Влияние препаратов простагландина f2 на сократительную функцию матки и эффективность их применения для профилактики послеродовых заболеваний у коров
На правах рукописи
ПОСТОВОЙ Сергей Гавриилович Влияние препаратов простагландина F2 на сократительную функцию матки и эффективность их применения для профилактики послеродовых заболеваний у коров 06.02.06 – ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных
Автореферат диссертации на соискание учной степени кандидата ветеринарных наук
Краснодар, 2010
Работа выполнена в отделе патологии воспроизводства и молочной железы ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии заслуженный деятель науки РФ, Научный руководитель доктор ветеринарных наук, профессор Нежданов Анатолий Григорьевич заслуженный деятель науки РФ,
Официальные оппоненты:
доктор ветеринарных наук, профессор Никитин Виктор Яковлевич кандидат ветеринарных наук, Коба Игорь Сергеевич ФГОУ ВПО «Казанская государственная Ведущая организация академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
Защита состоится «06» июля 2010г. в _10_ час. на заседании совета Д220.038.07 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, Краснодар, ул. Калинина,
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» и на сайте htt: kubsau. ru Автореферат разослан «_»_2010г.
Ученый секретарь диссертационного совета И.А. Родин 1.
Общая характеристика работы
1.1. Актуальность темы. В структуре причин, вызывающих развитие бесплодия у коров и снижение показателей воспроизводства крупного рогатого скота, высокий удельный вес продолжают занимать послеродовые заболевания воспалительного и функционального характера. Несмотря на достигнутые успехи в изучении причин и патогенеза их развития, разработки методов профилактики частота их проявления, особенно в высокопродуктивных молочных стадах, не имеет тенденции к снижению (Е.В. Ильинский, 1996;
М.В.
Назаров, 1997;
И.Н. Зюбин, 1998;
А.И. Варганов, 1998;
А.Н. Турченко, 1999;
В.П. Иноземцев, 1999;
А.Ф. Колчина, 2000;
Р.Г. Кузьмич, 2000;
К.А. Лободин, 2003;
И.Г. Конопельцев, 2004;
А.Г. Нежданов, 2005;
М.А. Багманов, 2005;
Н.И. Полянцев, 2006;
В.И. Михалв, 2007;
В.Я. Никитин, 2007;
К.В. Племяшов, 2008;
И.С. Коба, А.Н. Турченко, 2009).
В развитии родовой и послеродовой патологии у животных определяющую роль занимает нарушение сократительной функции матки (В.Д. Мисайлов, 1976-1990;
В.С. Шипилов, В.А. Чирков, 1987;
А.Г. Нежданов, В.Д. Мисайлов, 1996;
А.М. Семиволос, 1999;
В.И. Михалв,2005-2007). Поэтому одним из методов профилактики послеродовых заболеваний является медикаментозная коррекция активности ее сократительной деятельности с использованием фармакологических средств миотропного действия – окситоцина, питуитрина, карбахолина, прозерина, метилэргометрина и др. Вместе с тем, широкий опыт их применения показывает неоднозначные результаты (H. Bostedt et al., 1976;
E. Piper et al., 1978;
B. Franz et al., 1979;
А.Г. Нежданов, 1987, 1991, и др.).
В этом плане несомненного внимания заслуживает применение утеротонических средств нового класса биологического действия, таких, как адреноблокаторы – утеротоник, утеротон (С. Раулушкевич с соавт., 1991, 1995;
Т. Глазер, 1995;
В.А. Сафонов, 2000;
А.Г. Нежданов, С.В. Советкин и др., 2001;
В.А. Сидоркин с соавт., 2005;
К.А. Лободин, 2009) и простагландины F2 (О.П.
Ивашкевич, 1985;
А.С. Терешенков, 1988;
В.И. Михалв, В.Д. Мисайлов, 2005;
В.Н. Коцарев, 2006), возбуждающее действие которых на исполнительные механизмы контрактильной деятельности миометрия осуществляется через - адреноэргические рецепторы и функциональные структуры, занимающих в гладкомышечных клетках миометрия промежуточные положения между медиаторными рецепторами и исполнительными механизмами сократительной деятельности гладкомышечных клеток, обеспечивающих проявление стимулирующих свойств -адренорецепторов (Л.С. Персианинов, 1975). Кроме того, препараты простагландина F2 повышают местную резистентность матки (J.S. Ottobre, 1980;
S.T. Leung et al., 2001;
С.Н. Карташов, 2005).
Однако ввиду малой изученности биологического действия препаратов ПГF2 на моторику матки и организм животных, они не нашли своего широкого применения в целях профилактики послеродовых заболеваний у коров.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение влияния препаратов простагландина F2 на сократительную деятельность матки и гормонально-биохимический статус коров после родов и выявление эффективности их применения для профилактики послеродовых заболеваний.
В соответствии с этим на разрешение были поставлены следующие задачи.
1. Изучить сократительную деятельность матки коров в первые сутки послеродового периода и выявить влияние на не препаратов ПГF2 – просольвина (люпростиола) и магэстрофана (клопростенола).
2. Выявить состояние гормонально-метаболического статуса коров после родов и определить влияние на него ПГF2.
3. Провести сравнительное изучение эффективности применения различных синтетических препаратов ПГF2 для профилактики послеродовых заболеваний у коров.
4. Дать экономическое обоснование целесообразности использования препаратов простагландина F2 для коррекции воспроизводительной функции коров.
1.3. Научная новизна. Изучена сократительная функция матки коров в динамике первых суток послеродового периода и е взаимосвязь с содержанием в крови стероидных гормонов, стабильных метаболитов оксида азота и показателями активности пероксидного окисления липидов. Выявлено стимулирующее влияние на сократительную функцию матки коров после родов препаратов ПГF2 – люпростиола и клопростенола и установлена продолжительность их биологического действия. Определена реакция эндокринной, биоэнергетической, антиоксидантной систем и системы оксида азота на вводимые экзогенные препараты ПГF2. Установлено, что препараты нормализуют функциональную деятельность надпочечных желз, активизируют процессы пероксидного окисления липидов, способствуют повышению мощности стресс-лимитирующей системы оксида азота и усиливают поглощение и утилизацию глюкозы. Расширено современное представление о молекулярно-биохимических механизмах влияния простагландинов на процессы послеродовой инволюции половых органов и дано научное обоснование их применения для профилактики метропатий.
