Влияние низкоинтенсивного -излучения в ранние периоды онтогенеза на структурно-функциональное состояние коры надпочечников рыжей полевки и лабораторных мышей линии сва
На правах рукописи
БЫХОВЕЦ НАТАЛЬЯ МИХАЙЛОВНА ВЛИЯНИЕ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО -ИЗЛУЧЕНИЯ В РАННИЕ ПЕРИОДЫ ОНТОГЕНЕЗА НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КОРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ РЫЖЕЙ ПОЛЕВКИ И ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ ЛИНИИ СВА 03.00.16 — экология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Сыктывкар — 2009
Работа выполнена в Лаборатории экологии наземных позвоночных и в Отделе радиоэколо гии Института биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук.
Научный руководитель академик РАН, доктор биологических наук, профессор Большаков Владимир Николаевич
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Бойко Евгений Рафаилович кандидат биологических наук Григорькина Елена Борисовна Ведущее учреждение: Сыктывкарский государственный университет
Защита диссертации состоится 16 апреля 2009 г. в _ часов на заседании диссертационно го совета Д 04.005.01 в Институте биологии Коми НЦ УрО РАН по адресу: 167982, г. Сык тывкар, ул. Коммунистическая, 28.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Коми научного центра Уральского отде ления Российской академии наук.
Автореферат разослан_ марта 2009 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, д.б.н. Кудяшева А.Г.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Изучение эффектов малых доз ионизирующих излучений (ИИ) на живые организмы, выяснение механизмов приспособительной деятельности, а также ис следование структурных основ и компонентов стрессорного ответа остаются приоритетными направлениями современной экологии. В процессах адаптации организма к изменениям как внутренней, так и внешней среды ведущую роль играет нейроэндокринная система. Один из наиболее значимых ее компонентов — гипоталамо-гипофизарно-адреналовое звено, которое участвует в развитии неспецифического адаптационного или стресс-синдрома (Селье, 1972), координирует состояние иммунной защиты (Чеботарев, 1979, Черешнев и др., 2002), а на по пуляционном уровне (у мелких млекопитающих с циклической динамикой численности) оп ределяет численность последующих генераций (Чернявский, Ткачев, 1982). Значительная роль в адаптивной функции эндокринной системы принадлежит коре надпочечников (КН).
Совокупность кортикальных гормонов осуществляет множество функций, из которых в эко логическом аспекте наиболее важная — развитие неспецифической адаптивной (стрессовой) реакции. Структура КН чувствительна к воздействию различных экологических факторов, что показано во многих работах (Шварц, 1959;
Кротова, 1962;
Рахимов и др., 1968;
Кирил лов, 1973, 1977;
Круглова, 1975;
Чернявский, Ткачев, 1982;
Ильясова и др., 1987;
Ермакова, 1994, 1996;
Вылегжанина и др., 1998;
Соловьев, 2002;
Михеева и др., 2006;
Christian, 1963;
Christian, Davis, 1966;
и др.).
Радиоактивное загрязнение экосистем приводит к существенному увеличению доли эндокринных патологий (Медицинские аспекты…, 1992;
Цыб, 1998;
Гончарова, 1999;
Уте нина, Рахманова, 1996;
Отдаленные эколого-генетические…, 2000). Исследования, проводи мые в 30-километровой зоне Чернобыльской АЭС и на Ухтинском радиевом стационаре, по казали существенные деструктивные и компенсаторные изменения в органах эндокринной системы млекопитающих, хотя железы внутренней секреции состоят из высокодифференци рованных клеток и считаются относительно радиорезистентными, а мощность дозы на ис следованных участках не превышала 0.1 сЗв/сут (Материй, Ермакова, 1993;
Атлас…, 1994;
Ермакова, 1996;
Великанов, 2000). Хроническое низкоинтенсивное излучение, воздействуя на организм, может приводить к разнообразным системным эффектам (Межжерин, Мякуш ко, 1998;
Гончарова, Рябоконь, 1998;
Соколов и др., 1999;
Отдаленные эколого генетические…, 2000).
В природных популяциях животные, обитающие на загрязненных (в том числе и радио активными веществами) территориях, подвергаются неблагоприятному воздействию с самых ранних стадий онтогенеза, когда происходят закладка и формирование тканей, органов и систем.
В раннем онтогенезе организм особенно чувствителен к неблагоприятным влияниям среды, и даже относительно слабые воздействия, не вызывающие видимых морфологических поврежде ний, нередко сопровождаются длительными, а порой и постоянными нарушениями нейроэндок ринной регуляции физиологических функций и различных типов поведения. Особенно это отно сится к долгосрочным пренатальным стрессовым воздействиям, последствия которых приводят к возникновению необратимых патологических изменений у взрослого организма (Науменко и др., 1990;
Рубченя, 2002).
Цель работы – изучить морфофункциональные изменения в коре надпочечников ры жих полевок и лабораторных мышей линии СВА после хронического воздействия низкоин тенсивного -излучения в малых дозах на ранних стадиях онтогенеза.
В задачи работы входило:
1. Изучить гистологическую структуру коры надпочечников рыжих полевок и лабора торных мышей линии СВА в норме.
2. Дать качественную и количественную характеристику гистологического строения коры надпочечников рыжих полевок и мышей СВА, подвергшихся хроническому воздейст вию -излучения в пренатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза при мощно стях дозы 0.1 и 0.8 сГр/сут.
3. Провести морфологический и морфометрический анализ коры надпочечников об лученных и необлученных рыжих полевок и мышей СВА после дополнительной острой стрессовой нагрузки (иммунизация эритроцитами кролика).
Научная новизна работы. Впервые изучена гистологическая структура КН рыжих полевок и мышей линии СВА после воздействия на ранних стадиях онтогенеза низкоинтен сивного -излучения в малых дозах (4 сГр и 31 сГр). Определены границы физиологической нормы морфометрических показателей КН рыжих полевок и мышей линии СВА и степень отклонения этих показателей у облученных животных. Установлены особенности формиро вания ответной реакции КН облученных и необлученных животных на дополнительную на грузку (иммунизация эритроцитами кролика), проведенную в зрелом возрасте. При этом об наружено, что после облучения в дозах 4 сГр и 31 сГр при дополнительной нагрузке наи большие структурные преобразования в КН полевок и мышей проявляются при меньшей до зе облучения. Дана морфологическая характеристика гиперпластических образований КН рыжих полевок и мышей СВА в контроле и эксперименте. Показано, что воздействие излучения в использованных дозах в ранние периоды онтогенеза вызывает значимые долго временные изменения отдельных морфометрических показателей КН и значительно изменя ет ее стресс-реактивность, а следовательно, адаптивный потенциал организма в целом. Уста новлено, что характер изменений стресс-реактивности КН, вызванных воздействием низко интенсивного -излучения на ранних стадиях онтогенеза, зависит от видовой принадлежно сти организма и его изначального эндокринного статуса, поэтому экстраполировать данные, полученные на одном виде, на другой, хотя и систематически близкий вид, следует с боль шой осторожностью.
