Исследование мембранных механизмов длительных модификаций поведения у виноградной улитки
На правах рукописи
ТАГИРОВА РОЗА РИШАТОВНА ИССЛЕДОВАНИЕ МЕМБРАННЫХ МЕХАНИЗМОВ ДЛИТЕЛЬНЫХ МОДИФИКАЦИЙ ПОВЕДЕНИЯ У ВИНОГРАДНОЙ УЛИТКИ 03.00.13 – физиология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Казань - 2007 1
Работа выполнена в лаборатории биофизики Казанского физико-технического института Казанского Научного Центра Российской Академии Наук Научный руководитель – доктор биологических наук, профессор Гайнутдинов Халил Латыпович
Официальные оппоненты: чл-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор Зефиров Андрей Львович ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» доктор биологических наук Захаров Игорь Сергеевич Институт биологии развития РАН, Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН Ведущая организация – Институт нормальной физиологии РАМН (г. Москва)
Защита состоится «30» октября 2007 г. в «12» часов на заседании диссертационного Совета Д.212.078.02 по присуждению ученой степени доктора биологических наук по специальности 03.00.13. – физиология при ГОУ ВПО «Татарский государственный гуманитарно-педагогический университет» по адресу:
420021, г. Казань, ул. Татарстан, 2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Татарский государственный гуманитарно-педагогический университет» по адресу: 420021, г. Казань, ул. Татарстан, 2.
Автореферат разослан «27» октября 2007 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Т.Л. Зефиров Актуальность исследования. Среди исследователей поведения существует полное согласие в том, что углубление наших представлений о феноменах памяти и обучения должно проистекать из знаний о клеточных и молекулярных механизмах этих процессов (Балабан П.М., Захаров И.С., 1992;
Hawkins R.D. et al., 1993;
2006;
Matzel L.D. et al., 1998;
Balaban P.М. et al., 2004;
Соколов Е.Н., Незлина Н.И., 2007).
К настоящему времени накопились экспериментальные данные, демонстрирующие важную роль мембранных процессов в ассоциативных и неассоциативных формах обучения (Alkon D.L., 1984;
Byrne J., 1987;
Farley J., Hun Y., 1997;
Frysztak R.D.,Crow T., 1997;
Staras K. et al., 1998;
Matzel L.D. et al., 1998;
Haney J., Lukowiak K., 2001;
Balaban P.M., 2002b;
Гайнутдинов Х.Л. и др., 2002;
Nikitin E.S. et al., 2006).
Нейробиологические механизмы формирования временной связи остаются мало изученными в силу целого ряда трудностей. Один из путей преодоления этих трудностей - использование для анализа механизмов ассоциативного обучения простых клеточных систем, к каковым относится мозг моллюсков (Сахаров Д. А., 1974;
1992;
Kandel E.R., 1980;
2001;
Максимова О.А., Балабан П.М., 1983;
Alkon D.L., 1984;
Sangha S. et al., 2003). Интенсификация исследований механизмов обучения и памяти привела к новым экспериментальным подходам в изучении нейромедиаторных и модуляторных эффектов серотонина, а также механизмов участия соответствующих систем в явлениях пластичности поведения (Kandel E.R., Schwartz J.H., 1982;
Сахаров Д.А., 1990;
Balaban P.M., 2002b). Многочисленные исследования свидетельствуют, что ассоциативное обучение и формирование долговременной сенситизации затрагивает пути, в которых нейромедиатором и нейромодулятором выступает серотонин (Glanzman D.L. et al., 1989;
Балабан П.М.
и др., 1986;
1992;
Clark G.A., Kandel E.R., 1993;
Гайнутдинова Т.Х. и др., 1998, 2002;
Захаров И.С., 2001;
Burrell B.D., Sahley C.L., 2005;
Gillette R., 2006). Эффект серотонина является цАМФ-зависимым, так как серотонин поднимает уровень цАМФ, а цАМФ и форсколин иммитируют серотониновый ответ в нейронах (Pollock J.D. et al., 1985;
Yanow S.K. et al., 1998;
Burrell B.D., Sahley C.L., 2005;
Song X.-J. et. al., 2006).
Факторы, влияющие на образование и распад цАМФ, хорошо изучены.
Внутриклеточная концентрация цАМФ находится под контролем двух противоположно направленных действий и опосредуется относительной активностью аденилатциклазы, образующей цАМФ из АТФ, с одной стороны, и фосфодиэстеразы, разрушающей циклический нуклеотид - с другой (Пивоваров А.С. и др., 1989;
Torphy T.J., 1998). Показано, что в нервных клетках комплекс Са2+-кальмодулин стимулирует аденилатциклазу, что должно потенцировать цАМФ - опосредованые реакции (Теппермен Дж., Теппермен Х., 1989, Реутов В.П., 1998). Эти данные свидетельствуют о функциональной зависимости между двумя вторичными посредниками - цАМФ и Са2+, а также между двумя системами аденилатциклазной и системой мобилизации ионов Са2+ (Крутецкая З.И. и др., 2003). Таким образом, исследование роли серотонина и аденилатциклазной сигнальной системы в долговременных эффектах обучения на уровне параметров нейрональной мембраны и ионных каналов, представляется актуальным.
Цель и основные задачи исследования. Целью работы явилось исследование мембранных механизмов длительных модификаций поведения у виноградной улитки и роли серотонинергической и аденилатциклазной систем в ассоциативном обучении. В соответствии с этой целью были поставлены следующие задачи:
1. сравнить электрические характеристики командных нейронов оборонительного поведения при разных формах условных рефлексов у виноградной улитки:
оборонительного, пищеотвергательного и обстановочного, 2. сравнить длительность сохранения изменений электрических характеристик командных нейронов при ассоциативном обучении и долговременной сенситизации, включая эффекты истощения серотонина и дофамина в нервной системе, 3. исследовать роль серотонинергической системы в формировании условного оборонительного рефлекса, 4. исследовать роль аденилатциклазной системы в формировании условного оборонительного рефлекса.
Положения, выносимые на защиту:
1. Формирование условного оборонительного рефлекса, выработка долговременной сенситизации, эффекты инъекций 5,7-дигидрокситриптамина и 6 гидроксидофамина характеризуются деполяризационным сдвигом мембранного потенциала и снижением порога генерации потенциала действия командных нейронов виноградной улитки, которые сохраняются в течение 2-х недель.
2. Долговременным эффектом обучения у улиток является повышение активности фосфодиэстеразы цАМФ в командных нейронах оборонительного поведения.
