Фармакология и применение препаратов железа в ветеринарии и животноводстве
На правах рукописи
ТРОШИН АНДРЕЙ НИКОЛАЕВИЧ ФАРМАКОЛОГИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ЖЕЛЕЗА В ВЕТЕРИНАРИИ И ЖИВОТНОВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук
Краснодар 2013
Работа выполнена в ГНУ Краснодарский научно-исследовательский вете ринарный институт Росельхозакадемии.
Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН Антипов Валерий Александрович
Официальные оппоненты:
доктор ветеринарных наук, профессор Александров Игорь Дмитриевич, доктор ветеринарных наук, профессор Беляев Валерий Анатольевич доктор ветеринарных наук, профессор, Уразаев Дмитрий Николаевич
Ведущая организация: ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, ради ационной и биологической безопасности», г. Казань.
Защита состоится «29» августа 2013 года в 1000 на заседании диссертаци онного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аг рарный университет» по адресу: 350044 г.Краснодар, ул. Калинина,
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044 г. Краснодар, ул.
Калинина, 13)
Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» - http://kubsau.ru и сайте ВАК РФ – http://vak.ed.gov.ru Автореферат разослан « 2013 года »
Ученый секретарь диссертационного совета Родин И.А.
-2 1.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы исследования. Современное аграрное производ ство, основанное на искусственных условиях воспроизводства и содержания, создает предпосылки возникновения и массового проявления нарушений обме на веществ у животных. Анемический синдром часто наблюдается у беремен ных, кормящих, молодых, быстрорастущих животных. Последние задержива ются в росте и развитии, не полностью реализуют потенциал продуктивности (В.С. Бузлама, М.И. Рецкий и др. 1978;
В.Т. Самохин, 1982;
А.Г. Шахов и др.;
1995;
М.И. Рабинович, 1997;
В.А. Антипов, 2001 и др.).
Степень разработанности темы исследования. Изучение роли гипо и гиперферриемии в этиологии и патогенезе болезней способствовало значитель ному прогрессу в профилактике и лечении анемии и сопутствующих ей болез ней животных (J. P. McGowan, A. Chrichton, 1924;
Venn, 1947;
J.J. А.И. Карелин, 1983;
О.В. Мерзленко, 1998;
В.В. Сазонова, 2007;
И.Д. Александров, 2013).
Неорганические соли железа (II) (чаще всего используют сульфат) в каче стве энтеральных форм целесообразны и эффективны (Pierre Blaud, 1832;
Hart E.B., 1929), но их применение часто сопровождается нарушением пищеварения и низкой усвояемостью подобных ионных ферропрепаратов, включая органиче ские глюконат, лактат и др.
Полисахаридные комплексы гидроксида железа (III) для инъекций (Binger, 1958, Т.В. Полушина и др., 1974, А.В. Ариповский и др., 2001), применяемые в режиме высоких доз, приводят к перманентной гиперферрие мии, как следствие угнетению иммунитета и развитию микроорганизмов, что в сумме с местной воспалительной реакции вплоть до канцерогенеза в месте инъ екции. (Oppenheimer S. и др., 1986, 2001, Н.А. Трошин 2002, В.М. Чернов и др., 2004;
Д.Н. Уразаев, А.А. Дельцов, 2013).
Аминокислотные хелаты железа гидролизуются и соответственно вклю чаются в метаболизм медленнее других соединений, не высвобождая свобод ных ионов железа (A.K. Egeli, T. Framstad, 1998, В.И. Дорожкин 1998).
-3 Ферроаквакомплексы, стабилизированные протеинами, вызывают суще ственно меньшее раздражение (в том числе желудочно-кишечного тракта), а вот использование их жидких лекарственных форм (в том числе для инъекций) ограничено недостаточными растворимостью и стабильностью (Brady, 1978, Pagella P.G. и др., 1984, Кремонези П. и др., 2004).
В последние годы арсенал ферропрепаратов пополнился значительным количеством отечественных и зарубежных лекарственных средств и кормовых добавок, использование которых требует дополнительного изучения в плане всестороннего фармакотоксикологического эксперимента.
Таким образом, проблема анемии требует дальнейшего изучения, разра ботки и изучения фармакологических свойств и показаний к применению но вых ферропрепаратов, отличающихся повышенной биосовместимостью с мле копитающими.
Цели и задачи исследований. Целью настоящего исследования является научное и практическое обоснование разработки комплексных органических и хелатных препаратов железа, изучить их свойства и влияние на организм неко торых животных.
В соответствии с поставленной целью определены задачи:
- разработать комплексные железосодержащие лекарственные средства ферро-квин, биожелезо, бажедин, биомос на основе декстана и декстрина желе за;
- изучить фармако-токсикологические, биологические свойства железо декстрановых и железодекстриновых препаратов на лабораторных животных;
- изучить физико-химические показатели препаратов железа;
- провести сравнительную оценку влияния различных доз ферро-квина, био-железа, бажедина, биомоса, феранимала, седимина на концентрацию желе за в органах и тканях, метаболизм лабораторных животных;
- применить различные дозы железосодержащих препаратов в рационах животных с определением концентрации железа в тканях;
-4 - разработать нормативно-техническую документацию по получению, применению и контролю качества на новые препараты.
Научная новизна. Впервые разработаны и экспериментально изучены ферропрепараты, представляющие собой железо(III)-декстриновые комплексы:
ферро-квин (субстанция), ферро-квин для инъекций и ферро-квин сироп;
ком плексные препараты седимин и био-железо, а так же кормовые добавки биомос и бажедин.
Впервые установлена терапевтическая эквивалентность трехвалентных форм ферропрепаратов, а так же смешанных двух и трехвалентных, на основе природного сырья для профилактики и лечения железодефицитной анемии у животных.
В работе представлены три патента на изобретения - №2280457 «Лекар ственное средство для лечения анемий», № 234985 «Способ обогащения подкорм ки для пчел» и № 2338516 «Железосодержащее средство для профилактики и ле чения анемии у животных».
В результате выполнения работы научно обоснованы и экспериментально установлены принципы получения лекарственных средств, их антианемическое действие и биологическая активность.
Теоретическая и практическая значимость исследований.
Разработанные ферропрепараты обладают выраженным фармаколо гическим действием, положительно влияют на эритро и гемопоэз. При применении в комплексной терапии незаразных болезней животтных спо собствуют повышению основных иммунобиологических показателей, со кращению сроков выздоровления и повышению продуктивности живот ных.
На основании результатов исследований разработаны стандарты органи зации и технологические инструкции, регламентирующие технологический процесс производства препарата ферро-квин (СТО 9336-001-26582716-06).
Широкие производственные испытания препаратов ферро-квина разрешены начальником управления федеральной службы по ветеринарному и фитосани -5 тарному надзору по Краснодарскому краю и республике Адыгея (Временная ин струкция от 18.10.2006). Разработана нормативная документация и показания к применению препаратов бажедин, биомос, биожелезо, феранимал, седимин.
Создание препарата ферро-квин является приоритетным региональным инвестиционным проектом в номинации инновационные проекты Краснодарско го края по итогам международного экономического форума Сочи-2005.
Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических ис следований были представлены: на заседаниях Ученого Совета и научных кон ференциях факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Кубанский ГАУ (Краснодар, 2003-2007 г.г.) и ГНУ Краснодарского НИВИ Россельхозакадемии (2008 – 2013 гг.);
на конкурсе Русских инноваций журнала Эксперт (Москва, 2005);
на международном экономическом форуме Сочи-2005, на промышлен ной ярмарке Ганновермессе, (Ганновер, 2005);
на международной научно практической конференции Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ (Краснодар, 2006);
на I Международной научно-практической конференции «Новости научной мысли» (Днепропетровск, 2006);
на международном экономическом форуме «Дни Краснодарского края в Германии», (Мюнхен, 2006);
на между народной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования высшей школы» (Сингапур, 2007);
на международном экономическом форуме «Дни Краснодарского края в Китае», (Пекин, 2007);
на II Международной научно практической конференции Аграрная наука сельскому хозяйству (Барнаул, 2007);
на международном экономическом форуме «Дни Краснодарского края в Австрии», (Вена, 2007);
на международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины, биологии и животноводства» (Троицк, 2007);
на Всероссийской научно - практической конференции «Акту альные проблемы функциональной и морфофункциональной диагностики бо лезней животных» (Новочеркасск, 2007);
на IV Международной научно практической конференции «Агропромышленный комплекс: состояние, про блемы, перспективы» (Пенза, 2007);
на XV международном Московском вете -6 ринарном конгрессе (Москва, 2007);
«Разработка и внедрение в производство лекарственного средства для профилактики железодефицитной анемии» в 2006 г.
отмечены серебряной медалью выставки «Золотая осень» на ВВЦ, г. Москва.
Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссерта цию, опубликованы в 47 печатных работах, в том числе 3 патентах на изобрете ние и 17 статьях в ведущих рецензируемых научных журналах.