1.4. Практическая значимость. Дана оценка воспроизводительной способности молочных коров при переболевании их послеродовыми субинволюцией матки и эндометритом. Предложены эффективные способы профилактики послеродовых осложнений и повышения репродуктивной функции коров с использованием препаратов ПГФ2, показана клиническая и экономическая целесообразность их применения в условиях производства.
1.5. Апробация и реализация результатов исследования. Основные результаты исследований и положения представлены и одобрены на научно практических конференциях: «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных» (Воронеж, 2006), «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» (Краснодар, 2006), «Актуальные проблемы физиологии и патологии размножения животных» (Уфа, 2007), «Актуальные проблемы ветеринарного акушерства, гинекологии и биотехники размножения животных» (Ставрополь, 2007), «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса» (Курск, 2008), «Проблемы, задачи и пути научного обеспечения приоритетного национального проекта «Развитие АПК» (Новочеркасск, 2008), на первом съезде ветеринарных фармакологов России (Воронеж, 2007).
Материалы диссертации вошли в «Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения у коров и тлок» (Воронеж, 2007), включены в Методические рекомендации по диагностике, профилактике и терапии гестоза у молочных коров и свиноматок (Воронеж, 2009), используются в учебном процессе на курсах повышения квалификации ветеринарных специалистов Северо-Кавказского и Центрально Чернозмного регионов страны.
1.6. Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в научных работах, в том числе 2 в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных перечнем ВАК РФ.
1.7. Объм и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах текста в компьютерном исполнении, включает обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований и их анализ, выводы, практические предложения, список литературы, содержащий 286 источников, в том числе 75 зарубежных авторов. Диссертация содержит таблиц и 15 рисунков.
1.8. На защиту выносятся следующие основные положения диссертации:
- Сократительная функция матки у коров после отела находится на высоком физиологическом уровне в первые шесть часов после завершения родового акта. Снижение е контрактильной активности происходит на фоне уменьшения содержания в крови стероидных гормонов, стабильных метаболитов оксида азота и снижения активности пероксидного окисления липидов;
- Синтетические препараты простагландина F2 оказывают выраженное влияние на сократительную функцию матки коров, максимально проявляющееся через двенадцать часов после их введения и сохраняющееся в течение 18-24 часов;
- Реакция коров на вводимые экзогенные простагландины F2 проявляется нормализацией функциональной деятельности надпочечных желз, активизацией процессов пероксидного окисления липидов, генерации оксида азота и усилением утилизации глюкозы;
- Введение коровам после родов препаратов ПГF2 обеспечивает уменьшение послеродовых осложнений в 1,43-1,79 раза, способствует повышению оплодотворяемости и снижению количества остающихся бесплодными животных на 8,1%.
2. Материалы и методы исследований Научные исследования выполнены в 2006-2009 гг на коровах симментальской и красно-пестрой пород в возрасте 4-8 лет, массой тела 500 550 кг со среднегодовой молочной продуктивностью 4500-5200 кг, принадлежащих ООО «Воронежпищепродукт» Воронежской области (экспериментальные исследования) и СПК «Победа» Ростовской области (клинико-экспериментальные и научно-производственные исследования).
Постановка опытов осуществлялась в зимнее-стойловые периоды. Животные содержались в типовых помещениях на привязи с предоставлением прогулок в загоне. Их кормление осуществлялось по общепринятым рационам.
Исследования по изучению сократительной функции матки у коров после родов и влиянию на нее препаратов простагландина F2 выполнены на девяти коровах, включенных в опыт сразу же по завершении третьей стадии родов.
Запись сократительной деятельности матки осуществляли методом внутренней гистерографии с использованием прибора ГДГ-2 через 30 мин, 6, 12 и 24 часа после завершения родового акта. В каждом случае записывали не менее трех сокращений.
Просольвин в дозе 2 мл (15 мг люпростиола) и магэстрофан в дозе 2 мл (500 мкг клопростенола) вводили коровам внутримышечно на фоне предварительной записи сокращений матки в первые 30 мин после родов.
Последующая запись, как и у интактных животных, осуществлялась через 6, и 24 часа.
О характере сократительной деятельности матки и влиянии на нее препаратов ПГF2 судили по частоте сокращений в течение часа, амплитуде сокращений, продолжительности волны каждого сокращения, продолжительности пауз между сокращениями, продолжительности маточного цикла, по величине индекса активности сокращений (отношение продолжительности сокращений к продолжительности пауз между сокращениями) и величине контракционного индекса, рассчитанного по F. Dcke (1962).
Для оценки состояния гормонально-биохимического статуса коров и влияния на него ПГF2 в опыт было включено пятнадцать животных, из которых десять были интактными, а пяти через 3-6 часов после выведения плода был введен магэстрофан в дозе 2 мл. Перед постановкой опыта и через 12-15 часов после введения препарата от всех животных была получена венозная кровь для гормонального и биохимического анализа. В сыворотке крови определяли содержание прогестерона, эстрадиола-17, тестостерона и кортизола методом ИФА с использованием тест-систем фирмы ДВС (Канада) и спектроанализатора «Униплан» (Россия), общего белка рефрактометрически и его фракций электрофорезом в агаровом геле (И.П. Кондрахин, 1985), общих липидов по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом (К. Кант с соавт., 1972), глюкозы энзиматическим колориметрическим методом, холестерина, кальция общего, фосфора неорганического на биохимическом анализаторе «Hitachi-902», стабильных метаболитов оксида азота (NO*) и S нитрозотиолов (Г.Н. Близнецова с соавт., 2002), в крови – содержание малонового диальдегида (МДА), активность каталазы и глутатионпероксидазы (М.И. Рецкий с соавт., 2005). Определение оптической плотности растворов проводили на спектроколориметре «Spekol 210» (Германия) или спектрофотометре СФ-46 (Россия).
Экспериментальные исследования по изучению влияния препаратов ПГF на сократительную функцию матки и гормонально-биохимический статус коров выполнены совместно с доктором ветеринарных наук В.И. Михалевым и кандидатами биологических наук Г.Н. Близнецовой и В.И. Шушлебиным, за что автор диссертации выражает им искреннюю благодарность.
