Учебное учреждение белорусский государственный медицинский университет удк 616.441-008.64-074 лухверчик людмила николаевна иммунохимический анализ в диагностике и изучении патогенеза различных форм ги

1 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ВЕДУЩЕЕ ВЫСШЕЕ УЧЕБНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ УДК 616.441-008.64-074 Лухверчик Людмила Николаевна ИММУНОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ В ДИАГНОСТИКЕ И ИЗУЧЕНИИ ПАТОГЕНЕЗА РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ГИПОТИРЕОЗА 14.00.36 – Аллергология и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Минск 2004 2 Работа выполнена в ГНУ “Институт биоорганической химии НАН Белару си” и Международном государственном экологическом университете им.А.Д.Сахарова.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Пивень Н.В., ГНУ “Ин ститут биоорганической химии НАН Беларуси”, заведующая лабораторией медицинского микроанализа.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Федорович С.В., Респуб ликанский научно - практический центр гигиены Минздрава РБ, заведующий клиническим отделом проф. патологии и аллерго логии;

доктор медицинских наук Батян А.Н., Международный госу дарственный экологический университет им. А.Д.Сахарова, профессор кафедры экологической медицины и радиобиологии.

Оппонирующая организация: Витебский государственный медицинский университет.

Защита состоится “14” мая 2004 г. в 15.00 ч. на заседании Совета по за щите диссертаций Д 03.18.05 при Белорусском государственном меди цинском университете по адресу: 220116, г. Минск, пр. Дзержинского 83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Белорусского госу дарственного медицинского университета.

Автореферат разослан “_”_200_г.

Ученый секретарь Совета по защите диссертаций кандидат медицинских наук, доцент А.М. Близнюк ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы диссертации. Прогресс в диагностике и профи лактике различных заболеваний человека в последние годы стал возможен благодаря созданию универсальных, специфичных и высокочувствительных средств современного иммунохимического анализа (ИХА), среди которых основное место заняли иммуноферментный и радиоиммунный анализ (ИФА и РИА). ИХА позволяет проводить изучение концентраций различных биоре гуляторов, гормонов, транспортных белков, опухолевых маркеров, эффек торных молекул и др. с высоким уровнем чувствительности (10 -9- 10 - моль/л) и тем самым оценивать функциональное состояние различных регу ляторных систем организма в норме и патологии. Однако, широкое внедре ние методов ИХА в практику сдерживается отсутствием научно обоснованных рекомендаций по их применению при конкретных формах па тологии.

Особое место среди основных заболеваний человека занимает патоло гия щитовидной железы (ЩЖ). Результаты проводимых исследований пока зывают, что в последние годы среди населения нашей Республики возросло количество заболеваний ЩЖ. Так, заболеваемость гипертиреозом возросла в 1,3 раза по сравнению с 1997 годом и составила в 2002 году около 8 случаев на 100 тысяч населения, а гипотиреозом - в 3,8 раза и составила около случаев на 100 тысяч населения. В то же время количество тиреоидитов, ко торые могут приводить к развитию гипотиреоза, увеличилось в 2 раза. Таким образом можно предположить, что тенденция к росту заболеваемости гипо тиреозом в дальнейшем будет сохраняться. Перечень приоритетных научных исследований по проблеме ликвидации медицинских последствий аварии на ЧАЭС, определенный Всемирной организацией здравоохранения, включает и изучение патологии ЩЖ.

Важным аспектом этой проблемы является выявление ранних докли нических форм заболеваний ЩЖ и изучение роли иммуноэндокринных ме ханизмов в их патогенезе. Разработка и использование для этих целей высо кочувствительных и специфичных методов ИХА позволяет приблизиться к решению этой проблемы.

Связь работы с крупными научными программами, темами. Ис следования выполнялись в рамках тем: “Разработка и внедрение на основе радиоиммуноанализа автоматизированной системы донозологического скри нинга и мониторинга скрытых нарушений функции щитовидной железы”, Республиканская научно-техническая программа “Информатизация РБ”, но мер госрегистрации 19972003;

“Изучение регуляторных механизмов иммун ного гомеостаза: патогенетическая и прогностическая роль нарушений анти телосинтезирующей функции иммунной системы”, грант Фонда фундамен тальных исследований РБ, номер госрегистрации 20002885;

“Изучение функ ционального состояния системы “гипофиз - щитовидная железа” у здоровых лиц, проживающих в г. Минске, с помощью современного иммунохимиче ского анализа и на основе выявленных нарушений создание банка данных по гипо- и гипертиреоидному статусу для проведения динамического слежения за развитием патологии”, грант Министерства образования РБ, номер госре гистрации 20011478.

Цель исследования. Оценить использование средств ИХА для диагно стики доклинических нарушений функционирования системы “гипофиз– щитовидная железа”, изучения иммунопатогенеза субклинического и клини чески выраженного гипотиреоза и определения клинико-диагностической, патогенетической и прогностической значимости выявленных нарушений с помощью разработанных количественных критериев.

Задачи исследования. Для достижения цели были поставлены и реше ны следующие задачи:

1. Определить концентрации регуляторов тиреоидного статуса (тирео тропного гормона, тироксина, трийодтиронина, тироксинсвязывающего гло булина, тиреоглобулина) и аутоантител к тиреоглобулину у практически здо ровых лиц трудоспособного возраста и на этой основе выделить группы рис ка по гипер- и гипотиреоидному признакам;

2. Идентифицировать и количественно оценить уровень аутоантител к тиреоглобулину, тиреопероксидазе и микросомальной фракции тироцитов, определить их принадлежность к подклассам иммуноглобулинов G (G1-G4) и оценить патогенетическую роль в развитии субклинического и клинически выраженного гипотиреоза;

3. Изучить степень выраженности сенсибилизации лимфоцитов к анти генам ЩЖ (тиреоглобулину и тиреопероксидазе) и продукцию ими интерферона и оценить роль клеточного звена иммунитета в патогенезе ги потиреоза различных стадий;

4. Разработать методику иммуноферментного анализа Fas-рецептора и с его помощью оценить роль механизмов апоптоза в патогенезе субклиниче ского и клинически выраженного гипотиреоза;

5. Изучить возможности использования ИХА для оценки клинико патогенетической значимости выявленных нарушений при гипотиреозе.

Объект и предмет исследования. Объект исследования - здоровые лица трудоспособного возраста (18-45 лет), лица с субклиническим гипоти реозом и пациенты с клинически выраженным гипотиреозом (больные ауто иммунным тиреоидитом, находящиеся на диспансерном учете в Республи канском консультативном эндокринологическом центре МЗ РБ).

Предмет исследования - регуляторы тиреоидного статуса (тиреотроп ный гормон гипофиза - ТТГ, тироксин – Т4, трийодтиронин – Т3, тироксин связывающий глобулин - ТСГ и тиреоглобулин - ТГ), показатели гумораль ного и клеточного звеньев иммунорегуляции - аутоантитела к ТГ (АТ-ТГ), микросомальной фракции (АТ-МСФ) и тиреопероксидазе (АТ-ТПО) различ ных подклассов G1-G4 иммуноглобулинов G (IgG), – интерферон, Fas – ре цептор (FasR) и антигены ЩЖ – ТПО и ТГ. Все перечисленные показатели были изучены в сыворотке крови обследуемых лиц.

