Процессы пищеварения и обмена веществ у крупного рогатого скота при скармливании добавок с l - карнитином
На правах рукописи
ИВАНОВА ГАЛИНА ВИКТОРОВНА Процессы пищеварения и обмена веществ у крупного рогатого скота при скармливании добавок с L - карнитином 03.03.01 – Физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Дубровицы – 2012г 2
Работа выполнена в отделе кормления сельскохозяйственных животных и технологии кормов Государственного научного учреждения Всероссийский науч но-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохо зяйственных наук
Научный консультант: кандидат биологических наук Романов Виктор Николаевич
Официальные оппоненты: доктор биологических наук Буряков Николай Петрович кандидат биологических наук Стукалова Лариса Николаевна Ведущее учреждение: ФГБОУ ВПО Российский университет дружбы наро дов.
Защита диссертации состоится « » 2012 года, в 10 часов, на за седании диссертационного совета Д 006.013.01 при ГНУ Всероссийский научно исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяй ственных наук.
Адрес института: 142132 Московская обл. Подольский р-н п. Дубровицы Тел./факс: 8(4967) 65-11-
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института
Автореферат разослан « » января 2012 года.
Ученый секретарь совета Д 006.013.01. С.В. Воробьева 1.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы. Одним из путей повышения эффективности ведения современного промышленного животноводства является поиск, изучение и направ ленное применение биологически активных веществ (эрготропных соединений), способствующих оптимизации обменных процессов в организме, сохранению здо ровья животных и раскрытию их генетически обусловленной продуктивности.
Наряду с оптимизацией питания животных, в соответствии с существующи ми нормами кормления перспективным является применение биологически актив ных веществ, способствующих повышению функциональной деятельности желу дочно-кишечного тракта, печени и других жизненно важных систем организма [А.В. Жаров, 1974;
А.А. Алиев, 1991;
Б.П. Покровский, 2007;
А. Хенинг, 1986].
Известно, что дефицит ряда метаболитов в составе кормов усугубляется не достаточным их поступлением в обменный фонд организма, взаимосвязанном с дисфункциями преджелудочного и кишечного пищеварения, вызывающими сни жение переваримости питательных веществ [А.Д. Синещеков, 1965;
И.П. Ду хин,1977, 1979;
Н.В. Курилов, 1971;
В.В. Цюпко, 1984].
Учитывая особенности пищеварительной системы жвачных животных, остро встают вопросы поддержания и стимулирования жизнедеятельности симбионтной микрофлоры рубца. При этом целесообразным является защита высокоценных биологически активных соединений в составе кормовых добавок от опосредован ного воздействия симбионтной микрофлоры, для более рационального их исполь зования организмом животного [Н.В. Курилов, 1974;
А.А. Алиев, 1997;
Б.В. Тара канов, 1998].
В этой связи актуальным является разработка, изучение и использование кормовых добавок, имеющих направленное физиологическое действие, способ ствующее улучшению переваривающей и всасывающей деятельности желудочно кишечного тракта, связыванию и выведению токсичных продуктов обмена, при улучшении обменных процессов в организме животных.
К настоящему времени установлена важная роль в углеводно-жировом и белковом обмене у млекопитающих биогенного амина L-карнитина, при выявлен ном липотропно-гепатопротекторном и кардиопротектном его действии [В.Н. Ро манов, 1987;
Р.А. Богомолова, 2008;
Ю.П. Фомичев, 2010;
A. Bonomi, 1995;
S. Pre ziuso, 1999;
M. Szilagyi, 2002].
Как с теоретической, так и с практической точек зрения представляет инте рес изучение физиологического и продуктивного действия «защищенной» формы L–карнитина (Карнипасс), и разработанной на его основе многофункциональной кормовой добавки Кармецелл.
Цель исследований - изучить физиологическое действие кормовых добавок с L-карнитином на процессы пищеварения, переваримость и использование пита тельных веществ кормов у растущего молодняка крупного рогатого скота, а также влияние на обмен веществ и продуктивность новотельных лактирующих коров.
Для реализации цели были поставлены следующие задачи:
- изучить влияние добавок с «защищенным» L-карнитином на процессы пи щеварения в преджелудках, переваримость и усвоение питательных веществ кор мов в желудочно-кишечном тракте подопытных полифистульных бычков;
- изучить особенности обменных процессов у крупного рогатого скота на основе биохимических показателей крови в физиологических и научно хозяйственных опытах;
- установить влияние добавок на молочную продуктивность и затраты кор мов на единицу продукции в научно-хозяйственных исследованиях;
- внести предложения по использованию защищенной формы L-карнитина и многокомпонентной кормовой добавки Кармецелл в рационах крупного рогатого скота.
Научная новизна исследований заключается в том, что впервые изучено влияние использования кормовых добавок с L-карнитином на процессы пищеваре ния, переваримость и усвоение питательных веществ кормов, обмен веществ и продуктивность молочного скота.
Практическая значимость работы состоит в том, что применение кормо вых добавок с L-карнитином в условиях интенсивного молочного скотоводства способствует улучшению процессов пищеварения, нормализации обмена веществ в организме и повышению продуктивности коров на 8,0-16,5%.
Апробация работы Материалы диссертации доложены и одобрены:
- на научной конференции Рязанского ГАТУ имени П.А.Костычева, посвя щенной 60-летию вуза «Актуальные проблемы аграрной науки» (Рязань, 2009);
- на международной научно-практической конференции, посвященной 90 летию со дня основания кафедры физиологии животных ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.
Скрябина» «Адаптация и становление физиологических функций у животных» (Москва, 2010);
- на международной конференции, посвященной 50-летию Всероссийского НИИ физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных (Боровск, 2010) - на научных конференциях в отделе кормления сельскохозяйственных жи вотных и технологии кормов (Дубровицы, 2009, 2010, 2011).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных статей, в том числе две в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ (Зоотехния, №9, 2009 и Главный зоотехник, №8, 2011).