Положения, выносимые на защиту:
- получение и физико-химические свойства железосодержащих препара тов, нормативная документация на препараты;
- результаты изучения токсических и фармакологических свойств разра ботанных препаратов;
- профилактическая и терапевтическая эффективность ферро-квина, ба жедина, биомоса, биожелеза, феранимала, седимина при железодефицитной анемии и некоторых незаразных болезнях животных.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 312 страницах и включает введение - актуальность темы исследования, степень её разработан ности, цели и задачи, научную новизну, теоретическую и практическую значи мость работы, методологию и методы исследований, положения выносимые на защиту, степень достоверности и апробацию результатов;
результаты собствен ных исследований, их обсуждение;
заключение - выводы, предложения, список литературы и приложения. Диссертационная работа проиллюстрирована таблицами и 6 рисунками. Список литературы включает 498 источников, в том числе 275 на иностранных языках.
2. МЕТОДОЛОГИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Работа выполнялась в лаборатории фармакологии ГНУ Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института в соответствии с планом научно-исследовательских работ по заданию 08.04.04 «Разработать новые вы сокоэффективные средства профилактики и терапии массовых нарушений об мена веществ и других незаразных заболеваний сельскохозяйственных живот ных (№ государственной регистрации 15070.3666026906.06.8.004.5).
-7 Исследования проведены ООО «Биометаллика» по госконтакту № 2509р/4899 от 17.06.04 при поддержке Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере.
Препараты ферро-квин, бажедин и биомос изготовлены в НПВП «Вет фарм», г. Тимашевск Краснодарского края и на кафедре терапии и фармаколо гии Кубанского ГАУ, г. Краснодар. Препараты седимин, феранимал и био железо – фирмой А-Био, г. Москва.
Доклиническое и клиническое изучение препарата проведено в соответ ствии с требованиями соответствующих «Руководства по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ» и «Руководства по проведению клинических исследований новых лекарственных средств». Использовали здо ровых половозрелых животных, прошедших 14-дневный карантин. Содержание экспериментальных животных соответствовало Санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). Животные получали стандартную диету в соответствии с действующими нормами. Наряду с подопытными животными содержались кон трольные животные. (Хабриев Р.У. с соавт., 2005). При постановке и учете ре зультатов опытов использованы токсикологические, фармакологические, фи зиологические, клинические, биохимические, морфологические, иммунологи ческие, статистические и другие методы исследований.
В экспериментальной части работы использовали 208 мышей, 210 крыс, 36 морских свинок, 40 кроликов, 3425 свиней, 1236 голов крупного рогатого скота и 12 пчелосемей.
Определение токсичности, с учетом специфики лекарственных средств и кормовых добавок для животных, а так же выявления возможных побочных свойств, неблагоприятного действия и отдаленных последствий проводили в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвер жденными ГУВ СССР (1991), а так же «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветери -8 нарии», РАСХН (1998) и «Научно-методологическими аспектами исследования токсических свойств фармакологических лекарственных средств для живот ных» (Смирнов А.М., Дорожкин В.И., 2008).
Острую токсичность изучали с использованием грызунов, определяли пе реносимые, токсические и летальные дозы методом Кербера. За животными в течении 2 недель вели непрерывное наблюдение, учитывали общее состояние, исследовали гематологические показатели, регистрировали сроки интоксика ции, гибели и их непосредственные проявления в органах и тканях.
Изучение подострой токсичности ферро-квина проводили при перораль ном, подкожном, внутримышечном и внутрибрюшинном введении препарата.
Использовали терапевтическую дозу, и дозы эквивалентные соответственно 3-х кратной и 5-ти кратной терапевтической. Препараты для инъекций вводили внутрибрюшинно в дозе составляющей 1/50, 1/20 и 1/10 от дозы LD50.
Изучение хронической токсичности ферропрепаратов проводили на гры зунах и продуктивных животных, на которых получен фармакологический эф фект. При внутрибрюшинном введении в дозе составляющей 1/10 от дозы LD50.
При введении препарата перорально, подкожно и внутримышечно использова ли дозу эквивалентную 10-ти кратной терапевтической.
Препарат при пероральном применении вводили внутрижелудочно с по мощью металлического зонда с инъектором.
Эмбриотоксические и тератогенные свойства железосодержащего препара та ферро-квин изучали по методике А.П. Шицковой и др. (1977), раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность, выживаемость под считывали по формулам, предложенным А.М. Малашенко и И.К. Егоровым (1977). Аномалии скелета выявляли по методу Даусона (1984). Критериями оценки эмбриотоксического и тератогенного действия препарата служили пока затели гибели зародышей на пред- и постимплантационных стадиях развития (эмбриональный эффект), наличие аномалий развития внутренних орга нов и скелета (тератогенный эффект), уровень плодовитости, масса зародышей.
Препараты вводили инъекционно в дозе 5 и перорально 10 мл/кг массы на 5 и -9 10 дни беременности подопытных животных (периоды имплантации и органо генеза соответственно).
Раздражающее и кожно-резорбтивное действие препаратов изучали на морских свинках и кроликах методом накожных аппликаций, а так же внутри кожных инъекций и пробирочным методом.
Иммунотоксическое действие оценивали по данным исследования фаго цитарной активности макрофагов, активности лизосомальных мембранных ферментов, влияния препаратов на систему комплемента и на реакцию гипер чувствительности замедленного типа. Фагоцитарную активность макрофагов оценивали по изменению процента фагоцитоза за часа, его индексу за 1 и часов, а так же индексу завершенности фагоцитоза. Постановку реакции НСТ теста проводили стандартным общепринятым методом. Оценку степени влия ния ферро-квина на систему комплемента производили с помощью гемолитиче ского метода титрования сывороточного комплемента.
Влияние ферропрепаратов на РГЗТ. При постановке реакции, сенсибили зацию мышей осуществляли подкожным введением животным эритроцитов ба рана в дозе 1х107 клеток. На 5 сутки после сенсибилизации животные получали разрешающую дозу – 1х108 ЭБ в 0,05 мл физиологического раствора в поду шечку задней лапы. В контрольную лапу вводили физиологический раствор в том же объеме. Местную воспалительную реакцию оценивали через 24 часа по разнице массы опытной и контрольной лап. Для каждой мыши вычисляли ин декс реакции. Соответствующие лекарственные формы ферропрепаратов вво дили орально и внутримышечно в десятикратной терапевтической дозе - мл/кг массы тела. В первой группе животных препараты вводили за 1 час до сенсибилизации, во второй – за 1 час до разрешающей дозы и в третьей группе за 1 час до сенсибилизации и за 1 час до разрешающей дозы.
Мутагенную активность определяли методом учета доминантных леталь ных мутаций в зародышевых клетках мышей.
Канцерогенность оценивали методом метафазного анализа аберраций (изменения структуры) хромосом в клетках костного мозга млекопитающих.
- 10 Фармакокинетику изучали путем определения содержания железа в орга нах, тканях и биологических жидкостях белых крыс фотометрическим методом.
Остаточные количества определяли по содержанию железа в органах, тканях и биологических жидкостях фотометрическим методом.
Клиническая оценка фармакологических свойств включала внутреннее и парентеральное применение лекарственных форм разработанных ферропрепа ратов с целью профилактики и лечения железодефицитной анемии у животных с учетом заболеваемости и падежа, сохранности животных, их продуктивности, воспроизводительных показателей и качества животноводческой продукции.
В опытах регистрировали данные клинических и лабораторных исследова ний. Учитывали показатели белкового, углеводного, липидного, макро и микроэле ментного обмена.
Группы животных комплектовали по принципу аналогов, с учетом породы, пола, массы, возраста, условий содержания и кормления. Предварительные опыты проводились в условиях клиники факультета ветеринарной медицины, а производ ственные испытания в условиях учхоза Кубань и на животноводческих объектах аграрных предприятий Краснодарского края.
Профилактическую эффективность ферропрепаратов при железодефи цитной анемии изучали на поросятах, которым в опыте в 3-х дневном возрасте, вводили ферро-квин в дозе 1,0 мл на голову, а в контроле – препараты аналоги урсоферран и ферроглюкин в дозе 1,5 мл на голову) или стерильный физрас твор в той же дозе (группа отрицательного контроля). Все препараты применя ли в дозах согласно инструкциям по применению. Инъецировали однократно, внутримышечно в область бедра.
Использовали опытные образцы лекарственного средства ферро-квин с со держанием 75 мг/мл железа и серийные образцы урсоферрана 100 мг железа на мл, ферроглюкина – 75 мг железа/мл. До опыта, в 21 и 60 дневном возрасте по росят взвешивали, в 2-х, 5, 15, 30 и 60 дневном возрасте брали кровь для гема тологических и биохимических исследований;
определяли содержание гемо глобина, подсчитывали количество эритроцитов, лейкоцитов, цветовой показа - 11 тель крови, СОЭ и лейкоформулу. В сыворотке крови определяли содержание общего белка, глюкозы, железа, ферменты печени.
Терапевтическую эффективность ферропрепаратов изучали на больных же лезодефицитной анемией, которым в 10-х дневном возрасте, внутрь давали ферро-квин и препарат-аналог - мальтофер, животным третьей группы приме няли перорально сульфат железа, животные четвертой группы ферропрепарара тов не получали.
