Клинико-экспериментальное обоснование применения препаратов тилозина в ветеринарии
На правах рукописи
ЗУЕВ НИКОЛАЙ ПЕТРОВИЧ КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ ТИЛОЗИНА В ВЕТЕРИНАРИИ 06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией 06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук
Краснодар – 2012 2 Диссертационная работа выполнена в ГНУ Краснодарский научно-исследователь ский ветеринарный институт Россельхозакадемии Научные консультанты: доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН, заслуженный деятель науки РФ Антипов Валерий Александрович доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН, заслуженный деятель науки РФ Шахов Алексей Гаврилович
Официальные оппоненты: Болоцкий Иван Александрович доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий лабораторией эпизоотологии ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветери нарный институт Россельхозакадемии Малышева Людмила Александровна доктор ветеринарных наук, профессор, Почетный работник науки и техники РФ, заведующая кафедрой микробиологии, вирусологии и патанатомии ФГБОУ ВПО Донской государствен ный аграрный университет Папуниди Константин Христофорович доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ, Почетный работник высшего профессионального образования РФ, зам. директора Федерального цен тра токсикологической, радиационной и биологиче ской безопасности
Ведущая организация: Северо-кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт
Защита состоится 17 мая 2012 года в 10-00 на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный универси тет» по адресу 350044 г. Краснодар, ул. Калинина,
С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государ ственный аграрный университет» по адресу 350044 г. Краснодар, ул. Калинина, Автореферат размещен на сайте ВАК РФ - http/www.vak.et.gov.ru.
Автореферат разослан «»2012г.
Ученый секретарь диссертационного совета Родин И.А.
1.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследований. Перевод животноводства на промышленную основу, характеризующуюся качественно новыми методами содержания и эксплу атации, такими как длительным пребыванием животных в закрытых помещениях, высокой концентрацией их на ограниченных производственных площадях, воз действием на организм многочисленных стресс-факторов, отрицательно сказыва ется на физиологическом состоянии животных, снижая уровень их естественной резистентности, что приводит к возникновению ряда болезней (П.И. Притулин, 1971;
А.И. Карелин с соавт., 1974;
В.Е. Чумаченко, 1982;
В.П. Урбан, 1983;
А.Г.
Шахов, 1986, 2005 и др.) Одной из трудно разрешимых проблем крупных животноводческих хо зяйств являются желудочно-кишечные и респираторные болезни молодняка, зани мающие ведущее место в патологии сельскохозяйственных животных.
В связи с этим дальнейшее изучение этиологии и патогенеза массовых забо леваний животных c гастроэнтеральным и респираторным синдромами, разра ботка новых эффективных средств терапии больных животных и их профилакти ки являются весьма актуальными.
Одним из перспективных путей создания новых фармакологических средств является конструирование композиций препаратов. Это направление представляет собой основу ветеринарной фармакологии (Г.В. Кирюткин с соавт.,1997, М.Д. Машковский, 1998, Т.Н. Ракова, 1999, С.В. Шабунин, 2007;
).
Перспективной основой для разработки комбинированных антимикробных средств является группа тилозинсодержащих препаратов, включающая тилозина тартрат, высокоактивные формы фрадизина-40 и 50, повышение антимикробной активности которых за счет синергидного или потенциирующего действия других совместимых с ними компонентов позволит повысить эффективность этиотроп ной и патогенетической терапии больных животных при указанных патологиях.
Цель и задачи научных исследований. Основной целью настоящей рабо ты было: изучение и внедрение в ветеринарию тилозина тартрата и фрадизина 40(50), эффективных при гастроэнтеритах и пневмониях, а также разработка на их основе комбинированнных препаратов.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Изучить влияние технологических стресс-факторов на этиологическую роль бактерий при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка сельскохозяйствен ных животных.
2. Определить in vitro и in vivo антимикробную активность тилозина тартрата и фрадизина-40(50) в отношении потенциально патогенных бактериаль ных возбудителей гастроэнтеритов и пневмоний.