Теоретическая и практическая значимость результатов работы. Результаты ис следования пополняют сведения об особенностях структуры КН грызунов разных видов;
расширяют представление о характере воздействия низкоинтенсивного хронического излучения в ранние периоды онтогенеза на стресс-реактивность КН;
имеют ценность для по знания адаптационных механизмов на уровне организма и популяции, могут применяться для совершенствования принципов санитарно-гигиенического нормирования ионизирующих излучений.
Апробация работы. Результаты работы были представлены и доложены на IV-й мо лодежной конференции Института биологии Коми НЦ УрО РАН «Актуальные проблемы биологии» (Сыктывкар, 1996 г.), Международной конференции «БИОРАД-2001» (Сыктыв кар, 2001 г.), IX молодежной научной конференции Института биологии (Сыктывкар, г.), V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004 г.), 1-й За очной электронной конференции морфологов к 70-летию Курского медицинского универси тета (http://www.alexmorph.narod.ru;
2004 г.), Международной конференции «БИОРАД-2006» (Биологические эффекты малых доз ионизирующей радиации и радиоактивное заражение среды, Сыктывкар, 2006);
Научной конференции «Вопросы морфологии» (Уфа, 2006);
Науч ной конференции «Проблемы морфогенеза» (Орел, 2006);
Российской конференции «Меди ко-биологические проблемы токсикологии и радиологии» (Санкт-Петербург, 2008).
Личный вклад автора. Автором проведены сбор и фиксация материала, изготовле ние и микроскопический анализ всех гистологических препаратов, обобщение и статистиче ская обработка материала, осуществлена подготовка к печати научных работ, отражающих результаты диссертации.
Публикации. По материалам исследований опубликовано 13 работ, из них 2 – в ре цензируемых журналах, рекомендованных ВАК.
Благодарности. Автор благодарит А.И. Кичигина за предоставленную возможность сбора материала, старшего научного сотрудника Отдела радиоэкологии д. б. н. О.В. Ермако ву, к.б.н. Института экологии растений и животных В.П. Мамину, научных сотрудников это го же института к.б.н. И.А. Кшнясева и к.б.н. Ю.А. Давыдову;
профессора СПбГАВМ В.И.
Соколова, а также коллег — сотрудников Лаборатории экологии наземных позвоночных за помощь и консультации, оказанные в работе.
Структура и объем диссертации. Работа изложена на 118 страницах печатного текста и состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа содержит 22 таблицы, 7 рисунков и 22 фотографии. Список литературы включает 151 источник, в том числе 24 иностранных.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
1. Развитие структуры и функций коры надпочечников в онтогенезе (обзор литературы).
Глава посвящена обзору литературных источников. Обсуждено развитие КН и ста новление ее функций в онтогенезе, строение и функции дефинитивной КН, структурно функциональные особенности КН при воздействии ИИ. Обобщая данные из литературы, можно заключить, что функционирование КН млекопитающих, т.е. продукция кортикальных гормонов, начинается в антенатальном периоде;
ткань КН радиорезистентна, но реагирует на общее облучение организма, что объясняется вовлечением в процесс гипоталамо гипофизарно-адреналового звена;
изменения адренокортикальной структуры зависят от мощности дозы, поглощенной дозы, продолжительности воздействия, а также видовой при надлежности организма.
2. Материал и методы исследования.
Работа выполнена на 84 рыжих полевках и 82 лабораторных мышах линии СВА из вивария Института биологии Коми научного центра УрО РАН (табл. 1). Семьи зверьков (са мец + 1–2 самки) подвергали хроническому воздействию -излучения при мощностях дозы 0.1 и 0.8 сГр/сут от источника излучения, содержащего Ra (для измерения использовали дозиметр ДРГЗ-01 и установку «Игур»). Потомство от облучаемых зверьков в возрасте сут отнимали от родителей и переносили в питомник (в условия естественного радиационно го фона). Таким образом, исследуемые животные в течение всего пренатального (18 сут) и раннего постнатального (21 сут) периодов находились под воздействием повышенного ра диационного фона. Поглощенные дозы за все время эксперимента составили соответственно 4 и 31 сГр (Кичигин, Быховец, 1996;
Кичигин, 2003).
В качестве контроля использовали одновозрастных животных, постоянно находив шихся в виварии в условиях естественного радиационного фона. От родителей их также от нимали при достижении возраста 21 сут.
Экспериментальных и контрольных мышей и полевок выводили из эксперимента спо собом декапитации в возрасте 4 мес. Для дополнительной нагрузки на нейро-иммуно эндокринную систему часть зверьков за 7 суток до забоя иммунизировали внутрибрюшинно 5%-й взвесью эритроцитов кролика;
контрольным зверькам вводили физиологический рас твор. Все манипуляции с животными проводили согласно Международным рекомендациям по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (Между народные рекомендации…, 1993). Надпочечники фиксировали в 10% формалине с после дующей заливкой в парафин по общепринятым методикам (Ромейс, 1953). Гистологические срезы надпочечников толщиной 5–7 мк окрашивали гематоксилином Караччи с докраской эозин-натрием (Меркулов, 1961;
Основы гистологии…, 1972;
Евгеньева, 1983).
Таблица Распределение животных в эксперименте Экспериментальная группа Рыжая полевка, n Мыши СВА, n Контроль 17 Контроль + иммунизация 7 4 сГр 8 4 сГр + иммунизация 11 31 сГр 17 31 сГр + иммунизация 24 Гистологическое исследование препарата заключалось в общем обзоре его структуры, определении качественных показателей. Отмечали степень развития капсулы, коры и ее зон, мозгового вещества, степень полиморфизма клеток и ядер, наличие структурных нарушений и новообразований, состояние кровеносных сосудов. Количественный анализ препаратов и дальнейшую статистическую обработку данных вели по стандартным методикам (Морфо функциональные исследования…, 1980, Автандилов, 1990).
Для морфометрического анализа использовали цифровые снимки микропрепаратов, по лученные при помощи цифровой видеокамеры Sanyo и программного продукта Asus VideoSuite.
В программном пакете Adobe Photoshop измеряли ширину коркового вещества и размер отдель ных зон коры: клубочковой, пучковой и сетчатой. Линейку (Панель инструментов /Tools — ин струмент Линейка/Measure Scale) калибровали по снимку шкалы объект-микрометра ОМП-1, сделанному при том же увеличении. На 1 препарат делали 100 измерений каждого показателя.
Измеряли большой и малый диаметры среза надпочечника и мозгового вещества. Объем надпочечника рассчитывали как объем эллипсоида по формуле V = 0.523 (a·b)2/3, где a и b соответственно — большой и малый диаметры надпочечника (Автандилов, 1990).
Объем мозгового вещества (медуллы) на срезе вычисляли аналогично. Объем коркового ве щества рассчитывали как разность между показателями площади надпочечника и медуллы.
