Клинико-экспериментальное обоснование применения тетрасолвина
На правах рукописи
БАХМУТ ВИКТОРИЯ НИКОЛАЕВНА КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ТЕТРАСОЛВИНА 06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Краснодар – 2012 Диссертационная работа выполнена в Кубанском государственном аграрном уни верситете Научные руководители: доктор ветеринарных наук, профессор, Трошин Николай Алексеевич кандидат ветеринарных наук, Трошин Андрей Николаевич, заместитель директора Краснодарского НИВИ
Официальные оппоненты: Болоцкий Иван Александрович доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий лабораторией эпизоотологии ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветери нарный институт Россельхозакадемии Мирошниченко Василий Петрович кандидат ветеринарных наук.
Ведущая организация: Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт
Защита состоится 29 июня 2012 года в 14-00 часов на заседании диссертационно го совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу 350044 г. Краснодар, ул. Калинина,
С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государ ственный аграрный университет» по адресу 350044 г. Краснодар, ул. Калинина, Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» http://kubsau.ru " " мая 2012 г. и официальном сайте ВАК РФ – http://www.vak.ed. gov.ru/ Автореферат разослан «» мая 2012г.
Ученый секретарь диссертационного совета Родин И.А.
1.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. В настоящее время возрастает значение профилакти ки и лечения болезней сельскохозяйственных животных, особенно в связи с появ лением инфекций со сложной этиологией, обусловленной повышением вирулент ности условно патогенных микроорганизмов и вирусов. Часто эти болезни имеют общую симптоматику поражения дыхательных путей или пищеварительного тракта, приобретают характер смешанных инфекций, отличающихся от классиче ских форм проявления той или иной болезни осложненным течением.
Комплексное изучение их этиологии показало, что на фоне нарушения тех нологии получения и выращивания молодняка, возбудителями диарей и бронхоп невмонии у новорожденных поросят являются энтеропатогенные и энтеротокси генные, эшерихии, сальмонеллы, кокки, синегнойная палочка, криптоспоридии и другие.
Огромный экономический ущерб, причиняемый животноводческим хозяй ствам желудочно-кишечными и респираторными заболеваниями, вызывает необ ходимость поиска путей и методов совершенствования и изыскания новых эффек тивных средств профилактики и лечения.
В комплексе мероприятий по борьбе с указанными болезнями бактериаль ной этиологии у молодняка сельскохозяйственных животных широкое примене ние нашли такие химиотерапевтические средства, как антибиотики, сульфа ниламиды, нитрофураны и др. Однако длительное применение препаратов в жи вотноводстве привело к появлению резистентных штаммов микроорганизмов и резкому снижению эффективности указанных средств.
В связи с этим возникает необходимость создания новых высокоэффектив ных лекарственных препаратов, обладающих широким спектром антимикробного действия и активных в отношении резистентных штаммов микроорганизмов.
Известно, что широкий спектр антимикробной активности препаратов, как правило, достигается путем комбинирования нескольких лекарственных препара тов на базе одной или нескольких групп химических веществ. При этом сочетание различных химических структур в композиции позволяет достичь их синергидно го эффекта и получить препараты с новыми полезными свойствами.
Цель и задачи научных исследований. Основная цель нашего исследова ния заключается в изучении и внедрении ветеринарного препарата тетрасолвин, изучение его основных физико-химических свойств, токсикологического и фарма кологического действия, разработки показаний к применению, определении про филактической и лечебной эффективности при различных наиболее распростра ненных заболеваниях животных Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:
• разработать состав и технологию промышленного получения тетра солвина;
• изучить физические и химические свойства тетрасолвина, определить стабильность препарата и дать характеристику параметров контроля качества;
• изучить токсикологические свойства препарата;
• определить фармакологическое действие препарата;
• изучить лечебную и профилактическую эффективность препарата при респираторных и диарейных заболеваниях молодняка и при послеро довых заболеваниях у коров и свиней.
Научная новизна. Тетрасолвин – комплексный антибактериальный препа рат, разработанный для ветеринарной практики. Проведенные исследования поз волили определить его основные токсикологические и фармакологические свой ства.
Изучена эффективность тетрасолвина при заболеваниях животных, в срав нительном аспекте с традиционно применяемыми лекарственными средствами, установлено его преимущество, что выразилось в его высокой профилактической и лечебной эффективности при различных заболеваниях животных.
Исследования выполнены в соответствии с планом НИР Кубанского госу дарственного аграрного университета по заданию 4.12. № госрегистрации 01910049842.
Практическая значимость работы. Для лечения и профилактики органов пищеварения и дыхания у телят и поросят, а также гинекологических заболеваний коров бактериальной этиологии предложен новый комплексный антимикробный препарат тетрасолвин.
