Медицинский университет удк 616.351.-006:616-071(576.3+557.2)-036 ачинович сергей леонидович морфологические и иммуногистохимические факторы прогноза при раке прямой кишки

УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ «БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» УДК 616.351.-006:616-071(576.3+557.2)-036 АЧИНОВИЧ Сергей Леонидович МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ПРОГНОЗА ПРИ РАКЕ ПРЯМОЙ КИШКИ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальности 14.03.02 – патологическая анатомия Минск, 2012 Работа выполнена в УО «Гомельский государственный медицинский университет» Научные Голубев Олег Анатольевич, доктор медицинских наук, руководители: профессор, заведующий кафедрой патологической анатомии с курсом судебной медицины УО «Гомельский государственный медицинский университет» Надыров Эльдар Аркадьевич, кандидат медицинских наук, доцент кафедры патологической анатомии с курсом судебной медицины УО «Гомельский государственный медицинский университет» Официальные Недзьведь Михаил Константинович, доктор медицинских оппоненты: наук, профессор кафедры патологической анатомии УО «Белорусский государственный медицинский университет» Басинский Анатолий Викторович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патологической анатомии с курсом судебной медицины УО «Гродненский государственный медицинский университет» Оппонирующая УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов организация: медицинский университет» Защита диссертации состоится «26» октября 2012 года в 14.00 часов на заседании совета по защите диссертаций Д 03.18.02 при УО «Белорусский государственный медицинский университет» по адресу: 220116, г. Минск, пр-т Дзержинского, 83, тел.: 272-55-98, e-mail: [email protected].

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке УО «Белорусский государственный медицинский университет».

Автореферат разослан «» сентября 2012 года.

Ученый секретарь совета по защите диссертаций кандидат медицинских наук, доцент А. И. Герасимович ВВЕДЕНИЕ Известно, что колоректальный рак (КРР) занимает 4-е место в мире в структуре онкологической заболеваемости. Более чем 2/3 новых случаев выявляют в экономически развитых странах (США, Канаде, странах Западной Европы), где КРР занимает 2-е место среди злокачественных новообразований с частотой 20–37 случаев заболевания на 100 000 человек в год [Чиссов В.И, 2006]. Из 800 000 больных КРР, которых ежегодно регистрируют в мире, около 440000 умирают. В развивающихся странах Африки, Азии и Полинезии заболеваемость КРР наименьшая и составляет от 2,7 до 5,7 на 100 000 человек в год [Напалков Н.П. и др., Тимофеев Ю.М. и др., 2004].

По данным канцер-регистра в Республике Беларусь с 1990 по годы заболеваемость раком прямой кишки (РПК) увеличилась в 1,4 раза (с 13,0 до 17,9 на 100 000 населения). Заболеваемость РПК населения в Беларуси в 2010 г. составила 21,0 на 100 000 населения [Поляков С.М. и др., 2011].

За последние годы достигнуты значительные успехи в диагностике и лечении различных форм злокачественных новообразований прямой кишки.

В оценке опухолевого потенциала помимо традиционных критериев (возраст пациента, размер опухоли, форма и темп роста, локализация в различных отделах прямой кишки, наличие регионарных и отдаленных метастазов, гистологическая форма, степень злокачественности) используют молекулярно-генетические маркеры. Одной из актуальных задач современной онкологии является поиск дополнительных параметров опухолей, на основе которых можно было бы оценивать прогноз заболевания и определять адекватную тактику лечения [Напалков Н.П. и др., 2004].

Комплексный анализ факторов, участвующих в поддержании тканевого гомеостаза РПК, включает в себя оценку пролиферативной активности новообразования по экспрессии маркера пролиферации Ki-67 и фактора, регулирующего клеточный цикл – циклина Д1, апоптоза (p53, BCL2), определения относительной плотности сосудов микроциркуляторного русла, определяемого по экспрессии хромогранина А (ХГА). С помощью иммуногистохимического метода (ИГХМ) имеется возможность определить прогностическую значимость иммунных реакций путем изучения плазматических клеток, синтезирующих иммуноглобулин (IgA), характеристику Т-лимфоцитов (CD3) и В-лимфоцитов (CD20) по периферии опухоли, наличие опухолеассоциированных макрофагов (CD68), дендритных клеток, определяемых по экспрессии S100. Благодаря использованию ИГХМ появилась возможность изучения различных вариантов РПК, как медленно прогрессирующих, так и отличающихся быстрым ростом и ранним рецидивированием и метастазированием. Однако до настоящего времени такие исследования часто носят несистематизированный и противоречивый характер.

Между тем, использование традиционных молекулярных маркеров и корреляции их с клинико-морфологическими показателями с применением современных методов статистического анализа позволит получить достоверные данные не только о чувствительности опухоли к различным видам терапии, но и разработать модели индивидуального прогнозирования течения заболевания [Напалков Н.П. и др., 2004;

Чиссов В.И. и др., 2006;

Залуцкий И.В. и др., 2006].

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Связь работы с крупными научными программами и темами Исследование по изучению прогностических факторов при РПК выполнено в рамках задания НИР: «Молекулярно-генетические методы в изучении особенностей регуляции клеточного цикла как вероятной причины онкогенеза у различных групп населения, пострадавшего от катастрофы на Чернобыльской АЭС» в программе совместной деятельности по преодолению последствий Чернобыльской катастрофы в рамках Союзного государства на 2006–2010 гг. (2006–2010 гг.;

№ государственной регистрации 2008348 от 12.03.2008).

Также диссертационное исследование выполнялось в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГУ «РНПЦ радиационной медицины и экологии человека» в рамках Государственной программы Республики Беларусь по преодолению последствий катастрофы на Чернобыльской АЭС на 2006–2010 гг., раздела «Научное обеспечение решения медицинских проблем последствий катастрофы на Чернобыльской АЭС» по заданию: «Оценить уровни и динамику онкологической и неонкологической заболеваемости населения Республики Беларусь, пострадавшего от катастрофы на Чернобыльской АЭС», (03.01.2008– 31.12.2008 гг.;

№ государственной регистрации 20082094 от 15.02.2008).

Тема диссертации соответствует перечню приоритетных направлений фундаментальных и прикладных научных исследований Республики Беларусь на 2006–2010 гг., утвержденному постановлением Совета Министров Республики Беларусь № 512 от 10.05.2005, подраздел «Новые технологии профилактики, диагностики, лечения и реабилитации сердечно-сосудистых, онкологических и других социально значимых заболеваний».