Соотношение различных тканевых компонентов рассчитывали с помощью сетки Автан дилова со 100 равноудаленными точками нулевой толщины (Автандилов, 1990), также в пакете Adobe Photoshop. Сетку накладывали на цифровое изображение среза ткани и затем при помощи клавишного счетчика-интегратора подсчитывали число компонентов (ядер, цитоплазмы, лейко цитов, кровеносных сосудов). На один препарат просчитывали 300 точек. Ядерно цитоплазматическое соотношение рассчитывали как отношение числа точек, пришедшихся на ядра, к числу точек, пришедшихся на цитоплазму, выраженное в процентах (Автандилов, 1990).
На этих же изображениях измеряли диаметр ядер адренокортикоцитов. На один пре парат просчитывали 100 ядер.
Соответствие эмпирических распределений нормальному устанавливали, используя W-критерий Шапиро-Уилка. Гипотезу равенства выборочных дисперсий проверяли по кри терию Левена. Для оценки статистической значимости различий выборочных средних исполь зовали двухфакторный дисперсионный анализ (ANOVA).При сравнении выборочных долей ис пользовали точный критерий Фишера и критерий 2. Для анализа взаимосвязи количественных нормально распределенных признаков использовали параметрический корреляционный метод Пирсона. Расчеты и построение графиков вели в программах Statistica 6.0 и Microsoft Excel.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3. Морфофункциональная характеристика коры надпочечников рыжей полевки и мышей СВА в норме Рыжая полевка. Надпочечники полевок, использованных в нашем исследовании, обычно имели эллиптическую или, реже, округлую (почти сферическую) форму, иногда чуть сплюснутую в месте прилегания к почке. Надпочечник окружен тонкой однослойной капсу лой. Под ней располагается клубочковая зона (КЗ), развитая относительно слабо. Эта зона исследованных рыжих полевок состоит из небольших групп тесно расположенных клеток с гомогенной, равномерно окрашивающейся цитоплазмой и умеренно базофильными округ лыми ядрами. Далее находится зона компрессии, свойственная некоторым видам грызунов, сложенная из мелких клеток с небольшими темными ядрами, тесно прилегающих друг к дру гу. Пучковую зону (ПЗ) составляют крупные клетки полигональной формы, образующие ра диально направленные пучки. Цитоплазма часто имеет пенистый или зернистый вид, что указывает на высокое содержание в ней липидов — предшественников стероидных гормо нов. Ядра клеток пучковой зоны крупные, округлые, с хорошо выраженной структурой и за метными ядрышками. Иногда в этой зоне встречаются двуядерные клетки. У многих полевок радиальная направленность тяжей ПЗ почти не выражена, клетки плотно прилегают друг к другу. Васкуляризация ткани выражена слабо — объемная плотность кровеносных сосудов на препаратах равна 0.5 ± 0.4%. Сетчатая, или ретикулярная, зона расположена между пуч ковой зоной и медуллой. У рыжих полевок она не образует «классических» сетеподобных структур и складывается из плотно прилегающих небольших клеток с равномерно окрашен ной цитоплазмой и темным, плотным ядром, часто неправильной формы. В синусоидных ка пиллярах и межклеточном пространстве сетчатой зоны (СЗ) встречается много лейкоцитов и эритроцитов, что косвенно указывает на происходящие там интенсивные процессы клеточ ной деструкции.
Лабораторные мыши линии СВА. Кора надпочечников мышей СВА также обладает зональностью, общей для всех млекопитающих. Надпочечник окружает тонкая однослойная соединительнотканная капсула. Клубочковая зона складывается из довольно крупных клеток со слабо окрашивающейся цитоплазмой, скомпонованных в группы арочно клубковидной формы. По сравнению с надпочечником рыжей полевки, эта зона более развита, ее клетки и их ядра крупнее. Зона компрессии у мышей СВА отсутствует, и непосредственно за клубочковой зоной следует пучковая;
ее клетки образуют почти прямые, радиально ориентированные тяжи. Между тяжами проходят синусоидные капилляры, более выраженные, чем у рыжих полевок. Объемная плотность кровеносных сосудов в ПЗ у мышей СВА выше по сравнению с рыжими полевками более чем в 4 раза (р 0.0001).
Ядра клеток ПЗ округлые, крупнее и окрашены светлее, чем ядра клубочковой зоны, а цитоплазма вакуолизирована. В ПЗ мышей СВА чаще, чем у рыжих полевок, встречаются темные клетки, причем они также большей частью расположены в нижних отделах пучковой зоны. СЗ у мышей СВА выражена хорошо и состоит из переплетающихся между собой не правильной формы тяжей клеток небольшого размера с хорошо окрашиваемой цитоплазмой и высоким клеточным и ядерным полиморфизмом.
У некоторых мышей и рыжих полевок в коре надпочечника мы отмечали небольшие группы хромаффинных клеток, которые находились в отдалении от мозгового вещества (МВ), окруженные кортикоцитами. Возможно, это признак не завершившегося окончательно процесса миграции хромаффинобластов, образующих медуллу.
Кора надпочечников рыжих полевок и мышей СВА в возрасте 4 мес полностью сфор мирована, зональность выражена хорошо;
строение коры соответствует классической трех зональной схеме, хотя и обладает определенными видовыми особенностями, что, несомнен но, связано как с разницей в систематическом статусе мышей и полевок, так и с различиями в «образе жизни» диких животных и лабораторных, многие поколения которых живут в ус ловиях питомника. Абсолютный размер коры у обоих видов был почти одинаковым (рыжая полевка — 250.2 ± 11.4, мыши СВА — 247.5 ± 9.0), но по размерам отдельных зон у мышей и полевок наблюдались определенные различия. Как у рыжих полевок, так и у мышей самой обширной зоной в коре надпочечника являлась пучковая;
у полевок ее удельный объем был больше, чем у мышей — 68.2 и 58.7% от общего размера коры соответственно. Абсолютное значение ширины ПЗ у полевок также было больше (170.7 ± 10.5 мкм);
у мышей — 144.7 ± 8.1 мкм (р = 0.063). КЗ и СЗ, напротив, у мышей были шире, чем у полевок (особенно СЗ, р = 0.002);
больше был и удельный объем этих зон в коре. Известно, что мыши линии СВА, по сравнению с прочими линейными мышами, характеризуются наиболее низким уровнем со держания кортикостерона и наименьшим приростом уровня этого гормона в период острых стрессовых состояний (Науменко и др., 1990). Это подтверждается сниженной по сравнению с полевками шириной ПЗ, продуцирующей глюкокортикоиды, и ее удельного объема.
4. Морфометрические показатели коры надпочечников экспериментальных животных после хронического воздействия низкоинтенсивного -излучения на ранних стадиях онтогенеза Объем надпочечника, коры и медуллы. У рыжих полевок в норме объем КН больше, чем объем мозгового вещества, или медуллы (МВ). Объем МВ в разных экспери ментальных группах изменяется незначительно. Динамика изменений общего объема надпо чечника проявляет сильную положительную корреляцию с динамикой объема коры (p 0.001), т. е. объем надпочечника изменяется за счет размеров коры. После облучения в дозах 4 сГр и 31 сГр объемы надпочечника (и, соответственно, коры) по сравнению с контролем почти не изменились (р 0.05). Соотношение объемов КН и МВ в группах «Контроль» и «31 сГр» близко к единице, тогда как у полевок, облученных в дозе 4 сГр, объем кортикаль ной ткани по сравнению с медуллой несколько возрастает.
