Состояние антиоксидантной системы, иммунитета и продуктивность ягнят при введении их матерям различных соединений селена
На правах рукописи
Гаврюшина Ирина Владимировна Состояние антиоксидантной системы, иммунитета и продуктивность ягнят при введении их матерям различных соединений селена 03.03.01 – физиология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Боровск – 2010 Диссертационная работа выполнена в ФГОУ ВПО «Пензенская государ ственная сельскохозяйственная академия»
Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Боряев Геннадий Иванович
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Галочкин Владимир Анатольевич доктор биологических наук, профессор Григорьев Василий Семенович
Ведущая организация: ГОУ ВПО Мордовский государственный университет имени Н.П.Огарёва
Защита состоится « 22 » декабря 2010 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.030.01 в ГНУ Всероссийский научно исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяй ственных животных.
Адрес института: 249013, Калужская область, г. Боровск, пос. Институт, ВНИИФБиП с.-х. животных. Телефон 8-495-9963415, факс 8-484- Автореферат диссертации разослан «22» ноября 2010 года и размещен на официальном сайте института www.bifip2006.narod.ru «22» ноября года.
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук В.П. Лазаренко
Общая характеристика работы
1.1 Актуальность темы Проблема получения и сохранения молодняка сельскохозяйственных животных в настоящее время рассматривается как комплексная, в которой наряду с факторами окружающей среды важная роль отводится зависимости иммунологической резистентности новорожденного животного от состояния материнского организма. Сочетание генетически обусловленной продуктив ности молодняка сельскохозяйственных животных и современных методов ведения скотоводства предполагает иммунокоррекцию метаболических про цессов в организме с целью устранения иммунодефицитных состояний и уменьшения негативных последствий стресса молодняка в постнатальный период при адаптации к новым условиям существования. В связи с этим во просу иммунологической реактивности сельскохозяйственных животных в онтогенезе уделяется большое внимание.
Одной из основных причин возникновения патологий у новорожден ных животных, ведущих к снижению резистентности и развитию заболева ний молодняка при переходе к внеутробному развитию, является нарушение процесса становления и последующего согласованного взаимодействия фи зиологических систем, обеспечивающих поддержание адекватного метаболи тического статуса в организме в критические периоды его развития, к числу которых относится ранний постнатальный онтогенез. При этом очень важная роль в данный период принадлежит физиологической системе антиоксидант ной защиты (М.И. Рецкий, 2003, 2004;
Н.Н. Каверин, Д.В. Дегтярев, 2004, 2006;
В.А. Галочкин, 2005;
Ю.В. Кравченко, 2005;
H. Figueiras, 1984;
B.
Pehrson.;
S. Johnsson, 2008).
Иммунная система, которая участвует в обеспечении адаптивных воз можностей животного, представляет собой одну из важнейших гомеостати ческих и индикаторных систем. Нарушение функции иммунной системы рас сматривается как один из патогенетических механизмов при любых отклоне ниях, поэтому предупреждение ее патологии и повышение резистентности в онтогенезе особенно актуально для сохранения продуктивного здоровья жи вотных (Е.С. Воронин и др. 2002;
В.М. Манько и др., 2002;
Ю.Н. Федоров и др., 2007;
С.П. Дьякова и др., 2008;
N. Lacetera, 1999;
N. Kumar, 2008).
Среди веществ, способных регулировать иммунные реакции, а также выступать в качестве адаптогенов, следует отметить соединения антиокси дантной природы, которые через индуцирование ферментных систем влияют на развитие иммунных реакций организма молодняка сельскохозяйственных животных (Г.И. Боряев 2000;
А.А. Саразов, Е.М. Колоскова, 2000;
Т.Д. Буза нова, 2007;
Р. Kincaid, 2007).
Важнейшими веществами, обладающими одновременно адаптогенны ми и антиоксидантными свойствами, являются соединения селена.
1.2 Цели и задачи исследования В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы явилась сравни тельная оценка состояния антиоксидантной и иммунной систем, а также про дуктивности ягнят в раннем постнатальном онтогенезе при введении их ма терям селенита натрия и селенопирана.
В соответствии с целью в задачи исследований входило:
1. Определение динамики концентрации селена в молозиве овец, в кро ви и в сыворотке крови ягнят;
2. Изучение влияния неорганических и органических соединений селена на:
• систему антиоксидантной защиты ягнят в постнатальный период;
• клеточное звено иммунной системы ягнят;
• изменение гуморального звена иммунитета;
• гематологические, биохимические, физиологические и ростовые пока затели ягнят;
3. Обоснование целесообразности использования соединений селена в качестве адаптогенов.
1.3 Научная новизна работы Впервые проведено исследование влияния пролонгированной инъекци онной формы селенопирана на иммунно-физиологическое состояние ягнят в раннем постнатальном онтогенезе.
Была изучена возрастная динамика ферментативного звена системы ан тиоксидантной защиты, а также показателей перекисного окисления липидов ягнят в начальный период внеутробного развития при введении в организм их матерей селенопирана.
Определена динамика микроэлемента селена и иммуноглобулинов G-, М- и А-классов в молозиве овец, в крови и сыворотке крови ягнят при введе нии селенопирана в организм овцематок.
Выдвинута гипотеза о механизме влияния селенопирана на становле ние гуморального звена иммунной системы плода в конце пренатального развития и молодняка овец раннего постнатального онтогенеза.
Установлена способность селенопирана оказывать влияние на клеточ ное звено иммунной системы и показатели естественной резистентности яг нят при введении его в организм овцематок.
1.4 Практическая значимость работы Проведена комплексная оценка физиологической целесообразности на значения суягным овцематкам соединений селена направленного на более полную реализацию генетического потенциала резистентности и продуктив ности полученных от них ягнят. Определены дозы и период введения селе нопирана в организм суягных овцематок.
1.5 Положения, выносимые на защиту 1. Пренатальное применение селенорганического соединения селенопи ран суягным овцематкам наиболее благоприятно сказывается на иммунно физиологическом состоянии организма полученных от них ягнят.
2. Селенопиран обладает выраженными антиоксидантными и адаптоген ными свойствами.
3. Селенорганическое соединение селенопиран преодолевает плацентар ный барьер и оказывает стимулирующее влияние на дифференцировку В лимфоцитов.
4. Соединения селена стимулируют синтез основных классов иммуног лобулинов в молозиве овец и в сыворотке крови полученных от них ягнят:
селенопиран – IgG и IgA, селенит натрия – IgМ и IgA.
5. Применение селенопирана повышает естественную резистентность организма молодняка овец, что приводит к более полной реализации генети ческого потенциала скорости роста.