3. Провести конструирование препаратов на основе разработанных компо зиций и изучить их основные фармакотоксикологические свойства.
4. Обосновать возможность применения тилозинсодержащих препаратов при желудочно-кишечных и респираторных болезнях животных и изучить их ле чебную и профилактическую эффективность при гастроэнтеритах и пневмониях.
Научная новизна исследований. Впервые разработаны отечественные ти лозинсодержащие препараты (тилозина тартрат и фрадизин-50) и их композиции (биофрад и фрадифур) и дано клинико-экспериментальное обоснование использо вания их для профилактики и лечения телят, ягнят и поросят при желудочно-ки шечных и респираторных заболеваниях, включая кишечные и респираторные ин фекции - сальмонеллез, колибактериоз, пастереллез, дизентерию, бордетеллез, стрептококкоз и стафилококкоз. Определена чувствительность возбудителей ин фекций к разработанным препаратам и показано in vitro замедление развития к ним устойчивости микроорганизмов в рекомендуемых дозах.
Новизна исследований подтверждена патентами РФ на изобретения № 2412702 и 2372982.
Практическая значимость исследований. В ветеринарную практику для борьбы с гастроэнтеритами и пневмониями молодняка сельскохозяйственных жи вотных предложены новые препараты: тилозина тартрат, фрадизины-40 и 50, фра дифур и биофрад, обладающие высокой профилактической и (70-95%) и лечебной эффективностью (72-95%).
Практическая значимость проведенных научных исследований подтвержда ется:
1. Наставлениями на применение тилозина тартрата и фрадизина в ветери нарии, утвержденными ГУВ МСХ СССР (1990г).
2. Утверждением ГУВ МСХ СССР «Методических указаний по диагности ке, профилактике и лечению респираторных болезней телят» (1987г) и одобрени ем Отделением ветеринарной медицины РАСХН «Методических рекомендаций по диагностике, профилактике и лечению дизентерии свиней» (2008г).
Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ветфармсовета Департамента ветеринарии МСХ СССР, Межвузовских («Новые фармакологические средства в ветеринарии», Ленинград, 1989;
«Новые методы диагностики, способы профилак тики и лечения незаразных болезней животных», Воронеж, 1990 «Животно водство и ветеринария», Белгород, 1995);
Межрегиональных («Производственный потенциал агропромышленного комплекса и пути улучшения его использования», Воронеж, 1991);
Республиканской («Проблемы интенсификации производства мо лока», Минск, 1991);
Всесоюзных («Разработка и применение антибиотиков неме дицинского назначения», Москва, 1987;
«Повышение продуктивности сельскохо зяйственных животных и совершенствование мер борьбы с болезнями в условиях интенсивного ведения животноводства и создания фермерских хозяйств», Харь ков, 1991;
«Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных», Москва 1991);
Межгосударственных («Новые фармакологические средства в ветеринарии», Санкт-Петербург, 1991;
1992;
1993) конференциях и Международном координационном совещании «Экологические проблемы патоло гии, фармакологии и терапии животных (Воронеж, 1997), Международных («Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения», Белгород, 1997, 1998, 1999;
2000 г;
2001, 2002, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007, 2010, 2011).
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 53 научные работы, в том числе 14 в ведущих научных изданиях, рекомендуемых ВАК Минобразования РФ, 2 патента и 1 монография.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 287 страницах компьютерного набора, иллюстри рована 69 таблицами, 29 рисунками и 14 диаграммами. Список литературы вклю чает 415 источников, из них 300 отечественных и 115 иностранных.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Этиологическая структура желудочно-кишечных и респираторных болез ней молодняка сельскохозяйственных животных.
2. Клинико-экспериментальное обоснование применения тилозинсодержа щих препаратов.
3. Разработка и результаты изучения комбинированных тилозинсодержащих препаратов биофрад и фрадифур.
