Фармакология и применение гуанидинового производного роксацина
На правах рукописи
ЛИФЕНЦОВА МАРИЯ НИКИТИЧНА ФАРМАКОЛОГИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ ГУАНИДИНОВОГО ПРОИЗВОДНОГО РОКСАЦИНА 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Краснодар - 2013
Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (ФГБОУ ВПО Кубанский ГАУ).
Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Антипов Валерий Александрович
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, главный ветеринарный врач птицефабрики «Братковская» Богосьян Адам Аведисович доктор биологических наук, профессор, научный сотрудник ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии Крюков Николай Иванович
Ведущая организация: ГНУ Северо-Кавказский зональный научно-исследо вательский ветеринарный институт Россельхозакадемии
Защита диссертации состоится «05» июля 2013 г. в 1000 часов на засе дании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Ку банский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Крас нодар, ул. Калинина, 13.
Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубан ский ГАУ» http://www.kubsau.ru «30» мая 2013 г. и официальном сайте ВАК РФ – http://vak.ed.gov.ru.
Автореферат разослан « » июня 2013 г.
Ученый секретарь диссертационного совета Родин И.А.
1.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. На сегодняшний день перед ветеринарной наукой постав лена задача по обеспечению разработки и внедрения в практику более современных мето дов и средств профилактики и лечения болезней сельскохозяйственных животных, а также поиску эффективных ветеринарных препаратов.
В последние годы наблюдается значительное увеличение заболеваемости живот ных в связи со снижением эффективности традиционных методов терапии, роста устойчи вости патогенных микроорганизмов к применяемым лекарственным средствам (Х.З. Гафаров, 2002).
Появление сульфаниламидов, первых системных препаратов антимикробного действия, положило начало химиотерапии инфекционных заболеваний человека и живот ных. Последующее открытие антибиотиков, казалось бы, навсегда решило проблему мно гих из них. Однако с течением времени при использовании антибиотиков, сульфанилами дов, нитрофуранов и других антимикробных препаратов выявлялось все больше негатив ных сторон их применения, из которых главными являются: высокая токсичность, побоч ные действия, отдаленные последствия, а также резистентность к ним микроорганизмов, являющаяся следствием высокой способности последних к мутациям (С.Н. Козлов, 1994).
Поверхностно-активные вещества представляют большой интерес для здраво охранения и ветеринарии, так как лекарственная устойчивость к ним развивается медлен но, токсичность их низкая, действие комплексное (антимикробное, химиотерапевтическое, местноанестезирующее, репаративное, противовоспалительное, фунгицидное, противови русное, иммуномодулирующее). Наилучшими в этом отношении являются катионноак тивные детергенты. Благодаря сочетанию поверхностной активности и бактерицидных свойств они перспективны для применения в фармацевтической технологии (Т.И. Исто мина, 1972;
В.А. Березовский, 1983;
Н.П. Баркова, 1989, 1990;
С.У. Крейнгольд, 1998).
Одним из представителей группы катионных поверхностно-активных веществ яв ляется полигексаметиленгуанидин гидрохлорид. В связи с этим значительный практиче ский интерес представляет определение фармако-токсикологических свойств и изучение терапевтической эффективности нового отечественного препарата на основе полигексаме тиленгуанидина гидрохлорида – роксацина.
Цель и задачи исследования. Цель данной работы состояла в изучении эффек тивности препарата роксацин и его внедрение в ветеринарную практику для лечения и профилактики различных патологий у сельскохозяйственных животных, а также для дез инфекции объектов ветеринарного надзора.
В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:
1. Определить основные фармакологические и токсикологические свойства пре парата роксацин;
2. Изучить эффективность препарата роксацин при дезинфекции животноводче ских объектов;
3. Изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата роксацин при наиболее распространенных заболеваниях сельскохозяйственных животных.
Научная новизна работы. В результате проведенных исследований впервые бы ли изучены основные фармакологические и токсикологические свойства препарата рокса цин, который представляет собой 20 %-ный водный раствор субстанции гидрохлорида по лигексаметиленгуанидина. Установлено, что изучаемый препарат обладает выраженным антибактериальным и фунгистатическим действием.
Доказана эффективность дезинфекции воздушной среды животноводческих по мещений препаратом роксацин в виде аэрозольных обработок. Изучена терапевтическая эффективность препарата роксацин при бронхопневмониях, эндометритах, маститах, конъюнктиво-кератитах, а также для проведения первичной хирургической обработки ран животных.
Теоретическая и практическая ценность работы. Данные полученные при проведении токсикологических, фармакологических и клинических исследований дают теоретическую базу ветеринарным специалистам и позволяют рекомендовать в практику ветеринарной медицины новый, эффективный и безопасный для использования препарат роксацин.
Разработаны и предложены в практику животноводства схемы применения пре парата роксацин в целях терапии и профилактики различных заболеваний сельскохозяй ственных животных.
На основании полученных результатов составлено мультимедийное пособие «По лигуанидиновые антисептические средства» (свидетельство о государственной регистра ции базы данных № 2012621079 от 18.10.2012, автор Лифенцова Мария Никитична), кото рое может быть использовано в специальных курсах при обучении студентов.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Результаты фармакологической и токсикологической оценки препарата роксацин.