1.6 Апробация результатов исследований Основные научные положения, выводы и рекомендации диссертацион ных исследований доложены на международной научно-практической кон ференции, посвященной памяти профессора А.Ф. Блинохватова «Образова ние, наука, практика: инновационный аспект» (Пенза, 2008);
XII междуна родной научно-практической конференции «Современные технологии с.-х.
производства» (Гродно, 2009);
всероссийской научно-практической конфе ренции молодых ученых «Вклад молодых ученых в инновационное развитие АПК России» (Пенза, 2009);
расширенном межкафедральном заседании ка федр «Переработка продукции животноводства» и «Биология животных и ве теринария» ФГОУ ВПО «Пензенская ГСХА» (Пенза, 2010).
1.7 Структура диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и ме тодов исследований, результатов собственных исследований и их анализа, заключения, выводов и предложений практике, списка использованной лите ратуры, включающего 263 наименований, в том числе 196 иностранных ис точников.
Работа изложена на 141 страницах компьютерного текста, включа ет 20 таблиц.
2 Объект и методы исследований Научный эксперимент проводился на базе ООО Агрофирма «Биокор С», расположенной в с. Царевщино Мокшанского района Пензенской области.
На овцеферме, где разводят овец цигайской породы, для решения поставлен ных задач были сформированы три группы суягных овцематок по методу пар-аналогов по 15 голов в каждой, со средней живой массой 50 кг. Все три группы животных находились в одинаковых условиях содержания и кормле ния. Санитарно-гигиенические и зоотехнические требования соответствовали предусмотренным нормам.
Животным контрольной группы за 14 дней до ягнения внутримышечно вводился стерильный физиологический раствор, овцематкам первой опытной группы – водный раствор селенита натрия в дозе 0,1 мг селена на 1 кг массы тела, животным второй опытной группы – в такой же дозе масляный раствор селенопирана (СП-1).
Селенопиран представляет собой оранжевый жирорастворимый поро шок без запаха. Температура плавления – 95–96°С, содержание селена–24 %.
Химическое название – 9-фенил-симметричный октагидроселеноксантен (се ленопиран, СП-1).
Биологическим материалом для проведения исследований является кровь, которую отбирали из яремной вены ягнят на 1, 3, 7, 21, 60 и 90 сутки после рождения, а также молозиво и молоко, отобранные на 1, 3, 7 и 21 сутки лактации. Схема опыта представлена в таблице 1.
Таблица Схема опыта Этапы проведения Группа овцематок опыта Контрольная Первая опытная Вторая опытная 14 дней до окота Внутримышечно Физиологический Водный раствор Масляный рас раствор селенита натрия твор СП-1 в дозе в дозе 0,1 мг 0,1 мг селена на селена на 1 кг 1 кг массы тела массы тела 1, 3, 7, 21 сутки Отбор проб молозива и молока для проведения после окота исследований Окот Группа ягнят Контрольная Первая опытная Вторая опытная Первые сутки после рождения Отбор проб крови у ягнят всех групп для исследования.
до дачи молозива. Определение живой массы 1,3,7,21,60, 90 сут.
после рождения В ходе исследований определялись следующие показатели:
Биохимические – содержание селена в молозиве овец, в крови и в сыворотке крови полученных от них ягнят (флюориметрический метод в мо дификации В.А. Тутельяна, С.А. Хотимченко, Н.А. Голубкиной с использо ванием флюориметра «Флюорат-02-2М»);
активность ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ) – супероксиддисмутазы (СОД) (метод М.
Niashikimi et al. в модификации Г.Ю. Мальцева и А.В. Васильева, 1994) и глутатионпероксидазы (ГПО) (метод В.М. Моина, 1986);
концентрацию малонового диальдегида МДА (метод Z. Ernster, K. Nordenbrandt K., 1967);
содержание общего белка в сыворотке крови ягнят (рефрактометрический метод);
содержание кальция в сыворотке крови (с использованием набора реа гентов «Кальций-Витал» для определения концентрации кальция в сыворотке и плазме крови унифицированным колориметрическим методом), фосфора в кро ви ягнят (с использованием набора реагентов «Фосфор-Витал»для определения концентрации неорганического фосфора в сыворотке крови молибдатным UV методом).
Иммуно-физиологические – концентрация иммуноглобулинов G-, M- и А-классов в молозиве овец и в сыворотке крови ягнят (метод простой ради альной иммунодиффузии с использованием моноспецифических антисыво роток (G. Mancini, 1965);
фагоцитарная активность нейтрофилов (тест вос становления нитросинего тетразолия);
количество Т-лимфоцитов (метод спонтанного розеткообразования с гетерогенными эритроцитами (Е-РОК));
бактерицидная активность сыворотки крови (определялась по торможению развития внесенной в сыворотку E. Coli, по методу О.В. Смирновой, Г.А.
Кузминой, 1997).
Гематологические – лейкограмма (подсчет клеток велся по зигзагу (ли нии «Меандра») при увеличении 100*8 с использованием иммерсионной сис темы);
число лейкоцитов в 1 л крови (подсчет производился по общеприня той методике в камере Горяева в 100 больших квадратах под малым увеличе нием микроскопа);
количество гемоглобина (гемоглобин-цианидный метод).
Цифровой материал опытов обработан методом вариационной статисти ки с использованием пакета статистической обработки «Microsoft Excel 2007».
3 Результаты исследований 3.1 Уровень микроэлемента селена в молозиве овцематок, в крови и в сыворотке крови полученных от них ягнят Внутримышечное введение овцематкам за две недели до предполагае мого окота селенита натрия и селенопирана повлияло на содержание селена в молозиве.
На протяжении эксперимента концентрация селена в молозиве овцема ток опытных групп превышала его содержание в контрольной (Табл. 2).
Установлено, что максимальное содержание микроэлемента в молозиве наблюдалось в первые дни лактации. С переходом к секреции молока его концентрация снижается, и на 21 сутки существенных различий между кон трольной и опытными группами выявлено не было.
Снижение концентрации селена в молозиве как в контрольной, так и в опытных группах овцематок связано с передачей от матери потомству с мо лозивом не только иммунологически активных белков, но и собственного се лена. Процесс быстрого выведения селена из организма овцематок после окота свидетельствует о целесообразности введения селенсодержащих со единений для профилактики возникающего селенодефицита у новорожден ных ягнят.
Таблица Содержание селена в молозиве, мкг/л (M±m) Опытные группы Сутки Контрольная первая вторая после окота группа (селенит натрия) (СП-1) 1 102,60±3,17 196,50±4,09*** 147,20±5,20*** 3 105,78±4,29 128,40±4,97** 137,04±2,30*** 7 59,70±2,89 70,34±3,67* 73,00±2,73* 21 45,26±3,80 51,13±2,08 50,58±2, * Р0,05;
**Р0,01;
***Р0, Введение суягным маткам соединений селена способствовало повыше нию концентрации этого микроэлемента в крови ягнят (Табл. 3).