4. Лечебная и профилактическая эффективность препаратов тилозина при болезнях молодняка сельскохозяйственных животных.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2. 1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Экспериментальные исследования по теме диссертации проведены на лабораторных животных, в том числе на 1525 мышах, 780 крысах, 152 кроликах.
Исследования в крупных промышленных хозяйствах проведены на 34525 сельско хозяйственных животных и птиц, в т.ч. 17570 свиньях, 11450 телятах, 1525 овцах, 3980 курах.
Лабораторных животных получали из питомников ВАСХНИЛ и АМН СССР, референтные штаммы микоплазм, ахолеплазм из Украинского НИВИ. При изучении антимикробной активности препаратов были использованы также рефе рентные (музейные) и полевые штаммы эшерихий, сальмонелл, пастерелл и ста филококков.
При проведении исследований использовали зарубежные и отечественные простые и комбинированные тилозинсодержащие препараты: фармазин, тилан, тилозина тартрат, фрадизин, фрадифур и биофрад.
Этиологию гастроэнтеритов и пневмоний животных изучали комплексно на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных, ре зультатов бактериологических, серологических, гематологических и иммунобио химических методов исследований. Для характеристики клинического состояния у животных измеряли температуру тела (ректально), определяли частоту пульса и дыхания, характер носовых выделений и кала. Перед каждым опытом для прове дения предварительных морфологических и бактериологических исследований проводили убой двух больных гастроэнтеритами и пневмониями поросят. Кроме того, до и после применения препаратов от 3-5 животных каждой группы брали носовые выделения для изоляции и идентификации микроорганизмов. Тампоны с материалом помещали в пробирки со средой для выращивания микоплазм. Посе вы проводили на МПБ, МПА с 5 % крови барана, шоколадный агар, казеиноуголь ный агар (КУА), агар Эндо, среду Китт-Тароцци, модифицированную среду ВИЭВ с ингибиторами для выделения микоплазм и ахолеплазм. Посевы инкуби ровали в термостате при 370С. После 18-24 часовой инкубации изучали культу рально-биохимические, морфологические и тинкториальные свойства выделен ных культур. Патогенность бактерий, кроме микоплазм и ахолеплазм, определяли на белых мышах. Видовую принадлежность изолированных бактерий устанавли вали с помощью определителя D. Bergey (1997) и определителя зоопатогенных микроорганизмов под редакцией М.А Сидорова (1995). Типизацию кокковой ми крофлоры проводили согласно «Рекомендациям по индикации и идентификации стафилококков и стрептококков» (1976);
пастерелл согласно «Методическим ре комендациям по лабораторной диагностики инфекционных пневмоний свиней, вызванных микоплазмами, пастереллами и бордетеллами» (1983);
выделение ми коплазм и ахолеплазм в соответствии с «Методическими рекомендациями по вы делению, культивированию и идентификации микоплазм, ахолеплазм и уреа плазм» (1981);
энтеробактерий с учетом «Наставления по бактериологической диагностике колибактериоза сельскохозяйственных, промысловых животных и птиц» (1974);
брахиспиры выделяли и культивировали на ПЖТСЛА (полужидком триптиказослизистом агаре);
серологическую типизацию сальмонелл и эшерихий в РА с О-и Н-агглютинирующими сальмонеллезными сыворотками, изготовлен ными Краснодарской биофабрикой и О-коли сыворотками, изготовленными Ар мавирской биофабрикой согласно «Наставлению по применению агглютинирую щих О-коли сывороток» (1980) и «Методическим указанием по применению саль монеллезных монорецепторных О-и Н-аглютинирующих адсорбированных сыво роток для идентификации сальмонелл» (1978).
Для выявления антител к возбудителям вирусных и хламидийной инфекций использовали стандартные биофабричные антигены: в РСК на хламидиоз и адено вирусную инфекцию - Одесского предприятия по производству бактерийных пре паратов, в РТГА на грипп и парагрипп - Ленинградского научно-исследователь ского института вакцин и сывороток и Свердловского института вирусных вак цин, для энтеро- и коронавирусов в РН-штаммы вирусов, полученных в Укра инском НИВИ и ВГНКИ, а для РНГА- эритроцитарный диагностикум ВИЭВ.
