Молекулярно-генетическое исследование эссенциальной гипертензии: полиморфизм и транскрипционная активность генов воспалительного ответа
На правах рукописи
МАТВЕЕВА ВАЛЕРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭССЕНЦИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ:
ПОЛИМОРФИЗМ И ТРАНСКРИПЦИОННАЯ АКТИВНОСТЬ ГЕНОВ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА 03.02.07 - генетика
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Уфа – 2012 2
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук (ИБГ УНЦ РАН)
Научный консультант: Мустафина Ольга Евгеньевна доктор биологических наук, профессор Научный консультант: Карамова Ирина Марсиловна доктор медицинских наук, профессор
Официальные оппоненты: Хидиятова Ирина Михайловна доктор биологических наук, профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной генетики человека ИБГ УНЦ РАН доктор медицинских наук, профессор, Петрин Александр Николаевич заведующий лабораторией медицинских генетических технологий ГБОУ ВПО Московский государственный медико стоматологический университет МЗ
Ведущая организация: ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Защита диссертации состоится «_» «» 2012 г. в «_» часов на заседании Объединенного диссертационного совета ДМ 002.113.01 при ИБГ УНЦ РАН по адресу: 450054, Уфа, просп. Октября, 71. ИБГ УНЦ РАН
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уфимского научного центра РАН (Уфа, просп. Октября, 71), с авторефератом – на сайте ВАК РФ и на сайте ИБГ УНЦ РАН: www.ibg.anrb.ru/dissov.html e-mail: [email protected]
Автореферат разослан “_”_ 2012г.
Ученый секретарь диссертационного совета С. М. Бикбулатова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Эссенциальная гипертензия (ЭГ) – широко распространенное хронически протекающее многофакторное полигенное заболевание с длительным латентным периодом развития и тяжелыми клиническими осложнениями. Основным проявлением ЭГ является синдром артериальной гипертонии – стойкого повышения артериального давления (АД) от 140/90 мм.рт.ст. и выше. Как этиологический фактор коронарных, цереброваскулярных и реноваскулярных заболеваний, ЭГ представляет собой одну из основных причин заболеваемости, инвалидизации и смертности населения. ЭГ признана пандемией в большинстве стран мира, в том числе и в России, где распространенность этого заболевания составляет 39.2% среди мужчин и 41.1% среди женщин. [Гогин, 2004].
Несмотря на длительную историю изучения ЭГ, обширные клинические и клинико-физиологические изыскания, этиология этого заболевания во многом остается неясной. Одним из приоритетных направлений дальнейшего поиска является исследование молекулярно-генетических основ ЭГ. Опубликовано значительное число работ, посвященных этой проблеме. Поиск генов ЭГ основывается на разработанных для многофакторных признаков и заболеваний стратегиях, которые включают в себя анализ ассоциаций с заболеванием полиморфных локусов генов кандидатов, исследования на модельных объектах, изучение редких моногенных форм заболевания, полногеномные ассоциативные исследования (GWAS - Genome wide association study), мета-анализ по совокупности результатов многих независимо проведенных исследований [Hunt, 2010]. Не утратил своей актуальности и подход, основанный на выборе генов-кандидатов в соответствие с существующими концепциями о физиологических механизмах контроля АД, этиологии и патофизиологии ЭГ.
Не менее 150 генов можно предположительно отнести к генам-кандидатам ЭГ [http://cmbi.bjmu.edu.cn/genome/candidates/candidates.html]. Прежде всего, к ним причисляют гены, кодирующие белки ренин-ангиотензиновой и калликреин кининовой систем, белки, обеспечивающие поддержание сосудистого тонуса и структуры сосудов, белки-рецепторы адренергической системы, ферменты метаболизма стероидных гормонов, белки, контролирующие водно-солевой гомеостаз. Итоги ассоциативных исследований противоречивы. Было обнаружено, что характер ассоциаций имеет возрастные, гендерные, этнические, расовые особенности. По всей видимости, большое число аллелей с низкой пенетрантностью вовлечено в предрасположенность к ЭГ. Факторы окружающей среды и образа жизни могут влиять на пенетрантность генетических факторов риска ЭГ.
В связи с результатами экспериментальных исследований и клинических наблюдений все большее внимание обращается на потенциальную роль системного воспалительного ответа в развитии ЭГ [Hermann, Ruschitzka, 2009]. Также и по итогам исследований дифференциальной экспрессии генов в клетках периферической крови больных ЭГ с использованием ДНК-чипов обоснована в общих чертах роль воспаления и генов воспалительного ответа в развитии заболевания [Korkor, 2011].
Поэтому гены воспалительного ответа можно отнести к потенциальным генам кандидатам ЭГ. Анализ полиморфизма и экспрессии генов воспалительного ответа при ЭГ представляет значительный интерес, что и определило цель данного исследования.
Цель работы – оценить значимость полиморфизма ряда генов воспалительного ответа в развитии эссенциальной гипертензии.
Были поставлены следующие задачи:
1. Провести анализ ассоциаций с эссенциальной гипертензией полиморфных локусов генов воспалительного ответа:
CCL2 (-2518AG, -5796 AT, 5357 СT, 704(14)I/D), - CD40LG (3005CT), - CXCR3 (-3328AC), - CXCR4 (1627CT), - SELL (L193F), - SELE (3832TC), - SELР (S331N);
- TNFRSF1A (36GA );
- NFKB1 (28081564 TA);
СASP1 (–877СТ);
- FAS (670 AG).
2. Провести анализ межгенных взаимодействий аллельных вариантов анализируемых генов-кандидатов эссенциальной гипертензии.
3. Провести сравнительный анализ уровня транскрипционной активности генов хемокинов CCL2 и CD40LG в лейкоцитах периферической крови в контрольной группе и группе больных эссенциальной гипертензией.
4. Провести анализ ассоциаций полиморфных локусов генов CCL2 и CD40LG с уровнем транскрипционной активности этих генов в лейкоцитах периферической крови.
5. Провести анализ ассоциаций полиморфных локусов генов CCL2 и CD40LG с клинико-лабораторными показателями у больных эссенциальной гипертензией.
