля (Р0,05). При исследовании сыворотки крови через 96 часов после заражения фагоцитарная активность составила 62,7±2,6 %, что на 80,1 % (Р0,05) выше такового показателя в контрольной группе.
2.2.6. Патологоанатомические изменения у кур при спирохетозе Для детального исследования патологоморфологических изменений у кур, возникающих после искусственного заражения спирохетозом, нами было за ражено 10 клинически здоровых кур породы родонит в возрасте 12 месяцев, которым внутримышечно в область киля вводили кровь от больных спирохе тозом птиц в дозе 0,5 мл/гол. В качестве контроля служили куры того же воз раста и породы в количестве 10 голов.
Патологоанатомические изменения наблюдались в месте введения и прак тически во всех органах и тканях.
У павших кур мышцы киля были уменьшены в объеме, межмышечная клетчатка и частично мышцы, особенно вокруг места инъекции, имели жел тую окраску и обширные кровоизлияния (рис. 1).
Рис. 1. Мышцы киля кур на 5-й день после введения крови от больных спирохетозом кур У кур, которым вводили кровь от клинически здоровых птиц, мышцы киля были упругой консистенции, имели бледно-розовый цвет, четко выраженное волокнистое строение, в месте инъекции присутствовало незначительное про питывание кровью (рис. 2).
Рис. 2. Мышцы киля кур на 5-й день после введения крови от здоровых кур У кур, павших от спирохетоза, мышцы, взятые рядом с местом инъекции, при гистологическом исследовании были неоднородные по толщине, одни во локна утолщены, другие – сходны с таковыми у контрольной группы. Некото рые волокна распадались на отдельные части (рис. 3).
Рис. 3. Лизис и распад отдельных мышечных волокон.
Окраска гематоксилином и эозином Х Таким образом, при внутримышечном введении возбудителя спирохетоза у кур в месте введения были обнаружены патологоанатомические изменения, характерные для острого паренхиматозного миозита с преимущественными некротическими и дистрофическими изменениями в мышечных волокнах.
В печени развивались патологоанатомические изменения, характерные для острого паренхиматозного гепатита с белково-жировой дистрофией в гепато цитах (рис. 4).
Рис. 4. Жировая дистрофия гепатоцитов.
Окраска гематоксилином и эозином Х В селезенке были обнаружены патологоанатомические изменения харак терные для гиперплазии.
В фабрициевой сумке обнаружена пролиферация лимфоидных узелков (рис. 5), сосудистая реакция и диффузное изъязвление слизистой оболочки.
Рис. 5. Гиперплазия лимфоидных узелков в подслизистом слое фабрициевой сумки. Окраска гематоксилином и эозином Х В тимусе обнаруживалось уменьшение коркового слоя долек. Соотно шение коркового и мозгового вещества большей частью не превышало 1:4.
Корковый слой слабо выражен, толщина его составляла в среднем 5–6 рядов клеток (рис. 6). В мозговом слое большинство долек уменьшено по сравнению со здоровыми курами. Количество эпителиальных телец было снижено и не превышало 4–6 в каждой дольке.
Рис. 6. Истончение корковой зоны тимуса.
Окраска гематоксилином и эозином Х В пищеводе обнаружена гипоплазия лимфоидных узелков и изъязвление эпителия. В кишечнике отмечены патологоморфологические изменения, ха рактерные для подострого катарального энтероколита с гиперплазией лимфо идных узелков.
В сердце присутствуют патологоморфологические изменения, характер ные для подострого паренхиматозного миокардита, а в почках отмечены па тологоморфологические изменения, характерные для альтеративного тубуло нефрита.
2.2.7. Лечение кур, больных спирохетозом Для лечения кур, больных спирохетозом, мы применяли бактериостатиче ский антибиотик длительного действия – окситетрациклин 200, произведен ный фирмой «Invesa» (Испания).