Положения, выносимые на защиту:
- использование в рационах кормовых добавок с «защищенной» формой L карнитина повышает интенсивность процессов пищеварения, улучшает перевари мость и усвоение питательных веществ кормов в желудочно-кишечном тракте жвачных животных;
- включение кормовых добавок в рационы способствует созданию оптималь ных условий для жизнедеятельности симбионтной микрофлоры, увеличивает ее количество и изменяет видовой состав;
- применение в рационах крупного рогатого скота добавок Карнипасс и, осо бенно, Кармецелл, способствует увеличению молочной продуктивности коров, при нормализации обменных процессов;
Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора лите ратуры, материалов и методов исследований, результатов собственных исследова ний, заключения, выводов, предложений, списка использованной литературы, при ложений. Материал изложен на 131 странице печатного текста, содержит 22 табли цы и 4 рисунка. Список литературы включает 242 источника, в том числе 45 на иностранных языках.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследования проведены в отделе кормления сельскохозяйственных живот ных и технологии кормов в период с 2008-2011 г. Для выполнения поставленных задач были проведены физиологические исследования на физиологическом дворе ВИЖа и научно-хозяйственный опыт в условиях ЗАО «Русь» Тимашевского района Краснодарского края.
Общая схема исследований представлена на рисунке 1.
Рис. 1. Общая схема исследований Проце ссы пище варе ния и обме на ве ще ств у крупного рогатого скота при скармливании добавок с «защище нным» L-карнитином Физиологический опыт на полиф истульных бычках Методы исследования Зоотехнические Физиологические Биохимические 1. Состав рациона;
1. Показатели крови:
1. Показатели рубцового ме 2. Прирост живой массы;
таболизма;
- белкового, 3. Учет: -углеводного, 2. Переваримость и использо -потребления кормов;
вание питательных веществ -липидного и -количество кала и мочи. -минерального обменов.
рациона;
3. Уровень пищеварительной деятельности.
Научно-хозяйственный опыт на коровах Предложение производству Рис.1 Общая схема исследований В основу физиологических исследований была положена методика ком плексного изучения процессов пищеварения, разработанная в лаборатории физио логии пищеварения сельскохозяйственных животных ВИЖа, включающая одно временное проведение физиологических, биохимических и микробиологических исследований на фоне балансовых опытов по переваримости питательных веществ кормов [А.Д. Синещеков, З.И. Шеремет, 1953].
Физиологический опыт был проведён методом групп и периодов на бычках аналогах черно-пестрой породы (6 голов), подобранных по возрасту (8 месяцев) и живой массе (240 кг), прооперированных с наложением фистул рубца по методу В.А.Басова и дуоденальных анастомозов по А.Д.Синещекову по следующей схеме (таблица 1). Содержание животных привязное при двухкратном кормлении.
Таблица Схема физиологического опыта Количество Группа Характеристика кормления животных Контрольная 3 Основной рацион (ОР) 1-опытная 3 ОР + Карнипасс (15 г на 1 голову в сутки) 2-опытная 3 ОР + Кармецелл (77г на 1 голову в сутки) Основной рацион подопытных животных состоял из 20 кг кормосмеси (25% сенажа зл.-разнотравного, 47% силоса кукурузного, 23% комбикорма и 5% патоки), дополнительно 2 кг комбикорма и скорректирован согласно нормам ВИЖа для мо лодняка крупного рогатого скота.
Дозировка Карнипасса рекомендована производителем. Кормовая добавка Кармецелл рассчитывалась для бычка живой массой 230-240 кг исходя из перерас чета максимальной суточной дозы 200 г на корову живой массой 600кг, и состави ла – 77 г.
Во время предварительного (21 день) и учетного (7 дней) периодов прово дился учет задаваемых кормов и их остатков. Среднесуточные пробы кормов, их остатков, кала и мочи отбирались по общепринятой зоотехнической методике [М.Ф. Томмэ, 1969].
В конце исследований проведены балансовый и физиологический опыты.
Для изучения состояния обменных процессов в организме подопытных животных брали кровь из яремной вены через 4 часа после утреннего кормления и проводили биохимический анализ сыворотки крови с определением показателей, характери зующих состояние углеводно-жирового и белкового обмена, обмена аминокислот.
Биохимические исследования проводились в лаборатории биохимических исследо ваний ВИЖа на автоматическом биохимическом анализаторе ChemWell (Aware nessTehnology).
Учет химуса вели в последний день учетного периода на протяжении 16 ча сов (с 600 до 2200 ),с отбором средних проб (50 мл), и перерасчетом общего количе ства химуса, прошедшего через дуоденальный анастомоз за сутки, при высокой степени корреляции (r=0,99).
Химический анализ кормов, их остатков, кала, мочи и дуоденального химуса проводили в химико-аналитической лаборатории ВИЖа [Ю.И. Раецкая и др., 1970].
Для характеристики рубцового пищеварения у животных, в конце опыта, че рез фистулы отбирали пробы рубцовой жидкости за 1 час до кормления, через 1, 2, 3 и 4 часа после кормления. РН содержимого рубца определяли рН-метром Акви лон-410;
общее количество летучих жирных кислот – методом паровой дистилля ции в аппарате Маркгама;
процентное содержание летучих жирных кислот – хро матографическим методом в лаборатории пищеварения ВНИИФБиП сельскохозяй ственных животных;
количество биомассы – методом дифференцированного цен трифугирования;
видовой состав микрофлоры рубца молекулярно-генетическим методом T-RFLP анализа (ООО «Биотроф», г. Санкт-Петербург), определение ами нокислот – на жидкостном хроматографе LC-20 Prominence фирмы Shimadzy Япо ния.
В научно-хозяйственном опыте общей длительностью 180 дней добавки скармливались коровам-аналогам голштинизированной красно-пестрой породы с удоем за предыдущую лактацию на уровне 6400 л по следующей схеме (таблица 2).
Изучалось последействие препаратов в течение 40 дней после прекращения их скармливания.
Животные содержались привязно, при трехкратном доении. Технологиче ский учет надоев молока от каждой коровы проводился дважды в месяц при опре делении в нем содержания жира и белка в хозяйстве на анализаторе Клевер-2.
Полученные данные обработаны вариационно-статистическим методом [Г.Ф. Лакин, 1990].
Таблица Схема научно – хозяйственного опыта в ЗАО «Русь» Количество Характеристика Группа голов кормления контрольная 8 ОР (кормосмесь+комбикорм) 1-опытная 8 ОР + 15 г/гол./сут. Карнипасс 2-опытная 8 ОР + 200 г/гол./сут. кормовой добавки Кар мецелл 20 дней до отела и 20 дней после оте ла, далее по 100 г/гол./сут. в течение 100 дней.