Профилактическую эффективность ферро-квина при анемии у супоросных и лактирующих свиней определяли в опыте на свиноматках за месяц до и в те чении месяца после опороса. В опыте животным давали ежедневно внутрь пре параты железа в форме ферро-квина или сульфата железа, животные третьей группы дополнительных ферропрепаратов не получали.
Статистическая обработка результатов проведена программой Microsoft Excel на компьютере «Intel Core i5». Достоверность оценивали методом парных сравнений, c использованием критерия Стъюдента (ГФ XI, 1991).
3. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
3.1. Получение и физико-химические свойства ферропрепаратов.
Для разработки препаратов использовали действующие и вспомогательные вещества, соответствующие требованиям технологической документации;
изго тавливали лекарственные средства и кормовые добавки в лабораторных и про изводственных условиях по фармакопейным методам, изложенным в соответ ствующих общих и частных статьях.
Физико-химические свойства разработанных ферропрепаратов изучали с учетом их компонентов, а так же лекарственной формы, по фармакопейным ме тодам и НД Департамента ветеринарии – «ветеринарные препараты, показатели качества и безопасности».
Для реализации гипотезы получения стабильных in vitro и in vivo средств предложена трехкомпонентная модель ферропрепаратов. Схематично формулу железо(III)-декстрино-протеинатов, в виде ферроаквакомплексов, можно выра - 12 зить как Fe(H2O)63+ * RO * RP, где RO – органический комплексообразователь декстрин, а RP – защитный протеин (хелатор) или в виде Fe3+ * RO * RP.
Аналогичным образом синтезированы препараты двухвалентного железа соответствующие общей формуле Fe2+ * RO * RP.
Описанным методом, руководствуясь составленной нами классификацией ферропрепаратов, изготовили протеиновые формы трехвалентных ферропрепа ратов, в частности декстрана и декстрина. В качестве протеина использовали нативные, частично или полностью гидролизованные белки животного или рас тительного происхождения, такие как альбумин, казеин, коллаген и т.д.
Согласно известным требованиям к ферропрепаратам они должны быть не токсичными, нейтральными, стойкими в широком диапазоне рН, иметь лиганд с высокой степенью сродства к железу, который, для адекватной усвояемости, должен достаточно быстро включаться в обмен веществ. По итогам анализа предварительных лабораторных тестов для дальнейших исследований нами был отобран комплекс трехвалентного железа с декстрином и частично гидролизо ванным коллагеном, названный ферро-квином.
Соединение представлено в водорастворимой форме, обеспечивающей по лучение как минимум однопроцентного раствора при комнатной температуре и нейтральном значении рН среды. Ферро-квин может быть высушен, а впослед ствии растворен в воде. Лекарственные формы ферро-квин представлены в виде 7,5% препарата для инъекций, 1% сиропа для внутреннего применения, а так же сухой субстанции, содержащей до 48% трехвалентного железа.
Комплекс трехвалентного хлорида железа конденсированный экстрактом дуба натурального происхождения – биомос, а так же модифицированный с растительными добавками бентонит – товарное название бажедин.
Кроме того в исследованиях использовали препараты феранимал, седимин и биожелезо. Физико-химические характеристики полученных препаратов представлены в таблице 1.
- 13 Таблица 1 - Физико-химическая характеристика препаратов № Наименование Валент- Количество Лекарственная ность железа, % форма железа Ферро-квин Порошок 1 3+ 33- Ферро-квин сироп Раствор 2 3+ 1- Ферро-квин для инъекций Раствор 3 3+ 1- Бажедин Порошок 4 2+, 3+ 1- Биомос Паста 5 2+, 3+ 0,05- Феранимал Раствор 6 3+ 7, Седимин Раствор 7 3+ Био-железо Раствор 8 3+ 3.2. Изучение общетоксического действия препаратов ферроквин, бажедин, био-железо и биомос.
Ферроквин представляет собой новую субстанцию и изготовленные на её основе лекарственные формы, а препараты бажедин, био-железо, биомос, седи мин, феранимал, а так же препараты контроля –мальтофер, ферроглюкин явля ются лекарственными формами на основе известных лекарственных веществ (хлорида, декстрана и декстрина железа), в связи с чем токсикологические ис следования ферроквина проведены для субстанции и форм, а остальных препа ратов в сокращенном объеме токсикологических исследований.
3.2.1. Острая токсичность В первой серии опытов изучали острую токсичность ферропрепаратов при пероральном способе введения. При введении препарата в дозах 0,1-0,2 мл (мышам) и 1,0-4,0 мл (крысам) не обнаружено какого-либо токсического дей ствия. С увеличением дозы для мышей до 0,3 мл, для крыс до 5 мл на животное при внутреннем применении в течение 3-4 часов отмечались первичные клини ческие признаки интоксикации, гибели животных не наблюдалось в течение всего периода наблюдения. Первичное клиническое проявление токсического действия препарата проявлялось единичными тетаническими судорогами сла бой степени, угнетением, снижением двигательной активности.
Умеренная степень интоксикации, проявляемая соответственно для крыс в дозе 30 мл/кг массы тела и для мышей в дозе 20 мл/кг массы тела характери - 14 зовалась мышечным тетанусом, который через 40-60 мин сменялся общим угнетением. Выраженная клиника интоксикации наблюдалась у мышей в дозе 30 мл/кг. Множественные спастические сокращения мышц, непрекращающийся тетанус в течение 2-3 часов, спазм желудка, напряжение брюшной стенки, в дальнейшем угнетение. Общее угнетение и снижение двигательной активности у животных в ответ на введение препарата сохранялось в течение 72 часов по сле приема препарата.
Во второй серии опытов изучили острую токсичность препарата ферро квин для инъекций при внутримышечном и подкожном введении. Установлено, что однократная инъекция препарата в максимально допустимых дозах не вы зывает гибели животных, клиническая картина отравления слабо выражена.
Патоморфологическое изучение по окончании эксперимента не выявило нарушений в структурной организации внутренних органов.
Препарат по степени токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к IV классу опасности – малоопасные вещества.
В третьей серии токсикометрической оценки ферро-квина для инъекций, когда препарат вводили внутрибрюшинно в объеме для белых мышей – 1,0 мл, для белых крыс – 6,0 мл;
установили среднелетальную дозу, составившую LD мл/кг=1325 мг железа на кг и LD50 i.p. для мышей15,5 мл/кг = 1162 мг i.p. для крыс17, железа на кг массы. Для белых мышей МПД ферро-квина составила 12,0 мл/кг, LD16 -13,2 мл/кг, LD50 -15,5 мл/кг, LD84 – 18,6 мл/кг, LD100 -20,0 мл/кг. Для бе лых крыс МПД ферро-квина составила 13,0 мл/кг, LD16 – 14,5 мл/кг, LD50 17,67 мл/кг, LD84 – 20,7 мл/кг, LD100 -22,0 мл/кг.
Клинические признаки острого отравления ферро-квином у лабораторных животных при внутрибрюшинном введении препарата сходны с предыдущими опытами. Патолого-анатомическая картина вскрытия павших животных пока зала гиперемию тонкого и толстого отдела кишечника, мелкие одиночные кро воизлияния на брыжейке. Смерть наступала в результате остановки сердца.
Желудочки сердца и предсердия наполнены несвернувшейся кровью, в грудной полости – геморрагический экссудат.
- 15 В максимально вводимых дозах ферро-квин не вызывал летального эф фекта при внутреннем, подкожном и внутримышечном применении.
У крыс признаки интоксикации отсутствовали при внутреннем введении препарата в дозе до 1875 мг железа на кг. Клиника отравления установлена при однократной даче 6 мл препарата на крысу.
Подкожное введение препарата в дозе до 2625 мг железа на кг не отража лось отрицательно на состоянии крыс. У мышей отмечены признаки первичной интоксикации при инъекции железа в дозе 2250 мг на кг массы тела.
Применение препарата внутримышечно мышам и крысам в количестве до 1125 и 1875 мг железа на кг соответственно, не проявлялось клиникой интокси кации.
Учитывая результаты изучения острой токсичности и результаты опреде ления МПД ферро-квина, установлена тест-доза на безвредность – 0,10 мл (вну трибрюшинно) на мышь массой тела 18-20 грамм.
Аналогичные показатели острой токсичности демонстрировали и другие изученные препараты биомос, бажедин, биожелезо, феранимал и седимин, внутреннее применение которых в максимально созможных дозах лаборатор ным животным не вызывало их гибели.
Изучение подострой токсичности ферро-квина и бажедина при перораль ном, подкожном, внутримышечном, внутрибрюшинном введении препарата в течение 10 дней в терапевтической дозе, и дозах эквивалентных соответственно 3-х кратной и 5-ти кратной терапевтической, а так же при внутрибрюшинном введении в дозе составляющей 1/50, 1/20 и 1/10 от дозы LD50 показало, что мно гократное введение этих препаратов не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, груминг, аппетит, частота дыха ния у всех животных опытных групп не отличались от данных групп контроля.