Диагностикумы применяли согласно прилагаемым к ним наставлениям.
Для изучения физиолого-биохимических изменений в организме сельскохо зяйственных животных при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка сельскохо зяйственных животных, а также влияния технологических факторов (транспорти ровки и перегруппировки) на возникновение и распространение гастроэнтеритов и пневмоний до стрессового воздействия и спустя 1, 10, 15, 30, 35 и 60 дней из кровеносных сосудов брали кровь, в которой исследовали содержание эритроци тов и лейкоцитов на счетчике частиц Культер Каунтер (Франция), гемоглобина гемометром Сали и гемоглобинцианидным методом, гематокрита на спиральной центрифуге MPV-310 (Польша), СОЭ - по Панченкову, лейкограмму - методом подсчета 200 клеток, окрашенных по Романовскому-Гимза, с вычислением про центного содержания каждого вида, бактерицидную активность сыворотки крови по методу О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), комплементарную актив ность - по О.В. Бухарину и Н.В. Васильеву (1974), лизоцимную активность по К.А. Каграмановой и З.В. Ермольевой (1966), фагоцитарную активность лейкоци тов, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число - по В.С. Гостеву (С.И. Плящен ко, В.Г. Сидоров, 1979), содержание общего белка - рефрактометрически, бел ковых фракций сыворотки крови - методом Олла и Маккорда в модификации Кар пюка (1962), количественное определение классов иммуноглобулинов - радиаль ной реакцией преципитации по Манчини (1983), содержание суммарных иммуно глобулинов - по А.Д. Мак Юан с соавторами (1970).
Для установления взаимосвязи зоогигиенических показателей воздуха поме щений свиноводческих комплексов с заболеваемостью поросят пневмониями определяли температуру и относительную влажность воздуха психрометром Асмана (МВ-4М), скорость воздуха – кататермометром, содержание аммиака при помощи прибора УГ-2, углекислого газа по Прохорову, бактериальную загрязнен ность-методом осаждения.
Антимикробную активность тилозинсодержащих и других препаратов (фра дизина, фармазина, тилозина, левомицетина, тетрациклина, пенициллина, стреп томицина, неомицина, мономицина, гентамицина, эритромицина, полимиксина) в отношении референтных штаммов микоплазм, ахолеплазм, а также полевых культур эшерихий, пастерелл и золотистого стафилококка изучали на жидких и плотных питательных средах с применением индикатора 2,3,5 - трифенилтетразо лий хлорида с определением бактерицидного и бактериостатического действия препаратов. МБцК определяли путем высева из двух-трех последних пробирок, в которых наблюдали отсутствие роста. Фракционно-ингибирующую концентра цию (ФИК) определяли делением активности композиции препаратов на актив ность компонента в чистом виде и умножали на долевое содержание компонента в композиции. Чем она меньше, тем сильнее потенцируется данное средство дру гим, входящим в композицию. Индекс создаваемого соединения определяли сло жением ФИК составляющих ингредиентов композиции. Если он меньше единицы, то имеет смысл применять такое средство, чем в отдельности его составляющие.
Фармацевтические исследования проведены в соответствии с принятой тех нологией лекарственных форм (Н.А. Муравьев, 1988) и требованиями Государ ственной фармакопеи 10 и 11. Сконструировано 2 порошкообразных тилозинсо держащих препарата.
Оценку безвредности препаратов проводили в соответствии с ГФХ на бес породных белых крысах со средней массой тела 160-250 г. Испытуемые препара ты вводили в дозах и сроки, в три раза превышающие терапевтические.
Комплекс токсикологических исследований включал определение острой и хронической токсичности, тератогенного и эмбриотоксического действия. По этим показателям изучено 4 препарата.