Таблица Содержание селена в крови ягнят, мкг/л (M±m) Опытные группы Сутки после Контрольная первая вторая рождения группа (селенит натрия) (СП-1) 1 237,80±11,51 284,70±8,56** 272,83±10,17* 3 208,34±12,42 257,30±6,27** 251,07±11,55* 7 205,60±11,44 232,00±7,37 235,80±7,92* 21 268,78±10,18 279,20±8,62 289,20±7, 60 197,45±8,74 208,80±6,11 228,40±16, 90 200,80±2,47 218,10±8,06 232,00±11,09* * Р0,05;
** Р0,01.
Концентрация селена в крови ягнят в первые семь дней после рождения находилась в прямой коррелятивной зависимости от содержания селена в молозиве (r=0,51;
r=0,99;
r=0,88 – для контрольной, первой и второй опытных групп соответственно).
Резкое повышение содержания микроэлемента в крови ягнят как в опытных, так и в контрольной группах наблюдается на 21 сутки (на 20,3;
22, и 30,4% соответственно (Р0,001)).
Наблюдаемый факт, скорее всего, связан с тем, что в этот период пи щеварение у ягнят происходит по переходному типу. При этом постепенно приобретается способность переваривать и усваивать разнообразные расти тельные корма, и ягнята продолжают получать материнское молоко, содер жащее легкоусваиваемые белки.
Внутримышечное введение овцематкам за две недели до окота селени та натрия и селенопирана неоднозначно повлияло на содержание селена в сыворотке крови ягнят, однако на протяжении всего эксперимента его кон центрация в опытных группах была выше, чем в контрольной (Табл. 4).
Таблица Содержание селена в сыворотке крови ягнят, мкг/л (M±m) Опытные группы Сутки после Контрольная первая вторая рождения группа (селенит натрия) (СП-1) До дачи молозива 61,60±4,46 73,70±1,74 90,10±0,17*^ 1 69,40±5,14 95,40±1,74*** 94,00±1,66*** 3 72,55±2,21 99,57±6,13** 96,20±5,43** 7 66,36±2,26 90,50±1,48*** 102,00±5,97*** 21 93,07±2,40 106,40±2,93** 92,60±2, 60 64,93±1,16 71,33±3,24 82,27±2,87***^ 90 78,85±4,92 74,93±2,54 106,50±2,75***^^^ * Р0,05;
** Р0,01;
*** Р0,001 – значимость различий между опытной и контрольной группами;
^ Р0,05;
^^^ Р0,001 – значимость различий между опытными группами.
Необходимо отметить, что сразу после рождения до выпойки молозива было установлено, что содержание селена в сыворотке крови ягнят, матери которых получали инъекцию селенопирана, достоверно превышает его со держание в сыворотке крови ягнят, матерям которых вводили селенит на трия, а также ягнят контрольной группы на 22,3 и 46,3% соответственно (Р0,05).
Этот факт дает нам основания предположить, что часть молекул селе нопирана преодолевает плацентарный барьер в неизменном виде и поступает в кровь плода.
Таким образом, введение в организм овцематок за 14 дней до ягнения селенопирана и селенита натрия способствовало увеличению содержания микроэлемента в молозиве и, как следствие этого, в крови и в сыворотке кро ви, полученных от них ягнят.
3.2 Влияние соединений селена на антиоксидантный статус организма ягнят Исследования многих авторов указывают, что соединения селена влияют на состояние антиоксидантной системы (Д. Диманов и др., 1989;
Г.И. Боряев, 2000;
Н.Н. Каверин, Д.В. Дегтярев, 2004;
В.А. Галочкин и др., 2005;
Ю.В.
Кравченко, 2005;
Н.С. Старостина, 2005;
В.И. Беляев и др., 2006;
N. Lacetera et al., 1999;
B. Pehrson, S. Johnsson, 2008).
В наших исследованиях как селенопиран, так и селенит натрия оказали существенное влияние на активность ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ)– супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионпероксидазы (ГПО) (Табл.
5).
Таблица Активность ферментов антиоксидантной защиты крови ягнят и интенсивность перекисного окисления липидов (M±m) Опытные группы Сутки после Контрольная первая вторая рождения группа (селенит натрия) (СП-1) Активность супероксиддисмутазы, ед.акт.10 /гHb 1 10428±475 13022±781* ^^ 9960± 3 9434±879 11195±449^^^ 7190±272* 7 13331±254 12684±445 10764±849* 21 11373±622 12777±680*** 9307±296** ^^^ 60 6079±455 6545±352 6014± 90 6413±229 6471±200 6108± Активность глутатионпероксидазы, мкмоль G-SH/л мин/гHb 1 119,25±7,02 149,03±9,058* ^^ 109,75±4, 3 73,00±3,35 76,63±2,04 90,70±4,10** ^ 7 178,05±12,77 136,82±5,97** 119,93±9,40** 21 121,04±5,68 143,80±5,77* 160,80±11,89** 60 95,91±4,76 89,55±7,03 103,56±3, 90 87,02±7,13 89,88±6,99 86,3±7, Концентрация малонового диальдегида, мкмоль/л 1 2,37±0,14 2,24±0,03 2,25±0, 3 2,33±0,16 1,57±0,12** 1,71±0,07** 7 1,47±0,12 1,30±0,09 1,13±0,08* 21 2,47±0,09 2,07±0,11* 1,77±0,12** 60 1,25±0,06 1,06±0,06* 0,96±0,08* 90 1,04±0,05 0,99±0,07 0,55±0,03*** ^^^ * Р0,05;
** Р0,01;
*** Р0,001 – значимость различий между опытной и контрольной группами;
^ Р0,05;
^^ Р0,01^^^ Р0,001 – значимость различий между опытными груп пами.
Антиоксиданты преимущественно работают в комплексе, так как фер ментативные системы специализированы на разных этапах восстановления кислорода. Так и в наших исследованиях при оценке активности ферментов антиоксидантной системы крови всех исследуемых групп животных на про тяжении изучаемого периода изменение активности ГПО находилось в пря мой зависимости от изменения активности СОД. На протяжении изучаемого периода постнатального онтогенеза в крови ягнят опытных групп отмечался более низкий уровень МДА по сравнению с животными контрольной группы.
Высокая активность супероксиддисмутазы наблюдается в первые су тки после рождения, что обусловлено повышенной генерацией супероксид анион радикала в условиях резко возрастающей обеспеченности организма новорожденных кислородом и развития состояния оксидативного стресса (R.
Rоb1es et. al., 2001;
М.И. Рецкий и др., 2004).
Ранее проведенные исследования указывают на высокую степень про цессов липопероксидации в раннем постнатальном онтогенезе, что связано с адаптацией к атмосферному воздуху (V. Lemeshko, 1987;
П. Хочачка, Дж.