Клинико-экспериментальные исследования по изучению эффективности применения препаратов ПГF2 (просольвин, магэстрофан, энзапрост) для профилактики послеродовых осложнений выполнены на 230 коровах.
Препараты вводили однократно в первые шесть часов после рождения теленка.
В качестве контроля использовали коров, которым вводили миотропный препарат утеротон в дозе 10 мл, а также интактных животных. У всех подопытных коров учитывали характер течения послеродового периода и заболеваемость их послеродовым эндометритом и субинволюцией матки.
Окончательное заключение об эффективности применения ПГF2 для профилактики послеродовых заболеваний и влиянии их на воспроизводительную функцию коров было сделано по результатам научно производственных опытов, выполненных на 214 коровах. В качестве препарата ПГF2 использовали магэстрофан, в качестве положительного контроля утеротон. У всех включенных в опыт животных учитывали характер течения послеродового периода, послеродовые осложнения, осеменение и оплодотворение, продолжительность бесплодия. Одновременно был выполнен расчет экономической эффективности использования магэстрофана для контроля за течением послеродового периода в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (М., 1982).
Статистическая обработка цифрового материала проведена по И.А. Ойвину (1960) и Е.К. Меркурьевой (1964).
Научные исследования проведены в соответствии с планом научно исследовательских работ ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии по теме 08.04.02. «Разработать новые экспресс-тесты и терапевтические препараты для эффективной системы мероприятий по диагностике, профилактике и терапии болезней органов размножения и молочной железы у коров и свиней, обеспечивающей снижение бесплодия маточного поголовья, получение жизнеспособного приплода и производство продукции высокого санитарного качества» (№ гос. регистрации 15070.3666026906.06.8.002.3).
3. Результаты исследований 3.1. Сократительная функция матки у коров в первые сутки после родов Результаты исследований представлены в таблице 1, из данных которой следует, что по завершении родового акта частота сокращений матки за один час в среднем составила 9,71±0,16, амплитуда сокращений – 30,3±0,22мм, продолжительность каждого сокращения равнялась 3,48±0,08мин, а продолжительность пауз между сокращениями 2,70±0,11мин.
Продолжительность маточного цикла составляла 6,18±0,09мин, отношение длительности периода сокращения матки к продолжительности пауз между сокращениями – индекс активности сокращений – 1,29. Контракционный индекс – интегральный показатель функциональной деятельности матки равнялся 1025,9±28,80 ед. Сократительная функция матки характеризовалась частыми и ритмичными контракциями с короткими паузами между ними.
Через 6 часов после завершения родов сократительная активность матки остается достаточно высокой. Однако частота сокращений уменьшилась на 13,3%, амплитуда сокращений на 27,1%, продолжительность каждого сокращения на 9,8%, а продолжительность пауз между сокращениями увеличилась на 46,7%. В связи с этим продолжительность маточного цикла увеличилась на 15,4%, а индекс активности маточных сокращений уменьшился на 63,3% и контракционный индекс в 1,75 раза (Р0,001).
Таблица 1.
Показатели сократительной функции матки интактных коров в первые сутки после родов № Время после родов (час) п/ Показатели п 0,5 6 12 Частота сокращений, 9,71±0,16 8,42±0,10 7,03±0,04 5,43±0, 1.
кол-во/час Амплитуда 30,3±0,22 22,1±0,09 15,8±0,40 8,80±0, 2.
сокращений, мм рт. ст Продолжительность 3,48±0,08 3,17±0,06 2,65±0,02 1,78±0, 3.
сокращений, мин Продолжительность пауз между 2,70±0,11 3,96±0,03 5,88±0,07 9,92±0, 4.
сокращениями, мин Продолжительность 6,18±0,09 7,13±0,05 8,53±0,04 11,70±0, 5.
маточного цикла, мин Индекс активности 6. 1,29 0,79 0,45 0, сокращений, ед.
Контракционный 1025,9±27,80 308,5±10,14 98,8±9, 7. 586,7±8, индекс, ед Через 12 часов после родового акта интенсивность сократительной активности матки снизилась в 3,32 раза (Р0,001). При этом частота сокращений матки уменьшилась в 1,38 раза, амплитуда сокращений – в 1, раза, продолжительность сокращения – в 1,31 раза, а продолжительность пауз увеличилась в 2,18 раза. Продолжительность маточного цикла увеличилась в 1,38 раза, а индекс активности сокращений уменьшился до 0,45 или в 2,87 раза.
К 24 часам после завершения родов показатели сократительной активности достигли минимальных значений. Так, амплитуда сокращений составила всего лишь 29,0% от первоначального значения, продолжительность сокращения 51,5%, частота сокращений 55,9%, интервал между сокращениями – 367,4%.
Продолжительность маточного цикла увеличилась на 89,3%, а индекс активности сокращений снизился в 7,17 раза и контракционный индекс в 10, раза.
Анализ полученных данных позволяет заключить, что сократительная функция матки коров находится на достаточно высоком физиологическом уровне в первые 6, максимум 12 часов после родов. Следовательно, характер течения послеродовых инволюционных процессов в половых органах коров практически определяется интенсивностью сократительной деятельности матки в первые 12 часов после завершения третьей стадии родов (отделения последа).
Высокая маточная активность в этот период после родов обеспечивает нормальную ретракцию мышц матки и последующее нормальное течение дегенеративных инволюционных процессов в половых органах коров.
3.2. Влияние просольвина на сократительную функцию матки коров после родов Регистрация сократительной деятельности матки коров после введения просольвина показала (табл. 2), что данный препарат уже в первые шесть часов замедляет снижение е функциональной активности. Так, частота сокращений матки снизилась только на 8,3%, продолжительность сокращений на 4,7%, амплитуда сокращений – на 25,5%, индекс активности сокращений на 25%, контракционный индекс на 35%.
Через 12 часов после введения препарата амплитуда сокращений (28,9±1, мм) и их продолжительность (3,44±0,06 мин) возвратились к уровню первоначальных значений, а индекс активности сокращений возрос до 0,98 (на 5,4%), контракционный индекс до 857,3±46,16 (на 36,1%) и составил 87,7% от исходного.