Научная новизна исследования. Впервые на однородной по этнической и гендерной принадлежности выборке татарской этнической (мужчины принадлежности, проживающие в Республике Башкортостан) проведено комплексное исследование молекулярно-генетических основ ЭГ: анализ ассоциаций заболевания с 14-ю полиморфными локусами генов воспалительного ответа (CCL2, CD40LG, CXCR3, CXCR4, SELL, SELE, SELP, TNFRSF1A, NFKB1, СASP1 и FAS), исследование уровня транскрипционной активности (ТА) генов хемокинов CCL2 и CD40LG у больных ЭГ, анализ ассоциаций полиморфных локусов генов CCL2 и CD40LG с уровнем ТА этих генов и некоторыми клинико-лабораторными показателями при ЭГ.
Впервые показана значимость полиморфизма генов CCL2 и TNFRSF1A как факторов риска развития ЭГ. Установлено, что эффекты взаимодействий аллельных вариантов генов CCL2 (5357CT), SELE (L193F) и гена CXCR3 (-3328AC) вносят вклад в формирование молекулярно-генетических основ ЭГ. У больных ЭГ повышена ТА гена CD40LG. Впервые показано, что полиморфизм генов CD40LG и CCL2 имеет значение в формировании эндогенных факторов риска ЭГ: полиморфный локус 3005CT (rs715762) гена CD40LG ассоциирован с показателем функциональной активности системы свертывания крови активированным временем рекальцификации плазмы, полиморфный локус 704(14)I/D (rs3917887) гена CCL ассоциирован с ТА этого гена в лейкоцитах периферической крови у больных ЭГ, полиморфный локус 5357CT (rs991804) гена CCL2 ассоциирован с количеством тромбоцитов в крови больных ЭГ.
Научно-практическая значимость работы. Результаты проведенного исследования вносят вклад в развитие представлений о молекулярно-генетических основах ЭГ. Они могут послужить основой для последующих исследований по генетике ЭГ, для развития концепции о роли системного воспалительного ответа в этиопатогенезе заболевания. Результаты исследования также могут быть использованы при чтении спецкурсов по генетике на факультетах биологического и медицинского профиля в университетах и других ВУЗах.
Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на российских и международных конференциях: XII Всероссийской медико биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2009), 3-й и 4-й Международной научно практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины» (Ростов-на-Дону, 2009, 2011), Всероссийской конференции, посвященной 10-летию кафедры генетики БГПУ им. М.Акмуллы, приуроченной к ежегодным Вавиловским чтениям «Инновационные и молекулярно-генетические исследования живых систем» (Уфа, 2009), Всероссийской заочной научно-практической конференции «Актуальные вопросы физиологии, психофизиологии и психологии» (Уфа, 2009), Российской конференции с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины – возможное и реальное» (Санкт-Петербург, 2010), Научно-практической конференции с международным участием «Клиническая иммунология, иммуногенетика – междисциплинарные проблемы» (Ташкент, 2010), VI съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010), XVIII Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2011» (Москва, 2011), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакторной патологии» (Курск, 2011), Европейской конференции по генетике человека (European Human Genetics Conference, Amsterdam, 2011), 21-м Европейском конгрессе по гипертензии (21-st European Meeting on Hypertension, Milan, 2011).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 статьи в журналах из перечня ВАК и международной базы цитирования (PubMed). В виде тезисов и статей в материалах международных и российских конференций опубликовано 14 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 300 ссылок ( отечественных и 283 зарубежных работ). Диссертация иллюстрирована 16 рисунками, 40 таблицами и дополнена приложением (30 стр., 27 таблиц).
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы исследования. Выборка больных была сформирована из 217 не состоящих в родстве пациентов (мужчины в возрасте 22–60 лет, средний возраст 40.96±6.26 лет, татары по этнической принадлежности), проходивших обследование в ГУЗ «Республиканский кардиологический диспансер» (РКД, г. Уфа). Всем пациентам был поставлен клинический диагноз ЭГ. Диагноз ЭГ устанавливался по результатам клинико-инструментального и клинико-лабораторного обследования квалифицированными врачами отделения артериальной гипертензии РКД в соответствии с рекомендациями ВОЗ и экспертов Российского медицинского общества по артериальной гипертонии и Всероссийского научного общества кардиологов (2007). В исследование не включались больные с выраженными локальными проявлениями атеросклероза, сахарным диабетом, выраженными сопутствующими заболеваниями почек, легких, желудочно-кишечного тракта, печени, больные с заболеваниями крови и нарушением обмена веществ. В группу сравнения были отобраны 243 относительно здоровых индивида (мужчины в возрасте 25–60 лет, средний возраст 34.6±7.05 лет, татары по этнической принадлежности), не состоящих в родстве, без признаков сердечно-сосудистых и других хронических заболеваний в медицинском анамнезе. Все участники дали информированное добровольное согласие на проведение биомедицинских исследований.
Методы исследования. ДНК выделяли из 10 мл периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции [Mathew, 1984]. Генотипирование полиморфных локусов исследуемых генов проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) и рестрикционным анализом с последующим электрофорезом фрагментов ДНК в 7% полиакриламидном или 1-2% агарозном геле, окрашиванием гелей раствором этидия бромида (1%) и визуализацией с помощью видеогель-документирующей системы («Vilber Lourmat»). Подбор праймеров и рестриктаз осуществляли с помощью базы данных NCBI (http://www.ncbi.nlm.gov/SNP) и пакета программ DNASTAR V.5.0. Выделение тотальной РНК из цельной венозной крови (6 мл) производили фиколльно тризольным методом. Очистку РНК от примесей геномной ДНК осуществляли с помощью коммерческого набора реактивов фирмы «Fermentas» и соответствующего протокола. Выделенную РНК обрабатывали ДНКазой I, свободной от РНКазы (“Sigma”). Наличие в образце РНК примесей ДНК определяли с помощью ПЦР с праймерами к гену домашнего хозяйства GAPDH, а в качестве матрицы использовали препарат РНК. Количество матрицы РНК (в нг/мкл) оценивали на спектрофотометре «NanoDrop 1000» («Technologies»). Качество препаратов РНК оценивали по соотношению оптических плотностей А260/A280 и электрофорезом в 1%-ном агарозном геле по соотношению количества 28S и 18S рРНК (Sambrook et al., 2001).
Комплементарную ДНК (кДНК) получали из тотальной РНК реакцией обратной транскрипции с использованием коммерческого набора «RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit» и в соответствии с протоколом фирмы-изготовителя («Fermentas»).
Количественный анализ транскрипционной активности генов CCL2 и CD40LG проводили методом ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) на амплификаторе «iCycler iQTM Real-Time PCR Detection System» («BioRad»), использовали праймеры фирмы производителя (PPH00192E и PPH00259B, соответственно, «SuperArray Bioscience Corporation»). В качестве референсного гена был выбран ген бета-2-микроглобулина (B2M).