Сомеро, 1988;
M. Kolesnikov, 2002). Это подтверждается и нашими исследо ваниями.
Концентрация МДА в крови животных после рождения была высокой во всех исследуемых группах, наименьшее значение наблюдалось в первой опытной группе, однако достоверных различий не выявлено.
У ягнят всех исследуемых групп к третьим суткам наблюдалась поло жительная линейная корреляция между активностью СОД, ГПО и интенсив ностью процессов ПОЛ, что свидетельствует о высокой сбалансированности этих процессов, то есть произошла мобилизация защитных свойств организ ма, вероятнее всего связанная с антиоксидатными свойствами, проявляемыми биологически активными веществами, содержащимися в молозиве.
Период с 7 по 21 сутки является критическим для новорожденных яг нят, поскольку роль пассивного иммунитета снижается, а формирование соб ственного активного находится на начальной стадии развития, идет пере стройка пищеварения, и ягнята начинают использовать корма растительного происхождения. Кроме этого содержание гидроперекиси липидов увеличива ется с возрастной интенсификацией липидного обмена (М.И. Рецкий и др., 2004). Это подтверждают и наши исследования. Тем не менее, концентрация МДА была ниже в опытных группах, что свидетельствует о нормализации процессов ПОЛ и стимуляции антиоксидантной системы защиты организма ягнят опытных групп.
Повышение концентрации МДА в контрольной группе на фоне сни жающейся ГПО может свидетельствовать, таким образом, о возрастании ин тенсивности свободнорадикальных процессов и снижении уровня буферной емкости антиоксидантной системы.
Между активностью ГПО крови ягнят опытных групп и содержанием селена в крови отмечена высокая положительная корреляция (r = 0,61;
r = 0,71), что еще раз доказывает тот факт, что увеличение содержания селена в крови влияет на повышение активности ГПО.
В отличие от селенита натрия селенопиран является способным к за медленному воздействию на активность ГПО. Это предопределено разными путями элиминирования селена из данных соединений.
Устойчивая тенденция к росту активности ГПО у животных, получав ших СП-1, появляется только на 21 сутки после рождения, что можно объяс нить определенными метаболическими преобразованиями, которым подвер гается селенорганическое соединение в организме за данный промежуток времени. В ходе этих метаболических изменений из препарата высвобожда ется селен, который и стимулирует активность ГПО. Активность селенита натрия проявляется на 7 сутки и остается таковой до 21 суток, что может быть связано с быстрым включением в метаболизм селена, присутствующего в составе неорганического соединения. Селенит натрия проявляет свойства антиоксиданта, стимулируя активность фермента антиоксидантной защиты ГПО, что доказано многочисленными исследованиями. Что же касается кон трольной группы, то максимальная скорость реакции ГПО установлена на сутки, в дальнейшем происходит ее снижение, что, вероятнее всего, связано с полным насыщением фермента субстратом к этому периоду.
При использовании селенита натрия и в контрольной группе животных корреляция между уровнем активности СОД и активностью ГПО была высо кой (r = 0,74;
r = 0,78), тогда как при использовании органической формы со единения селена она была средней (r = 0,59), что может быть связано с анти оксидантными свойствами данного селенорганического соединения, его спо собностью включаться в цепь ферментативных реакций и частично выпол нять функции глутатионпероксидазы.
На основании полученных результатов можно предположить, что селе нопиран проявляет свойства антиоксиданта за счет своей химической струк туры, сдерживает рост активности ферментов антиоксидантной защиты, час тично выполняя их функции.
В наших исследованиях выраженное снижение интенсивности образо вания продуктов ПОЛ у животных опытных групп по сравнению с контроль ной свидетельствует об эффективной регуляции свободнорадикальных про цессов и дает основание сделать выводы о значительной роли соединений се лена в формировании антиоксидантного статуса у новорожденных ягнят.
3.3 Влияние селенсодержащих препаратов на клеточное звено иммунной системы ягнят В наших исследованиях препараты селена смягчили воздействие стрес са на количество лейкоцитов в крови ягнят, матери которых получали соеди нения селена. Меньше всего стресс повлиял на показатели лейкоцитов ягнят, полученных от матерей, инъецированных селенопираном.
В период до 21 суток содержание белых кровяных телец во второй опытной группе изменялось незначительно, тогда как в первой опытной и контрольной группах животных наблюдалось снижение их количества. На сутки уровень лейкоцитов в крови ягнят второй опытной группы был выше, чем в контрольной группе, на 14,8% (Р0,001) и первой опытной группе на 9,5% (Р0,01). Содержание белых клеток крови ягнят первой опытной груп пы превышало показатели контрольной группы на 4,9% (Р0,01). Понижен ное содержание лейкоцитов в крови молодняка контрольной группы, по всей вероятности, связано с истощением системы АОЗ в крови ягнят в течение трех недель после рождения.
Изменения количественного и качественного состава лейкоцитов в ре зультате использования соединений селена происходят в основном за счет лимфоцитов и нейтрофилов.
В динамике относительного содержания нейтрофилов и лимфоцитов в крови ягнят всех исследуемых групп на протяжении эксперимента наблюда лась сходная волнообразная тенденция. Однако на 21 сутки после рождения относительное содержание нейтрофилов в контрольной группе достоверно превышало их процентное содержание в опытных группах на 18,3 и 15,3% соответственно (Р0,01), а количество лимфоцитов было достоверно ниже на 24,7 и на 22,8% соответственно (Р0,05). Вероятнее всего, в критические пе риоды стресса соединения селена, обладающие антиоксидантными свойства ми, оказали предохраняющее действие на лимфоциты крови животных опыт ных групп, разрушающихся под воздействием свободных радикалов.
Примечательно, что аналогичеая картина наблюдалась и при пересчете содержания нейтрофилов и лимфоцитов на абсолютное значение. Тем не менее в контрольной группе, на фоне незначительных изменений абсолютного содержания нейтрофилов в период до 21 суток после рождения, содержание лимфоцитов уменьшалось значительно. Процентное содержание лимфоцитов контрольной группы на 21 сутки было достоверно ниже показателей опытных групп на 30,6 и 40,7% соответственно (Р0,01). Показа тели второй опытной группы на 7 сутки после рождения достоверно превы шали значения контрольной группы на 17,5% (Р0,05).
Однократное введение соединений селена в организм суягных овцематок не оказало существенного влияния на фагоцитарную активность нейтрофилов крови ягнят.
Фагоцитирующая активность нейтрофилов в первой опытной и контрольной группах с 1 по 3 сутки после рождения несколько увеличивается и становится достоверно выше, чем во второй опытной группе, на 29,7% и 28,3%, соответсвенно. Интерпретация показателей фагоцитарной активности нейтрофилов с позиции степени стрессированности молодняка позволяет предположить, что повышение уровня активности нейтрофилов обусловлено именно иммуномодулирующим действием стресс-факторов и, вероятно, относительно низкой функциональной способностью других звеньев клеточного иммунитета.