Цель и задачи исследования Цель исследования – разработать методы оценки биологического потенциала рака прямой кишки на основе комплекса клинико морфологических и иммуногистохимических параметров для определения клинических исходов заболевания.

Задачи исследования:

1. Провести комплексную оценку клинико-морфологических параметров рака прямой кишки у пациентов с различными клиническими исходами заболевания и определить их прогностическую значимость.

2. Определить характеристики различных иммуногистохимических параметров рака прямой кишки и уточнить их значение в исходе заболевания.

3. Установить взаимосвязи между клинико-морфологическими и иммуногистохимическими показателями рака прямой кишки для оценки биологического потенциала опухоли у пациентов с различными исходами заболевания.

4. С помощью математического анализа определить значимость изучаемых клинико-морфологических и иммуногистохимических параметров для оценки индивидуального прогноза при раке прямой кишки.

Объект исследования – операционный материал карциномы прямой кишки I–III стадии у пациентов с различной выживаемостью и видами лечения.

Предмет исследования – клинико-морфологические и иммуногистохимические показатели рака прямой кишки I–III стадии у пациентов с различной выживаемостью и видами лечения.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту 1. Продольный размер опухоли более 4-х см, степень распространения опухоли, соответствующая категории рТ4, наличие регионарных метастазов (N1а–2а) в лимфатических узлах accoциируются с низкой выживаемостью у пациентов с раком прямой кишки.

2. У пациентов с раком прямой кишки с низкой выживаемостью чаще определяется гиперэкспрессия маркеров нейроэндокринной дифференцировки ХГА, пролиферации Кi-67, эндотелия сосудов CD34, транскрипционного фактора апоптоза р53. У больных с высокой выживаемостью после радикального лечения чаще выявляется как гиперэкспрессия маркеров фактора апоптоза BCL2 в структурах опухоли, так и гиперэкспрессия кластеров дифференцировки В-лимфоцитов СD20 и макрофагов СD68 по периферии новообразования.

3. Установлены значимые различия между группами пациентов с раком прямой кишки с низкой и высокой выживаемостью по следующим параметрам: категория Т, категория N, категория G, продольный размер опухоли, Кi-67, CD34, ХГА, CD3, СD20.

4. Разработанная нами система моделирования прогноза заболевания методом логистической регрессии с использованием комплекса клинико морфологических и иммуногистохимических параметров позволяет с высокой точностью определять исход болезни.

Личный вклад соискателя Постановка проблемы, формулировка целей и задач исследования, положений, выносимых на защиту, внедрение в практику результатов исследования проведены совместно с научным руководителем. Автором единолично выполнен анализ специальной медицинской литературы, проведена выборка медицинской документации 154 пациентов проживающих в Гомельской области и соответствующих критериям данного исследования. Самостоятельно выполнен весь комплекс исследований гистологических и гистохимических препаратов с использованием светового микроскопа, произведена отработка протоколов иммуногистохимического (ИГХ) выявления р53, BCL2, СD34, СD3, S100, циклина Д1, CD20, СD68, ХГA, IgA, Ki-67, оценка морфометрических и иммуногистохимических исследований.

На протяжении всего исследования выборочно проводился периодический контроль амбулаторных карт больных в течение 10 лет. Автором выполнена статистическая обработка компьютерной базы данных с использованием методов непараметрической статистики, проведен анализ и интерпретация полученных результатов. Определение прогностических факторов, выявление корреляционных связей между клинико-морфологическими параметрами, моделирование клинических исходов у пациентов с РПК лично получены автором и представлены в статьях в рецензируемых журналах. В совместных публикациях вклад соискателя составил: [1–3] – 95%, [7] – 90%. В опубликованных статьях [4–6] вклад диссертанта – 100%.

Полученные данные о значении сочетанной экспрессии иммуногистохимических факторов прогноза при раке прямой кишки отражены также в статьях, тезисах докладов и материалах конференций [8–16], вклад автора в опубликованные работы составил 85%. По теме диссертации получен также патент на изобретение «Раствор для создания разграничивающей линии на предметном стекле при иммуногисто(цито)химических исследованиях» [18]. По теме диссертации была разработана и утверждена инструкция по применению «Иммуногистохимические методы исследования новообразований различного генеза» [17]. Разработанная методика, изложенная в инструкции по применению, внедрена в клиническую практику учреждений здравоохранения Республики Беларусь: ГУ «РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им.

Н.Н. Александрова», ГУ «РНПЦ радиационной медицины и экологии человека», У «Гомельский областной клинический онкологический диспансер», УЗ «Витебское областное клиническое патологоанатомическое бюро», УЗ «Могилевское областное клиническое патологоанатомическое бюро», а также внедрена в клиническую практику учреждений здравоохранения Российской Федерации: ГУЗ «Рязанская областная клиническая больница», ОГБУЗ «Смоленский областной институт патологии», что подтверждается актами внедрения.

Апробация результатов диссертации Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

заседаниях общественного объединения «Белорусское общество патологоанатомов» (Гомель 2005–2007;

Минск, 2011);

конференции молодых ученых Гомельского государственного медицинского университета (Гомель, 2008);

республиканской научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицины»;

17-й итоговой научной сессии Гомельского государственного медицинского университета (Гомель, 2008);

международной научно-практической конференции «Чернобыльские чтения» (Гомель, 2008, 2009, 2010);

научно-практической конференции «Актуальные вопросы морфологической диагностики заболеваний» (Витебск, 2008);

Российско-Белорусской научно-практической конференции «Роль коммуникационных систем в развитии опухолевых процессов» (Смоленск, 2009);

республиканской научно-практической конференции «Актуальные проблемы патологической анатомии» (Гродно, 2010);

на II съезде патологоанатомов Республики Беларусь (Гомель, 2011).