Научная новизна. Найдено, что ежедневное введение предшественника серотонина 5-НТР перед началом сеанса обучения ускоряет процесс выработки условного рефлекса. Впервые показано, что введение предшественника серотонина 5-НТР перед началом сеанса обучения улиткам, которым была произведена предварительная инъекция 5,7-дигидрокситриптамина снимает эффект этого вещества. Если на поведенческом уровне 5-HTP препятствовал действию 5,7-ДОТ, то на уровне электрических характеристик командных нейронов подобный эффект 5-HTP отсутствовал. Найдено, что формирование условного обстановочного рефлекса, когда у улитки наблюдалось значительное увеличение амплитуды оборонительной реакции только в той обстановке, в которой при обучении наносились электрошоки, не влияет на электрофизиологические параметры командных нейронов оборонительного поведения.
Впервые найдено, что изменения электрических характеристик командных нейронов сохраняются в течение одного месяца после выработки условного оборонительного рефлекса и в течение двух недель после формирования долговременной сенситизации, т.е. в течение времени сохранения поведенческих изменений. Впервые показано, что сдвиг значений электрических параметров командных нейронов, вызванный введением 5,7-дигидрокситриптамина и 6 гидроксидофамина сохраняется в течение не менее 2-х недель.
Показано, что аппликация водорастворимого аналога цАМФ - 8Br-cAMP и активатора аденилатциклазы форсколина вызывает деполяризацию командных нейронов как у интактных, так и у обученных улиток. Применение хинина на фоне 8Br-cAMP и форсколина увеличивает деполяризацию мембранного потенциала как у интактных, так и у обученных улиток. Найдено, что аппликация ингибитора фосфодиэстеразы IBMX, увеличивающего уровень цАМФ в клетке, снижала мембранный потенциал покоя командных нейронов в группе обученных животных, но не в группе интактных улиток, что выявляет метаболические изменения, произошедшие в командных нейронах оборонительного рефлекса после ассоциативного обучения, на уровне фосфодиэстераз. Показано, что аппликация блокатора кальмодулина трифлуопиразина приводила к увеличению мембранного потенциала у интактных улиток, в группе обученных животных потенциал покоя не изменился.
Научно-практическая ценность. Полученные результаты позволяют составить более полное представление о роли мембранных процессов в механизмах обучения и сохранения долговременной памяти. Результаты, свидетельствующие об увеличении скорости формирования условного оборонительного рефлекса при ежедневной инъекции метаболического предшественника серотонина 5-HTP до процедуры обучения, позволяют составить более полное представление о роли серотонина в процессах обучения и памяти. Снижение мембранного потенциала покоя командных нейронов после аппликации неселективного блокатора фосфодиэстераз IBMX в группе обученных животных, но не в группе интактных улиток, выявляет метаболические изменения, произошедшие после ассоциативного обучения, на уровне фосфодиэстераз.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на итоговых конференциях Казанского научного центра РАН (Казань, 2000-2006 гг), 5, 7, 8 Всероссийских школах молодых ученых «Актуальные проблемы нейробиологии» (1998, 2000, 2001 гг), Central European Conference of Neurobiology, (Krakw, Poland, 2001 г), XVIII съезде Физиологического общества им. И.П.Павлова, (Казань, 2001 г), 7-ой и 9-ой Пущинской школы-конференции молодых ученых (Пущино, 2003, 2005 гг), V, VI, VII и VIII Всероссийских симпозиумах “Растущий организм: адаптация к физической и умственной нагрузке” (Казань, 2000, 2002, 2006 г и Набережные Челны, 2004 г.), Sixth IBRO World Congress of Neuroscience (Prague, Czech Republic, 2003 г.), XIX съезде Физиологического общества им. И.П.Павлова, (Екатеринбург, 2004 г), Всероссийской конференции «Нейрохимия: Фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005 г), Всероссийская конференция молодых исследователей «Физиология и медицина». (Санкт-Петербург, 2005 г), I съезда физиологов СНГ (Сочи-Дагомыс, 2005 г), 6-th, 8-th East European Conference of the International Society for Invertebrate Neurobiology “Simpler Nervous Systems” (Moscow-Pushchino, Всероссийской конференции «Нейроспецифические 2000, Kazan, 2006), метаболиты и энзимологические основы деятельности цнс» (Пенза, 2006 г), «Человек и его здоровье» Всероссийская конференция молодых 10-ая исследователей (Санкт-Петербург, 2007г), XX съезд физиологического общества им. И.П. Павлова (Москва, 2007 г).
Реализация результатов исследования. Материалы исследования отражены в 10 статьях, опубликованных в рецензируемых журналах, и в 25 тезисах докладов.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа объемом страниц состоит из введения, обзора литературы, описания объекта и методов исследования, главы результатов исследования, общего их обсуждения, заключения, выводов и указателя цитируемой литературы. Список цитируемой литературы включает 284 источников, из них 182– иностранных авторов.
Диссертация иллюстрирована 37 рисунком и содержит 3 таблицы.
Список используемых сокращений:
УС - условный стимул;
БС - безусловный стимул;
УОР - условный оборонительный рефлекс;
ПУОР – пищеотвергательный условный рефлекс;
ДС – долговременная сенситизация;
ФР - физиологический раствор;
5,6- и 5,7-ДОТ – 5,6 и 5,7-дигидрокситриптамин;
6-OH-DA – 6-гидроксидофамин;
5-HTP – 5 окситриптофан;
цАМФ – циклический аденеозинмонофосфат;
АТФ – аденозинтрифосфат;
PDE – фосфодиэстераза;
КМ – кальмодулин;
Vm - потенциал покоя;
Vt - порог генерации потенциала действия.
ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ В эксперименте использовали половозрелых особей, однородных по весу и размеру. До эксперимента улитки не менее двух недель находились в активном состоянии. Условный оборонительный рефлекс закрытия пневмостома вырабатывался по схеме, предложенной О.А.Максимовой и П.М.Балабаном (1983).
В качестве условного стимула (УС) использовались постукивания по раковине, которые в норме не вызывали оборонительной реакции улитки. Безусловным стимулом (БС) служило вдувание струи воздуха в отверстие легочной полости, что вызывало у животных безусловную оборонительную реакцию закрытия пневмостома. В день предъявлялось 60 сочетаний УС и БС. Для выработки условного рефлекса на отвергание пищи (ПУОР) в качестве УС предъявлялся кусочек огурца, БС служил электрический ток. Кусочек пищи на металлическом стержне подносили к оральной области улитки и в момент первого жевательного движения через стержень пропускали ток величиной в 1 мА. Другой электрод прикладывали к ноге улитки. Сочетания пищи и тока предъявляли с интервалами в 10-20 мин. Рефлекс считался выработанным после того, как улитка либо избегала пищу 10 раз подряд, либо, дотронувшись до нее проявляла оборонительную реакцию, не дожидаясь подкрепления. Все поведенческие эксперименты проводились с применением метода двойного слепого контроля. Для выработки у животных обстановочного рефлекса, эта группа 5 дней получала 5 электрошоков величиной в 1 мА в течение 0,5 с. в стандартной обстановке (на шаре). Тесты проводилось в двух вариантах: в стандартных условиях (на шаре), т.е. тех, в которых животные получали электрошоки и в условиях, отличных от стандартных (на плоской поверхности крышки террариума). В качестве контроля использовались интактные улитки. Долговременную сенситизацию (ДС) оборонительного рефлекса закрытия пневмостома получали применением электрических стимулов в область головы (использовался электрический ток 6- мА, 50 Гц и продолжительностью 1 сек.). Критерием выработки ДС служило значительное увеличение времени закрытия дыхательного отверстия в ответ на тестирующее тактильное раздражение мантии.