После иммунизации у необлученных полевок общий объем НП и КН возрастает, дос тигая максимальных значений (р 0.05). Так, объем НП в группе «Контроль + иммунизация» составляет 8235.3 ± 792.5 мкм3, объем КН — 4716.2±388.0 мкм3 (в контроле соответственно 7229.4 ± 484.2 мкм3 и 3940.2 ± 302.4 мкм3). Объем МВ также увеличился — 3519.1±406. мкм3 (также наибольшее значение по сравнению с другими экспериментальными группами).
Это можно расценивать как типичное проявление неспецифической реакции на введение ан тигена.
Иммунизация полевок, облученных в дозах 4 сГр и 31 сГр, практически не вызвала в обеих группах изменений объема коры по сравнению с контролем и облученными интактными полевками. Это может означать, что адаптивные возможности КН у облученных животных по сравнению с контрольными снижены. Невыраженная реакция кортикальной ткани на воздействие стрессового фактора может являться признаком общей функциональной недостаточности гипоталамо-гипофизарно-адреналовой системы.
Итак, хроническое воздействие -излучения в ранние периоды онтогенеза не вызвало значимых изменений объема НП у рыжих полевок. Статистически достоверные различия (р 0.05) по объему НП отмечены между иммунизированными необлученными и облученными полевками. Это свидетельствует о значительных изменениях адаптивного потенциала облу ченных животных.
По динамике объема НП, КН и МВ мыши СВА отличаются от рыжих полевок. Отно шение объемов кора/медулла в группе «Контроль» составило 1.1. Объем КН превышает объ ем МВ во всех группах. У облученных мышей объем КН по сравнению с контрольными жи вотными незначительно повысился.
Дисперсионный анализ не выявил статистически значимых различий по объемным по казателям надпочечника между облученными и необлученными мышами, а также между ин тактными и иммунизированными.
Иммунизация вызвала слабое снижение объема коры во всех экспериментальных груп пах. Снизилось и соотношение «объем коры/объем мозгового вещества». Корреляции между изменяющимися объемными показателями у мышей СВА не выявлено (р = 0.505);
это озна чает, что изменения объема НП в данном случае зависят в равной степени от изменений объ ема КН и МВ.
Морфометрические показатели КН и ее зон. У облученных рыжих полевок ши рина КН оказалась выше, чем у контрольных, хотя и статистически недостоверно;
у живот ных, получивших меньшую дозу (группа «4 сГр»), этот показатель увеличился сильнее. Рост КН произошел за счет пучковой зоны (r = 0.987, р = 0.0001), ширина которой также увеличи лась в обеих группах. КЗ и СЗ, напротив, несколько уменьшились;
это уменьшение более за метно в группе «4 сГр».
Ширина пучковой зоны, мкм Интактные Иммунизированные Рис. 1. Ширина пучковой зоны надпочечника у интактных и иммунизированных рыжих по левок. Средние невзвешенные значения. 1 — контроль, 2 — 4 сГр, 3 — 31 сГр. Вертикальные метки (здесь и в последующих графиках) обозначают 95%-ный доверительный интервал.
Результаты дисперсионного анализа морфометрических показателей КН рыжих поле вок показали, что после иммунизации у необлученных животных ширина коры (и, соответ ственно, ПЗ) достоверно увеличивается (р = 0.0096);
это явление соответствует неспецифи ческой реакции на острое воздействие стресс-фактора (рис. 1). У облученных полевок этот показатель после иммунизации, напротив, уменьшается и в группе «4 сГр + иммунизация» достигает минимального значения (различие достоверно по сравнению с группой «4 сГр», р = 0.0118). Поскольку клетки КН (и, в частности, ПЗ) находятся под контролем адренокорти котропного гормона гипофиза (АКТГ), разнонаправленность изменения ее размеров в ре зультате воздействия стресс-фактора указывает на существенные отличия в функциональном состоянии гипоталамо-гипофизарно-адренокортикального звена эндокринной системы облу ченных и необлученных полевок.
Таким образом, факторы «излучение» и «иммунизация» по отдельности значимо не влияют на ширину КН полевок, но эффект их совместного действия становится статистиче ски значимым (р = 0.0016). По-видимому, уменьшение размеров КН и ПЗ у облученных жи вотных в ответ на иммунизацию является признаком не только глубоких функциональных изменений в адренокортикоцитах, но также недостаточной активности гипоталамо гипофизарного звена в результате нарушения нормальной нейроэндокринной регуляции, по скольку в течение длительного периода излучение воздействовало на весь организм в целом и затронуло не только надпочечник, но и развивающиеся структуры мозга.
Ширина, мкм Интактные Иммунизированные Рис. 2. Ширина пучковой зоны надпочечника у интактных и иммунизированных мышей СВА. Средние невзвешенные значения. 1 — контроль, 2 — 4 сГр, 3 — 31 сГр.
У мышей СВА морфометрические показатели КН в ответ на облучение изменились незначительно (рис. 2). Изменения размера КН также, как у полевок, происходили за счет ПЗ (r = 0.921, р = 0.009). Ширина КН у мышей, облученных при мощности доз 4 и 31 сГр, уменьшилась, причем у животных, облученных при меньшей мощности дозы (4 сГр), шири на коры снизилась на 4.2% по сравнению с контролем, а у облученных при мощности дозы 31 сГр — всего на 1.5%. Снизились и относительные размеры пучковой и сетчатой зон (за исключением группы «31 сГр», где СЗ увеличилась на 2.4%). Все эти изменения статистиче ски незначимы. В отличие от рыжих полевок, иммунизация облученных и необлученных мышей СВА вызывает практически однонаправленные изменения ширины ПЗ;
различие за ключается лишь в степени их выраженности. Так, после введения эритроцитов кролика кон трольным мышам, ширина их ПЗ достоверно снижается (р = 0.028), но у облученных мышей подобный эффект наблюдается только в группе «31 сГр + иммунизация», причем в значи тельно более слабой степени (р 0.05). Возможно, поскольку мыши СВА обладают изна чально низкой кортикальной секрецией, реакция на стресс у них прошла быстро и не интен сивно;
так как стимуляция КН находится под управлением АКТГ, гипотрофия коры после иммунизации может быть объяснена недостаточным воздействием гипоталамо гипофизарного компонента. По данным дисперсионного анализа, факторы «облучение» и «иммунизация» не оказали какого-либо значимого воздействия на ширину КН (и, соответст венно, ПЗ) мышей СВА. Выявлено лишь статистически достоверное различие по ширине ПЗ между группами «Контроль» и «Контроль + иммунизация» (р = 0.025).
Таким образом, характер изменений стресс-реактивности коры надпочечников, вы званных низкоинтенсивным -излучением на ранних стадиях онтогенеза, зависит от видовой принадлежности организма и его гормонального статуса.