Гипотеза. С помощью средств современного ИХА возможна разработ ка количественных критериев оценки функционального состояния различных регуляторных звеньев иммуноэндокринного статуса и на этой основе диагно стика доклинических форм патологии, формирование групп риска для после дующего динамического слежения и изучения патогенеза заболевания (на примере субклинического и клинически выраженного гипотиреоза).

Методы проведенного исследования. Для выполнения исследования использованы следующие методы:

- радиоиммуноанализ тиреоидных гормонов (ТТГ,Т4,Т3) и белков (ТСГ,ТГ);

- радиоиммунный и иммуноферментный анализ АТ-ТГ, АТ-МСФ и АТ-ТПО;

- иммуноферментный анализ подклассов IgG, формирующих АТ-ТГ и АТ ТПО;

- оценка пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови в присутствии неспецифического митогена (фитогемагглютинина) и антигенов ЩЖ (ТГ и ТПО);

- иммуноферментный анализ концентрации -интерферона;

- иммуноферментный анализ концентрации растворимой формы FasR;

- методы компьютерной обработки данных и математической статистики:

описательная статистика, критерий Стьюдента, дисперсионный анализ и кри терий Ньюмена-Кейсла.

Научная новизна и значимость полученных результатов Впервые разработана научно-обоснованная методология использова ния количественного ИХА для проведения скрининга и комплексной оценки тиреоидного статуса здоровых лиц с целью выявления скрытых донозологи ческих нарушений функционирования системы “гипофиз-щитовидная желе за”, достоверного разграничения состояний эу-, гипер- и гипотиреоза и фор мирования на основе выявленных нарушений групп риска для последующего динамического слежения за развитием патологии.

Обнаружено повышение уровня аутоантител к тиреоглобулину, тирео пероксидазе и микросомальной фракции тироцитов при субклиническом и клинически выраженном гипотиреозе, которое нарастает по мере развития гипотиреоза. Полученные результаты обосновывают использование сочетан ного ИХА двух и более антитиреоидных аутоантител с целью повышения эффективности диагностики и оценки степени выраженности аутоиммунных нарушений в организме.

Впервые обнаружены различия в распределении аутоантител к ТГ и ТПО по подклассам (G1-G4) IgG, что может быть одним из патогенетических механизмов аутоиммунных нарушений в силу различного повреждающего действия подклассов IgG на ткань ЩЖ.

Выявлено повышение интенсивности пролиферативного ответа лим фоцитов периферической крови под влиянием антигенов ЩЖ – ТГ и ТПО у лиц с различными формами гипотиреоза, что доказывает возможность их ис пользования для оценки степени выраженности аутосенсибилизации и имму нореактивности на антигены ЩЖ при гипотиреозе.

Разработан новый метод иммуноферментного анализа концентрации FasR - маркера апоптоза и доказана возможность использования этого теста в качестве дифференциально-диагностического, патогенетического и прогно стического критерия при патологии ЩЖ различного генеза.

Практическая значимость полученных результатов Разработана научно-обоснованная методология использования средств современного ИХА в медицинской практике в норме и при патологии (на примере различных форм гипотиреоза) для выявления ранних донозологиче ских нарушений функции ЩЖ, достоверного разграничения состояний эу-, гипер- и гипотиреоза, формирования на основе выявленных нарушений групп риска для последующего динамического слежения за развитием пато логии, обоснования проведения индивидуальных лечебно-профилактических мероприятий;

диагностики и изучения патогенеза различных стадий гипоти реоза.

Рекомендовано использование сочетанного ИХА двух и более аутоан тител для повышения эффективности диагностики и оценки степени выра женности аутоиммунных нарушений.

Определена дифференциально-диагностическая, патогенетическая и прогностическая значимость ИФА концентрации FasR – маркера апоптоза при патологии ЩЖ различного генеза.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Иммунохимический анализ является адекватным и надежным лабо раторным методом для разработки количественных критериев оценки функ ционирования различных звеньев иммуноэндокринного статуса в норме и па тологии при субклиническом и клинически выраженном гипотиреозе;

выяв ления доклинических нарушений функционирования системы “гипофиз– щитовидная железа” и достоверного разграничения их по принципу эу-, ги пер- и гипотиреоза;

формирования групп риска на основе выявленных нару шений для последующего слежения за развитием патологии.

2. Повышение содержания различных типов антитиреоидных аутоан тител при развитии гипотиреоза обосновывает использование сочетанного ИХА двух и более аутоантител к антигенам ЩЖ в целях повышения эффек тивности диагностики и оценки степени выраженности аутоиммунных нару шений. Различия в распределении АТ-ТГ и АТ-ТПО по подклассам (G1-G4) IgG могут быть одним из патогенетических механизмов аутоиммунных на рушений в силу разного повреждающего действия подклассов IgG на ткань ЩЖ.

3. Повышение пролиферативной активности лимфоцитов под действи ем ТГ и ТПО у лиц с различными формами гипотиреоза подтверждает воз можность использования антигенов ЩЖ для оценки степени выраженности аутосенсибилизации и иммунореактивности при гипотиреозе различных ста дий.

4. Изменение уровня FasR при различных формах гипотиреоза под тверждает роль механизмов апоптоза в его патогенезе, а концентрация FasR может служить количественным дифференциально – диагностическим, пато генетическим и прогностическим критерием при патологии ЩЖ различного генеза.

Личный вклад соискателя. Организация и проведение эксперимен тальных исследований, статистическая обработка полученных результатов, анализ литературы, обобщение результатов, написание работы и выводов выполнены лично автором. Основные результаты работы, полученные по данным обследования 767 человек, выполнены с участием автора. Планиро вание экспериментов, теоретическое обсуждение и оформление результатов в виде статей проводилось совместно с научным руководителем.

Апробация результатов диссертации. Материалы диссертационной работы были представлены и обсуждены на: Республиканских конференциях молодых ученых и студентов "Сахаровские чтения" ( Минск, 23-24 мая г.;

Минск, 21-22 мая 2001 г.);

Третьей Международной конференции моло дых ученых "Экологические проблемы XXI века" (Минск, 1-2 ноября г.), 6-й Международной научной конференции “Дни иммунологии в Санкт Петербурге” (Санкт-Петербург, 20-23 мая 2002 г.);

6-й Международной шко ле иммунологов Джона Хамфри (Москва - Пущино, 15-22 сентября 2002 г.), XXII Европейском конгрессе аллергологов и клинических иммунологов (Па риж - Франция, 7-11 июня 2003 г.), 7-м Всероссийском научном Форуме с международным участием им. акад. В.И. Иоффе “Дни иммунологии в Санкт Петербурге” (Санкт-Петербург, 23-26 июня 2003 г).