фирмы “Sigma” вводился двумя 5,6-дигидрокситриптамин (5,6-ДОТ) инъекциями по 15 мг/кг веса каждая с интервалом в 7 дней. В отдельной серии применяли 5,7-ДОТ фирмы “Sigma” в дозе 20 мг/кг веса однократно. Применялся (6-OH-DA) фирмы “Sigma”, который вводили двумя 6-гидроксидофамин инъекциями по 15 мг/кг веса с интервалом в 7 дней. Нейротоксины растворяли в 0,1 мл солевого раствора для виноградной улитки, кроме того, в раствор была добавлена 0,1 % аскорбиновая кислота в качестве антиоксиданта. Поведенческие эксперименты начинали спустя 5 дней после инъекций 5,7-ДОТ. Метаболический предшественник серотонина 5-окситриптамин (5-HTP) применялся в дозе 10 мкг/г веса. 5-HTP растворяли в 0,1 мл солевого раствора и вводили каждый день за 1 час до сеанса обучения. Контролем служили улитки, которым был введен только солевой раствор (0,1 мл) с 0,1 % аскорбиновой кислотой в те же сроки, что и в опытных сериях. Регистрация электрических характеристик происходила после окончания поведенческой части.
В работе использовался препарат изолированной центральной нервной системы улитки. Измерения проводились при комнатной температуре с применением внутриклеточных стеклянных микроэлектродов, имеющих сопротивление 5 - 25 МОм и заполненных 2,5М КCl. В ходе эксперимента регистрировались потенциал покоя и порог генерации потенциалов действия.
Исследовались нейроны ЛПа3, ППа3, ЛПа2 и ППа2. Регистрация электрических характеристик нейронов в экспериментах производилась в солевом растворе для виноградных улиток - NaCl-80mM, KCl-4mM, CaCl2-10mM, MgCl2-5mM, NaHCO3 5mM. Использовали также растворы содержащие водорастворимый аналог цАМФ 8-Br-цАМФ - 10 4 моль;
активатор аденилатциклазы форсколин - 10 4 моль;
неспецифический блокатор фосфодиэстераз IBMX - 210 4 моль;
блокатор кальмодулина ТФП - 10 4 моль. Для блокады потенциал-зависимых Ca2+-каналов использовали верапамил (Sigma) – 5 10 4 моль. Для блокады Ca2+-зависимых K+ каналов использовали хинин (Sigma) - 2 10 4 моль. Результаты статистически обрабатывались с применением t-критерия Стъюдента, также получали среднее значение и стандартную ошибку среднего (M SEM).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Электрофизиологические параметры командных нейронов оборонительного поведения после выработки оборонительного рефлекса на постукивание по раковине, пищеотвергательного рефлекса и обстановочного условного рефлекса Исследования электрических характеристик командных нейронов оборонительного поведения ЛПа3, ППа3, ЛПа2 и ППа2 показали (рис.1), что мембранный потенциал (Vm) командных нейронов оборонительного поведения у контрольных улиток достигал значения -61.31 мВ (n=10), порог генерации потенциалов действия (Vt) был равен 19,71 мВ (n=10). У улиток после выработки УОР и ПУОР наблюдается достоверное снижение величины Vm в командных нейронах до -56.60.8 мВ (n=74) при УОР и -56.80.2 мВ (n=43) при ПУОР и Vt – до 16.40.3 мВ и 16.60.4 мВ (n=24) соответственно. Следует отметить, что не было выявлено достоверных отличий между электрическими характеристиками как после выработки условного оборонительного рефлекса на постукивание по раковине, так и на отвергание пищи.
Выработка обстановочного условного рефлекса достоверно не изменяет электрофизиологические параметры командных нейронов по сравнению с интактными улитками. Vm командных нейронов после выработки обстановочного рефлекса составлял -58,92,1 мВ., Vt составлял 18,10,7 мВ. Это результат показывает, что при формировании условного обстановочного рефлекса у виноградной улитки не происходит изменений электрических характеристик командных нейронов оборонительного поведения.
Vt, мВ -Vm, мВ 65 19. -61. * * * * ±1 18. ±1 -58.9 ±0. 16. ±2. -56.8 16. -56. ±0, ±0,2 ±0. ±0.8 Контроль УОР Контроль УОР ПУОР Обст. УР ПУОР Обст. УР Рис. 1. Значение потенциала покоя (Vm) и порогового потенциала (Vt) командных нейронов у интактных улиток (Контроль), улиток после выработки условного оборонительного рефлекса на постукивание по раковине (УОР), условного пищеотвергательного рефлекса (ПУОР) и обстановочного условного рефлекса (Обст. УР).
Сравнительное исследование длительности сохранения электрических характеристик командных нейронов при обучении и долговременной сенситизации. Важным звеном в переходе кратковременных пластических изменений в долговременные, являются биофизические и биохимические характеристики нервных клеток (Goelet P. et. all., 1986;
Балабан П.М., Захаров И.С., 1992;
Hawkins R.D. et. al., 1993). Ранее в нашей лаборатории было найдено, что при выработке УОР снижаются величины Vm и Vt, данные изменения ведут к повышению возбудимости нейронов (Гайнутдинов Х. Л. и др., 1998). Известно, что УОР на постукивание по раковине сохранялся более одного месяца на поведенческом уровне, это было показано в работах О.А.Максимовой (1980). В настоящей работе исследована динамика изменений электрических параметров командных нейронов оборонительного поведения в течение времени сохранения изменений поведенческих реакций.
Электрические характеристики нейронов регистрировали у животных на разных сроках: через 1, 7, 14, 21, 28, 40, 52 дня после выработки УОР. Нами найдено, что при выработке УОР снижаются величины Vm и Vt в командных нейронах. Дальнейшие измерения электрических характеристик нейронов показывают сохранение этих изменений в течение одного месяца, что говорит о длительном сохранении повышенной возбудимости этих клеток (рис. 2). Через месяц после формирования УОР различия в электрических характеристиках экспериментальных и контрольных животных становятся недостоверными.