3.2.2. Хроническая токсичность Хроническую токсичность изучали при пероральном, подкожном, внут римышечном, внутрибрюшинном введении препаратов ферроквин, бажедин, био-железо и биомос в течение 14 дней. В результате изучения полиорганной - 16 недостаточности установлено, что коэффициенты массы внутренних органов крыс (моргана/ мкрысы х 1000), которым применяли препарат, существенно не от личались от контроля.
При исследовании крови животных, получавших ферро-квин, не отмече но достоверных изменений в морфологическом составе крови и биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы. Установлено, что при длительном внутрибрюшинном введении препа рата присутствует тенденция к снижению количества эритроцитов и гемогло бина на 5-7% и соответственно увеличением билирубина на 15-18%.
Длительное применение препарата сопровождаются также активацией аминотрансфераз на 8-10%, что косвенно свидетельствует о феномене слабого гепатоцитолиза и повышением на 5-10% концентрации креатинина и мочевины в крови, что говорит о напряженном функционировании выделительной систе мы, однако все вышеуказанные изменения не превышают показатели физиоло гической нормы для данного вида животных.
Эти изменения согласуются с данными изучения хронической токсично сти сахарозного комплекса железа индуцировавшего при внутривенном введе нии повышение в плазме крови уровня щелочной фосфатазы и аланин - амино трансферазы у животных исследуемых групп, а также повышение концентра ции белка в моче в группе, получающей более высокую дозу препарата.
С учетом полученных результатов при изучении подострой токсичности ферро-квина и LD50, полученной при определении острой токсичности, уста новлено, что препарат ферро-квин оральный раствор и раствор для инъекций не обладают кумулятивным эффектом. Ввиду отсутствия смертности животных в опытных группах рассчитать коэффициент кумуляции не представляется воз можным.
В хроническом опыте препараты не оказывают токсического эффекта, существенно не влияют на органную структуру и на белковый, липидный и уг леводный гомеостаз организма.
- 17 3.2.3. Эмбриотоксическое и тератогенное действие В опытах по изучению эмбриотоксического и тератогенного действия на лабораторных животных установлено что существенных различий в плодови тости крыс опытных и контрольной групп не было. Среднее количество плодов на самку в контрольной группе составило 9,9+0,4, а у крыс, получавших ферро квин в дозе 5 мл/кг массы тела на 5 и 10 дни беременности 9,7+0,6 и 9,7+0,4 со ответственно. У крыс, получавших ферро-квин в дозе10 мл/кг массы тела на 5 и 10 дни беременности 9,8+0,5 и 9,6+0,6 соответственно.
Крысята, рожденные от самок опытных групп, не отличались от крысят контрольных самок. Проведенные морфологические исследования показали от сутствие аномалий развития внутренних органов и скелета плодов, рожденных от крыс опытных групп.
3.2.4. Местнораздражающее, кожно-резорбтивное и аллергизирущее действие ферропрепаратов В результате проведенных исследований местнораздражающего действия препаратов ферроквин, бажедин, био-железо и биомос установлено, что при однократной аппликации на кожные покровы кроликам при плотности нанесе ния от 0,020 до 0,10 мл/см2 они не вызывают повреждения кожи в виде эритемы или отеков. Аппликация препаратов не вызывала местную реакцию в виде де сквамации, аллергической экземы и дерматита.
Определение раздражающих свойств препарата при внутрикожном спо собе введения показало, что после внутривенного введения 1% раствора трипа нового синего в дозе 1 мл/кг массы тела кролика ферро-квин в форме 7,5%-ного раствора оказывал слабое раздражающее действие, через 3 и 4 часа раздража ющее действие препарата отсутствовало.
При визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век глаз кро ликов установлено, что ферро-квин вызывает слабое раздражение конъюнктивы спустя 1 час после закапывания, которое проходило уже к 2-му часу. Таким об разом, ферро-квин обладает слабораздражающим действием при наружном применении.
- 18 При изучении кожно-резорбтивного действия на кожные покровы мышей и крыс установлено, что аппликация ферро-квина (20-ти кратная) не вызывала гибели животных, не нарушала целостности кожи на месте нанесения, не нару шала функционирования организма животных.
Трехнедельный эксперимент по изучению аллергизирующего действия фер ро-квина, бажедина, био-железа и биомоса показал, что двадцатикратная ап пликация препаратов не вызывала явлений сенсибилизации организма под опытных животных.
3.2.5. Иммунотоксические свойства Исследования влияния ферропрепаратов на фагоцитарную активность макрофагов перитонеального экссудата мышей показали что они не оказывают негативного влияния на фагоцитарную активность макрофагов (% фагоцитоза по сравнению с контролем достоверно не отличается). Кроме того, при приме нении ферро-квина в превосходящей дозе наблюдается тенденция к активации переваривающей способности фагоцитов, повышая индекс завершенности фа гоцитоза на 1-2%.
Данные НСТ – теста, свидетельствуют о том, что ферро-квин существен но не влияет на количество НСТ-положительных нейтрофилов.
Оценку степени влияния ферро-квина на систему комплемента изучили на морских свинках с помощью гемолитического метода титрования сыворо точного комплемента. Активность комплемента в опыте с введением ферро квина в дозах 5 и 10 мл/кг массы животных существенно не отличалась от дан ных животных, которым препараты не вводили и была значительно ниже пока зателей группы животных которым инъецировали левамизол.
3.2.6. Оценка канцерогенной и мутагенной активности Изучение параметров мутагенности и канцерогенности ферропрепаратов особенно актуально с учетом существующего риска возникновения новообра зований при их инъекциях.
Для оценки мутагенных свойств ферро-квина учитывали постимпланта ционную смертность. В опыте данные смертности эмбрионов и количества жи - 19 вых эмбрионов на одну самку при применении ферро-квина в 3 фазу спермато генеза (зрелые сперматозоиды, самки оплодотворенные непосредственно после введения ферро-квина самцам), во 2 фазу сперматогенеза (поздние сперматиды, самки оплодотворенные через неделю после введения ферро-квина самцам) и в 1 фазу сперматогенеза (ранние сперматиды, самки оплодотворенные через недели после введения ферро-квина самцам) не отличаются от данных группы животных не получавших ферропрепараты.
Данные исследований канцерогенной и мутагенной активности ферро квина – сиропа и препарата для парентерального применения методом мета фазного анализа аберраций (изменения структуры) хромосом в клетках костно го мозга лабораторных животных представлены в таблице 6.
В опытных и контрольных группах не наблюдалось существенного (более чем десятикратного) увеличения количества клеток со структурными наруше ниями хромосом: разрывами, транслокациями, дицентриками и кольцевыми хромосомами. В результате проведённых исследований у ферро-квина – сиропа и раствора для инъекций не выявлено канцерогенной и мутагенной активности при применении его в дозе 10TD в остром эксперименте, что указывает на от сутствие у изучаемого лекарственного средства цитогенетического действия.
3.2.7. Фармакокинетика препаратов Фармакокинетику ферро-квина для инъекций, феранимала и седимина изучали при их внутримышечном, подкожном и внутрибрюшинном способах введения. Фармакокинетику ферроквина, бажедина, биомоса и био-желаза, со ответственно при их внутреннем применении.
Внутримышечное введение препарата ферро-квин в дозе 1 мл/кг массы тела в пересчете на действующее вещество соответствовало 75 мг трехвалент ного железа на килограмм массы животного, феранимала и седимина в дозах рекомендучемых производелелем (1-2 мл голову). В таблице 2, содержащей фактические данные эксперимента, отражена динамика количества железа в различных тканях, указывающая на активную абсорбцию препарата при его внутримышечном введении.
- 20 Содержание железа в крови значительно увеличилось сразу после введе ния препарата (до 29 мкг железа на г ткани), достигло максимума к третьему часу (до 62 мкг железа на г ткани). Оставалось на высоком уровне в течение су ток (до 25 мкг железа на г), а к третьему дню значительно уменьшилось. На пя тый день было минимальным и к седьмому дню железо уже не обнаруживалось.
В печени железо было обнаружено к третьему часу эксперимента. Его концентрация была ниже чем в крови на 55%, что свидетельствует об активной абсорбции железа другими тканями, в частности кроветворными.
Стабильно высокий уровень экзогенного железа на протяжении исследо вания с первого часа и до пяти суток после инъекции введения препарата был обнаружен в костном мозге. Максимум концентрации этого металла в костном мозге обнаружен на первые – третьи сутки эксперимента, когда его содержание было стабильно высоким на уровне 46 – 28 мкг железа на г ткани.
Наибольшее содержание железа было в мышцах (от 72 мкг железа на г сразу после введения, до 27 мкг железа на г на третьи сутки). Вместе с тем к 7 – 9 суткам экзогенные количества железа в мышцах установлены не были.
В содержимом толстого отдела кишечника на протяжении эксперимента препарат обнаружен не был. Это свидетельствует о том, что изученные ферро препараты не выводятся через желудочно-кишечный тракт.
С третьего по шестой часы небольшое количество железа (от 4 до мкг/г) было обнаружено в почках.
Из общего количества железа 23,8% его было обнаружено в крови, около 13,2 % в печени и 28% в костном мозге. Мышцы содержали максимальное ко личество железа – примерно 32,5%, почки – минимальное – 2,5%.
Такое распределение железа характерно для его устойчивых комплексов.