Характеристика изучаемых кормовых добавок:
Карнипасс – 18 % «защищенного» L-карнитина (линейного мышечного бе таина), витамины, провитамины. Носитель – кремниевая кислота. Производство.
Германия (LAH) Кармецелл - «защищенная» формы L-карнитина (2,16г), в виде добавки Кар нипасс (12%), метионина гидроксианалог (20%), холин-хлорид (15%), пробиотик Целлобактерин-Т (10%), адсорбент (цеолит) (30%), наполнитель – отруби пшенич ные и ароматические вещества (13%). Производство ЗАО «Премикс» (Краснодар ский край) 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Состав и питательность рационов бычков Таблица Фактическое потребление питательных веществ кормов Группа Показатель контрольная 1-опытная 2-опытная Кол-во % Кол-во % Кол-во % ЭКЕ 6,7 - 6,9 - 7,0 Обменная энергия, М Дж 66,5 - 69,5 - 70,3 Сухое вещество, г 6795 100,0 6836 100,0 6879 100, Органическое вещество, г 6300 92,7 6335 92.7 6402 93. Сырой протеин, г 1059 15.6 1072 15.7 1089 15. Переваримый протеин, г 659 - 678 - 689 Сырой жир, г 258 3.8 256 3.7 255 3, Сырая клетчатка, г 1385 20.4 1388 20.3 1398 20. Сырая зола, г 495 7.3 501 7.3 477 6. Кальций, г 63 - 66 - 68 Фосфор, г 40 - 43 - 47 Железо, мг 2287 - 2396 - 2576 М едь, мг 96 - 101 - 108 Цинк, мг 400 - 421 - 452 М арганец, мг 376 - 396 - 425 Каротин, мг 216 - 228 - 231 Витамин Д, тыс.М Е 15 - 16 - 17 Витамин Е, мг 714 - 752 - 803 Установлено, что введение в состав рациона добавок Карнипасс и Кар мецелл, ведет к увеличениию потребления сухого, органического вещества и сыро го протеина.
3.1.2. Показатели рубцового пищеварения Применение добавок в значительной степени сказалось на динамике процес сов пищеварения в преджелудках (таблица 4).
Таблица Динамика показателей рубцового метаболизма Время взятия проб После кормления через (час.) Группа За 1 час до кормления 1 2 3 Азот аммиака в рубцовой жидкости бычков (мг%) контрольная 10,761,42 23,790,73 26,320,56 22,651,84 12,940, 1-опытная 6,170,04* 18,01,11* 22,171,12 22,050,73 14,600, 2-опытная 10,752,22 21,671,58 29,950,24* 30,311,50* 24,273,75* ЛЖК в рубцовой жидкости (М моль/100мл) контрольная 10,1±0,61 10,2±0,41 12,3±0,23 12,8±0,23 13,6±0, 1-опытная 10,8±0,40 12,2±0,29* 13,2±0,32 14,1±0,20* 14,6±0, 2-опытная 10,7±0,32 12,5±0,47* 13,7±0,12** 14,3±0,36* 15,8±1, рН рубцовой жидкости контрольная 7,10±0,07 6,94±0,01 6,79±0,09 6,75±0,06 6,64±0, 1-опытная 7,09±0,01 6,73±0,07* 6,53±0,02 6,48±0,03* 6,38±0, 2-опытная 7,12±0,02 6,63±0,12 6,60±0,02 6,50±0,02** 6,38±0, Различия по сравнению с контролем статистически достоверны при значении Р:*)- 0,05,**)- 0,01.
Установлено резкое возрастание концентрации азота аммиака после кормле ния во всех группах животных, с максимумом через 2-3 часа после начала кормле ния. За это время она увеличилась в контрольной группе на 144,6% (Р0,001), в 1 опытной – на 259,3 % (Р0,001), во 2-опытной к 3 часу на 182,0 % (Р0,01).
При этом, до, и после кормления, установлены более низкие показатели кон центрации азота аммиака у животных 1-опытной группы в сравнении с контролем на 43,0% (Р0,05), что может указывать на его вовлечение в азотистый обмен на тканевом уровне,и более эффективное использование азота протеина рубцовой микрофлорой, при более низких потерях азота с мочой. а имевшая место тенденция к повышению концентрации азота аммиака только на второй час после кормления может свидетельствовать о «защищенности» карнитина как азотистого соединения.
Изменения концентрации азота аммиака после кормления могли быть обу словлены особенностями гепато-руменальной циркуляции, при обратном поступ лении ряда азотистых метаболитов в просвет рубца.
К третьему часу после кормления отмечена тенденция к снижению концен трации азота аммиака как в контроле, так и в 1-опытной группе, а снижение уровня азота аммиака во 2-опытной группе только к четвертому часу может быть обуслов лено действием многокомпонентной добавки Кармецелл.
Общее содержание летучих жирных кислот (ЛЖК) в рубцовой жидкости жи вотных всех групп закономерно возрастало, достигая максимума к четвертому часу после кормления. К этому времени концентрация ЛЖК у животных контрольной группы возросла по сравнению с исходной на 34,7% (Р0,05), 1-опытной группы – на 35,2% (Р0,001), во 2 группе – на 47,7% (Р0,05).
Следует отметить, что концентрация ЛЖК в рубце животных, потреблявших добавки, была более высокой, чем в контроле. Так, до кормления этот показатель был выше по сравнению с контролем в 1-опытной группе на 6,9%, во 2 группе – на 5,9%. Через 1 час после кормления разница составила между группами 19, (Р0,05) и 22,5% (Р0,05), через два часа – 7,3 и 11,4% (Р0,01), через три – 10,2 и 11,0%, через четыре – 7,4 и 16,2%, соответственно. Это свидетельствует о более интенсивном протекании гидролиза углеводов у животных опытных групп, осо бенно в группе с Кармецеллом.
Концентрация водородных ионов в рубцовой жидкости, отражающая в опре деленной степени интенсивность и направленность микробиологических процессов в рубце жвачных животных находилась в пределах физиологической нормы, при соответствии динамике уровня образования ЛЖК.
С повышением уровня образования ЛЖК у животных, получавших добавки, существенной разницы в их соотношении не выявлено.