Опубликованность результатов. Основное содержание диссертации изложено в 17 научных работах, из них - 3 статьи в рецензируемых журналах, 14 научных работ в сборниках материалов и конференций, из них – 9 в меж дународных изданиях. Суммарный объем опубликованных материалов со ставляет 41 страницу.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 129 стра ницах машинописного текста, иллюстрирована 16 таблицами (14 страниц) и 18 рисунками (9 страниц). Состоит из введения, общей характеристики рабо ты, обзора литературы, материалов и методов, четырех глав собственных ис следований и обсуждения результатов, заключения и выводов, списка ис пользованных источников, включающего 81 работу отечественных и 246 ра бот иностранных исследователей.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Донозологическая диагностика нарушений функции щитовид ной железы Для изучения возможности использования одного из методов ИХА радиоиммуноанализа (РИА) в целях массового скрининга здорового населе ния трудоспособного возраста, выявления доклинических нарушений функ ционального состояния регуляторной системы "гипофиз - щитовидная желе за" и формирования на основе выявленных нарушений групп риска для орга низации последующего динамического слежения за развитием патологии в течение 1999-2002 гг. нами было проведено комплексное клинико лабораторное обследование 727 практически здоровых лиц в возрасте от до 45 лет без жалоб и клинических нарушений со стороны ЩЖ. Комплексное клинико-лабораторное обследование включало сбор анамнеза, осмотр спе циалиста – эндокринолога, проведение ультразвукового исследования ЩЖ и РИА концентраций тиреоидных гормонов и белков (ТТГ, Т3, Т4, ТСГ, ТГ и АТ-ТГ).

В результате проведенных исследований были выявлены различные формы гипертиреоза у 209 человек (28,8%), в то время как у 215 лиц (29,7%) был выявлен гипотиреоз. У 303 обследуемых (41,5%) не были обнаружены изменения в концентрациях тиреоидных гормонов и белков, что позволило отнести их в группу здоровых лиц. Значения изученных показателей в кон трольной группе и сформированных группах риска приведены в таблице 1.

Таблица Концентрации тиреоидных гормонов и белков (M±m) у обследуемых лиц Форма Число Изучаемые соединения обсл. ТТГ, Т3, Т4, ТСГ, ТГ, АТ-ТГ (%) мМЕ/л нмоль/л нмоль/л мкмоль/л нг/мл ЕД/мл ЗДОРОВЫЕ ЛИЦА 1,7±0,06* 2,32±0,5* 109,9±1,8* 0,52±0, Здоровые 303 39±7,4 13,1±2, ГИПЕРТИРЕОЗ 0,2±0,07*,^ 2,56±0,2*, Субклини- 197 28±3,2 14,5±0, 120±4,2 0,33±0, ческий (94,2%) 0,1±0,03*, ^ 2,9±0,3*, ^ 188,6±4,4*, ^ Клиниче- 12 49,8±0, 0,37±0,01 7,4± ски выра- (5,8%) женный ГИПОТИРЕОЗ 19,5±0,6*, ^ 1,92±0, Субкли- 207 24,6±1, 107,1±1,5 0,37±0,01 7,7± нический (96,3%) 20,8±3,7*, ^ 1,15±0,09 48±3,5*, ^ Клиниче- 8 12±4,8 78,7±8, 0,33±0, ски выра- (3,7%) женный * - различия с показателями нормы достоверны при р0,05, ^ - различия с группой здоровых лиц достоверны при р0,05.

Как видно из таблицы у лиц с гипертиреозом преобладала субклиниче ская форма, которая характеризовалась снижением уровня ТТГ на фоне нор мального содержания Т3, Т4, ТСГ и ТГ. Клинически выраженный гипертире оз характеризовался значительным снижением концентрации ТТГ и повыше нием уровня Т3 и Т4. Содержание ТСГ и ТГ оставалось в пределах нормаль ных значений.

Состояние гипотиреоза выявлено у 215 чел. (29,7%), при этом среди лиц с выявленным гипотиреозом также преобладала субклиническая форма, которая характеризовалась повышением концентрации ТТГ на фоне нор мального содержания Т3, Т4, ТСГ и ТГ. Клинически выраженный гипотиреоз характеризовался снижением концентрации Т3 и Т4, повышением уровня ТТГ на фоне нормального содержания ТСГ и ТГ.

Изучение характера выявленных в функциональной системе “гипофиз – щитовидная железа” нарушений в зависимости от возраста и пола обсле дуемых лиц показало, что у лиц в возрасте 18-19 лет в 25% (59) случаев был выявлен гипотиреоз и 28,4% (67) - гипертиреоз;

20-29 лет – в 37,4% (123) и 26,6% (91);

30-39 лет – в 20% (23) и 33,9% (39) и 40-45 лет – в 14,7% (5) и 35,2% (12) соответственно. Гипертиреоз был выявлен в 42,5% (94) случаев среди обследованных женщин и в 23% (116) случаев среди мужчин, в то вре мя как гипотиреоз – в 10,8% (24) и 38% (192) случаев соответственно и 46,7% (105) из обследованных женщин и 39% (196) из обследованных мужчин были отнесены в группу здоровых лиц.

Таким образом проведенные исследования доказали возможность ис пользования РИА для выявления донозологических нарушений функции ЩЖ в виде гипер- и гипотиреоза различных стадий и на этой основе формирова ния групп риска для организации последующего динамического слежения за развитием патологии.

Скрытые нарушения в функционировании эндокринного звена “гипо физ – щитовидная железа” обнаружены более чем у половины обследуемых лиц, причем у лиц более молодого возраста (18-29 лет) преобладал гипотире оз, в то время как у лиц старше 30 лет - гипертиреоз. Другим важным резуль татом можно считать факт обнаружения доклинической патологии у мужчин в большем проценте случаев, чем у женщин, при этом доминирующим нару шением функции ЩЖ у них являлся гипотиреоз, в то время как у женщин – гипертиреоз.

На основе полученных показателей тиреоидного статуса был проведен сравнительный анализ значений концентрации регуляторов тиреоидного ста туса в группе здоровых лиц (контрольная группа) и общепринятых показате лей “нормы”, отраженных в инструкциях к соответствующим наборам. В ре зультате этого сравнения были обнаружены достоверные различия (р0,05) в значениях концентрации этих двух групп показателей: ТТГ (1,66±0,06 мМЕ/л - концентрация полученная при обследовании здоровых лиц, 2,9±0,2 МЕ/л общепринятый показатель “нормы”), Т4 (109,9±1,8 нмоль/л и 100,±2, нмоль/л соответственно), Т3 (2,32±0,05 нмоль/л, при показателе “нормы” 1,54±0,03 нмоль/л). Обнаруженные различия значений концентрации ТТГ, Т и Т3 у здоровых лиц, характеризующие функционирование как центрального, так и периферического звеньев системы “гипофиз - щитовидная железа” мо гут служить основанием для обсуждения, на наш взгляд, важного вопроса:

какова взаимосвязь между уровнем “нормальных” показателей и интерпрета цией выявляемых на их основе нарушений функции ЩЖ.

В связи с этим полученные показатели тиреоидного статуса были ин терпретированы и на основе использования показателей “нормы”, получен ных в наших исследованиях у здоровых лиц. В результате такого подхода произошло “перераспределение” обследуемых лиц по группам со скрытым гипер- и гипотиреозом (табл.2), которое проявлялось в “снижении” как числа лиц с доклиническими нарушениями функционирования системы “гипофиз щитовидная железа”, так и соответственно числа лиц, которые были отнесе ны в группы с гипер- и гипотиреозом, т.е. среди обследуемых лиц произошел сдвиг в сторону “оздоровления”.

В случаях с гипертиреозом по-прежнему преобладала субклиническая его форма. При гипотиреозе уменьшалось число лиц с субклинической и клинически выраженной стадиями гипотиреоза. Таким образом, использова ние общепринятых показателей “нормы” для тиреоидных гормонов и белков приводит к “завышению” числа случаев с нарушениями функции ЩЖ.