Через 24 часа после введения простагландина F2 сократительная функция матки у коров значительно снизилась по всем показателям. Так, частота сокращений уменьшилась на 54,5%, амплитуда сокращений в 2,47 раза, продолжительность сокращений на 84,9%, продолжительность пауз между сокращениями возросла в 2,8 раза, а маточного цикла на 54,5%. Индекс активности сокращений составил от первоначальных значений 18,5% и контракционный индекс 13,8%.
Таблица 2.
Показатели сократительной функции матки коров после родов при парэнтеральном введении препарата просольвин Время после родов (час) № Показатели п/п 0,5 6 12 Частота сокращений, кол 9,64±0,11 8,84±0,13 8,61±0,08 6,24±0, 1.
во/час Амплитуда сокращений, 29,4±0,52 21,9±1,02 28,9±1,68 11,9±0, 2.
мм рт. ст Продолжительность 3,44±0,07 3,28±0,05 3,44±0,06 1,81±0, 3.
сокращений, мин Продолжительность пауз 2,78±0,11 3,51±0,15 3,52±0,02 7,80±0, 4.
между сокращениями, мин Продолжительность 6,22±0,09 6,79±0,10 6,96±0,04 9,61±0, 5.
маточного цикла, мин Индекс активности 6. 1,24 0,93 0,98 0, сокращений, ед.
Контракционный индекс, 977,0±42,70 629,7±14,39 857,3±46,16 134,7±9, 7.
ед При сравнительном анализе динамики различных показателей сократительной функции матки подопытных и контрольных коров установлено, что исходная частота сокращений матки у них была примерно одинаковой (9,71±0,16 и 9,64±0,11). Через шесть часов после введения препарата у подопытных коров она превышала контрольных на 4,99%, а через 12 часов на 22,5% (8,61±0,08 и 7,03±0,04, Р0,001). Разница через 24 часа составила 14,9% (Р0,05).
Амплитуда сокращений матки в первые шесть часов после родов была примерно равной, однако через 12 часов у подопытных коров она превысила показатели контрольных животных в 1,83 раза (P0,001). Через 24 часа эта разница составила 35,2% (Р0,05).
Продолжительность каждого сокращения матки через 6 часов после введения просольвина превышала показатель контрольных животных на 3,5%, а через 12 часов – на 29,8% (Р0,001). Через 24 часа эти показатели выровнялись.
Интервалы между сокращениями у подопытных коров через 6 часов оказались меньше на 5,0%, через 12 часов на 67,6% и через 24 часа на 21,7% (Р0,001).
Разница в сократительной деятельности матки у интактных и подопытных коров демонстративно проявляется при сопоставлении показателей индекса активности сокращений и контракционного индекса. Так, при включении в опыт животных эти индексы у контрольных коров превышали показатели подопытных соответственно на 4% и 5%. Через 6 часов после введения препарата разница уже в пользу подопытных животных соответственно составила 17,7% и 7,3%, через 12 часов – 217,8% и 277,9% (Р0,001) и через часа 27,8% и 33,6% (Р0,05).
Таким образом, синтетический препарат простагландина F2 просольвин (люпростиол) обладает выраженным утеромоторным действием, проявляющимся в активизации частоты, амплитуды и продолжительности сокращений и общим увеличением контрактильной активности матки у коров, что является необходимым компонентом ускорения в ней ретракционных, дегенеративных и инволюционных процессов. Действие препарата начинает проявляться через 6 часов после его внутримышечного введения, достигает максимальных значений через 12 часов, а общее время активного действия препарата на матку превышает 18 часов.
3.3. Влияние магэстрофана на сократительную функцию матки коров после родов Установлено (табл. 3), что через 6 часов после введения магэстрофана частота сокращений матки снизилась только на 9,7%, амплитуда – на 7,6%, продолжительность сокращений – на 3,6%, индекс активности сокращений на 24,4% и контракционный индекс на 19,6%.
Через 12 часов уменьшение частоты сокращения от начальных показателей составило 13,2%. При этом амплитуда сокращений возросла на 20% (Р0,001) в сравнении с исходным уровнем и на 29,8% (Р0,001) в сравнении с показателями через 6 часов, продолжительность каждого сокращения на 15,1 и 19,4%. Показатель контракционного индекса – на 19,7% (Р0,05) и на 48,9% (Р0,001).
Через 24 часа после введения магэстрофана сократительная активность матки значительно снизилась по всем показателям. Частота сокращений составила 6,69±0,02, что ниже исходного на 47,1% и показателя в 12 часов – на 26,8%. Амплитуда сокращений снизилась до 15,6±0,62 мм, что составило 53,8% от исходного и 44,8% от показателя в 12 часов, продолжительность сокращений на 63,2% и 54,9%.
Индекс активности сокращений матки от первоначальных значений составил 25,2%, а контракционный индекс – 23,1%.
Сопоставление показателей сократительной деятельности матки контрольных животных и животных после назначения магэстрофана еще в большей степени раскрывает миотропные свойства клопростенола. Через часов после введения магэстрофана частота сокращений матки подопытных животных превышала показатели контрольных на 5,6%, через 12 часов – на 21,5% (Р0,001) и через 24 часа – на 23,2% (Р0,01). Амплитуда сокращений была выше интактных коров на 21,3%, через 12 часов – на 220,0% (Р0,001) и через 24 часа – на 77,3% (Р0,01).
Продолжительность каждого сокращения матки через 6 часов после введения магэстрофана превысила показатель контрольных животных на 2,5%, через 12 часов – на 46,4% (Р0,001) и через 24 часа на 19,7% (Р0,001).
Интервалы между сокращениями оказались меньше соответственно на 13,1%, на 87,3% и на 45,2%(Р0,001).
Таблица 3.
Показатели сократительной функции матки коров после родов при парэнтеральном введении препарата магэстрофан Время после родов (час) № Показатели п/п 0,5 6 12 Частота сокращений, 9,84±0,11 8,89±0,07 8,54±0,01 6,69±0, 1.
кол-во/час Амплитуда сокращений, 29,0±0,18 26,8±0,31 34,8±0,31 15,60±0, 2.
мм рт. ст Продолжительность 3,37±0,14 3,25±0,04 3,88±0,04 2,13±0, 3.
сокращений, мин Продолжительность пауз между 2,73±0,12 3,50±0,03 3,14±0,04 6,83±0, 4.
