Профилактика и лечение мастита без применения химиотерапевтических средств

На правах рукописи

РЕШЕТКА МИХАИЛ БОРИСОВИЧ ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ МАСТИТА БЕЗ ПРИМЕНЕНИЯ ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией 06.02.06 – ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Краснодар 2013

Работа выполнена на кафедре терапии и фармакологии факультета ве теринарной медицины ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аг рарный университет» Научные руководители: Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, член-корр. РАСХН Антипов Валерий Александрович доктор ветеринарных наук Коба Игорь Сергеевич доктор ветеринарных наук

Официальные оппоненты: Семененко Марина Петровна доктор ветеринарных наук, профессор Авдеенко Владимир Семенович

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Ставропольский госу дарственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится «04» июля 2013 года в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Крас нодар, ул. Калинина, 13)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу:

350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» http://www.kubsau.ru «30» мая 2013 г. и официаль ном сайте ВАК РФ – http://vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан «» июня 2013 года.

Ученый секретарь диссертационного совета Родин И.А.

1.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Заболевания молочной железы у крупного рогатого скота представляют собой хозяйственно-экономическую про блему во всех странах с интенсивным молочным скотоводством. По ражения вымени очень распространены и причиняют животноводству большой ущерб. Они обуславливают огромные потери молока за счет снижения молочной продуктивности, ограничивают сроки хозяйствен ного использования коров, снижают качество молока и молочной про дукции (Л.Д. Демидова, 1997;

Л.К. Попов с соавт., 1999;

А. Данкверт, Л. Зернаева, 2003). По мнению отечественных и зарубежных авторов наибольшее распространение мастит получил: во время запуска, в су хостойный период, а также после родов (В.М. Морев, А.П. Береснова, А.Р. Корягина, 1984;

Г.В. Зверева, В.Н. Олескив, Д.Е. Капур, 1983;

Ю.П. Полянцев, 1985;

А.Н. Савостин, 1988;

В. Шевкопляс, Н. Филип пов, А. Смеянов, 2000;

В.А. Париков с соавт., 2000;

В.К. Понамарв, 2002).

Другая проблема, связанная с маститом – наличие ингибирую щих веществ в молоке во время и после лечения больных животных.

Основная доля этих веществ приходится на антибиотики, сульфанила миды, нитрофураны и гормоны, которые содержатся в комплексных противомаститных препаратах и широко применяются в ветеринарной практике. (А.И. Тузов, 2002).

В системе лечебно-профилактических мероприятий при мастите у коров важная роль отводится сухостойному периоду. Одним из эф фективных приемов профилактики мастита является обработка вымени коров в начале сухостоя пролонгированными антимикробными препа ратами. (С.И. Ширяев, 2010).

В нашей стране разработан арсенал новых, высокоэффективных противомаститных препаратов антимикробного и противовоспали тельного действия (Л.Д. Демидова, 1997;

A.A.Архипов, 2008;

Е.А. Си доркин, 2009 и др.), доступных к применению в условиях любых жи вотноводческих ферм. Однако их эффективность все еще уступает за рубежным средствам. Особенно это относится к препаратам, предна значающимся для профилактики и терапии мастита в периодах запуска и сухостоя. Поэтому, разработка и введение в ветеринарную практику новых более эффективных и недорогих противомаститных препаратов является актуальной задачей ветеринарной науки.

Цель и задачи исследований. Цель настоящих исследований со стояла в разработке нового эффективного средства для профилактики мастита у коров в период сухостоя и создание препарата для лечения коров больных маститом, не содержащего в своем составе химиотера певтических средств.

Для достижения данной цели были поставлены следующие за дачи:

Изучить степень распространения мастита у коров в 1.

некоторых хозяйствах Краснодарского края.

Изучить микробный фон коров, больных маститом.

2.

Разработать новые препараты для профилактики и ле 3.

чения мастита в сухостое и изучить его фармако-токсикологические свойства.

Изучить их профилактическое и лечебное действие 4.

при маститах у коров.

Научная новизна. Определена степень распространения мастита у коров в хозяйствах Краснодарского края, установлен видовой состав микрофлоры, выделенный от больных маститом коров. Разработан но вый препарат для профилактики мастита у коров в период сухостоя, дано его фармако-токсикологическое обоснование и оценка профилак тической эффективности в сравнительном аспекте с другим аналогич ным по действию препаратом. Разработан новый препарат для лечения мастита у коров без химиотерапевтических средств, дана его фармако токсикологическая характеристика и оценка терапевтической эффек тивности при лечении маститов в сравнении с другими препаратами.

Практическая значимость. Установлена степень заболеваемости коров маститом в некоторых хозяйствах Краснодарского края. Прове дены научные исследования по выяснению некоторых причин заболе ваемости коров маститом, в частности в период сухостоя. Предложено новое средство для профилактики мастита у коров в период сухостоя и получена заявка на патент № 2012153019. Предложен новый препарат для лечения мастита у коров не содержащий в своем составе антибио тики, сульфаниламиды и нитрофураны. Получено решение о выдачи патента на изобретение по заявке №2012121970/15.

Апробация результатов собственных исследований. Результаты исследований и основные положения диссертации доложены, обсуж дены и одобрены на заседаниях кафедры терапии и фармакологии ве теринарного факультета Кубанского государственного аграрного уни верситета (2010-2013);

международной научно-практической конфе ренции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» посвящен ной 90-летию со дня образования Кубанского государственного аграр ного университета и 65-летию ветеринарной науки Кубани (2011);

межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии и фармации» посвященной 90 летию Кубанского государственного аграрного университета (2012);

международной научно-практической конференции «современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведе ния животных» (2012);

научной конференции профессорско преподавательского состава факультета ветеринарной медицины Ку банского аграрного университета (2013).

Публикации материалов диссертации. По материалом диссерта ционной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изло жена на 155 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений, списка литературы и приложений. Список использованной литературы включает 211 источников, в том числе 26 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 28 таблицами и 9 рисунками.