2. Результаты исследований препарата роксацин для дезинфекции объектов ветери нарного надзора.
3. Результаты изучения эффективности препарата роксацин при профилактике и ле чении различных заболеваний сельскохозяйственных животных.
Апробация результатов работы. Основные результаты работы доложены и об суждены на ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподава тельского состава и аспирантов КубГАУ (Краснодар 2009-2012 гг.);
на V Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромыш ленного комплекса», посвященной 90-летию КубГАУ (Краснодар, 2011);
на международ ной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветерина рии», посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (Краснодар, 2011);
на I Между народной научно-практической интернет-конференции «Современные направления в диа гностике, профилактике и терапии заболеваний животных» (Ставрополь, 2011);
на межре гиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной фар макологии и фармации», посвященной 90-летию КубГАУ (Краснодар, 2012).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 2 в издании рекомендованном ВАК РФ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 156 страницах ма шинописного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, ма териалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и списка литературы. В диссертации 35 таблиц, рисунка. Всего использовано 197 литературных источников, в том числе, 49 зарубежных авторов.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.
Материалы и методы исследований 2.1.
Работа выполнялась с 2009 по 2013 год на базе кафедры терапии и фармакологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего про фессионального образования «Кубанского государственного аграрного университета».
В ходе экспериментальных исследований были использованы клинические, фар макологические, токсикологические, гинекологические и микробиологические методы.
Для более детального изучения особенностей течения болезней в различные сро ки развития патологического процесса, проводили общий и биохимический анализ крови животных в ФГБУ Краснодарская межобластная ветеринарная лаборатория при помощи автоматического гематологического анализатора фирмы MINDRAY BC-2800 vet для вете ринарии и автоматического биохимического анализатора Vitalab Flexor E.
Определение антибактериальных свойств химиотерапевтических средств in vitro изучали методом серийных разведений в жидкой питательной среде - бульоне Хоттингера.
В опыте использовали культуры Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, E.coli A-20, Bacteria citrobacter, Pseudomonas aerugenosa, Enterobacter agglomerans, Proteus mirabilis.
При определении антимикотического действия препарата роксацин в качестве пи тательной среды для плесневых грибов были выбраны плотные питательные среды агар Чапека и сусловый агар. Дрожжи высевали на среду Сабуро. Испытания проводили по от ношению к грибам Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Candida albicans, Fusarium sp., Mucor sp., Penicillium sp., Cephalosporium sp. Предва рительный учет колоний дрожжей и плесневых грибов осуществляли через 3-ое суток.
Препарат вносили непосредственно при посеве в концентрации от 0,1 % до 0,0001 %.
Общетоксические свойства препарата роксацин оценивали согласно рекоменда ций: «Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармаколо гических средств» (Е.В. Арзамасцев, 1997), «Руководство по экспериментальному (докли ническому) изучению новых фармакологических веществ» (Р.У. Хабриев, 2005), «Мето дические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ве теринарии и животноводстве» (Л.П. Маланин с соавт., 1988).
Токсикологические исследования были проведены на 75 белых нелинейных мы шах массой 18,0-20,0 г, 90 белых беспородных крысах массой 150,0-160,0 г и 30 белых беспородных крысах массой 180,0-200,0 г, 24 кроликах породы шиншилла массой 2-3 кг и 5 коровах.
Изучение острой токсичности препарата роксацин было проведено в трех сериях:
в первой серии опытов токсикологию препарата изучали на белых мышах при внутриже лудочном его введении, во второй – при подкожном назначении белым крысам и в третьей препарат вводили интрацистернально коровам. Расчет ЛД50 проводили по методу Крбе ра (1931).
Субхроническую токсичность препарата роксацин изучали на 50 белых мышах, поделенных на 10 равных групп, препарат роксацин испытывали в дозах 0,45;
0,9 и 2,25 мл/кг при однократном, пятикратном и десятикратном введении.
За всеми животными вели клинические наблюдения на протяжении всего опыта (14 дней), обращая внимание на общее состояние, поведенческие реакции, аппетит, дина мику прироста массы животных, время и характер интоксикации, ее тяжесть, обрати мость, сроки гибели животных. Учитывали количество павших и выживших животных.
Погибших мышей вскрывали и регистрировали патологоанатомические изменения в орга нах и тканях. Выживших животных в конце опыта убивали и также подвергали патолого анатомическому исследованию. Умерщвление опытных животных проводили методом декапитации через 48 часов после последнего введения препарата и непосредственно пе ред этим определяли массу тела. Сразу после декапитации брали кровь, проводили вскры тие мышей и определяли массу печени, почек (суммарную) и селезенки. Во взятых пробах крови определяли количественное содержание эритроцитов, лейкоцитов, уровень содер жания гемоглобина, рассчитывали лейкоцитарную формулу.
Раздражающее действие препарата роксацин изучали при наружном применении на конъюнктиву глаз и внутрикожном введении 24 белым кроликам по методике В.В. Га цура (1974).
Выявление кожно-резорбтивного действия препарата роксацин проводилось по методике И.В. Саноцкого (1970) методом погружения хвоста в раствор препарата.