Содержание уксусной кислоты в рубцовой жидкости животных как опыт ных, так и контрольной групп после кормления снижалось: в контроле на 5,8%, 1 опытной группе – на 6,0%, 2-опытной группе – на 5,8%, при возрастании доли про пионовой кислоты в контроле на 22,4%, в 1-опытной – на 21,9%, во 2 - опытной – на 21,2%, соответственно. Наряду с этим отмечалась тенденция к снижению уровня масляной и прочих кислот в рубцовой жидкости животных, получавших добавки.
Дополнительным подтверждением повышения интенсивности гидролиза уг леводов является увеличение численности симбионтной микрофлоры в жидкости рубца (таблица 5).
Таблица Количество микробиальной массы в рубцовой жидкости бычков (г/100мл) Время отбора проб Группа 1 час до кормления 3 часа после кормления бактерии простейшие всего бактерии простейшие всего контрольная 0,2240± 0,3437± 0,5677 0,4505± 0,6015± 1, 0,01 0,04 0,03 0, 1-опытная 0,2500± 0,3702± 0,6202 0,4780± 0,6060± 1, 0,02* 0,01* 0,02** 0,01* 2-опытная 0,4644± 0,3984± 0,8128 0,5997± 0,6812± 1, 0,01* 0,004** 0,01*** 0,02** Различия по сравнению с контролем статистически достоверны при значении Р:*) 0,05,**)- 0,01,***)- 0,001.
При скармливании опытным животным добавок с «защищенным» L карнитином наблюдалось значительное достоверное увеличение бактериальной массы, как за счет бактерий, так и простейших. Это может свидетельствовать о со здании более благоприятных условий для роста микроорганизмов, причем в боль шей степени при использовании комплексной кормовой добавки Кармецелл.
Через три часа после кормления количество микробиальной массы увеличи валось в контрольной группе на 85,3;
в первой опытной - на 74,8;
во второй – на 57,6%. При этом до кормления масса микроорганизмов рубца у животных кон трольной группы была ниже, чем в опытных группах на 9,2 и 43,1%, соответствен но.
Повышение количества микробиальной массы сопровождалось изменением и видового состава микрофлоры рубца, который в значительной степени зависел как от времени взятия рубцовой жидкости, так и от включения в рацион изучаемых добавок, с доминированием микроорганизмов, участвующих в процессах фермен тации компонентов растительных кормов: бактерии фил Bacteroidetes (семейств Bacteroidaceae, Flavobacteriaceae, Flexibacteraceae) и Firmicutes (семейств Clos tridiaceae, Eubacteriaceae, Lachnospiraceae, Peptostreptococcaceae, Ruminococcaceae) (таблица 6).
При этом наибольшее количество целлюлозолитических бактерий семейства Laсhnospiraceae выявлено в рубце бычков, потреблявших Кармецелл, как до, так и после кормления, соответственно составившее 4,09±0,92% (Р0,05) и 4,38±0, (Р0,05), как и бактерий семейства Ruminococcaceae (Р0,01). Скармливание кор мовой добавки Карнипасс незначительно сказалось на концентрации данных цел люлозолитиков.
Количество других микроорганизмов, ферментирующих простые и сложные углеводы кормов – бактерий семейств Eubacteriaceae (Eubacterium sp., Eubacterium rectale, Eubacterium ruminantium) и Clostridiaceae (Clostridium sp.) было вариабель ным. Отмечалось снижение количества семейства Eubacteriaceae после кормления у всех бычков, при достоверном повышении популяций семейства Clostridiacea, в рубцовой жидкости бычков 2-опытной группы как до, так и после кормления.
Тенденция к увеличению содержания бактерий филы Bacteroidetes после кормления у животных 1-опытной группы на 1,10% и 2-опытной на 1,51%, в срав нении с контролем, указывает на повышение переваримости крахмалсодержащих компонентов корма.
Количество молочнокислых бактерий семейства Lactobacillaceae, ферменти рующих моносахара до лактата в рубце, было достаточно высоким у всех исследу емых животных, при значительном росте популяций после кормления, у животных 2-опытной группы - 18,10%, что на 5,50% выше контроля, при увеличении бакте рий семейства Bifidobacteriales.
Введение в рацион добавки Кармецелл способствовало достоверному сни жению количества в содержимом рубца Actinomycetales, включающих значитель ное количество патогенных для животных видов микроорганизмов, как до, на 0, (Р0,05), так и после кормления, на 3,26% (Р0,01).
Следует особо отметить, что в рубце всех животных были зафиксированы фузобактерии – бактерии рода Fusobacterium (вызывающие некробактериоз жвач ных) и кампилобактерии семейства Campylobacteriaceae (возбудители кампилобак териозного мастита), количество которых варьировало в зависимости от времени кормления. Наименьшее количество данных бактерий выявлено в рубце бычков 2 опытной группы как до, так и после кормления, - ниже контроля на 0,74%(Р0,05) и 1,08% (Р0,01), наряду с тенденцией к их снижению у животных, потреблявших Карнипасс, на 0,34 и 0,40%, соответственно.
При расшифровке T-RFLP-профилей установлено, что большинство бакте рий рубца бычков были некультивируемыми. Всего было зафиксировано 70 фило типов некультивируемых микроорганизмов, среди которых было выделено 6 доми нирующих. Установлено также, что количество данных бактерий зависело как от влияния кормовых добавок, так и от времени взятия рубцовой жидкости.