Основные положения выносимые на защиту:

Распространение мастита в стадах коров и формы его 1.

проявления.

Материалы разработки препарата профмастит, опре 2.

деление его фармако-токсикологических свойств и оценка профилак тической эффективности маститов у коров в период сухостоя.

Материалы разработки препарата сангвимаст, опреде 3.

ление его фармако-токсикологических свойств и оценка терапевтиче ской эффективности при лечении мастита у коров.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Работа выполнена в период с 2010 по 2013 год на кафедре тера пии и фармакологии ветеринарного факультета Кубанского государ ственного аграрного университета совместно с лабораторией акушер ства и гинекологии с/х животных Краснодарского научно исследовательского ветеринарного института, а также в хозяйствах Краснодарского края: Учхоз «Кубань», филиал Смоленский ООО «Предгорье Кавказа» Северского района и ЗАО АФ «Искра» Тимашев ского района.

Исследованию было подвергнуто: 3868 коров с продуктивно стью 4,0-7,5 тысяч кг и более молока в год, исследовано 15427 проб молока на скрытую форму мастита, бактериологическому исследова нию было подвергнуто 54 пробы от больных маститом коров, иссле довано 39 проб крови и 338 лабораторных животных.

Исследования проведены в соответствии с рекомендацией «Диа гностика, профилактика и лечение мастита у коров» (Краснодар, 1986), «Наставлением по диагностике терапии и профилактике мастита у ко ров» (М., 2000), «Методическими рекомендациями по диагностике, терапии и профилактики субклинического мастита у коров в сухостой ный период» (Воронеж, 2005).

При клиническом исследовании коров определяли состояние вымени методом осмотра и пальпации, а также проводили пробное сдаивание секрета вымени.

При наружном осмотре обращали внимание на форму вымени, состояние волосяного покрова, симметричность четвертей, цвет кожи, величину сосков, состояние сфинктера соскового канала.

Пальпацией определяли местную температуру молочной желе зы, консистенцию, наличие болевой реакции, состояние надвыменных лимфатических узлов их величину, консистенцию и болезненность.

Пробным сдаиванием определяли тонус сфинктера соскового канала и его проходимости. Так же обращали внимание на внешний вид секрета, цвет, количество, однородность и наличие в нем сгустков и хлопьев.

Для выявления субклинического мастита учитывалась реакция секрета молочной железы с кенотестом на молочно-контрольной пла стинке ПМК-2, а также постановкой пробы отстаивания по В.И. Муто вину (1974). Диагноз на субклинический мастит ставили при наличии положительной реакции секрета молочной железы с диагностическим реактивом при повторном исследовании через 48 ч, а также при заме рах слоя сливок в пробе отстаивания. Также проводили подсчет сома тических клеток в счетной камере с сеткой Горяева (по Н.М. Хильке вичу, 1973) и при помощи прибора «Соматос-мини».

Для определения видового состава микрофлоры, выделенной из вымени коров, нами было исследовано 54 пробы секрета вымени взя того от больных маститом коров. Взятие проб проводили по методике В.И. Слободяник, В.А. Париков, Н.Т. Климов и В.В. Подберезный (2009). Из взятых проб делали посевы на МПА, МПБ, МПА с 7,5% натрия хлорида, МПА с 5% дефибринированной крови барана, МПА с 1% глюкозой, среду Сабуро, среду Эндо, цветные среды Гисса. Для культивирования микроорганизмов чашки Петри с посевами помещали в термостат при +38°С.

Культуральные свойства определяли по характеру роста на пи тательных средах и по внешнему виду колоний микроорганизмов.

Учитывали форму колоний, цвет, размер, характер поверхности и про зрачность. При посевах на кровяной агар учитывали отсутствие или наличие зоны гемолиза.

Для определения вида бактерий использовали пластины биохи мические дифференцирующие стафилококки и энтеробактерий научно производственного объединения «Диагностические системы», г. Н.

Новгород, углеводные среды Гиса. Видовую принадлежность микроор ганизмов устанавливали, руководясь «Определителем бактерий Берги» (1980) и рекомендациями Н.Н. Михайлова (1983), В.М. Карташовой с соавт. (1988), а грибов - «Определителем патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов» (1979) и также «Атласом грибов пато генных для сельскохозяйственных животных и птиц» (1953). Иденти фикацию проводили с учетом культуральных, морфологических и био химических свойств бактерий по общепринятым методикам (Сидоров М.А. 1982).

Патогенность микроорганизмов устанавливали при внутрибрю шинном заражении белых мышей массой 18-20 г 1 млрд взвесью мик робных тел в мл смытой с агаровой культуры в дозе 0,2-0,5мл (200 500млн микробных тел).

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяли на среде АГВ луночным методом, а также методом наложения стан дартных дисков с антибиотиками и методом кратных серийных разве дений в МПБ.

Для лабораторных исследований брали кровь из подхвостовой вены до кормления животных. При гематологических исследованиях определяли количество лейкоцитов и эритроцитов в камере с сеткой Горяева, содержание гемоглобина – гемоглобинцианидным методом, подсчитывали СОЭ в аппарате Панченкова, вычисляли цветовой пока затель, выводили лейкоформулу по В.Г. Мухину, характер лейкограм мы (микроскопией мазков крови окрашенных по Романовскому Гимзе). Биохимические исследования заключались в определении в сыворотке крови белковых фракций (нефелометрически), общего белка (колориметрически), мочевины (цветной реакцией с тиосемикарбази дом и диацетилмонооксимом), неорганического фосфора (с ванадат молибдатным реактивом), общего кальция (с орто-кризолфталеином), глюкозы (ферментативно). Активность трансаминаз, щелочной фосфа тазы, билирубин – с помощью наборов фирмы «ДДС».

Исследование специфического действия антимикробных препа ратов включало: установление антимикозных и антибактериальных свойств методами последовательных серийных разведений в МПБ и диффузии в агар с образованием лунок с применением в качестве тест культур, микроорганизмов выделенных из молочной железы коров больных маститом.