Кариометрические показатели клеток пучковой зоны. У рыжих поле вок хроническое воздействие -излучения в использованных дозах вызвало недостоверное сни жение среднего диаметра ядер в кортикоцитах ПЗ (рис. 3). Иммунизация эритроцитами кролика привела к еще более заметному снижению этого показателя. Наименьший диаметр ядер ПЗ от мечен в группе «31 сГр + иммунизация» (р = 0.007). Уменьшение диаметра ядер указывает на снижение процессов синтеза белка в адреналовой коре. Таким образом, у иммунизированных полевок, в отличие от интактных, изменение диаметра ядер в пучковой зоне совпадает с редук цией коры.
У мышей СВА хроническое -излучение в дозе 4 сГр вызвало незначительное увели чение диаметра ядер пучковой зоны, а в дозе 31 сГр – почти не повлияло на этот показатель (рис. 4). Иммунизация усилила наметившуюся тенденцию – в группе «4 сГр + иммунизация» диаметр ядер увеличился, а в группе «31 сГр + иммунизация», напротив, снизился. По дан ным дисперсионного анализа, эти изменения статистически незначимы.
5, 5, 5, 5, 5, Диаметр, мкм 5, 5, 5, 5, 4, 4, Интактные Иммунизированные Рис. 3. Диаметр ядер (мкм) кортикоцитов пучковой зоны надпочечника у интактных и имму низированных рыжих полевок. Средние невзвешенные значения. 1 — контроль, 2 — 4 сГр, — 31 сГр.
5, 5, 5, 5, Диаметр, мкм 5, 5, 5, 5, 5, Интактные Иммунизированные Рис. 4. Диаметр ядер (мкм) кортикоцитов пучковой зоны надпочечника у интактных и имму низированных мышей СВА. Средние невзвешенные значения. 1 — контроль, 2 — 4 сГр, 3 — 31 сГр.
Итак, введение эритроцитов кролика выявило скрытые функциональные различия меж ду облученными и необлученными животными. Снижение объема ядер кортикоцитов в важ нейшей зоне КН — пучковой (ответственной за выработку глюкокортикоидов) после воздей ствия -излучения и иммунизации может быть признаком пониженной синтетической актив ности гормонпродуцирующих клеток.
Соотношение различных тканевых компонентов в пучковой зоне. Для более полной характеристики функционального состояния ткани одних только морфометрических показателей недостаточно. Информативны относительные показатели, которые рассчитыва ются как число важнейших тканевых компонентов (ядер, цитоплазмы, кровеносных сосудов и т. д.) на определенную единицу площади среза (Морфофункциональные исследования…, 1984;
Автандилов, 1990). Для каждого типа нормальной клетки существует определенное соотношение между ядром и цитоплазмой;
в клетках патологически перерожденных тканей и опухолей это соотношение изменяется (Абрамов, 1962;
Хесин, 1967).
Ядено-цитоплазматическое соотношение у облученных рыжих полевок (табл. 2) по сравнению с контролем возрастает и достигает максимума в группе «4 сГр» (2 = 6.62, р = 0.0101);
в группе «31 сГр» этот показатель практически не изменяется. Введение эритроцитов кролика вызывает незначительное снижение (на 2 — 2.5%) доли ядер и ядерно цитоплазматического соотношения в пучковой зоне надпочечников как у облученных, так и не облученных животных;
минимальное значение этого показателя отмечено в группе «Контроль + иммунизация».
Обращает на себя внимание резкое и статистически значимое (р 0.005) увеличение доли кровеносных сосудов пучковой зоны во всех экспериментальных группах полевок (кроме «4 сГр + иммунизация», где относительная плотность сосудов осталась практически неизменной). Особенно этот эффект заметен в группах «Контроль + иммунизация» и « сГр», где показатель васкуляризации пучковой зоны вырос почти в 3 и 5 раз соответственно, по сравнению с контролем). Повышение кровенаполнения ткани — несомненный признак ее напряженного функционирования.
Содержание лейкоцитов в кортикальной ткани рыжих полевок после облучения в группе «4 сГр» несколько снизилось (на 0.4%), в группе «31 сГр» не изменилось. Наибольшее содержа ние тканевых лейкоцитов отмечено в группе «4 сГр + иммунизация» (3.2%), наименьшее — в группе «Контроль + иммунизация» (2.4%). Различия статистически незначимы.
У мышей СВА объемные соотношения тканевых компонентов ПЗ распределились несколько иным образом (табл. 3). После облучения, также как и у рыжих полевок, возраста ет ядерно-цитоплазматическое соотношение (в группе «4 сГр» — на 3.6%, в группе «31 сГр» — на 6.2% по сравнению с контролем), но этот эффект выражен сильнее и статистически достоверен. Доля кровеносных сосудов после облучения, напротив, в группе «4 сГр» снижа Таблица Соотношения тканевых компонентов в пучковой зоне ( рыжая полевка) Ядерно- Васкуляризация Содержание тканевых Экспериментальная группа Ядра (%) Цитоплазма цитоплазматическое пучковой зоны лейкоцитов соотношение (%) р р (%) p (%) (%) 20. Контроль 16.1 80.5 -- 0.5 -- 2.9 - 18. Контроль + иммунизация 0. 14.4 82.0 0.0843 1.3 2.3 0. 23. 4 сГр 0.0101 0. 18.2 77.1 2.3 2.5 0. 21. 4 сГр + иммунизация 16.6 79.6 0.4669 0.6 0.5593 3.2 0. 21. 31 сГр 0. 17.1 79.0 0.7226 1.0 2.9 0. 19. 31 сГр + иммунизация 0. 15.7 80.2 0.1358 1.2 2.9 0. Примечание. р – уровень вероятности для критерия Таблица Соотношения тканевых компонентов в пучковой зоне (мыши СВА) Ядерно- Васкуляризация Содержание тканевых Экспериментальная группа Ядра (%) Цитоплазма цитоплазматическое пучковой зоны лейкоцитов соотношение (%) р р (%) p (%) (%) Контроль – 15.1 79.8 19.1 -- 2.2 2.9 - Контроль + иммунизация 0. 15.8 78.1 20.3 0.3027 1.9 0.3640 4. 4 сГр 0.0043 0.0017 0. 17.4 77.5 22.7 1.3 3. 4 сГр + иммунизация 0.0002 0. 18.2 77.2 23.7 1.6 2.9 0. 31 сГр 0. 18.9 75.5 25.3 2.1 0.7018 3.5 0. 31 сГр + иммунизация 0. 17.8 76.3 23.5 2.8 0.0950 3.1 0. Примечание. р – уровень вероятности для критерия ется почти вдвое, а в группе «31 сГр» остается неизменной. Содержание лейкоцитов в ПЗ становится больше по сравнению с контролем во всех экспериментальных группах, дости гая максимальных значений в группах «Контроль-иммунизация» и «4 сГр» (р 0.05).