Влияние препарата роксацин на течение воспалительного процесса и, в частности, на регенерацию тканей, изучали по скорости заживления экспериментальных ран у белых крыс после обработки их препаратом. О ходе заживления ран судили визуально с реги страцией изменений раневой поверхности. За срок окончательного заживления экспери ментальных ран у подопытных животных принимали время полного покрытия раневого дефекта эпителием.
Укорочение срока заживления ран (УСЗР) рассчитывали в процентах по формуле:
х 100, где Т1 – время заживления ран у животных контрольной группы, Т2 – время заживления ран у животных опытной группы.
Бактериальную и грибковую контаминацию воздуха профилактория определяли с помощью метода седиментации (метод Коха), который заключается в оседании микро флоры (находящейся в воздухе), под действием силы тяжести, на поверхность питатель ной среды.
Для определения общего содержания бактерий и грибов в 1м3 воздуха производи ли расчет общего микробного числа (ОМЧ) согласно формуле, предложенной В.Л. Оме лянским:
где а – число выросших в чашках колоний (среднее из двух);
S – площадь чашки Петри, см2;
Т – время экспозиции, мин;
100 – перерасчет площади чашки Петри на 100 см2;
5 – время экспозиции по Омелянскому, мин;
100 – перерасчет на 1 м3 воздуха.
Профилактическую аэрозольную дезинфекцию воздуха осуществляли в отсут ствии животных в закрытом помещении согласно Правилам проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора (Утв. Мин. с/х РФ от июля 2002г.).
Эффективность аэрозольной дезинфекции с использованием препарата роксацин оценивали по принципу снижения в воздухе контаминации бактерий и грибов после обра ботки через 30, 60 и 120 минут экспозиции.
Профилактическую эффективность препарата роксацин при бронхопневмонии те лят с использованием аэрозольного метода введения изучали на клинически здоровых те лятах.
В ходе эксперимента регистрировали сохранность и заболеваемость телят. Учи тывали изменения роста телят в динамике (с двух до пяти месяцев). Для этого проводили индивидуальное взвешивание в начале (2 месяца), в четырех месячном возрасте и в конце опыта (5 месяцев).
До проведения и по окончании курса лечения у 5 телят каждой группы отбира лись пробы крови для морфологических и биохимических исследований.
Терапевтическую эффективность 2 %-ного водного раствора препарата роксацин при лечении острой бронхопневмонии с использованием аэрозольного метода введения изучали на 20 телятах 2-3-х месячного возраста.
Телятам опытной группы применяли схему лечения хозяйства + аэрозольно 2 % ный водный раствор препарата роксацин из расчета 5 мл/м3.
Телятам контрольной группы применяли схему лечения хозяйства + аэрозольно препарат йодинол из расчета 5 мл/м3.
Эффективность схем лечения оценивали по общему состоянию животных, про должительности лечения (до полного клинического выздоровления). За всеми животными вели клинические наблюдения в течение всего срока назначения препарата. До проведе ния и по окончании курса лечения у 5 животных каждой группы отбирались пробы крови для морфологических и биохимических исследований.
Для изучения терапевтической эффективности и определения оптимальных доз применения препарата роксацин при лечении острых послеродовых эндометритов у коров были сформированы две группы.
Животным контрольной группы применяли схему лечения хозяйства: препарат эндометрамаг-био, утеротон, карток.
Животным опытной группы применяли 0,1 %-ный водный раствор препарата рок сацин, утеротон, карток. Препараты применяли в соответствии с наставлениями по их применению.
Терапевтическую эффективность схем лечения оценивали по общему состоянию животных, продолжительности лечения (до полного клинического выздоровления), про должительности сервис-периода. До проведения и по окончании курса лечения у 5 живот ных каждой группы отбирались пробы крови для морфологических и биохимических ис следований.
Опыт по определению терапевтической эффективности препарата роксацин при лечении острого серозного мастита у коров проводили на 30 животных, разделенных на три группы: две опытные и контрольная.
Животным первой опытной группы интрацистернально вводили 0,1 %-ный вод ный раствор препарата роксацин в дозе 15 мл на одно введение с интервалом 24 часа.
Второй опытной группе аналогичным способом вводили 10 мл 0,1 %-ного водно го раствора препарата роксацин на одно введение с интервалом 24 часа.
Животным третьей (контрольной) группы применяли препарат мастисан-А в со ответствии с наставлением по его применению.
До проведения и по окончании курса лечения у 5 животных каждой группы от бирались пробы крови для морфологических и биохимических исследований.
Результаты лечения оценивали по количеству и проценту вылеченных животных через 3 и 5 дней от начала лечения.
Терапевтическую эффективность препарата роксацин при лечении серозно катарального конъюнктиво-кератита изучали на 18 больных телятах.
Телятам первой опытной группы, предварительно смочив препаратом роксацин стерильную марлевую салфетку в концентрации 0,1 %, производили обработку уголков глаз и век, удаляя экссудат и корочки. Затем проводили инстилляцию 1-2 капель препара та в конъюнктивальную полость каждого глаза. Обработку производили 2 раза в день.
Телятам второй опытной группы проводили ретробульбарную новокаиновую блокаду по В.Н. Авророву 1 раз с интервалом в 3 дня.
Телят третьей группы лечили соответственно схеме хозяйства: 1 % -ную тетра циклиновую мазь закладывали в конъюнктивальный мешок 2 раза в день.