Опубликованность результатов диссертации По тематике исследования опубликовано 17 научных работ, из них: статей в рецензируемых журналах ВАК Республики Беларусь, 7 статей в сборниках конференций, 2 – в тезисах конференций в соавторстве с научным руководителем;

из них в республиканских конференциях – 6, СНГ – 2, с международным участием – 1;

1 утвержденная в МЗ Республики Беларусь инструкция по применению: «Иммуногистохимические методы исследования новообразований различного генеза», регистрационный номер № 160– от 11.02.2011. Без соавторов опубликовано 3 работы. Общее количество опубликованных материалов – 58 страниц, составляющих 3,5 авторских листа. Получены 10 актов о внедрении, 1 патент.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 109 страницах печатного текста и состоит из введения, общей характеристики работы, обзора литературы (глава 1), нозологической характеристики материала и методов исследования (глава 2), результатов собственных исследований, изложенных в главах 3–6, заключения, библиографического списка (218 наименований работ, из них – на русском языке, 191 – на иностранных языках), собственных публикаций соискателя – 18 наименований. Диссертационная работа содержит рисунков, в том числе представленных 38 микрофотографиями, 14 таблиц, формул, 3 приложения.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования В качестве материала использованы гистологические препараты и парафиновые блоки послеоперационного материала (опухолевых структур и краев резекции) 154 пациентов с РПК, которые находились на лечении в У «Гомельский областной клинический онкологический диспансер» с по 2002 год. Вырезка кусочков тканей проводилась в день операции. В дальнейшем все кусочки тканей фиксировали в 10% нейтральном формалине и подвергали стандартной проводке с заливкой в парафин. Из парафиновых блоков готовили срезы толщиной 4 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином и использовали для обзорной микроскопии с последующей реклассификацией и уточнением морфологических особенностей новообразований на основании критериев классификации ВОЗ (2000 г.). Для морфометрического исследования использовался аппаратно-програмный комплекс Nikon с программным обеспечением.

Микропрепараты фотографировали с помощью микроскопа Nicon Eclipse 50i c цифровой фотокамерой DS-F1 в 6 полях зрения. Подсчет параметров производили с использованием пакета прикладных программ анализа изображения.

Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование осуществлялось стрептавидин-биотиновым методом с использованием в качестве системы визуализации Universal LSAB2 KIT корпорации «Dako Cytomation» (Дания) с постановкой положительного и отрицательного контролей. Анализ иммунофенотипа клеток проводился на основании оценки иммуногистохимического окрашивания гистологических срезов с применением моноклональных и поликлональных антител корпорации «Dako Cytomation».

Для проведения ИГХ исследований были использованы: маркер апоптоза BCL2, маркер эндотелиальных клеток – СD34, СD3 – кластер дифференцировки Т-лимфоцитов, S100 – маркер дендритных клеток, циклин Д1 – протеин-регулятор клеточного цикла, CD20 – кластер дифференцировки В-лимфоцитов, СD68 – кластер дифференцировки макрофагов, ХГA – маркер нейроэндокринных клеток, IgA – антитела к секреторному иммуноглобулину А, р53 – транскрипционный фактор, регулирующий клеточный цикл, Ki-67 – нуклеарный протеин, ассоциированный с клеточной пролиферацией. Оценка экспрессии ИГХ маркеров проводилась в 6 случайных полях зрения (объектив 40), исходя из 1000 окрашенных клеток.

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием лицензионной программы Statistica 6.0 (Stat Soft, GS-35F-5899H). Оценка нормальности распределения признаков проводилась с использованием критерия Шапиро-Уилка. Для сравнительной характеристики признаков использованы следующие непараметрические методы: сравнение двух независимых выборок – U-критерий Манна-Уитни, при необходимости сравнения частот встречаемости признаков в различных группах использовали тест 2. За уровень статистической значимости принимался p0,05. Взаимосвязь между показателями определялась методом непараметрического корреляционного анализа с определением коэффициента Тау Кендалла (). При представлении данных были использованы значения медианы (Ме), 25- и 75-го перцентиля: Ме (25%–75%), 95% доверительного интервала (ДИ).

Выживаемость пациентов оценивалась с использованием метода Каплана Майера. Также рассчитывался показатель относительного риска (ОР) наступления события для пациентов, проживших менее 3-х лет (группа с низкой выживаемостью) и более 3-х лет (группа с высокой выживаемостью) после радикального лечения. Показатель ОР, отличающийся от 1, указывал на увеличение (уменьшение) вероятности возникновения события, т.е. изучаемый признак, который является фактором риска (благоприятным фактором).

Результаты считали статистически значимыми при нижней границе 95% ДИ более 1,0. Для комплексной оценки влияния анализируемых факторов и прогноза течения заболевания использовались методы дискриминантного анализа и логистической регрессии [Реброва О.В., 2002].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Пациенты находились в возрасте от 40 до 70 лет. Медиана возраста составила 63,0 (58,0–67,0) лет. Преобладали пациенты в возрасте 55 лет и старше – 47 случаев (85,5%).

Соотношение между мужчинами и женщинами – 1,3/1,0. Длительность жизни пациентов от начала лечения была прослежена во всех наблюдениях в 1, 1, Кумулятивная доля выживших 1, Кумулятивная доля выживших 1,0 р=0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, Б Время, месяцы Время, месяцы А комбинированное лечение, хирургическое лечение завершенные наблюдения незавершенные наблюдения завершенное наблюдение незавершенное наблюдение Рисунок 1 – Выживаемость пациентов: А – общая, Б – в зависимости от вида лечения сроки от 1 до 168 месяцев (рисунок 1А). Показатели наблюдаемой выживаемости пациентов для 3-х летнего временного интервала составили 71,3%, 5-и летнего – 59,9% и 10-и летнего – 52,1%, соответственно. Таким образом, в первые 3 года наблюдения умерло 29,7% пациентов, в течение лет – 41,1% и 10 лет – 47,9%. Принимая во внимание, что максимальная доля умерших пациентов приходилась на первые три года наблюдения, именно этот срок наблюдения был принят для разделения пациентов на группы А – размер опухоли;

Б – категория рТ Рисунок 2 – Клинико-морфологические показатели у пациентов с различными исходами заболевания (* – здесь и далее абсолютные значения) исследования. Значимых различий в выживаемости пациентов в зависимости от вида лечения выявлено не было (рисунок 1Б).

Клинико-морфологическая характеристика рака прямой кишки у пациентов с различными исходами заболевания. Продольный размер опухоли (ПРО) варьировал от 2,5 см до 9,5 см. В группе пациентов с низкой выживаемостью, преобладали новообразования с ПРО более 4-х см ( А – категория N;

Б – категория G Рисунок 3 – Клинико-морфологические показатели у пациентов с различными исходами заболевания (* – здесь и далее абсолютные значения) случая), что составило 96,4%. В данной группе пациентов чаще определялась степень прорастания опухоли в стенку прямой кишки, соответствующая рТ – 21 случай (38,2%) (рисунок 2).

Локализация опухоли в нижней трети прямой кишки наблюдалась в случае (38,2%);

реже всего опухоль локализовалась в верхней трети – случаев – (25,5%). Метастазы в регионарных лимфатических узлах (N1а–2а) были выявлены в 31 случае (56,4%). В новообразованиях чаще выявлялась степень дифференцировки (G), соответствующая G2 – 35 случаев (63,3%) (рисунок 3).