Следовательно, использование протеина повысило стабильность железосодер жащего комплекса in vivo и улучшило показатели фармакодинамики препарата.
В отличие от железо-сорбитолового комплекса, утилизирующегося до 60% пе ченью, значительная часть железа из изученных препаратов (до 84% для фер ро-квина) обнаружена в костном мозге, крови и мышцах.
- 21 Таблица 2 Содержание железа в органах и тканях крыс после внутримышечно го введения ферро-квина, феранимала и седимина в дозе 1 мл/кг массы тела* Содержание железа пре- Содержание железа пре парата (мкг/г ткани) че- парата (мкг/г ткани) че Биосуб Препарат рез, часов рез, суток страт 1 3 6 12 24 2 3 5 7 ферро-квин 24 64 24 33 25 21 17 5 0 феранимал Кровь 27 62 21 27 19 14 5 9 0 седимин 29 57 15 19 12 9 0 0 0 ферро-квин 0 23 22 19 7 9 5 0 0 феранимал Печень 0 27 28 19 12 9 0 0 0 седимин 0 24 24 22 29 19 2 0 0 ферро-квин 0 4 17 0 0 0 0 0 0 феранимал Почки 0 0 19 0 0 0 0 0 0 седимин 0 5 11 0 0 0 0 0 0 ферро-квин 57 49 35 25 19 22 12 7 0 феранимал 72 37 37 22 28 34 27 15 0 Мышцы седимин 64 50 31 28 24 31 9 2 0 ферро-квин 12 46 32 22 29 32 28 18 0 Костный феранимал 9 41 38 31 22 29 21 12 0 мозг седимин (бедрен ная 11 36 44 35 26 30 19 11 0 кость) *-Данные приведены за вычетом концентрации эндогенного железа в ткани При интраперитонеальном введении ферро-квина в крови содержание железа увеличилось до максимальных значений (67 мкг железа на г) сразу по сле введения препарата. В течение суток было стабильно высоким (до 44-62 мкг железа на г). К третьему дню незначительно уменьшилось, а к пятому дню же лезо уже не обнаруживалось.
В печени железо было обнаружено в течении часа после введения препа рата (до 8 мкг железа на г), к третьему часу эксперимента существенно увели чилось (до 27 мкг железа на г) и оставалось на высоком уровне ещё три часа. К двенадцатому часу наметилось снижение его количества (до 20 мкг железа на г), а к двадцать четвертому содержание железа в печени было приблизительно вдвое меньше максимального уровня отмеченного к шестому часу. В целом в - 22 печени железа содержалось примерно в три раза меньше чем в крови, что сви детельствует об активной абсорбции железа другими тканями (в частности кро ветворными), в значительной мере минуя печень.
Стабильно высокий, сопоставимый с кровью, уровень экзогенного железа на протяжении исследования с первого часа и до пяти суток после внутрибрю шинного введения препарата был обнаружен в костном мозге. Максимум кон центрации этого металла в костном мозге обнаружен к третьему часу экспери мента, когда его содержание было стабильно высоким на уровне 56-71 мкг же леза на г ткани.
Распределение железа, введенного внутрибрюшинно: 43,6% его было об наружено в крови, около 14 % в печени и 34,3% в костном мозге. Почки содер жали около 7% железа.
При подкожном введении ферропрапатов содержание железа в крови уве личилось к третьему часу, достигло максимума к двенадцатому и оставалось на высоком уровне в течении суток, к третьему дню уменьшилось вдвое, к пятому было минимальным и к седьмому уже не обнаруживалось.
В печени концентрация железа была примерно вдвое ниже чем в крови, что свидетельствует о его абсорбции другими тканями, в частности органами кроветворения.
Стабильно высокий уровень экзогенного железа на протяжении исследо вания с первого часа и до пяти суток после подкожного введения препарата был обнаружен в костном мозге. Максимум концентрации этого металла в костном мозге обнаружен на первые – третьи сутки эксперимента, когда его содержание было стабильно высоким на уровне 56 – 52 мкг железа на г ткани.
Соотношение подкожно введенного железа: 44,2% его было обнаружено в крови, около 17% в печени и 34% в костном мозге. Мышцы и почки содержа ли минимальное количество железа – примерно 5%.
Внутреннее применение ферроквина, бажедина, био-железа и биомоса характеризовалось следующими особенностями фармакокинетики. В содержи мом толстого отдела кишечника установлено наибольшее количество экзоген - 23 ного железа через один час после начала опыта 95-107 мкг железа на г ткани.
На протяжении трех суток этот показатель уменьшился почти в двадцать раз до минимального значения 5-8 мкг железа на г ткани.
С шестого по двенадцатый часы опыта небольшие количества железа (1 12 мкг железа на г ткани) обнаруживались в мышцах и до трех суток в почках.
Содержание железа достигло максимума в крови и печени к двадцать четвертому часу эксперимента до 37 и 27 мкг железа на г соответственно.
Стабильно высокий уровень экзогенного железа на протяжении исследо вания с первого часа и до пяти суток после перорального введения препарата обнаружен в костном мозге. Максимум концентрации этого металла в костном мозге обнаружен на первые – третьи сутки эксперимента, когда его содержание было на уровне 56 – 52 мкг железа на г ткани.
Суммируя данные внутреннего применения ферропрепаратов выявляем, что 79,9 % железа было обнаружено в крови и костном мозге, а всего около 18% в печени и почках. Мышцы абсорбировали минимальное количество желе за – примерно 2 %.
3.2.8. Остаточные количества ферропрепаратов В результате анализа данных опыта по внутреннему и инъекционному применению изучаемых препаратов установлено, что через 3 суток после их введения (при 5-ти дневном курсе применения) остаточные количества железа определяются во всех исследуемых органах и биологических жидкостях.
На 7 сутки после введения препаратов железо практически отсутствует во всех органах, тканях и жидкостях организма подопытных животных.
Как показывают данные изучения фармакокинетики и фармакодинамики ферропрепаратов при различных способах введения, в наибольшей концентра ции они содержатся в крови и костном мозге, элиминируются преимуществен но в печени. Препараты быстро всасываются и включаются в метаболизм, в связи с чем в период после 48 часов после введения препарата экзогенное желе зо в свободном виде в организме практически не присутствует.
- 24 3.2.9. Влияние ферропрепаратов на качество мясопродуктов Гигиеническую оценку на качество мясопродуктов проводили на кроли ках с массой тела 2,7-3,0 кг и поросятах в возрасте 60 – 70 дней. В результате ветеринарно-санитарной экспертизы мясопродуктов, полученных от животных убитых по истечении 7 дней после внутреннего и 14 дней после инъекционного применения препаратов железа, установлено отсутствие отрицательного влия ния ферротерапии на качество продуктов животного происхождения.
4. Научно-производственное испытание железосодержащих препа ратов.
Профилактическую эффективность парентерального применения ферро препаратов изучили в опытах на поросятах в возрасте 1 – 60 дней. Результаты исследования представлены в таблице 3.
У подопытных поросят уровень гемоглобина повышался до 15 дня жиз ни, в группе ферро-квина до 92,5 г/л, феранимала до 115,3, ферроглюкина до 98,5 г/л. У животных контрольной группы напротив, к пятидневному возрасту уровень гемоглобина возрастал, а к 15-ти дневному возрасту снижался до 78, г/л. С этим согласуется и увеличение количества эритроцитов, как относитель но фоновых показателей, так и отрицательного контроля. Более высокие значе ния в 15 дневном возрасте установили в группах ферроглюкина и феранимала, количество эритроцитов составило 3,86 и 4,14 млн/мл.
Цветовой показатель крови, повышался в 5 дневном возрасте с последу ющим снижением к 15 дню жизни, как у подопытных животных, так и отрица тельного контроля.
К тридцатидневному возрасту гематологические показатели у поросят выров нялись, однако у подопытных животных из группы ферро-квина, уровень гемо глобина был несколько ниже относительно групп феранимала и ферроглюкина, но существенно выше чем в группе отрицательного контроля. Кроме того, необходимо отметить, что относительно высокий уровень гемоглобина и со держание эритроцитов у поросят из контрольной группы, связаны, прежде все го, с обезвоживанием организма животных по причине диарей, что также под - 25 тверждает низкий цветовой показатель крови, повышенное содержание лейко цитов и данные заболеваемости. В период с 30 дней до 2-х месячного возраста, динамика роста количества гемоглобина и эритроцитов у подопытных живот ных сохранялась, наиболее высокие показатели в группе ферро-квина.