Статистическую обработку полученных результатов выполняли с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows 5.0 (Stat-Soft), SPSS v.13.0, Haploview v.4.2 и MDR (Multifactor Dimensionality Reduction, и www.epistasis.org/mdr.html, http://www.multifactordimensionalityreduction.org/) компьютерной программы RxC (ROW x Columns) по алгоритму, описанному Roff D.A. [Roff, 1989]. Силу ассоциаций оценивали в значениях показателя отношения шансов (OR - odds ratio). Для оценки неравновесия по сцеплению пары полиморфных локусов использовали показатель D’, рассчитанный с помощью программы Haploview v.4.2. Определение частот гаплотипов и тестирование различий в распределении частот гаплотипов между группами больных и здоровых индивидов осуществляли также с помощью программы Haploview v.4.2. Для оценки относительного содержания мРНК использовали метод Ct [Livak, 2001]. При анализе ассоциаций полиморфных локусов с уровнем транскрипционной активности генов в лейкоцитах периферической крови, клинико-лабораторными показателями использовали непараметрические методы статистического анализа.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Анализ ассоциаций полиморфных локусов генов воспалительного ответа с эссенциальной гипертензией Анализ ассоциаций полиморфных локусов -5796АT, -2518AG, 5357CT и 704(14)I/D гена CCL2 с эссенциальной гипертензией Роль хемокина CCL2 (или моноцитарного хемоаттрактантного белка 1, MCP-1) в этиопатогенезе ЭГ может быть обусловлена тем, что он проявляет сильную хемотаксическую активность по отношению к моноцитам и Т-лимфоцитам, является промотором миграции циркулирующих лимфоцитов из плазмы крови в ткани и очаги воспаления, одновременно влияя на их активацию и прилипание к сосудистой стенке.
Этот хемокин может быть вовлечен в воспаление сосудистой стенки и развитие эндотелиальной дисфункции [Coll B, 2007].
Нами проведен анализ ассоциаций с ЭГ полиморфных локусов -5796АT (rs1860190), -2518AG (rs1024611), 5357CT (rs991804) и 704(14)I/D (rs3917887) гена CCL2. Обнаружено, что в группе больных ЭГ отмечается достоверное увеличение частоты генотипа 5357*T/*T (14.29% против 7.82% в контрольной группе, р=0.035, OR=1.96, CIOR: 1.07-3.58). Анализ ассоциаций с учетом возраста манифестации заболевания показал, что в группе больных с манифестацией заболевания в возрасте до 46 лет в отличие от соответствующей контрольной группы повышена частота генотипа 5357*T/*T (14.62% и 5.26%, соответственно, р=0.005, OR=3.08, ClOR: 1.38 6.86), тогда, как между группами лиц в возрасте 46 лет и старше статистически значимых различий не прослеживается. При попарном сравнении по частотам аллелей и генотипов полиморфных локусов -2518AG, -5796АT и 704(14)I/D гена CCL2 между группами больных и здоровых индивидов не выявлено статистически значимых различий.
В группе больных ЭГ и в контрольной группе наблюдается неравновесие по сцеплению между анализируемыми полиморфными локусами гена CCL2 (рис. 1). В результате проведенного анализа в выборках обнаружено 12 из 16 возможных гаплотипов (табл. 1). В группе больных ЭГ повышена частота гаплотипа CCL2*A*G*D*T (20.4% против 13.9% в контрольной группе, 2=6.662, р=0.009, OR=1.57, CIOR:1.04-2.36).
Рис. 1. Графическое представление структуры неравновесия по сцеплению между полиморфными локусами гена CCL Примечание: в верхней части рисунка показана локализация SNP в гене CCL2.
Черными линиями выделены гаплотипические блоки;
в ячейках представлены значения коэффициента неравновесия по сцеплению D’. Различные оттенки цвета отображают силу неравновесия по сцеплению между SNP.
Таблица Распределение частот гаплотипов полиморфных локусов гена CCL2 в группе больных эссенциальной гипертензией и в контрольной группе Локус 704(14)I/D -2518AG -5796AT 5357СТ Частота гаплотипа, % P Гаплотип Контроль Больные *T*A*I*C 49.8 48.4 0. *A*G*D*T 13.4 20.5 0. *A*A*I*C 9.5 10.1 0. *A*A*D*T 7.6 5.2 0. *T*G*D*T 3.1 2.9 0. *T*A*D*T 2.6 2.2 0. *A*G*I*T 2.7 1.9 0. *T*A*D*C 1.3 2.8 0. *A*A*D*C 2.3 1.5 0. *T*A*I*T 2.1 1.1 0. *T*G*I*C 1.9 1.2 0. *A*A*I*T 1.3 0.9 0. Анализ литературных данных показал, что из многих полиморфных локусов гена CCL2 функциональная значимость выяснена для локуса -2518AG (rs1024611).
Этот локус ассоциирован с содержанием хемокина CCL2 и С-реактивного белка в плазме крови;
у носителей гомозиготного по аллелю CCL2-2518*G генотипа содержание данного белка и С- реактивного белка в крови повышено, причем такого рода различия отмечены как у здоровых индивидов, так и у пациентов с ИБС и ЭГ [Rovin, 1999;
Tabara, 2003;
Ka-Po Tse, 2007;
Bucova, 2009;
Wang, 2011]. Относительно функциональной значимости других полиморфных локусов гена CCL2 сведения весьма ограничены. Статистически значимая и независимая от факторов риска сердечно-сосудистой патологии ассоциация полиморфного локуса -2518AG (rs1024611) гена CCL2 выявлена в популяции жителей Туниса;
предрасполагающим к развитию ЭГ является аллель CCL2-2518*G (OR = 1.46, CIOR:1.11-1.91, p=0.004) [Jemaa, 2009]. Согласно результатам другого исследования, у носителей аллеля CCL2 2518*G отмечены более высокие показатели САД и ДАД, чем у носителей аллеля CCL2-2518*А [Penz, 2010]. Согласно результатам проведенного нами исследования, полиморфный локус -2518AG вносит вклад в развитие ЭГ, но его эффект обнаруживается только при гаплотипическом анализе;
аллель CCL2-2518*G входит в гаплотип CCL2*A*G*D*T, предрасполагающий к развитию ЭГ. В связи со сказанным выше следует, что полученные нами данные соответствуют результатам других исследований.