В начале, середине и конце экспериментов в крови и сыворотке определяли вышеуказанные морфологические и иммунобиохимические показатели, а у телят, поросят, ягнят и цыплят, кроме того, основные показатели углеводного, липидно го, минерального и белкового обменов: глюкозу - ферментативным методом, об щие липиды - сульфофосфованилиновым реактивом, мочевину - по реакции с диа цетилмонооксимом, бета-липопротеиды-турбодиметрическим методом, холесте рол - по Ильку, аминокислоты и другие биологически активные соединения: гид роксипролин, серин, треонин, бета-аминоизобутиловую кислоту, аргинин, трипто фан, 3-метилгистидин, гистидин, 1- метилгистидин, лизин, орнитин, аланин, фенилаланин - на автоматическом аминокислотном анализаторе ААА-339 (Фран ция). Активность щелочной фосфатазы определяли по гидролизу бета-глицеро фосфата (по Боданскому), а аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансфера зы по Райтману и Френкелю (1957).
Фармакокинетику тилозинсодержащих препаратов изучали на лаборатор ных - ( крысы) и сельскохозяйственных ( поросята) животных с определением действующего вещества тилозина. Препарат назначали в течение 10 дней в терапевтической дозе. Через 3, 6, 12, 24 и 48 часов после прекращения его введе ния проводили убой животных и отбирали пробы внутренних органов (печени, почки, селезенки, легких, сердца, желудка, тонкого и толстого кишечника), тка ней (кожи, мышцы, крови), содержимого желудка и ободочной кишки. В качестве контроля использовали гомогенаты тех же органов от животных, не получавших препараты. Исследования ДВ - тилозина было проведено спектрофотометриче ским методом на спектрофотометре СФ-26 по модифицированной нами методике, ранее разработанной в лаборатории фармакологии и фармации ВНИВИПФиТ Ан типовым В.А.(1982г.) совместно с сотрудниками лаборатории химической очистки ВНИИБП (Е.Б. Кругляк, Л. Слепова, Л.М. Апенянская, Г.В. Дембо).
Ветеринарно-санитарная оценка качества мяса включала органолептиче скую оценку вкусовых качеств мяса и бульона, определение концентрации водо родных ионов с помощью рН-метра через 1 час после убоя, бактериальной обсе мененности туши методом мазков отпечатков с поверхностных и глубоких слоев мышц, реакций на пероксидазу, формольной и с сернокислой медью.
В опыте на белых мышах изучали влияние тилозинсодержащих препаратов на развитие и течение бордетеллезной, сальмонеллезной, пастереллезной и стафи лококковой инфекций. Для воспроизведения инфекций использовали минималь ную летальную дозу (DLM). Для определения DLM сальмонелл, пастерелл, борде телл и стафилококков были подобраны 128 белых мышей. Использовали суточ ные агаровые культуры, которые смывали физиологическим раствором. Опреде ляли концентрацию микробных клеток по оптическому стандарту мутности и до водили ее для бордетелл и сальмонелл до 1 млрд., пастерелл - 1 млн., стафилокок ков - 4 млрд. Суспензии микроорганизмов вводили внутрибрюшинно в дозах 0,05;
0,1;
0,15;
0,2;
0,25;
0,3;
0,35;
0,4. На каждую дозу брали по 4 мыши. При определе нии индекса защиты (эффективности) препарата использовали формулу В.Д. Бе лякова (1961):
Е= 100 (А - В), где Е - индекс защиты;
в A - процент выживших мышей в опыте;
B - в контроле;
в - процент павших мышей в контроле;
В основной опыт по каждому препарату взято 200 белых мышей (20 групп по 10 животных). Минимальная летальная доза для сальмонелл и бордетелл соста вила 200 млн., пастерелл 250 тыс. и стафилококков 1,6 млрд. микробных клеток.