Для испытания данного препарата куры русской белой породы в возрасте 12 месяцев были сформированы в пять групп (четыре подопытных и одна кон трольная) по 15 голов в каждой и экспериментально заражены возбудителем спирохетоза. Для заражения использовали цитратную кровь в дозе 0,5 мл/гол.
Всех подопытных и контрольных птиц содержали изолированно до конца на блюдений.
Лечение у экспериментально зараженных кур начинали с момента про явления типичных клинических признаков болезни и обнаружения в мазках крови 50 и более спирохет в одном поле зрения.
В первой подопытной группе окситетрациклин 200 вводили внутримы шечно в область киля из расчета 0,1 мл на 1 кг веса однократно.
Во второй подопытной группе данный препарат выпаивали однократно из расчета 0,2 мл на 1 кг веса, разведенный в 200 мл воды (норма потребления воды в сутки на 1 голову по Н. В. Кожемяка, Ф. С. Кудрявцеву, 1982).
В третьей подопытной группе окситетрациклин 200 выпаивали однократ но в дозе 0,3 мл на 1 кг веса, разведенный в 200 мл воды.
В четвертой группе антибиотик вводили внутримышечно в область киля из расчета 0,1 мл на 1 кг веса однократно. Одновременно с этим куры получали спиртовой экстракт из личинок трутней. Данную добавку применяли путем выпаивания в течение 10 дней из расчета 1 мл на 1 кг веса животного, раз веденную в 200 мл воды.
Пятая группа служила контролем, птиц этой группы не лечили.
Результаты проведенных исследований по испытанию эффективности ок ситетрациклина 200 приведены в таблице 4.
Таблица Эффективность окситетрациклина 200 при спирохетозе Результаты Доза лечения Количество Метод окситетра Группа зараженных введения Выздо циклина 200, Пало, птиц, гол. препарата ровело, мл/кг гол.
гол.
Подопытная 1 15 0,1 Внутримышечно 1 Подопытная 2 15 0,2 С водой 6 Подопытная 3 15 0,3 С водой 2 В/м + экстракт 0,1 + 1 мл/кг с водой Подопытная 4 15 0 экстракта в течение 10 дней Контрольная 15 – – 15 Чтобы выяснить, как быстро исчезают спирохеты при применении дан ных методов лечения, у птиц через 6, 12, 24, 48, 72, 96 и 120 часов после лечения исследовали мазки крови. Результаты исследований представлены в таблице 5.
Окситетрациклин 200 при лечении кур, экспериментально зараженных воз будителем спирохетоза, обладает терапевтической эффективностью: методом однократного группового выпаивания в дозе 0,3 мл/кг;
путем однократного внутримышечного введения в область киля в дозе 0,1 мл/кг и внутримышеч ным однократным введением в дозе 0,1 мл/кг в комбинации со спиртовым экстрактом из личинок трутней (1,0 мл/кг в течение 10 дней). Следует от метить, что применение данного антибиотика в комплексе со спиртовым экс трактом из личинок трутней способствовало быстрому выздоровлению кур, являясь в свою очередь наиболее эффективным методом.
Таблица Среднее число спирохет в поле зрения микроскопа после лечения Срок исследований, ч Группа 6 12 24 48 72 96 Подопытная 1 14 6 2 1 0 0 Подопытная 2 15 14 12 10 9 5 Подопытная 3 15 10 5 3 1 0 Подопытная 4 12 5 1 0 0 0 Контрольная 15 16 19 23 25 26 2.2.8. Показатели крови при лечении кур, больных спирохетозом Для изучения влияния окситетрациклина 200 и окситетрациклина 200 в комплексе со спиртовым экстрактом из личинок трутней на организм кур, экс периментально зараженных спирохетозом, была отобрана и исследована кровь от кур тех же четырех подопытных и одной контрольной групп и определены количественные изменения со стороны гематологических (эритроциты, гемо глобин, лейкоциты, базофилы, эозинофилы, псевдоэозинофлы, лимфоциты, моноциты), биохимических (общий белок, альбумины, альфа, бета, гамма глобулины) и иммунологических (Т- и В-лимфоциты, клетки хелперы, супрес соры, нулевые) показателей до начала и через 1, 5, 10 дней после лечения.