У пациентов, с высокой выживаемостью ПРО менее 4-х см выявлялся в 54 случаях (54,6%), более 4-х см – в 45 случаях (45,5%). Степень прорастания опухолью стенки кишки (Т), соответствующая рТ2, была выявлена в случаях, что составило 22,2%, рТ3 – в 69 (69,7%), рТ4 – в 8 (8,1%). Отсутствие метастазов в регионарных лимфатических узлах (N0) было выявлено в случаях (74,7%), наличие метастазов в регионарных лимфатических узлах (N1а–2а) – в 25 случаях (25,3%). В исследование были включены только опухоли, имеющие гистологическое строение аденокарциномы. Степень дифференцировки G1 определялась в 4-х случаях (4,0%), степень дифференцировки G2 была выявлена в 84 случаях (84,8%), степень дифференцировки G3 определялась в 11 случаях (11,1%). Локализация опухоли, соответствующая верхнеампулярному отделу прямой кишки, была обнаружена в 43 случаях (43,4%), среднеампулярному отделу – в 42 случаях (42,4%), нижнеампулярному отделу – в 14 случаях (14,1%). В 13 случаях (13,1%) встречались пациенты в возрасте до 55 лет, в 86 случаях (86,9%) – в возрасте более 55 лет.

Для сравнительного анализа между группами больных с различными исходами был проведен расчет относительного риска (ОР) неблагоприятного исхода заболевания. Расчет ОР показал, что факторами риска неблагоприятного исхода заболевания являются: ПРО более 4-х см – (ОР=2,1;

95% ДИ 1,72,6;

р0,001), прорастание опухолью стенки ПК, соответствующее Т4 – (ОР=4,7;

95% ДИ 2,29,9;

р0,001), наличие метастазов в регионарных ЛУ (N1a–2a) – (ОР=2,2;

95% ДИ 1,53,4;

р0,001).

Иммуногистохимические показатели рака прямой кишки у пациентов с различными исходами заболевания. В настоящее время для оценки биологического поведения опухоли перспективным является использование ИГХ методов исследования, что помогает определить индивидуальный прогноз течения заболевания. Сравнительный анализ ИГХ критериев у пациентов с различными исходами заболевания представлен в таблице 1.

Таблица 1 – ИГХ критерии у пациентов с различными исходами заболевания Исход заболевания (прожили) Показатель р ОР (95% ДИ) до 3-х лет более 3-х лет n=55 % n=99 % 10% 8 14,5 41 41, p53 0,001 1,5 (1,21,8) 10% 47 85,5 58 58, 10% 53 96,4 65 65, BCL2 0,001 1,5 (1,31,7) 10% 2 3,6 34 34, 10% 14 25,5 43 43, Ki-67 0,041 1,3 (1,01,7) 10% 41 74,5 56 57, 10% 37 67,3 54 55, Циклин Д1 0,171 0,7 (0,51,1) 10% 18 32,7 45 45, 10% 20 36,4 79 80, ХГА 0,001 3,1 (2,04,9) 10% 35 63,6 20 20, 10% 40 72,7 40 40, IgA 0,001 1,8 (1,32,4) 10% 15 27,3 59 60, 10% 24 43,6 14 14, CD3 0,001 3,1 (1,75,5) 10% 31 56,4 85 86, 10% 34 60,0 9 9, CD20 0,001 6,8 (3,513,3) 10% 22 40,0 90 91, 10% 32 58,2 39 39, CD68 0,038 1,5 (1,12,1) 10% 23 41,8 60 61, 10% 36 65,5 16 16, S100 0,001 4,1 (2,56,6) 10% 19 34,5 83 84, 16 15 27,3 54 55, CD34* 0,002 1,6 (1,22,1) 16 40 72,7 45 45, * – относительная плотность сосудов микроциркуляторного русла Как видно из таблицы 1, у лиц с низкой выживаемостью чаще определялась гиперэкспрессия транскрипционного фактора р53 – в случаях, что составило 85,5%. Гиперэкспрессия фактора апоптоза BCL2, наоборот, выявлялась реже – в 2 случаях (3,6%). Гиперэкспрессия маркера пролиферации Кi-67 определялась с большей частотой – в 41 случае (74,5%), то же самое относилось к гиперэкспрессии маркера нейроэндокринных клеток ХГА – в 35 случаях (63,6%), в меньшем количестве была выявлена гиперэкспрессия маркера макрофагов СD68 – в 23 случаях (41,8%), в то же время гиперэкспрессия маркера В-лимфоцитов СD20 определялась в меньшем количестве – в 22 случаях (40,0%), чаще имела место гиперэкспрессия маркера эндотелия сосудов CD34 – в 40 случаях (72,7%).

У лиц с высокой выживаемостью гиперэкспрессия маркера пролиферации Кi-67 определялась реже – в 56 случаях (57,6%), гиперэкспрессия маркера нейроэндокринных клеток ХГА также выявлялась реже – в 20 случаях (20,2%). В то же время с большей частотой определялась гиперэкспрессия маркера Т-лимфоцитов СD3 – в 85 случаях (86,9%), а также гиперэкспрессия маркера В-лимфоцитов СD20 – в случаях (91,9%) и маркера макрофагов СD68 – в 60 случаях (61,6%). Реже определялась гиперэкспрессия CD34 – в 45 случаях (45,5%).

Расчет ОР показал, что факторами риска неблагоприятного исхода заболевания являются гиперэкспрессия следующих ИГХ маркеров: ХГА (ОР=3,1;

95% ДИ 2,04,9;

р0,001), CD34 (ОР=1,6;

95% ДИ 1,22,1;

р=0,002), Кi-67 (ОР=1,3;

95% ДИ 1,01,7;

р=0,041), р53 (ОР=1,5;

95% ДИ 1,21,8;

р=0,001). Факторами благоприятного исхода являются гиперэкспрессия следующих ИГХ маркеров: BCL2 (ОР=1,5;

95% ДИ 1,31,7;

р0,001), СD (ОР=6,8;

95% ДИ 3,513,3;

р0,001), СD68 (ОР=1,5;

95% ДИ 1,12,1;

р=0,038).