Изучение острой токсичности и хронической токсичности пре паратов проводили на беспородных белых мышах, массой 20-25 г и белых крысах, массой 150-200 г в соответствии с «Оценкой биологиче ского действия медицинских изделий. Часть 11. Исследование обще токсического действия» (Утвержденной и введенной в действие При казом Федерального агентства по техническому регулированию и мет рологии от 6 августа 2009 г. ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009).

Изучение раздражающего и сенсибилизирующего действия пре паратов проводили на 8 молодых кроликах-альбиносах массой 2300 2700 г, 50 морских свинках-альбиносах массой 250-330 г и 30 беспо родных белых мышах массой 20-25 г в соответствии с «Оценкой био логического действия медицинских изделий. Часть 10. Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия» (Утвержденной и введенной в действие Приказом Федерального агентства по техниче скому регулированию и метрологии от 6 августа 2009 г. ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009).

Всего для оценки безвредности препаратов было задействовано 188 белых мышей-альбиносов, 92 белые крысы, 50 морских свинок альбиносов и 8 кроликов-альбиносов.

Изучение пленкообразующей способности профмастита провели на 15 коровах голштинской породы, находящихся в сухостое. Для это го профилактическое средство наносили на соски вымени в период запуска животных, непосредственно после последней дойки. В даль нейшем каждые 5 дней проводилось наблюдение за сосками вымени животных и проверка наличия пленки на сосках коров.

Изучение общей микробной обсеменнности секрета молочной железы и кожи сосков коров после применения профмастита осу ществляли на 10 клинически здоровых коровах, находящихся в про цессе перевода в сухостой.

Изучение профилактической эффективности профмастита про вели на 300 животных, которых разделили на 3 равные группы опыт ную, 1-ю контрольную (положительный контроль) и 2-ю контрольную (отрицательный контроль) по 100 животных в каждой. Коровам опыт ной группы во время запуска, непосредственно после последнего дое ния, и проведения туалета вымени при помощи пластмассового ста канчика для обработки сосков наносили профмастит, после чего коров определяли в группу сухостоя. Коровам первой контрольной группы по аналогичной схеме при помощи пластмассового стаканчика для об работки сосков наносили ProfilacDryOff. Животных второй контроль ной группы определяли в сухостой без средств фармакопрофилактики.

У подопытных животных на 15-е сутки сухостойного периода и после отела исследовали молочную железу клиническими методами и поста новкой тест-реакций на скрытую форму мастита.

Влияние сангвимаста на молочную железу изучили на 5 клини чески здоровых коровах на 4-6 месяце лактации. Препарат, разогретый до 38-39°С в дозе 10 мл, вводили внутрицистернально в соски правой половины молочной железы после предварительного выдаивания мо лока и вытирания сосков 70° этиловым спиртом (соски левой половины вымени служили контролем). За животными вели наблюдение и ис следовали молоко оценки реакции с кенотестом и постановки пробы отстаивания. Также определяли внешний вид, запах, цвет, рН, количе ство соматических клеток в 1 мл секрета.

Оптимальную лечебную дозу сангвимаста определяли на 30 ко ровах-аналогах голштинской породы больных катаральным маститом, разделенных на 3 равных группы. Животным первой группы после предварительного выдаивания молока внутрицистернально вводили препарат, подогретый до 38°С. в дозе 5мл, второй -10 мл и третьей мл до выздоровления. После всего курса лечения учитывали количе ство введений препарата, а также определяли состояние четвертей вы мени визуально и при помощи пальпации, проводили исследование молока на скрытый мастит. Терапевтическую эффективность сангви маста изучали в двух сериях опыта при различных клинически выра женных формах мастита на 216 животных в сравнительном аспекте с препаратами «Ваккамаст» и «Септогель», которые использовали со гласно наставлению по применению. Препарат сангвимаст вводили животным после доения внутрицистернально в дозе 10 мл с интерва лом 24 часа до выздоровления.

Математическую и биометрическую обработку полученных данных проводили при помощи программы WindowsVista, MicrosoftExcel 2010, степень достоверности «Р» устанавливали по рас пределению Стьюдента.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Степень распространения и формы проявления мастита у коров По данным акушерско-гинекологической диспансеризации крупного рогатого скота в 2010-2012 годах в 3 хозяйствах Краснодар ского края (ООО «Предгорье Кавказа» в Северском районе, ОАО «Ис кра» в Тимашевском районе, Учхоз «Кубань») было обследовано коров и из них выявлено с заболеванием маститом 1520 коров, что со ставляет 39,3%. Ежегодные исследования животных на мастит показа ли, что положительно реагирующих животных из года в год нарастало, несмотря на то, что поголовье ферм оставалось примерно на одном и том же уровне. Процент заболеваемости в 2010 году составил 39,0 % из 1290 обследованных животных, а в 2012 году – 39,6 % из 1289 обсле дованных животных.

Проведенные исследования по изучению сезонности возникно вения мастита на МТФ №2 ООО «Предгорье Кавказа» позволили нам установить, что мастит коров имеет определенный сезонный характер и основные его пики приходятся на март-май и сентябрь-ноябрь.

В эти месяцы было выявлено больных маститом коров от 2,5 % до 4,1 % от общего поголовья фермы. С декабря по февраль этот пока затель снижается до 1,3-2,0 %, а с июня по август до 1,2-1,7 % от обще го поголовья фермы.