Таким образом, в результате проведенного исследования обнаружена ассоциация с ЭГ полиморфного локуса 5357CT (rs991804) в отдельности и гаплотипа CCL2*A*G*D*T по четырем полиморфным локусам -5796АT (rs1860190), -2518AG (rs1024611), 704(14)I/D (rs3917887) и 5357CT гена CCL2. На этом основании можно заключить, что полиморфизм гена CCL2 вносит вклад в развитие ЭГ.
Анализ ассоциаций полиморфного локуса 3005СT гена CD40LG с эссенциальной гипертензией Среди возможных механизмов влияния хемокинов на развитие ЭГ рассматривают активацию системы гемостаза и вазоконстрикцию, воспаление, деградацию матрикса, которые развиваются в результате взаимодействия хемокинов с их рецепторами [Schonbeck, Libby, 2001]. С участием сигнальной системы CD40 CD40L может развиваться вазоконстрикция, дисрегуляция артериального давления в результате гипоксии, увеличения коагуаляционного потенциала крови, воспаления.
Ген CD40LG картирован на хромосоме Х (Xq26). Соответственно такой локализации у мужчин он представлен одной копией. Результаты генотипирования по полиморфному локусу 3005СT (rs715762) гена CD40LG показали, что в выборке мужчин группы сравнения, татар по этнической принадлежности, доля носителей аллеля CD40LG3005*С составила 93%, а носителей аллеля CD40LG3005*T - 7%.
Статистически значимых различий по частотам гемизигот между группой больных ЭГ и группой сравнения не выявлено (94.47% и 5.53% против 91.77% и 8.23%, соответственно, р=0.276). Также не найдено ассоциаций с заболеванием при анализе полученных данных с учетом таких факторов как возраст манифестации заболевания, табакокурение, ожирение. В то же время замечено, что в группе пациентов с отягощенным по сердечно-сосудистой патологии семейным анамнезом частота гемизигот по аллелю CD40LG3500*T выше, чем в группе пациентов с благополучным анамнезом (9.62% против 2.17% соответственно, р=0,037). После введения поправки на множественность сравнений эти различия становились статистически не значимыми (р=0.13).
Анализ ассоциаций полиморфного локуса -3328AC гена CXCR с эссенциальной гипертензией Роль рецептора CXCR3 в контроле физиологических функций кровеносных сосудов и регулировании артериального давления остается неясной. Отсутствие данного хемокинового рецептора, как показали результаты эксперимента с трансгенными мышами (Cxcr3-/-), может привести к повышению АД. Полагают, что CXCR3 является важным в развитии спазма сосудов и ЭГ;
возможно, его влияние реализуется через изменение экспрессии рецептора типа 1 к ангиотензиногену [Hsu, 2009]. Вклад полиморфизма гена CXCR3 (Xq13.1) в молекулярно-генетическую структуру сердечно-сосудистых заболеваний не исследован. Также и в популяционном плане полиморфизм гена CXCR3 мало изучен.
Нами проведен анализ ассоциаций с ЭГ полиморфного локуса -3328AC (rs3091305) гена CXCR3 и получены следующие данные. В группе сравнения частоты аллелей CXCR3-3328*C и CXCR3-3328*А составили 54.73% и 45.27%, а в группе больных ЭГ – 58.53% и 41.47% соответственно;
существенных различий между группами не выявлено. На основании полученных данных следует признать, что полиморфный локус -3328AC гена CXCR3 не ассоциирован с ЭГ.
Анализ ассоциаций полиморфного локуса 1627CT гена CXCR с эссенциальной гипертензией Хемокиновый рецептор CXCR4 может вносить вклад в патофизиологию ЭГ. В пользу этой точки зрения свидетельствуют результаты ряда исследований. В частности было показано, что у больных ЭГ происходит снижение уровня экспрессии гена CXCR4, вследствие этого может развиваться один из ключевых механизмов повреждения сосудистой стенки при ЭГ, который состоит в повышении адгезии к эндотелию и миграции в сосудистую стенку естественных киллеров и цитотоксических Т-лимфоцитов [Тимофеева, 2007].
Нами для анализа ассоциаций с ЭГ был выбран полиморфный локус 1627CT (rs2471859) гена CXCR4. В контрольной группе частоты обнаружения генотипов CXCR4 1627*T/*T, CXCR4 1627*T/*C и CXCR4 1627*C/*C составили 64.14%, 33.33% и 2.53%, аллелей CXCR4 1627*T и CXCR4 1627*C – 80.8% и 19.2% соответственно.
Сопоставление по частотам генотипов и аллелей групп больных ЭГ и здоровых лиц показало, что между ними нет различий. Следовательно, полиморфный локус 1627TC гена CXCR4 не ассоциирован с ЭГ у этнических татар. Поскольку было обнаружено изменение уровня экспрессии гена CXCR4 в клетках периферической крови при ЭГ [Тимофеева, 2007], представляет интерес дальнейший поиск функционально значимых полиморфных локусов этого гена.
Анализ ассоциаций полиморфных локусов генов SELL(L193F), SELE (3832TC), SELP (S331N) с эссенциальной гипертензией Взаимоотношения между молекулами адгезии и АД отличаются для разных молекул адгезии, изменяются в зависимости от возраста и гендерных особенностей, модифицируются менопаузой. В целом роль молекул адгезии в регуляции АД остается неясной [Miller, 2004]. В то же время возрастание уровня экспрессии молекул адгезии и их лигандов при ЭГ относится к той категории фактов, которые подтверждают точку зрения о вкладе воспаления сосудистой стенки в патофизиологию этого заболевания [Glowinska, 2005;
Shalia, 2009]. Селектины E, P и L - молекулы клеточной адгезии, которые обеспечивают взаимодействие клеток крови с клетками эндотелия сосудов в физиологических и патофизиологических процессах и могут быть маркерами повреждения сосудистой стенки при ЭГ. У больных ЭГ содержание селектина Е в плазме крови повышено [Sanada, 2005;
Hjelstuen, 2007]. Содержание селектина Р в плазме крови коррелирует с уровнем АД, возрастом, величиной показателя ИМТ и концентрацией фибриногена [Lip, 1995;
Koyama, 2003;
Preston, 2007]. В ответ на гипертензивную терапию происходит снижение уровня растворимого слектина Р [Sanada, 2005].