Также для определения значимости экспрессии ИГХ показателей для исходов РПК был проведен сравнительный анализ между группами пациентов с использованием критерия Манна-Уитни. У пациентов с низкой выживаемостью медиана экспрессии p53 составила 44,20 (27,6–59,8), в то же время в группе пациентов с высокой выживаемостью медиана p53 была значимо ниже – 15, (6,5–32,30);

(р0,001, z=4,131). Экспрессия фактора апоптоза BCL характеризовалась более низкими значениями медианы в группе пациентов с низкой выживаемостью после радикального лечения и составила 2,2 (1,2–3,5), а для пациентов с высокой выживаемостью – 3,5 (1,8–6,8), (р=0,001;

z=4,131).

Медиана экспрессии Ki-67 была значимо выше у пациентов с низкой выживаемостью и составила 31,4 (9,5–43,30), в то же время в группе пациентов, с высокой выживаемостью, медиана была значимо ниже – 12,60 (7,8–25,5), (р0,001;

z=4,131). У пациентов с низкой выживаемостью медиана экспрессии кластера дифференцировки Т-лимфоцитов CD3 составила 29,5 (10,8–60,8), а для пациентов с высокой выживаемостью – 51,6 (34,5–78,9), (р0,001;

z= –4,657), аналогичные значения экспрессии кластера дифференцировки В-лимфоцитов CD20 – 7,8 (4,3–12,5) и – 20,4 (15,6–26,3) (р0,001;

z= –8,437), соответственно.

Количество плазматических клеток, экспрессирующих IgA, было меньше в группе пациентов с низкой выживаемостью после радикального лечения и составило 21,1 (17,7–28,8), в то же время у пациентов, с высокой выживаемостью – 37,7 (17,8–55,5), (р0,001;

z= –3,688). Аналогичная тенденция отмечалась и при исследовании экспрессии кластера дифференцировки макрофагов CD68 – 134,6 (98,50–176,7) и – 168,4 (112,6–215,0), (р=0,004;

z= – 2,915), соответственно. Медиана экспрессии S100-позитивных дендритных клеток в группе пациентов с низкой выживаемостью – 9,2 (7,6–9,4), а для пациентов с высокой выживаемостью – 12,4 (10,8–13,8), (р0,001;

z= –7,334).

Полученные данные по изучению маркеров иммунных реакций свидетельствуют о значимости данных реакций в прогрессировании РПК.

Повышенный уровень экспрессии ХГА-позитивных нейроэндокринных клеток был характерен для неблагоприятного исхода заболевания и составил в группе пациентов с низкой выживаемостью – 5,6 (2,0–9,6), а с высокой выживаемостью – 1,5 (1,2–2,2), (р0,001;

z=5,732). Повышенная относительная плотность сосудов микроциркуляторного русла (ОПСМР), определяемая по экспрессии CD34, также была значимо выше у пациентов с низкой выживаемостью – 18, (15,70–21,50) по сравнению с пациентами с высокой выживаемостью – 15, (13,7–17,70), (р0,001;

z=5,473).

Корреляционные связи между клинико-морфологическими и Изучение корреляционных иммуногистохимическими критериями.

зависимостей между различными параметрами, характеризующими новообразование, позволяет оценить биологические потенции опухолевой ткани.

У пациентов с различными исходами заболевания характер и сила корреляционных зависимостей отличались. Характер корреляций между клинико-морфологическими и иммуногистохимическими показателями в которые определялись только группе пациентов с низкой выживаемостью представлен в таблице 2.

Таблица 2 – Корреляционные связи у пациентов с низкой выживаемостью Показатель Тау Кендалл z p pТ vs ПРО 0,306 3,267 0, pТ vs G 0,325 3,474 0, N vs G 0,378 4,040 0, Ki-67 vs CD20 –0,297 –3,176 0, Ki-67 vs CD34 0,314 3,348 0, CD3 vs ХГA –0,404 –4,311 0, CD20 vs CD34 –0,381 –4,064 0, Проведение корреляционного анализа между данными показателями в подгруппе пациентов с низкой выживаемостью показало наличие прямых связей умеренной силы между категориями pТ и ПРО (=0,306;

p=0,001, категориями pТ и G (=0,325;

p0,001) и категориями N и G (=0,378;

p0,001), что подчеркивало агрессивный характер роста опухоли.

Выявлялась обратная взаимосвязь умеренной силы между Ki-67 и CD20 (= – 0,297;

p=0,001), что не противоречило литературным данным и отражало угнетение В-клеточного звена иммунного ответа при повышении пролиферативной активности эпителиального компонента рака прямой кишки.

В нашем исследовании была выявлена прямая корреляционная связь умеренной силы между маркером пролиферации Ki-67 и CD34 (=0,314;

p0,001), что подчеркивает значение повышенной пролиферативной активности клеток опухоли и повышенного показателя ОПСМР для неблагоприятного прогноза заболевания.

Корреляционный анализ показал наличие обратной связи умеренной силы между экспрессией CD3 и количеством нейроэндокринных клеток, определяемых по экспрессии ХГA (= –0,404;

p0,001), что свидетельствовало об уменьшении количества Т-лимфоцитов по периферии опухоли при увеличении количества нейроэндокринных клеток в составе РПК.

Нами было выявлено наличие обратной связи умеренной силы между CD20 и CD34 (= –0,384;

p0,001). Данное обстоятельство указывает, что при увеличении ОПСМР по периферии опухоли, определяемой по экспрессии CD34, имеет место уменьшение количества В-лимфоцитов.

Таким образом, проведенное исследование корреляционных взаимосвязей между клинико-морфологическими и ИГХ показателями позволило установить ряд зависимостей, которые в определенной мере отражали свойства прогрессии РПК. Уменьшение количественных показателей кластеров дифференцировки CD3, CD20, CD68, IgA и соответствующее увеличение экспрессии указанных выше факторов риска (G, ХГА, CD34 и Ki-67) отражало угнетение иммунных реакций у пациентов с низкой выживаемостью после радикального лечения РПК I–III стадии.

Подтверждением агрессивного течения РПК служило наличие прямых взаимосвязей между категориями pТ и G, Т и ПРО, CD34 и Ki-67.

Моделирование клинических исходов у пациентов с раком прямой кишки I-III стадии после радикального лечения. Моделирование исходов заболевания проводилось с использованием методов дискриминантного анализа и логистической регрессии. Матрица наблюдений формировалась по результатам обследования 104 пациентов с различными исходами заболевания (обучающая выборка). Для тестирования эффективности использованных моделей была выполнена дополнительная экзаменационная выборка из пациентов, в которую входили по 25 больных с выживаемостью до и более 3-х лет.