Таблица Количество доминирующих микроорганизмов в рубце бычков, % Группа контроль 1-опытная 2-опытная Время отбора проб М икроорганизм 3 часа 3 часа 3 часа 1 час до 1 час до 1 час до после после после кормления кормления кормления кормления кормления кормления Фила Bacteroidetes 5,26±1,19 3,09±0,18 3,74±1,49 4,19±1,37 3,57±0,97 4,60±0, Фила Firmicutes 54,20±4,44 51,30±3,99 56,20±1,12 57,10±0,51 61,20±1,03 63,94±8, Класс Clostridia 28,9±2,17 24,7±1,83 29,7±6,41 28,9±5,74 33,4±3,34 31,5±2,04* Сем. Clostridiaceae 8,92±1,12 8,45±1,21 8,81±4,21 8,83±0,95 13,5±0,30* 13,6±1,33* Сем. Eubacteriaceae 4,23±0,86 2,49±0,31 5,22±0,27 2,39±0,30 6,95±1,56 2,29±1, Сем. Ruminococcaceae 1,03±0,30 н.п.д.о. 3,20±1,13* 1,38±0,92** 4,01±0,14** 4,19±1,44** Сем. Lachnospiraceae 2,14±0,44 2,21±0,47 2,98±1,50 2,85±0,54 4,09±0,22* 4,38±0,36* Сем. Veillonellaceae 1,34±0,26 0,96±0,43 0,88±0,58 0,24±0,32 0,28±0,18 0,35±0, Класс Bacilli 25,30±3,48 26,60±4,71 26,50±10,9 28,20±5,21 27,80±3,42 32,44±7, Сем. Bacillaceae 3,24±0,72 3,77±0,48 3,36±1,57 3,89±1,81 3,58±0,68 4,37±1, Сем. Lactobacillaceae 5,31±2,94 12,60±9,15 7,30±7,7 13,51±0,18 7,35±4,07 18,10±3, Порядок Bifidobacteriales 0,53±0,45 1,44±0,47 0,96±0,64 1,71±1,77 1,24±0,46 1,91±0, Порядок Actinomycetales 4,41±0,19 8,23±0,88 3,62±2,42 6,48±2,01 3,64±0,14* 4,97±1,31** Патогенные бактерии Сем. Enterobacteriaceae 4,85±0,37 3,63±0,90 3,19±2,12 3,17±1,82 3,11±0,52* 3,39±1, Сем.Campylobacteriaceae 0,69±0,02 0,55±0,37 0,56±0,37 н.п.д.о. н.п.д.о. н.п.д.о.
Сем. Enterococcaceae 12,2±2,37 8.90±1,36 5,13±2,42* 4,40±0,20* 3,25±2,01** 3,16±1,52* Фила Fusobacteria 1,37±0,21 1,73±0,23 1,03±0,86 1,33±1,42 0,63±0,16* 0,65±0,25** Некультивируемые бактерии 28,04±2,42 29,4±1,96 30,5±9,92 24,6±4,63 24,40±1,9 20,43±5, н.п.д.о. – ниже предела допустимого определения Данные в таблице представлены в сокращенном виде, полный анализ показан в диссертации Таким образом, установлено, что введение в рационы откармливаемых быч ков L-карнитина в «защищенной» форме в составе Карнипасса и комплексной до бавки Кармецелл способствует положительным изменениям направленности мик робиальных процессов в преджелудках, создавая более благоприятные условия для повышения переваримости и усвоения питательных веществ кормов в нижележа щих отделах пищеварительного тракта. При этом не отмечено повышение напря женности желудочно-кишечного тракта у бычков, свидетельством чего является сравнительно одинаковое образование дуоденального химуса.
3.1.3. Переваримость питательных веществ рациона Введение в состав рациона добавок положительно сказалось на переваримо сти сухого вещества и составных питательных веществ кормов (таблица 7).
Таблица Коэффициенты переваримости питательных веществ, % Показатель Органи Сухое Сырой Сырой Сырая ческое БЭВ вещество протеин жир клетчатка Группа вещество Контрольная 65,7±1,3 68,0±1,2 62,2±2,9 56,3±3,2 60,6±2,5 73,0±1, 1-опытная 68,5±2,7 70,8±2,5 63,3±1,3 59.4±2,4 66,7±3,0 75,9±2, 2-опытная 68,3±1,6 70,6±1,6 63,3±5,4 68,6±1,1* 74,0±3,4* 71,6±0, Различия по сравнению с контролем статистически достоверны при значении Р:*) 0, В 1-опытной группе на фоне повышения потребления сухого и органическо го вещества, можно отметить увеличение их переваримости: сухого и органическо го вещества на 2,8%, сырого протеина на 1,1%, сырого жира на 3,1%, и клетчатки на 6,1%, соответственно.
Во 2-опытной группе переваримость сухого и органического вещества была выше чем в контроле на 2,6 %. Следует отметить значительное достоверное увели чение переваривания клетчатки - на 13,4% (Р0,05), что обусловлено комплексным действием добавки Кармецелл, в состав которой входит пробиотик Целлобактерин Т. Значительное повышение переваримости клетчатки согласуется с показателями метаболических процессов в преджелудках, в частности, с почасовой динамикой уровней образования ЛЖК, количественного и видового состава бактериальной массы (таблицы 4, 5 и 6).
Также, во 2-опытной группе отмечалось увеличение общей переваримости сырого протеина на 1,1% и сырого жира на 12,3% (Р0,05).
Изменение направленности в переваривании питательных веществ по отде лам желудочно-кишечного тракта оказало положительное влияние на усвоение и использование азотистых веществ в организме животных, получавших добавки.
3.1.4. Баланс азота в организме откармливаемых бычков Наибольшее количество потребленного азота отмечалось во 2-опытной группе, при разнице с контролем на 2,8%, в 1-опытной группе – на 1,2% (таблица 8).
Количество поступившего в кишечник азота у животных опытных групп бы ло ниже, соответственно по группам: в первой – на 10,3%, во второй – на 9,6%, что, вероятно, связано с изменением направленности азотистого обмена в преджелуд ках и вовлечением его в гепато-руменальную циркуляцию.
Таблица Баланс и использование азота протеина в пищеварительном тракте бычков Группа Показатель контрольная 1-опытная 2-опытная Принято с кормом, г 169,46±6,13 171,46±3,32 174,20±0, Прошло через анастомоз, г 182,57±7,68 163,80±10,64 165,00±6, Содержится в кале, г 64,08±2,83 62,95±2,67 64,02±9, Всего переварено, г 105,38±8,31 108,51±2,90 110,18±9, Коэффициент переваримости, % 62,2±2,86 63,3±1,33 63,3±5, Содержится в моче, г 80,89±2,95 75,35±7,18 72,96±7, Отложено в теле, г 24,49±5,55 33,16±4,27 37,22±7,40* Коэффициент использования, % 14,5±2,87 19,3±2,65 21,4±7,72* Различия по сравнению с контролем статистически достоверны при значении Р:*) 0,05.