При исследовании крови в первой подопытной группе (окситетрациклин 200 внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг) количественные изменения изучае мых показателей наблюдались уже через сутки после применения препара та. Через 5 дней большинство гематологических показателей (эритроци ты – 3,3±0,21012/л, базофилы – 2,9±0,5 %, эозинофилы – 7,3±1,0 %, моно циты – 4,4±1,2 %) находилось в пределах нормы, но в крови было отмечено пониженное количество гемоглобина (70,7±4,2 г/л), незначительный лейкоци тоз (68,2±2,2109/л), лимфоцитопения (51,3±1,0 %).
При исследовании сыворотки крови через сутки после лечения наблюда лось увеличение количества альбумина (9,7±0,6 г/л) на 59,0 % (Р0,05) по срав нению с данным показателем в контрольной группе, достигая через 10 дней 13,8±1,0 г/л, что в 2,2 раза выше, чем в подопытной группе до начала лечения.
Количество альфа-глобулинов через сутки после введения препарата состави ло 5,7±0,8 г/л, что в 2,0 раза превышало аналогичный показатель в контроль ной группе (Р0,05). В динамике количества гамма-глобулинов прослежива лось незначительное снижение (28,0 %, Р0,05) по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе. Данный показатель находился в пределах нормы при исследовании крови через 10 дней (28,9±2,0 г/л).
Среди иммунобиологических показателей следует отметить увеличение ко личества Т- и В-лимфоцитов через сутки после лечения (35,8±1,7 и 23,0±2,2 % соответственно), это на 34,6 и 24,3 % (Р0,05) выше, чем в контрольной группе.
Высокий процент снижения клеток хелперов (17,0 %) и супрессоров (43,0 %) наблюдался через 10 дней по отношению к результатам, полученным до начала лечения. Количество нулевых клеток в сыворотке крови подопытной группы через сутки после лечения составило 21,3±1,1 %, это на 27,3 % (Р0,05) ниже такового показателя в контрольной группе. Через 5 и 10 дней данный показатель снизился на 17,2 и 30,6 % по сравнению с результатом, полученным в подопыт ной группе до начала лечения соответственно.
По результатам исследования крови кур второй подопытной группы (ок ситетрациклин 200 в дозе 0,2 мг/кг методом группового выпаивания) следу ет отметить, что в данной группе наиболее положительные результаты были получены нами через 10 дней. Однако в этот период был отмечен лейкоцитоз (66,4±3,6 %). Через 10 дней после лечения было отмечено низкое количество альбуминов (10,9±1,0 г/л), альфа-глобулинов (5,2±0,8 г/л) на фоне повышенно го содержания гамма-глобулинов (33,04±11,6 г/л).
Содержание Т- и В-лимфоцитов в сыворотке крови кур подопытной группы через 10 дней повысилось на 14,1 и 21,7 % по сравнению с пока зателем, полученным в этой группе до начала лечения. Количество клеток супрессоров в сыворотке крови подопытной группы через 10 дней состави ло 8,9±1,9 %, что на 18,3 % ниже показателя, полученного в этой группе до начала лечения соответственно. Уровень клеток хелперов в сыворотке крови подопытной группы через 10 дней после лечения снизился до 30,6±2,2 %, что на 2,8 % ниже по сравнению с показателем, полученным в подопытной группе до начала лечения. Количество нулевых клеток снизилось на 30,6 % по сравнению с результатом, полученным в подопытной группе до начала лечения соответственно.
По результатам проведенных исследований крови кур третьей подопыт ной группы (окситетрациклин 200 в дозе 0,3 мг/кг методом группового вы паивания) отмечался низкий уровень гемоглобина (70,4±2,7 г/л), лейкоцитоз (77,3±2,2109/л), эозинопения (4,5±0,9 %) и повышенное содержание псев доэозинофилов (33,4±1,9 %). Через 5 дней после лечения данные показатели находились в пределах нормы.