Нами проведен анализ ассоциаций с ЭГ полиморфных локусов L193F (rs3177980, 665CT или синоним - rs1131498, g.9358TC, F206L в домене подобному эпидермальному фактору роста) гена SELL, 3832CT (rs2076059) гена SELE, S331N гена В контрольной группе частоты генотипов (1087GA, rs6131) SELP.
SELL193*F/*F, SELL193*F/*L и SELL193*L/*L составили 66.8%, 29.88% и 3.32%, частоты аллелей SELL193*F и SELL193*L – 81.74% и 18.26% соответственно;
генотипы SELE 3833*C/*C, SELE 3833*C/*T и SELE 3833*T/*T выявлены в 37.86%, 40.33% и 21.81%, аллели SELE 3833*C, SELE 3833*T в 58.02% и 41.98% случаев;
генотипы SELР 331*S/*S, SELР 331*S/*N и SELР 331*N/*N обнаружены у 63.79%, 29.63% и 6.58%, аллели SELР 331*S и SELР 331*N у 78.6% и 21.4% индивидов. При попарном сравнении по частотам генотипов и аллелей полиморфных локусов генов SELL, SELE и SELР статистически значимых различий между контрольной группой и группой больных ЭГ не найдено.
Гены SELL, SELE и SELP локализованы в кластере (160 kb) на длинном плече хромосомы 1 (1q24-q25) и тесно сцеплены с геном фактора коагуляции V (F5);
горячая точка рекомбинации присутствует внутри гена SELP. Был проведен анализ неравновесия по сцеплению и гаплотипический анализ аллельных вариантов генов SELL, SELE и SELP. В результате было идентифицировано восемь гаплотипов, частоты обнаружения которых в контрольной группе и группе больных ЭГ не отличались.
Таким образом, анализируемы полиморфные локусы генов SELL, SELE и SELР не ассоциированы с ЭГ.
Анализ ассоциаций полиморфного локуса 28081564TA гена NFKB с эссенциальной гипертензией Транскрипционный фактор NFB – эволюционно консервативный медиатор воспаления [Ghosh, 1999]. NFB особенно важен в развитии васкулярного воспаления, так как он регулирует экспрессию генов цитокинов (CCL2, RANTES, IL6, CD40), селектинов, FAS, AGT, NOS3 и ряда других в клетках эндотелия [Liu-Mares, 2007;
Park, 2007;
Camici, 2009]. В исследованиях на модельных объектах наблюдали нарушения регуляции NFB-сигналинга в тканях при развитии гипертонии [Camici, 2009].
Нами проведен анализ ассоциаций полиморфного локуса 28081564TA (rs4648110) гена NFKB1 с ЭГ. В контрольной группе частоты аллелей NFKB1*T и NFKB1*А составили 78.6% и 21.4%, генотипов NFKB1*T/*T, NFKB1*T/*A и NFKB1*A/*A – 63.79%, 29.63% и 6.58%. Не выявлено различий по частотам генотипов и аллелей между группой больных ЭГ и группой здоровых индивидов.
Следовательно, данный полиморфный локус гена NFKB1 не ассоциирован с ЭГ.
Анализ ассоциаций полиморфного локуса –877СТ гена CASP с эссенциальной гипертензией Субстратами провоспалительной каспазы 1 являются молекулы (IL-1, IL18 и другие), вовлеченные в регуляцию функций эндотелия сосудов, апоптоз, воспаление и атерогенез [Shen, 2010]. Содержание каспазы 1 в крови оценивается как предиктор смерти у пациентов с ИБС [Blankenberg, 2006]. Функциональная значимость полиморфных локусов гена CASP1 в детерминации уровня активности каспазы 1 и в развитии ИБС, ИМ и ЭГ остается малоизученной.
В данном исследовании проведено генотипирование по полиморфному локусу –877СТ (rs481736) гена CASP1. В контрольной группе частоты обнаружения генотипов CASP1–877*T/*T, CASP1–877*T/*C и CASP1–877*C/*C составили 1.99%, 32.45% и 65.56%, аллелей CASP1–877*T и CASP1–877*C – 18.21% и 81.79%.
Распределение частот генотипов и аллелей в группе больных ЭГ соответствовало таковому в контрольной группе. На основании полученных данных следует признать, что полиморфный локус –877СТ гена CASP1 не ассоциирован с ЭГ.
Анализ ассоциаций полиморфного локуса 36AG гена TNFRSF1A с эссенциальной гипертензией Рецептор типа 1 к TNF- может активировать NFkB, опосредовать апоптоз и функционировать как регулятор воспаления [Wajant, Scheurich., 2011]. Полиморфный локус +36AG (rs767455) ассоциирован с уровнем экспрессии гена TNFRSF1A;
у носителей генотипа +36*G/*G повышено содержание ингибитора активатора плазминогена 1 [Mavri, 2007].
У этнических татар группы сравнения частоты аллелей TNFRSF1A 36*А и TNFRSF1A 36*G составили 60.38% и 39.62%, частоты генотипов TNFRSF1A 36*А/*А, TNFRSF1A 36*A/*G и TNFRSF1A 36*G/*G – 36.79%, 47.17% и 16.04% соответственно. Сравнительный анализ групп пациентов с ЭГ и здоровых индивидов показал, что между ними наблюдаются различия по распределению частот аллелей (2=4.57, Р=0.045) и генотипов на уровне тенденции (2 =5.40, Р=0.066). В группе больных ЭГ повышены частоты генотипа TNFRSF1A 36*G/*G (28.3% против 16.4% в контрольной группе, р=0.026) и аллеля TNFRSF1A 36*G (49.06% против 39.62%, р=0.033) и понижена частота аллеля TNFRSF1A 36*А (50.94% против 60.38%, р=0.033). Результаты анализа ассоциаций полиморфного локуса +36AG гена TNFRSF1A с учетом ИМТ показали, что генотип TNFRSF1A 36*G/*G обнаруживается с большей частотой в группе больных ЭГ с ожирением (48.88%), чем в группах больных с избыточной (27.27%, р=0.07) или нормальной массой тела (12.82%, р=0.003). Статистически значимые различия обнаруживаются между группой больных с ожирением и контрольной группой по частоте генотипа TNFRSF1A 36*G/*G (р=0.0007), и по частотам аллелей (р=0.0016). Следовательно, полиморфный локус +36AG гена TNFRSF1A ассоциирован с ЭГ;
относительные шансы заболевания повышены у носителей генотипа *G/*G с ожирением (OR=4.62, ClOR: 1.94-10.99).