По результатам исследований разработана нормативно-техническая доку ментация (технические условия и временная инструкция по применению).
Апробация работы. Основные результаты исследований по диссертацион ной работе доложены на ежегодных научно-практических конференциях профес сорско-преподавательского состава и аспирантов Кубанского ГАУ (Краснодар 2005, 2006, 2009 г.г.), конференции в Московской государственной академии ве теринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина и Ставропольском го сударственном аграрном университете (2006).
Основные положения, выносимые на защиту:
- физико-химические характеристики тетрасолвина;
- результаты оценки основных токсикологических свойств тетрасолвина;
- отдельные фармакологические свойства препарата;
- применение тетрасолвина при заболеваниях пищеварительной, дыхатель ной систем, а также гинекологических заболеваниях коров и свиней.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи, из них 2 в изда ниях, рекомендованных ВАК РФ.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста, содержит таблицы, включает в себя введение, обзор литературы, материалы и методы ис следований, результаты собственных исследований, заключение, выводы и прак тические предложения. Список литературы содержит источников, из них отечественных и 68 иностранных.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал и методы исследований.
Экспериментальные исследования были проведены в условиях лаборатории кафедры терапии и клинической диагностики Кубанского ГАУ. Исследования выполне ны в соответствии с планом НИР Кубанскою государственного аграрного университета в период с 2003 по 2010гг. В проведе нии отдельных лабораторных исследований, с учетом их комплексности принимали участие А.Н. Трошин и Н.А. Трошина. Клинические экспери менты и производственные испытания в условиях животноводческих хозяйств Красно дарского края, проводились с участием ветеринарных работников ферм.
Основной объект исследований – препарат тетрасолвин, наработанный ООО НПВП «Ветфарм» (г. Тимашевск).
Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с установленными требованиями к эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содер жания животных в период работы и учета результатов. При постановке опытов были использованы клинические, токсикологические, фармакологические, биохимические, физиологические, микробиологические и другие методы исследований. В экс периментальной части работы использовали 116 белых крыс, 96 белых мышей, 25 кро ликов, 116 телят и 74 поросят. Широкие производственные испытания лечебной эффек тивности тетрасолвина проведены на 1650 поросятах и 1248 телятах в хозяйствах Тима шевского района, АО им. Ленина Новокубанского района, ООО АФ «Победа» Брюхо вецкого района Краснодарского края. Общетоксические свойства препара тов оценивали путем определения острой хронической токсичности, а также возмож ных побочных свойств и отдаленных последствий в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветерина рии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР и «Методическими рекомендация ми по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветерина рии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).
Определение острой токсичности проводили па белых мышах и телятах по методу Кербера. Исследуемые образцы вводили мышам внутрибрюшинно, телятам вну тримышечно. После введения регистрировали характер токсического действия, обращая внимание на поведение, двигательную активность, физиологические функции, поедае мость корма животными. Параметры хронической ток сичности изучали по общепринятым методикам на белых крысах, телятах и поросятах при пероралыюм, внутримышечном, внутрибрюшиниом способе введения. Испытуемые образцы при введении внутрибрюшипно применяли в дозе составляющей 1/5 и 1/10 от LD 50, а при введении препарата перорально и внутримышечно использовали терапевти ческую дозу и дозы эквивалентные соответственно 3-х кратной и 5-ти кратной (ориен тировочной) терапевтической. Инъекционно препарат вводили в объемах допустимых нормативными документами (ГФ 11-е издание 1990;
Руководство но экспериментально му (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, под редакцией Фи сенко В.П., 2000). При наблюдениях учитывали потребление корма, воды, состояние кожного покрова и слизистых оболо чек, показатели дыхания, пульса и температуры тела. Определение массы животного осуществляли в начале опыта, а затем каждые 10 дней. Кровь для исследований брали раза (фоновое, на 21 и 31-е сутки). В конце эксперимента проводили морфобиохимиче ские исследования сыворотки крови.
В хронических опытах на телятах оценивали влияние тетрасолвина на функ цию почек и пищеварительного тракта, для этого от животных опытной и контрольной групп собирали мочу и фекалии. В динамике устанавливали физико химические свойства мочи (цвет, консистенцию, запах, концентрацию водородных, ионов, удельный вес, содержание белка, углеводов, желчных пигментов и уробилина) и фекалий (цвет, запах и консистенцию - органолептически, наличие кровяных пигментов - бензидиновой пробой, желчных пигментов и жира - окраской суданом-3, крахмала обработка раствором Люголя).Выявление кожно-резортивного действия терасолвина проводилось на кроликах по методике И.В. Саноцкого (1970) методом накожных аппли каций. Изучение специфической антимикробной активности препарата проводилась в опытах на чистых культурах микроорганиз in VITRO мов выделенных при гинекологических заболеваниях у маточного стада и молодняка животных. Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) тетрасолвина определяля методом серийных разведений в мясопептонном бульоне (МПБ) по сумме компонентов препарата. Этот метод основан на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую актив ность тетрасолвина.