Таблица Сравнительная характеристика тиреоидного статуса обследуемых лиц, полу ченная на основе различных показателей “нормы” тиреоидных гормонов Всего из них:

обсле Здоро ГИПЕРТИРЕОЗ: ГИПОТИРЕОЗ:

дова- вые Всего в том числе всего в том числе:

но: лица На основании Субкли 197 Субкли общеприня- нический 94% нический 96,3% тых показате Клинически 12 215 Клиниче- лей "нормы" 727 303 28,8% выраженный 6% 29,7% ски выра- 3,7% 41,5% женный На основании Субкли 15 Субкли выявленных нический 48,4 нический 98% показателей % “нормы” в 727 491 31 203 Клиниче Клинически 16 группе здоро- 67,5% 4,3% 28,2% ски выра выраженный 51,6 2% вых лиц % женный (1999-2002) На наш взгляд, использование значений показателей “нормы”, получен ных в наших исследованиях, более объективно и адекватно отражает функ циональное состояние изучаемой эндокринной системы в новых экологиче ских условиях, возникших на территории Республики Беларусь спустя 18 лет после аварии на ЧАЭС. Все вышеизложенное дает основание поставить во прос о необходимости пересмотра существующих показателей "нормы" для регуляторов тиреоидного статуса и разработки новых региональных показа телей, отражающих истинный уровень регуляции, характерный для населе ния республики Беларусь 2. Иммунохимическая диагностика аутоиммунного поражения ЩЖ и изучение его роли в патогенезе различных форм гипотиреоза Концентрация аутоантител к ТГ, МСФ и ТПО как количественный критерий развития аутоиммунного процесса. Уровень аутоантител к ТГ, предшественнику синтезируемых из него периферических гормонов ЩЖ, МСФ – основному компоненту тироцитов и ТПО, ключевому ферменту гор моногенеза, определяли методами РИА и ИФА. Полученные результаты представлены в таблице 3.

Таблица Концентрация АТ-ТГ, АТ-МСФ и АТ-ТПО в сыворотке крови у здоровых лиц, лиц с субклиническим и клинически выраженным гипотиреозом Обследуемые группы АТ - ТГ АТ – МСФ АТ - ТПО Ед/мл МЕ/мл МЕ/мл Здоровые лица, (n=34) 25,58±1,83 32,33±4,58 8,9±0, 98,74±3,1* ** 96,91±6,99* ** 53,34±1,44*,**, Лица с субклиническим ги потиреозом, (n=42) Лица с клинически выражен- 785,45±13,8* 742,23±65,8* 216,52±9,45* ным гипотиреозом, (n=40) * - достоверность различий с контрольной группой p0,05, ** - достоверность различий с клинически выраженным гипотиреозом p0,05.

Как видно из таблицы концентрация АТ-ТГ в группе лиц с субклини ческим гипотиреозом был выше в 3,9 раза по сравнению с контрольной груп пой, а в группе с клинически выраженным гипотиреозом – в 30 раз. Уровень АТ-МСФ в группе лиц с субклиническим гипотиреозом был выше 2,9 раза, а в группе с клинически выраженным гипотиреозом – в 23 раза по сравнению со здоровыми лицами. Концентрация АТ-ТПО при субклиническом гипоти реозе была в 6 раз выше, а при клинически выраженном гипотиреозе – в раза выше по сравнению с контрольной группой. Таким образом, обнаружено значительное повышение концентрации всех изученных разновидностей ау тоантител уже на стадии субклинического гипотиреоза, которое значительно возрастало по мере развития гипотиреоза. Обнаруженная динамика концен траций аутоантител доказывает сочетанное прогрессирование аутоиммуниза ции и гипофункции ЩЖ по мере развития патологии.

Так как ТПО является основной частью микросомальной фракции ЩЖ, мы провели корреляционный анализ связи между значениями концентраций этих АТ в изучаемых группах. Была установлена прямая корреляционная связь уровня АТ-МСФ и АТ-ТПО, при этом коэффициент корреляции соста вил 0,9 (p0,05). Полученные результаты указывают на возможность исполь зования для диагностики аутоиммунных тиреоидных нарушений одного из двух изученных видов аутоантител (АТ-ТПО или АТ-МСФ), так как прове денные исследования показали их взаимозаменяемость.

Анализ распределения аутоантител к ТГ и ТПО среди обследованных лиц показал, что среди лиц с субклиническим гипотиреозом у 36% было вы явлено повышение концентрации АТ-ТГ, а у 24% - только АТ-ТПО, сочетан ное повышение АТ-ТГ и АТ-ТПО обнаружено у 29%, а у 11% обследуемых концентрации АТ-ТГ и АТ-ТПО оставались в пределах нормы. Среди лиц с клинически выраженным гипотиреозом у 18% обнаружено увеличение коли чества только АТ-ТГ. В 72% случаев отмечалось сочетанное повышение уровня АТ-ТГ и АТ-ТПО. У 10% обследуемых концентрации АТ-ТГ и АТ ТПО оставались в пределах нормы. Полученные результаты показывают, что у лиц с субклиническим гипотиреозом в большем числе случаев присутству ют АТ-ТГ, в то время как при клинически выраженном гипотиреозе преобла дают лица с повышением концентрации двух типов аутоантител (АТ-ТГ и АТ-ТПО). В то же время в обеих изучаемых группах у 10% обследуемых не обнаружено повышения концентрации АТ-ТГ и АТ-ТПО, что, вероятно, мо жет быть проявлением индивидуальной гипореактивности иммунной систе мы на конкретный аутоантиген, опосредуемой в некоторых случаях дефекта ми Ir-генов – генов иммунного ответа (Immune response).

Исходя из полученных результатов можно заключить, что сочетанный ИХА двух и более видов антитиреоидных аутоантител существенно повыша ет эффективность лабораторной верификации аутоиммунного поражения ЩЖ.

Патогенетическая роль аутоантител к ТГ и ТПО различных под классов Ig G. Известно, что АТ-ТГ и АТ-ТПО, в основном, принадлежат к IgG, однако, их принадлежность к различным подклассам IgG (G1-G4) при гипотиреозе мало изучена. Между тем подклассы IgG различаются по функ циям, выполняемым ими в организме, что обусловлено различиями в струк туре тяжелых цепей иммуноглобулиновой молекулы. В связи с этим мы про вели ИФА концентраций IgG и их подклассов, формирующих АТ-ТГ и АТ ТПО у лиц с различными формами гипотиреоза.

Концентрация IgG, представленных АТ-ТГ, у здоровых лиц была равна 15,6±0,5 нг/л, в то время как у лиц с субклиническим и клинически выражен ным гипотиреозом она была достоверно выше (p0,05) и составляла 63,29±0,7 нг/л и 322,27±1,2 нг/л соответственно. Для удобства анализа был рассчитан удельный вес (в процентах) подклассов АТ-ТГ-IgG у всех обсле дованных лиц, что представлено на рисунке 1.