Vt, мВ -Vm, мВ А Б # # # 61 # # 58 # * * * * * * * 57 * * * К К 14 28 1 7 7 1 14 28 Рис. Длительность сохранения изменений электрических характеристик 2.
командных нейронов оборонительного поведения после выработки условного оборонительного рефлекса на постукивание по раковине сразу после этого (1) и через 7, 14, 21, 28, 40 и 52 дня после формирования рефлекса. К – интактные улитки. Vm потенциал покоя (А), Vt - порог генерации потенциалов действия (Б).
Нами, как и ранее, на Aplysia (Frost et. al, 1985) и у Helix (Береговой и др., 1990), показано длительное сохранение ДС. В связи с этим представлялось интересным проследить взаимосвязь поведенческих модификаций с изменениями электрических характеристик командных нейронов оборонительного поведения в течение времени сохранения поведенческих изменений. Электрические характеристики командных нейронов регистрировали перед началом четырехдневной процедуры сенситизации, а также на 1-й, 4-й, 7-й, 10-й и 14-й дни, и через месяц после ее окончания. Выработка ДС привела к достоверному (р0,001) уменьшению значений Vm (с –60,90,3 до –54,10,4 мВ) и Vt (c 19,90, до 14,50,6 мВ). Дальнейшие измерения электрических характеристик нейронов показывают сохранение этих изменений в течение, по крайней мере, 14 дней после выработки ДС (рис. 3), что означает длительное сохранение повышенной возбудимости нейронов. Через месяц после формирования ДС Vm и Vt возвращаются на прежний уровень и отличия от контроля становятся недостоверны (Vm=-61,10,4;
Vt=19,30,3). Таким образом, длительное сохранение поведенческих феноменов при ДС сопровождается длительными изменениями электрических характеристик командных нейронов оборонительного рефлекса закрытия пневмостома.
Vt, мВ а -Vm, мВ б 13 n=9 n= n=16 n= n=10 n= n= 53 n=17 n=8 n=18 n=22 n=22 n=18 n= 10 a 1 4 a 4 1 10 t, дни t, дни Рис. 3. Динамика сохранения измененных при ДС мембранных параметров командных нейронов: А) потенциал покоя (Vm), Б) порог генерации потенциала действия (Vt). Ось ординат – потенциал, в мВ. Ось абсцисс - этапы эксперимента, где: a – параметры до начала выработки ДС;
1 (4, …) – дни, прошедшие с окончания процедуры ДС. Числа на столбцах – количество исследованных нейронов.
Сравнительное исследование длительности сохранения электрических характеристик командных нейронов после инъекций 5,6-ДОТ и 6-OH-DA.
Известно, что спустя 30-40 дней после применения 5,6- и 5,7-ДОТ ряд серотонинергических нейронов приобретают характерный оттенок, который связан с распадом вещества, образуемого из 5,6- 5,7-ДОТ (Балабан и др., 1985;
Jahan Parwar et al., 1987). Поэтому было проведено исследование сохранения воздействия блокады синтеза серотонина нейротоксином 5,6-ДОТ на параметры электрической активности командных нейронов оборонительного поведения, т.е. прослежено изменение электрических характеристик командных нейронов на разных сроках после введения нейротоксина. В наших экспериментах при введении нейротоксина 5,6-ДОТ наблюдается деполяризация мембраны командных нейронов ЛПа3, ППа3, ЛПа2 и ППа2 (рис. 4) с уровня -60.90.5 мВ (n=33) у улиток, которым был введен физиологический раствор, до -57.20.3 мВ (n=21) у улиток, получивших инъекцию нейротоксина в дозе 30 мг/кг веса. При этом у них снижается величина Vt с 19.90.4 мВ (n=17) до 16.80.5 мВ (n=18). Мы нашли, что найденные изменения электрических характеристик командных нейронов сохраняются в течение 3-х недель.
-Vm, мВ А Б Vt, мВ 56 55 54 ДОТ ДОТ ДОТ ДОТ ДОТ ДОТ ФР ДОТ ДОТ ДОТ ДОТ ДОТ ФР ДОТ 14 сразу 7 14 7 30 сразу Рис. 4. Длительность сохранения изменений электрических характеристик командных нейронов оборонительного поведения после инъекции 5,6-дигидрокситриптамина сразу после нее и через 7, 14, 21, 30 и 40 дней. ФР – улитки после инъекции физиологического раствора. А - потенциал покоя (Vm), Б - порог генерации потенциалов действия (Vt).
Применение 6-OH-DA, селективно разрушающего дофаминовые элементы, является благоприятным методом для исследования роли дофаминергической системы (Lent, Santamarina, 1984;
Kemenes et al., 1990;
Андрианов и др., 2000). В данной серии была прослежена динамика сохранения изменений электрических параметров нейронов вызванных введением животным нейротоксина 6-OH-DA.
Введение 6-OH-DA привело к достоверному (p0,05) уменьшению средних значений Vm (с –59,70,7 до –57,50,7 мВ) и Vt (с 19,40,4 до 18,10,2 мВ) (рис. 5).
Дальнейшие измерения электрических характеристик нейронов показали сохранение достоверного отличия этих параметров по отношению к их первоначальному уровню и по отношению к характеристикам нейронов животных, получивших инъекцию физиологического раствора, в течение 10 дней. Таким образом, сдвиг значений электрических параметров командных нейронов вызванный введением нейротоксина 6-OH-DA устойчиво сохраняется на протяжении 10 дней.
-Vm, мВ A Vt, мВ 63 Б 58 * * * * 54 n=10 n=15 n=10 n=16 n=8 n=17 n=9 n=21 n=12 14 n=9 n=14 n=10 n=9 n=5 n=17 n=8 n=15 n= ФР OHDA ФР OHDA ФР OHDA ФР OHDA OHDA ФР OHDA ФР OHDA ФР OHDA ФР OHDA OHDA 10 дней 20 дней 30 дней i a i a 20 дней 30 дней 10 дней Рис. 5. Динамика восстановления: мембранного потенциала (Vm) и порогового потенциала (Vt). ФР и OHDA –животные, соответственно, с введением физиологического раствора и 6-OH-DA. Ось абсцисс - а – параметры за день до инъекций, «i» – следующий день после инъекций, 10 (20, …) дней – время, прошедшее после инъекций. Ось ординат – потенциал, в мВ. * - достоверное отличие от ФР.
Электрофизиологическое исследование роли серотонинэргической системы в механизмах формирования условного рефлекса. К настоящему времени накопился большой экспериментальный материал, свидетельствующий о связи уровня серотонина в нервной системе со способностью к обучению (Castellucci et al., 1986;
Балабан, Захаров, 1992;
Clark, Kandel, 1993;
Levenson et al., 1999;
Balaban et al., 2004). Эти работы побудили нас к исследованию эффектов влияния предшественника серотонина 5-НТР и нейротоксина 5,7-ДОТ на УОР и на электрические характеристики, изучаемых нами, командных нейронов.