О фармакодинамике препарата судили по клиническим показателям, срокам выздоровления и интенсивности роста животных, а так же его влиянии па морфо биохимические факторы крови.
Фармакокинетику тетрасолвина изучали на телятах путем определения уровней левомицетина и тетрациклина в субстратах (сыворотке крови, моче, орга нах и тканях общепринятым микробиологическим методом в модификации В.Ф.
Ковалева с соавторами), а также срокам выведения остаточных количеств дей ствующих веществ препарата из организма телят.
При гематологических исследованиях определяли количество эритроцитов и лей коцитов в камере Горяева, цветовой показатель выводили лейкоформулу по В.Г. Мухи ну, содержание гемоглобина (гемоглобинцианидным методом), высчитывали цветовой показатель, СОЭ в аппарате Панченкова, гематокрит в капиллярах с центрифугой МЦГ -8. Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка (колориметрически), белковых фракций (нефелометри-чески), мочевины (цветной реакцией с диацетилмонооксимом и тиосемикарбазидом), общего кальция (с орто-кри золфталеином), неорганического фосфора (с ванадат-молибдатным реактивом), глюко зы (ферментативно). Активность трансаминаз, щелочной фосфатазы, мочевую кислоту, билирубин, холестерин, общие липиды, креатинин оценивали с помощью наборов фир мы «ДДС». Микроэлементный состав крови (железо, цинк, медь) исследовался атомно абсорбционным методом.
Комплексные исследования животных проводили с учетом их кормления, содер жания и выращивания, выявляя при этом причины заболевания, оценивали особенности течения болезни, патологоанатомическую картину павших и вынуждено убитых живот ных, диагноз заболеваний подтверждали лабораторными исследованиями.
Применение тетрасолвииа при терапии больного молодняка сельскохозяйственных животных, обосновывалось выделе нием микрофлоры от павших или вынужденоубитых животных с обязательной лабора торной подтитровкой на чувствительность к препарату.
При этом проведены исследования по изучению препарата при остром послеродовом эндометрите коров и симптомокомплексе ММА у свиноматок диарейных заболеваниях телят и поросят (диспепсии), бронхопневмонии телят. О терапевтической эффективности препарата судили по состоянию больного животного, срокам выздоровления, приросту массы тела животного и положительном влиянии на морфологические и биохимические показатели крови в сравнительном аспекте с контрольными животными. Экономиче ская эффективность применения тетрасолвииа рассчитана в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (1982), а так же с «Методическими указаниями по определению экономической эффективности вете ринарных мероприятий», утвержденными Департаментом ветеринарии МСХ РФ (2002), и на основании «Методических рекомендаций по определению общего экономического эффекта от использования результатов научно-исследовательских и опытно-конструк торских работ в Агропромышленном комплексе» (2007).
Полученные в опытах данные были подвергнуты биометрической об работке с помощью программного обеспечения фирм Microsoft и Carl Zeiss. Критерий достоверности определяли по таблице Стьюдента.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Физико-химические свойства тетрасолвина Заболевания сельскохозяйственных животных являются основной причиной резкого снижения экономического состояния отечественного животноводства.
Проведенные нами исследования показали, что, на животноводческих фермах за болеваемость крупного рогатого скота составила в среднем 46,5% и среди свино поголовья 33,7%.
Следовательно, существует необходимость изыскания комплексных лекар ственных средств, которые обладали бы высоким терапевтическим эффектом и синергидным действием, и вместе с тем не оказывали отрицательного влияния на организм животного.
В связи с этим, нами в лаборатории кафедры терапии и клинической диа гностики Кубанского ГАУ и ООО НПВП «Ветфарм», был разработан новый пре парат тетрасолвин, обладающий комплексным антимикробным действием.
Тетрасолвин-комплексный химиотерапевтический препарат, представляю щий собой жидкость светло-коричневого цвета, прозрачная, без запаха, горького вкуса, хорошо смешивается с водой и этанолом.
Состав препарата содержит действующие вещества — левомицетин 4,0г, тетрациклин 4,0г, аскорбиновую кислоту 0,1г и новокаин 1,0г и пропиленгликоль до 100,0 мл.
На препарат разработана научно-техническая документация, в которой отра жены требования, соблюдение которых гарантирует высокое качество тетрасолви на и наличие активно-действующих веществ, что обеспечивало бы рациональное его использование в ветеринарии. В технических условиях отражены показатели, характеризующие препарат по внешнему виду, цвету, массовой доли действую щих веществ, стерильности и безвредности (таблица №1).