сокращениями, мин Продолжительность 6,10±0,13 6,75±0,03 7,02±0,04 8,96±0, 5.
маточного цикла, мин Индекс активности 6. 1,23 0,93 1,24 0, сокращений, ед.
Контракционный 962,8±34,36 773,7±14,89 1152,3±2,26 222,6±14, 7.
индекс, ед Индекс активности сокращений у интактных животных при включении их в опыт превышал подопытных животных на 4,9% (1,29 и 1,23), а контракционный индекс на 6,6% (1025,9±27,8 и 962,8±34,36). Через 6 часов после введения препарата индекс активности сокращений матки у подопытных коров уже превышал показатель интактных животных на 17,7%, а контракционный индекс на 31,9% (Р0,001). Через 12 часов эта разница составила соответственно 275,6% и 373,5% и через 24 часа 72,2% и 225,3% (Р0,01).
Таким образом, синтетический аналог ПГF2 клопростенол (препарат магэстрофан) обладает высокой миотропной активностью и вызывает выраженное увеличение контрактильной активности матки после родов, как и просольвин, на срок более 18 часов.
При сравнении показателей сократительной функции матки коров после назначения просольвина и магэстрофана в рекомендованных инструкцией дозах выявляется более выраженная утеротоническая активность последнего. Так, разница во влиянии магэстрофана и просольвина на амплитуду сокращений матки через 6 часов после их введения составила 22,4%, через 12 часов – 20,4% и через 24 часа – 31,1% (Р0,05-0,01). Общая интенсивность сократительной деятельности матки, оцениваемая по показателям контракционного индекса, при назначении магэстрофана была выше через 6 часов на 22,9%, через часов – на 34,4% и через 24 часа – на 65,2% (Р0,05-0,01).
3.4. Влияние простагландина F2 на гормонально-биохимический статус коров Результаты иммуноферентного анализа сыворотки крови коров на содержание половых и кортикостероидных гормонов, представленные в таблице 4, свидетельствуют, что реакция их эндокринной системы на введение простагландина F2 характеризовалась более выраженным в крови эстрогенов, кортикостероидов и снижением концентрации и андрогенных гормонов.
Количество тестостерона в крови через 12 часов после введения препарата оказалось ниже интактных животных в эти же сроки в 1,31 раза, эстрадиола 17 в 1,67 раза и кортизола в 1,74 раза (Р0,05). Поскольку данные гормоны у животных после родов вырабатываются в основном яичниками и надпочечниками материнского организма, можно полагать, что введенные коровам экзогенные простагландины снижают их послеродовое стрессовое напряжение, ослабляют вероятность перевозбуждения -адренорецепторов и торможения спонтанной моторики матки.
Таблица Показатели содержания гормонов в крови коров после отела и введения магэстрофана № Гормоны Интактные (3-6 Интактные (15-18 ПГF п/п час) час) (15-18 час) Тестостерон, нг/мл 129,0±16,69 143,5±18,85 109,8±30, Эстрадиол -17, пг/мл 480,0±48,04 114,7±20,38 68,5±9, Прогестерон, нг/мл 0,93±0,07 0,55±0,06 0,84±0, Кортизол, нг/мл 115,0±6,15 85,0±5, 4 48,9±5, Оценка состояния процессов свободно радикального окисления и антиоксидантной системы защиты у коров после родов показала (табл. 5), что уже в первые сутки послеродового периода у коров происходит снижение концентрации в крови промежуточного продукта пероксидного окисления липидов (ПОЛ) – малонового диальдегида на 18,0%, увеличение активности каталазы на 8,0% и глутатионпероксидазы на 22,7% (Р0,05). Это свидетельствует о снижении интенсивности процессов свободнорадикального окисления липидов и уменьшении накопления в организме токсических продуктов свободнорадикального окисления.
Таблица Содержание малонового диальдегида и активность ферментов системы антиоксидантной защиты в крови коров после отела и введения магэстрофана № Показатели Интактные (3-6 Интактные (15- ПГF п/п часов) 18 часов) (15-18 часов) Малоновый диальдегид, 1,28±0,13 1,05±0,11 1,32±0, мкМ/л Каталаза, мМН2О2/л х 36,1±1,38 39,0±1,56 35,9±0, мин Глутатионпероксидаза, мм 21,6±1,37 26,5±1,08 21,2±0, G-SH/л х мин У коров, обработанных магэстрофаном, показатели ПОЛ и активности ферментов антиоксидантной защиты остались на первоначальном уровне.
Концентрация малонового диальдегида в их крови превосходила уровень у контрольных животных на 25,7 %, активность каталаза была ниже на 8,7% и глутатионпероксидазы на 25,0% (Р0,05). По всей видимости, это связано с тем, что парэнтерально введенные экзогенные простагландины, активизируя биосинтез в матке эндогенных простагландинов (L.E. McDonald, 1980;
H. Slama et al., 1991;
A.A. Ramadan et al., 1997;
F.I. Diaz et al., 2002), включающего гидроксилирование липидов и образование циклических эндоперекисей (M.P.
Embrey, 1975;
Н.А. Юдаев, 1976;
С.А. Ажчихин, 1978), вызывают накопление продуктов пероксидного окисления. Как и то, что интенсивная мышечная работа матки, развивающаяся после введения простагландина F2, сопряжена со значительным потреблением кислорода. Снижение же активности антиокислительных ферментов свидетельствует о том, что активация процессов ПОЛ, сопряженная с биосинтезом простагландинов, не выходит за рамки нормального (стационарного) протекания этого процесса.
В тесной взаимосвязи с процессами свободнорадикального окисления, антиоксидантной системой защиты находится система оксида азота (Н.К. Зеньков с соавт., 2001). В настоящее время доказано, что оксид азота принимает активное участие в релаксии гладкомышечных структур миометрия, ограничивая тем самым сокращения матки (R. E. Garfield et al., 2001).
Выявлено (табл. 6), что по истечении 12 часов после первого определения содержание в крови стабильных метаболитов оксида азота (NO*) снизилось на 19,6%, а S-нитрозотиолов – депо оксида азота – на 31,2%. То есть, на фоне снижения контрактильной активности матки отмечается и снижение содержания в крови стабильных метаболитов оксида азота.