Содержание альбумина в сыворотке крови кур подопытной группы через сутки после лечения равнялось 7,4±0,7 г/л, что на 48 % (Р0,05) превыша ло аналогичный показатель в контрольной группе, достигая через 10 дней 14,7±1,4 г/л соответственно.
Касаясь количественных изменений глобулинов, следует отметить увеличе ние альфа- и бета-глобулинов по сравнению с контролем через сутки после ле чения (в 2,2 и 2,0 раза соответственно, Р0,05). Количество гамма-глобулинов в сыворотке крови подопытной группы через сутки после лечения равнялось 35,8±2,0, это на 32,3 % (Р0,05) меньше, чем в контрольной группе. Через и 10 дней показатель достиг 27,5±2,1 и 13,8±2,1 %, что на 42,5 и 71,1 % ниже результата, полученного в данной группе до начала лечения.
Среди иммунобиологических показателей отмечали увеличение Т- и В-лимфоцитов через сутки после лечения (34,6±1,3 и 24,8±1,3 % соответ ственно), что на 30,0 и 34,0 % (Р0,05) превышало аналогичный показатель в контроле. Количество нулевых клеток (21,3±1,8 %) снизилось через сутки по сле лечения на 27,3 % (Р0,05) относительно контроля, а содержание клеток супрессоров и хелперов (12,8±1,7 и 34,2±2,3 % соответственно) снизилось на 18,5 и 8,3 % (Р0,05) по отношению к показателям в контрольной группе.
По результатам исследования крови кур четвертой подопытной группы (ок ситетрациклин 200 внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг в комплексе со спиртовым экстрактом из личинок трутней) следует отметить, что уже через сутки после ле чения большинство гематологических показателей (гемоглобин – 75,8±2,0 г/л, эозинофилы – 6,3±1,0 %, псевдоэозинофилы – 32,4±1,4 %, лимфоциты – 54,8±1,9 %, моноциты – 6,1±1,1 %) находились в пределах нормы. Однако в крови присутствовал лейкоцитоз (71,5±2,1109/л). По истечении пяти дней по сле лечения данный показатель находился в пределах нормы (53,7±1,6109/л).
Среди биохимических показателей отмечено снижение через сутки после лечения общего белка на 8,4 % относительно контроля (Р0,05). Содержание альбумина в сыворотке крови подопытной группы через сутки после лече ния возросло до 11,3±0,9 г/л (Р0,05), достигая через 5 и 10 дней 14,01±1, и 16,8±1,1 г/л соответственно. Уровень гамма-глобулинов в сыворотке крови через сутки после лечения достиг 35,9±2,2 г/л, что на 32,1 % ниже, чем в кон трольной группе (Р0,05). Через 5 и 10 дней после лечения данный показатель снизился до 15,2±2,7 и 13,08±3,7 г/л, это на 69,4 и 73,7 % меньше показателя, полученного в подопытной группе до начала лечения.
Количество Т- и В-лимфоцитов увеличилось (32,0 и 31,0 % соответствен но) через сутки после лечения по отношению к контролю. Количество клеток супрессоров через сутки после лечения составило 13,6±1,8 %, что на 13,4 % меньше, чем в контрольной группе. Через 5 и 10 дней данный показатель сни зился на 43,0 и 60,0 % соответственно по сравнению с результатом, получен ным нами до начала лечения в подопытной группе. Количество клеток хелпе ров через сутки после лечения снизилось на 8,8 % в сравнении с контролем (Р0,05). По истечении 5 и 10 дней после лечения количество клеток хелперов в сыворотке крови подопытной группы равнялось 30,8±1,6 и 27,8±1,8 %, что на 9,4 и 18,2 % соответственно ниже результата, полученного в этой группе до начала лечения. Уровень нулевых клеток через сутки после лечения достигал 20,7±1,6 %, что на 29,3 % ниже аналогичного показателя в контрольной груп пе (Р0,05). Через 5 и 10 дней содержание нулевых клеток в сыворотке крови подопытной группы составило 18,7±1,9 и 16,4±1,9 %, это на 25,2 и 34,4 % ниже результата, полученного в данной группе до начала лечения.