Исследования физико-химических свойств безвредности препарата и содер жание активных действующих веществ, проведенные в соответствии с СТО 26582716-0001-05 в течении 36 месяцев показали, что содержание активных дей ствующих веществ препарата, хранившегося в темном сухом месте при темпера туре от 10 до 25С, снизилось по сравнению со стартовым менее чем на 5% и оста лось в пределах НТД.
Таблица № Физико-химические свойства препарата.
Наименование показателя Характеристика и нормы Внешний вид, цвет Жидкость светло-коричневого цвета Механические включения Не допускается Подлинность:
Левомицетина Вишневый цвет Тетрациклина гидрохлорид Коричневый цвет Новокаин Зеленоватый цвет Аскорбиновая кислота Образование осадка Стерильность Стерильный Токсичность, тест-доза на одну мышь под- 0, кожно, мл Массовая доля тетрациклина гидрохлорида, 4,0±0, тыс. мкг/мл Массовая доля левомицитина, тыс. мкг/мл 4,0±0, Массовая доля аскорбиновой кислоты, г 0, Массовая доля новокаина, г 1, Массовая доля 1,2 – пропиленгликоль, мл До 100, Концентрация водородных ионов (рН) 2,6-3, Полученные результаты свидетельствуют о возможности установления сро ка годности препарата при хранении в сухом темном месте при температуре от до 25С в течении 24 месяцев.
3.2.Токсические свойства препарата.
Среднелетальную дозу - LD50 - определяли аналитическим способом по ме тоду Кербера (1931), величины LD16 и LD84 находили графически на основании пробитов.
Клиническое проявление токсического действия тетрасолвина проявлялось единичными тетаническими судорогами мышц слабой степени, угнетением, сни жением двигательной активности, умеренная степень интоксикации, характери зовалась мышечным тетанусом, который сменяло угнетение.
Выраженная степень интоксикации наблюдалась в виде множественных спастических сокращений мышц, непрекращающегося тетануса в течение 2-3 ча сов, спазм желудка, напряжение брюшной стенки и в дальнейшем угнетение.
Полученные данные позволили определить параметры острой токсичности тетрасолвина. Так для белых мышей МПД тетрасолвина составляет 3,3мл/кг, LD16- 3,6мл/кг, LD50 -5,0мл/кг, LD84 -6,4мл/кг, LD100- 6,7мл/кг. По параметрам острой токсичности тетрасолвина было установлено, что препарат относится к ма лоопасным веществам (ГОСТ 12.1.007). При введении препарата телятам в пяти и десятикратной дозе не вызвало видимых клинических изменений в общем состоя нии и физиологических отравлений у животных. При изучении хронической токсичности тетрасолвина было установлено, что дли тельное применение в течении 20 дней препарата телятам в терапевтической дозе (0,2 мл/кг) и трехкратной терапевтической дозе (0,6 мл/кг) не вызывало видимых клинических изменений в организме телят. Животные были активны, подвижны, охотно поедали корм, нарушений дефекации и мочеиспускания не отмечалось, температура тела, частота дыхания и пульса находились в пределах нормы.
Установлено, что при введение препарата в течение 20 дней в терапевтической дозе(1 группа) и трехкратной терапевтической дозе во второй группе что основные морфологиче ские и биохимические показатели крови в опытных группах статистически не от личаются от показателей контрольной группы и находились в пределах физиоло гической нормы. Повышение активности аспартатаминотрансферазы наблюда лось на 21 день у животных, получавших тетрасолвин в дозе 0,6 мл/кг в течении 20 суток. Указанное изменение было в пределах нормы и было обратимо. К дню активность фермента не отличалась от показателей контроле.
У телят через сутки по сле окончания введения препарата уровень билирубина, получавших 0,2 мл/кг массы, соответствовал физиологической норме (8,9 - 9,0 мкмоль/л), а у телят по лучавших препарат в дозе 0,6мл/кг, отмечали небольшое увеличение содержания билирубина в сыворотке крови, что по-видимому связано с попадание прямого билирубина в кровь и замедлением выделения его из организма. На 31 сутки со держания билирубина пришло в норму и не отличалось от показателей контроль ной группы. Время плавания суще ственно не изменялось, что свидетельствует о том, что препарат не оказывал су щественного влияния на компенсаторно-приспособительные реакции. Существен но не отличалась терапевтическое продолжительность медикаментозного сна и антитоксическая функция печени. Введение препарата не вызвало изменений от носительной массы внутренних органов. О состоянии почек судили по результа там исследования мочи и по содержанию креатинина и мочевины в сыворотке крови. Моча у опытных животных, во все периоды исследования соответствовала физиологической норме, белок, сахар, билирубин, уробилин, индикан и кетоно вые тела не обнаруживались. Длительное введение тетрасолвина не оказывало от рицательного влияния на функции почек.