Таблица Содержание стабильных метаболитов оксида азота и S-нитрозотиолов в крови коров после отела и введения магэстрафана № Показатели ПГ F 3-6 часов 15-18 часов н/н (15-18 часов) Оксид азота (NOx), мкМ/л 93,8±7,34 75,4±12,75 87,3±8, 3212±540, S-нитрозотиолы (RSNO), нм/л 2210±214,5 2440±419, После введения ПГF2 концентрация NO* в сыворотке крови превышала показатели интактных животных на 15,8%, а S-нитрозотиолов на 10,4%.
Полученные данные позволяют заключить, что введение коровам после отела ПГF2 сопровождается увеличением синтеза в организме животных оксида азота, обладающего миорелаксантным действием. И в то же самое время мы отмечаем усиление сократительной деятельности матки.
На основании результатов наших исследований и данных литературы (М.И. Рецкий с соавт., 2005;
Н.А. Пасько, 2009) можно предположить, что стимуляция сократительной деятельности матки препаратами простагландина F2 сопровождается активизацией генерации оксида азота, который, во-первых, обладая миорелаксантным действием на гладкомышечные структуры миометрия, ограничивает или удерживает эффект стимуляции в физиологических пределах, предупреждая тем самым эффект перевозбуждения, явлений мышечного спазма и блокады ритмической сократительной деятельности матки. Во-вторых, активизация синтеза оксида азота, проявляющего антиоксидантное действие, является одним из физиологических механизмов, ограничивающих интенсивность пероксидных реакций в организме.
Назначение коровам простагландина F2 положительно отразилось на белковом обмене, что проявилось увеличением белковосинтезирующих функций печени, увеличением содержания альбуминов по сравнению с интактными животными на 8,8 % (37,1±1,44% против 34,1±1,07%), снижением количества глобулинов и повышением белкового индекса с 0,52 до 0,59 или на 13,5%. Показатели содержания в крови липидов и холестерола остались на уровне фоновых значений и превышали уровень у контрольных животных соответственно на 12,0% и 18,6%. В то же время содержание глюкозы в крови подопытных коров в сравнении с контрольными оказались ниже на 26,6 % (2,85±0,41 мМ/л и 3,88±0,42 мМ/л). Можно полагать, что усиление сократительной функции матки препаратами простагландина Ф 2 реализуется через усиление поглощения и утилизацию миометрием легкодоступного основного энергетического субстрата – глюкозы.
Таким образом, с учетом полученных нами результатов по влиянию ПГF2 на сократительную деятельность матки и гормонально-метаболический гомеостаз организма животных и имеющихся данных литературы можно считать, что возбуждающее действие простагландина F2 на матку после родов осуществляется через возбуждение - и угнетение -адренорецепторов (Х.М.
Марков, 1970), стимуляцию основных автономных моторных механизмов миометрия, осуществляющих автоматию, сам процесс сокращения и тоническое напряжение матки (А.Н. Кудрин с соавт., 1973) и через нормализацию функциональной деятельности надпочечных желез и исключение отрицательного действия на моторику матки вырабатываемых ими повышенного количества катехоламинов при родовом и послеродовом стрессовом состоянии. Эти процессы сопровождаются активизацией пероксидного окисления липидов, усилением генерации оксида азота, увеличением поглощения и утилизации тканями матки глюкозы.
Полученные нами материалы и имеющиеся данные литературы позволяют нам представить следующую концептуальную схему действия препаратов ПГF2 на матку коров после отела (рис.).
ПГF Система NО* Надпочечники Матка кортикостероидов и катехоламинов Поглощение и утилизация глюкозы Стимуляция -адренорецепторов Стимуляция синтеза ПГF2 и Блокада -адренорецепторов Активизация генерации NО* Стимуляция специфических Нормализация синтеза структур клеток лейкотриена В Повышение тканевой Усиление контрактильной резистентности матки активности матки Эффект Предупреждение послеродовых функциональных расстройств и воспалительных заболеваний матки 3.5. Клинико-экспериментальные данные по сравнительному изучению эффективности применения препаратов простагландина F2 для профилактики послеродовых заболеваний у коров Первый опыт выполнен на 91 корове, которые были распределены на три группы. Коровам одной группы (n=33) в первые шесть часов после рождения теленка однократно внутримышечно вводили по 2 мл магэстрофана, второй ( n=20) по 2 мл просольвина. Коровам третьей группы (n=38) инъекции препаратов не осуществлялись и они служили контролем.
Послеродовые осложнения (субинволюция матки и эндометрит) были зарегистрированы у 50% коров контрольной группы, 36,4% при назначении магэстрофана и 40% - просольвина.
Следовательно препараты простагландина F2 обладающие миотропным действием, обеспечили снижение заболеваемости коров после родов 1,37-1, раза. При этом профилактическая эффективность клопростенола (магэстрофана) оказалось выше лупростила (просольвина) на 3,6%.
Вторая серия клинических опытов была выполнена на 139 коровах. Их гематологический и биохимический статус находился в пределах физиологических нормативов. На нижних границах были показатели белкового индекса, содержание общих липидов, холестерина, каротина при достаточно высоком содержании витамина А. Изучено профилактическое действие магэстрофана, просольвина, энзапроста и утеротона.
Послеродовые осложнения в группе контроля были зарегистрированы у 47,8% животных. Инъекции коровам после отела магэстрофана или энзапроста способствовали снижению их заболеваемости до 26,7% или в 1,79 раза, а утеротона - до 23,8 % или в 2,0 раза. При сочетанном назначении препаратов простагландина и -адреноблокатора утеротона заболеваемость составила 22,8%, то есть выраженного увеличения профилактической эффективности не отмечено. Надо полагать, что сочетанное назначение маточных контрольных препаратов близко направленных действий на гладкомышечные структуры миометрия не дает усиления сократительной функции матки. Поэтому для реализации потенциала ее сократительной активности после родов достаточно введения одного из этих препаратов блокирующих -адренорецепторы матки или стимулирующих ее основные моторные механизмы, осуществляющих автоматизм, процесс сокращения и тоническое напряжение матки.
Окончательное заключение об эффективности применения препаратов простагландина F2 для профилактики послеродовых заболеваний у коров и влиянии их на воспроизводительную функцию было сделано на основании результатов дополнительно проведенных широких производственных опытов, которые представлены ниже (3.6.).