Анализ удельного веса подклассов IgG, формирующих АТ- ТГ у всех обследованных лиц показал, что у здоровых лиц большую часть АТ-ТГ со ставляли IgG2 и IgG3. У лиц с субклиническим гипотиреозом увеличивалось количество IgG4 почти до 30% от общего числа иммуноглобулинов, а уро вень IgG2 имел тенденцию к снижению (до 20%). В то же время у лиц с кли нически выраженным гипотиреозом основная масса АТ-ТГ была представле на IgG2 и IgG4. В целом с нарастанием гипофункции ЩЖ возрастал удель ный вес IgG4 на фоне снижения количества IgG2 и IgG3. Таким образом, ре зультаты исследования показали, что АТ-ТГ, в основном, представлены IgG и IgG4, которые не способны активировать комплемент, и в связи с этим, воз можно, они не оказывают серьезного повреждающего действия на клетки ЩЖ.

42,8 40, 33, 27, 27, 19,1 20, 17,4 16, 18, 14, G 1% G2 % G3 % G4 % З д оровы е л ица Л ица с субкл иническим гип отиреозом Л ица с кл инич ески вы раж енны м гип отиреозом Рис.1. Содержание подклассов IgG (%), формирующих АТ-ТГ, у здоровых лиц и лиц с различными формами гипотиреоза В группе с субклиническим гипотиреозом общее количество IgG, пред ставленных АТ-ТПО, составило 162,6 ±2,9 нг/л, а у лиц с клинически выра женным гипотиреозом - 265±1,9 нг/л и было достоверно выше (p0,05) по сравнению с группой здоровых лиц (15,6±1,5 нг/л). Удельный вес подклассов АТ-ТПО-IgG у всех исследуемых представлен на рис.2.

У лиц с различными формами гипотиреоза преобладали IgG1 и IgG4. По сравнению с распределением по подклассам АТ-ТГ шло увеличение доли IgG1, на фоне незначительной тенденции к снижению других подклассов – IgG2 – IgG4. И по мере развития гипотиреоза увеличивался удельный вес IgG1 на фоне достаточно высокого уровня IgG4. Таким образом, значитель ную долю АТ-ТПО составляли IgG1(37,7%), которые как известно, активи руют комплемент по классическому пути и осуществляют “антителозависи мую клеточно-опосредованную цитотоксичность”. В силу этого можно пред положить, что именно этими факторами обусловлены более выраженные де структивные свойства АТ-ТПО по сравнению с АТ-ТГ.

4 8, 4 3, 3 7, 3 5, 3 0, 2 0, 1 8,6 1 7, 1 4, 1 2,4 1 1, 8, G 1% G2 % G3 % G4 % З д о р о в ы е лиц а Л иц а с суб клинич е с ким гипо тир е о зо м Л иц а с клинич е ск и вы р а ж е нны м гипо тир е о зо м Рис.2. Содержание подклассов IgG (%), формирующих АТ-ТПО, у здоровых лиц и лиц с различными формами гипотиреоза 3. Участие клеточного звена иммунитета в патогенезе гипотиреоза Изучение сенсибилизации и иммунореактивности лимфоцитов на антигены ЩЖ. Была изучена пролиферативная активность лимфоцитов пе риферической крови у здоровых лиц и лиц с различными формами гипотире оза под действием общепринятого неспецифического митогена – фитоге магглютинина (ФГА) и антигенов ЩЖ - ТГ и ТПО с целью оценки возмож ности использования этих антигенов в реакции пролиферации лимфоцитов.

Обнаружена тенденция повышения уровня спонтанной пролифератив ной активности лимфоцитов периферической крови у лиц с субклиническим (161,18±3,58 имп/мин) и клинически выраженным (169,4±7,24 имп/мин) ги потиреозом по сравнению с контрольной группой (149,78±3,43 имп/мин), что свидетельствует об активации лимфоцитов у лиц с нарушениями функции ЩЖ.

Пролиферативная активность лимфоцитов, индуцированная ФГА и оце ненная через индекс пролиферации (ИП), у лиц с субклиническим (87,71±8,02) и клинически выраженным (51,37±3,1) гипотиреозом была дос товерно (p0,05) ниже, чем в контрольной группе (93,6±2,13).

ИП лимфоцитов под влиянием антигена - ТГ у лиц с субклиническим (3,29±0,14) и клинически выраженным гипотиреозом (3,14±0,24) был практи чески одинаков, но достоверно (p0,05) выше по сравнению со здоровыми лицами (0,8±0,12) - в 4,1 и 3,9 раза соответственно.

Величина ИП при культивировании с ТПО у лиц с субклиническим ги потиреозом (3,54±0,18) была в 4,2 раза, а при клинически выраженном гипо тиреозе (4,89±0,37) - в 5,5 раз выше (p0,05), чем у здоровых лиц (0,89±0,07).

Пролиферативная активность лимфоцитов при клинически выраженном ги потиреозе была выше (p0,05), чем при субклиническом гипотиреозе. Выяв ленные различия уровня пролиферации лимфоцитов периферической крови под действием ТГ и ТПО у лиц с субклиническим и клинически выраженным гипотиреозом позволяют говорить о сенсибилизации лимфоцитов к антиге нам ЩЖ, выраженность которой возрастает по мере прогрессирования гипо тиреоза. Полученные результаты позволяют обосновать использование ТГ и ТПО для изучения механизмов аутосенсибилизации и иммунореактивности на антигены ЩЖ.

Клинико-диагностическая и патогенетическая роль -интерферона в развитии гипотиреоза. С целью оценки роли клеточного звена иммунорегу ляции в патогенезе гипотиреоза нами была изучена и концентрация -IFN в сыворотке крови здоровых лиц и лиц с различными формами гипотиреоза в силу доказанного участия его в различных реакциях клеточного иммунитета, опосредованных цитотоксическими CD8+-Т-лимфоцитами, CD4+- T хелперами 1 типа, натуральными киллерами и др.

Результаты оценки концентрации -IFN методом твердофазного ИФА показали, что уровень -IFN у лиц с субклиническим гипотиреозом был выше в 21 раз, а у лиц с клинически выраженным гипотиреозом - в 25 раз по срав нению с контрольной группой (табл. 4). Однако, между группами лиц с суб клиническим и клинически выраженным гипотиреозом не выявлено стати стически достоверных различий концентраций -IFN.

Таблица Концентрация -IFN (M±m) в сыворотке крови здоровых лиц и лиц с различными формами гипотиреоза -IFN (МЕ/мл) Обследуемые группы Здоровые лица – контрольная группа, (n=34) 0,05±0, Лица с субклиническим гипотиреозом, (n=42) 1,06±0,03* Лица с клинически выраженным гипотиреозом, (n=40) 1,25±0,09* * - достоверность различий с контрольной группой p0,05.

Обнаруженное повышение уровня -IFN при гипотиреозе различных стадий доказывает участие механизмов клеточного звена иммунорегуляции в развитии этой патологии. Однако, отсутствие достоверных различий его кон центраций между донозологической и клинически выраженной формами ги потиреоза позволяет говорить о недостаточной информативности этого теста при изучаемых видах патологии.

4. Патогенетическая роль Fas-рецептора (CD95) – маркера апоптоза в развитии тиреоидной патологии Нами разработан метод иммуноферментного анализа растворимой фор мы Fas-рецептора (sFasR), принцип которого основан на специфическом взаимодействии FasR с моноклональными антителами (МАТ) к нему, иммо билизованными на твердой фазе (полистироловом планшете). Образовав шийся комплекс “МАТ – sFasR” выявляли с помощью МАТ к sFasR другой специфичности, меченных пероксидазой хрена. Количество связавшегося конъюгата определяли с помощью субстрат-хромогенной смеси, регистрируя оптическую плотность (при длине волны 492 нм) на многоканальном спек трофотометре, величина которой находилась в прямой зависимости от кон центрации sFasR.