Также заболеваемость коров маститом зависит и от технологии доения коров. Проведенный нами анализ показал, что наименьший процент заболеваемости маститом отмечается при линейном доении коров в молокопровод, а наибольший процент заболеваемости прихо дится на линейную в бочок. Это зависит от того, что при доении коров в молокопровод коровы разделены на группы и каждая группа коров закреплена за определенными доярками в связи, с чем они уделяют пристальное внимание к каждой корове, как в период лактации, так и в период запуска. При доении коров в бочок нами было замечено, что вследствие высокой нагрузки на операторов машинного доения: вместо двух доильных аппаратов они используют три и четыре, происходит передержка доильных аппаратов, что ведет к раздражению вымени и, как правило, заболеванию коров маститом. Так же в трех хозяйствах были замечены нарушения в преддоильной подготовке вымени к ма шинному доению. В Учхозе «Кубань» и ОАО «Искра» больные живот ные доились совместно со здоровыми, что ведет к передаче через до ильный аппарат возбудителей мастита от больных животных к здоро вым. В ООО «Предгорье Кавказа» больных коров доили только после того как подоили здоровых, что в свою очередь не ведет к передачи возбудителей от больных к здоровым через доильный аппарат.

В результате мониторинга было выявлено 74 коровы с воспале нием вымени в период сухостоя и установлено, что 46 животных забо лели в первые 15 дней, 17 – на 16-30 день, а 11 животных в оставшиеся дни сухостоя. При этом у 34 (46%) коров диагностировали клинически выраженный мастит, а у 40 (54%) коров – субклинический мастит (табл. 1).

Таблица Заболевание маститом коров в период сухостоя по дням (n=74) Заболело Заболело суб клиническим клиническим Заболело маститом в сухостое маститом маститом 31 день – 16- 1-15 день день до отела гол. гол.

% % гол. гол. % гол.

% % 34 46 40 54 46 62,2 17 23 11 14, При анализе данных распространения мастита в Краснодарском крае нами было отмечено, что мастит имеет широкое распространение и является актуальной проблемой.

3.2. Видовой состав микрофлоры молока у коров больных маститом При микробиологическом исследовании молока от 54 коров больных маститом было выделено 17 видов микроорганизмов и 4 вида грибов, всего 105 изолята. У 50 коров (92,6%) больных маститом выде лялась условно-патогенная микрофлора: при посевах молока из пора женных долей вымени на МПА в чашках Петри обнаруживали массо вый рост микробных колоний. У 4 (7,4%) животных в секрете пора женных долей вымени, как правило, больных субклиническим и сероз ным маститом микрофлора не выделялась, воспаление протекало, как асептическое.

В монокультуре микрофлору выделяли у 17 коров (31,5%): E.

coli;

St. epidermidis;

C. freundi;

Sh. dysenteriae;

St. aureus;

St. hyicus spp.

chromogenes;

Str. agalactiae;

St. lentus;

St. intermedius.

У 33 (61,1%) коров больных маститом микрофлора выделялась в ассоциациях. В исследуемом материале наиболее часто встречались следующие ассоциации бактерий: St. epidermidis + St. aureus + Str. aga lactiae + Str. haemolyticus;

E. coli + Str. agalactiae;

Str. agalactiae + St.

epidermidis;

St. epidermidis + St. aureus + Str. agalactiae и другие.

В 3 пробах были выявлены грибы: Asp.fumigatus, Candida rugosa, Candida glabrata, Candida citerrii.

Гемолитической активностью обладали 63,8% культур, были па тогенны для лабораторных животных 77,1% культур.

3.3. Фармакология и применение профмастита 3.3.1. Физико-химические свойства профмастита В результате анализа соответствующих литературных данных и разносторонних исследований при подборе компонентов и определе ния их оптимальных доз и соотношения, мы разработали средство для профилактики мастита у коров в сухостое. Которое представляет собой прозрачный гель синего цвета, со специфическим запахом и вкусом спирта, горюч. Водородный показатель 5,8–6,0. После высыхания геля образуется прозрачная пленка голубого цвета.

При изучении стабильности профмастита по методу «ускорен ного старения» было установлено, что срок годности препарата проф мастит составляет 3 года.

3.3.2. Антимикробная активность профмастита Антимикробную активность профмастита определяли в сравни тельном аспекте с препаратом аналогом ProfilacDryOff (табл. 7). В ре зультате нами установлено, что профмастит задерживает рост микро организмов от 14,4 до 16 мм, в то время как ProfilacDryOff не дает зон задержки роста. Таким образом, препарат профмастит обладает хоро шим антимикробным действием на основную микрофлору, выделяе мую от коров больных маститом.

3.3.3. Изучение токсичности профмастита Исследование острой токсичности препарата провели в двух се риях опытов на белых мышах и белых крысах.

В первой серии опыта белым мышам препарат вводили перо рально в дозах от 0,1 до 0,5мл, белым крысам от 1 до 3мл. Также нами была сформирована контрольная группа мышей и крыс, которым пре парат не вводили.

Во второй серии опыта белым мышам и белым крысам препа рат вводили подкожно в дозах 0,5-1мл и 5-10мл соответственно. Кон трольной группе лабораторных животных препарат не вводили.

В течение последующих 14 дней за животными вели клиниче ское наблюдение, обращая внимание на общее состояние, аппетит, по веденческие реакции, картину интоксикации, гибель мышей и крыс.

В течение всего периода наблюдений гибели мышей и крыс не наблюдалось, состояние животных было аналогично состоянию жи вотных из контрольной группы.

Для определения хронической токсичности препарата использо вались беспородные белые мыши, которым в желудок вводили испы туемый препарат в дозе 0,3 мл на 1 введение в течение 7 дней. Крысам препарат вводили в желудок в дозе 2 мл на 1 введение в течение дней. За животными вели пристальное наблюдение, учитывая их пове дение, общее состояние и аппетит. По истечению 7 дней после послед него введения препарата 5 мышей и 3 крысы было подвергнуто эвтана зии и вскрыто, было изучено патологическое состояние внутренних органов. За остальными 5 мышами и 2 крысами продолжали вести наблюдение в течение 3 недель, учитывая их поведение, общее состоя ние и аппетит. Мыши и крысы второй группы служили контролем, им препарат не вводили. В течение всего периода наблюдений гибели мышей и крыс не наблюдалось, состояние животных было аналогично состоянию животных из контрольной группы. При патологическом изучении внутренних органов белых мышей и крыс первой группы каких-либо изменений в их структуре не наблюдалось. Расположение внутренних органов было правильным. Просвет трахеи и бронхов сво боден. Ткань легких розового цвета. Слизистая оболочка желудка и кишечника серо-розового цвета без изъявлений и кровоизлияний. Кап сула почки легко снималась, мозговое и корковое вещество хорошо различимы на разрезе. В течение всего периода наблюдений изменений в их поведении, общем состоянии и аппетите не наблюдалось, живот ные вели себя и поедали корм, аналогично животным из второй кон трольной группы. Следовательно, разработанное средство по степени воздействия на организм теплокровных животных относится к веще ствам малоопасным (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76).