3.6. Результаты производственного испытания эффективности применения препаратов ПГF2 для профилактики послеродовых заболеваний и повышения воспроизводительной функции коров Исследования проведены на 214 коровах. Морфологический и биохимический статус их крови характеризовался содержанием эритроцитов – 5,6-6,0 1012/л, лейкоцитов – 5,2-7,6 109/л, гемоглобина – 120-120,9 г/л, белка общего – 74,2-88,7 г/л, липидов общих – 3,2-4,0 г/л, глюкозы – 2,06-3,61 мМ/л, каротина – 334-492 мкг%, витамина А – 42,0-66,9 мкг%, кальция общего – 2,37 2,46 мМ/л, фосфора неорганического – 1,54-1,97 мМ/л, магния – 2,05-3,10 мг%.
Включенные в опыт животные были распределены на три группы. Коровам первой группы (n=54) препараты не назначались и они служили контролем.
Животным второй группы (n=75) в первые 6-12 часов после рождения теленка парентерально однократно вводили утеротон в дозе 10 мл (положительный контроль), а третьей (n=85) – магэстрофан 2 мл (70 коров) или просольвин 2 мл (15 коров).
На фоне выявленного у отдельных животных белкового, углеводного или минерального обменов заболеваемость интактных коров после родов составила 35,2% (табл. 7). Инъекция коровам после отела препарата утеротон способствовала снижению заболеваемости до 22,7% или в 1,55 раза. При введении препаратов ПГF2 послеродовые осложнения были зарегистрированы у 24,7% коров, что ниже контрольных животных в 1,43 раза.
Таблица Эффективность профилактики послеродовых осложнений у коров и показатели их воспроизводительной функции Показатели Контроль Утеротон ПГФ Количество животных 54 75 Заболело: число 19 17 % 35,2 22,7 24, Оплодотворились: число 42 62 % 77,8 82,7 85, Индекс оплодотворения 1,69 1,84 1, Период от отела до 98,4 97,6 99, оплодотворения, дни Остались бесплодными, % 22,2 17,3 14, Контроль за осеменением и оплодотворением подопытных коров показал, что в группе интактных животных оплодотворились 77,8% коров при индексе оплодотворения 1,69. 22,2% животных из этой группы остались бесплодными.
После применения утеротона оплодотворились 82,7% коров, что на 4,9% больше, чем в контроле. Количество бесплодных животных в этой группе снизилось до 17,3% или в 1,28 раза.
Среди животных, которым после отла инъецировали препараты простагландина F2, оплодотворились 85,9% коров при индексе оплодотворения 1,59. В сравнении с контролем оплодотворяемость оказалась выше на 8,1%, а индекс оплодотворения ниже на 0,1. Бесплодными в этой группе остались 14,1% коров, что меньше группы контрольных животных в 1,57 раза и группы с утеротоном в 1,23 раза. Выраженных различий по продолжительности бесплодия оплодотворившихся коров разных групп не выявлено.
При анализе оплодотворяемости не заболевших и заболевших коров после родов установлено, что при нормальном течении послеродового периода за время опыта (7 месяцев) оплодотворились 89,2% коров, а при патологическом его течении (после клинического выздоровления) только 64,9%. Разница составила 24,3%. Количество оставшихся бесплодных животных увеличилось с 10,8% до 35,1% или в 3,25 раза.
Коэффициент оплодотворения у оплодотворившихся переболевших животных превышал показатели здоровых коров в 2,2 раза (3,21 против 1,45) и продолжительность бесплодия у каждого оплодотворенного животного на 82, дня или более чем в два раза (132,4 против 50,2 дней).
Кроме того, установлено, что эффективность лечебных мероприятий в плане восстановления плодовитости переболевших животных оказалась выше в 1,41 – 1,74 раза у коров, которым в день отла назначали утеротонические препараты. Если в контроле из числа переболевших животных оплодотворились только 47,4%, то в группах с назначением миотропных препаратов 66,7-85,7%. Надо полагать, что данные препараты не только профилактируют послеродовые осложнения, но и снижают степень тяжести патологического процесса.
Приведенные цифровые материалы по воспроизводительной способности коров при нормальном и патологическом течении послеродового периода подчеркивают исключительную важность проблемы профилактики послеродовых осложнений у молочных коров.
Использование с этой целью препаратов простагландина F2 оправдано как с ветеринарной, так и с экономической точек зрения. Фактическая чистая прибыль на каждую корову при использовании магэстрофана для контроля за течением послеродового периода составила 454,8 рублей при окупаемости на рубль затрат 12,81 рублей (454,8 : 35,5).
4. Выводы Сократительная функция матки коров после отла находится на 1.
высоком физиологическом уровне в первые шесть часов после завершения родового акта. В этот период частота сокращений матки составляет 9,71±0,16 8,42±0,10/час, амплитуда сокращений 30,3±0,22 22,1±0,09мм, продолжительность сокращений 3,48±0,08 - 3,17±0,06мин, контракционный индекс 1025,9±27,80-586,7±8,19. К 12-ти часам после родов индекс контрактильной активности снижается до 308,5±10,14 или в 3,32 раза, а к часам - до 98,8±9,36 или в 10,38 раза. Следовательно, характер течения послеродовых инволюционных процессов в половых органах коров практически определяется интенсивностью сократительной деятельности матки в первые 12 часов после завершения третьей стадии родов.
2. Постепенное снижение контрактильной активности матки коров после родов происходит на фоне значительного уменьшения содержания в крови кортизола, эстрадиола -17, тестостерона, прогестерона, стабильных метаболитов оксида азота (NОх) и его депонированной формы - нитрозотиолов (RSNo), а также снижения интенсивности пероксидного окисления липидов.
3. Препараты простагландина F2 (просольвин и магэстрофан) оказывают выраженное стимулирующее действие на сократительную функцию матки коров после родов, проявляющееся активизацией частоты (на 22,5-21,5%), амплитуды (в 1,83-2,2 раза), продолжительности (на 29,8-46,4%) сокращений и увеличением общей контрактильной активности матки в 2,78-3,74 раза.