Содержание креатинина и мочевины в сыворотке крови телят при изучении субхронической токсичности препарата, соответствовало норме.
При исследовании было установлено, что двадцати дневное применение тетрасолвина телятам в ориентировочной терапевтической (0,2мл/кг) и трехкрат ной дозе (0,6 мл/кг) не вызвало функциональных изменений в организме опытных животных. В период всего опыта телята контрольной и опытных групп были по движны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеваре ния и мочеотделения не установлены. При многократном применении тетрасолви на в дозе 0,6 мл/кг массы тела морфологические, биохимические и иммунологиче ские показатели крови также существенно не отличались от показателей телят контрольной группы.
При изучении кумулятивных свойств установлено, что препарат относится к ве ществам со слабо выраженной кумуляцией. При изучении местно-раздражающего действия тетрасолвина установлено, что при од нократной апликации тетрасолвина на кожные покровы кроликам не вызывает па тологических изменений кожи в виде эритемы или отека. Определе ние раздражающего действия тетрасолвина при внутрикожном методе вве дения показало, что через 30 минут после введения красителя отмечено слабое раздражающее действие тетрасолвина, и через 60 и 180 минут раздражающее дей ствие препарата было умеренным, через 4 часа- слабым, а через 5 часов отсут ствовало. При изуче нии раздражающего действия тетрасолвина на конъюнктиву глаз кроликов, уста новлено, что препарат тетрасолвин вызывает слабое раздражение конъюнктивы спустя 2-3 часа после закапывания, которое проходило уже к 4-му часу.
3.3.Фармакологические свойства тетрасолвина.
При проведении исследований выделений от больных животных, частота микроорганизмов составила :E.coli-28,3%, Salmonella holerae suis и tiphi murium 17,5%, микроорганизмы рода Staphilococcus- 13,1%, рода Streptococcus – 9,7% рода Рroteus- 12,3%, рода Klebsiella pneumonia-17,8 %, грибы рода Candida albi cans- 10,5%.
При изучении чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам нами было установлено, что все применяемые в хозяйствах антибиотики облада ют высокой активностью. К антибиотикам, давшим наиболее высокую зону за держки роста микроорганизмов можно отнести левомицетин и тетрациклин. К этим лекарственным средствам и показала высокую чувствительность, выделен ная микрофлора от больных животных.
Минимальная бактериостатическая концентрация тетрасолвина в отноше нии грамм-положительных микроорганизмов в опытах составляла порядка 1,48 3,14 мкг/мл. В отношении музейных и полевых штаммов сальмонелл и кишечной палочки минимальная бактериостатическая концентрация составляла 24,5 — 50, мкг/мл. Бактерицидные свойства тетрасолвина проявлялись в концентрациях в 2- раза превышающих МбсК.
Выявлено, что препарат обладает высокой антибактериальной активностью с зоной задержки роста бактерий от 25 до 38 мм, поэтому он является высокоэф фективным средством при лечении заболеваний молодняка животных бактериаль ной этиологии. Было установлено, что после инъекции тетрасолвина левомицетин и тетрациклин, вхо дящие в состав препарата быстро всасываются из места инъекции и обнаружива ются в сыворотке крови уже через пол часа после инъекции. Максимальная кон центрация тетрациклина и левомицетина в сыворотке крови регистрировались че рез 6-9 часов после введения препарата. Однократное вве дение тетрасолвина телятам в дозе 0,2 мл/кг обеспечивало нахождение терапевти ческих концентраций антибиотиков в сыворотке крови в течение 72 часов(табли ца №2).
Определение антибиотиков в субстратах и сроков выведения остаточных кличеств действующих веществ тетрасолвина из организма телят показывают, что через 120 и 144 часов после последнего введения тетрасолвина остаточные коли чества левомицетина и тетрациклина были обнаружены в сердце, печени, лег ких, почках и моче. А через 168 часов (7 суток) после окончания применения тетрасолвина остаточных количеств антибиотиков не обнаружено.
Из полученных данных видно, что через 5суток после последнего введения тетрасолвина остаточные количества левомицетина и тетрациклина определяются во всех органах и биологических жидкостях, больше всего их определяется в сер дечной мышце, месте инъекции, печени, почки, мышечной ткани и моче.