Таблица 3 Влияние железосодержащих препаратов на состав крови поросят Эритроциты, Гемоглобин, Цветовой Железо, группы день жизни г/л показатель мкмоль/л 10 /л фон (2-й день жиз- 2-й 2,36±0,45 83,6±6,1 0,99±0,15 14,2±1, ни) 5 3,03±0,30 89,4±2,3 0,92±0,10 17,7±4, 15 3,70±0,29 92,5±1,9 0,75±0,10 19,3±3, Ферро квин 30 3,29±0,48 94,0±3,3 0,86±0,08 26,9±1, 60 4,22±0,18 106,0±3,5 0,75±0,01 34,5±1, 5 2,93±0,71 89,3±5,1 0,92±0,17 30,9±8, 15 4,14±0,65 115,3±17,2 0,83±0,06 18,3±5, Феранимал 30 3,45±0,40 97,3±4,6 0,80±0,07 33,0±5, 60 4,48±0,76 96,0±15,1 0,66±0,01 38,5±1, 5 2,78±0,30 90,7±2,3 0,98±0,09 16,1±1, Ферроглю- 15 3,86±0,52 98,5±12,7 0,78±0,10 8,7±0, кин 30 3,60±0,19 87,0±2,1 0,72±0,03 28,5±6, 60 3,97±0,55 89,3±12,2 0,67±0,06 32,9±1, 5 2,99±0,28 85,8±1,4 0,85±0,10 16,0±1, 15 3,75±0,31 95,6±10,6 0,76±0,11 18,1±0, Седимин 30 4,11±0,22 99,0±2,2 0,73±0,08 18,5±3, 60 3,56±0,43 103,8±6,2 0,88±0,10 32,9±3, контроль 5 2,18±0,40 87,3±2,3 1,17±0,26 8,0±2, (без при- 15 3,06±0,93 78,8±20,7 0,80±0,20 5,3±0, менения 30 4,47±0,24 81,3±8,3 0,55±0,08 14,1±3, препара 60 4,30±0,39 89,7±7,1 0,63±0,11 21,0±1, тов) Изучая лейкопоэз, наиболее существенные изменения, а именно в коли чественном и качественном составе лейкоцитов крови, наблюдали в группе, где применяли ферро-квин. Данные характеризовались абсолютным и относитель ным снижением количества лейкоцитов (лимфоцитов) по сравнению с фоном в 5 дневном возрасте и увеличением их количества (в пределах физиологических значений) на всем протяжение эксперимента. Начиная с 30-го дня жизни, у подопытных животных, четко прослеживалась тенденция снижения содержа - 26 ния гранулоцитов и увеличения агранулоцитов, показатели белой крови имели одинаковую тенденцию, как в опытных, так и в контрольных группах. Необхо димо отметить повышенное количество лейкоцитов в контрольной группе, что связано с заболеваемостью желудочно-кишечными болезнями.
Изучая влияние препаратов на биохимические показатели сыворотки кро ви, установили, что у поросят из опытных групп содержание сывороточного железа было закономерно выше, относительно фона и группы отрицательного контроля. Однако наиболее высокие и стабильные показатели наблюдали в группе с феранималом, тогда как у животных, которым вводили ферро-квин и ферроглюкин, количество железа соответствовало друг другу. В белковом и уг леводном обмене четких закономерностей не наблюдалось.
В месячном возрасте у поросят опытных групп уровень сывороточного железа был на приблизительно одинаковом уровне, в районе 27-33 мкмоль/л, что почти в 2 раза превышало показатели группы отрицательного контроля.
В двухмесячном возрасте данные изменения сгладились, уровень железа у подопытных и контрольных животных был на одном уровне, в пределах фи зиологической нормы. В белковом, углеводном и обмене ферментов печени, четких закономерностей не наблюдалось.
Токсических явлений на фоне введения ферропрепаратов у поросят не отмечено, температура была в пределах физиологической нормы и не отлича лась от таковой в контроле. Уже через 3-4 дня подопытные поросята были бо лее активны, имели характерно розовую окраску кожи, лучший аппетит, чем отличались от поросят группы отрицательного контроля.
Лучшие результаты по приросту живой массы и сохранности получены в группе ферро-квина с дозой введения 1 мл (таблица 4). Более низкий среднесу точный прирост живой массы был в группах феранимала и ферроглюкина. В частности, при удовлетворительных хозяйственных условиях после примене ния ферро-квина в дозе 1,0 мл получен дополнительный прирост массы тела в среднем 3,3 кг на одного поросенка, пало 4,2% поросят. Применение феранима ла и ферроглюкина позволило увеличить прирост живой массы поросят на 3,2, - 27 0,4 кг и сохранности 91,3 и 87,5% соответственно. При этом падеж поросят в контрольной группе составил в среднем 22,4% при заболеваемости третьей ча сти от общего количества поросят.
Таблица 4 Профилактическое действие железосодержащих препаратов Забо Средняя масса головы в возрасте, Среднесуточный бо- Со- дней. прирост, г.
ле- хран группы До 21 го До 60 го вае- ность, дня жиз- дня 10 30 мост % ни жизни ь, % Ферро- 211,8±54, 294,3± 16,7 95,8 2,64±0,1 5,82±0,9 19,3±0, квин 1 4, Фера 164,0±28, 293,8±7, нимал 18,1 91,3 2,52±0,2 4,99±0,5 19,1±0, 3 Ферро- 150,5±34, 244,5±7, 29,1 87,5 2,56±0,1 4,78±0,8 15,9±0, глюкин 7 Седи- 170,1±31, 290,1±6, 20,2 90,1 2,55±0,3 5,04±0,9 19,5±0, мин 5 Кон- 159,5±33, 218,8± 31,7 78,6 2,58±0,1 4,61±0,6 14,3±0, троль 2 0, Терапевтическую эффективность изучали на поросятах в возрасте 9- дней, больных алиментарной анемией. После 10 дневного курса дачи препара тов, наиболее существенные изменения в крови наблюдали у поросят опытных групп. Отмечалась четкая тенденция к увеличению в крови содержания эрит роцитов и гемоглобина. Наиболее ярко количество увеличивалось во второй группе (мальтофер): к 20-му дню жизни (в 1,8 1,1 раза) и в первой (ферро квин) на 52,814,2% соответственно. У животных, которым вводили сульфат железа, содержание эритроцитов увеличилось в 1,6 раза, а гемоглобин повы сился на 6,7%. Однако необходимо отметить, что у этих животных, как ответ ная реакция на введение препарата возникла диарея, продолжающаяся в тече ние 5-7 дней, с резким обезвоживанием организма.
К тридцатидневному возрасту, тенденция повышения содержание гемогло бина у подопытных животных сохраняется. Наиболее четко это прослеживается в группе ферро-квина, данный показатель превышает таковой в контроле на - 28 29,9%. Количество эритроцитов напротив, снижается, однако данные измене ния характерны при высокой функциональной способности клеток и корриги руют с высоким цветовым показателем крови. К 2-х месячному возрасту гема тологические показатели крови стабилизируются, однако у подопытных живот ных групп (мальтофер и ферро-квин) содержание эритроцитов, гемоглобина и цветовой показатель крови в значительной степени превышает, аналогичные показатели интактных животных и группы – сульфат железа.
Влияние ферропрепаратов на гемопоэз у свиней изучали в опытах на су поросных и лактирующих свиноматках. При внутреннем применении препара та, содержащего 10 %-ный раствор железо-протеинового комплекса (группа 1 – опыт), супоросным свиноматкам в течении 30 дней до опороса и 30 дней после, в дозе 500 мг железа на голову, установлено, что препарат эффективен при же лезодефицитной анемии у беременных и лактирующих животных.
В контрольных группах – второй (давали сульфат железа в той же дозе и те же сроки) и третьей (без дачи дополнительного железа) количество гемогло бина и содержание сывороточного железа было значительно ниже.
Клиническое состояние животных к окончанию эксперимента не отлича лись от физиологических показателей, присущих здоровым животным.
Дополнительное введение в рацион препаратов железа способствовало повышению сохранности полученных от свиноматок поросят, уменьшению их заболеваемости и повышению темпов прироста их массы.
Применение ферропрепаратов в качестве средства патогенетической те рапии при внутренних болезнях животных изучили в опыте на телятах больных диспепсией. Учитывая роль недостатка железа в патогенезе диспепсии включе ние ферропрепаратов в комплекс лечебных мероприятий при этой болезни спо собствовало сокращению сроков лечения животных и скорейшему восстанов лению их продуктивности.
Для повышения эффективности комплекса лечебных мероприятий при дис пепсии у телят нами были применены препараты «ферро-квин» и урсоферран.
Отмеченные в опыте уменьшение срока выздоровления телят на один день, а - 29 так же увеличение прироста живой массы телят мы связываем с активизацией гемопоэза под воздействием препаратов железа.
Таблица 5 - Влияние ферропрепаратов на количество, сохранность, заболевае мость и рост поросят, полученных от свиноматок получавших перорально фер ро-квин (М±m;
n=36) Наименова- Ферро-квин Сульфат Контроль ние препа- железа (n=12) (n=12) (n=12) рата Количество полученного приплода, голов 34 32 День жизни Масса поросенка, кг 1 1,16± 0,25 1,12 ± 0,6 1,06±0, 21 5,3± 0,60 4,9± 0,58 5,0± 0, 7,9 ± 0, 30 8,6± 0,37 8,2± 0, Сохранность поросят, % 21 89 85 30 82 78 Заболеваемость поросят, % 21 12 16 30 15 22 Ферропрепараты обладают выраженной терапевтической эффективно стью при диспепсии телят, характеризующейся нормализацией минерального обмена, выражающейся в повышении Hb, увеличении количества эритроцитов у телят в возрасте 1 – 30 дней.