В продолжение наших предыдущих исследований мы провели эксперименты по совместным эффектам инъекций 5-HTP и 5,7-ДОТ на формирование УОР.
Инъекция 5-HTP в дозе 10 мкг/г веса за 1 час до ежедневной серии сочетаний УС с БС, приводили к убыстрению выработки УОР (за 260 сочетаний, вместо 330 после инъекции ФР). У 5,7-ДОТ-инъецированных улиток не происходило формирования УОР, а применение предотвращало эту блокаду (рис. В 5-HTP 6).
электрофизиологических экспериментах было показано, что 5-HTP не вызывал достоверного изменения Vm и Vt. В то же время, несмотря на наличие протекторного эффекта на поведенческом уровне, в ответ на инъекцию 5,7-ДОТ, на уровне электрических характеристик командных нейронов при УОР такого эффекта не наблюдалось.
B A positive responses, % positive responses, % 5,7-ДОТ+5HTP 80 5-НТР 5,7-ДОТ SS 0 100 200 300 0 50 100 150 200 250 300 n n Рис. Влияние инъекции 5,7-ДОТ и 5-НТР на выработку условного 6.
оборонительного рефлекса. Ось абсцисс – количество сочетаний условных и безусловных стимулов. Ось ординат – количество положительных ответов в процентах в каждом десятке сочетаний условных и безусловных стимулов.
Исследование роли вторичных посредников при ассоциативном обучении Установлено, что основные эффекты серотонина на клетки проявляются через их воздействие на систему вторичных клеточных посредников (Kandel, Schwartz, 1982;
Eskin et al., 1989;
Sun, Schacher, 1996;
Yanow et al., 1998). Поэтому целью наших экспериментов явилось изучение роли аденилатциклазной системы и кальмодулина (КМ) в функционировании командных нейронов виноградной улитки после выработки условного оборонительного рефлекса.
Нами при аппликации водорастворимого аналога 8-Br-цАМФ и активатора аденилатциклазы форсколина был найден деполяризационный сдвиг мембранного потенциала исследуемых нейронов, этот эффект был одинаковым как у конторольных, так и у обученных улиток. Изменение в количестве или активности фосфодиэстераз (PDE) в рамках эффекторов клеток, серьезно влияет на способность к ответу на эндогенные и экзогенные стимулы. Выделяют 2 вида регуляции активности PDE: 1) кратковременный – включает активацию вторичных мессенджеров, и как следствие аллостетическую модификацию энзимной активности PDE;
2) долговременный – происходит через увеличение синтеза энзима (Torphy T.J., 1998).
Нами было показано, что неспецифический ингибитор PDE – IBMX вызывал деполяризационный сдвиг Vm у обученных улиток в противоположность интактным улиткам (рис. 7). Этот эффект усиливался хинином. Мы предполагаем, что у обученных улиток происходит долговременное увеличение активности PDE, по сравнению с интактными животными, и блокирование их действия приводит к изменению установившегося баланса вторичных посредников.
Аппликация блокатора КМ ТФП приводила к достоверному гиперполяризационному сдвигу Vm в контрольной группе. В группе обученных улиток ТФП не изменил параметры электрической активности командных нейронов оборонительного поведения. Хинин на фоне действия ТФП привел к достоверному снижению мембранного и порогового потенциалов в контроле, не изменив эти параметры в группе УОР (рис. 8). Эти результаты указывают на сохранение изменений в кальциевой регуляторной системе после выработки УОР.
Контроль -Vm, мВ УОР -Vm,мВ 58. ±1 55.4 * 54.3 * 55. 50 ±2,5 ±2.9 50 ±1. ±3.6 49. 49. * 45 ±2. ±1. 44. ±2. 40 ФР Хинин IBMX IBMX ФР Хинин Vp Vp Рис. 7. Значение потенциала покоя (Vm) и порогового потенциала (Vt) командных нейронов у контрольных и обученных (УОР) улиток до смены раствора (ФР), при аппликации IBMX и последующей аппликации хинина или верапомила (Vp). * достоверные отличия от значений в ФР (Р0,05).
Контроль УОР -Vm, мВ -Vm,мВ 65 * 60 62. ±1.1 # 58. 55 ±0.9 56 55. 55. ±2.8 ±1. ±1.2 53. ±3. 50 ФР Хинин ТФП ТФП ФР Хинин Рис. 8. Значение потенциала покоя (Vm) командных нейронов у контрольных и обученных (УОР) улиток до смены раствора (ФР), при аппликации ТФП и последующей аппликации хинина. *- достоверные отличия от значений в ФР (Р0,05). #- достоверные отличия от значений после ТФП (Р0,05).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ Внимание многих исследователей в последнее время привлекают нейронные процессы, определяющие длительные пластические модификации поведения. Это определяется, во-первых, ключевой ролью нейрона в управлении интеграцией сложных передающих сообщений, т.к. проблема локализации нейронального субстрата обучения и памяти является фундаментальной во всех работах, посвященных основам памяти и обучения (Соколов Е.Н., 1981;
Kandel E.R., Schwartz J.H., 1982;
Woody C.D., 1986;
Byrne J., 1987;
Benjamin P.R. et. al., 2000;
Balaban P.M., 2002b;
Гайнутдинов Х.Л. и др., 2002). Во-вторых, клеточные механизмы обучения и памяти определяются биофизическими и биохимическими характеристиками нервных клеток, которые дают важное звено в переходе кратковременных пластических изменений в долговременные (Klein M. et al., 1980;
Byrne J., 1987;
Nelson T.J., Alkon D.L., 1989;
Hawkins R.D., et al., 1993;
2006;
Bailey C.H. et al., 1996;
Sugita S. et al., 1997;
Matzel L.D. et al., 1998;
Balaban P.М. et al., 2004;
Nikitin E.S. et al., 2006;
Соколов Е.Н., Незлина Н.И., 2007).
Полученные в данной работе результаты свидетельствуют о большой значимости таких характеристик, как мембранный потенциал покоя и порог генерации потенциалов действия при таких пластических модификациях нервной системы, как условный оборонительный рефлекс, долговременная сенситизация, эффекты инъекций 5,7-дигидрокситриптамина и 6-гидроксидофамина. Найденные эффекты уменьшения исходного потенциала покоя при неизменном уровне критической деполяризации, сохраняются в течение месяца после выработки условного оборонительного рефлекса и в течение 2-х недель после долговременной сенситизации.