Таблица № Содержание антибиотиков (мкг/мл) в сыворотке крови телят после инъекции тетрасолвина Пе- Левомицетин Тетрациклин телята телята риод, №1 №2 №3 среднее №1 №2 №3 среднее час 0,5 1,51 1,37 1,54 1,47±1,21 1,1 1,09 1,08 1,06±0, 1 2,81 2,9 3,21 2,96±0,16 2,61 2,62 2,43 2,53±0, 3 4,73 4,82 5,6 5,03±1,24 4,6 4,52 4,23 4,46±0, 6 7,42 7,24 7,8 7,47±1,42 7,35 7,41 7,19 7,23±0, 9 7,08 6,52 7,3 6,93±0,12 6,14 5,84 6,51 6,16±1, 12 5,9 5,46 6,24 5,83±0,34 4,72 5,04 5,37 5,71±0, 18 4,63 4,7 5,26 4,82±0,23 3,76 4,07 4,04 3,95±0, 24 3,95 3,84 4,5 4,06±0,52 3,41 3,26 2,92 3,16±0, 48 3,53 3,46 4,2 3,7±0,02 3,01 2,78 2,75 2,84±1, 72 2,9 2,83 3,74 3,13±0,05 2,58 2,53 2,48 2,51±0, Представленные данные свидетельствуют о том, что этом значительная часть ле вомицетина и тетрациклина выделяется с мочой.
3.4. Разработка прказаний к применению и лечебно-профилактическая эф фективность тетрасолвина.
При применении тетрасолвина свиноматкам при синдроме ММА наи большая эффективность при применении препарата в дозе 70 и 90 мл на живот ное. При этом терапевтическое действие составило 90% кратность введения в среднем 2,5 раза с продолжительностью курса лечения 3 дня (таблица №3).
При применении тетрасолвина с профилактической целью эффективность соста вила в среднем 93,13±0,3%, что было выше действия прозерина на 4,9%. При этом заболеваемость свиноматок была ниже отрицательного контроля в среднем на 14,5%. В группе где применяли тетрасолвин заболеваемость по сравнению с поло жительным контролем была ниже в 3,3 раза.
Таблица № Эффективность тетрасолвина у свиноматок при синдроме ММА.
Показатели 1 группа 2 группа 3 группа Тетрасолвин 0,5% Прозерин отриц. контроль Количество живот- 86 86 ных Заболело эндомет- 3,9±2,0 8,8±1,1 16,3±1, ритом, % Заболело ММА 2,9±1,8 2,9±1,8 5,7±2, животных, % Заболело всего жи- 6,8±0,32 11,7±2,7 21,3±4, вотных, % Профилактическая 93,13±0,3 88,2±2,7 78,6±4, эффективность, % При применении тетрасолвина при остром гнойно-катаральном эндометрите свиноматок кратность введения составила 2,5±0,1 раза, а терапевтический эффект 90,2±0,3 %. При применении же 5% суспензии фуразолидона кратность составила 3,32± 0,09, а эффективность 75,4±0,05% (таблица №4).
При отработке дозировок тетрасолвина при гнойно-катаральном эндометри те у коров наиболее эффективвной оказалась 100,0 мл на животное. При проведе нии опыта терапевтическая эффективность тетрасолвина составила 90,3%, 5% суспензии фуразолидона 28,5% и раствор ваготила 75,9%, а кратность введения была больше в 2,3 раза и в третьей группе в 3,7 раза. Бактерицидное действие уве личилось соответственно на 17,0 и 7,6 соответственно. Срок от отела до плодо творного осеменения сократился на 46,6 о 37,6 дней.
Таблица Терапевтическая эффективность препарата тетрасолвин при остром гнойно катаральном эндометрите у свиноматок.
Показатели Тетрасолвин 5% суспензия Лефуран фуразолидона Количество больных жи- 28 28 вотных Кратность введения пре- 2,5±0,1 3,32±0,09 3,0±0, парата М±m Кратность дней лечения 2,5±0,1 3,32±0,09 3,0±0, М±m Терапевтический эффект 90,2±0,31 75,4±0,17 82,7±0, В картине крови существенных изменений не наблюдалось за исключением активизации общего белка.
При изучении средств заместительной терапии при гнойно-катаральном эн дометрите установлено, что наиболее эффективным является препарат карток, ко торый включает каротин и токоферол. Совместное применение этих средств способствовало снижению кратности введения тетрасолвина на 0,8 раз, по сравне нию тетрасолвина с негативным контролем.
Тетрасолвин эффективен при послеродовом эндометрите у коров. При этом профилактическая эффективность составила 87,5% против 68,8% в контроле. Пре парат способствовал более ранней инволюции матки, сокращению периода от оте ла до оплодотворения и повышению оплодотворяемости (таблица №5).
Таблица № Профилактическая эффективность эндометрита при задержании после да у коров.