Изменение направленности межуточного обмена вследствие применения кормовых добавок в целом способствовало улучшению азотистого обмена в орга низме животных опытных групп, при выявленном повышении коэффициентов ис пользования на фоне увеличения отложения азота в теле. Так, коэффициент ис пользования азота у животных 2-опытной группы был выше по сравнению с кон трольной на 6,9 абс.% (Р0,05), 1- опытной - на 4,8%.
Отложение азота у бычков опытных групп было значительно выше: в группе отложено на 8,7 г или 35,4%, во второй – на 12,7 г или 52,0% (Р0,05), в сравнении с контрольной.
Увеличение отложения азота у животных, получавших кормовые добавки, согласуется с полученными данными по усвояемости аминокислот. Так сумма усвоенных незаменимых аминокислот была на 5,7% и 11,6% выше контроля, а за менимых на 6,2% и 13,1%, соответственно по группам опыта.
3.1.5. Биохимические показатели крови бычков Концентрация изученных метаболитов обмена веществ в крови животных всех групп находилась в пределах физиологической нормы (таблица 9).
Скармливание добавок сказалось положительно на состоянии азотистого обмена, создав определенный резерв белка в виде белков сыворотки крови. Так общего белка у бычков 1-опытной группы содержалось на 6,2%, альбуминов – на 5.9%, глобулинов – на 11,4% выше в сравнении с контролем. Во 2-опытной группе данные показатели были более высокими, и составили, соответственно, - 14,8% (Р0,05), 9,4%, 25,5% (Р0,05). При возрастание уровня альбуминов, представляю щих мелкодисперсную фракцию белков, может свидетельствовать об усилении белковообразовательной функции печени, и показателем восполнения запасов бел ка в организме.
При этом отмечалось снижение альбуминово-глобулинового соотношения у животных опытных групп по сравнению с контрольной группой.
Рост уровня аммиака в рубце, на фоне незначительного повышения уровня мочевины в крови бычков, могут свидетельствовать о более интенсивном течении азотистого обмена, при усилении функциональной преобразовательной деятельно сти печени, что особенно выражено у животных 2-опытной группы.
Таблица Биохимические показатели крови бычков Группа Показатели контрольная 1-опытная 2-опытная Общий белок, г/л 71.37±1.68 75.77±1.68 81,93±3.31* Альбумины, г/л 24.38±0.79 25,83±4.12 26.68±1. Глобулины, г/л 44.68±2.72 49.78±3.79 56.09±1.06* А/Г 0.55±0.07 0.52±0.06 0.48±0. АЛТ, М Е/л 15.15±1.51 18.10±1.80 19.03±4. АСТ, М Е/л 44.05±1.32 41.83±1.09 38.67±2. М очевина, ммоль/л 4.77±1.38 4.96±1. 4.86±0. Креатинин, мкмоль/л 73.14±1.13 77.96±2.64 85.66±3.42* Билирубин общий, мкмоль/л 5.37±0.42 4.39±0.44 3.86±0.47* Холестерин, ммоль/л 2.42±0.11 2.25±0.07 2.01±0.09* Щелочная фосфатаза, М Е/л 322.90±64.89 318.86±46.83 282.68±34. Глюкоза, ммоль/л 3.29±0.14 3.09±0.40 2.89±0. Кальций, ммоль/л 3.82±0.27 3.32±0.25 3.07±0. Фосфор, ммоль/л 2.85±0.40 2.81±0.50 2.73±0. М агний, ммоль/л 1.04±0.13 0.97±0.15 0.81±0. Различия по сравнению с контролем статистически достоверны при значении Р:*) 0,05.
Концентрация креатинина в крови бычков 1-опытной группы была выше, чем в контроле на 6,6%, а 2 группы на 17,1% (Р0,05), что свидетельствует о боль шем накоплении креатинфосфата – запасного аккумулятора энергии, используемо го при синтезе белков.
Повышение уровня АЛТ в сыворотке крови на 19,5% в 1-опытной, и на 25,6% во 2 группе, при значительном снижении активности АСТ, - на 5,0% и 12,2%, соответственно, по сравнению с контролем, является показателем стабили зирующего действия кормовых добавок на свободные аминокислоты крови, менее подвергаемых катаболизму, при более активном синтезе белков в печени.
Достоверное снижение уровня билирубина и холестерина в крови животных получавших кормовые добавки, может также свидетельствовать об улучшениии функциональной деятельности печени.
Уровень глюкозы в крови, как один из важнейших показателей углеводного обмена снижался в сравнении с контролем на 6,1% в 1-опытной группе, и на 12,2% во 2 группе, что может свидетельствовать о более высоком энергообеспечении ор ганизма животных на фоне более интенсивных процессов белкового синтеза.
Снижение активности щелочной фосфатазы у животных, получавших ком плексную добавку (на 12,5%), при тенденции к снижению уровня фосфора (на 4,2%) может указывать на повышение энергообеспеченности клеток тканей в виде АТФ.
Уровень кальция и магния был положительным и находился в пределах фи зиологической нормы у всех подопытных животных.
Результаты исследований, полученные в физиологических опытах на поли фистульных бычках, дали основания для проведения научно-хозяйственного опыта на лактирующих коровах.
3.2. Научно-хозяйственный опыт Продолжительность опыта составила 180 дней. Животные, при привязном содержании, получали общехозяйственный рацион, представленый в таблице 10.
Таблица Состав и питательность средневзвешенных рационов в научно-хозяйственном опыте в ЗАО «Русь» Группа Показатели контрольная 1-опытная 2-опытная Сено люцерновое, кг 5,0 5,0 5, Силос кукурузный, кг 10,0 10,0 10, Сенаж люцерновый, кг 12,0 12,0 12, Комбикорм, г * 9,5 10,4 11, Жмых подсолнечн., кг 1,5 1,5 1, Жом свекловичный, кг 1,0 1,0 1, Патока, кг 2,0 2,0 2, Карнипасс, г - 15,0 Кармецелл, г - - по схеме В рационе содержится (по фактически потребленным веществам):
ЭКЕ 24,1 25,0 25, Обменной энергии, М Дж 241 250 Сухого вещества, г 23187 23952 Сырого протеина, г 3738 3840 Переваримого протеина, г 2529 2605 Сырого жира, г 722 742 Сырой клетчатки, г 4235 4279 Кальция, г 260 266 Фосфора, г 130 138 Железа, мг 2050 2095 М еди, мг 235 248 Цинка, мг 1503 1575 М арганца, мг 1553 1650 Кобальта, мг 19,1 20,3 21, Каротина, мг 1120 1146 Витамина D, М Е 23,7 24,1 25, Витамина Е, мг 862 989 * комбикорм скармливался из расчета 380 г на литр молока, в соответствии с данными контрольных доек.