Критерии оценки эффективности ферротерапии.
Учитывая что, целесообразность применения ферропрепаратов обуслов лена благоприятным результатом возмещения недостатка железа в макроорга низме. Принимая во внимание нормализацию всех физиологических показате лей, измененных в виде суммы симптомов железодефицитной анемии (указан ных в соответствующем разделе), ориентиром эффективности ферротерапии является рост количества гемоглобина крови.
Время наступления положительного эффекта от применения ферропрепа ратов зависит не только от индивидуальных свойств иммунобиологической ре активности организма, уровня его кормления и содержания, но и от пути введе ния препарата, его химической и фармацевтической формы, скорости абсорб ции, количества железа усвоенного на килограмм массы организма.
- 30 Первый объективный эффект от применения ферропрепаратов наблюда ется около седьмого дня после начала лечения. Он выражается в возникновении ретикулоцитарного криза, проявляющегося многократным (в 2-10 раз по срав нению с исходным) увеличением количества ретикулоцитов. В течении следу ющих 14 дней наблюдают рост количества гемоглобина и числа эритроцитов. К концу первого месяца после начала лечения исчезают гипохромия и микроци тоз. Насыщение депо железа происходит позже.
Эффективность парентерального применения феранимала и седимина бе ременным характеризуется приростом количества гемоглобина в течении пер вых десяти дней после начала лечения соответствует ежедневному увеличению количества гемоглобина на 0,6 ± 0,02 г/л и 0,5± 0,01 соответственно.
При послеродовой анемии среднеуточный прирост уровня гемоглобина составляет до 1,3 г/л при использовании бажедина, биожелеза и биомоса При внутривенном применении ферроквина в дозах до удовлетворения расчетного дефицита железа прирост количества гемоглобина составил за дней около 2,6 г/л в день.
Препарат ферро-квин давали анемичным 10-ти дневным поросятам (Hb 62,00±2,83) ежедневно в дозе 5 мг железа на кг массы. За двадцать дней еже дневный прирост гемоглобина составил 2,92 г/л, при достижении 120,40±3, г/л гемоглобина и цветового показателя 1,20±0,24 к тридцатому дню жизни.
В группе животных с аналогичными стартовыми показателями крови, по лучавших в тех же дозах и те же сроки железо-декстрин гемоглобин ежедневно увеличивался на 1,94, сульфат железа на 1,67, а в группе негативного контроля, не получавшей ферропрепаратов, на 1,19 г/л, а цветовой показатель по истече нии 20 дневного опыта достиг 0,95, 0,90 и 0,77 соответственно.
В опыте на здоровых крысах имевших исходный гемоглобин 146,8 ±12, г/л и цветовой показатель 0,7 однократная инъекция ферро-квина в дозе мг/кг массы позволила увеличить к девятому дню наблюдений гемоглобин до 172,6 ± 20,4 при цветовом показателе 1,2, ежедневный прирост гемоглобина составил 2,8 г/л.
- 31 В сравнительном исследовании применения ферропрепаратов супорос ным и лактирующим свиньям мы изучили влияние ежедневной дачи 5 мг желе за на кг массы животного течении 30 дней до опороса и 30 дней после опороса на гематологические показатели. К седьмому дню до опороса количество гемо глобина в группе животных получавших внутрь с кормом ферро-квин выросло с начальных 116 ±1,65 до максимальных 146 ±5,45 г/л (за 60 дней наблюдений в трех группах), ежедневный прирост составил 1,3 г/л.
В условиях алиментарного дефицита железа для различных возрастных групп животных показателем эффективного применения ферропрепаратов яв ляется суточное увеличение количества гемоглобина на 1-3 г/л.
ВЫВОДЫ 1. Химическими и биотехнологическими методами получено 37 новых биологически активных препаратов железа, с различным физико-химическим составом. Путем скрининга, оптимизации технологии синтеза получена суб станция железо-протеинового комплекса – ферро-квина.
2. Разработана технология получения и стабилизации препарата Бажедин, сочетающего в себе двух и трехвалентные ионы железа.
3. Жидкие и твердые лекарственные формы ферро-квина, предназначены для внутреннего и инъекционного применения в качестве средства для профи лактики и лечения железодефицитной анемии у животных. Бажедин, био железо и биомос предназначены для использования в кормовых добавках и премиксах в качестве источника железа. Содержание железа в препаратах со ставляет от 0,05 до 48%.
4. Исследование параметров токсичности препарата ферро-квин свиде тельствует о его безвредности и отсутствии побочных эффектов в дозах пре вышающих профилактические и лечебные более чем в десять раз.
6. При внутреннем применении препаратов трехвалентного железа ферро квин, бажедина и биомоса установлена их высокая профилактическая и тера певтическая эффективность при железодефицитной анемии у крыс, поросят, те лят и собак, а так же при экспериментальной анемии у лабораторных живот - 32 ных. В опыте на анемичных 10-ти дневных поросятах (стартовый уровень Hb 62,0±2,83), при применении ферро-квина в дозе 5 мг железа на кг массы в день, за двадцать дней лечения ежедневный прирост гемоглобина составил 2,92 г/л, при достижении 120,4±3,29 г/л гемоглобина и цветового показате ля 1,2±0,24 к тридцатому дню жизни.
7. Применение ферропрепаратов в форме железо-органо-протеинатов супоросным и лактирующим свиньям в дозе 500 мг железа на голову тече нии 30 дней до опороса и 30 дней после опороса существенно влияет на гема тологические показатели. К седьмому дню до опороса количество гемо глобина в группе животных получавших внутрь с кормом ферро-квин вы росло с начальных 116,2 ±1,65 до максимальных 146,3 ±5,45 г/л (за 60 дней наблюдений в трех группах), ежедневный прирост составил 1,3 г/л.
8. При внутримышечном или подкожном способах применения установ лен высокий уровень гемопоэтической активности ферро-квина, феранимала и седимина у крыс, поросят-сосунов и молодняка крупного рогатого скота. Одно кратная инъекция ферро-квина в дозе 75 мг железа на кг массы крысам с ис ходным гемоглобином 146,8 ±12,1 г/л и цветовым показателем 0,7 позволила увеличить к девятому дню наблюдений гемоглобин до 172,6 ± 20,4 при цвето вом показателе 1,2, ежедневный прирост гемоглобина составил 2,8 г/л.
Однократная внутримышечная инъекция ферро-квина, феранимала и се димина поросятам сосунам в дозе 0,5 – 2,5 мл предупреждает развитие алимен тарной анемии в течение подсосного периода их жизни.
9. Применение ферропрепаратов в форме органо-протеиновых комплек сов не оказывает отрицательного влияния на иммунный статус животных. Фер ро-квин, бажедин и биомос рекомендуются в качестве средств этиотропной и патогенетической терапии в регламентах лечения и профилактики незаразных болезней животных, в частности диспепсии и бронхопневмонии молодняка.
- 33 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Нормативная документация на железосодержащие препараты.
Экспериментальные данных токсичности и фармакологических свойств новых отечественных железосодержащих препаратов.
Для ветеринарии и животноводства предлагаются внутренние и инъекци онные формы препарата ферро-квин, бажедин, биомос, био-железо, феранимал и седимин, обладающие высокими профилактическими и терапевтическими па раметрами при железодефицитной анемии у животных.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ АВТОРОМ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Трошин, А.Н. Применение бажедина в животноводстве / А.Л.Буланкин, Н.А.Трошин, 1.
С.В. Симирников, А.Н.Трошин // Информационный листок. ЦНТИ. Краснодар. 339-92. 1992.
С. 1- Трошин, А.Н. Применение препарат Биомос-ВЖ / А.Л.Буланкин, А.Н.Трошин, 2.
Н.А.Трошин., М.Т.Кацеба // Информационный листок. ЦНТИ. Краснодар. 75-94. 1994. С. 1- Трошин, А.Н. Задачи и проблемы ветеринарной фармации в России / А.Н.Трошин, 3.
Н.А.Трошин // «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» Мате риалы Международной научно-практической конференции. Воронеж. 2002, С. 669 – Трошин, А.Н. Патент на изобретение № 2280457 «Лекарственное средство для лече 4.
ния анемий». RU C1, A61K33/26, 2005. М., ФГУ ФИПС, Опубл. 27.07.2006 бюл. №21.
Трошин, А.Н. Хроническая токсичность железосодержащего препарата «ферро 5.
квин» / А.Н. Трошин // Труды Кубанского государственного аграрного университета.
Выпуск №1. – Краснодар: КГАУ, 2006. С. 206 -215.
Трошин, А.Н. Кожно-резорбтивное действие железосодержащего препарата ферро-квин / 6.
А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях.
Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ, Символика. Краснодар. 2006. С. 78-81.
Трошин, А.Н. Раздражающее действие железосодержащего препарата ферро-квин сиропа 7.
/ А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, В.И. Кровная // Там же. С. 81-82.
Трошин, А.Н. Эмбриотоксические и тератогенные свойства железосодержащего препара 8.
та ферро-квин / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Там же. С. 82-84.
Трошин, А.Н. Острая токсичность железосодержащего препарата «Ферро Квин» / 9.