В период с 7 по 21 сутки наблюдается достоверное увеличение фагоцитирующей активности нейтрофилов в крови животных первой опытной и контрольной групп как при спонтанной, так и при индуцированной реакции в НСТ-тесте (Р0,001). В крови животных второй опытной группы показатели спонтанной реакции увеличились на 30,7%, причем увеличение не было достоверным, а индуцированной – на 23,1% (Р0,05).
Работы последних лет свидетельствуют о том, что ПОЛ лежит в основе реакций фагоцитоза (И.П. Спепанова и др., 2005). Фагоцитирующая активность нейтрофилов характеризует состояние кислородозависимых механизмов бактерицидности нейтрофила (наработку супероксидного аниона и его производных) (Н.И. Барабанова, Т.А. Дружинина, 1998).
На протяжении эсперимента между фагоцитирующей активностью нейтрофилов при спонтанной реакции и концентрацией МДА в первой опытной и контрольной группах наблюдалась высокая кортреляция (r=0,63, r=0,91), тогда как зависимость между этими показателями во второй опытной группе была низкой (r=0,30).
В результате проведенных нами исследований было выявлено, что введение селенсодержащих препаратов суягным овцематкам повлияло на Т клеточное звено имунной системы родившихся ягнят (Табл. 6).
Таблица Относительное содержание Т-лимфоцитов в крови ягнят, % (M±m) Опытные группы Сутки после Контрольная первая вторая рождения группа (селенит натрия) (СП-1) 1 35,62±2,80 39,08±1,69 36,50±2, 3 31,50±2,29 31,13±1,48 39,75±2,37* ^^ 7 35,75±2,05 33,25±1,01 39,13±2, 21 36,40±2,68 36,90±2,68 47,25±1,76** ^^ 60 43,36±2,89 47,50±3,44 46,70±1, 90 30,50±1,49 34,30±2,28 36,30±3, * Р0,05;
** Р0,01 – значимость различий между опытной и контрольной группами;
^^ Р0,01 – значимость различий между опытными группами.
В самые критические периоды жизни содержание Т-лимфоцитов в контрольной и первой опытной группах снижалось, в то время как при использовании селенопирана данный показатель увеличивался. На третьи сутки после рождения относительное содержание Т-лимфоцитов во второй опытной группе животных достоверно превышало показатели первой опытной и контрольной групп на 27,7 и 26,2% соответственно (Р0,01), на сутки превышение составило 19,3 и 29,8% соответственно (Р0,01).
При пересчете количества Т-лимфоцитов в абсолютное значение наблюдается более выраженое воздействие стресса на клеточное звено иммунитета в контрольной группе ягнят.
Вероятно, снижение содержания Т-клеток в крови новорожденных яг нят связано с повреждающим действием избыточного количества продуктов свободнорадикального окисления, а предохранительный эффект селенопира на определяется его антиоксидантными свойствами. В своих работах некото рые исследователи указывают на то, что Т-лимфоциты более чувствительны к воздействию свободных радикалов, чем другие клетки, так как клеточная мембрана Т-лимфоцитов более насыщена липидами по сравнению с мембра нами В-лимфоцитов и более восприимчива к окислению (R.J. Turner et al., 1985;
J.A. Маrch, 1987).
Следовательно, в отличие от селенита натрия селенорганическое со единение СП-1 предотвращает снижение количества Т-лимфоцитов в крови ягнят в раннем постнатальном онтогенезе не за счет специфического дейст вия селена как микроэлемента, а благодаря антиоксидантным свойствам его молекулы.
3.4 Влияние селенсодержащих препаратов на гуморальное звено иммунитета Введение селенсодержащих препаратов овцематкам за две недели до предполагаемого окота отразилось на состоянии гуморального иммунитета полученных от них ягнят. Прежде всего изменения были связаны с повыше нием содержания иммуноглобулинов в молозиве (Табл. 7).
Таблица Концентрация иммуноглобулинов М-и G-классов в молозиве овец, мг/мл (M±m) Опытные группы Контрольная Сутки первая вторая группа (селенит натрия) (СП-1) Ig М Через час по 4,04±0,40 4,28±0,23 4,27±0, сле окота 7 1,80±0,06 2,05±0,04** 1,96±0, 21 –– –– –– Ig G Через час по 90,63±4,49 90,75±3,50 147,90±9,06*** ^^^ сле окота 7 2,56±0,12 2,33±0,18 2,44±0, 21 1,90±0,18 2,12±0,18 1,91±0, ** Р0,01;
*** Р0,001 – значимость различий между опытной и контрольной группами;
^^^ - Р0,001 значимость различий между опытными группами При анализе изменений содержания IgM в молозиве овец было отмече но, что в первые сутки лактации значения этих показателей достоверно не отличались. К концу молозивного периода в первой опытной группе, где ов цы получали инъекцию селенита натрия, уровень IgM достоверно превышал его содержание в контрольной группе на 13,8 % (Р0,01).
Во второй опытной группе превышение составило 8,9% по отношению к контролю. Этот факт дает основание предположить, что непосредственно элемент селен способствует увеличению количества плазматических клеток в молочной железе, тем самым увеличивая концентрацию IgМ.
В наших исследованиях введение в организм овцематок селенопирана способствовало увеличению содержания иммуноглобулинов G-класса в мо лозиве в первые сутки после ягнения. Концентрация IgG достоверно превы шала показатели в молозиве овец, получавших селенит натрия и в молозиве овец контрольной группы на 62,9 и 63,1%, соответственно (Р0,001). В по следующем показатели по содержанию IgG нивелировались.
Обнаружение иммуноглобулинов в сыворотке крови ягнят второй опытной группы при рождении до дачи молозива, вероятно, является еще од ним доказательством того, что молекула селенопирана преодолевает плацен тарный барьер в неизменном виде, вызывая первичный и вторичный иммун ные ответы, и результатом этого является усиленное функционирование ан тителобразующих клеток.
В наших исследованиях минимальную концентрацию IgМ в сыворотке крови ягнят, матери которых получали селенопиран, отмечали сразу после рождения до приема молозива в количестве 0,226 мг/мл, тогда как в сыворот ке крови ягнят первой опытной и контрольной групп до приема молозива иммуноглобулина данного класса обнаружено не было (Табл. 8).