Таким образом, использование окситетрациклина 200 методом группово го выпаивания в дозе 0,3 мл/кг, внутримышечного введения в область киля в дозе 0,1 мл/кг и внутримышечного введения в дозе 0,1 мл/кг в комбинации со спиртовым экстрактом из личинок трутней (1,0 мл/кг в течение 10 дней) сопровождается высоким терапевтическим эффектом и улучшением гемато логических, биохимических и иммунобиологических показателей.
3. ВЫВОДЫ 1. На территории Ставропольского края Благодарненский, Советский (за сушливая зона);
Новоалександровский, Красногвардейский, Труновский (зона неустойчивого увлажнения);
Левокумский, Арзгирский, Туркменский (крайне засушливая зона), а также Минераловодский (зона достаточного увлажнения) районы являются наиболее неблагополучными по спирохетозу птиц.
2. При экспериментальном заражении кур различных возрастов установ лено, что на течение спирохетоза влияет доза заражения, чем выше доза, тем тяжелее заболевание, при этом симптомы болезни ярче выражены у молодня ка, чем у взрослой птицы.
3. При внутримышечном заражении кур спирохетозом в месте введения развиваются обширные некротические изменения, а в органах и тканях – па тологоморфологические изменения, характерные для септицемии (гиперпла зия селезенки, акцидентальная инволюция тимуса, паренхиматозный миокар дит, паренхиматозный гепатит, альтеративный тубулонефрит, катаральный гастроэнтерит с гиперплазией лимфоидных узелков).
4. У экспериментально зараженных кур в крови наблюдается анемия, со провождающаяся достоверным снижением числа эритроцитов (50,0 %) и ге моглобина (37,4 %). Уровень лейкоцитов повышается в два раза, а в лейкоци тарной формуле присутствует псевдоэозинофилия, эозинопения, лимфоцито пения и выраженный моноцитоз.
5. При спирохетозе в сыворотке крови кур отмечается гиперпротеинемия (50,4±1,5–61,7±0,4 г/л). Увеличение общего белка свидетельствует о глубоких нарушениях обмена веществ в организме, преимущественно за счет усиленно го синтеза глобулинов. Высокий уровень гамма-глобулинов (27,5±6,3-46,8±0, г/л) сопровождался уменьшением фракции альбумина (12,7±3,4-6,1±0,01 г/л), в результате чего снижался альбумин-глобулиновый коэффициент.
6. Патогенное действие спирохет сопровождается общей реакцией им мунитета, при которой отмечено снижение Т- и В-лимфоцитов (36,7±1,7– 28,9±2,1 % и 26,7±1,8–17,8±1,3 % соответственно). Со стороны субпопуляций Т-лимфоцитов происходит увеличение хелперов (29,8±1,6–38,5±1,5 %), су прессоров (10,3±1,2–17,5±1,5 %). Содержание нулевых клеток также возрас тает (21,3±2,4–26,0±1,2 %). При спирохетозе у кур отмечено значительное уве личение в сыворотке крови циркулирующих иммунных комплексов (6,3±0,5– 14,8±1,6 ед.). У экспериментально зараженных кур отмечено достоверное увеличение показателей фагоцитарной активности (44,2±2,2–62,7±2,6 %).
7. Окситетрациклин 200 при лечении кур, экспериментально зараженных возбудителем спирохетоза, обладает терапевтической эффективностью: мето дом группового выпаивания в дозе 0,3 мл/кг (однократно);
однократного вну тримышечного введения в область киля в дозе 0,1 мл/кг и внутримышечного однократного введения в дозе 0,1 мл/кг в комбинации со спиртовым экстрак том из личинок трутней (1,0 мл/кг в течение 10 дней).
8. В крови кур, экспериментально зараженных спирохетозом, происходит значительное увеличение гематологических, биохимических и иммунобиоло гических показателей с использованием окситетрациклина 200 методом груп пового выпаивания в дозе 0,3 мл/кг (однократно);
однократного внутримы шечного введения в область киля в дозе 0,1 мл/кг и внутримышечного одно кратного введения в дозе 0,1 мл/кг в комбинации со спиртовым экстрактом из личинок трутней (1,0 мл/кг в течение 10 дней).
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. Материалы по лечению кур при спирохетозе вошли в рекомендации «Биология, диагностика, лечение и профилактика спирохетоза птиц» для практикующих ветеринарных врачей, утвержденные НТС министерства сель ского хозяйства Ставропольского края 26.03.2010.
2. Для лечения кур, больных спирохетозом, рекомендуем применять ок ситетрациклин 200 внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг (однократно);
методом однократного внутримышечного введения в дозе 0,1 мл/кг совместно со спир товым экстрактом из личинок трутней (1,0 мл/кг в течение 10 дней), а также однократного группового выпаивания данного препарата в дозе 0,3 мл/кг.
3. Основные положения диссертации могут быть использованы в качестве учебного материала по паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизе.
5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Луцук, С. Н. Распространение спирохетоза птиц / С. Н. Луцук, Д. С. Штумпф // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сель скохозяйственных животных : материалы 72-й науч. конф. (Ставрополь, 22–24 апреля 2008 г.) / СтГАУ. – Ставрополь : АГРУС, 2008. – С. 74–76.
2. Луцук, С. Н. Спирохетоз кур при экспериментальном заражении / С. Н. Луцук, Д. С. Штумпф // Паразитарные, инфекционные и неинфек ционные заболевания животных : материалы Междунар. науч.-практ.
Интернет-конф. (Ставрополь, 1–15 декабря 2008 г.) / СтГАУ. – Ставро поль : АГРУС, 2009. – С. 61–64.
3. Луцук, С. Н. Течение спирохетоза кур при экспериментальном зараже нии / С. Н. Луцук, Д. С. Штумпф // Диагностика, лечение и профилак тика заболеваний сельскохозяйственных животных : материалы 73-й науч. конф. (Ставрополь, 23–25 февраля 2009 г.) / СтГАУ. – Ставрополь :
АГРУС, 2009. – С. 54–56.
4. Луцук, С. Н. Биохимические показатели крови при спирохетозе кур / С. Н. Луцук, Д. С. Штумпф // Российский паразитологический журнал. – М., 2009. – № 4. – С. 83–85.
5. Луцук, С. Н. Морфофункциональное состояние печени кур при спиро хетозе / С. Н. Луцук, Д. С. Штумпф // Современные методы диагно стики, профилактики и терапии заразных и незаразных болезней жи вотных : материалы Междунар. науч.-практ. конф. (Ставрополь, 18– ноября 2009 г.) / СтГАУ. – Ставрополь : АГРУС, 2009. – С. 64–66.
6. Луцук, С. Н. Динамика гематологических показателей кур при спирохетозе и после лечения окситетрациклином / С. Н. Луцук, Д. С. Штумпф // Российский паразитологический журнал. – М., 2010. – № 2. – С. 78–79.
7. Луцук, С. Н. Биология, диагностика, лечение и профилактика спирохе тоза птиц : метод. рекомендации / С. Н. Луцук, Д. С. Штумпф. – Став рополь, 2010. – 19 с.
Подписано в печать 29.10.2010. Формат 60х84 1/16.
Гарнитура «Таймс». Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0.
Тираж 100. Заказ № 464.
Отпечатано в типографии издательско-полиграфического комплекса СтГАУ «АГРУС», г. Ставрополь, ул. Мира, 302.