Полученные результаты дают доказательства прямой взаимосвязи между электрической активностью командных нейронов оборонительного поведения и пластическими модификациями поведения, что свидетельствует о сложной динамике изменений электрических характеристик командных нейронов при обучении. Поскольку имеется возможность изменения электрических характеристик идентифицированных нейронов, участвующих в формировании оборонительного поведения, нельзя полностью исключать влияние постсинаптических факторов в проявлении эффектов значительного снижения содержания серотонина и дофамина в нервной системе при помощи нейротоксинов 5,6-, 5,7-ДОТ и 6-OH-DA.
Изучение функциональной роли серотонина показало его важную роль в деятельности центральной нервной системы, а также в механизмах обучения и памяти (Сахаров Д.А., Каботянский Е.А., 1986;
Балабан П.М., Захаров И.С., 1992;
Levenson et al., 1999;
Захаров И.С., 2001;
Burrell B.D., Sahley C.L., 2005;
Gillette R., 2006). Посредством аппликаций серотонина в омывающий центральную нервную систему раствор удается воспроизвести электрофизиологические корреляты пластичности у виноградной улитки (Малышев Ю.А. и др., 1997;
Шевелкин А.В. и др., 1997) и у гермиссенды (Farley J., Wu P., 1989), с помощью серотонина возможна регуляция пластических свойств электровозбудимой мембраны нейрона (Дьяконова Т.Л., 1985;
Балабан П.М., Захаров И.С., 1992). Было найдено нарушение нейротоксином 5,6- и 5,7-ДОТ формирования условного оборонительного рефлекса и длительной сенситизации оборонительного поведения (Балабан П.М. и др., 1992;
Balaban P.M., Bravarenko N., 1993).
Нами найдено, что ежедневное введение предшественника серотонина 5-НТР в дозе 10 мкг/г веса перед началом сеанса обучения ускоряет процесс обучения.
Введение 5-НТР улиткам, которым была произведена предварительная инъекция 5,7-дигидрокситриптамина снимает блокаду выработки УОР этим веществом. Если на поведенческом уровне 5-HTP препятствовал действию 5,7-ДОТ, то на уровне электрических характеристик командных нейронов подобный эффект 5-HTP отсутствовал.
Согласно схеме долговременных пластических эффектов, предложенной для сенсорных нейронов аплизии, вторичные посредники, такие как ионы кальция или цАМФ, вовлечены в реализацию не только кратковременных, но и долговременных эффектов обучения (Goelet P. et al., 1986;
Bailey C.H. et al., 1996;
Yanow S.K. et al., 1998;
Hawkins R.D., et al., 2006). Существенную роль в работе аденилатциклазной системы играют фосфодиэстеразы (PDE), ограничивающие действие циклических нуклеотидов. Еще в начале 70-х годов показано, что обработка различных клеток и тканей агентами, увеличивающими содержание цАМФ, стимулируют увеличение активности PDE. Изменение в количестве или активности PDE в рамках эффекторов клеток, серьезно влияет на способность к ответу на эндогенные и экзогенные стимулы. Выделяют 2 вида регуляции активности PDE: 1) кратковременный – включает активацию вторичных мессенджеров, и как следствие аллостетическую модификацию энзимной активности PDE;
2) долговременный – происходит через увеличение синтеза энзима (Torphy T.J., 1998).
Аппликация веществ увеличивающих концентрацию цАМФ в нейронах не выявляет различий в чувствительности к цАМФ у контрольных и обученных улиток. Неспецифический ингибитор фосфодиэстеразы – вызывал IBMX деполяризационный сдвиг Vm только у обученных улиток. Мы предполагаем, что у обученных улиток происходит долговременное увеличение активности фосфодиэстераз, по сравнению с интактными животными.
ВЫВОДЫ 1. Показано, что выработка условного оборонительного рефлекса и формирование долговременной сенситизации у виноградной улитки сопровождаются снижением величин мембранного потенциала и порога генерации потенциалов действия командных нейронов. Пониженные при обучении и сенситизации значения электрических характеристик сохраняются в течение месяца после выработки условного оборонительного рефлекса и в течение 2-х недель после долговременной сенситизации.
2. Найдено, что инъекция 5,7-ДОТ, истощающего серотонин, вызывает снижение мембранного и порогового потенциалов командных нейронов виноградной улитки. Найдено, что эффектом воздействия 6-гидроксидофамина, истощающего дофамин, является деполяризационный сдвиг мембранного потенциала и снижение порога генерации потенциала действия. Сдвиг значений электрических параметров командных нейронов, вызванный введением 5,7-ДОТ и 6-гидроксидофамина сохраняется в течение не менее 2-х недель.
3. Показано, что при формировании условного обстановочного рефлекса у виноградной улитки, в котором наблюдалось значительное увеличение амплитуды оборонительной реакции улитки на стандартное тактильное раздражение только в той обстановке, в которой наносились электрошоки, не происходит изменений электрических характеристик командных нейронов оборонительного поведения.
4. Ежедневное введение предшественника серотонина 5-НТР в дозе 10 мкг/г веса перед началом сеанса обучения ускоряет процесс обучения.
5. Ежедневное введение предшественника серотонина 5-НТР в дозе 10 мкг/г веса перед началом сеанса обучения улиткам, которым была произведена предварительная инъекция 5,7-ДОТ снимает эффект этого вещества. Если на поведенческом уровне 5-HTP препятствует действию 5,7-ДОТ, то на уровне электрических характеристик командных нейронов подобный эффект 5-HTP отсутствует.
6. Показано, что аппликация водорастворимого аналога цАМФ - 8Br-cAMP и форсколина вызывает деполяризацию командных нейронов, как у интактных, так и у обученных улиток. Остальные электрические характеристики командных нейронов не изменяются. Применение хинина на фоне 8Br-cAMP и форсколина увеличивает деполяризацию мембранного потенциала, как у интактных, так и у обученных улиток.
7. Аппликация ингибитора фосфодиэстеразы IBMX, увеличивающего уровень цАМФ в клетке, снижает мембранный потенциал покоя командных нейронов в группе обученных животных, но не в группе интактных улиток.
8. Аппликация блокатора кальмодулина трифлуопиразина приводит к увеличению мембранного потенциала у интактных улиток, в группе обученных животных потенциал покоя не изменяется.
Список публикаций Тагировой (Назыровой) Розы Ришатовны по материалам диссертации. Статьи:
1. Гайнутдинова Т.Х. Исследование длительности сохранения электрических характеристик командных нейронов при выработке долговременной сенситизации у виноградной улитки / Т.Х. Гайнутдинова, В.В. Андрианов, Р.Р. Назырова., Х.Л.
Гайнутдинов // Журн. высш. нервн. деят. - 1999. - Т. 49, N.6. - С. 1063-1065.
2. Gainutdinova T. Kh. The duration of persistence of the electrical characteristics of command neurons during acquisition of long-term sensitization in the common snail / T.Kh.