Действие препаратов на моторику матки начинает проявляться через 6 часов после их введения, достигает максимальных значений к 12 часам и сохраняется до 24 часов. При этом биологическое действие магэстрофана (клопростенола) превосходило действие просольвина (люпростиола) через 6 часов после их введения на 22,4%, через 12 час – на 34,4% и через 24 час – на 65,2%.
4. Реакция эндокринной системы коров на введение клопростенола проявилась снижением концентрации в крови кортизола на 74%, эстрадиола – на 67% и тестостерона – на 31%. Это свидетельствует о нормализации функциональной деятельности надпочечных желз и снижении послеродового стрессового напряжения организма животных. Изменений в содержании прогестерона в крови, достигшего к моменту введения ПГF2 базального уровня, не отмечено.
5. Парентеральное введение коровам препарата ПГF2 – клопростенола активизирует процессы пероксидного окисления липидов, проявляющееся увеличением концентрации в крови коров малонового диальдегида на 25,7% и снижением активности каталазы на 8,7% и глутатионпероксидазы на 25,0%, что связано с индукцией биосинтеза эндогенных простагландинов.
6. Синтетический препарат ПГF2 клопростенол оказывает активизирующее влияние на систему оксида азота. Концентрация в сыворотке крови стабильных метаболитов оксида азота и S-нитрозотиолов, в сравнении с интактными животными, увеличивается соответственно на 15,8 и 10,4%. Это удерживает эффект экзогенной стимуляции сократительной активности матки в физиологических пределах, предупреждает эффект перевозбуждения, возможный мышечный спазм и блокаду е ритмической сократительной деятельности. Кроме того, активизацию синтеза оксида азота следует рассматривать одним из физиологических механизмов, ограничивающим реакции пероксидного окисления в организме.
7. Активизация сократительной деятельности матки коров под влиянием препаратов ПГF2 сопровождается усилением поглощения и утилизации биологического субстрата – глюкозы, являющейся физиологическим стимулятором сократительной функции гладкомышечных клеток. Е концентрация в крови после введения магэстрофана снизилась на 26,6%.
8. В группе коров, переболевших послеродовыми субинволюцией матки и эндометритом, отмечено снижение их оплодотворяемости на 24,3%, увеличение коэффициента оплодотворения в 2,2 раза, продолжительности бесплодия у каждого оплодотворенного животного в 2 раза и количества оставшихся бесплодных животных с 10,8% до 35,1% или в 3,25 раза.
9. Введение коровам в первые часы после родов препаратов простагландина F2 (магэстофан, энзапрост) способствует снижению проявления послеродовых субинволюций матки и эндометрита в 1,43-1,79 раза, снижает степень тяжести патологического процесса у заболевших животных и повышает оплодотворяемость коров на 8,1%. При сложившейся закупочной цене на молоко это позволяет в течение года получить от каждых 100 коров дополнительной продукции на сумму 418250 рублей, чистой прибыли рублей, при окупаемости на каждый рубль затрат 12,81 рублей.
5. Практические предложения 1. Для активизации сократительной деятельности матки после родов, профилактики послеродовых осложнений и повышения воспроизводительной способности молочных коров парентерально вводить им в первые часы после родов один из препаратов ПГF2.
2. Научные положения и практические рекомендации, вытекающие из материалов диссертации, использовать в учебном процессе по ветеринарному акушерству, гинекологии и биотехнике размножения, а также при написании учебных пособий и учебников для студентов ВУЗов зооветеринарного профиля.
6. Список научных работ, опубликованных по материалам диссертации 1. Нежданов А.Г. Гормонально-метаболические и гистоморфологические аспекты послеродовых функциональных расстройств и воспалительных заболеваний матки у коров /А.Г. Нежданов, К.А. Лободин, В.А. Сафонов, С.Г.
Постовой //Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных», посвященной 100-летию со дня рождения проф. Авророва А.А Воронеж, 2006. С. 952-955.
2. Нежданов А.Г. Современные тенденции и перспективные пути решения проблемы профилактики послеродовых заболеваний у животных /А.Г.
Нежданов, К.Г. Дашукаева, К.А. Лободин, В.А. Сафонов, С.Г. Постовой //Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях», посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ.- Краснодар, 2006.-С. 363-366.
3. Постовой С.Г. Влияние препаратов простагландина Ф2 на сократительную функцию матки коров /С.Г. Постовой //Ветеринария.- 2007. № 4.- С. 36-38.
4. Постовой С.Г. Эффективность стимуляции сократительной деятельности матки коров препаратами простагландина F2/С.Г. Постовой//Материалы республиканской научно-практической конференции «Актуальные проблемы физиологии и патологии размножения животных», посвященной 90-летию со дня рождения И.Ф. Заянчковского.- Уфа, 2007.-С. 42-45.
5. Постовой С.Г. Опыт применения препаратов простагландина F2 для профилактики послеродовых осложнений у коров /С.Г. Постовой //Российский ветеринарный журнал.- 2007.- Май.- С.24.
6. Нежданов А.Г. Репродуктивный потенциал маточного поголовья крупного рогатого скота и пути его реализации в производственных условиях /А.Г. Нежданов, К.А. Лободин, В.А. Сафонов, С.Г. Постовой //Актуальные вопросы ветеринарной медицины, том 2.- Екатеринбург: изд-во УрГСХА, 2007.- С. 147-148.
7. Постовой С.Г. Утеромоторное действие препаратов ПГФ 2 и результаты их клинического применения для профилактики послеродовых заболеваний у коров /С.Г. Постовой, А.Г. Нежданов //Материалы первого съезда ветеринарных фармакологов России.- Воронеж, 2007.- С. 504-508.
8. Постовой С.Г. Изучение сравнительной эффективности применения миотропных препаратов для профилактики послеродовых эндометритов и субинволюции матки /С.Г. Постовой, А.Г. Нежданов //Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы, задачи и пути научного обеспечения приоритетного национального проекта «Развитие АПК» (к 40-летию Северо-Кавказского ЗНИВИ).- Новочеркасск, 2008.- С. 87-90.
9. Нежданов А.Г. Проблема болезней органов репродукции молочных коров и основные пути ее решения /А.Г. Нежданов, М.Н. Кочура, В.А. Сафонов, С.Г. Постовой, К.А. Лободин //Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса».- Курск, 2008.- С. 227-229.