При проведении дискриминантного анализа из 21 фактора-признака признаков вошли в категорию, которая определяет исход заболевания: CD20, размер опухоли, ОПСМР, ХГА, S100, BCL2, циклин Д1, возраст, N, CD34, врастание в смежные органы, вид роста, CD68. В то же время были определены параметры, не имеющие значительного влияния на течение заболевания. К данным признакам относились: вид лечения, локализация опухоли, G, стадия, CD3, p53, Ki-67. При автоматическом определении классификации в обучающей выборке (коэффициент: 0,5/0,5) в группе из 30 пациентов с низкой выживаемостью корректное определение неблагоприятного исхода заболевания составило 28 случаев (93,3%). В группе из 74-х пациентов с благоприятным исходом с высокой выживаемостью корректно были диагностированы случаев заболевания (94,6%). Точность проведенного исследования составила 94,2%. Для определения эффективности работы модели в программу были введены данные экзаменационной выборки из 50 пациентов. При автоматическом определении классификации экзаменационной выборки (коэффициент: 0,5/0,5) у 25 пациентов с низкой выживаемостью корректное определение неблагоприятного исхода заболевания составило 23 случая (92,0%). В группе из 25 пациентов с высокой выживаемостью корректно были определены 23 случая заболевания (92,0%). Точность проведенного исследования составила 92,0%.

Также для определения исхода заболевания использовался логистической регрессионный анализ. Критерием прогноза развития неблагоприятного исхода заболевания служило значение вероятности события более 0,5, рассчитанного с помощью логистической функции. Предикторы прогноза заболевания определялись с использованием функции нелинейного оценивания. Определено, что только 5 переменных из предложенных вносят весомый вклад в прогнозирование риска развития неблагоприятного исхода заболевания. К таковым относились: категория pT, показатели экспрессии ХГА, p53, CD20 и СD34 (таблица 3).

Таблица 3 – Константа и коэффициенты логистической регрессии у пациентов с раком прямой кишки с различной выживаемостью Показатель Const. B0 ХГА pТ p53 CD20 СD Значение –17,393 0,961 1,839 0,071 –0,291 0, Стандартная ошибка 5,240 0,323 0,728 0,022 0,087 0, t –3,320 2,971 2,527 3,304 –3,360 3, p 0,001 0,003 0,013 0,001 0,001 0, Критерий Вальда 11,020 8,828 6,383 10,915 11,286 13, Соотношение шансов 0,000 2,615 6,291 1,074 0,747 1, –95% ДИ 0,000 1,380 1,493 1,029 0,630 1, +95% ДИ 0,001 4,955 26,515 1,121 0,887 2, Полученные коэффициенты логистической регрессии были внесены в формулу логистической функции. По результатам расчетов из 30 пациентов с РПК с низкой выживаемостью были определены правильно 28 больных. Из пациентов с высокой выживаемостью правильно были определены 70 больных.

Диагностическая точность модели в обучающей выборке составила 94,2%. С учетом высоких показателей диагностической эффективности качество предложенной модели было оценено как хорошее. На следующем этапе была проведена процедура валидизации, т.е. проверка работоспособности полученной модели. В модель были включены 50 наблюдений пациентов с РПК, не вошедших в обучающую выборку. По результатам расчетов из пациентов с РПК с низкой выживаемостью были определены правильно случая. Из 25 пациентов с высокой выживаемостью правильно были определены 22. Диагностическая точность модели в экзаменационной выборке составила 92,0%.

Использование методов дискриминантного анализа и логистической регрессии позволяет с одинаковой точностью проводить определение прогноза исхода заболевания. Однако методы логистической регрессии являются более предпочтительными, так как позволяют использовать меньшее количество ИГХ маркеров, что является экономически более обоснованным. Таким образом, на основании совокупности ИГХ и клинико морфологических параметров был апробирован оптимальный диагностический алгоритм с использованием модели, включающей четыре ИГХ параметра (p53, CD20, CD34, ХГА) и один клинико-морфологический (рТ), позволяющий определять вероятность неблагоприятного исхода РПК после проведенного лечения. Результаты проведенного исследования обеспечивают отнесение полученных данных к группе с высокой или низкой выживаемостью с диагностической точностью 92,0%. Полученные результаты позволяют выделять группы риска среди пациентов с РПК, требующих более углубленного обследования и диспансерного наблюдения в послеоперационном периоде.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ Основные научные результаты диссертации 1. Продольный размер опухоли более 4-х см (ОР=2,1;

95% ДИ 1,72,6;

р0,001), степень распространения опухоли, соответствующая категории рТ4 (ОР=4,7;

95% ДИ 2,29,9;

р0,001), наличие регионарных метастазов N1а–2а (ОР=2,2;

95% ДИ 1,53,4;

р0,001) ассоциируются с низкой выживаемостью пациентов с раком прямой кишки [1–3, 9, 12].

2. Факторами риска низкой выживаемости у пациентов с раком прямой кишки являются: гиперэкспрессия ХГА (ОР=3,1;

95% ДИ 2,04,9;

р0,001), CD34 (ОР=1,6;

95% ДИ 1,22,1;

р=0,002), Кi-67 (ОР=1,3;

95% ДИ 1,01,7;

р=0,041), р53 (ОР=1,5;

95% ДИ 1,21,8;

р=0,001). Гиперэкспрессия BCL2 (ОР=1,5;

95% ДИ 1,31,7;

р0,001), СD20 (ОР=6,84;

95% ДИ 3,513,3;

р0,001), СD68 (ОР=1,5;

95% ДИ 1,12,1;

р=0,038) ассоциируется с более высокой выживаемостью при раке прямой кишки [1–3, 5, 7, 8, 10–18].

3. При сравнительном анализе между группами пациентов с раком прямой кишки установлено, что только в группе с низкой выживаемостью определялись ассоциации между категориями рТ и ПРО (=0,306;

p=0,001), категориями N и G (=0,378;

p0,001), экспрессией маркеров пролиферации Ki-67 и В-лимфоцитов CD20 (= –0,297;

p=0,001), Т-лимфоцитов CD3 и нейроэндокринных клеток ХГA (= –0,404;

p0,001), В-лимфоцитов CD20 и эндотелия сосудов CD34 (= –0,381;

p0,001), Ki-67 и CD34 (=0,314;

p0,001) [4].

4. Использование разработанной нами логистической модели позволяет на основании совокупности клинико-морфологических и иммуногистохимических параметров (рТ, p53, CD20, CD34, ХГА) определять вероятность неблагоприятного исхода РПК после проведенного лечения отнесением пациентов к группам с различным клиническим исходом заболевания с диагностической точностью 92,0%. Полученные результаты позволяют выделять группы риска среди пациентов с раком прямой кишки [6, 14, 15].