До проведения и по окончании курса лечения у всех животных отбирались пробы крови для морфологических и биохимических исследований.
Для оценки эффективности применения препарата роксацин при первичной хи рургической обработке ран у крупного рогатого скота были сформированы три группы животных по принципу пар-аналогов. Коров в возрасте 3 – 4-х лет, разделили на три груп пы по 15 животных в каждой. Животные на момент проведения опыта были клинически здоровы и содержались в идентичных условиях. Животным в области бедра с латеральной стороны готовили операционное поле по Пирогову, затем под местной инфильтрационной анестезией по трафарету наносили резаные раны в горизонтальном направлении, площа дью 400 мм2. Скальпелем с ограничителем заданной глубины (до 3 см) рассекали кожу, фасции и мышцы. После остановки кровотечения рану инфицировали методом орошения, 2 мл взвеси из суточной культуры патогенного Staphylococcus aureus (1 мл взвеси содер жал 1 млрд. микробных тел). Через 48 часов в ране наблюдалось выраженное острое гной ное воспаление.
Животным первой опытной группы первичную хирургическую обработку ран проводили согласно схеме: инфицированные резаные раны обрабатывали 0,2 %-ным вод ным раствором препарата роксацин через 6-12 часов после травмы 2 раза в сутки.
Животным второй опытной группы первичную хирургическую обработку ран проводили согласно схеме: инфицированные резаные раны обрабатывали 0,5 %-ным вод ным раствором декаметоксина через 6-12 часов после травмы 2 раза в сутки.
Животные третьей группы служили контролем. Инфицированные раны им обра батывали согласно схеме применяемой в хозяйстве – раствор фурацилина в концентрации 1:5000 через 6-12 часов после травмы 2 раза в сутки.
У всех групп животных регистрировали характер заживления ран и средние сроки заживления (в сутках). При этом сроки заживления ран определялись видом раны, харак тером повреждения тканей, исходным состоянием организма и временем проведения пер вично-хирургической обработки и ее качеством.
Расчет экономической эффективности проводили согласно Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденную Департамен том ветеринарии МСХ РФ 21 февраля 1997 г.
Все варьирующие количественные признаки результатов исследований подверга лись статистической обработке, с проверкой достоверности результатов с помощью кри терия Стьюдента и уровня значимости.
Результаты исследований 2.2.
2.2.1. Изучение антимикробной и фунгицидной активности препарата роксацин При определении чувствительности к противомикробным препаратам некоторых микроорганизмов (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, E.coli A-20, Bacteria citrobacter, Pseudomonas aerugenosa, Enterobacter agglomerans, Proteus mirabilis) установле на их высокая резистентность к тетрациклину, пенициллину, мономицину, эритромицину, неомицину. В тоже время наибольшую чувствительность они проявляли к роксацину, ле вомицетину и фурацилину. Следовательно, препарат роксацин обладает выраженной ан тимикробной активностью в отношении как грамотрицательных, так и грамположитель ных микроорганизмов.
При изучении антимикотической активности препарата роксацин в отношении грибов Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Can dida albicans, Fusarium sp., Mucor sp., Penicillium sp., Cephalosporium sp., которые являются причиной многих заболеваний животных, было установлено, что применяемый препарат оказал угнетающее действие на рост и развитие всех грибов при концентрации 0,1 %, 0,01 %.
Препарат роксацин обладает высокими фунгистатическими свойствами в отноше нии плесневых грибов Aspergillus sp., Penicillium sp. и Cephalosporium sp. и в меньшей степени по отношению Candida albicans, Fusarium sp., Mucor sp.
2.2.2. Токсикологические и фармакологические свойства препарата роксацин В результате проведенных исследований установлено, что при введении внутрь препарата роксацин белым мышам в максимально возможных дозах (1 мл) не регистриро вали гибели животных. При однократном подкожном введении препарата роксацин белым крысам ЛД50 составила 4,5 мл/кг.
Введение клинически здоровым лактирующим коровам препарата роксацин внут рицистернально в дозе 5 мл не оказывает токсического действия на организм животного.
Общее состояние и аппетит животных, а также все физиологические показатели остава лись в пределах нормы и отклонений в виде токсических проявлений не регистрировали.
Препарат роксацин не оказывает существенного влияния на содержание в крови общего белка и белковых фракций. Морфологические показатели крови коров также не претерпе вают достоверных изменений.
При изучении субхронической токсичности препарата роксацин на белых мышах установлено, что при длительном применении степень токсического воздействия препара та на организм животных находится в прямой зависимости от величины применяемой дозы.
Снижение массы тела мышей происходило только при длительном (пятикратном и десятикратном) введении препарата в дозе 1/2 от ЛД50 один раз в сутки.
Проведенное взвешивание внутренних органов опытных белых мышей (печень, почки (суммарно), селезенка) показало, что их средняя масса существенно не отличалась от таковых у животных контрольной группы.
При десятикратном введении препарата в дозе 1/2 от ЛД50 наблюдается увеличе ние массы почек.
Значение массы печени у мышей опытных групп находилось в пределах, которые не имеют статистически достоверных различий в сравнении с теми же показателями у животных контрольной группы.