3.3.4. Изучение раздражающего действия профмастита В первой серии опыта раздражающее действие профмастита определяли методом конъюнктивальных проб. Исследование проводи ли на кроликах и морских свинках, которым на конъюнктиву под верх нее веко правого глаза однократно нанесли одну каплю испытуемого средства (левый глаз служил контролем – 1 каплю стерильного изото нического раствора натрия хлорида). Через 15 минут не отмечали по мутнений роговицы, радужная оболочка без видимых изменений, хи мотоз отсутствует. Через 24-48 часов проводили повторные исследова ния у животных, не отмечали помутнений роговицы, радужная оболоч ка без видимых изменений, химотоз отсутствует.

Во второй серии опыта раздражающее действие профмастита определяли методом накожных аппликаций. Исследование проводили на морских свинках и беспородных белых мышах. После 20 накожных аппликаций изучаемого средства положительных реакций кожи (эри тема, пузырь, микро везикулы) не выявлено. Толщина кожной складки на месте нанесения препарата не увеличилась от исходного состоя ния.Таким образом, профмастит не обладает раздражающим воздей ствием на ткани в зоне его применения.

3.3.5. Изучение пленкообразующей способности профмастита Пленкообразующую способность профмастита определяли на коровах голштинской породы, находящихся в сухостое. Для этого профмастит наносили на соски вымени в период запуска животных, непосредственно после последней дойки. За животными вели непре рывное наблюдение, после чего установили, что через 5-7 минут на кожи соска вымени и в зоне соскового отверстия образовалась про зрачная голубая пленка.В дальнейшем каждые 5 дней проводилось наблюдение за сосками вымени животных и проверка наличия пленки на сосках коров.

В процессе систематического наблюдения было установлено, что средство профмастит имеет хорошую устойчивость на сосках ко ров и может обеспечить надежную защиту на протяжении почти всего периода сухостоя, вплоть до отела.

3.3.6. Изучение общей микробной обсеменнности секрета молоч ной железы и кожи сосков коров после применения профмастита Общую микробную обсеменнность секрета молочной железы и кожи сосков после применения профмастита изучали на 10 клинически здоровых коровах, находящихся в процессе перевода в сухостой. После последней дойки у животных брали пробы секрета из всех долей, а также смывы с соска вымени для подсчета общей микробной обсеме ннности секрета вымени и кожи сосков. Затем наносили профмастит на соски правой половины вымени, соски левой половины вымени не обрабатывали, они служили контролем. Спустя неделю после нанесе ния средства на соскибрали пробы секрета вымени и смывы с сосков для подсчета общей микробной обсеменнности (табл. 2).

Из полученных нами данных видно, что в начале опыта обсеме ненность бактериями кожи сосков (31,2±0,321 и 31,2±0,329 тыс. бакте рий/см2) и секрета вымени (196,85±0,708 и 197,7±0,901 тыс. бакте рий/мл) правой и левой половины вымени у коров была приблизитель но одинаковой. После обработки сосков профмаститом их бактериаль ная обсемененность снижалась до 2,9±0,27 тыс. бактерий/см 2, т.е. более чем в 10 раз. А бактериальная обсеменнность секрета вымени снижа лось до 130,55±0,515 тыс. бактерий/мл, т.е. на 66%.

Таблица Общая микробная обсемененность секрета вымени и кожи сосков коров Бактериологическая обсеменн ность Количество Группа Секрета вымени Кожи сосков проб (103 бакте- (103 бакте рий/см2) рий/мл) I опытная (до об 196,85±0,708 31,2±0, работки) II опытная (после 130,55±0,515* 2,9±0,27* обработки) Контрольная (соски не обраба- 197,7±0,901 31,2±0, тывали) *Р 0, 3.3.7. Изучение профилактической эффективности профмастита Для оценки профилактической эффективности средства в пери од сухостоя у коров провели производственный опыт на 300 животных, которых разделили на 3 равные группы: опытную, положительный контроль и отрицательный контроль по 100 животных в каждой. Коро вам опытной группы во время запуска, непосредственно после послед него доения,наносили профмастит, после чего коров определяли в группу сухостоя. Коровам группы положительный контрольнаносили ProfilacDryOff, после чего коров определяли в группу сухостоя. Жи вотных группы отрицательный контроль определяли в сухостой без средств фармакопрофилактики. У подопытных животных трех групп на 15-е сутки сухостойного периода и после отела исследовали молоч ную железу клиническими методами и постановкой тест-реакции на скрытую форму мастита (табл. 3).

В итоге, при использовании профмастита заболеваемость коров маститом снижается до 10% или в 3,4 раза, по сравнению с отрица тельным контролем или в 1,6 раза по сравнению с положительным контролем, где использовали средство ProfilacDryOff.

Таблица Профилактическая эффективность профмастита в период сухо стоя Выявлено заболевших маститом коров На 15-е сутки За весь период сухостоя Клиниче- Клиниче Группа Субклиниче- Субклиниче ский ский ский мастит ский мастит мастит мастит К-во % К-во К-во % К-во % % Опытная 0 0 4 4 6 6 4 Положи тельный 4 4 4 4 10 10 6 контроль Отрица тельный 18 18 8 8 24 24 10 контроль 3.4. Фармакология и применение сангвимаста 3.4.1. Физико-химические свойства сангвимаста В результате анализа соответствующих литературных данных и разносторонних исследований при подборе компонентов и определе ния их оптимальных доз и соотношения, мы в соавторстве разработали препарат для лечения мастита у коров, который представляет собой гель от светло-оранжевого до оранжевого цвета, не имеет запаха, не горюч, не пожароопасен. Водородный показатель 6,6-6,8. Активным компонентом разработанного препарата является смесь бисульфатов двух близких по структуре алкалоидов – сангвинарина и хелеритрина.

При изучении стабильности препарата установлено, что срок годности препарата – 3 года.

3.4.2. Антимикробная и антимикозная активность сангвимаста Антимикробные свойства препарата проверяли методом диффу зии в агар с использованием лунок и последовательных серийных раз ведений в жидкой питательной среде.

Сангвимаст обладает выраженным бактерицидным и бактерио статическим действием с концентрацией действующего вещества 312, мкг/мл по отношению к культуре Staphylococcus epidermidis, а также с концентрацией действующего вещества 625 мкг/мл по отношению к культуре Staphylococcus aureus, Streptococcus haemolyticus и Escherichiacoli. МБцК для Klebsiella pneumonia составила 1250 мкг/мл, а МБсК – 625 мкг/мл.

Чувствительность выявленной микрофлоры в вымени коров к антибактериальным препаратам устанавливали in vitro при помощи следующих методов: диффузии в агар с использованием лунок и мето дом дисков. Анализируя полученные результаты исследований по определению чувствительности условно-патогенной микрофлоры к лекарственным препаратам, устанавливаем, что наиболее активно пре пятствуют росту микрофлоры такие антибиотики, как цефазолин, ци профлоксацин, левомецитин, гентамицин;

из противомаститных пре паратов наиболее эффективными оказались такие как ваккамаст, гама рет и разработанный нами сангвимаст.

3.4.3. Изучение токсичности сангвимаста В первой серии опыта белым мышам препарат вводили перо рально в дозах от 0,1 до 0,5мл, белым крысам от 1 до 3мл. Также нами была сформирована контрольная группа мышей и крыс, которым пре парат не вводили.

Во второй серии опыта белым мышам и белым крысам препа рат вводили подкожно в дозах 0,5-1мл и 5-10мл соответственно. Кон трольной группе лабораторных животных препарат не вводили.

В течение последующих 14 дней за животными вели клиниче ское наблюдение, обращая внимание на общее состояние, аппетит, по веденческие реакции, картину интоксикации, гибель мышей и крыс.

В результате проведенных исследований установлено, что даже максимально возможная доза введения препарата в течение всего пе риода наблюдения не вызывала гибели и острой интоксикации у под опытных животных.

Для определения хронической токсичности препарата использо валась беспородные белые мыши и белые крысы. Мышам первой группы испытуемый препарат вводили в желудок в дозе 0,3 мл на введение в течение 14 дней. Крысам первой группы испытуемый пре парат вводили в желудок в дозе 2 мл на 1 введение в течение 14 дней.

За животными вели пристальное наблюдение, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит. По истечению 14 дней после последнего введения препарата 5 мышей и 3 крысы было подвергнуто эвтаназии и вскрыто, было изучено патологическое состояние внутренних органов и взята кровь на гематологическое исследование. За остальными мы шами и крысами продолжали вести наблюдение в течение 3 недель, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит. Мыши и крысы второй группы служили контролем, им препарат не вводили. Условия содержания и кормления были аналогичны с животными первой груп пы. В течение всего периода наблюдений гибели мышей и крыс не наблюдалось, состояние животных было аналогично состоянию жи вотных из контрольной группы.

При патологическом изучении внутренних органов белых мы шей и крыс первой группы каких-либо изменений в их структуре не наблюдалось. Расположение внутренних органов было правильным.

Просвет трахеи и бронхов свободен. Ткань легких розового цвета. Сли зистая оболочка желудка и кишечника серо-розового цвета без изъяв лений и кровоизлияний. Капсула почки легко снималась, мозговое и корковое вещество хорошо различимы на разрезе.

При анализе гематологических показателей крови крыс установ лено, что при применении сангвимаста наблюдается незначительное повышение эритроцитов и гемоглобина. Гематологические показатели крови крыс в опытных группах не превышали физиологических норм.Следовательно, разработанный препарат по степени воздействия на организм теплокровных животных относится к веществам мало опасным (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76).

3.4.4. Изучение раздражающего и сенсибилизирующего действия сангвимаста В первой серии опыта раздражающего действия сангвимаста определяли методом конъюнктивальных проб. Исследование проводи ли на кроликах и морских свинках, которым на конъюнктиву под верх нее веко правого глаза однократно нанесли одну каплю испытуемого средства (левый глаз служил контролем – 1 каплю стерильного изото нического раствора натрия хлорида). Через 15 минут и спустя 24- часов не отмечали помутнений роговицы, радужная оболочка без ви димых изменений, химотоз отсутствует.

Во второй серии опыта раздражающего действия сангвимаста определяли методом накожных аппликаций. Исследование проводили на морских свинках и беспородных белых мышах, которым на протя жении 4 недель 5 раз в неделю изучаемое средство наносили на боко вую поверхность туловища. После 20 накожных аппликаций изучаемо го средства положительных реакций кожи (эритема, пузырь, микро везикулы) не выявлено. Толщина кожной складки на месте нанесения препарата не увеличилась от исходного состояния.

Изучение сенсибилизирующего действия сангвимаста определя ли методом максимального сенсибилизирующего воздействия. Иссле дование проводили на морских свинках, которым в выстриженные участки внутрикожно инъецировали по 0,1 мл растворов. Спустя 24, и 72 часа положительных реакций кожи (отек, эритема, пузырь) не вы явлено.Таким образом, препарат сангвимаст не обладает раздражаю щим и сенсибилизирующим воздействием на ткани в зоне его приме нения.