Рекомендации к практическому использованию 1. Определение показателей маркеров, отражающих иммунную реакцию на опухоль (CD3, CD20, CD68), в структурах рака прямой кишки может быть использовано для оценки клинического течения заболевания. Снижение показателей экспрессии данных маркеров ассоциируется с неблагоприятным прогнозом заболевания.

2. Экспрессия маркеров пролиферации Ki-67, транскрипционного фактора p53, маркера эндотелия сосудов CD34 при раке прямой кишки позволяет выявлять группы риска среди пациентов с данной патологией.

3. Для определения прогноза рака прямой кишки рекомендуется использовать маркер нейроэндокринной дифференцировки ХГА. Повышение уровня экспрессии данного маркера характеризует неблагоприятный прогноз заболевания.

4. Применение алгоритма диагностики с использованием совокупности клинико-морфологических и иммуногистохимических характеристик рака прямой кишки позволяет формировать группы пациентов в зависимости от риска прогрессирования, что может быть использовано для послеоперационного наблюдения и диспансеризации пациентов.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ СОИСКАТЕЛЯ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в научных журналах 1. Ачинович, С.Л. Рак прямой кишки: современные представления о морфогенезе, особенностях прогрессии, прогнозе / С.Л. Ачинович, О.А. Голубев // Проблемы здоровья и экологии. – 2006. – № 1 – С.

87–94.

2. Ачинович, С.Л. Прогностические факторы рака прямой кишки II–III стадии после предоперационной лучевой терапии / С.Л. Ачинович, Э.А.Надыров, О.А. Голубев // Проблемы здоровья и экологии.– 2007. – № 3. – С. 49–54.

3. Ачинович, С.Л. Прогностическое значение иммуногистохимических и морфологических особенностей рака прямой кишки / С.Л.

Ачинович, Э.А. Надыров // Проблемы здоровья и экологии. – 2008. – № 3. – С. 125–129.

4. Ачинович, С.Л. Корреляционные связи между клинико морфологическими параметрами при раке прямой кишки / С.Л.

Ачинович // Медицинский журнал. – 2010. – № 2. – С. 32–34.

5. Ачинович, С.Л. Экспрессия различных иммуногистохимических маркеров в аденомах и раке прямой кишки / С.Л. Ачинович // Медицинский журнал. – 2010. – № 2. – С. 34–35.

6. Ачинович, С.Л. Моделирование клинических исходов у пациентов с раком прямой кишки I–III стадии / С.Л. Ачинович // Медико биологические проблемы жизнедеятельности. – 2010. – № 2. – С. 57– 61.

7. Особенности местного иммунитета у пациентов с раком прямой кишки после радикального лечения / С.Л. Ачинович, Т.И. Пригожая, В.Э. Нитиш, Э.А. Надыров // Проблемы здоровья и экологии.– 2011.

– № 3. – С. 69–73.

Статьи в сборниках материалов конференций 8. Ачинович, С.Л. Иммуногистохимические факторы прогноза при раке прямой кишки / С.Л. Ачинович, Т.И. Пригожая, Э.А. Надыров // Актуальные вопросы морфологической диагностики заболеваний:

материалы республиканской науч.-практ. конф., Витебск, 14– февраля 2008г. / Витебск. Гос. мед. ун-т – Витебск, 2008. – С. 108– 111.

9. Ачинович, С.Л. Некоторые прогностические факторы при раке прямой кишки / С.Л. Ачинович, Р.В. Дорошенко, Э.А. Надыров // Актуальные проблемы медицины: материалы республиканской науч.-практ. конф., Гомель, 21–22 февраля 2008 г. / Гомельский Гос.

мед. ун-т – Гомель, 2008. – С. 56–58.

10. Экспрессия некоторых иммуногистохимических маркеров в аденомах и раке прямой кишки / С.Л. Ачинович, Т.И. Пригожая, В.Э. Нитиш, Э.А. Надыров // Актуальные проблемы медицины:

материалы республиканской науч.-практ. конф., Гомель, 26– февраля 2009 г. / Гомельский Гос. мед. ун-т – Гомель, 2009. – С. 57– 59.

11. Ачинович, С.Л. Прогностические факторы при раке прямой кишки / С.Л. Ачинович, Э.А. Надыров // Актуальные проблемы медицины:

материалы республиканской науч.-практ. конф., Гомель, 26– февраля 2009 г. / Гомельский Гос. мед. ун-т – Гомель, 2009. – С. 57– 59.

12. Ачинович, С.Л. Моделирование клинических исходов у пациентов с раком прямой кишки I–III стадии / С.Л. Ачинович, Э.А. Надыров // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии: материалы науч.-практ. конф. с международным участием памяти профессора Олега Анатольевича Голубева, Гомель, 4–5 мая 2010 г. / Гомельский Гос. мед. ун-т – Гомель, 2010. – С. 5–8.

13. Ачинович, С.Л. Исследование зависимостей прогностических факторов при раке прямой кишки / С.Л. Ачинович, Э.А. Надыров // Актуальные проблемы патологической анатомии: материалы республиканской науч.-практ. конф., Гродно, 26 ноября 2010 г. / Гродненский Гос. мед. ун-т – Гродно, 2010. – С. 11–14.

14. Ачинович, С.Л. Оценка прогностической значимости клинико морфологических и иммуногистохимических параметров у пациентов после радикального лечения рака прямой кишки I–III стадии / С.Л. Ачинович, Э.А. Надыров // Проблемы патоморфологической диагностики современных инфекций и других заболеваний: сборник научных статей II съезда патологоанатомов Республики Беларусь, Гомель, 26–27 мая 2011 г. / РНПЦ радиационной медицины и экологии человека – Гомель, 2011.

– С. 13–16.

Тезисы докладов 15. Значение сочетанной экспрессии иммуногистохимических факторов прогноза при раке прямой кишки / С.Л. Ачинович, Т.И.

Пригожая, В.Э. Нитиш, Э.А. Надыров // Чернобыльские чтения 2008: материалы международной науч.-практ. конф., Гомель, 24– апреля 2008 г. / РНПЦ радиационной медицины и экологии человека – Гомель, 2008. – С. 24–25.

16. Ачинович, С.Л. Экспрессия иммуногистохимических маркеров в аденомах и при раке прямой кишки у пациентов в экстремальных условиях после аварии на Чернобыльской АЭС / С.Л. Ачинович, Э.А.