Масса селезенки у опытных мышей колебалась в широких пределах, но значи тельное увеличение наблюдали при десятикратном введении препарата в дозе 1/5 от ЛД и при однократном, пятикратном и десятикратном введении препарата в дозе 1/2 от ЛД50.
Гематологические показатели находились в пределах, не имеющих достоверной разницы между контрольной и опытными группами животных. При однократном, пяти кратном и десятикратном введении препарата в дозе 1/10 от ЛД50, 1/5 от ЛД50 и при одно кратном введении в дозе 1/2 от ЛД50 наблюдалось незначительное увеличение числа эрит роцитов с повышением в них гемоглобина в пределах нормы по сравнению с контрольной группой. Аналогичное действие отмечали и в картине белой крови, где наблюдался нейтрофильный лейкоцитоз за счет увеличения сегментоядерных нейтрофилов.
При пятикратном и десятикратном введении препарата роксацин в дозе 1/2 от ЛД50 показатели красной крови были ниже, чем в контрольной группе, но находились в пределах нормы.
При изучении раздражающего действия препарата роксацин на конъюнктиву глаз кроликов установлено, что водные растворы препарата в концентрации 0,1 % и 0,25 % не обладают раздражающим действием. Увеличение концентрации водного раствора препа рата роксацин до 0,5 % вызывает степень раздражающего эффекта от слабого до умерен ного. Дальнейшее увеличение концентрации препарата роксацин усиливает раздражаю щее действие до выраженного.
При изучении раздражающего действия водных растворов препарата роксацин различной концентрации при внутрикожном введении установлено, что водные растворы препарата роксацин в концентрации 0,1 %, 0,25 % и 0,5 % обладают незначительным раз дражающим действием, которое можно охарактеризовать как очень слабое и слабое до умеренного, что подтверждают данные, которые нами были получены в опытах по изуче нию влияния этих растворов на конъюнктиву глаз кроликов. Согласно классификации В.В. Гацура (1974) изучаемый препарат можно отнести к группе переносимых организмом животных.
Оценка кожно-резорбтивного действия препарата роксацин показала, что общее состояние подопытных животных на протяжении всего опыта существенно не отличалось от такового в контрольной группе. Случаев гибели не наблюдалось. Клиническая картина интоксикации животных отсутствовала, аппетит сохранялся на протяжении всего опыта.
Показатели массы тела у животных опытной группы достоверно не отличались от таковых у животных контрольной группы. Показатели уровня гемоглобина, эритроцитов и лейко цитов находились в пределах физиологической нормы.
Изучение влияния препарата на скорость заживления экспериментальных ран по казало, что у контрольных животных раны заживали в среднем за 12,4±0,31 суток, в то время как раны у животных опытной группы за 9,1±0,18 суток. Укорочение срока зажив ления ран (УСЗР) после обработки препаратом роксацин составило 27 %.
2.2.3. Эффективность препарата роксацин при аэрозольной дезинфекции животноводческих помещений Динамика изменения бактериальной и грибковой контаминации воздуха до и по сле проведения аэрозольной дезинфекции профилактория с применением препарата рок сацин отражена на рис. 1.
Рисунок 1 - Динамика изменения уровня бактериальной и грибковой контаминации воздуха в профилактории после проведения аэрозольной обработки препаратом роксацин После аэрозольной обработки профилактория препаратом роксацин бактериаль ная контаминация воздушной среды уже через 30 минут экспозиции снизилась на 38,4 %, через 60 минут на 65,3 %, а через 120 минут на 97 % по сравнению с данными до обработки.
Такую же тенденцию наблюдали и при определении грибковой контаминации воздуха после аэрозольной дезинфекции препаратом роксацин. Так, уже через 30 минут число условно-патогенных и патогенных грибов снизилось на 50,6 %, через 60 минут на 73,7 %, а через 120 минут на 97,6 % по сравнению с данными до обработки.
2.2.4. Лечебно-профилактическая эффективность аэрозольного применения препарата роксацин при респираторных заболеваниях телят Профилактическую эффективность 2 % -ного водного раствора препарата рокса цин при бронхопневмонии аэрозольным методом введения оценивали с учетом изменений живой массы телят в возрасте с двух до пяти месяцев. При первичном взвешивании телят в возрасте 2-х месяцев, определили, что живая масса подопытных животных контрольной и опытных групп была одинакова (разница составляла не более 3 %).
После серии обработок в 5 месяцев живая масса телят первой опытной группы относительно контрольной была выше на 2 %. Живая масса телят второй опытной группы относительно контрольной была выше на 3,3 %.
Профилактическое использование препарата роксацин в дозе 1 мл/м 3 обеспечило сохранность телят на уровне 86,7 %, а в дозе 2 мл/м3 – 93,3 %. Отсутствие обработки в контрольной группе обусловило заболеваемость у 20 % животных.
Отсутствие изменений в картине крови телят в начале опыта, объясняется тем, что объектом при исследовании профилактической эффективности препарата роксацин слу жили клинически здоровые животные. Морфологические и биохимические показатели крови соответствовали видовой и возрастной норме.
Терапевтическая эффективность лечения неспецифической бронхопневмонии те лят в опытной группе составила 90 %, а срок выздоровления в среднем - 9,1±0,2 дней.