Общее количество полученного натурального молока за учетный период опыта при скармливании добавок составило в 1-опытной группе 3879 кг (Р0,05), что на 279 кг выше, чем в контроле, и 4032 кг (Р0,01) во 2-опытной, что на 432 кг выше контроля (таблица 11).
Наряду с повышением суточных удоев молока у коров, получавших добавки, отмечалась тенденция к увеличению общего выхода жира и белка. Так, валовый выход жира у животных 1- и 2-опытных групп был на 7,6% и 16,5% выше, чем в контроле. По выходу белка эта разница составила 5,9 % и 13,0%, соответственно.
Затраты концентратов на литр молока 4%-й жирности составили в контроле 404 г, в 1-опытной группе 403 г, во 2-й -387 г.
Таким образом, по основным показателям молочной продуктивности приме нение комплексной кормовой добавки Кармецелл является более эффективной.
Таблица Молочная продуктивность дойных коров за 120 дней научно-хозяйственного опыта (в среднем на 1 голову) (n=8) Группа Показатель контрольная 1-опытная 2-опытная Валовой удой молока натураль ной жирности, кг 3600±81,53 3879±77,45* 4032±99,54** Среднесуточный удой молока натуральной жирности, кг 30,0±1,02 32,3±1,05* 33,6±1,05* Содержание жира, % 3,96±0,03 3,96±0,05 4,12±0, Содержание белка, % 3,20±0,02 3,15±0,02 3,23±0, Валовой удой молока 4% -ной жирности, кг 3564±67,89 3840±44,29** 4153±85,56** Среднесуточный удой молока 4% -ной жирности, кг 29,7±1,02 32,0±0,15* 34,6±2, Количество молочного жира, кг 142,6 153,6 166, Количество молочного белка, кг 115,2 122,2 130, Затрачено на 1 кг молока 4%-й жирности:
ЭКЕ, М Дж 0,81 0,78 0, концентратов, г 404 403 Различия по сравнению с контролем статистически достоверны при значении Р:*) 0,05,**)- 0,01,***)- 0,001.
В 40-дневный учетный период последействия препарата дополнительная прибавка молока составила 7,7% (70 кг) в 1-опытной группе и во 2, - 16,9 % ( кг) по отношению к контролю.
Применение препаратов способствовало улучшению воспроизводительной функции у коров, а также снижению послеотельных осложнений. Так сервис период у контрольных животных составил 105 дней, получавших Карнипасс, - дней, и 82 дня у получавших добавку Кармецелл.
В конце научно-хозяйственного опыта проведены биохимические исследо вания крови у коров, по 3 головы из каждой группы (таблица 12).
В результате проведенных исследований установлено, что концентрация изученных метаболитов обмена веществ в крови животных всех групп находилась в пределах допустимой физиологической нормы.
По ряду показателей отмечалась общая тенденция, согласующаяся с биохи мическими показателями крови, полученными в физиологических опытах на быч ках - модельных животных (таблица 9).
Так, при изучении показателей белкового обмена у коров, получавших до бавки установлено увеличение резерва белка в виде белков сыворотки крови, - в 1 опытной группе на 2,3%, альбуминов – на 7,7%, во 2-ой опытной на 13,0% (Р0,001), альбуминов – на 16,3% (Р0,01), при сравнительно одинаковом уровне глобулинов, и отношении А/Г.
Имеющаяся тенденция к повышению уровня мочевины и креатинина в крови подопытных животных, косвенно может свидетельствовать о более интенсивном течении азотистого обмена, при усилении функциональной преобразовательной деятельности печени у животных получавших добавки, особенно во 2-ой опытной группе. Так, уровень мочевины в крови животных 1-опытной группы был выше на 9,9%, по сравнению с контролем, а во 2 - на 20,6%, креатинина на 8,3% и на 26,9%, соответственно, что незначительно сказалось на повышении белка в молоке.
Таблица Биохимические показатели крови Группа Показатель контрольная 1-опытная 2-опытная 75,82±1,65 77.53±1,33 85,68±1,58*** Общий белок, г/л 26,80±0,49 28,87±1,15 31,18±1,14** Альбумин, г/л 53,39±2.01 54,04±1,68 55,38±1, Глобулин, г/л 0,50±0,08 0,53±0,09 0,56±0, А/Г 30,52±3,37 32,77±3,55 33,88±3, АЛТ,М Е/л 76,42±9,24 68,87±4,63 59,36±5, АСТ,М Е/л 4,85±0,78 5,33±0,53 5,85±0, М очевина, ммоль/л 69,08±3,78 74,84±3,53 87,66±3,33** Креатинин, мкмоль/л 3,85±0,36 3,57±0,30 3,27±0, Билирубин общий, мкмоль/л 5,08±0,18 4,86±0,13 4,13±0,32* Общие липиды, г/л 2,83±0,18 2,42±0,16 2,31±0, Фосфолипиды, ммоль/л 5,04±0,26 4,12±0,37* 3,77±0,30** Холестерин, ммоль/л Липидный индекс 0,04 0,04 0, 116,88±15,17 103,53±14,36 95,11±8, Щелочная фосфатаза, М Е/л Различия по сравнению с контролем статистически достоверны при значении Р:*) 0,05,**)- 0,01,***)- 0,001.
Ввиду более интенсивного азотистого обмена у опытных животных установ лено повышение уровня АЛТ в сыворотке крови коров на 7,4% в 1-опытной, и на 11,0% во 2-опытной группе по сравнению с контролем.
Снижение уровня билирубина и холестерина в крови животных, получавших кормовые добавки, наряду со снижением активности щелочной фосфатазы в 1 опытной на 11,4%, во 2-опытной группе на 18,6% связано с повышением функцио нальной деятельности печени.