С помощью разработанного метода была изучена концентрация sFasR у здоровых лиц, лиц с различными формами гипотиреоза и у больных, проопе рированных по поводу рака ЩЖ (группа сравнения) и оценена его диффе ренциально-диагностическая, патогенетическая и прогностическая значи мость. Полученные результаты представлены в таблице 5.

Таблица Концентрация sFasR в сыворотке крови обследуемых лиц (M±m) Обследуемые группы Количество CD95 в УЕ Контрольная группа - здоровые лица, (n=34) 356,9±47, Субклинический гипотиреоз, (n=42) 1035,69±202,6* Клинически выраженный гипотиреоз, (n=40) 763,6±46,18* Рак ЩЖ, (n=15) 106,0±4,79* * - достоверность различий по сравнению с контрольной группой p0,05.

В группе обследуемых с субклиническим гипотиреозом отмечалось по вышение уровня sFasR в 2,9 раза, а у лиц с клинически выраженным гипоти реозом – в 2 раза по сравнению с контрольной группой. В то же время кон центрация sFasR у лиц с раком ЩЖ была снижена в 3 раза по сравнению с контрольной группой. Таким образом концентрация sFasR повышается при гипотиреозе, причем степень этого повышения зависит от стадии гипотирео за: если при субклиническом гипотиреозе экспрессия sFasR достаточно вы сока, то при клинически выраженном она снижается, однако, остается суще ственно выше, чем у здоровых лиц. В то же время у больных раком ЩЖ уро вень sFasR в крови значительно снижен по сравнению с контролем. Все вы шеизложенное позволяет говорить о взаимосвязи характера патологических нарушений в ЩЖ с уровнем экспрессии Fas-рецептора и, тем самым, с функ ционированием системы Fas-рецептор - Fas-лиганд, которая является, по со временным воззрениям, пусковым сигналом апоптоза. Кроме того, снижение уровня FasR по мере прогрессирования гипофункции ЩЖ может служить важным патогенетическим маркером глубоких нарушений механизмов апоп тоза при гипотиреозе и, вероятно, прогностическим критерием риска возник новения опухолевого поражения ЩЖ. В связи с этим мы склонны рекомен довать проведение ИХА концентрации FasR в динамике развития гипотирео за: появление тенденции к снижению уровня FasR, вероятно, требует, более тщательного обследования таких пациентов на предмет исключения онкопа тологии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ По результатам работы сделаны следующие выводы:

1. У здоровых лиц с помощью ИХА выявлены нарушения в функциони ровании системы “гипофиз - щитовидная железа” в виде донозологических форм гипер- и гипотиреоза (58,6% обследуемых). Субклинический гипотире оз обнаружен в 28,4%, а субклинический гипертиреоз – 27,1% случаев от об щего числа обследованных. Выявлены различия между значениями общепри знанных показателей “нормы”концентраций ТТГ, Т3, Т4 и определенных на ми у здоровых лиц, что обосновывает необходимость пересмотра сущест вующих показателей “нормы” для тиреоидных гормонов и белков и разра ботки новых “региональных” показателей для названных соединений, наибо лее адекватно отражающих функциональное состояние эндокринной системы в новых экологических условиях на территории Беларуси [1, 5, 8].

2. Обнаружено повышение уровня аутоантител различной специфично сти (АТ-ТГ, АТ-ТПО/АТ-МСФ, АТ-ТГ + АТ-ТПО/АТ-МСФ) у лиц с субкли ническим и клинически выраженным гипотиреозом. Выявление АТ-ТГ и АТ ТПО при доклинической форме гипотиреоза подтверждает развитие аутоим мунного синдрома на ранней стадии заболевания. По мере развития гипоти реоза повышается процент сочетанного содержания аутоантител (АТ-ТГ + АТ-ТПО/АТ-МСФ) с 29% случаев при субклиническом до 72% - при клини чески выраженном гипотиреозе, что доказывает необходимость проведения ИХА двух и более типов аутоантител в целях повышения эффективности ди агностики аутоиммунного поражения ЩЖ. Прямая корреляция между кон центрациями АТ-МСФ и АТ-ТПО (коэффициент корреляции – 0,9) подтвер ждает взаимозаменяемость этих двух тестов и доказывает возможность ис пользования для диагностики аутоиммунных нарушений одного из двух ти пов аутоантител (АТ-МСФ или АТ-ТПО) [10, 13, 17].

3. Иммунохимический анализ общего IgG и подклассов IgG1-IgG4, формирующих АТ-ТГ и АТ-ТПО, выявил, что при субклиническом гипоти реозе большая часть IgG представлена АТ-ТПО, которые обладают более вы раженным деструктивным воздействием на ткань ЩЖ по сравнению с АТ ТГ. Обнаружены значительные различия в распределении аутоантител по подклассам: среди АТ-ТГ преобладали IgG2, в то время как среди АТ-ТПО – IgG4. Нарастание явлений гипотиреоза приводило к перераспределению этих аутоантител по подклассам: среди АТ-ТГ преобладали IgG2 и IgG4, а АТ ТПО - IgG1 и IgG4. Различия в распределении аутоантител по подклассам IgG могут быть одним из патогенетических механизмов аутоиммунных на рушений из-за разного повреждающего действия подклассов IgG на ткань ЩЖ [12, 15, 16].

4. Повышение индекса пролиферации лимфоцитов периферической кро ви под влиянием антигенов ЩЖ (ТГ и ТПО) у лиц с субклиническим гипоти реозом в 4,1 и 4,2 раза, а у лиц с клинически выраженным гипотиреозом в 3, и 5,5 раз, соответственно, по сравнению со здоровыми лицами, подтверждает возможность их использования в качестве митогенов для оценки степени вы раженности аутосенсибилизации и иммунореактивности при гипотиреозе различных стадий [9, 17].

5. Обнаруженное с помощью разработанного метода ИФА повышение концентрации FasR/CD95 – маркера апоптоза при субклиническом (1035,69±202,6 УЕ) и клинически выраженном гипотиреозе (763,6±46,2) и ее снижение при раке ЩЖ (106,0±4,79) по сравнению со здоровыми лицами (356,9±47,7) доказывает важную роль механизмов апоптоза в развитии пато логии ЩЖ и обосновывает возможность использования этого теста в качест ве дифференциально-диагностического, патогенетического и прогностиче ского критерия при патологии ЩЖ различного генеза [2, 3, 14].

6. ИХА является современным адекватным методом для разработки ко личественных критериев оценки функционирования различных звеньев им муноэндокринного статуса в норме и при патологии (субклиническом и кли нически выраженном гипотиреозе) и использовании их в выявлении донозо логических нарушений функции ЩЖ, изучении патогенетической роли ме ханизмов аутосенсибилизации, иммунореактивности и апоптоза при различ ных формах гипотиреоза [1, 4, 6].