А.Н. Трошин // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Выпуск №2. – Краснодар: КГАУ, 2006. С. 134 – 145.
Трошин, А.Н. Иммунотоксичность железосодержащего препарата ферро-квин / А.Н.
10.
Трошин, А.В. Нечаева // Труды Кубанского государственного аграрного университета.
Выпуск № 4. – Краснодар: КГАУ, 2006. С. 136-145.
Трошин, А.Н. Анализ потребности и параметры разработки новых ферропрепаратов / А.Н.
11.
Трошин, А.В. Нечаева // Материалы I Международной научно-практической конференции «Новости научной мысли».- Днепропетровск, Наука и образование. 2006. Т. 6. С. 97- Трошин, А.Н. Сравнительная эффективность ферротерапии железодефицитной анемии у 12.
животных / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Там же. С. 93- Трошин, А.Н. Фармакопрофилактика алиментарной анемии поросят / А.Н. Трошин, А.В.
13.
Нечаева // Там же. С. 95- - 34 Трошин, А.Н. Биодоступность и перспективы ферро-протеинов в качестве источни 14.
ка железа при его дефиците / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Материалы Меж дународной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования высшей шко лы». М. «Современные наукоемкие технологии» №3. 2007. С. 31 – 32.
Трошин, А.Н. Инфекции на фоне ферротерапии железодефицита и возможные пути 15.
их предотвращения / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Там же. С. 37 – 38.
Трошин, А.Н. Железо-протеинат Ферро-квин для стимуляции гемопоэза у свинома 16.
ток / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Там же. С. 35 – 36.
Трошин, А.Н. Синтез железо-протеиновых комплексов как путь повышения эф 17.
фективности и безопасности ферротерапии животных при железодефицитной анемии/ А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // СПб Ветеринарная практика. №1(36) 2007 С. 24-27.
Трошин, А.Н. Трошин А.Н., Нечаева А.В. Некоторые параметры оценки эффективно 18.
сти применения ферропрепаратов / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Материалы XV междуна родного Московского ветеринарного конгресса. М., 2007. С. 180-181.
Трошин, А.Н. Лечение алиментарной анемии свиней железосодержащим препа 19.
ратом ферро-квин / А.Н. Трошин, И.Н. Бессмертная, Е.А. Лысенко, А.В. Молоховская, Д.В. Стрельникова // Труды Кубанского гос. агроуниверситета. Выпуск 426 (454). – Краснодар: КубГАУ, 2007. – С. 63-66.
Трошин, А.Н. Применение нового железосодержащего препарата ферро-квин для 20.
профилактики железодефицитной анемии у новорожденных поросят/А.Н. Трошин, И.Н.
Бессмертная, Е.А. Лысенко, А.В. Молоховская, Д.В. Стрельникова // Там же. – С. 66-68.
Трошин, А.Н. Разработка лекарственных средств обладающих биологической 21.
активностью при железодефицитной анемии / А.Н. Трошин, И.Н. Бессмертная, Е.А.
Лысенко, А.В. Молоховская, Д.В. Стрельникова // Там же. – С. 68-70.
Трошин, А.Н. Изучение фармакокинетики и остаточных количеств железосодержащего 22.
препарата «ферро-квин® сиропа» / А.Н. Трошин, Т.И. Ермакова // Аграрная наука сельскому хозяйству: сборник статей. В 3 Т. / II Международная научно-практическая конференция.
Барнаул: Изд-во АГАУ, 2007. Т. 2. С. 464-467.
Трошин, А.Н. Параметры фармакокинетики и остаточных количеств железосодер 23.
жащего препарата «ферро-квин®» для подкожных инъекций [Электронный ресурс] / А.Н.
Трошин, Т.И. Ермакова // Научный электронный журнал «Современные проблемы науки и образования». №3, 2007, 0420700037/0054 – Режим доступа: www.science-education.ru Трошин, А.Н. Фармакокинетика ферро-квина для инъекций / А.Н. Трошин, Т.И. Ермако 24.
ва, Н.В. Когденко, А.Н. Трошин // Материалы Международной научно-практической конфе ренции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины, биологии и животноводства».
УГАВМ. Троицк 2007 г., С. 154-157.
Трошин, А.Н. Особенности фармакокинетики нового железосодержащего препарата фер 25.
ро-квин / А.Н. Трошин, Т.И. Ермакова, Н.В. Когденко, Н.А. Трошин // Там же. С. 157-161.
Трошин, А.Н. Изменение гематологических показателей организма при использовании 26.
различных форм и путей введения ферропрепаратов / А.Н. Трошин, Т.И. Ермакова, Н.В. Когден ко, А.Н. Трошин // Материалы Всероссийской научно - практической конференции «Акту альные проблемы функциональной и морфофункциональной диагностики болезней живот ных» Новочеркасск. 2007 г. С. 41-43.
Трошин, А.Н. Ферропрофилактика железодефицитной анемии как фактор технологиче 27.
ского стресса / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко, Н.А. Трошин // Там же. С. 43-44.
Трошин, А.Н. Причины и результаты побочного действия железосодержащих препаратов 28.
/ А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Там же. С. 44-46.
Трошин, А.Н. Применение препарата ферро-квин для профилактики железодефи 29.
цитной анемии у свиней / А.Н. Трошин // Ветеринарный врач. Казань. 2007 № 1 С. 44-47.
Трошин, А.Н. Внутренние и парентеральные ферропрепараты, история и классифика 30.
ция / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Материалы IV Международной научно-практической - 35 конференции «Агропромышленный комплекс: состояние, проблемы, перспективы. Пенза.
ГСХА. 2007. С. 91- Трошин, А.Н. Варианты синтеза железодекстрана как фактор его терапевтической не 31.
эквивалентности. / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Материалы IV Международной научно практической конференции «Агропромышленный комплекс: состояние, проблемы, перспек тивы. Пенза. ГСХА. 2007. С. 89- Трошин, А.Н. Недостаточное всасывание соединений железа в организме, проблемы и 32.
возможные решения / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Там же. С. 93- Трошин, А.Н. Оральные препараты железа эффективны при железодефицитной ане 33.
мии поросят / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Там же. С. 97- Трошин, А.Н. Препараты железа в медицине и ветеринарии вчера, сегодня и зав 34.
тра [Электронный ресурс] / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко, А.В. Нечаева // Научный журнал КубГАУ, 2007, № 28(4) – Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2007/04/pdf/05.pdf Трошин, А.Н. Получение препарата и его профилактическая эффективность при 35.
железодефицитной анемии у животных [Электронный ресурс] / А.Н. Трошин, А.В. Нечае ва // Научный журнал КубГАУ, 2007, № 28(4) – Режим доступа:
http://ej.kubagro.ru/2007/04/pdf/06.pdf Трошин, А.Н. Изучение мутагенной активности и канцерогенности железосодер 36.
жащего препарата ферро-квин / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Труды Кубанского государ ственного аграрного университета. Выпуск № 10. – Краснодар: КГАУ, 2008. С. 138- Трошин, А.Н. Трошин А.Н., Нечаева А.В. Лечение железодефицитной анемии телят.
37.
Труды Кубанского государственного аграрного университета. Выпуск № 12. – Красно дар: КГАУ, 2008. С. 172-184.
Трошин, А.Н. Железосодержащее средство для профилактики и лечения анемии у 38.
животных / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Патент № 2338516 RU C1, A61K31/047, М., ФГУ ФИПС, 2008. Опубликовано 20.11.2008 Бюл. № Трошин, А.Н. Способ обогащения подкормки для пчел / А.Н. Трошин, Н.В. Ко 39.
гденко, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Патент № 2349085. RU C1. A01K53/00 Опубликовано 20.03.2009 Бюл. № 8.
Трошин, А.Н. Инновационные подходы к лечению анемии / А.Н. Трошин, В.А.
40.
Антипов // Труды Кубанского государственного аграрного университета.- Серия: Вете ринарные науки № 1 (ч. 1).- Краснодар.-2009., С. 295 – 297.
44. Трошин, А.Н. Влияние ферро-квина на показатели обмена веществ поросят / А.В. Степи ка, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // «Актуальные проблемы современной ветеринарии», Мате риалы междунар. науч.-практ. конф., посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани/ Материалы международной научно-практической конференции ФГОУ ВПО Кубанский ГАУ, 2011, часть 1, С. 85-87.
45. Трошин, А.Н. Инновационные средства компенсации железодефицита у животных / В.А.
Антипов, А.Н. Трошин, А.В. Степика, Р. Гимранов // Научные основы повышения продук тивности сельскохозяйственных животных. // Сборник научных трудов 4-й международной научно-практической конференции. СКНИИЖ 2011, С. 42-46.
46. Трошин, А.Н. Перспективы использования железосодержащих руд при анемии животных / В.А. Антипов, А.Н. Трошин // Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии и фарма ции: Материалы меж. науч.-практ. конф. - Краснодар, 2012. - С. 162- 47. Трошин, А.Н. Сравнительная эффективность железодекстриновых и железопротеиновых комплексов при внутреннем применении при лечении анемии животных / А.Н. Трошин, А.В.
Степика // Там же. С. 89-92.
- 36