Животных 1 - 5 групп заражали внутрибрюшинно бордетеллами, а 6 - 10 групп сальмонеллами в дозе 0,2 мл, 11 - 15 пастереллами в дозе 0,25 и 16 - 20 стафило кокками в дозе 0,4 мл. Животным 2, 7, 12, 17 групп за 3 часа до заражения, белым мышам 3, 8, 13, 18 одновременно с ним, животным 4, 9, 14 и 19 через 3 часа, мы шам 5, 10, 15 и 20 групп одновременно с ним и через 7 часов после заражения вводили в желудок с помощью шприца с иглой с оливой в крахмальной суспензии исследуемые препараты. Кроме того, мышам 5, 10, 15 и 20 групп продолжали вво дить препараты 2 раза в день в течение 7 суток. Животные контрольных групп (1, 6, 11 и 16) препараты не получали. За подопытными животными вели наблюдение до гибели, а при ее отсутствии в течение 10 дней, учитывали заболеваемость, па деж и выздоровление. Павших мышей вскрывали и проводили бактериологиче ские исследования крови сердца, почек, печени, селезенки.
Экономическую эффективность применения препаратов тилозина определя ли в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности ве теринарных мероприятий» (1982).
Полученный цифровой материал подвергали математической обработке с ис пользованием методов математической статистики, принятыми в биологии и меди цине (Е.К. Меркурьев, 1964 и пакета прикладных программ Microsoft Excel 97).
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Этиологическая структура гастроэнтеритов и пневмоний молодняка сельскохозяйственных животных 3.1.1. Влияние различных технологических стресс-факторов на возникновение и распространение болезней молодняка Для определения влияния различных стресс-факторов на возникновение и распространение заболеваний молодняка с желудочно-кишечным и респиратор ным синдромами было проведено три серии опытов.
В первом опыте изучали влияние внутрихозяйственных перегруппировок, во втором и третьем - транспортировки и связанных с ними смены условий содер жания и кормления на естественную резистентность организма поросят.
Транспортировку животных осуществляли автотранспортом из хозяйств-по ставщиков на межхозяйственное предприятие, удаленных друг от друга во 2-ом опыте на 45 и в 3-ем - 15 километров.
У животных до воздействия стресс-факторов и через 15 и 30 дней после него проводили морфологические, биохимические и иммунологические исследо вания крови.
Проведенными исследованиями установлено, что у поросят под действием перегруппировок (I опыт) происходило снижение бактерицидной активности cы воротки крови через 4 часа исследований на 3,0 и 4,0% (15 и 30 день), фагоцитар ного индекса и содержания эритроцитов на 14,0% (15 день). После транспорти ровки у животных отмечено уменьшение содержание гемоглобина на 17,0 (I опыт, 60 день), 18,0 и 5,0% (2 опыт, 20 и 30 дни), эритроцитов на 16,0 и 13,0% (2 и опыты, 20 дни), лейкоцитов 75,0% (3 опыт), при увеличении их на 38,0% во 2-ом опыте (20 дни), уменьшение фагоцитарного числа на 22,0% (2 опыт,10 день), комплементарной активности на 33,0% (2 опыт, 35 день), лизоцимной 62,0% ( опыт, 35 день), 48,0 и 59,0% (3 опыт, 10 и 20 дни), бактерицидной активности че рез 2 часа исследований на 33,0% (2 опыт, 20 день) через 4 часа - 6 и 6 часов 4,0%, бактерицидной напряженности - 13,0% (2 опыт, 20 день), снижение содер жания юных нейтрофилов на 150,0;
48,0 и 100,0% (2 опыт, 10,20, 35 дни) с увели чением последних к 60 дню в 4 раза, а в 3-ем опыте в 3 и 2 раза (10 и 20 дни), уменьшение содержания моноцитов на 64,0 (2 опыт, 10 день), сегментоядерных нейтрофилов на 70,0% (3 опыт, 20день), лимфоцитов 9,0% (2 опыт, 20 день) при возрастании последних на 29,0% (3 опыт, 20 день), а также эозинофилов и палоч коядерных нейтрофилов на 88,0 и 15,0% (2 опыт, 10 и 20 дни).
Во 2-ом опыте гастроэнтеритами и пневмониями заболело 15 (43%), из них пало 9 (60,0%), в 3-ем 12 (76,0%), пало 7 (58,0%), в 1-ом 5 (25,0%), пало 2 (40,0%).