Практические рекомендации 1. РИА (ИФА и др.) тиреоидных гормонов и белков рекомендуется включать в комплексное клинико-лабораторное обследование при проведе нии скрининга здоровых лиц с целью выявления ранних донозологических нарушений функции ЩЖ, достоверного разграничения состояний эу-, гипер и гипотиреоза и формирования на основе выявленных нарушений групп рис ка для последующего динамического слежения за развитием патологии и разработки индивидуальных лечебно-профилактических рекомендаций.

2. С целью диагностики и оценки степени выраженности аутоиммунных нарушений рекомендуется проводить сочетанный ИХА двух и более аутоан тител к антигенам ЩЖ.

3. ИФА концентрации Fas-рецептора рекомендуется в качестве допол нительного критерия при дифференциальной диагностике патологии ЩЖ различного генеза.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИС СЕРТАЦИИ 1. Пивень Н.В., Пилатова Н.Л., Лухверчик Л.Н., Соловей В.В., Кравчук В.Г., Мохорт Т.В. Радиоиммунный анализ в выявлении донозо логических нарушений функционирования системы "гипофиз - щитовид ная железа” // Вести НАН Беларуси, серия биологические науки. – 2001. №2. - С.104-108.

2. Пивень Н.В., Новиков В.В., Лухверчик Л.Н., Кузьменкова Е.И.

Иммуноферментный анализ Fas-рецептора (CD95) у лиц с патологией щитовидной железы // Иммунопатология, аллергология, инфектология. – 2001. - №3. - С.15-20.

3. Пивень Н.В., Лухверчик Л.Н., Орлова Е.Е., Гончарик А.В.

FAS/CD95 – опосредованный апоптоз в патогенезе различных заболева ний (Обзор) // Сб. “Биорегуляторы: Использование и применение”. – Минск, УП “Технопринт”, 2003. – С.53-61.

4. Пивень Н.В., Лухверчик Л.Н., Пилатова Н.Л., Соловей В.В., Кузьменкова Е.И., Кравчук В.Г. Возможности радиоиммуноанализа для выявления ранних донозологических нарушений функции щитовидной железы // Медицинская иммунология (Санкт-Петербург). 1999. - № 3-4.

- С. 80-81.

5. Пивень Н.В., Лухверчик Л.Н. Радиоиммуноанализ (РИА) – ос нова разработки автоматизированной системы донозологического скри нинга и мониторинга нарушений щитовидной железы // Сб. трудов меж дународной конференции иммунологов и аллергологов. – Дагомыс. 2000.- С.332.

6. Пивень Н.В., Лухверчик Л.Н., Кузьменкова Е.И., Соловей В.В.

Создание автоматизированной системы донозологического скрининга и мониторинга нарушений функции щитовидной железы на основе имму нохимического анализа // Сб. трудов съезда иммунологов Республики Беларусь. – Гомель. - 2000 г. - С.265-267.

7. Лухверчик Л.Н. Выявление донозологических нарушений функционирования системы "гипофиз-щитовидная железа" средствами современного иммунохимического анализа // Сб. материалов Республи канской конференции молодых ученых и студентов "Сахаровские чте ния". – Минск. - 2000 г. - С.195-197.

8. Лухверчик Л.Н. Диагностика доклинических нарушений функ ции щитовидной железы с применением средств современного иммуно химического анализа // Сб. материалов Третьей Международной конфе ренции молодых ученных "Экологические проблемы XXI века". – Минск. - 2000 г. - С. 199-201.

9. Лухверчик Л.Н., Шило Е.А. Оценка пролиферативной активно сти лимфоцитов периферической крови у лиц со скрытым и клинически выраженным гипотиреозом // Сб. материалов Республиканской конфе ренции молодых ученых и студентов "Сахаровские чтения". – г.Минск. 2001 г.- С.169-170.

10. Piven N.V., Luchverchik L.N., Kuzmenkova E.I., Solovei V.V., Kravchuk V.G. Reveal of autoantibodies to thyroglobulin and thyroperoxidase in people with latent and clinically obvious hypothyroidism, resulted from autoimmune pathology of thyroid gland // Int. Journal on Immunorehabilita tion. - 2001.- Vol.3, N 1. - P.109.

11. Пивень Н.В., Лухверчик Л.Н. Анализ Fas-рецептора у лиц с па тологией щитовидной железы // Аллергология и Иммунология. - 2001. T.2, №2. - C.120-121.

12. Лухверчик Л.Н., Пивень Н.В., Кузьменкова Е.И. Радиоиммун ный анализ в диагностике нарушений функции щитовидной железы // Сборник тезисов докладов III международного симпозиума “Актуальные проблемы дозиметрии” (15 лет после Чернобыльской катастрофы). – Минск. - 2001г. - С.108-110.

13. Пивень Н. В., Лухверчик Л.Н. Иммунохимический анализ ауто антител к тиреоглобулину и тиреопероксидазе при различных формах гипотиреоза // Медицинская иммунология (Санкт-Петербург). - 2002. – Т.4., №2.-С.203.

14. Luchverchyk L., Piven N. Soluble form of Fas-receptor in patients with thyroid pathology // Sixth John Humphrey advanced summer programme in immunology. – Pushchino. – 2002. - Р.79.

15. Luchverchyk L., Piven N. IgG subclass distribution antithyroid peroxidase and antithyroglobulin antibodies in different forms of hypothyroid ism //

Abstract

Book of XXII Congress of the European Academy of Allergol ogy and Clinical Immunology. – Paris. – 2003. – P.48.

16. Лухверчик Л.Н., Пивень Н.В. Изучение субклассов IgG, форми рующих антитела к тиреопероксидазе и тиреоглобулину при различных формах гипотиреоза // Медицинская иммунология (Санкт-Петербург). 2003. –Т.5, №3-4. - С.259.

17. Piven N., Luchverchyk L. Immunochemical analysis as differential estimation of autoimmune disorders at hypothyroidism development // Int.

Journal on Immunorehabilitation.-2003.- V.5, N 1.-P.84.

.

РЭЗЮМЭ Лухверчык Людмiла Miкалаеўна Iмунахiмiчны аналiз у дыягностыцы i вывучэннi патагенезу розных форм гiпатэрыезу Ключавыя словы: iмунахiмiчны аналiз, гiпатэрыез, шчытападобная залоза, апаптоз, атаiмунiтэт, дыягностыка, патагенез.

Аб'екты i прадмет даследавання: Аб'ект - здаровыя асобы ва ўзросце ад да 45 гадоў, асобы з субклiнiчным гiпатэрыезам i пацыенты з клiнiчна выражаным гiпатэрыезам. Прадмет - рэгулятары тэрыоiднага статусу (тэрыятропны гармон, цiраксiн, трыйодцiранiн, цiраксiнзвязваючы глабулiн и цiраглабулiн), аутаантыце лы да цiраглабулiну (АЦ-ЦГ), мiкрасамальнай фракцыi (АЦ-МСФ) i цiрапераксiда зы (АЦ-ЦПА) розных падкласаў iмунаглабулiнаў G (IgG), – iнтэрферон, Fas – рэ цептар i антыгены шчытападобнай залозы (ШЗ) – ЦГ i ЦПА.

Мэта даследавання: Ацанiць выкарыстанне iмунахiмiчнага аналiзу (IХА) для дыягностыкi парушэнняў функцыянавання сicтэмы “гiпофiз - шчытападобная зало за”, вывучэння iмунапатагенезу субклiнiчнага i клiнiчнага гiпатэрыеза i ацэнкi клiнiка–дыягнастычнай, патагенетычнай i прагнастычнай значнасцi выяўленых па рушэнняў з дапамогай распрацаваных колькасных крытэрыяў.

Метады даследавання: радыяiмунны i iмунаферментны аналiз (IФА), метад ацэнкi пралiфератыўнай актыўнасцi лiмфацытаў, статыстычныя метады.

Навуковыя вынiкi: Упершыню распрацавана навукова-абгрунтаваная мета далогiя выкарыстання сродка сучаснага IХА для правядзення скрынiнгу здаровых асоб шляхам ацэнкi тэрыоiднага статусу з мэтай выяўлення даназалагiчных пару шэнняў функцыянавання сicтэмы “гiпофiз - шчытападобная залоза”, дакладнага размежавання стану эу-, гiпер- i гiпатэрыезу i фармiравання на выснове выяўленых парушэнняў груп рызыкi для наступнага дынамiчнага назiрання за развiццем пата логii. Абгрунтавана перавага выкарыстання спалучанага IХА дзьвюх i больш аўта антыцел да аўтаантыгенаў ШЗ, што павышае эфектыўнасць дыягностыкi i ацэнкi ступенi выяўлення аўтаiмунных парушэнняў. Упершыню выяўлены адрозненні ў размеркаваннi АЦ-ЦГ i АЦ-ЦПА па падкласах IgG, што можа з'яўляцца адным з патагенетычных механiзмаў аўтаiмунных парушэнняў у сілу разнастайнага паш коджваючага дзеяння падкласаў IgG на тканку ШЗ. Паказана магчымасць выкары стання ЦПА i ЦГ у якасцi мiтагенаў для ацэнкi аўтасенсiбiлiзацыi i iмунарэак тыўнасцi пры гiпатэрыезе розных стадый. Даказана дыферынцыяльна дыягнастычная, патагенетычная i прагнастычная важнасць канцэнтрацыi FasR – маркеру апаптозу пры паталогii ШЗ рознага генэзу.

Галiна выкарыстання: клiнiчная i эксперыментальная iмуналогiя, эндакры налогiя, клiнiчная бiяхiмiя.

РЕЗЮМЕ Лухверчик Людмила Николаевна Иммунохимический анализ в диагностике и изучении патогенеза различ ных форм гипотиреоза Ключевые слова: иммунохимический анализ, гипотиреоз, щитовидная желе за, апоптоз, аутоиммунные нарушения, диагностика, патогенез.

Объекты и предмет исследования: здоровые лица в возрасте от 18 до 45 лет, лица с субклиническим гипотиреозом и пациенты с клинически выраженным гипо тиреозом. Предмет - регуляторы тиреоидного статуса (тиреотропный гормон гипо физа, тироксин, трийодтиронин, тироксинсвязывающий глобулин и тиреоглобу лин), аутоантитела к тиреоглобулину (АТ-ТГ), микросомальной фракции (АТ МСФ) и тиреопероксидазе (АТ-ТПО) различных подклассов иммуноглобулина G (IgG), – интерферон, Fas – рецептор (FasR) и антигены щитовидной железы (ЩЖ) – ТПО и ТГ.

Цель работы: Оценить использование ИХА для диагностики доклинических нарушений функционирования системы “гипофиз–щитовидная железа”, изучения иммунопатогенеза субклинического и клинически выраженного гипотиреоза и оценки клинико-диагностической, патогенетической и прогностической значимо сти выявленных нарушений с помощью разработанных количественных критериев.

Методы исследования: радиоиммунный и иммуноферментный анализ (ИФА), метод оценки пролиферативной активности лимфоцитов, статистические методы.

Научные результаты: Впервые разработана научно-обоснованная методоло гия использования средств современного ИХА для скрининга здоровых лиц путем оценки тиреоидного статуса с целью выявления скрытых донозологических нару шений функционирования системы “гипофиз-щитовидная железа”, достоверного разграничения состояний эу-, гипер- и гипотиреоза и формирования на основе вы явленных нарушений групп риска для динамического слежения за развитием пато логии. Обосновано использование сочетанного ИХА двух и более антител к ауто антигенам ЩЖ, что повышает эффективность диагностики и оценки степени вы раженности аутоиммунных нарушений. Впервые обнаружены различия в распре делении АТ-ТГ и АТ-ТПО по подклассам IgG, что может являться одним из пато генетических механизмов аутоиммунных нарушений в силу различного повреж дающего действия подклассов IgG на ткань ЩЖ. Показана возможность использо вания антигенов ЩЖ - ТПО и ТГ в качестве митогенов для оценки аутосенсибили зации и иммунореактивности при гипотиреозе различных стадий. Доказана диффе ренциально-диагностическая, патогенетическая и прогностическая значимость концентрации FasR – маркера апоптоза при патологии ЩЖ различного генеза.

Область применения: клиническая и экспериментальная иммунология, эн докринология, клиническая биохимия.

SUMMARY Lukhverchyk Liudmila Nikolaevna Immunochemical analysis in diagnosis and study of hypothyroidism different forms pathogenesis Key words: immunochemical analysis, hypothyroidism, thyroid gland, apoptosis, autoimmunity disorders, diagnose, pathogenesis.

Object and subject of the study: Object of the study was health’s people in age form 18 to 45 years, patients with lanent hypothyroidism and patients with manifest hy pothyroidism against background of autoimmune thyroiditis. Subject of the study was thyroid hormones and proteins (thyroid-stimulating hormone, triiodthyronine, thyroxine, thyroxine binding globulin and thyroglobulin) and indicators of humoral and cellular immunity - antithyroglobulin antibodies (antiTg Abs)/ anti microcomal antibodies (anti MC abs) and antithyroid-peroxidase antibodies (anti-TPO Abs) of different subclasses (G1-G4) of immunoglobulin G (IgG), – interferon, Fas – receptor (FasR) и autoanti gens of thyroid gland (TG) – TPO and TG.

Purpose of the study: to appreciate possibility of immunochemical analysis (ICA) use for diagnosis of subclinical functional disorders in system “pituitary – thyroid gland”, investigation of hypothyroidism different form immunopathogenesis and estimation of diagnostic, pathogenesis and prognoses significance of the disorders with help quantita tive criteria.

Methods: radioimmunoaasay, enzyme immunoassay, method of estimation of lym phocytes proliferation activity, statistical methods.

Results: It was developed scientific methodology of quantitative ICA use for esti mation thyroid status by health’s people, diagnosis subclinical functional thyroid disor ders, reliable division of hypothyroidism and hyperthyroidism, risk groups formation for further dynamic observation for pathology development. It was substantiated advantage of combination two and more antithyroid Abs immunochemical assay for effective diag nosis of autoimmunity disorders. It was revealed difference in IgG subclass distribution anti-TPO and anti-TG Abs that may be one of autoimmunity pathogenesis mechanisms.

Since subclasses IgG had differences in destroy of thyroid tissue. It was showed possibil ity of TG and TPO use for estimation autosensibility and immunological reactivity to thy roid antigens by hypothyroidism different forms. It was proved differential-diagnostic, pathogenesis and prognosis significance of FasR concentration by thyroid pathology.

Field of application: clinical and experimental immunology, endocrinology, clini cal biochemistry.