3.4.5. Влияние сангвимаста на молочную железу коров Влияние сангвимаста на молочную железу коров осуществля лось на 5 клинически здоровых коровах во вторую фазу лактационного периода. Для этого внутрицистернально в соски правой половины вы мени вводили 10 мл препарата сангвимаст, соски левой половины вы мени служили контролем, в них вводили 10 мл физиологического рас твора. После введения сангвимаста на 3, 6, 9, 12, 24 и 48 часов учиты вали состояние вымени, а также брали пробы молока для подсчета ко личества соматических клеток. В ходе исследований проб молока на соматические клетки, нами отмечено, что в долях, в которые вводили сангвимаст и физиологический раствор, наблюдалось незначительное повышение соматических клеток уже на 3 час после введения. Спустя 48 часов после введения сангвимаста число соматических клеток сни жалось до 54,86±2,347 тыс./мл и было практически равно контролю, где число соматических клеток составляло 55,7±2,376 тыс./мл. То есть за весь промежуток исследований число соматических клеток в опыт ной и контрольной группе не превышало физиологической нормы. Та ким образом, сангвимаст не оказывает раздражающего действие на молочную железу коров, и может быть рекомендован для интраци стернального введения. Оптимальная лечебная доза сангвимаста при маститах коров составляет 10 мл на 1 введение повторное введение через 24 часа, курс лечения 3-4 введения.

3.4.6. Применение сангвимаста для лечения маститов у коров Опыт по определению терапевтической эффективности сангви маста проводили в двух повторностях. В первой серии опыта, по определению терапевтической эффективности сангвимаста, было за действовано 109 коров с различными формами мастита. Животных разделили на 2 группы, по принципу пар-аналогов, на опытную и кон трольную. Опытной группе животных после доения внутрицистер нально вводили препарат сангвимаст. Контрольной группе животных после доения внутрицистернально вводили применяемый в хозяйстве препарат Ваккамаст (табл. 4).

Таблица Терапевтическая эффективность сангвимаста в сравнении с антибактериальным препаратом Ваккамаст Пролечено Крат Срок ность Терапевтиче Форма лече- введе К-во К-во Группа ская эффек мастита ния, ния ко- до тивность, % дней препа ров лей рата серозный 19 22 1,4 1,4 катараль 19 21 1,9 1,9 94, ный Опыт гнойно катараль- 16 20 3,1 3,1 87, ный серозный 20 22 2,4 2,4 катараль 19 22 2,9 2,9 78, Кон- ный троль гнойно катараль- 16 19 3,2 3,2 68, ный Таким образом, при лечении серозного мастита у коров сангви мастом терапевтическая эффективность составляла на 5% больше, а кратность введения препарата на 1 введения меньше, чем у Ваккама ста. При лечении катарального мастита у коров сангвимастом терапев тическая эффективность составляла на 15,8% больше, а кратность вве дения препарата на 1 введения меньше, чем у Ваккамаста. При лечении гнойно-катарального мастита у коров сангвимастом терапевтическая эффективность составляла на 18,8% больше, а кратность введения пре парата на 0,1 введения меньше, чем у Ваккамаста. Срок лечения сероз ного и катарального мастита у коров сангвимастом на 1 день меньше, чем при лечении Ваккамастом. Срок лечения гнойно-катарального ма стита у коров сангвимастом на 0,1 день меньше, чем при лечении Вак камастом.

Во второй серии опыта, опытной группе животных после дое ния внутрицистернально вводили препарат сангвимаст. Контрольной группе животных после доения внутрицистернально вводили препарат Септогель (табл. 5).

Таблица Терапевтическая эффективность сангвимаста в сравнении с Септогелем Пролечено Крат Срок ность Терапевтиче Форма лече- введе К-во К-во Группа ская эффек мастита ния, ния ко- до тивность, % дней препа ров лей рата серозный 20 22 1,4 1,4 катараль 18 21 2 2 94, ный Опыт гнойно катараль- 16 21 3,1 3,1 87, ный серозный 19 22 2,5 2,2 94, катараль 19 21 3,1 3,5 89, Кон- ный троль гнойно катараль- 15 21 4,1 4,7 73, ный Таким образом, при лечении серозного мастита у коров сангви мастом терапевтическая эффективность составляла на 5,3% больше, а кратность введения препарата на 1,1 введения меньше, чем у Септоге ля. При лечении катарального мастита у коров сангвимастом терапев тическая эффективность составляла на 4,9% больше, а кратность вве дения препарата на 1,1 введения меньше, чем у Септогеля. При лече нии гнойно-катарального мастита у коров сангвимастом терапевтиче ская эффективность составляла на 14,2% больше, а кратность введения препарата на 1 введение меньше, чем у Септогеля. Срок лечения се розного мастита у коров сангвимастом на 0,8 дня меньше, чем при ле чении Септогелем. При лечении катарального мастита сангвимастом срок лечения коров на 1,5 дня меньше, чем при лечении Септогелем.

Срок лечения гнойно-катарального мастита у коров сангвимастом на день меньше, чем при лечении Септогелем.

Проведенный сравнительный анализ гематологических и био химических исследований сыворотки крови коров показал, что после лечения гнойно-катарального мастита сангвимастом наблюдалось снижение лейкоцитов на 57%, что на 7,8% больше по сравнению с вак камастом и на 22,3% по сравнению с септогелем и снижение палочко ядерных нейтрофилов на 6%. В сыворотки крови наблюдалось повы шение фракций альбуминов на 6,8%, -глобулинов на 3,9% и глобулинов на 5,4% и снижение фракции -глобулинов на 10,5%. Т.е.

после применения сангвимаста все показатели крови коров приходили в пределы физиологической нормы.

Таким образом, применение препарата сангвимаст при лечении маститов способствует уменьшению сроков лечения животных и уско ряет нормализацию некоторых показателей крови животных.