Таблица Концентрация иммуноглобулинов М-и G-классов в сыворотке крови ягнят, мг/мл (M±m) Опытные группы Контрольная Сутки первая вторая группа (селенит натрия) (СП-1) Ig М До дачи 0,226±0, молозива Через 20 ч по 2,03±0,06 2,18±0,11 2,12±0, сле рождения 7 1,96±0,09 2,01±0,09 1,97±0, 21 1,69±0,14 1,69±0,09 2,02±0, Ig G До дачи 0,45±0,05 0,45±0,05 1,70±0,14*** ^^^ молозива Через 20 ч по 28,00±2,41 28,50±2,57 48,70±2,19*** ^^^ сле рождения 7 22,00±0,73 24,20±1,17 32,50±1,14*** ^^^ 21 24,72±2,21 20,70±0,87 38,50±2,50** ^^^ ** Р0,01;
*** Р0,001 – значимость различий между опытной и контрольной группами;
^^^ Р0,001 – значимость различий между опытными группами.
Иммуноглобулины G-класса были обнаружены до приема молозива в сыворотке крови ягнят всех опытных групп (Табл. 8). Между контрольной и первой опытной группами различий по содержанию иммуноглобулинов не было, что же касается второй опытной группы, то концентрация IgG в сыво ротке крови ягнят достоверно превышала уровень контрольной и первой опытной групп (Р0,001).
Индуцирование иммунного ответа селенопираном, очевидно, связано с образованием так называемых гаптенов в процессе его метаболизма.
Гаптены – низкомолекулярные химические вещества известного строе ния. Сами по себе гаптены не иммуногенны, но при образовании комплекса с неиммуногенной или слабоиммуногенной молекулой-носителем индуцируют выработку антител на данный комплекс. Поскольку селенопиран является ксенобиотиком, то есть чужеродным для организма веществом, его метабо лизм осуществляется, скорее всего, ферментативными системами, локализо ванными в эндоплазматическом ретикулуме (на микросомах) печеночных клеток. Под влиянием микросомальных ферментов ксенобиотик образует ко валентную связь с белками организма, что превращает его в высокореакци онноспособное вещество (И.Е. Ковалев, О.Ю. Полевая, 1985;
Е.С Воронин., А.М Петров, М. Серых М., 2002).
Образование таких конъюгатов в организме служит сигналом для про дукции антител, "вылавливающих" подобные вещества и предотвращающих их попадание в клетки. (П.В. Сергеев, 1982).
Положительным моментом в данном процессе можно считать то, что вырабатываемые антитела, обладают не абсолютной, а относительной спе цифичностью, то есть могут реагировать не только с антигеном, вызвавшим их образование, но и с другими, иногда совершенно неродственными моле кулами.
В период с первых по седьмые сутки между содержанием IgМ в моло зиве овец всех опытных групп и в сыворотке крови полученных от них ягнят установлена высокая степень положительной корреляции. Вероятно, именно с этим связана тенденция к увеличению количества IgМ в группе ягнят, ма тери которых получали инъекцию селенита натрия. К трехнедельному воз расту концентрация IgМ в сыворотке крови молодняка второй опытной груп пы превышала показатели контрольной и первой опытной групп на 19,5% (Табл. 8).
Анализ корреляционных связей показателей концентрации IgG выявил, что во всех опытных группах существует высокая положительная взаимоза висимость между содержанием иммуноглобулинов G-класса в молозиве и молоке овец и в сыворотке крови полученных от них ягнят (в первой опыт ной группе r=0,89;
во второй опытной группе r=0,93;
в контрольной группе r=0,89).
Повышение концентрации иммуноглобулинов G-класса в молозиве овец, получавших селенопиран, повлияло на его содержание в сыворотке крови ягнят (Табл. 8).
В сыворотке крови молодняка, матерям которых вводили органическое соединение, отмечалось более высокое содержание IgG в первые, седьмые и 21 сутки после рождения. В первые сутки превышение составило 70,8 и 73, %, на 7 сутки – 34,3 и 47,7 %, на 21 сутки – 85,9 и 55,7 %, соответственно по отношению к первой опытной и контрольной группам (Р0,01;
Р0,001).
Очевидно, причиной синтеза иммуноглобулинов G-класса является не элемент селен, а молекула селенопирана в целом. Это подтверждается тем, что введение селенита натрия в организм овец не оказало стимулирующего влияния на уровень IgG класса в молозиве и в сыворотке крови полученных от них ягнят.
Повышенное содержание иммуноглобулинов классов G и М в сыворот ке крови ягнят второй опытной группы на 21 сутки после рождения свиде тельствует о том, что селенопиран способствует стимулированию становле ния собственной иммунной системы.
Третьим важным классом иммуноглобулинов является А-изотип.
Так как большая часть IgA, выделяющаяся с молозивом, синтезируется плазматическими клетками, локализующимися в тканях молочной железы, повышение содержания IgA в молозиве, по-видимому, связано с увеличением числа плазматических клеток под воздействием элемента селена и изменени ем функциональной активности этих клеток под влиянием органического се ленсодержащего препарата.
Наиболее высокий уровень IgA в молозиве наблюдался у ягнят от ма терей, получавших за две недели до предполагаемого окота селенопиран (Табл. 9).
Таблица Концентрация иммуноглобулинов А-класса, мг/мл (M±m) Опытные группы Контрольная Сутки первая вторая группа (селенит натрия) (СП-1) Ig А в молозиве овец Через час по 1,91±0,15 1,83±0,01 2,22±0, сле окота 7 0,06±0,01 0,11±0,01* 0,18±0,01*** ^^ 21 0,062±0,002 0,065±0,004 0,063±0, Ig А в сыворотке крови ягнят До дачи молозива Через 20 ч по 0,36±0,03 0,38±0,01 0,37±0, сле рождения 7 0,13±0,01 0,27±0,02*** 0,40±0,06*** 21 0,11±0,02 0,17±0,02* 0,16±0,01* * Р0,05;
*** Р0,001 – значимость различий между опытной и контрольной группами;
^^ - Р0,01 значимость различий между опытными группами.
Как и предполагалось, после рождения до дачи молозива IgA в сыво ротке крови ягнят всех опытных групп обнаружено не было. Через 20 часов после рождения концентрация иммуноглобулина в сыворотке крови ягнят между группами существенно не различалась.
На седьмые сутки в опытных группах концентрация иммуноглобулина достоверно превышала показатели контрольной группы (Р0,001).
В трехнедельном возрасте уровень IgA в сыворотке крови ягнят опыт ных групп достоверно превышал его количество в контрольной группе на 61,7 и 46,7 % соответственно.
По всей видимости, IgA сильно подвержен оксидативному поражению, и при применении соединений селена сохранение высокого уровня IgA в мо лозиве овец первой недели лактации, и как следствие, сохранение его уровня в сыворотке крови ягнят обеспечивается антиоксидантными свойствами применяемых препаратов.
Таким образом, введение соединений селена в организм овцематок за две недели до предполагаемого окота позволило повысить концентрацию иммуноглобулинов основных классов в молозиве и в сыворотке крови ро дившихся ягнят. Селенопиран обладает более выраженным эффектом по сравнению с селенитом натрия.