Итак, облучение рыжих полевок и мышей СВА в ранних периодах онтогенеза вы звало неоднозначную реакцию основных морфометрических показателей КН. У рыжих полевок -излучение повлияло в большей степени на васкуляризацию пучковой зоны. У мышей СВА, напротив, более чувствительным оказался показатель «ядерно цитоплазматическое соотношение». Наибольшее число достоверных отличий от контрольных животных – как для рыжих полевок, так и для мышей СВА – отмечено в группе «4 сГр». В целом можно заключить, что облучение в дозе 4 сГр вызывает более долговременные морфо логические сдвиги в ткани КН, по сравнению с большей в несколько раз дозой 31 сГр. Реак ция одних и тех же показателей у облученных и необлученных животных на иммунизацию различна, а иногда противоположна, что свидетельствует о значительных различиях функ ционального состояния животных.
5. Гиперпластические изменения в коре надпочечника у экспериментальных животных Роль ИИ в индукции опухолей общеизвестна и доказана на огромном количестве экспериментального и клинического материала. К опосредованным и отдаленным эффек там облучения относят, например, возникновение лейкозов и злокачественных опухолей.
Многочисленными работами показано, что даже самые малые дозы ионизирующих излу чений потенциально канцерогенны (Виленчик, 1983;
Гофман, 1994;
Романова, Жорова, 1994;
Яблоков, 1998). Особенно чувствителен к этому повреждающему фактору (по срав нению со взрослым организмом) эмбрион. Еще в 1960-е годы стало известно, что у детей, прошедших до рождения радиографическое обследование, риск заболевания лейкемией или солидными опухолями возрастает в 1,5 раза (Яблоков, 1998).
Диффузная гиперплазия. Этот вид перестройки кортикальной ткани была отме чен во всех экспериментальных группах рыжих полевок (табл. 4). Клетки в таких участ ках меньше по размеру, с темными, часто деформированными ядрами, расположены плотнее, чем в окружающей ткани. Иногда кора утрачивала свою типичную зональность.
В литературе встречаются сведения о потере корой надпочечников зональности при дли тельном стрессовом воздействии (Виноградов, 1998). Также встречалась дискомплексация тяжей КН, которые утрачивали свою радиальную направленность. Этот тип патологиче ской перестройки кортикальной ткани также встречается при стрессовых воздействиях (Рыжавский, 1989). Наименьшая частота встречаемости животных с подобными измене ниями была зарегистрирована в группе «Контроль» (11.8%). После облучения частота диффузной гиперплазии увеличилась в три раза, составив в группах: «4 сГр» – 37.5%;
« сГр» – 35.3%. Иммунизация необлученных полевок вызвала незначительное повышение этого показателя (14.3%). Наибольшая частота диффузной гиперплазии отмечена в груп пах «4 сГр + иммунизация» (72.7%, р = 0.0018) и «31 сГр + иммунизация» (62.5%;
р = 0.0013).
У контрольных мышей СВА в норме диффузная гиперплазия наблюдалась в 14.3% случаев (табл. 5). В результате облучения частота гиперплазий этого типа увеличи лась и была примерно равна в группах «4 сГр» и «31 сГр» — 25.0% и 23.1% соответствен но. После иммунизации этот показатель у необлученных мышей незначительно увеличил ся, составив 16.7%;
в группе «4 сГр + иммунизация» частота появления диффузной гипер плазии не изменилась (14.3%), а в группе «31 сГр + иммунизация», напротив, увеличи лась, достигнув наибольшего значения (35.1%). Изменения статистически незначимы.
Макроузелковая гиперплазия («добавочная кора надпочечников»). У рыжих полевок отмечена во всех экспериментальных группах (табл. 4). Эти узелки (в большинстве случаев неструктурированные) всегда находятся во внешних отделах КН, отграничены тон кой соединительнотканной оболочкой и располагаются одиночно или группами. Узелки мо гут быть погружены в кору, прилегать к ней снаружи или же довольно далеко отстоять от нее, находясь в окружающей ткани. В единичных случаях «добавочная кора» представляет собой хорошо структурированное образование, напоминающее миниатюрный надпочечник, с выраженной зональностью коры и медуллярными клетками в центре. Наибольшая частота появления «добавочной коры» зарегистрирована в группе «4 сГр» (37.5%), наименьшая — в группе «Контроль + иммунизация» (14.3%). У иммунизированных полевок частота появле ния «добавочной коры» ниже, чем у интактных (как среди облученных, так и среди необлу ченных животных). Полагают, что адренокортикальная узелковая гиперплазия выражает неспецифическую компенсаторную реакцию, так как появляется в результате воздействий, различных по своей природе (Строганова, 1961;
Маркелов и др., 1981;
Рубченя, 2002). И. Н.
Рубченей (2002) также отмечены макроузелковые образования у необлученных крыс. Оче видно, узелковая гиперплазия может возникать и в норме (в случаях, когда организму необ ходимо компенсировать возникшую по какой-либо причине временную гормональную не достаточность), и является одной из форм регенерации адреналовой ткани.
У мышей линии СВА в норме частота появления макроузелковой гиперплазии до вольно высока (28.6%) (табл. 5). У облученных мышей «добавочная кора» отмечалась со ответственно в 1.5 и 3 раза реже (18.8% и 7.7%), чем у необлученных. Известны факты снижения числа опухолей у мышей под влиянием облучения (Cai, 1999). Возможно, мы наблюдаем подобный эффект. Введение эритроцитов кролика повлияло на частоту появ ления макроузелковой гиперплазии неоднозначно: у мышей, облученных в дозе 31 сГр, она увеличилась вдвое (14.3%), а у необлученных животных и у мышей, облученных в до зе 4 сГр, частота этих новообразований снизилась (причем у необлученных более чем в раза, составив 8.3%).
Микроузелковая гиперплазия. У рыжих полевок (как в норме, так и после об лучения) кортикальные микроаденомы представляют собой округлые узелки, нечетко от граниченные от окружающей ткани, диаметром 20–40 мкм. Как правило, они находятся в пучковой зоне, состоят из клеток со светлой, сильно вакуолизированной цитоплазмой и темными эксцентрически расположенными ядрами. Не встречаются микроузелки у жи вотных из групп «Контроль + иммунизация» и «4 сГр» (табл. 4). Частота их появлений в остальных группах примерно одинакова (4.2 – 5.9%), за исключением группы «4 сГр + иммунизация» (9.1%).
У мышей линии СВА, в отличие от рыжих полевок, микроузелковая гиперплазия наблюдалась во всех без исключения экспериментальных группах (табл. 5). Узелки, также как и у рыжих полевок, располагаются одиночно или группами, исключительно в пучко вой зоне. В группе «Контроль» частота встречаемости микроузелковой гиперплазии дос тигла 35.7%. Среди облученных мышей гиперплазия этого типа наблюдается у 12.5 и 23.1% животных соответственно (почти в 3 и в 1.5 раза реже, чем у необлученных).
Иммунизация эритроцитами кролика вызывает неоднозначное изменение этого при знака у экспериментальных мышей. Так, частота появления микроузелковой гиперплазии после введения антигена снизилась в группах «Контроль + иммунизация» (8.3%) и «31 сГр + иммунизация» (7.1%);
в группе «4 сГр + иммунизация» этот показатель, напротив, резко вырос и составил 42.9%.