Ликвидацию воспалительного процесса у телят контрольной группы фиксировали на 2- дня позже по сравнению с животными опытной группы. У телят контрольной группы дольше наблюдался кашель и серозно-катаральные носовые истечения, отмечались хрипы.
В среднем срок выздоровления составил 10,9±0,3 дней, а терапевтическая эффективность 80 %.
При фоновом гематологическом исследовании были выявлены значительные из менения, указывающие на наличие острого воспалительного процесса в организме живот ных. Наблюдался нейтрофильный лейкоцитоз со слабым сдвигом ядра влево (13,1±0,6410 л). После лечения в контрольной и опытной группе животных наблюдали достоверное снижение уровня лейкоцитов по сравнению с фоном. Так в контрольной группе количество лейкоцитов составило 10,6±0,51109л (Р0,01), а в опытной 10,4±0,97109л (Р0,05). Количество палочкоядерных нейтрофилов при фоновом исследо вании составило 7,8±0,58 %. После лечения в контрольной и опытной группе телят также наблюдали достоверное снижение количества палочкоядерных нейтрофилов. Так в кон трольной группе количество палочкоядерных нейтрофилов составило 4,6±0,87 % (Р0,01), а в опытной 4,8±0,86 % (Р0,01).
В сыворотке крови животных опытной и контрольной группы до и после лечения наблюдали низкий уровень содержания общего белка, что свидетельствует о снижении уровня обмена веществ.
При фоновом исследовании сыворотки крови больных телят показатели резерв ной щелочности находились на нижних границах физиологической нормы (17,6±0,95 ммоль/л), что связано со снижением уровня газообмена в тканях организма жи вотного и вызвано нарушениями в функционировании легочной ткани. После лечения этот показатель в физиологических пределах увеличился по сравнению с фоном и соста вил 21,0±0,86 ммоль/л (Р0,01), а в опытной 20,5±0,54 ммоль/л (Р0,01).
2.2.5. Терапевтическая эффективность препарата роксацин при остром гнойно-катаральном эндометрите Терапевтическую эффективность схем лечения при эндометрите коров оценивали по общему состоянию животных, продолжительности лечения (до полного клинического выздоровления), продолжительности сервис-периода. Полученные данные представлены в табл. 1.
Таблица 1 - Терапевтическая эффективность препарата роксацин при лечении острого гнойно-катарального эндометрита у коров (M±m) Группа Количество Результаты лечения Сервис больных коров период, дней Выздоровело, % Длительность в группе, голов лечения, дней Контрольная 14,5±0,4 96,5±0, 15 86,6 % Опытная 12,3±0, 15 93,3 % 91,7±0, В крови животных опытной и контрольной группы до и после лечения уровень гемоглобина находился на нижних границах физиологической нормы.
Наблюдался нейтрофильный лейкоцитоз со слабым сдвигом ядра влево (13,2±0,82109л). После лечения в контрольной и опытной группе наблюдали достоверное снижение количества лейкоцитов относительно фона. Так в контрольной группе количе ство лейкоцитов составило 10,2±0,86109л (Р0,05), а в опытной 10,3±0,52109л (Р0,01).
Аналогичные изменения наблюдали в изменении количества палочкоядерных нейтрофи лов. До лечения количество палочкоядерных нейтрофилов было выше физиологических пределов и составило 7,4±0,6 %, после лечения в опытной и контрольной группе произо шло их достоверное снижение, так в контрольной группе количество палочкоядерных нейтрофилов составило 5,0±0,63 % (Р0,01), а в опытной группе 4,8±0,86 % (Р0,05).
В сыворотке крови животных опытной и контрольной группы наблюдали низкий уровень содержания общего белка и кальция. Уровень фосфора и резервной щелочности находился в пределах физиологической нормы.
2.2.6. Терапевтическая эффективность препарата роксацин при мастите у коров Терапевтическую эффективность лечения острого серозного мастита оценивали по количеству и проценту вылеченных животных через 3 и 5 дней от начала лечения. По лученные данные отражены в табл. 2.
Таблица 2 - Терапевтическая эффективность препарата роксацин при остром серозном мастите у коров Группа Препарат Доза, Кол-во Выздоровело через:
животных мл больных 3 дня 5 дней животных кол-во кол-во % % жив. жив.
Первая опытная Роксацин 15 10 7 70 9 Вторая опытная Роксацин 10 10 6 60 9 Контрольная Мастисан-А 5 10 8 80 9 После применения препарата роксацин у коров с первых дней лечения, как прави ло, наблюдалось заметное улучшение общего состояния и постепенное уменьшение кли нических признаков заболевания, после двух-трехкратного введения температура, пульс и дыхание находились в пределах физиологической нормы, в дальнейшем наступало полное клиническое выздоровление.
Через пять дней от начала лечения во всех трех группах было вылечено 9 коров (90 %). Однако у одной из леченых коров контрольной группы отмечена агалактия одной четверти вымени.
Гематологические показатели находились в пределах, не имеющих достоверной разницы между контрольной и опытными группами животных.
Наблюдался нейтрофильный лейкоцитоз со слабым сдвигом ядра влево. В сыво ротке крови у животных контрольной и опытных групп после лечения увеличилось со держание общего белка по сравнению с фоновым исследованием в среднем на 8,3 %. Это происходило в основном за счет увеличения количества -глобулинов в среднем на 15,1 % и -глобулинов в среднем на 16,1 % по сравнению с фоном.