ВЫВОДЫ 1. Заболеваемость коров маститом в некоторых хозяйствах Краснодарского края, в среднем, составляет 39,3%. Отмечается тен денция увеличения мастита с 39,0% в 2010 г. до 39,6% в 2012 г. Клини чески выраженный мастит составляет в среднем 25,7% от общего числа заболевших маститом коров, а на долю субклинического мастита при ходится в среднем 74,3%. Соотношение клинически выраженного ма стита к субклиническому составляет 1:3. В период лактации мастит проявляется у 49% коров, в период запуска у 17%, а в период сухостоя у 34% животных. В период сухостоя заболеваемость коров маститом приходится на первые 2 недели сухостоя.

2. У коров, больных маститом, из секрета вымени изолировали 17 видов бактерий и 4 вида гриба. В монокультуре микрофлору выде ляли у 31,5% коров: E. coli;

St. epidermidis;

C. freundi;

Sh. dysenteriae;

St. aureus;

St. hyicus spp. chromogenes;

Str. agalactiae;

St. lentus;

St. in termedius. У 61,1% коров больных маститом микрофлора выделялась в ассоциациях. Наиболее часто встречались следующие ассоциации бактерий: St. epidermidis + St. aureus + Str. agalactiae + Str. haemolyticus;

E. coli + Str. agalactiae;

Str. agalactiae + St. epidermidis;

St. epidermidis + St. aureus + Str. agalactiae и другие. А у 7,4% животных в секрете пора женных долей вымени, как правило, больных субклиническим и сероз ным маститом микрофлора не выделялась. Гемолитической активно стью обладали 63,8 % культур, были патогенны для лабораторных жи вотных 77,1% культур.

3. При определении острой и хронической токсичности нами установлено, что предложенный препарат профмастит согласно приня той классификации химических веществ относится к малотоксичным препаратам (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76), не обладает раз дражающим воздействием на ткани в зоне его применения. При нане сении профмастита на соски коров он обеспечивает надежную защиту соска на протяжении практически всего периода сухостоя, вплоть до отела.

4.При применении профмастита в период сухостоя заболевае мость коров маститом снижается до 10% или в 3,4 раза, по сравнению с отрицательным контролем или в 1,6 раза по сравнению с положитель ным контролем, где использовали средство ProfilacDryOff. А экономи ческая эффективность профмастита на рубль затрат составляет 9,3 руб ля.

5.При определении острой и хронической токсичности препара та сангвимаст установлено, что он относится к малотоксичным препа ратам (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76), не обладает раздража ющим и сенсибилизирующим воздействием на ткани в зоне его приме нения. При введении сангвимаста в молочную железу здоровой коро вы, он оказывает слабо раздражающее действие на молочную железу коров, которое проходит спустя 24 часа после введения препарата, и может быть рекомендован для интрацистернального введения.

6.Наиболее оптимальная терапевтическая доза сангвимаста для лечения мастита у коров – 10 мл на 1 введение повторное введение через 24 часа, курс лечения 3-4 введения. При лечении серозного ма стита у коров сангвимастом терапевтическая эффективность составля ла 100% при кратности введения препарата 1,4 введения, а экономиче ская эффективность на рубль затрат при лечении серозного мастита была 13,74 руб. При лечении катарального мастита у коров сангвима стом терапевтическая эффективность составляла 94,5% при кратности введения препарата 2 введения. Экономическая эффективность препа рата сангвимаст при лечении катарального мастита на рубль затрат составляла 10,79 руб. При лечении гнойно-катарального мастита у ко ров сангвимастом терапевтическая эффективность была 87,5% при кратности введения препарата 3,1 введение, а экономическая эффек тивность на рубль затрат составляла 9,16 руб.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1.Для профилактики мастита в сухостойном периоде, в конце за пуска проверять молочную железу на клинический и скрытый мастит.

А также в этом периоде после последней дойки коровы обрабатывать соски вымени животного препаратом профмастит, методом погруже ния соска в пластиковый стаканчик с препаратом.

2.Для лечения мастита у коров использовать новый препарат санг вимаст интрацистернально в дозе 10 мл 3-4 раза с интервалом 24 часа в зависимости от тяжести заболевания.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Решетка М.Б.Распространение мастита у коров и разра 1.

ботка средства профилактики мастита в период сухостоя / Ре шетка М.Б. // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ) [Электронный ресурс]. – Красно дар: КубГАУ, 2013. – №04(88). – IDA [article ID]: 0881304059.

– Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2013/04/pdf/59.pdf, 0, у.п.л., импакт-фактор РИНЦ=0, Турченко А.Н., Коба И.С., Новикова Е.Н., Решетка М.Б., 2.

Горпинченко Е.А. Пробиотики в акушерско-гинекололгической практике ветеринарной медицины// Актуальные проблемы со временной ветеринарии: Материалы международной научно практической конференции, посвященной 65-летию ветеринар ной науки Кубани, ч.1 – Краснодар, 2011. – 95-98 с.

Решетка М.Б., Турченко А.Н., Коба И.С. Распространение 3.

и этиология мастита у коров // Актуальные вопросы ветеринар ной фармакологии и фармации: Материалы меж. Науч.практ.

Конф. - Краснодар, 2012. – 113-115 с.

Турченко А.Н., Коба И.С., Новикова Е.Н., Решетка 4.

М.Б., Горпинченко Е.А. Перспектива решения акушерско гинекологической патологии у коров на промышленной ферме/ Труды Кубанского государственного аграрного университета 1(34), 2012 – 194-196с.

Решетка М.Б., Коба И.С.Распространение и профилактика 5.

мастита в сухостойном периоде у коров //Современные про блемы вете-ринарного акушерства и био-технологии воспроиз ведения животных: материалы между-нар. науч.-практ. конф., посвещ. 85-летию со дня рожд. проф. Д.А. Черемисинова и 50 летию созд. Воронежской школы вет. акушер., 18-19 октября 2012 г., Воронеж, 397-398 с.

Коба И.С., Решетка М.Б. Лечение мастита у коров без ан 6.

тибиотиков // Эффективное животноводство №3(89) март – 22-23 с.