Снижение уровня общих липидов во 2-опытной группе на 18,7% (Р0,05) и фосфолипидов на 18,4% в сыворотке крови может свидетельствовать о более ин тенсивном вовлечении их в обмен веществ, что способствовало повышению жир номолочности коров получавших добавки. Липидный индекс во всех группах был одинаков, что свидетельствует об отсутствии отрицательного влияния кормовых добавок на липидный обмен.
При проведении научно-хозяйственного опыта установлено, что применение кормовых добавок Карнипасс, с затратной стоимостью 1170 руб. и Кармецелл, 2880 руб. полностью окупается дополнительно полученной продукцией и способ ствует снижению затрат кормов на производство молока, а также улучшению функций воспроизводства и уменьшению послеотельных осложнений.
4. Выводы 1. Включение в рацион бычков добавок Карнипасс и Кармецелл способ ствует изменению направленности преджелудочного пищеварения, что сопровож дается:
- увеличением общего количества симбионтной микрофлоры, - через три часа после кормления на 3,0 и 21,8%, в том числе в 1-опытной по количеству бак терий на 6,1%, простейших – на 0,7%, и во 2-опытной, соответственно, – на 33,1 и 13,3% по отношению к контрольной группе;
- значительным увеличением целлюлозолитических микроорганизмов, при достоверно установленном снижении условно и безусловно-патогенной микрофло ры, особенно у животных получавших комплексную добавку Кармецелл;
- увеличением уровня образования ЛЖК после кормления на 7,4-16,2% в сравнении с контролем, при изменении концентрации аммиака;
свидетельствую щих о повышении интенсивности рубцового метаболизма.
2. Применение добавок способствует повышению видимой переваримости сухого вещества и органического вещества на 2,6-2,8%, сырого протеина на 1,1%, сырого жира на 3,1 и 12,3% (Р0,05), по сравнению с контролем, при значительном повышении переваримости клетчатки, - на 6,1 и 13,4% (Р0,05), соответственно.
3. Введение в рацион добавок положительно сказывается на использовании азота, отложение которого составило 33,16 г в группе получавшей Карнипасс, 37, г (Р0,05) в группе получавшей Кармецелл, против 24,49 г в контроле, при повы шении усвояемости аминокислот.
4. Использование добавок в рационах молодняка крупного рогатого скота положительно влияет на азотистый и углеводно-жировой обмен, особенно полу чавших Кармецелл, при достоверном увеличении показателей уровня белка на 14,8%, креатинина на 17,1%, и снижении уровней билирубина и холестерина на 39,1 и 20,4%, соответственно.
5. Введение в рацион добавки Кармецелл оказывает положительное влияние на интенсивность протекания обменных процессов в организме коров в период раздоя, при установленном достоверном повышении уровня белка на 13,0%, креа тинина на 26,9%, и снижении уровней холестерина на 25,2% (Р0,01), общих липи дов на 18,7% (Р0,05), щелочной фосфатазы на 18,6% и билирубина на 15,1%, что свидетельствует об улучшении углеводно-жирового и белкового обмена. В мень шей степени аналогичные тенденции отмечались у животных, получавших Карни пасс.
6. Скармливание добавок Карнипасс и Кармецелл новотельным коровам, способствует увеличению валового удоя молока 4%-ной жирности на 7,7% и на 16,5%, соответственно, при снижении затрат кормов на единицу продукции, с вы раженным положительным последействием.
Практические предложения Рекомендуем в практике молочного животноводства использовать в составе рационов кормовые добавки «защищенной» формы L-карнитина в виде Карнипасс, при широком использовании его в составе многокомпонентной кормовой добавки Кармецелл, согласно разработанным схемам.
Список опубликованных работ В рецензируемых журналах:
1. Иванова, Г.В. Влияние добавок с защищенной формой L-карнитина на процессы пищеварения и молочную продуктивность коров. / В.Н. Романов, Г.В.
Иванова // Главный зоотехник. – 2011. - № 8. – С.16-20.
2. Романов, В.Н. Обеспечение здоровья и продуктивности животных в пери оды технологических стрессов. / В.Н. Романов, Р.В. Некрасов, Н.В. Боголюбова, Г.В. Иванова, Е.Ю. Подшибякин, И.Ю. Прохоров // Зоотехния. – 2009. - №9. - С.
27-28.
В других изданиях:
3. Романов, В.Н. Оптимизация обменных процессов и оздоровление высоко продуктивного скота в периоды технологических стрессов. / В.Н. Романов, В.В.
Пузанова, Г.В. Иванова, И.Ю. Прохоров // Материалы международной юбилейной научно-практической конференции, посвященной 60-летию Рязанского ГАТУ име ни П.А.Костычева «Актуальные проблемы аграрной науки». – Рязань. - 2009. - С.
341-342.
4. Романов, В.Н. К целесообразности применения защищенного L-карнитина в рационах высокопродуктивного скота. / В.Н. Романов, Н.В. Боголюбова, Р.В.
Некрасов, Г.В. Иванова // Материалы международной юбилейной научно практической конференции, посвященной 60-летию Рязанского ГАТУ имени П.А.Костычева «Актуальные проблемы аграрной науки». – Рязань. - 2009. - С. 365 367.
5. Романов, В.Н. Особенности процессов пищеварения у жвачных и молоч ная продуктивность при использовании в рационах защищенной формы L карнитина. / В.Н. Романов, Н.В. Боголюбова, Г.В. Иванова // Научные труды ВИ Жа. «Научные основы ведения животноводства». Вып. 65. - Дубровицы. - 2009. - С.
63-65.
6. Романов, В.Н.Физиологические основы и методы снижения отрицательно го действия технологических стрессов у жвачных животных. / В.Н. Романов, Н.В.
Боголюбова, Г.В. Иванова, В.А. Девяткин // Сборник научных тезисов «Адаптация и становление физиологических функций у животных». – Москва. - 2010. - С. 131 134.
7. Романов, В.Н. Физиологическое и продуктивное действие кормовых доба вок с «защищенным L-карнитином. / В.Н. Романов, Г.В. Иванова, Н.В. Боголюбо ва // Материалы V Междунар. Конференции, посвященной 50-летию ВНИИФБиП «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». - Боровск 2011. – С. 169-171.
Издательство ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии Тел. (8-4967) 65-13- (8-4967) 65-15- Сдано в набор 18.01.2012. Подписано в печать 19.01. Заказ № 03. Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз.
Отпечатано в типографии ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии