Клинико – генетическое исследование аскаридоза в республике башкортостан
На правах рукописи
МУРЗАГАЛЕЕВА ЛИРА ВАЛЕРЬЕВНА КЛИНИКО – ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ АСКАРИДОЗА В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН 14.01.09 – инфекционные болезни 03.02.07 - генетика
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва – 2010 1
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.
Научные руководители:
доктор медицинских наук, профессор Валишин Дамир Асхатович доктор биологических наук, профессор Хуснутдинова Эльза Камилевна
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук Ермак Татьяна Никифоровна доктор медицинских наук, профессор Петрин Александр Николаевич Ведущая организация – ГОУ ВПО «Московский государственный медико – стоматологический университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.
Защита диссертации состоится «29» июня 2010г. в «» часов на заседании диссертационного совета Д 208.114.01 Федерального государственного учреждения науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере прав потребителей и благополучия человека по адресу: 111123, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного учреждения науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере прав потребителей и благополучия человека по адресу: 111123, Москва, ул.
Новогиреевская, д.3а.
Автореферат разослан «»2010 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, Горелов Александр Васильевич доктор медицинских наук, профессор
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы По официальным данным ВОЗ и отдельных авторов, в мире аскаридозом ежегодно поражается свыше 1 млрд. человек [Такмолаев А.К., Бронштейн А.М., 2002]. Аскаридоз является ведущей инвазией в группе геогельминтозов и распространен на всей территории Российской Федерации [М.Н. Лебедева, Ф.С. Михайлицина, 1998;
В.П. Сергиев, 2005;
Г.Г.
Онищенко, 2007]. Так, в 2006 году зарегистрировано 66548 больных аскаридозом, в том числе – 46398 детей [Романенко Н.А., Черникова Е.А., Гузеева Т.М., Глиненко В.М., Сергиев В.П., 2006 г.]. Аскаридоз также относится к наиболее распространенным гельминтозам в Республике Башкортостан.
В настоящее время, несмотря на широкую распространенность аскаридоза, нет достаточных данных о патогенетических механизмах развития болезни. Известно, что на ранней стадии аскаридозной инвазии восприимчивость организма к паразитам контролируется механизмами клеточного иммунитета, повышается метаболическая, рецепторная и синтетическая активность моноцитов, наблюдается индукция Т–клеточного звена в основном за счет повышения супрессорной активности без соответствующей активации Т–хелперов. Гельминты нарушают функции желудочно-кишечного тракта, являются причиной аллергических реакций, интоксикации и ослабления иммунитета [Чахирева Н.Е., 2003;
Курашвили В.А., 2007]. Особенностью аскаридоза является полиморфизм клинических проявлений – от бессимптомного (субклинического) течения до тяжелейших форм. Это объясняется сложным воздействием комплекса разнообразных и многочисленных внешних и внутренних патогенных факторов, влияние которых закономерно изменяется в зависимости от стадии, длительности болезни;
а также иммунореактивности организма во взаимоотношении с условиями окружающей среды. Многочисленные исследования, проводимые во всем мире, показывают, что восприимчивость к инфекционным агентам генетически детерминирована [Смольникова М.В., 2001;
Wucherpfenning К., 2001;
Meyer С., 2002;
Khakoo S., 2004].
Одним из наиболее доступных подходов, применяемых в молекулярно – генетических исследованиях многофакторных заболеваний, является изучение ассоциаций заболевания с полиморфными вариантами генов, белковые продукты которых участвуют в патогенезе болезни. Ассоциация полиморфных вариантов генов про- и противовоспалительных цитокинов, определяющих баланс «активации – ингибирования» иммунореактивности с инфекционными заболеваниями, в настоящее время интенсивно исследуется в различных странах мира. Sarah Williams-Blangero и соавт. при полногеномном скрининге выявили ряд локусов сцепления с аскаридозом в непальской популяции - 13q33, 13q21, 11p14, 8q23, 1p36, 1p34 [Williams Blangero S., 1999;
Williams - Blangero S., 2008]. Согласно данным литературы, обнаружены ассоциации полиморфных вариантов генов интерлейкинов 1, 4, 10, 13 с развитием аскаридоза и аллергических заболеваний [Schall T.J., 1994;
Tsunemi Y., 2002;
Peisong G., 2004].
В доступной литературе мы не нашли данных о молекулярно генетических исследованиях аскаридоза, в связи с чем является актуальным изучение ассоциации полиморфных вариантов генов-кандидатов с данным заболеванием.
В рамках рассматриваемой проблемы идентификация генов, вовлеченных в патогенез аскаридоза, является важной медико – генетической задачей, которая способствует формированию фундаментальных представлений о патогенезе этого социально значимого заболевания, а также позволит прогнозировать риск развития и характер клинического течения аскаридоза.
Цель работы:
Проанализировать роль полиморфных вариантов генов цитокинов (ТNFA (-308GА), IL4 (–590CT), -цепи IL4R (Ile50Val), IL10 (-627СА), IL13 (Arg130Gln) и CCL11 (–384AG)) в развитии клинических вариантов течения аскаридоза.
Задачи исследования Охарактеризовать и проанализировать эпидемиологическую ситуацию 1.
по аскаридозу в РБ.
Изучить и проанализировать клинико - лабораторные особенности 2.
течения кишечной стадии аскаридоза.
Провести исследование полиморфных вариантов генов фактора некроза 3.
опухоли альфа (ТNFA (-308GА)), интерлейкина 4 (IL4 (–590CT)), альфа цепи рецептора интерлейкина 4 (-цепи IL4R (Ile50Val)), интерлейкина 10 (IL10 (-627СА)), интерлейкина 13 (IL13 (Arg130Gln)) и эотаксина (CCL11 (–384AG)) у больных аскаридозом и здоровых индивидов контрольной группы.
Провести анализ ассоциации исследуемых полиморфных вариантов 4.
генов с развитием клинических проявлений аскаридоза и с различными клиническими вариантами течения данного заболевания.
Провести анализ роли межгенных взаимодействий изученных 5.
полиморфных локусов в развитии аскаридоза.
Научная новизна исследования Впервые на основе анализа клинических проявлений у больных с аскаридозом определены варианты течения кишечной стадии аскаридоза.
Впервые у больных с кишечной стадией аскаридоза проведено исследование частот генотипов и аллелей полиморфных локусов генов цитокинов и их рецепторов (интерлейкина-4, -цепи рецептора интерлейкина-4, интерлейкина–10, интерлейкина-13, гена фактора некроза опухоли и эотаксина). Проведен анализ ассоциаций данных полиморфных локусов с аскаридозом в Республике Башкортостан. Выявлены маркеры повышенного риска развития аскаридоза.
Впервые установлена ассоциация изученных полиморфных локусов генов цитокинов с различными клиническими вариантами течения аскаридоза.
Впервые с помощью программы GMDR исследовано межгенное взаимодействие генов цитокинов, а также изучено их взаимовлияние с учетом половой принадлежности индивидов и клинических проявлений аскаридоза.
Научно-практическая значимость работы Результаты работы вносят вклад в расшифровку патогенеза аскаридоза и общее представление о генетических основах предрасположенности к аскаридозу. Впервые выявлены генетические маркеры предрасположенности к различным клиническим вариантам течения кишечной стадии аскаридоза.
Внедрение результатов исследования в практику Результаты исследований используются в учебном процессе кафедры инфекционных болезней с курсами дерматовенерологии и косметологии ИПО ГОУ ВПО ”Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию”.
Данные диссертационной работы могут послужить основой для последующих исследований по определению генетических факторов риска развития аскаридоза в РБ. Результаты исследования также могут быть использованы при чтении спецкурсов на факультетах биологии, в медицинских ВУЗах, на курсах повышения квалификации медицинских работников.
Основные положения, выносимые на защиту 1. Генотип CCL11*А/*А и аллель CCL11*А полиморфного варианта – 384АG гена CCL11 являются маркерами повышенного риска развития аскаридоза.
2. Ассоциация генотипа CCL11*А/*А и аллеля CCL11*А полиморфного варианта –384АG гена CCL11 с аллергическим вариантом течения, генотипа IL4R*50 Val/Val полиморфного варианта Ile50Val гена IL4R с диспепсическим вариантом течения и генотипа IL10*C/*А полиморфного варианта -627СА гена IL10 - со смешанным вариантом течения кишечной стадии аскаридоза.
3. Статистически достоверные различия в распределении частот аллелей и генотипов полиморфных локусов генов IL4(-590CT), IL (Arg130Gln) и TNFA(-308GA) между пациентами с аскаридозом различной половой принадлежности.
4. Межгенное взаимодействие полиморфных локусов генов эотаксина CCL11 (-384АG) и -цепи рецептора интерлейкина 4 IL4R (Ile50Val), детерминирующее развитие аскаридоза;
комбинация полиморфных вариантов генов -цепи рецептора интерлейкина 4 IL4R (Ile50Val) и интерлейкина 10 IL10 (-627CA), ассоциированные с развитием аскаридоза у женщин.
Апробация работы Основные положения диссертации были представлены на 72-й юбилейной Республиканской конференции студентов и молодых ученых, посвященной Году 450-летия единства Башкортостана с Россией, 75-летию БГМУ, 60-летию СНО и 40-летия СМУ (Уфа, 2007), XII Российской научно практической конференции «Инфекционные болезни: актуальные вопросы в клинике и эксперименте», посвященной 75-летию Дагестанской МГА (Махачкала, 2007), Международном Евро – Азиатском Конгрессе по инфекционным заболеваниям (Витебск, 2008), XIV Российской научно практической конференции «Актуальные вопросы инфекционных болезней в клинике и эксперименте» (Махачкала, 2009), VIII областной научно – практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии», посвященной кафедры эпидемиологии и 65-летию инфекционных болезней Оренбургской ГМА (Оренбург, 2010), 2 Ежегодном Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2010) и на совместном научном заседании кафедр инфекционных болезней, инфекционных болезней с курсами дерматовенерологии и косметологии ИПО, детских инфекционных болезней ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» и лаборатории молекулярной генетики человека ИБГ УНЦ РАН (Уфа, 2010).
Публикации По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе статья в журнале, рекомендованном ВАК.
Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 156 страницах, содержит 29 таблиц и рисунка, состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и практических рекомендаций. Список литературы включает 266 источников ( отечественных и 177 зарубежных).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Под нашим наблюдением находилось 140 больных аскаридозом в кишечной стадии в возрасте от 15 до 80 лет (средний возраст 34,94±2,49лет).
Лечение и обследование пациентов проводилось на базе МУ ИКБ № 4 г.
Уфы. Наблюдение проводилось в течение 2005 – 2009 гг., и все обследованные являлись жителями Республики Башкортостан.
Критериями включения в исследование больных являлись: больные обоих полов (15 - 80 лет) с установленным диагнозом «Аскаридоз. Кишечная стадия». Диагноз устанавливался на основании клинико эпидемиологических и лабораторных данных. Сбор данных, включающих в себя: жалобы больного, индивидуальный, эпидемиологический и аллергологический анамнез, проводился в личной беседе с больным. У всех пациентов диагноз аскаридоза подтвержден обнаружением яиц в фекалиях методом нативного мазка и Като. Критерием исключения являлось наличие у больного с кишечной стадией аскаридоза сопутствующего острого или обострение хронического соматического заболевания.
Группа контроля представлена 100 практически здоровыми индивидами (средний возраст 37,7±3,30 лет), не имевшими в анамнезе данных за аллергические заболевания как со стороны самого представителя контрольной группы, так и его родственников, с отрицательными результатами анализов крови в ИФА на наличие антител к антигенам известных гельминтов (аскаридоз, лямблиоз, токсокароз, эхинококкоз, трихинеллез) и исследованиями кала на наличие яиц гельминтов.
ДНК выделяли из периферической крови методом фенольно хлороформной экстракции [Mathew С.С., 1984]. Амплификацию изученных локусов проводили с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК на амплификаторе “Терцик” производства компании «ДНК технология» (г. Москва). Для амплификации использовали реакционную смесь объёмом 25 мкл, которая содержала 2,5 мкл 10хTaq-буфера (67 мМ трис-HCl (pH 8,8), 16,6 мМ (NH4)2 SO4,, 1,5мМ MgCl2, 0,01% Тween-20), 0, мкг геномной ДНК, смесь dNTP (dATP, dGTP, dCTP, dTTP по 200 мкМ каждого), 1 ед. ДНК-полимеразы Termus aquaticus (производства фирмы «Cилекс», г. Москва) и 5-10 пМ локусспецифичных олигонуклеотидных праймеров. Для определения нуклеотидных замен проводили гидролиз амплифицированных фрагментов соответствующей рестриктазой. Разделение фрагментов ДНК после амплификации и рестрикции проводили при помощи электрофореза в 7% полиакриламидном геле (ПААГ), приготовленном из 30% раствора ПААГ (соотношение акриламид:N,N’-метиленбисакриламид 29:1). Электрофорез проводили в 1 ТБЕ буфере (0,089 М трис-HCl;
0,089 М борная кислота;
0,002 М ЭДТА, рН=8,0). Перед нанесением на гель пробы смешивали в соотношении 5:1 с краской, содержащей 0,25% бромфенолового синего, 0,25% ксиленцианола и 15% фикола. После окончания электрофореза гель окрашивали раствором бромистого этидия и фотографировали при УФ освещении.
Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием параметрической и непараметрической статистики в зависимости от шкал и характера распределения переменных. Все расчеты проводились с использованием пакета «Statistica 6.0» [StatSoft Inc., 2001].
При попарном сравнении частот генотипов и аллелей в группах больных и здоровых лиц использовался точный двухсторонний критерий Фишера P (F2), а также критерий (P) для таблиц сопряженности 22 с поправкой Йейтса на непрерывность (Леонов, 1998). Силу ассоциаций оценивали в значениях показателя отношения шансов Odds Ratio (OR) (Бабич П.Н. и соавт., 2005). С целью преодоления проблемы множественных сравнений применялись поправка Бонферрони (Реброва О.Ю., 2003).
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Клинико – анамнестическая и лабораторная характеристика больных с кишечной стадией аскаридоза С целью оценки особенностей клинических и лабораторных проявлений аскаридоза были проанализированы жалобы, анамнез и результаты осмотра 140 больных с кишечной стадией аскаридоза, получавших амбулаторное и/или стационарное лечение в клинической инфекционной больнице № 4 г. Уфы. Возраст пациентов колебался от 15 до 80 лет (34,94±2,49). Анализ структуры сопутствующих заболеваний выявил, что у значительной части больных аскаридозом – 45% регистрировалась патология желудочно-кишечного тракта (в сравнении с 13% в контрольной группе, 2=64,82;
р=0,001) и железодефицитная анемия – 37% (в сравнении с 1% в контрольной группе, 2=39,80;
р=0,001). При изучении данных анамнеза установлено, что большая часть заболевших имела контакт с землей (в частном доме, саду, лесу, даче при посадке, прополке и уборке урожая) 83,6%;
45% пациентов употребляли в пищу немытые («с грядки») ягоды, овощи и фрукты;
5,7% больных аскаридозом регулярно выезжает на отдых в страны с жарким климатом (Турция, Египет, Таиланд, Индия) и 11,4% - часто питаются в заведениях общественного питания. Также было установлено, что максимальная зараженность аскаридозом наблюдается среди лиц трудоспособного возраста от 21 до 50 лет – 60 %. При распределении больных по полу, мужчины составили 36 %, женщины - 64 %. Отмечается повышение заболеваемости у женщин, по сравнению с мужчинами практически в 2 раза. Наиболее значимая разница между заболевшими мужчинами и женщинами наблюдается в возрасте 31 – 40 лет, что связано, по-видимому, с наибольшей вовлеченностью женщин данного возраста в садово–огородную деятельность. Динамика обращаемости пациентов имела сезонный характер, пик отмечался в осенне – зимний период (78%). В первые 3 месяца от момента появления первых симптомов заболевания в стационар обратилось 18,6% больных;
в период 3 – 6 месяцев - 24,3%;
30% пациентов поступило спустя 6 месяцев от начала заболевания и 27,1% - через 1 год и более. В клинике всех обследованных больных с кишечной стадией аскаридоза были выявлены 4 синдрома: кожно – аллергический, диспепсический, астено – невротический и респираторный. С учетом выраженности таких ведущих синдромов как аллергический и диспепсический (абдоминальный) все пациенты были разделены на клинические группы: аллергическую (n=48;
34,3%), диспепсическую (n=59;
42,1%) и смешанную (n=33;
21,4%), где отмечались и аллергические симптомы, и диспепсические расстройства.
В клинической картине у больных аллергической группы преобладающими являлись высыпания на туловище (75%), лице (50%), конечностях (60,4%) в виде крапивницы, атопического дерматита, нейродермита, зуд кожных покровов (87,5%) и перианальной области (4,2%), отек век, лица (4,2%), приступы удушья и одышка (8,3%), раздражительность (27,1%), слабость (89,6%) и нарушение сна (25%).
В диспепсической группе доминировали боли в животе (89,8%) стойкого, иногда приступообразного характера, преимущественно в околопупочной области, часто сопровождающиеся тошнотой (42,4%) и рвотой (5,1%), расстройством стула в виде запоров (18,6%) и/или разжижения (50,8%);
субфебрильная лихорадка (20,3%);
похудание (22%);
сухость во рту (6,8%);
изжога (15,3%);
снижение аппетита в 30,5% и слюнотечение в 15,3% случаев.
В клинике у больных аскаридозом из смешанной группы в одинаковой степени регистрировались как аллергические, так и диспепсические симптомы. Так, у каждого пациента помимо высыпаний на лице и/или туловище и/или конечностях (100%) и кожного зуда (69,7%), отмечались боли в животе – 91,0%, в 75,8% - жидкий стул, в 21,2% - субфебрильная температура тела, тошнота, ухудшение аппетита, изжога и гепатомегалия;
у 27,3% - снижение массы тела, а в 18,2% случаев наблюдалась сухость кожных покровов и сухой кашель. Также двое пациентов (6%) предъявляли жалобы на постоянное чувство голода, слюнотечение и скрежет зубами и трое (9%) – на тяжесть в правом подреберье.
Анализ некоторых лабораторных показателей выявил статистически значимые различия между группами больных и группой контроля. Так, среди пациентов с аскаридозом наблюдалась относительная эозинофилия (5 – 15%) в 10,7% случаев (15 больных) в сравнении с контрольной группой (2=9,67, р=0,002), 8 пациентов из которых относились к аллергической группе (16,7%), 5 больных – к диспепсической (8,5%) и 2 человека – к смешанной (6,1%). Инвазия аскаридами также увеличивает активность АЛаТ и АСаТ сыворотки крови. Так, индивидуальные показатели активности аминотрансфераз оказались выше средних (до 152 Ед/мл) у больных аскаридозом – АлаТ у 67,9% и АСаТ у 34,3% - в сравнении с контролем (20,0%;
2=44,83, р=0,001 и 5,0%;
2=24,97, р=0,001 соответственно). Также у пациентов с аскаридозом в 3,6% случаев наблюдалось повышение уровня общего билирубина (до 80 мкмоль/л). При сравнении средних показателей общего билирубина между общей выборкой больных аскаридозом и группой контроля, а также между клиническими группами, различия не достигли статистической значимости (р0,05).
Исследование показателей красной крови (количество эритроцитов, уровень гемоглобина) выявило статистически значимое снижение уровня гемоглобина (менее 115 г/л у женщин и 132 г/л у мужчин) в группе больных аскаридозом – 37,0% по сравнению с контрольной группой – 1,0% (2=39,80;
р=0,001). При этом снижение гемоглобина с наибольшей частотой – 47,5% регистрировалось в диспепсической группе, в 30,3% случаев – в смешанной и в 29,2% в аллергической группах. Различия средних показателей гемоглобина и количества эритроцитов между группами, а также при сравнении общей выборки пациентов с аскаридозом и контрольной группы, не достигли статистической значимости - р0,05.
Таким образом, в настоящее время кишечная стадия аскаридоза может протекать в виде трех различных по клинике вариантов – аллергического, диспепсического и смешанного. У больных с кишечной стадией аскаридоза нами выявлена относительная эозинофилия (5 – 15%), повышение уровня трансаминаз (до 152 Ел/мл), редко – общего билирубина (до 80,0 мкмоль/л), снижение уровня гемоглобина, а также наличие у значительной части пациентов сопутствующих заболеваний желудочно – кишечного тракта в виде хронического гастрита, панкреатита, холецистита, гепатита, дискинезии желчевыводящих путей и железо – дефицитной анемии.
Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов цитокинов с аскаридозом в Республике Башкортостан Нами проведено изучение ассоциации полиморфных вариантов генов цитокинов: интерлейкина-4 IL4 (–590CT), -цепи рецептора интерлейкина- IL4R (Ile50Val), интерлейкина–10 IL10 (-627СА), интерлейкина-13 IL (Arg130Gln), гена фактора некроза опухоли TNFA (-308GА) и эотаксина CCL11 (–384AG) с аскаридозом в Республике Башкортостан.
Изучение полиморфного локуса –384АG гена CCL11 у больных аскаридозом Анализ полиморфных вариантов –384АG гена CCL11 выявил статистически значимые различия в распределении частот генотипов между сравниваемыми группами больных и контроля (2=11,76;
р=0,003). Среди больных аскаридозом и представителей контрольной группы преобладал гетерозиготный генотип CCL11*G/*А (49,29% и 60,00%, соответственно).
Генотип CCL11*А/*А встречался реже, отмечено достоверное увеличение частоты встречаемости данного генотипа у больных аскаридозом по сравнению с контролем (30,71% и 12,00%, соответственно, 2=11,57;
р=0,001). Показатель соотношения шансов (OR) развития аскаридоза для носителей генотипа CCL11*А/*А составляет 3,25 (95%CI 1,61 – 6,56) (рис. 1).
Наиболее редко среди больных аскаридозом встречался гомозиготный генотип CCL11*G/*G, частота которого в данной группе составила 20,00% против 28,00% у представителей контрольной группы, но различия оказались статистически незначимыми (2=2,09;
р=0,15).
Анализ распределения частот аллелей полиморфного локуса -384AG гена эотаксина CCL11 показал, что в группе больных аскаридозом частота встречаемости аллеля CCL11*А достоверно выше, чем у индивидов контрольной группы (55,36% и 42,00% соответственно;
2=8,33;
р=0,004).
Показатель OR развития аскаридоза для индивидов - носителей аллеля CCL11*А, составил 1,71 (95%CI 1,19 – 2,47) (рис. 1).
Рис. 1. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного варианта –384АG гена CCL11 в выборках больных аскаридозом и индивидов контрольной группы Анализ полиморфного варианта –384АG гена CCL11 не обнаружил статистически значимых различий в распределении частот генотипов и аллелей между группами больных аскаридозом и контроля в зависимости от половой принадлежности, однако при попарном сравнении частот генотипов были обнаружены статистически достоверные различия частоты встречаемости генотипа CCL11*А/*А как между мужчинами из группы больных аскаридозом и контроля (2 correct =5,53;
р=0,019), так и женщинами из соответствующих групп (2 =5,07;
р=0,020). У больных аскаридозом мужчин и женщин частота гомозиготного генотипа CCL11*А/*А была значительно выше (31,37% и 30,34%, соответственно), чем у представителей контрольных групп (9,30% и 14,04%, соответственно). Показатель соотношения шансов развития аскаридоза у мужчин, носителей генотипа CCL11*А/*А, составил 4,46 (95%CI 1,36-14,60), у женщин – 2,67 (95%CI 1,11-6,39).
При анализе распределения частот аллелей полиморфного варианта – 384АG гена CCL11 выявлены статистически значимые различия в распределении частот аллелей между больными мужчинами и представителями мужского пола контрольной группы. Установлено, что у больных аскаридозом мужчин чаще встречался аллель CCL11*А, частота встречаемости которого составила 55,88% против 39,53% в контрольной группе (2=4,99;
р=0,025;
OR=1,94;
95%CI 1,08-3,47);
тогда как аллель CCL11*G чаще регистрировался у здоровых мужчин – 60,47% против 44,12% мужчин с аскаридозом OR=0,52;
95%CI 0,29-0,92).
При сравнении частоты встречаемости аллелей и генотипов данного локуса в зависимости от преобладающих клинических проявлений (доминирующего клинического синдрома) выявлено, что во всех группах больных преобладал генотип CCL11*G/*А, частота которого у пациентов в аллергической группе составила 43,75%, в диспепсической – 52,54% и в смешанной – 51,52%. Частота генотипа CCL11*А/*А была достоверно выше во всех группах больных: наиболее высокая в аллергической группе – 35,42% (2=11,29;
р=0,001), в смешанной группе – 30,30% (2=6,02;
р=0,014) и в диспепсической – 27,12% (2=5,85;
р=0,016) по сравнению с контролем, где частота данного генотипа достигала 12,00%. Показатель OR развития аскаридоза у носителей генотипа CCL11*А/*А с аллергическими проявлениями составил 4,02 (95%CI 1,73-9,36), со смешанными проявлениями – 3,19 (95%CI 1,23-8,30) и с диспепсическими проявлениями – 2,73 (95%CI 1,19-6,27) (рис. 2). Также нами установлено, что во всех группах пациентов статистически достоверно чаще встречались носители аллеля CCL11*А, частота которого в аллергической группе составила 57,29% (2=6,09;
р=0,014);
в смешанной - 56,06% (2=3,96;
р=0,047);
в диспепсической – 53,39% (2=3,87;
р=0,049) против 42,00% в контрольной группе. Показатель OR развития аскаридоза у носителей аллеля CCL11*А с аллергическими проявлениями составил 1,85 (95%CI 1,13-3,03), со смешанными проявлениями – 1,76 (95%CI 1,01-3,09);
с диспепсическими проявлениями – 1,58 (95%CI 1,00-2,50) (рис.2.).
Рис. 2. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного варианта –384АG гена CCL11 в выборках больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями и индивидов контрольной группы Изучение полиморфного локуса -590CT гена IL4 у больных аскаридозом В результате изучения полиморфного варианта гена IL4 (590CT) в группе больных аскаридозом и индивидов контрольной группы нами идентифицировано 3 генотипа – IL4*–590C/C, IL4*–590C/Т и IL4*–590Т/Т.
Характеризуя частоту встречаемости генотипов, следует отметить, что в обеих группах наблюдения с большей частотой обнаруживались генотипы IL4*–590C/C и IL4*–590C/Т. Так, частоты данных генотипов в группе больных аскаридозом составили 48,5% и 43,57%, в группе контроля 51,00% и 43,00%, соответственно. Статистически значимых различий между общей выборкой больных аскаридозом и представителей контрольной группы выявлено не было.
В обеих группах чаще встречался аллель IL4*–590C - в 70,36% случаев у больных и в 72,50% случаев в контроле. Согласно данным литературы, в азиатских популяциях выше частота встречаемости аллеля IL4*–590T (54– 83%), тогда как в европеоидных популяциях аналогично нашему исследованию чаще встречается аллель IL4*–590C (70–82%) [Noguchi E. et al., 1998;
Beghe B. et al., 2003;
He J-Q. et al., 2003].
Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов данного локуса у больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями не выявил между ними статистически значимых различий (р0,05). Во всех группах наблюдения преобладающим был гомозиготный генотип IL4*–590C/C, частота встречаемости которого в аллергической группе составила 54,17%, в диспепсической – 42,37%, в смешанной – 51,51%, в группе контроля – 51,00%. Наиболее распространенный аллель IL4*–590C:
у больных аскаридозом с аллергическими проявлениями встречался в 75,00% случаев, с диспепсическими – в 65,25%, со смешанными – в 72,73% и в группе контроля - в 72,50% случаев.
При сравнении частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфного варианта -590CT гена IL4 у пациентов с аскаридозом и индивидов контрольной группы различной половой принадлежности не обнаружено статистически значимых различий, а также гендерных отличий между представителями контрольных групп в различающихся по полу выборках. Однако у больных аскаридозом мужчин было определено статистически значимое увеличение частоты встречаемости гомозиготного генотипа IL4*–590C/C – 66,67% по сравнению с больными аскаридозом женщинами – 38,20% (2=10,52;
р=0,001) (рис. 3). Также установлено, что у пациентов мужского пола чаще встречался аллель IL4*–590C, частота которого составила 83,33% против 62,92% у пациентов с аскаридозом женского пола;
тогда как аллель IL4*–590T чаще выявлялся у женщин с аскаридозом и составил 37,08% против 16,67% мужчин с аскаридозом (2=12,95;
р=0,001).
90.00% 80.00% 70.00% 60.00% 50.00% 40.00% 30.00% 20.00% 10.00% 0.00% IL 4*–590C /C IL 4*–590C /Т IL 4*–590Т/Т IL 4*–590C IL 4*–590T мужчины больные мужчины контроль женщ ины больные женщ ины контроль Рис. 3. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -590CT гена IL4 у больных аскаридозом различной половой принадлежности Rossenwasser L.J. и соавт., впервые выявившие в американской популяции в промоторной области гена IL4 данную транзицию цитозина на тимин (–590СT), обнаружили ассоциацию этого полиморфного варианта с повышенной экспрессией данного гена in vitro [Rosenwasser L.J. et al., 1995].
Таким образом, анализ полиморфного варианта -590CT гена IL4 не выявил ассоциации данного локуса с аскаридозом. Установлены статистически достоверные различия в частоте встречаемости генотипов и аллелей данного локуса между мужчинами и женщинами с аскаридозом. У больных мужчин статистически достоверно чаще гомозиготный генотип IL4*–590C/C – 66,67% по сравнению с больными аскаридозом женщинами – 38,20% и аллеля IL4*–590C, 83,33% против 62,92%, соответственно, аллель IL4*–590T чаще выявлялся у женщин с аскаридозом и составил 37,08% против 16,67% мужчин с аскаридозом.
Анализ ассоциации полиморфного варианта Ile50Val (148 AG) гена IL4R с аскаридозом По распределению частот аллелей и генотипов данного полиморфного варианта не было обнаружено статистически достоверных отличий между выборками больных аскаридозом и контроля (p0,05). Наиболее распространенным во всех группах оказался гетерозиготный генотип IL4R*50Ile/Val, выявленный у 45,00% пациентов с аскаридозом и 62,00% индивидов контрольной группы. Аллель IL4R*50Ile встречался чаще (на 56,79% хромосом у больных и на 54,00% хромосом представителей контрольной группы), чем IL4R*50Val (43,21% и 46,00%, соответственно, у больных и контроля).
Гендерных различий в распределении частот аллелей и генотипов полиморфного варианта Ile50Val гена IL4R не было выявлено ни у больных аскаридозом, ни у индивидов контрольной группы, ни при сравнении групп больных аскаридозом и контроля одинаковой половой принадлежности (p0,05).
На рис. 4 представлено распределение частот аллелей и генотипов замены Ile50Val в различных клинических группах пациентов с аскаридозом.
У больных аскаридозом с диспепсическими проявлениями достоверно реже по сравнению с контрольной выборкой встречался гетерозиготный генотип IL4R*50Ile/Val – 38,98% и 62,00%, соответственно (2=7,9;
р=0,005;
OR=0,39;
95%CI 0,2-0,76) и чаще гомозиготный генотип IL4R*50 Val /Val – 28,81% против 15,00% контрольной группы (2=2,29;
р=0,036;
OR=2,29;
95%CI 1,04-5,04).
70.00% OR=0, 60.00% 50.00% OR=2, 40.00% 30.00% 20.00% 10.00% 0.00% IL 4R 50*Ile/Ile IL 4R *50Ile/V al IL 4R *50 V al IL 4R *50Ile IL 4R *50V al /V al аллергичес кая дис пепс ичес кая с меш анная контрольная Рис. 4. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного варианта Ile50Val (148AG) гена IL4R в выборках больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями и индивидов контрольной группы Таким образом, проведенный анализ полиморфного варианта Ile50Val гена IL4R позволил определить, что гомозиготный генотип IL4R*50Val/Val ассоциирован с развитием диспепсических расстройств при аскаридозе.
Анализ ассоциации промоторного полиморфного варианта -627СА гена IL 10 с аскаридозом Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов данного локуса не выявил выраженных отличий между больными аскаридозом и индивидами контрольной группы (p0,05). Наиболее распространенным генотипом в контрольной выборке оказался генотип IL10*C/*C, определенный в 56,00% случаев;
тогда как у пациентов с аскаридозом практически с одинаковой частотой регистрировались генотипы IL10*C/*C и IL10*C/*А – 44,29% и 45,71%, соответственно. Частоты встречаемости аллелей IL10*C и IL10*А составили у больных аскаридозом – 67,14% и 32,86%, а у представителей контрольной группы – 74,00% и 26,00%, соответственно.
Гендерных различий в распределении частот аллелей и генотипов описываемого ДНК – локуса в исследованных группах пациентов с аскаридозом и контроля не обнаружено. Среди женщин с аскаридозом и представителей контрольных групп обоих полов преобладал гомозиготный генотип IL10*C/*C – 48,31%, 59,65% и 51,16%, соответственно, тогда как в группе больных аскаридозом мужчин чаще встречался гетерозиготный генотип IL10*C/*А – в 52,94% случаев, но данные различия не достигли уровня статистической значимости (p0,05).
При анализе распределения и попарном сравнении частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфного варианта -627СА гена IL10 у больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями между собой статистически достоверных различий не обнаружено. Однако у пациентов со смешанными проявлениями достоверно чаще, чем в контрольной группе, встречался гетерозиготный генотип IL10*C/*А – в 57,58% случаев против 36,00% в контроле (2=4,76;
р=0,029;
OR=2,41;
95%CI 1,08-5,38) и достоверно реже гомозиготный генотип IL10*C/*C – 33,33% против 56,00% контрольной группы (2=5,1;
р=0,024;
OR=0,39;
95%CI 0,17 0,9) (рис. 5).
80.00% OR=2, 70.00% OR=0, 60.00% 50.00% 40.00% 30.00% 20.00% 10.00% 0.00% IL 10*C /*C IL 10*C /*А IL 10*A /*А IL 10*C IL 10*А аллергичес кая дис пепс ичес кая с меш анная контрольная Рис. 5. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного варианта -627СА гена IL10 в выборках больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями и индивидов контрольной группы Таким образом, в результате проведенного анализа промоторного полиморфного локуса -627СА гена IL10, установлено значительное увеличение доли лиц – носителей гетерозиготного генотипа IL10*C/*А в группе больных в кишечной стадии аскаридоза со смешанными (аллергическими и диспепсическими) проявлениями (OR=2,41;
95%CI 1,08 5,38).
Анализ ассоциации полиморфного варианта Arg130Gln (2044 GA) гена IL13 с аскаридозом Анализ полиморфного локуса Arg130Gln (2044 GA) гена IL13 не выявил статистически значимых различий в распределении частот генотипов и аллелей между пациентами с аскаридозом и представителями контрольной группы (2=0,59, p=0,75 и 2=0,04, p=0,84, соответственно). В обеих группах преобладал гомозиготный генотип IL13*130Arg/Arg (49,29% у больных аскаридозом и 53,00% в контроле), следующим по частоте встречаемости был гетерозиготный генотип IL13*130Arg/Gln (42,86% и 38,00%, соответственно). Частота гомозиготного по редкому аллелю генотипа IL13*130Gln/Gln составила у пациентов с аскаридозом 7,86%, среди индивидов контрольной группы – 9,00%.
Распределение частот аллелей IL13*130Arg и IL13*130Gln между группами больных аскаридозом и контроля существенно не отличалось.
Частота встречаемости аллеля IL13*130Arg у больных аскаридозом достигала 70,71%, в контроле – 72,00%, частота аллеля IL13*130Gln – 29,29% и 28,00%, соответственно. Согласно литературным данным, в европейской популяции данный аллель встречается в 33,00% случаев [Graves P.E. et al., 2000].
Также не обнаружено статистически значимых различий между больными аскаридозом и контролем различной половой принадлежности (p0,05). Однако между пациентами с аскаридозом мужского и женского пола установлены статистически значимые различия в распределении частот аллелей и генотипов в целом (2=8,01, p=0,005 и 2=9,12, p=0,01, соответственно). При попарном сравнении частоты встречаемости аллелей у больных аскаридозом мужчин достоверно чаще определялся аллель IL13*130Arg – в 81,37% по сравнению с больными аскаридозом женщинами – 64,61% (2=8,8;
р=0,003) и гомозиготный генотип IL13*130Arg/Arg – 64,71% в сравнении с 40,45% больных аскаридозом женского пола (2=7,63;
р=0,006) (рис. 6).
При анализе распределения частот аллелей и генотипов описываемого локуса у больных с различными клиническими проявлениями кишечной стадии аскаридоза и индивидами контрольной группы статистически значимых различий не выявлено (p0,05).
Таким образом, в результате проведенного анализа промоторного полиморфного варианта Arg130Gln гена IL13 обнаружено статистически достоверно более высокая частота встречаемости носителей генотипа IL13*130Arg/Arg и аллеля IL13*130Arg среди пациентов с кишечной стадией аскаридоза мужского пола по сравнению с больными аскаридозом женщинами.
90.00% 80.00% 70.00% 60.00% 50.00% 40.00% 30.00% 20.00% 10.00% 0.00% rg ln A rg G ln G ln 30A 30G A rg / A rg / G ln / *1 * 30 1 30 1 30 I L 13 I L 1 3 *1 * * I L 13 I L IL мужчины больные мужчины контроль женщ ины больные женщ ины контроль Рис. 6. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса Arg130Gln (2044 GA) гена IL13 у больных аскаридозом различной половой принадлежности Анализ ассоциации полиморфного локуса -308GA гена фактора некроза опухоли (TNF) с аскаридозом Проведенный нами анализ промоторного полиморфного локуса -308GA гена TNF не выявил достоверных различий между группами больных аскаридозом и индивидами контрольной группы. Преобладающим в обеих выборках был гомозиготный генотип TNF *G/*G (77,14% и 81,00%, соответственно) и чаще встречался аллель TNF *G (87,86% и 90,50%, соответственно).
Анализ распределения и попарное сравнение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -308GA гена TNF у больных с различными клиническими проявлениями кишечной стадии аскаридоза, а также сравнение этих групп с контролем, не выявили значимых отличий между анализируемыми выборками. Во всех группах преобладающим был гомозиготный генотип TNF *G/*G, на долю которого приходилось 77,08% пациентов с аллергической симптоматикой, 79,66% - с диспепсическими проявлениями, 72,73% - со смешанными и 81,00% индивидов контрольной группы. Частота встречаемости генотипа TNF *G/*А у больных со смешанными (аллергическими и диспепсическими) проявлениями была выше (24,24%) в сравнении с пациентами из аллергической (20,83%), диспепсической (20,34%) и контрольной групп (19,00%), но различия не достигли статистической значимости (p0,05).
Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -308GA гена TNF не обнаружил гендерных различий ни в группе больных аскаридозом, ни в контрольных группах, также как при сравнении групп пациентов с кишечной стадией аскаридоза с индивидами из контрольных выборок соответствующего пола. Однако при попарном сравнении частоты встречаемости генотипов выявлено, что в группе больных аскаридозом мужчин достоверно чаще встречается гетерозиготный генотип TNF*G/*А – в 31,37% случаев против 15,73% у больных аскаридозом женщин (2=4,71;
р=0,03) и реже гомозиготный генотип TNF *G/*G – 68,63% против 82,02% у пациентов женского пола (2=4,71;
р=0,03) (рис. 7).
100.00% 90.00% 80.00% 70.00% 60.00% 50.00% 40.00% 30.00% 20.00% 10.00% 0.00% TNF A *G /*G TNF A *G /*А TNF A *А /*А TNF A *G TNF A *А мужчины больные мужчины контроль женщ ины больные женщ ины контроль Рис. 7. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -308GA гена TNF у больных аскаридозом различной половой принадлежности Таким образом, полученные нами результаты анализа полиморфного локуса -308GA гена TNF у больных аскаридозом и индивидов контрольной группы обнаружили более высокую, статистически достоверную частоту встречаемости гетерозиготного генотипа TNF *G/*А у больных аскаридозом мужчин (2=4,71;
р=0,03) и гомозиготного генотипа TNF*G/*G в группе пациентов с аскаридозом женского пола (2=4,71;
р=0,03).
Анализ ассоциаций сочетаний полиморфных локусов IL4 (– 590CT), IL4R (Ile50Val), IL10 (-627СА), IL13 (Arg130Gln), TNF ( 308GА) и CCL11 (–384AG) при аскаридозе Нами проведена оценка роли межгенных взаимодействий полиморфных локусов 6 генов цитокинов в детерминации риска развития аскаридоза у индивидуумов из Республики Башкортостан.
При исследовании межгенных взаимодействий полиморфных локусов генов цитокинов (IL4 (-590CT), IL4R (Ile50Val), IL10 (-627СА), IL (Arg130Gln), CCL11 (-384AG), TNF (-308GА) с помощью программы GMDR была определена двухфакторная модель взаимодействия ДНК локусов, приводящая к развитию аскаридоза: IL4R (Ile50Val) и CCL11 ( 384AG) (рис.8). На рисунке темно-серым цветом выделены ячейки с сочетаниями генотипов повышенного риска, светло-серого – пониженного риска.
Рис. 8. Комбинации генотипов полиморфных локусов генов цитокинов (IL4R (Ile50Val), CCL11 (–384AG)), ассоциированные с повышенным и пониженным риском развития аскаридоза Тестируемая сбалансированная точность (Bal.Acc.) данной модели составила 0,5750, чувствительность (Se) – 0,55, специфичность (Sp) – 0,6, повторяемость результата (CV Consistency) – 9/10, p0,05.
К сочетаниям повышенного риска развития заболевания были отнесены 4 различные комбинации генотипов: CCL11*А/*А - IL4Ra*50Ile/Ile;
CCL11*G/*А - IL4Ra*50Ile/Ile;
CCL11*А/*А - IL4Ra*50Ile/Val;
CCL11*А/*А IL4Ra*50Val/Val. К сочетаниям пониженного риска развития заболевания были отнесены 5 различных комбинаций генотипов: CCL11*G/*А IL4Ra*50Ile/Val;
CCL11*G/*А - IL4Ra*50Val/Val;
CCL11*G/*G IL4Ra*50Ile/Ile;
CCL11*G/*G - IL4Ra*50Ile/Val;
CCL11*G/*G IL4Ra*50Val/Val.
Комбинация CCL11*А/*А - IL4Ra*50Ile/Ile в 2 раза чаще встречалась у больных аскаридозом – в 8,6%, чем в контроле – 4,0%, однако при попарном сравнении частот комбинаций разница не достигла статистической значимости (2=1,29;
р=0,26). Частота комбинации CCL11*А/*А IL4Ra*50Ile/Val также была выше у пациентов с аскаридозом – 14,3% по сравнению с группой контроля – 8,0% (2=2,24;
р=0,135). Носителей комбинации CCL11*А/*А - IL4Ra*50Val/Val среди индивидов контрольной группы не наблюдалось. Сочетания генотипов CCL11*G/*G IL4Ra*50Val/Val встречались реже у IL4Ra*50Ile/Val;
CCL11*G/*G больных аскаридозом (9,3% и 2,1%, соответственно), по сравнению с группой контроля, у которых частота данных комбинаций составляла 15,0% и 4,0%, соответственно, однако разница оказалась статистически недостоверной (2=1,85;
р=0,174;
2=0,21;
р=0,65 ). Частота встречаемости комбинации гетерозиготных генотипов CCL11*G/*А - IL4Ra*50Ile/Val была достоверно выше у индивидов контрольной группы 39,00% по сравнению с пациентами с аскаридозом – 21,4% (2=8,79;
р=0,003). Показатель OR развития аскаридоза у носителей комбинации генотипов CCL11*G/*А IL4Ra*50Ile/Val составил 0,43 (95%CI 0,24-0,75).
При исследовании межгенных взаимодействий полиморфных локусов генов цитокинов (IL4 (-590CT), IL4R (Ile50Val), IL10 (-627СА), IL (Arg130Gln), CCL11 (-384AG), TNFA (-308GА) в группах больных аскаридозом и контроля женского пола также была определена двухфакторная модель взаимодействия ДНК-локусов: IL4R (Ile50Val) и IL10 (-627СА) (рис.9).
Рис. 9. Комбинации генотипов полиморфных локусов генов цитокинов (IL4R (Ile50Val), IL10 (-627СА)), ассоциированные с повышенным и пониженным риском развития аскаридоза у больных аскаридозом и контрольной группы женского пола Тестируемая сбалансированная точность (Bal.Acc.) данной модели составила 0,627, чувствительность (Se) – 0,67, специфичность (Sp) – 0,58, повторяемость результата (CV Consistency) – 10/10, p0,01.
К сочетаниям повышенного риска развития заболевания были отнесены 5 различных комбинаций генотипов: IL10*C/*А - IL4Ra*50Ile/Ile;
IL10*C/*А IL4Ra*50Ile/Val;
IL10*А/*А - IL4Ra*50Val/Val;
IL10*C/*С - IL4Ra*50Ile/Ile;
IL10*C/*С - IL4Ra*50Val/Val. К сочетаниям пониженного риска развития заболевания были отнесены 4 различных комбинации генотипов: IL10*А/*А IL4Ra*50Ile/Val;
IL10*А/*А - IL4Ra*50Ile/Val;
IL10*C/*А - IL4Ra*50Val/Val;
IL10*C/*С - IL4Ra*50Ile/Val.
Комбинации IL10*C/*С - IL4Ra*50Ile/Ile, IL10*C/*С - IL4Ra*50Val/Val и IL10*C/*А - IL4Ra*50Ile/Val встречались в 2 раза чаще у больных аскаридозом женщин – в 20,2%, 10,0% и 22,5%, соответственно, чем у женщин контрольной группы – 12,3%, 5,3% и 10,5%, однако разницы оказались статистически недостоверными (2=1,56;
р=0,21;
2=1,08;
р=0,298;
2=3,39;
р=0,066). Носителей комбинации IL10*А/*А - IL4Ra*50Val/Val среди женщин группы контроля не отмечалось. Сочетания генотипов: IL10*А/*А IL4Ra*50Ile/Val и IL10*C/*А - IL4Ra*50Val/Val встречались реже у больных аскаридозом женщин (5,6% и 9,0%, соответственно), по сравнению с женщинами контрольной группы, у которых частота данных комбинаций составляла 8,8% и 12,3%, соответственно, однако разницы оказались статистически недостоверными (2=0,16;
р=0,689;
2=0,41;
р=0,523).
Комбинация IL10*C/*С - IL4Ra*50Ile/Val встречалась достоверно чаще у женщин группы контроля – в 42,00% по сравнению с женщинами с аскаридозом – 18,0% (2=10,17;
р=0,001). OR развития аскаридоза у женщин носителей комбинации генотипов IL10*C/*С - IL4Ra*50Ile/Val, составил 0, (95%CI 0,14-0,64).
Таким образом, на основе полученных нами результатов, обнаружено, что комбинации генотипов CCL11*G/*А - IL4Ra*50Ile/Val в общей выборке и IL10*C/*С - IL4Ra*50Ile/Val у лиц женского пола являются маркерами пониженного риска развития аскаридоза (OR = 0,43, 95%CI 0,24-0,75);
OR=0,3, CI95% 0,14-0,64, соответственно).
ВЫВОДЫ 1. Клинические проявления кишечной стадии аскаридоза характеризуются развитием трех вариантов течения аскаридоза – аллергического, диспепсического и смешанного, относительной эозинофилией у 10,7% больных, повышением уровня трансаминаз до норм (АЛаТ – в 67,9%, АСаТ - в 34,3% случаев) и снижением уровня гемоглобина у 37% пациентов.
2. Генотип CCL11*А/*А и аллель CCL11*А полиморфного варианта – 384АG гена CCL11 являются маркерами повышенного риска развития клинических проявлений аскаридоза.
3. Генотип IL4R*50 Val/Val полиморфного варианта Ile50Val гена IL4R ассоциирован с диспепсическим вариантом течения и генотип IL10*C/*А полиморфного варианта -627СА гена IL10 - со смешанным вариантом течения кишечной стадии аскаридоза.
4. Обнаружены статистически достоверные гендерные различия в распределении частот аллелей и генотипов полиморфных локусов генов IL4(-590CT), IL13 (Arg130Gln) и TNFA(-308GA) между пациентами с аскаридозом различной половой принадлежности.
5. Выявлено межгенное взаимодействие полиморфных локусов генов эотаксина CCL11 (-384АG) и -цепи рецептора интерлейкина 4 IL4R (Ile50Val), детерминирующее развитие аскаридоза. Определены комбинации полиморфных вариантов генов -цепи рецептора интерлейкина 4 IL4R (Ile50Val) и интерлейкина 10 IL10 (-627CA), ассоциированные с развитием аскаридоза у женщин.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ У больных аскаридозом выявлены генетические маркеры, ассоциированные с аллергическим вариантом (генотип CCL11*А/*А и аллель CCL11*А полиморфного варианта –384АG гена CCL11), с диспепсическим вариантом (генотип IL4R*50 Val/Val полиморфного варианта Ile50Val гена IL4R ) и со смешанным вариантом (генотип IL10*C/*А полиморфного варианта -627СА гена IL10) течения аскаридоза.
У пациентов с аскаридозом обнаружены генетические маркеры повышенного риска развития клинических проявлений аскаридоза: генотип CCL11*А/*А и аллель CCL11*А полиморфного варианта –384АG гена CCL11.
Результаты проведенного исследования могут быть использованы для своевременного прогнозирования различных клинических вариантов течения кишечной стадии аскаридоза.
Список публикаций по теме диссертации 1. Мурзагалеева, Л.В. Современные особенности клинических проявлений аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Е.Р. Валинурова, Д.Н. Шокуров, Д.А. Валишин, Ф.М. Хусаинова//Материалы юбилейной 72-й Республиканской конференции студентов и молодых ученых, посвященной Году 450-летия единства Башкортостана с Россией, 75-летию БГМУ, 60 летию СНО и 40-летия СМУ. – Уфа, 2007. – С. 317-318.
2. Мурзагалеева, Л.В. Содержание гормонов щитовидной железы у больных с кишечной стадией аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Е.Р. Валинурова, Д.А. Валишин, Р.Т. Мурзабаева, А.П. Мамон, Д.Н. Шокуров //Сборник трудов XII Российской научно-практической конференции «Инфекционные болезни: актуальные вопросы в клинике и эксперименте», посвященной 75 летию Дагестанской МГА. – Махачкала, 2007. – С. 221-222.
3. Мурзагалеева, Л.В. Современные особенности клиники и патогенеза аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А. Валишин, Р.Т. Мурзабаева, А.П.
Мамон, Е.Р. Валинурова//Сборник материалов Международного Евро – Азиатского Конгресса по Инфекционным заболеваниям. – Витебск. – 2008. – С. 158 – 159.
4. Мурзагалеева, Л.В. Современные клинико-лабораторные особенности аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А. Валишин, Р.Т. Мурзабаева, А.П.
Мамон // Сборник научных трудов XIV Российской научно - практической конференции «Актуальные вопросы инфекционных болезней в клинике и эксперименте». - Махачкала, 2009. – С. 174-178.
5. Мурзагалеева, Л.В. Значение полиморфизма -384АG гена эотаксина у больных с кишечной стадией аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А.
Валишин, А.С. Карунас, Э.К. Хуснутдинова // Сборник научных трудов VIII областной научно – практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии», посвященной 65-летию кафедры эпидемиологии и инфекционных болезней Оренбургской ГМА. – Оренбург, 2010. – С. 87 – 88.
Мурзагалеева, Л.В. Роль полиморфизма -384АG гена эотаксина при 6.
аскаридозе [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А. Валишин, А.С. Карунас, Э.К.
Хуснутдинова // Материалы 2 Ежегодного Конгресса по инфекционным болезням: Инфекционные болезни. – 2010. - Т.8, прил. 1. – С.215.
Мурзагалеева, Л.В. Ассоциация полиморфизма –384АG гена 7.
эотаксина с клиническими вариантами течения кишечной стадии аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А. Валишин, А.С. Карунас, Э.К. Хуснутдинова // Научно-практический журнал «Медицинский вестник Башкортостана». – 2010. – Т. 5, №2. – С. 35 – 37.