Показатели Тетрасолвин (опытная) Трициллин (контроль ная) Количество животных, гол 16 Профилактическая эффектив- 14/87,5 11/68, ность, гол/% Срок инвалюции матки, дней 25,1±0,4 29,3±0, Оплодотворяемость из числа 13/92,9 9/81, незаболевших голов, % Срок от отела до проявления 45,4±1,42 53,1±1, стадии возбуждения, дней Период от отела до оплодо- 59,2±3,67 72,5±4, творения, дней Индекс оплодотворения 1,54±0,18 2,0±0, Окупаемость профилактического применения составила 4,79 рублей на рубль затрат.
Таким образом установлена высокая эффективность фармакологической коррекции послеродового периода у коров с патологическими родами.
Проведенными опытами при изучении лечебного действия тетрасолвина установлено, что применение препарата при парагриппе-3 крупного рогатого скота способствовало улучшению общего состояния и аппетита исчезновению кашля, истечений из носовых ходов и саливация. При назначении препаратов для срав нения эффект был выражен слабее. При этом в контроле пало 1 животное, осталь ные телята лечились тетрасолвином.
Среднесуточный прирост массы тела животных при применении тетрасол вина составил 318,5 г в позитивном контроле 206,7 и негативном 76,3г. Исследо ваниями крови животных установлено, что применение тетрасолвина не оказало токсического действия. В опыте отмечается усиление фагоцитоза микробных кле ток нейтрофилами и увеличение числа фагоцитирующих лекоцитов. У опытных животных отмечается увеличение концентрации общего белка в сыворотке крови, увеличение у-глобулиновой фракции белка, повышается бактерицидная актив ность сыворотки.
В другом опыте также установлено, что тетрасолвин проявляет высокий ле чебный эффект при парагриппе-3. Выздоровление наступало в основном через 3- дня лечения, против 10 в контроле.
В негативном контроле 2 теленка вынуждены были убить. Препарат также не оказывал токсического действия на животных и не проявлял отрицательного влияния на кровь, среднесуточный прирост в опыте составил 376,2г, против 307, г в положительном контроле и 90,1 г в отрицательном.
При изучении лечебной эффективности тетрасолвина при острой форме бронхопневмонии телят было установлено, что применение препарата способ ствовало улучшению общего состояния и выздоровлению больных телят уже на 3 5 дни лечения. При этом у телят регистрировали улучшение аппетита, прекращение кашля и истечений из носовых отверстий, дыхание становилось ровным.
Выздоровление больных животных наступало в основном на 5-8 сутки. При лечении йодинолом выздоровление происходило позже – на 7-12 сутки. В этой группе вынуждено убит теленок, тогда как в негативном контроле 2 животных. У контрольных животных заболевание прогрессировало, телята имели плохой аппе тит, были угнетены. Они были переведены на лечение тетрасолвином, среднесуточ ный прирост массы в опытной группе 312,4 позитивном контроле 280,6 и негатив ном 102,4.
При исследовании крови отмечено повышение лимфоцитов в сравнении с контролем, усиление фагоцитоза микробных клеток нейтрофилами и увеличение числа фагоцитирующих лейкоцитов.
Таким образом, применение тетрасолвина обладает терапевтическим дей ствием в пределах 87,5-100%.
4. ВЫВОДЫ 1. Тетрасолвин является новым отечественным комплексным препаратом, в со став которого входят хлорамфеникол и тетрациклин. Контроль качественных и количественных показателей препарата осуществляется в соответствии с утвер жденными техническими условиями по органолептическим и физико-химическим показателям, характеризующим их внешний вид, запах и вкус, подлинность и массовую долю действующих веществ, стерильность, микробиологическую чи стоту и токсичность.
2. Препарат является малотоксичным средством для теплокровных животных, как в острых, так и хронических опытах. Тетрасолвин обладает слабой острой токсичностью, не вызывая выраженного токсикоза в дозе 0,3мл/кг массы тела, и по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относится к 4-му классу опасности (не значительные опасные вещества). Длительное применение препарата в дозах, пре вышающих терапевтическую в 3-5 раз, не влияет отрицательно на общее состоя ние животных и другие показатели их клинического статуса, не оказывает вредно го местного действия, существенно не влияет на морфо-биохимические показате ли крови, не проявляет отрицательного влияния на основные виды обмена, не на рушает функций и структуру жизненно важных систем, органов и тканей, не изме няет качеств мяса.
3. Фармакокинетика тетрасовина характеризуется быстрым всасыванием пре парата из места инъекции, входящих в состав левомицетина и тетрациклина с об наружением их в сыворотке крови на 30 минуте после инъекции. Максимальные концентрации тетрациклина и левомицетина в сыворотке крови регистрировались через 6-9 часов после введения препарата. Однократное введение тетрасолвина те лятам в дозах 0,2 и 0,3 мл/кг массы тела обеспечивало нахождение терапевтиче ских концентраций антибиотиков в сыворотке крови в течение 72 часов. В суб стратах (в печени, мышцах, легких, сердце, почках и моче), остаточные количе ства действующих веществ тетрасолвина обнаруживаются через 120 и 144 часов после последнего введения препарата. Полная его элиминация происходит в тече ние 168-192 часов, рекомендуемый срок убоя животных на мясо после назначения препарата составляет 7-8 суток.