Неспецифическая гуморальная система защиты организма ягнят после рождения представлена в виде общей бактерицидной активности сыворотки крови.
Бактерицидная активность сыворотки крови ягнят второй опытной группы в первые сутки была выше по сравнению с контрольной и первой опытной группами на 18,9 (Р0,01) и на 12,9% (Р0,05), соответственно.
Повышение бактерицидной активности отмечалось на третьи сутки, причем значения этого показателя в крови опытных групп достоверно пре вышали контрольную на 12,3 (Р0,001) и 8,0% (Р0,01) соответственно.
Данный факт, по всей видимости, связан с высокой бактерицидной активностью молозива первых суток.
С третьих по шестидесятые сутки происходило снижение уровня бак терицидной активности во всех группах исследуемых животных.
3.5 Содержание белка, гемоглобина и минеральных веществ в крови ягнят Доказательством стимулирующего влияния соединений селена на ко лостральные факторы иммунитета и становление собственной иммунной системы служат данные содержания общего белка в сыворотки крови ягнят.
Количество общего белка в сыворотке крови ягнят опытных групп пре восходило концентрацию белка ягнят контрольной группы на протяжении всего эксперимента (Табл. 10).
Содержание белка в сыворотке крови ягнят исследуемых групп в пер вые сутки после рождения существенно не отличалось. В последующий пе риод до 7 суток наблюдается увеличение данного показателя в первой опыт ной группе на 31,9%, во второй – на 28,8% и в контрольной группе на 11%.
Наиболее низкое содержание белка в сыворотке крови ягнят всех ис следуемых групп животных отмечалось на 21 сутки, тем не менее, во второй опытной группе данный показатель достоверно превышал значения первой опытной и контрольной групп (Р0,05).
Таблица Содержание общего белка в сыворотке крови, мг/% (M±m) Опытные группы Сутки Контрольная первая после рождения группа вторая (СП) (селенит натрия) 1 4,89±0,21 4,95±0,13 4,98±0, 3 6,21±0,14 6,83±0,14** 6,57±0, 7 5,73±0,15 6,53±0,13*** 6,78±0,21*** 21 4,12±0,17 4,16±0,11 5,00±0,42* ^ 60 5,10±0,26 5,34±0,09 6,32±0,14** ^^^ 90 6,27±0,21 6,39±0,10 7,17±0,26* ^ * Р0,05;
** Р0,01;
*** Р0,001 – значимость различий между опытной и контрольной группами;
^ Р0,05;
^^^ Р0,001 – значимость различий между опытными группами.
Уменьшение общего количества белка, скорее всего, связано с тем, что роль пассивного иммунитета уже снижается, а формирование собственного активного находится на начальной стадии развития. Кроме этого в данный период происходит активизация процессов ПОЛ. Обладая высокой реакци онной способностью, продукты перекисного окисления липидов оказывают повреждающее действие на различные биомолекулы, и в первую очередь на белки (И.П. Кондрахин, 2004).
В последующем до 90 суток уровень общего белка сыворотки крови повышался до физиологической нормы взрослого животного. Относительное содержание белка во второй опытной группе достоверно превосходило его уровень в контрольной и первой опытной группах. Возможно, пониженное содержание общего количества белка в этот период в первой опытной и кон трольной группах связано с активацией обменных процессов под влиянием развития в организме реакций «активации», требующих повышенных энерго затрат. По-видимому, у ягнят наблюдается определенный дефицит обменной энергии, компенсирующийся использованием белков на энергетические нуж ды.
Введение селенсодержащих соединений суягным овцематкам повлияло на содержание гемоглобина в крови полученных ягнят. Следует отметить, что именно органическая форма селена – селенопиран – стимулировала син тез гемоглобина в течение первых трех недель эксперимента. На 3, 7 и 21 су тки показатели гемоглобина в крови животных второй опытной группы дос товерно превышали его содержание в контрольной группе (Р0,05 – Р0,001), а на 7 сутки и показатели первой опытной группы (Р0,05).
Введение соединений селена овцематкам за две недели до окота в нашем эксперименте не оказало влияния на содержание кальция и фосфора в сыво ротке крови полученных от них ягнят.
3.6 Клинические показатели новорожденных ягнят На протяжении всего периода исследований температура тела, количе ство сердечных сокращений и дыхательных движений у контрольных и опытных ягнят находились в диапазоне колебаний физиологической нормы, которые в разрезе изучаемых групп были незначительными.
Стимуляция колостральных факторов иммунитета способствовала бо лее полной реализации скорости роста ягнят в первые три месяца жизни. На протяжении всего эксперимента показатели живой массы ягнят опытных групп превосходили показатели ягнят контрольной (Табл. 11).
Таблица Динамика формирования живой массы ягнят, кг (M±m) Опытные группы Сутки Контрольная после первая вторая группа рожде- (селенит натрия) (СП-1) ния один двойня один двойня один двойня 1 4,6±0,2 4,1±0,2 5,0±0,2 4,1±0,1 4,9±0,2 4,1±0, 3 5,0±0,3 4,5±0,2 5,8±0,3 4,5±0,2 5,7±0,2 5,0±0, ** * 5,7±0,1* 7 6,4±0,1 5,4±0,1 7,1±0,2 5,1±0,1 6,9±0, 21 9,7±0,6 8,6±0,4 10,4±0,2 8,0±0,2 10,3±0,2 8,5±0, 60 19,8±1,4 15,5±0,9 23,5±1,5 15,3±0,5 22,4±0,8 16,7±0, 31,8±1,6 25,5±0,9**^ 90 27,4±1,8 21,5±0,7 28,0±2,1 22,5±0, * Р0,05;
** Р0,01 – значимость различий между опытной и контрольной группами;
^ Р0,05 значимость различий между опытными группами.
На 7 сутки после рождения ягнята-одинцы первой опытной группы превосходили по живой массе аналогов контрольной группы на 10,9% (Р0,01). Живая масса ягнят второй опытной группы превышала показатели контрольной группы на 7,8 и 5,5% (Р0,05).
В возрасте трех месяцев живая масса ягнят-одинцов, матери которых получали селенопиран, была выше живой массы ягнят контрольной группы на 16,1%, а ягнят, матери которых получали селенит натрия, – на 13,6%.
Показатели живой массы ягнят-двоен второй опытной группы превы шали показатели аналогов первой опытной и контрольной групп на 13,3 % (Р0,05) и 18,6% (Р0,01), соответственно.
Среднесуточный прирост массы тела ягнят-одинцов, полученных от матерей после введения селенопирана, превышал показатели среднесуточно го прироста ягнят, матери которых получали селенит натрия, и контрольной группы на 12,1 и 13,0%, соответственно.