Полагают, что даже самые низкие дозы ионизирующих излучений для млекопи тающих потенциально канцерогенны, а при облучении на ранних стадиях онтогенеза он кологический риск особенно велик. С другой стороны, имеются факты и противополож ного действия ионизирующих излучений. Отмеченные нами перестройки тканей не имеют признаков злокачественного перерождения ткани. В основе подобных аденоматозных об разований лежит нарушение клеточного деления. На наш взгляд, подобные явления – при знак качественных изменений адреналовой функции. Среди рыжих полевок особенно по казательна в этом отношении группа «4 сГр + иммунизация», где отмечена наиболь шая частота появления диффузных и микроузелковых гиперплазий. Это может свидетель ствовать о том, что гипоталамо-гипофизарно-адреналовое звено у животных этой группы находилось в наибольшем функциональном напряжении, хотя после облучения экспери ментальные полевки провели в условиях естественного радиационного фона более 3 ме сяцев, а этого срока для компенсации преходящих эффектов было бы вполне достаточно.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ Эксперимент по хроническому облучению рыжих полевок и лабораторных мышей линии СВА показал, что низкоинтенсивное -излучение (мощности доз 0.1 и 0.8 сГр/сут, поглощенные дозы соответственно 4 и 31 сГр) в ранние периоды онтогенеза вызывает долговременные структурно-функциональные эффекты в коре надпочечника экспериментальных животных.
Хроническое воздействие -излучения на ранних стадиях онтогенеза в использованных дозах не вызывает видимых патоморфологических нарушений в КН как рыжих полевок, так и мышей СВА, но влияет на морфометрические показатели, что свидетельствует об изменении реактивности коры и, следовательно, адаптивного потенциала взрослого организма. Более значимые эффекты отмечены после облучения экспериментальных животных в меньшей поглощенной дозе (4 сГр). Зарегистрированы признаки активации коры надпочечников — гипертрофия пучковой зоны, увеличение объемной плотности кровеносных сосудов, возросшая частота гиперплазий. С другой стороны, снижение диаметра ядер в кортикоцитах пучковой зоны КН противоречит общей тенденции к гипертрофии, которая характерна для неспецифической адаптивной реакции, и указывает на недостаточность процессов белкового синтеза. Возможно, это признак разной направленности процессов повреждения и компенсации, одновременно происходящих в организме при воздействии низкоинтенсивных факторов (в данном случае -излучения).
Введение взвеси эритроцитов кролика необлученным рыжим полевкам вызывает неспецифическую адаптивную реакцию, которая выражается в гипертрофии КН, происходящей за счет увеличения размеров ПЗ;
возрастает удельная плотность кровеносных сосудов в ПЗ, что указывает на усиление напряженности функционирования КН. У облученных полевок в ответ на иммунизацию, наоборот, происходит гипотрофия КН — снижение ее ширины и ширины ПЗ, уменьшение диаметра ядер в кортикоцитах;
поскольку КН находится под контролем АКТГ, разнонаправленность изменения ее размеров в результате воздействия стресс-фактора указывает на существенные отличия в функциональном состоянии гипоталамо-гипофизарно-адренокортикального звена эндокринной системы облученных и необлученных полевок.
У мышей СВА хроническое воздействие -излучения в использованных дозах не вызвало значимых изменений размера КН и ПЗ, но повлияло на ядерно цитоплазматическое соотношение в клетках ПЗ (у облученных мышей оно достоверно Таблица Доля животных с гиперпластическими изменениями коры надпочечников в экспериментальных группах, рыжая полевка Гиперплазия Экспериментальная группа n Диффузная Макроузелковая Микроузелковая Кол-во (%) Кол-во (%) р Кол-во (%) р p Контроль — — — 17 2 (11.8%) 4 (23.5%) Контроль + иммунизация 7 1 (14.3%) 0.6640 1 (14.3%) 0.5375 0 0. 4 сГр 8 3 (37.5%) 0.1668 3 (37.5%) 0.3931 0 0. 4 сГр + иммунизация 0. 11 8 (72.7%) 2 (18.2%) 0.5610 1 0. 31 сГр 17 6 (35.3%) 0.1123 4 (23.5%) 0.6560 1 0. 31 сГр + иммунизация 24 15 (62.5%) 5 (20.8%) 0.0013 0.5650 1 0. Примечание. р — уровень вероятности для точного критерия Фишера.
Таблица Доля животных с гиперпластическими изменениями коры надпочечников в экспериментальных группах, мыши СВА Гиперплазия Экспериментальная группа n Диффузная Макроузелковая Микроузелковая Кол-во (%) Кол-во (%) р Кол-во (%) р p Контроль — — — 14 2 (14.3%) 4 (28.6%) 5 (35.7%) Контроль + иммунизация 12 2 (16.7%) 0.6409 1 (8.3%) 0.2130 1 (8.3%) 0. 4 сГр 16 4 (25.0%) 0.3954 3 (18.8%) 0.4186 2 (12.5%) 0. 4 сГр + иммунизация 14 2 (14.3%) 0.7022 2 (14.3%) 0.3242 6 (42.9%) 0. 31 сГр 13 3 (23.1%) 0.4623 1 (7.7%) 0.1860 3 (23.1%) 0. 31 сГр + иммунизация 14 5 (35.7%) 2 (14.3%) 0.1923 0.3242 1 (7.1%) 0. Примечание. р — уровень вероятности для точного критерия Фишера.
выше, чем у необлученных). Иммунизация необлученных и облученных мышей выявила различие в структурно-функциональном состоянии их КН. После введения эритроцитов кролика необлученным мышам в КН были отмечены признаки гипотрофии — достоверное снижение ширины КН и ПЗ. Известно, что лабораторные мыши линии СВА характеризуются наименьшим приростом кортикостерона во время острого стресса (Науменко и др., 1990);
возможно, поэтому реакция на стресс у них прошла быстро и не интенсивно. Так как стимуляция КН находится под управлением АКТГ, гипотрофия коры после иммунизации может быть объяснена недостаточным воздействием гипоталамо гипофизарного компонента. У облученных мышей иммунизация не вызывает значимых изменений ширины КН и ПЗ. Таким образом, характер изменений стресс-реактивности коры надпочечников, вызванных низкоинтенсивным -излучением на ранних стадиях онтогенеза, зависит от видовой принадлежности организма и его гормонального статуса.
Хроническое воздействие -излучения вызвало у рыжих полевок увеличение частоты появления гиперплазий КН (макроузелковой и диффузной);
наибольшая частота встречаемости диффузной гиперплазии отмечена у полевок, подвергшихся облучению и иммунизации;
при меньшей поглощенной дозе (4 сГр) она достигает максимума (72.7%).
Мыши СВА характеризуются высокой частотой микроузелковой гиперплазии (35.7%) в норме;
после иммунизации облученных животных этот показатель достигает максимального значения (42.9%) при меньшей поглощенной дозе. Отмеченные нами перестройки тканей не имеют признаков злокачественного перерождения ткани, но, несомненно, они являются признаком качественных изменений функции КН.