4.Фармакодинамика препарата обусловлена выраженной антимикробной актив ностью в отношении возбудителей респираторных (бронхопневмонии) и акушер ско-гинекологическизх заболевании животных. Под влиянием препарата ослабля ются и исчезают признаки болезни, возрастает темп прироста массы тела, оптимизируется морфобиохимический статус организма, повышается сохран ность молодняка, за счет активизации основных видов обмена веществ. Тетрасол вин положительно повлиял на показатели крови, что выразилось в увеличении ге могло бина на 22,1%, в опыте 115,0±2,67 в контроле 89,6±0,63, общего белка на 17,3% при его содержании в крови опытных животных 58,4=Ы,23, у кон трольных 48,4±1,21, а также увеличения фагоцитарной активности лейкоцитов.
5.Клиническими и производственными испытаниями, проведенными в хо зяй ствах Краснодарского края, подтверждены экспериментальные данные о профилак тической и терапевтической эффективности тетрасолвина, а также об экономиче ской целесообразности его применения в ветеринарии. Так, его экономическая эффективность составляет 4,96 рубля на 1 руб затрат.
6.При применении тетрасолвина с терапевтической целью свиноматкам при синдроме ММА эффект составил 90 %. При среднем введении 2,5 раза продолжи тельностью курса лечения 3 дня. Профилактическая эффективность составила 93,13 % против 78,6 % в контроле.
Назначение тетрасолвина при остром гнойно-катаральном эндометрите сви номаткам терапевтический эффект составил 90,2 % против 78,6 % в контроле.
Введение тетрасолвина при гнойно-катаральном эндометрите коров;
лечеб ный эффект составил 30,3 %. При этом по сравнению с позитивным контролем со кратилась кратность введения препарата и срок от отела до плодотворного осеме нения.
Использование препарата карток, включающего каротин и токоферол в сочета нии с тетрасолвином, заметно усиливает действие последнего и способствует сни жению кратности введения.
Профилактическое действие тетрасолвина при послеродовом эндометрите у коров составило 87,5 % против 68,8 % в контроле.
Назначение тетрасолвина при парагриппе 3 крупного рогатого скота оказало выраженный лечебный и профилактический эффект. При этом у опытных живот ных повышался среднесуточный прирост массы, улучшались общее состояние и аппетит, исчезали клинические признаками заболевания. В крови улучшался фа гоцитоз микробных клеток нейтрофилами и бактерицидная активность сыворотки крови, активизировался белковый обмен.
При острой форме бронхопневмонии телят выздоровление наступало в основном на 5-8 сутки. Терапевтическое действие составило 87,5-100 %.
5. Предложения к производству Ветеринарной практике и животноводству рекомендуется комплексный ан тимикробный препарат тетрасолвин для лечения гинекологических, респиратор ных и желудочно-кишечных заболеваий бактериальной этиологии согласно инструкции по его применению.
Производство препарата в соответствии с разработанными и утвержденными в установленном порядке техническими условиями, обеспечено Научно-произ водственным предприятием «Ветфарм» г. Тимашевск Краснодарский край.
Список научных работ, опубликованных по теме диссертации.
1.Ткачев Е.Н. Черненко В.Н.- Внутригайморовое введение левотетрасульфина и экспериментальная оценка лечебно-профилактической эффективности при респи раторных заболеваниях телят. «Новые методы профилактики и лечения болезней животных». Труды Кубанского агроуниверситета. Выпуск 407 (441) стр. 40-34.
Краснодар-2005г.
2. Бурменская Г.А., Черненко В.Н., Трошин Н.А.- Комплексная профилактика желудочно-кишечных и респираторных заболеваний молодняка сельскохозяй ственных животных. «Новые методы профилактики и лечения болезней живот ных». Труды Кубанского агроуниверситета. Выпуск 407 (441) стр. 36-37. Красно дар-2005г.
3.Черновская А.А., Черненко В.Н., Онищук Ф.Д. Токсические свойства салура.
Профилактика и лечение болезней животных. Труды Кубанского агроуниверси тета. Выпуск 426 (454) стр.57-59. Краснодар-2007г.
4.Ткачев Е.Н., Черненко В.Н., Трошин Н.А. Нарушение обмена веществ у телят при бронхопневмонии. Профилактика и лечение болезней животных. Труды Ку банского агроуниверситета. Выпуск 426 (454) стр. 42-44. Краснодар-2007г.