Надыров // Донозология – 2008. Методологические и методические проблемы изучения донозологического статуса в экстремальных условиях: материалы четвертой международной науч. конф., Санкт Петербург, 18–19 декабря 2008 г. / Санкт-Петербургский институт экологии и здоровья – Санкт-Петербург, 2008. – С. 90–91.

Инструкция по применению 17. Иммуногистохимические методы исследования новообразований различного генеза: инструкция по применению № 160–1110;

утв.

11.02.2011 г. / Э.А. Надыров, Ю.И. Рогов, А.Ч. Дубровский, Е.В.

Воропаев, С.Л. Ачинович, А.Ю. Крылов, А.П. Богданович, А.С.

Прокопович.

Патент 18. Раствор для создания разграничивающей линии на предметном стекле при иммуногисто(цито)химических исследованиях: пат.

13985 Респ. Беларусь, МПК (2009) G 01N 1/28 / Э.А. Надыров, С.Л.

Ачинович, С.Н. Никонович;

заявитель ГУ «РНПЦ РМ и ЭЧ» – № а 20090798;

заявл. 02.06.09;

опубл. 28.02.11 // Афіцыйны бюл. / Нац.

цэнтр інтэлектуал. уласнасці. – 2011. – № 1. – С. 126.

РЭЗЮМЭ Ачыновіч Сяргей Леанідавіч Марфалагічныя і імунагістахімічныя фактары прагнозу пры раку прамой кішкі Ключавыя словы: рак прамой кішкі, перадаперацыйная прамянёвая тэрапія, клініка-марфалагічныя прагнастычныя фактары, імунагістахімічныя прагнастычныя фактары, прагнастычная мадэль.

Аб'ект даследавання: аперацыйны матэрыял рака прамой кішкі I–III стадыі.

Прадмет даследавання: клініка-марфалагічныя і імунагістахімічныя фактары рака прамой кішкі I–III стадыі.

Мэта даследавання: правядзенне аналізу клініка-марфалагічных і імунагістахімічных паказчыкаў рака прамой кішкі дзеля ацэнкі клінічных зыходаў захворвання.

Метады даследавання: клінічныя, марфалагічныя, гістахімічныя, імунагістахімічныя, статыстычныя.

Атрыманыя вынікі і іх навізна: Устаноўлена, што экспрэсія маркераў праліферацыі Ki-67, апаптоза p53, маркера эндатэлію сасудаў CD34 пры раку прамой кішкі дазваляе вызначаць групы пацыентаў з неспрыяльным прагнозам захворвання. Вызначэнне паказчыкаў імунных рэакцый (CD3, CD20, CD68) у тканіны рака прамой кішкі можа быць выкарыстана для ацэнкі клінічнага працякання захворвання. Зніжэнне паказчыкаў імунных рэакцый звязваецца з неспрыяльным прагнозам захворвання. Навукова абгрунтавана мінімальная дыягнастычна значная панэль прагнастычных характарыстык рака прамой кішкі, якая дазваляе фарміраваць групы пацыентаў у залежнасці ад рызыкі прагрэсавання, што можа быць выкарыстана для пасляаперацыйнага назірання і дыспансэрызацыі пацыентаў.

Рэкамендацыі па выкарыстаннi: прапанавана мадэль клінічных зыходаў з выкарыстаннем лагістычнага рэгрэсійнага аналізу ў пацыентаў з ракам прамой кішкі I–III стадыі пасля розных відаў радыкальнага лячэння з выкарыстаннем клініка-марфалагічных і імунагістахімічных параметраў.

Галіна прымянення: паталагічная анатомія, анкалогія.

РЕЗЮМЕ Ачинович Сергей Леонидович Морфологические и иммуногистохимические факторы прогноза при раке прямой кишки Ключевые слова: рак прямой кишки, предоперационная лучевая терапия, клинико-морфологические прогностические факторы, иммуногистохимические прогностические факторы, прогностическая модель.

Объект исследования: операционный материал рака прямой кишки I– III стадии.

клинико-морфологические и Предмет исследования:

иммуногистохимические показатели рака прямой кишки I–III стадии.

Цель исследования: проведение анализа клинико-морфологических и иммуногистохимических показателей рака прямой кишки для оценки клинических исходов заболевания.

клинические, морфологические, Методы исследования:

гистохимические, иммуногистохимические, статистические.

Результаты исследования и их новизна: Установлено, что экспрессия маркеров пролиферации Ki-67, апоптоза p53, маркера эндотелия сосудов CD34 при раке прямой кишки позволяет определять группы пациентов с неблагоприятным прогнозом заболевания. Определение показателей иммунных реакций (CD3, CD20, CD68) в ткани рака прямой кишки может быть использовано для оценки клинического течения заболевания. Научно обоснована возможность использования метода логистической регрессии для определения индивидуального прогноза заболевания, что может быть использовано для послеоперационного наблюдения и диспансеризации пациентов.

Рекомендации по использованию: предложена модель для определения клинических исходов с использованием логистической регрессии у пациентов с раком прямой кишки I–III стадии после различных видов радикального лечения с использованием клинико-морфологических и иммуногистохимических параметров.

Область применения: патологическая анатомия, онкология RESUME Achinovich Sergey Leonidovich Morphological and immunohistochemical prognostic factors in rectal cancer Key words: a rectum cancer, preoperative beam therapy, сliniсal and morphological prognostic factors, immunohistochemical prognostic factors, prognostic model.

The object of the research: surgical specimens of the rectal carcinoma stage I–III.

The subject of the research: clinical, morphological and immunohistochemical factors of the rectal carcinoma stage I–III.

The purpose of research: carrying out the analysis of сliniсal, morphological and immunohistochemical markers of the rectal carcinoma in order to estimate clinical outcomes of disease.

Methods: clinical, morphological, histochemical, immunohistochemical, statistical.

The results obtained and their novelty: It is established that the expression of proliferation marker (Ki-67), apoptosis marker (p53) and endothelium one (CD34) for rectum cancer allows to define groups of patients with unfavorable prognosis for the disease. Defining indicators of immune responses (CD3, CD20, CD68) in colorectal cancer tissue can be used to assess the clinical course of the disease. The use of logistic regression analysis was scientifically validated in order to estimate individual prognosis of a disease. It can be applied in the field of postoperated patients management and prophylactic medical examination.

Recommendations for use: the model of clinical outcomes involving the logistic regression analysis at patients with rectal cancer of I–III stage after various kinds of radical treatment with use of clinical, morphological and immunohistochemical parameters is offered.

The area of application: pathology, oncology.