ВЫВОДЫ 1. Кора надпочечников рыжих полевок и мышей линии СВА в возрасте 4 мес полностью сформирована, зональность выражена хорошо. Основной объем КН как у полевок, так и у мышей занимает ПЗ;
ее абсолютная и относительная ширина у полевок больше, чем у мы шей. У мышей СВА по сравнению с рыжими полевками в норме достоверно выше ширина СЗ, объемная плотность кровеносных сосудов ПЗ и частота микроузелковых гиперплазий.
2. У рыжих полевок, подвергшихся воздействию -излучения при мощностях дозы 0.1 и 0.8 сГр/сут на ранних стадиях онтогенеза, в возрасте 4 мес отмечены признаки повышен ной активности коры надпочечников — увеличение ширины КН и ПЗ, ядерно цитоплазматического соотношения и относительной плотности кровеносных сосудов в ПЗ, частоты встречаемости диффузной и макроузловой гиперплазии. Эти явления более выра жены у животных, облученных при меньшей мощности дозы (0.1 сГр/сут).
3. У мышей линии СВА, подвергшихся воздействию -излучения на ранних стадиях онто генеза при мощностях дозы 0.1 и 0.8 сГр/сут, происходит достоверное увеличение ядерно цитоплазматического соотношения в ПЗ.
4. У необлученных рыжих полевок после дополнительной нагрузки (введения эритроци тов кролика) отмечаются признаки универсальной неспецифической адаптивной реакции — увеличение ширины КН и ПЗ, тогда как у облученных полевок после иммунизации в адренокортикальной ткани происходят гипотрофические изменения — снижение ширины КН и ПЗ, диаметра ядер и ядерно-цитоплазматического соотношения в ПЗ. Наибольшая частота встречаемости диффузной гиперплазии отмечена у полевок, подвергшихся облу чению и иммунизации;
при меньшей мощности дозы (0.1 сГр/сут) она достигает макси мума.
5. После иммунизации необлученных мышей линии СВА произошла адренокортикальная гипотрофия: ширина КН и ПЗ достоверно ниже, чем в контроле. У облученных мышей эти показатели не изменились.
6. Хроническое воздействие -излучения на ранних стадиях онтогенеза (мощности дозы 0.1 и 0.8 сГр/сут, поглощенная доза 4 и 31 сГр) вызывает долговременные структурно функциональные изменения в адренокортикальной ткани, которые у взрослых животных усиливаются после иммунной нагрузки. Характер изменений зависит от видовой принадлежности организма.
СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК:
1. Быховец Н.М. Влияние низкоинтенсивного гамма-облучения в ранние периоды онто генеза на структурно-функциональное состояние коры надпочечников рыжей полевки // Экология. — 2008. — № 6. — С. 475-477.
2. Быховец Н. М. Воздействие низкоинтенсивного хронического гамма-излучения на морфогенез коры надпочечника // Морфология. — Т. 129. — № 4. — С. 28. (Мат-лы докл. VIII Конгресса Межд. Ассоциации морфологов: Орел, 15 сентября 2006)).
Публикации в прочих изданиях:
3. Кичигин А.И. Влияние хронического гамма-облучения в пренатальном и раннем пост натальном периодах на количество ореолообразующих клеток в белой крови лабора торных мышей / Кичигин А.И., Быховец Н.М. // Воздействие радиоактивного загряз нения на наземные экосистемы в зоне аварии на Чернобыльской АЭС (1986—1996 гг.) / Труды Коми НЦ УрО РАН, № 145. — Т. 1. — Сыктывкар, 1996. — С. 163–172.
4. Быховец Н. М. Влияние хронического гамма-облучения в пренатальном и раннем по стнатальном периодах онтогенеза на количество ореолообразующих клеток в крови белых мышей // Четвертая молодежная конференция Института биологии. Актуальные проблемы биологии (тезисы докладов). — Сыктывкар, 1996. — С. 14.
5. Быховец Н. М. Влияние хронического гамма-облучения в ранних периодах онтогене за на морфофункциональное состояние коры надпочечника мышей линии СВА // Био логические эффекты малых доз ионизирующей радиации и радиоактивное загрязнение среды: Междунар. конф. БИОРАД-2001. Сыктывкар, 20–24 марта 2001 г. Тезисы док ладов. — Сыктывкар, 2001. — С. 184–185.
6. Быховец Н. М. Некоторые количественные показатели надпочечника мышей линии СВА в результате хронического воздействия низкоинтенсивного гамма-излучения на ранних этапах онтогенеза // Актуальные проблемы биологии и экологии: Тезисы док ладов IX молодежной научной конференции. — Сыктывкар, 2002. — С. 25-26.
7. Быховец Н. М. Морфофункциональная характеристика коры надпочечника мышей линии СВА в результате хронического гамма-облучения на ранних этапах онтогенеза // Миграции животных на Европейском Северо-Востоке. — Сыктывкар, 2004. — С.
131–139. — (Труды Коми НЦ УрО РАН, № 175).
8. Быховец Н. М. Морфометрические показатели коры надпочечника рыжей полевки в результате хронического воздействия низкоинтенсивного -излучения в ранние перио ды онтогенеза // Морфогенез и регенерация. – Заочная электронная конференция мор фологов к 70-летию Курского медицинского университета. – 2004.
http://www.alexmorph.narod.ru 9. Быховец Н. М. Использование AdobePhotoshop в гистоморфометрических исследова ниях / Быховец Н. М., Ермакова О. В. // Морфогенез и регенерация. – Заочная элек тронная конференция морфологов к 70-летию Курского медицинского университета. – 2004. http://www.alexmorph.narod.ru 10. Быховец Н. М. Диспластические изменения в коре надпочечника рыжей полевки (Clethrionomys glareolus Schreb.) после хронического воздействия низкоинтенсивного гамма-излучения на ранних стадиях онтогенеза // Биологические эффекты малых доз ионизирующей радиации и радиоактивное заражение среды: Тез. докл. Междунар.
конференции (Сыктывкар, Республика Коми, Россия, 28 февраля – 3 марта 2006 г.). — Сыктывкар, 2006. — С. 68–69.
11. Быховец Н. М. Морфофункциональные показатели коры надпочечника рыжей полев ки (Clethrionomys glareolus Shreb.) в результате хронического возлействия низкоинтен сивного гамма-излучения на ранних стадиях онтогенеза // Морфологические ведомо сти. — № 1–2. — Москва – Берлин, 2006. (Мат-лы всероссийской науч. конф. «Вопро сы морфологии») — С. 36-38.
12. Быховец Н.М. Влияние низкоинтенсивного гамма-облучения в ранних периодах онтогенеза на стресс-реактивность коры надпочечника рыжей полевки // Вестник Российской Военно-медицинской академии. — 2008. — № 3 (23). — Прил. 1. — С. 119 120. (Мат-лы Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы токсикологии и радиологии»).