2.2.7. Терапевтическая эффективность препарата роксацин при лечении конъюнктиво-кератитов у телят Применение препарата роксацин при лечении острого серозно-катарального конъюнктиво-кератита сокращало сроки лечения до 3,8±0,4 дня, что на 2,8 дня меньше по сравнению с контрольной группой (6,6±0,3 дня), где применяли 1 %-ную тетрациклино вую мазь и на 3,4 дня меньше по сравнению со второй опытной группой (7,2±0,3 дня), где применяли ретробульбарную новокаиновую блокаду.
Гематологические показатели находились в пределах, не имеющих достоверной разницы между контрольной и опытными группами животных, а также между показате лями в начале опыта.
При фоновом исследовании наблюдался нейтрофильный лейкоцитоз. Остальные клетки белой крови не выходили за пределы допустимых норм.
2.2.8. Эффективность применения препарата роксацин при первичной хирургической обработке ран у крупного рогатого скота При обработке ран 0,2 %-ным водным раствором препарата роксацин у животных первой опытной группы заживление первичным натяжением регистрировали у 73,4 % жи вотных. При этом, уже на 6-7 сутки раневой канал был заполнен прочной фибринозной тканью, что надежно закрывало рану от внешней среды. Попытка разъединить ткани со провождалась кровотечением, что указывает на рост грануляционной ткани. У животных второй опытной группы, раны которых обрабатывались 0,5 %-ным водным раствором де каметоксина, заживление первичным натяжением регистрировали у 53,4 % животных, а в контрольной группе, где применяли раствор фурацилина, всего лишь у 40 % животных.
Если раны контрольных животных при использовании фурацилина заживали в среднем за 20,2±0,43 дня, то при использовании поверхностно-активных веществ (рокса цин и декаметоксин) эти сроки были намного меньше. Так проведение первичной хирур гической обработки ран в комплексе с 0,5 %-ным водным раствором декаметоксина при водило к заживлению ран на 14,2±0,45 сутки, что на два дня больше, чем при обработке ран препаратом роксацин, где средние сроки заживления ран составили 12,4±0,29 дня.
Следует отметить, что в первые 3-5 суток после выполнения первичной хирургической обработки ран существенных отличий в проявлении признаков воспаления между груп пами животных не выявлено, эти различия появились на 5-6 сутки после применения пре паратов. У животных, чьи раны были обработаны детергентами (роксацин и декаметок син), наиболее интенсивно проявлялось снижение воспалительного отека, местной темпе ратуры и болезненности, и в меньшей степени уменьшение этих процессов регистрирова ли у животных контрольной группы.
2.2.9. Экономическая эффективность применения препарата роксацин при терапии острого послеродового эндометрита Результаты расчета экономической эффективности препарата роксацин при тера пии острого послеродового эндометрита коров представлены в табл. 3.
Таблица 3 - Экономическая эффективность лечебных мероприятий при эндометрите коров Показатель Группа Опытная Контрольная Число коров, подвергнутых лечению, голов 15 Продолжительность лечения, дней 12,3 14, Материальные затраты на препараты, руб 352,46 6817, В том числе на одно животное, руб 23,5 454, Оплата труда, руб 1362,02 1197, Экономический ущерб от снижения продуктивности, руб 4723,2 5568, Экономический ущерб от потери приплода, руб 4620,8 9241, Расходы на ветеринарные мероприятия, руб 2007,31 8271, Предотвращенный ущерб в результате лечения больных 22278,4 16812, животных, руб Экономический эффект, полученный в результате проведе- 20271,09 8540, ния лечебных мероприятий, руб Экономическая эффективность в расчете на один рубль за- 10,1 1, трат, руб Согласно данным табл. 3 следует, что для лечения острого гнойно-катарального эндометрита коров экономически эффективнее применять препарат роксацин, так как, на каждый затраченный рубль мы получаем 10,1 рублей прибыли.
ВЫВОДЫ Препарат роксацин проявляет антимикробное действие в отношении следу 1.
ющих микроорганизмов: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, E.coli A-20, Bacteria citrobacter, Pseudomonas aerugenosa, Enterobacter agglomerans, Proteus mirabilis.
Препарат роксацин оказывает угнетающее действие на рост и развитие грибов Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Candida albicans, Fusarium sp., Mucor sp., Penicillium sp., Cephalosporium sp. при концентрации 0,1 % и 0,01 %.
Препарат роксацин относится к 4-му классу опасности – вещества мало 2.
опасные, в соответствии с нормативами ГОСТ 12.1.007.-76. Минимально переносимой до зой препарата роксацин для белых крыс является доза 1,5 мл/кг, а ЛД50 составляет 4,5 мл/кг. Длительное введение препарата роксацин белым мышам в дозах составляющих 1/10, 1/5 от ЛД50 не влияет отрицательно на массу тела и общее состояние, другие показа тели клинического статуса животных, не нарушает функционального состояния и струк туры жизненно важных органов, а также морфобиохимических показателей крови.
0,2 %-ный водный раствор препарата роксацин существенно влияет на про 3.
цесс заживления ран, а также на ход регенеративных процессов.