Среднесуточные приросты массы тела составили соответственно 276,0;
230,0 и 243,0 г.
Изучение влияния различных зоогигиенических показателей на заболевае мость животных гастроэнтеритами и пневмониями проведено на поросятах групп доращивания. Установлено, что температура воздуха составляла 20,3 (первый корпус) и 21,7 С (второй корпус) относительная влажность 68,1 и 68,4%, скорость движения воздуха 0,16 и 0,12 м/с, содержание углекислого газа 0,18 и 0,15%, ам миака 7,6 и 7,71 мг/м3, бактериальная загрязненность воздуха 90,9 и 111,3 тыс.
микробных клеток/м3. Заболеваемость поросят в них соответственно составила 21,1 и 29,8%.
Проведенными исследованиями установлено, что заболеваемость поросят групп доращивания гастроэнтеритами и пневмониями в наибольшей степени за висела от уровня бактериальной загрязненности воздуха помещений.
На основании полученных данных можно сделать вывод, что перегруппи ровки и транспортировка снижают естественную резистентность поросят в хозяй ствах с промышленной технологией: происходит уменьшение содержания эритро цитов и насыщения их гемоглобином;
комплементарной;
лизоцимной;
бактери цидной активности сыворотки крови и опсонофагоцитарной лейкоцитов.
Проведенными исследованиями периферической крови у больных пневмо ниями и гастроэнтеритами поросят и телят установлено снижение содержания эритроцитов и гемоглобина при увеличении количества лейкоцитов и гамма-гло булинов.
3.1.2. Роль бактерий в этиологии гастроэнтеритов и пневмоний молодняка животных Для определения роли микрофлоры в этиологии и патогенезе болезней мо лодняка проводили бактериологические исследования каловых масс, носовых вы делений от 5 больных гастроэнтеритами и пневмониями телят, ягнят, поросят и цыплят и паренхиматозных органов от убитых с диагностической целью больных животных (n - 5). Из каловых масс больных гастроэнтеритами животных были изолированы и идентифицированы следующие микроорганизмы:
- от поросят - энтеропатогенные эшерихии, сальмонеллы, стафилококки, стрептококки, энтеробактер;
- телят - патогенные эшерихии, сальмонеллы, протей, стафилококки, стреп тококки;
- ягнят - патогенные эшерихии, сальмонеллы, стафилококки и пастереллы;
- цыплят - патогенные эшерихии, сальмонеллы и стафилококки;
Из паренхиматозных органов больных гастроэнтеритами выделены:
- от поросят из крови сердца стрептококки;
печени - сальмонеллы и неиденти фицированная микрофлора;
брыжеечных лимфоузлов - патогенные сальмонеллы;
телят - из крови сердца - пастереллы;
печени - сальмонеллы;
почек - эшери хии;
селезенки - сальмонеллы, стафилококки, протей;
ягнят -из крови сердца патогенные пастереллы;
почек - сальмонеллы;
селе зенки - стафилококки;
цыплят - из крови сердца - стафилококки;
печени - сальмонеллы, эшерихии и нетипированная микрофлора;
брыжеечных лимфоузлов - сальмонеллы.
При бактериологическом исследовании носовых выделений больных пнев мониями животных была изолирована и идентифицирована следующая микро флора:
от поросят - эшерихии и сальмонеллы, стафилококки и стрептококки, па стереллы и клебсиеллы, сенная палочка. Патогенными из них оказались первые пять видов;
телят - эшерихии, сальмонеллы, стафилококки, стрептококки, пастереллы, обладающие патогеными свойствами и непатогенная сенная палочка. Из 80% проб была изолирована не дифференцируемая микрофлора, которая в 50% случа ев обладала патогенными свойствами;
от ягнят - в 20% случаев эшерихии, сальмонеллы, пастереллы, стрептокок ки, сенная палочка, в 60% случаев неидентифицированная микрофлора. Первые четыре вида микроорганизмов обладали патогенными свойствами в 20% случаев, а нетипированная микрофлора в 30%.