Среднесуточный прирост массы тела ягнят-двоен, полученных от мате рей, инъецированных селенитом натрия, был выше прироста ягнят контроль ной группы на 8,1%, а прирост ягнят-двоен, полученных от матерей после введения селенопирана, достоверно превышал показатели контрольных жи вотных на 18,5 % (р0,05).
Интенсивность роста и развития во многом связана с рядом факторов генотипического и фенотипического плана.
Положительное влияние селенопирана на показатели живой массы яг нят, скорее всего, связано не столько со стимуляцией роста молодняка, сколько с сохранением генетически запрограммированного потенциала ско рости роста за счет повышения уровня иммунологической и физиологиче ской защиты.
Оптимизация концентрации селена в крови ягнят способствовала улуч шению окислительно-восстановительных процессов в организме и, как след ствие, благоприятно повлияло на рост, развитие и прирост живой массы.
4 Выводы 1. У новорожденных ягнят впервые установлены функциональные взаимосвязи между ферментативной системой антиоксидантной защиты ор ганизма и иммунной системой при введении разных форм соединений селена в организм овцематок. Определена динамика содержания селена в молозиве, в крови и в сыворотке крови ягнят в раннем постнатальном периоде при ис пользовании селенопирана.
2. Парентеральное введение суягным овцематкам селенита натрия и се ленопирана в дозе 0,1 мг на кг живой массы способствует достоверному по вышению содержания селена в молозиве в первые сутки жизни на 91,5% при использовании неорганической формы селена и на 43,5% – органической по сравнению с контролем. В последующем наблюдается снижение уровня се лена в молозиве во всех исследуемых группах. Достоверные различия между опытными группами и контролем отмечались до седьмых суток.
3. Установлено, что введение селенопирана способствовало увеличе нию содержания селена в сыворотке крови новорожденных ягнят до выпойки молозива на 46,3% по сравнению с контролем и на 22,3% по сравнению с яг нятами, полученными от овцематок первой опытной группы. С первых по седьмые сутки после рождения концентрация микроэлемента в крови и сыво ротке крови ягнят опытных групп была выше, чем в контроле. Установлена положительная корреляция между содержанием селена в молозиве и крови животных (r=0,51;
r=0,99;
r=0,88).
4. Введение в организм овцематок соединений селена положительно повлияло на активность ферментов антиоксидантной защиты новорожденных ягнят.
5. Установлена тесная взаимосвязь между содержанием селена в крови ягнят опытных групп и активностью глутатионпероксидазы в условиях ран него постнатального онтогенеза (r=0,61;
r=0,71).
6. Снижение концентрации малонового диальдегида в крови молодняка опытных групп на 11,6 – 32,6% (Р0,05 – 0,001) способствовало оптимизации соотношения свободнорадикального окисления и активности антиоксидант ной системы в организме ягнят.
7. Использование селенсодержащих соединений в системе мать-плод способствовало сохранению в критические периоды жизни новорожденных ягнят концентрации Т-лимфоцитов в крови, содержания гемоглобина, уровня общего белка в сыворотке крови.
8. Применение селенита натрия привело к повышению в молозиве седьмых суток содержания IgМ на 13,9% по сравнению с контролем, а при использовании селенопирана содержание IgG в молозиве первых суток повы силось на 63,2% (Р0,001). В опытных группах концентрация иммуноглобу линов А-класса на седьмые сутки была значительно выше контроля.
9. Введение соединений селена в организм овцематок позволило также повысить уровень иммуноглобулинов классов G и А в сыворотке крови по лученных ягнят. Ягнята, матери которых получали соединение органической природы, превосходили аналогов первой опытной и контрольной групп по содержанию IgG в зависимости от возраста соответственно на 34,3 – 85,9 и 47,7 – 73,9% (Р0,01–0,001), а по IgА – на 49,5 – 207,7%. При использовании селенита натрия также наблюдались различия в сторону увеличения уровня IgА, но в меньшей степени по сравнению с органической формой селена.
10. Повышение уровня иммунологической и физиологической защиты ягнят за счет применения селенсодержащих препаратов способствовало со хранению генетически запрограммированного потенциала скорости роста. К концу исследований живая масса опытных ягнят-одинцов была выше кон троля на 13,6 и 16,1%, соответственно. Живая масса ягнят-двоен второй опытной группы превышала показатели аналогов первой опытной и кон трольной групп на 13,3 (Р0,05) и 18,6% (Р0,01), соответственно. Наиболь ший эффект проявило органическое соединение селенопиран.
5 Предложения практике 1. Для повышения естественной резистентности и продуктивности но ворожденных животных целесообразно вводить суягным овцематкам за две недели до предполагаемого окота селенопиран из расчета 0,1 мг селена на кг массы тела.
2. Рекомендовать использовать результаты проведенных исследований в учебном процессе сельскохозяйственных и ветеринарных заведений и на овцеводческих сельскохозяйственных предприятиях.
Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Боряев, Г.И. Биохимический и физиологический статус ягнят в раннем по стнатальном онтогенезе на фоне инъекций соединений селена суягным овце маткам / Г.И. Боряев, И.В. Гаврюшина, Ю.Н. Федоров // Сельскохозяйствен ная биология. – 2010. – № 2. – С. 65-70.
2. Боряев, Г.И. Влияние соединений селена на состояние Т-клеточного звена иммунитета новорожденных ягнят / Г.И. Боряев, И.В. Гаврюшина // Совре менные технологии сельскохозяйственного производства: материалы XII Международной научно-практической конференции. – Гродно, 2009. – С. 380-381.
3. Остапчук, А.В. Показатели крови ягнят при введении в организм их мате рей соединений селена / А.В. Остапчук, И.В. Гаврюшина // Современные технологии сельскохозяйственного производства: материалы XII Междуна родной научно-практической конференции. – Гродно, 2009. – С. 426-427.
4. Гаврюшина, И.В. Динамика содержания селена в крови ягнят в зависимо сти от концентрации микроэлемента в молозиве овцематок / И.В. Гаврюшина // Вклад молодых ученых в инновационное развитие АПК России: Материа лы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. – Пенза, 2009. – С. 234.
5. Боряев, Г.И. Влияние соединений селена на активность ферментов антиок сидантной защиты новорожденных ягнят / Г.И. Боряев, И.В. Гаврюшина // Аграрная наука – сельскому хозяйству: сборник научных трудов, посвящен ный 90-летию Самарской государственной сельскохозяйственной академии.
– Самара, 2010. – С. 98-103.
6. Гаврюшина, И.В. Интенсивность роста и показатели антиоксидантной за щиты ягнят под влиянием соединений селена / И.В. Гаврюшина // Аграрная наука – сельскому хозяйству: материалы V международной практической конференции. – Барнаул, 2010. – С. 65-67.