Gainutdinova, V.V. Andrianov, R.R. Nazyrova, Kh.L. Gainutdinov // Neurosci. Behav.
Physiol. – 2001. – Т. 31, N.1. – С. 69-70.
3. Gainutdinova T.H. Anisomycine-induced inhibition of memory to environmental conditioning in snail during reactivation / T.H. Gainutdinova, R.R. Tagirova, A.I. Ismailova, L.N. Muranova, Kh.L. Gainutdinov, P.M. Balaban // Acta Neurobiologiae Experimentalis. 2003. - V. 63, N. 3. - P. 275.
4. Гайнутдинова Т.Х. Длительность сохранения изменений электрических характеристик командных нейронов при выработке условного оборонительного рефлекса у улитки / Т.Х. Гайнутдинова, В.В. Андрианов, Х.Л. Гайнутдинов, Д.И.
Мухамедшина, Р.Р. Тагирова // Журн. высш. нервн. деят. – 2003. - Т. 53, N. 3. - С. 388 391.
5. Андрианов В.В. Влияние 6-гидроксидофамина на электрические характеристики нейронов улитки при долговременной сенситизации / В.В. Андрианов, Р.Р. Тагирова, Х.Л. Гайнутдинов, Т.Х. Гайнутдинова, А.И. Голубев, Л.Н. Муранова // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. – 2003. - Т. 89, N. 9. - С. 1067-1076.
6. Gainutdinova T.H. Duration of Retention of Changes in the Electrical Characteristics of Command Neurons During Acquisition of a Conditioned Defensive Reflex in Snails / T.Kh.
Gainutdinova, V.V. Andrianov, Kh.L. Gainutdinov, D. I. Mukhamedshina, R. R. Tagirova // Neurosci. and behavioral physiol. – 2004. - V. 34, N. 7. P. 731-733.
7. Гайнутдинова Т.Х. Зависимая от белкового синтеза реактивация обстановочного условного рефлекса у виноградной улитки / Т.Х. Гайнутдинова, Р.Р. Тагирова, А.И.
Исмаилова, Л.Н. Муранова, Х.Л. Гайнутдинов, П.М. Балабан // Журн. высш. нервн.
деят. – 2004. - Т. 54, N. 6. - С. 795-800.
8. Andrianov V.V. The effects of 6-hydroxydopamine on electrical characteristics of snail neurons in long-term sensitization / V.V. Andrianov, R.R. Tagirova, Kh.L. Gainutdinov, T.Kh. Gainutdinova, A.I. Golubev, L.N. Muranova.// Neurosci. and behavioral physiol. – 2005. V. 35, N. 3. - P. 305-311.
9. Gainutdinova T.H. Reconsolidation of a context long-term memory in the terrestrial snail requires protein synthesis / T.H. Gainutdinova, R.R. Tagirova, A.I. Ismailova, L.N.
Muranova, E.I. Samarova, Kh.L. Gainutdinov, P.M. Balaban // Learning and Memory. – 2005. - V. 12, N. 6. - P. 620-625.
10. Gainutdinova T.Kh. Protein synthesis-dependent reactivation of a contextual conditioned reflex in the common snail / T.H. Gainutdinova, R.R. Tagirova, A.I. Ismailova, L.N.
Muranova, Kh.L. Gainutdinov, P.M. Balaban // Neurosci. and behavioral physiol. – 2006. V.
36, N. 2. - P. 203-207.
Тезисы докладов:
1. Назырова Р.Р. Исследование длительности сохранения электрических характеристик командных нейронов при выработке долговременной сенситизации у виноградной улитки / Р.Р. Назырова, Т.Х. Гайнутдинова, В.В. Андрианов // Актуальные проблемы нейробиологии. - Тез. докл. 5 Всероссийской школы молодых ученых. Казань - 1998.
- С. 52.
2. Гайнутдинова Т.Х. Корреляция долговременной сенситизации оборонительного рефлекса с длительным сохранением изменений электрических характеристик командных нейронов / Т.Х. Гайнутдинова, В.В. Андрианов, Р.Р. Назырова, Х.Л.
Гайнутдинов // Тез. докл. II Съезда биофизиков России. - 1999. - Москва. Т.1. - С. 232.
3. Andrianov V.V. Long-lasting changes of electrical characteristics of command neurons after long-term sensitization of intact and serotonin-depleted snails / V.V. Andrianov, Kh.L.
Gainutdinov, T.H. Gainutdinova, R.R. Nazyrova, E.A. Tarasova // Abstracts of the Conference “Conceptual advances in the studies of associative learning and memory”. – Moscow. – 1999. - P. 15.
4. Назырова Р.Р. Влияние истощения дофамина у виноградной улитки на параметры электрической активности командных нейронов / Р.Р. Назырова, В.В. Андрианов, Т.Х. Гайнутдинова, А.И. Голубев, Х.Л. Гайнутдинов // Тезисы V Всероссийского симпозиума “Растущий организм: адаптация к физической и умственной нагрузке”. – Казань. - 2000. - С. 101-102.
5. Назырова Р. Р., Андрианов В. В., Гайнутдинова Т. Х. Влияние 6-гидроксидофамина на поведение и электрические характеристики командных нейронов при долговременной сенситизации у виноградной улитки / Р.Р. Назырова, В.В. Андрианов, Т.Х.
Гайнутдинова // Тезисы 7 Всероссийской школы молодых ученых. Актуальные проблемы нейробиологии. – Казань. - 2000. - С. 101-102.
6. Nazyrova R.R. Investigation of membrane mechanisms of aversion learning in snail / R.R.
Nazyrova, T.H. Gainutdinova, V.V. Andrianov // Abstracts of the 6-th East European Conference of the International Society for Invertebrate Neurobiology. Moscow-Pushchino.
– 2000. - P. 82.
7. Nazyrova R. Dynamics of defensive reactions and changes of the electrical characteristics after conditioning of defensive reflex on food aversion in HELIX LUCORUM / R. Nazyrova, V.
Andrianov, Kh. Gainutdinov, D. Mukhamedshina. // Abstracts of the Central European Conference of Neurobiology. - Krakw, Poland. - 2001. - P. 161.
8. Назырова Р.Р. Эффекты влияния нейротоксина 6-гидроксидофамина на формирование долговременной сенситизации у виноградной улитки / Р.Р. Назырова, В.В.
Андрианов, А.И. Голубев // Тезисы XVIII съезда Физиологического общества им.
И.П.Павлова. – Казань. - 2001. М.:ГЭОТАР-МЕД. - С. 169.
Назырова Р.Р. Динамика оборонительных реакций и электрических характеристик 9.