Аэрозольное применение препарата роксацин для дезинфекции воздушной 4.
среды животноводческих помещений позволяет снизить уровень бактериальной контами нации воздуха через 30 минут экспозиции на 38,4 %, через 60 минут на 65,3 %, а через 120 минут на 97 % по сравнению с данными до обработки;
уровень грибковой контамина ции через 30 минут снизился на 50,6 %, через 60 минут на 73,7 %, через 120 минут на 97,6 % по сравнению с данными до обработки.
Профилактическое использование препарата роксацин при бронхопневмо 5.
нии в дозе 1 мл/м3 обеспечило сохранность телят на уровне 86,7 %, а в дозе 2 мл/м3 – 93, %. Отсутствие обработки в контрольной группе обусловило заболеваемость у 20 % жи вотных. Терапевтическая эффективность применения 2 %-ного водного раствора препара та роксацин в виде аэрозоли при лечении неспецифической бронхопневмонии телят со ставила 90 %.
Терапевтическая эффективность применения 0,1 %-ного водного раствора 6.
препарата роксацин при лечении острого гнойно-катарального эндометрита у коров соста вила 93,3 %. Использование препарата роксацин привело к исчезновению клинических признаков на 12,3±0,3 сутки, что на 15,2 % быстрее, чем в контрольной группе.
Лечебная эффективность 0,1 %-ного водного раствора препарата роксацин 7.
при остром серозном мастите у коров составляет 90 %.
Инстилляция 0,1 %-ного водного раствора препарата роксацин оказывает 8.
высокий терапевтический эффект при лечении серозно-катарального конъюнктиво кератита у телят и сокращает сроки лечения до 3,8±0,4 дня.
Применение 0,2 %-ного водного раствора препарата роксацин при первич 9.
ной хирургической обработке ран является существенным дополнением для ее качествен ного выполнения, способствует созданию благоприятных условий для регенерации тка ней, а также положительно влияет на ход регенеративных процессов.
Применение препарата роксацин при терапии послеродового эндометрита у 10.
коров является экономически выгодным, т.к. на каждый рубль ветеринарных затрат хо зяйство получает 10,1 рублей прибыли.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Разработан новый гуанидиновый препарат роксацин, который рекомендуется в качестве дезинфицирующего средства на объектах ветеринарного надзора и в качестве лечебно-профилактического средства при бронхопневмониях, эндометритах, маститах, конъюнктиво-кератитах, а также для проведения первичной хирургической обработки ран животных.
СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Лифенцова М.Н. Лечебно-профилактическая эффективность препарата роксацин при 1.
лечении диспепсии телят / М.Н. Лифенцова, А.И. Сидоренко // Университет: наука, идеи и решения. – 2010. - № 1. – С. 93-95.
Лифенцова М.Н. Эффективность лечения катарального стоматита с применением пре 2.
парата роксацин / М.Н. Лифенцова // Университет: наука, идеи и решения. – 2010. - № 2. – С. 66-67.
Лифенцова М.Н. Терапевтическая эффективность применения препарата роксацин при 3.
лечении конъюнктиво-кератитов у крупного рогатого скота / М.Н. Лифенцова, В.А.
Антипов // Актуальные проблемы современной ветеринарии: материалы Междунар.
науч.-практ. конф., посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани / КНИВИ. – Краснодар, 2011. – С. 157-159.
Лифенцова М.Н. Аэрозольное применение препарата роксацин для профилактики 4.
бронхопневмонии телят / М.Н. Лифенцова, В.А. Антипов // Актуальные проблемы со временной ветеринарии: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвященной 65 летию ветеринарной науки Кубани / КНИВИ. – Краснодар, 2011. – С. 226-229.
Лифенцова М.Н. Терапевтическая эффективность применения препарата роксацин при 5.
лечении катарального стоматита у телят / М.Н. Лифенцова //Научное обеспечение аг ропромышленного комплекса: материалы V всероссийской науч.-практ. конф. моло дых ученых / КубГАУ. – Краснодар, 2011. – С. 362-364.
Лифенцова М.Н. Эффективность применения препарата роксацин при первичной 6.
хирургической обработке ран у крупного рогатого скота / М.Н. Лифенцова, А.И.
Сидоренко / Вестник ветеринарии. – 2011. - № 4 (59). – С. 39-40.
Лифенцова М.Н. Эффективность аэрозольного применения препарата роксацин 7.
для профилактики респираторных заболеваний молодняка / М.Н. Лифенцова, А.И. Сидоренко / Вестник МичГАУ. – 2011. - № 1, Ч.2. – С. 39-41.
Лифенцова М.Н. Влияние препарата роксацин на микрофлору матки при остром гной 8.
но-катаральном эндометрите коров / М.Н. Лифенцова // Актуальные вопросы ветери нарной фармакологии и фармации: материалы Межрегиональной науч.-практ. конф., посвященной 90-летию КубГАУ / КубГАУ. – Краснодар, 2012. – С. 101-104.
Лифенцова М.Н. Терапевтическая эффективность препарата роксацин при эндометрите 9.
коров / М.Н. Лифенцова // Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии и фарма ции: материалы Межрегиональной науч.-практ. конф., посвященной 90-летию КубГАУ / КубГАУ. – Краснодар, 2012. – С. 104-107.