Анализ ассоциаций полиморфного локуса 670AG гена FAS с эссенциальной гипертензией Повышенный уровень апоптоза наблюдали в эксперименте с модельными гипертензивными животными [Suematsu, 2002]. Роль этого феномена в различных моделях гипертензии и у больных ЭГ остается неясной. FAS вовлечен в сигналинг апоптоза и воспаления.
Полиморфный локус 670AG (rs1800682) гена FAS локализован внутри сайта связывания факторов транскрипции Sp1, STAT1 и, по-видимому, может влиять на экспрессию гена FAS.
В группе сравнения частоты аллелей FAS670*А и FAS670*G составляют 50.42% и 49.58%, частоты генотипов FAS670*A/*A, FAS670*A/*G и FAS670*G/*G – 27.73%, 45.38% и 26.89% соответственно. При сопоставлении по частотам генотипов и аллелей контрольной группы с группой больных ЭГ между ними не выявлено различий. Таким образом, полиморфный локус 670AG гена FAS не ассоциирован с ЭГ.
Анализ гаметического неравновесия по сцеплению и анализ межгенных взаимодействий аллельных вариантов анализирумых генов-кандидатов эссенциальной гипертензии Большое значение для понимания молекулярно-генетических основ многофакторного заболевания имеет информация о структуре паттернов гаметического неравновесия по сцеплению аллельных вариантов генов, о межгенных взаимодействиях. Как показал анализ результатов исследования, между контрольными группами и группами больных ЭГ наблюдаются различия по структуре паттернов гаметического неравновесия по сцеплению аллельных вариантов анализируемых генов. В контрольной группе прослеживается неравновесное сцепление между аллельными вариантами генов NFKB1 и SELE (p0.001), NFKB1 и SELP (p0.001), NFKB1 и SELL (p0.001), FAS и SELP (p=0.033), FAS и SELL (p=0.029), SELL и TNFRSF1A (p=0.002), SELE и SELP (p=0.022), SELE и SELL (p0.001). В группе больных ЭГ наблюдается неравновесное сцепление между аллельными вариантами генов NFKB1 и TNFRSF1A (p=0.001), NFKB1 и FAS (p0.001), FAS и TNFRSF1A (p0.001), SELE и SELP (p=0.010), SELE и SELL (p=0.005).
Неравновесное сцепление локусов, наблюдаемое в контрольной группе и группе больных ЭГ, может свидетельствовать в пользу гипотезы об отборе некоторых аллелей разных генов в сочетании друг с другом, об “адаптивном преимуществе” одних или “уязвимости” с риском развития сердечно-сосудистой патологии других паттернов неравновесия по сцеплению.
Анализ межгенных взаимодействий был выполнен с помощью непараметрической программы MDR, в которой используется подход редукции размерных величин [Ritchie, 2001;
Lou, 2007]. Были проанализированы энтропийные функции каждой пары анализируемых полиморфных локусов.
Как следует из полученных данных, наибольшие показатели информационной ценности даёт взаимодействие аллельных вариантов генов SELE и CXCR3 (рис. 2).
Исходя из этого, можно говорить о синергизме эффектов генов SELE и CXCR3 в развитии ЭГ. С использованием методов логистической регрессии и мультифакторной пространственной редукции была построена модель с наибольшим потенциалом предикции риска развития заболевания (табл. 2).
Рис. 2. Графическое отображение результатов анализа взаимодействий между аллельными вариантами генов при эссенциальной гипертензии.
Примечание: на вершинах многогранника представлена информационная ценность каждого маркера в отдельности, на ребрах – информационная ценность взаимодействия пары маркеров.
Таблица Коэффициенты множественной логистической регрессии и их статистическая оценка Предиктор р B OR CIOR *A+*C/C 0.04 1.04 0.797-1. *A+*C/T -0.550 0.58 0.44–0. *A+*T/T 0.51 1.67 1.22–2. CxCR3+SELE 0. *C+*C/C -0.04 0.961 0.74–1. *C+*C/T 0.550 1.73 1.334–2. *C+*T/T -0.510 0.6 0.44–0. *C/C -0.345 0.708 0.5–1. CCL2 (5357CT) 0. *C/T -0.635 0.53 0.37–0. *T/T 0.98 2.66 1.58–4. Константа 0.131 0.282 1. Примечание. В – коэффициент логистической регрессии (0В1 – регрессия;
В0 – детерминация);
OR (odds ratio) – экспоненциальный коэффициент (отношение шансов);
CIOR – 95% доверительный интервал для OR;
р – уровень значимости.
Анализ уровня транскрипционной активности генов хемокинов CD40LG и CCL2 в лейкоцитах периферической крови у больных эссенциальной гипертензией Функции клеток циркулирующей крови реализуются не только в кровотоке, но и в периферийных тканях. Реакция клеток крови на факторы различной природы, их взаимодействие с эндотелием, миграция через сосудистую стенку является важным в инициации и развитии физиологических и патофизиологических процессов в разных тканях и в организме в целом.
Оценка дифференциальной экспрессии генов в клетках крови в норме и при патологии важна для раскрытия механизмов развития заболевания, а также для поиска генов-кандидатов заболевания. Транскриптом клеток крови у больных ЭГ практически не изучен.
Согласно результатам проведенного исследования, в группе больных ЭГ по сравнению с контрольной группой выше относительное количество мРНК гена CD40LG. Возрастание количества транскриптов гена CD40LG свидетельствует о повышении его ТА. ТА гена CCL2 остается без изменений (табл. 3, 4).
Таблица Выборочные статистики эмпирических вариационных рядов значений относительного содержания мРНК генов CD40LG и CCL2 в лейкоцитах периферической крови у здоровых и больных эссенциальной гипертензией лиц Ген Группа х N xmin xmax Me Q25 Q Контроль 17 0.96 0.26 3.25 0.74 0.60 1. CD40LG Больные ЭГ 24 7.64 0.51 34.92 2.00 1.16 7. Контроль 17 2.29 0.07 9.53 0.80 0.21 3. CCL Больные ЭГ 23 2.24 0.09 12.00 0.77 0.20 3. Примечание: х – среднеарифметическое значение, xmin и xmax – минимальное и максимальное значения, N – численность группы, Me – медиана (или 50% квартиль), Q25 и Q75 –25% и 75% квартили.