командных нейронов при выработке условного рефлекса на отвергание пищи у улитки / Р.Р. Назырова, Т.Х. Гайнутдинова // Тезисы 8 Всероссийской школы молодых ученых. Актуальные проблемы нейробиологии. – Казань. - 2001. - С. 47.
Тагирова Р.Р. Исследование природы формирования условного рефлекса на 10.
отвергание пищи у виноградной улитки / Р.Р. Тагирова, Т.Х. Гайнутдинова, А.И.
Исмаилова, Х.Л. Гайнутдинов // Тезисы VI Всероссийского симпозиума “Растущий организм: адаптация к физической и умственной нагрузке”. – Казань. - 2002. - С. 159 160.
Гайнутдинов Х.Л. Исследование роли серотонина в формировании долговременной 11.
сенситизации у виноградной улитки: изменения электрических параметров командных нейронов под влиянием 5,6-дигидрокситриптамина / Х.Л. Гайнутдинов, В.В. Андрианов, Т.Х. Гайнутдинова, Д.И. Мухамедшина, Р.Р. Тагирова // Тезисы IV съезда физиологов Сибири. – Новосибирск. - 2002. - С. 52.
Андрианов В.В. Эффекты влияния 6-гидроксидофамина на электрические 12.
характеристики командных нейронов виноградной улитки / В.В. Андрианов, Р.Р.
Тагирова // Тезисы 7 Пущинской школы-конференции молодых ученых Биология – наука XXI века. - Пущино. - 2003. - С. 7-8.
13. Andrianov V. Electrophysiological investigation of influence of 6-hydroxydopamine injection on long-term sensitization in snail / V. Andrianov, R. Tagirova, Kh. Gainutdinov // Abstracts of the Sixth IBRO World Congress of Neuroscience. - Prague, Czech Republic. - 2003. – P. 3302.
Гайнутдинов Х.Л. Исследование роли ионов Са и аденилатциклазной системы 14.
командных нейронов в ассоциативном обучении виноградной улитки / Х.Л.
Гайнутдинов, В.В. Андрианов, Т.Х. Гайнутдинова, Р.Р. Тагирова // Росс. физиол.
журн. им. И.М.Сеченова. – 2004. - Т.90, № 8, Ч.1. XIX съезд физиологического общества, Екатеринбург. - С. 203.
Тагирова Р.Р. Эффекты 8-Br-цAMФ и хинина на электрические характеристики 15.
командных нейронов виноградной улитки / Р.Р. Тагирова, Т.Х. Гайнутдинова // Материалы VII Всероссийского симпозиума “Растущий организм”. - Набережные Челны. - 2004. - Ч.2. - С. 70-71.
Тагирова Р.Р. Исследование роли серотонинергической и аденилатциклазной систем в 16.
ассоциативном обучении у виноградной улитки / Р.Р. Тагирова, Т.Х. Гайнутдинова, И.Б. Канакотина // Тезисы Всероссийской конференции «Нейрохимия:
Фундаментальные и прикладные аспекты». – Москва. – 2005. - С. 66.
Тагирова Р.Р. Влияние метаболического предшественника серотонина 5 17.
окситриптофана и нейротоксина 5,7-дигидрокситриптамина на выработку условного оборонительного рефлекса у виноградной улитки / Р.Р. Тагирова, И.Б. Канакотина // Тезисы 9 Пущинской школы-конференции молодых ученых Биология – наука XXI века. - Пущино. - 2005. - С. 171-172.
Тагирова Р.Р. Эффекты 8-Br-cAMP, IBMX и хинина на электрические характеристики 18.
командных нейронов при выработке условного рефлекса / Р.Р. Тагирова, Т.Х.
Гайнутдинова // Тезисы Всероссийской конференции молодых исследователей.
Вестник молодых ученых. Физиология и медицина. - Санкт-Петербург. - 2005. - С.
117.
-Vm, мВ -61. * * 19. Гайнутдинов Х.Л. Роль ионов Са и аденилатциклазной системы командных нейронов ±1 -58. ±2. -56. в ±0, процессах сохранения условного оборонительного рефлекса у виноградной улитки / -56. ±0. Х.Л. Гайнутдинов, Т.Х. Гайнутдинова, Д.И. Силантьева, Р.Р. Тагирова // Научные Контроль УОР ПУОР Обст. УР труды I съезда физиологов СНГ. - Сочи-Дагомыс. - 2005. - № 96. - С. 38-39.
20. Tagirova R.R. Investigation of adenylatcyclase system of snail command neurons EMBED Origin50.Gra participations in associative learning: effects of forskoline, IBMX and 8-Br-cAMP / R.R.
ph Контроль Tagirova, Kh.L. Gainutdinov // Тезисы Международной конференции «Простые -Vm, мВ нервные системы 2006». - Казань. - 2006. – С. 86.
21. Тагирова Р.Р. Исследование механизмов долговременного сохранения эффектов обучения и влияния нейротоксинов к серотонину и дофамину / Р.Р. Тагирова, В.В.
58. Андрианов, Х.Л. Гайнутдинов // Тезисы VIII Всероссийского симпозиума “Растущий ±1 55.4 54. 50 ±2, 53 организм: адаптация к физической и умственной нагрузке”. – Казань. - 2006. - С. 103 ±2. ±3. 104.
22. Силантьева Д.И. Исследование взаимодействия ионов Са и аденилатциклазной системы при ассоциативном обучении у виноградной улитки / Д.И. Силантьева, В.В.
ФР IBMX Хинин Vp Андрианов, Т.Х. Гайнутдинова, Р.Р. Тагирова, Х.Л. Гайнутдинов // Тезисы Всероссийской конференции «Нейрохимические метаболиты и энзимологические основы деятельности ЦНС» - Пенза. – 2006. – С. 64-65.
23. Тагирова Р.Р. Эффекты 5-окситриптофана и нейротоксина 5,7-дигидрокситриптамина при ассоциативном обучении у виноградной улитки / Р.Р. Тагирова, И.Б. Канакотина, Х.Л. Гайнутдинов // Тезисы Всероссийской конференции «Нейрохимические метаболиты и энзимологические основы деятельности ЦНС» - Пенза. – 2006. – С. 111 112.
24. Канакотина И.Б. Роль серотонинергической системы в ассоциативном обучении у виноградной улитки / И.Б. Канакотина, Р.Р. Тагирова // Тезисы 10 Всероссийской конференции молодых исследователей. Человек и его здоровье. - Санкт-Петербург. 2007. - С. 225-226.
25. Гайнутдинов Х.Л. Роль внутриклеточных ионов кальция и аденилатциклазной системы в механизмах обучения и долговременной сенситизации у виноградной улитки / Х.Л. Гайнутдинов, В.В. Андрианов, Д.И. Силантьева, Р.Р. Тагирова // Тезисы XX съезда физиологического общества. - Москва. - 2007. - С. 27.