Таблица Результаты сравнительного анализа относительного содержания мРНК генов CD40LG и CCL2 в лейкоцитах периферической крови у здоровых и больных эссенциальной гипертензией лиц Ген Тест df p H 15,54 1 0. CD40LG 2 11,26 1 0. H 0.009 1 0. CCL 2 0.102 1 0. Примечание: Н - критерий Краскела—Уоллиса, 2 - критерий при сравнеии медиан (медианный тест), df –число степеней свободы, p – уровень значимости В контрольной группе не выявлено корреляций между ТА генов CD40LG и CCL2 (коэффициент ранговой корреляции Спирмана, R, составил -0.03, р=0.90). В отличие от этого, в группе больных ЭГ наблюдается положительная корреляция между ТА гена CD40LG и ТА гена CCL2 (R= 0.53, p=0.013).
Полученные результаты свидетельствуют о том, что у больных ЭГ активирована сигнальная система рецептор CD40–лиганд CD40 (CD40-CD40L).
Анализ ассоциаций полиморфных локусов генов хемокинов CD40LG и CCL2 с транскрипционной активностью этих генов в лейкоцитах периферической крови и некоторыми клинико-лабораторными показателями у больных эссенциальной гипертензией Анализ ассоциаций полиморфных локусов генов CD40LG и CCL2 с ТА этих генов в лейкоцитах периферической крови и некоторыми клинико-лабораторными показателями проводили с помощью непараметрических методов статистического анализа (Kruskal-Wallis ANOVA by Ranks).
*D/*D ТА *I/*D 4, *I/*I 3, 2, 1, 0, Контроль Больные Рис. 3. Уровень относительной транскрипционной активности гена CCL2 в лейкоцитах периферической крови у носителей разных генотипов по полиморфному локусу 704(14)I/D гена CCL2.
Обнаружено, что полиморфный локус 3005CT гена CD40LG не ассоциирован с уровнем ТА этого гена в лейкоцитах периферической крови ни в контрольной группе, ни в группе больных ЭГ. В то же время в группе больных ЭГ прослеживается ассоциация полиморфного локуса 3005CT гена CD40LG с таким показателем, как активированное время рекальцификации плазмы крови (р=0.001). Укорочение ативированного времени рекальцификации плазмы свидетельствует о гиперкоагуляции. У носителей генотипа CD40LG3005*С/*С по сравнению с носителями генотипа CD40LG3005*Т/*Т ниже значения АВР (58.3 и 292.3 сек, соответственно), а следовательно выше риск развития тромбов. Эти наблюдения косвенно свидетельствуют в пользу возможной функциональной значимости полиморфизма 3005CT гена CD40LG в формировании эндогенных факторов риска сердечно-сосудистой патологии.
Установлено, что из всех анализируемых полиморфных локусов гена CCL полиморфный локус 704(14)I/D ассоциирован с уровнем ТА гена CCL2 в лейкоцитах периферической крови в группе больных ЭГ (2=7.88, р=0.019, Н=7.59, р=0.022). При этом ТА гена CCL2 сравнительно выше у гомозигот по делеции, чем у гетерозигот и гомозигот по инсерции в группе больных ЭГ (2=4.07, р=0.043, Н=7.29, р=0.007) и в контрольной группе (2=4.00, р=0.045, Н=3.57, р=0.059) (рис. 3). Не выявлено статистически значимого влияния полиморфного локуса 5357CT гена CCL2 на уровень ТА этого гена в лейкоцитах периферической крови в контрольной группе и группе больных. В то же время наблюдается ассоциация полиморфного локуса 5357CT с количеством тромбоцитов (р=0.046), а на уровне заметной тенденции – с количеством лимфоцитов (р=0.093). При этом выражены различия между группами лиц с генотипами CCL2 5357*Т/*Т и CCL2 5357*С/*С по количеству тромбоцитов (240.70 и 156.83, р=0.030).
ВЫВОДЫ 1. Полиморфизм гена ССL2 вносит вклад в структуру наследственной предрасположенности к ЭГ. Генотип CCL2 5357*T/*T и гаплотип CCL2*A*G*D*T по полиморфным локусам -5796АT, -2518AG, 704(14)I/D и 5357CT (rs1860190, rs1024611, rs3917887 и rs991804) предрасполагают к развитию эссенциальной гипертензии.
2. Полиморфный локус 5357CT (rs991804) гена CCL2 ассоциирован с количеством тромбоцитов в крови больных ЭГ;
у носителей генотипа CCL2 5357*Т/*Т количество тромбоцитов выше, чем у носителей других генотипов.
3. Полиморфный локус rs767455 (+36AG) гена TNFRSF1A ассоциирован с эссенциальной гипертензией;
у носителей генотипа TNFRSF1A+36*G/*G повышены шансы развития этого заболевания.
4. У больных эссенциальной гипертензией транскрипционная активность гена CD40LG в лейкоцитах периферической крови увеличена, транскрипционная активность гена CCL2 не изменяется.
5. Полиморфный локус 3005CT (rs715762) гена CD40LG не ассоциирован с уровнем транскрипционной активности этого гена в лейкоцитах периферической крови и с эссенциальной гипертензией, но ассоциирован с показателем функциональной активности системы свертывания крови активированным временем рекальцификации плазмы;
у носителей генотипа CD40LG3005*С/*С по сравнению с носителями генотипа CD40LG3005*Т/*Т ниже значения этого показателя а, следовательно, выше риск образования тромбов.
6. Полиморфный локус 704(14)I/D (rs3917887) гена CCL2 ассоциирован с транскрипционной активностью этого гена в лейкоцитах периферической крови у больных эссенциальной гипертензией;
транскрипционная активность гена CCL выше у гомозигот по делеции, чем у гетерозигот и гомозигот по инсерции.
6. Не выявлено ассоциаций полиморфных локусов генов CXCR3 (-3328AC, rs3091305), CXCR4 (1627CT, rs2471859), SELL (L193F, rs3177980), SELE (3832TC, rs2076059), SELР (S331N, rs6131), NFKB1 (28081564TA, rs4648110), CASP1 ( 877СТ, rs481736) и FAS (-670 AG, rs1800682) с эссенциальной гипертензией.
7. В структуру наследственной предрасположенности к эссенциальной гипертензии вносят вклад эффекты взаимодействий аллельных вариантов генов CCL2 (5357CT), SELE (L193F) и гена CXCR3 (-3328AC).
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Насибуллин Т.Р., Белоногова В.А., Туктарова И.А., Карамова И.М., Мустафина О.Е. Роль полиморфных маркеров гена CCL2 в формировании наследственной предрасположенности к эссенциальной гипертензии // Генетика. 2011. Т.7, №9. С.
1262-1266.
2. Белоногова В.А., Насибуллин Т.Р., Туктарова И.А., Карамова И.М., Мустафина О.Е. Гаплотипический анализ гена CCL2 у больных эссенциальной гипертензией // Молекулярная диагностика. Сб. трудов. 2010. Т.3. С. 17-18.
3. Насибуллин Т.Р., Белоногова В.А., Эрдман В.В., Туктарова И.А., Николаева И.Е, Гареева Л.Н., Карамова И.М., Мустафина О.Е. Роль полиморфных маркеров воспаления в формировании наследственной предрасположенности к эссенциальной гипертензии // Цитокины и воспаление. 2011. Т.10, №3. С. 46-50.
4. Белоногова В.А., Тимашева Я.Р., Насибуллин Т.Р., Туктарова И.А., Мустафина О.Е. Ассоциация инсерционно-делеционного (I/D) полиморфизма гена CCL2 с эссенциальной гипертензией // Материалы III Международной научно практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины». Ростов-на-Дону. 2009. С. 152-154.
5. Белоногова В.А., Тимашева Я.Р., Насибуллин Т.Р., Мустафина О.Е. Ассоциация полиморфизма -511TC гена интерлейкина 1 бета с эссенциальной гипертензией // Материалы XII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина». Санкт Петербург. 2009. С. 43-44.
6. Белоногова В.А., Тимашева Я.Р., Насибуллин Т.Р., Мустафина О.Е. Ассоциация инсерционно-делеционого полиморфизма гена CCL2 с эссенциальной гипертензией //Труды Всероссийской конференции, посвященной 10-летию кафедры генетики БГПУ им. М. Акмуллы, приуроченной к ежегодным Вавиловским чтениям и молекулярно-генетические «Инновационные исследования живых систем». Уфа. 2009. C. 23-26.
7. Белоногова В.А., Насибуллин Т.Р., Туктарова И.А., Мустафина О.Е. I/D полиморфизм гена CCL2 и риск эссенциальной гипертензии в популяции татар // Материалы Всероссийской заочной научно-практической конференции «Актуальные вопросы физиологии, психофизиологии и психологии». Уфа. 2009.
С. 9-13.
8. Белоногова В.А., Тимашева Я.Р., Насибуллин Т.Р., Туктарова И.А., Мустафина О.Е. Участие гена CCL2 в развитии эссенциальной гипертензии // Медицинская генетика. Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков.
Ростов-на-Дону. 2010. С. 21.
9. Белоногова В.А., Насибуллин Т.Р., Туктарова И.А., Карамова И.М., Мустафина О.Е. Гаплотипический анализ гена CCL2 у больных эссенциальной гипертензией // Клинико-лабораторный консилиум. Материалы Российской конференции с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины – возможное и реальное». Санкт-Петербург. 2010. №2. C. 149.
10. Белоногова В.А., Насибуллин Т.Р., Туктарова И.А., Карамова И.М., Мустафина О.Е. Ассоциация полиморфных маркеров гена CCL2 с эссенциальной гипертензией // Материалы научно-практической конференции с международным участием «Клиническая иммунология, иммуногенетика – междисциплинарные проблемы». Ташкент. 2010. С. 35-36.
11. Белоногова В.А., Насибуллин Т.Р. Роль полиморфных маркеров генов факторов воспаления в формировании наследственной предрасположенности к эссенциальной гипертензии // Материалы XVIII Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2011». Москва. 2011. С. 53.
12. Белоногова В.А., Насибуллин. Т.Р., Туктарова И.А., Николаева И.Е., Карамова И.М., Мустафина О.Е. Ассоциация полиморфного локуса 3005СT гена CD40L с эссенциальной гипертензией // Материалы II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакторной патологии». Курск. 2011. С. 32-33.
13. Тимашева Я. Р., Матвеева В. А., Насибуллин Т. Р., Мустафина О. Е. Полиморфизм генов цитокиновой сети и предрасположенность к эссенциальной гипертензии // Биомика – наука XXI века. Материалы школы-семинара молодых ученых УНЦ РАН и Волго-Уральского по физико-химической и биотехнологии. Уфа. 2007. C.
123-124.
14. Belonogova V.A., Nasibullin T. R., Tuktarova I.A., Mustafina O. E. Haplotype analysis of MCP-1/CCL2 with Essential Hypertension in Tatars from Russia // European Journal of Human Genetics. European Human Genetics Conference. Amsterdam. 2011. V. 14.
P. 134.
15. Belonogova V.A, Timasheva Y.R., Tuktarova I.A., Nasibullin T.R., Mustafina O.E.
Association between the insertion-deletion polymorphism in the Chemoattractant Protein-1 gene and Essential Hypertension // 21-st European Meeting on Hypertension.
Milan. 2011. P. 262.
16. Матвеева В.А., Насибуллин Т.Р., Туктарова И.А., Мустафина О.Е. Роль хемокинов ССL2 и CD40LG в воспалении при эссенциальной гипертензии // Материалы IV Международной конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины». Ростов-на-Дону. 2011. C. 99-100.
Список сокращений и условных обозначений АВР активированное время рекальцификации плазмы крови АД артериальное давление ДАД диастолическое артериальное давление ИБС ишемическая болезнь сердца ИМ инфаркт миокарда ИМТ индекс массы тела САД систолическое артериальное давление ТА транскрипционная активность гена ЭГ эссенциальная гипертензия СASP1 ген каспазы ген хемокина CCL2 (или моноцитарного хемоаттрактантного белка) CCL ген CD40-лиганда CD40LG ген хемокинового рецептора 3 C-X-C семейства CXCR ген хемокинового рецептора 4 C-X-C семейства CXCR ген члена 6 суперсемейства рецептора фактора некроза опухоли FAS MDR Multifactor Dimensionality Reduction ген субъединицы ядерного фактора транскрипции каппа бета NFKB ген селектина E SELE ген селектина L SELL ген селектина Р SELР single-nucleotide polymorphism - однонуклеотидный полиморфизм SNP фактор некроза опухолей альфа TNF ген рецептора первого типа фактора некроза опухолей TNFRSF1A 95% сonfidence interval - 95% доверительный интервал для OR CIOR число степеней свободы df Н критерий Краскела—Уоллиса odds ratio - соотношение шансов OR