При бактериологическом исследовании патологического материала (пора женные участки легких, бронхиальные и средостенные лимфоузлы, паренхима тозные органы) от убитых с диагностической целью больных пневмониями жи вотных, была выделена различная микрофлора: из легких поросят были изолиро ваны эшерихии, сальмонеллы, пастереллы, стафилококки, стрептококки, из них сальмонеллы, пастереллы и стрептококки обладали патогенными свойствами в 100% случаев, а эшерихии и стафилококки в 50%;
телят - эшерихии, сальмонеллы, пастереллы, стрептококки. Патогенность их была выявлена в 100, 100, 60 и 50% случаев соответственно.
Из легких больных пневмонией ягнят были выделены и идентифицирова ны эшерихии (патогенные), сальмонеллы (50% патогенные);
стрептококки (пато генные).
Проведенными исследованиями установлено, что при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка сельскохозяйственных животных микрофлора каловых масс, носовых выделений и паренхиматозных органов представлена практически одними и теми же таксономическими единицами, отличаясь лишь частотой выде ления и степенью патогенности.
Таким образом, в этиологии гастроэнтеритов и пневмоний молодняка сель скохозяйственных животных принимают участие грамположительные (стафило кокки) и грамотрицательные (эшерихии, сальмонеллы и т.д.) микроорганизмы, ко торые, как правило, выделяются в различных сочетаниях.
Несмотря на сходство микрофлоры, выделяемой при указанных патологиях следует отметить, что видовой состав бактерий, изолированных при гастроэнтери тах, более разнообразен. Патогенность возбудителей, выделяемых из каловых масс при гастроэнтеритах была менее выражена по сравнению с таковой у возбу дителей пневмоний, выделяемых из носовой слизи. Патогенность микрофлоры изолированной из паренхиматозных органов при гастроэнтеритах и пневмониях мало чем отличалась. На основании клинических наблюдений установлена зако номерность в возникновении гастроэнтеритов и пневмоний. Последние, как пра вило, регистрируются вслед за гастроэнтеритами и часто патология протекает в виде пневмоэнтеритов.
До 70% выделенных бактерий были слабочувствительными или устойчивы ми к ранее применяемым с целью лечения препаратам: фармазину, левомицетину, тетрациклину, пенициллину, стрептомицину, неомицину, мономицину, гентами цину, эритромицину, полимиксину, тетрациклину.
Резистентные к химиотерапевтическим средствам штаммы выявлялись у всех микроорганизмов и ко всем применявшимся в опытах препаратам, кроме сульгина и фуразонала. В отдельных случаях регистрировалась перекрестная устойчивость стафилококков, эшерихий и сальмонелл.
Полученные данные по преодолению фуразоналом адаптации возбудителей к препаратам тилозина и другим химиотерапевтическим средствам свидетельству ют о том, что фуразонал препятствует формированию резистентности возбуди телей к тилозину и является перспективным с точки зрения создания комбиниро ванных препаратов тилозина.
Установлено, что антимикробная активность тилозина тартрата в комбина ции с фуразоналом в отношении возбудителей гастроэнтеритов и пневмонии по росят не изменяется и после 30 пассажей, что свидетельствует об ингибировании плазмид резистентности у исследуемых микроорганизмов с помощью фуразонала.
3.2. Разработка антимикробных композиций на основе тилозина 3.2.1. Антимикробная активность препаратов тилозина, нитрофуранов и антибиотиков Результаты изучения антимикробной активности различных модификаций тилозина представлены в таблице 1.
Очищенный от мицелия и культуральной жидкости тилозина тартрат прояв ляет высокую антимикробную активность в отношении золотистого стафилококка и микоплазм (1,2-5,2 мкг/мл). Представители семейства Enterobacteriaceae - (E.
coli, S. ch.suis), а также P. multocida были более устойчивы к препаратам. При пересчете на действующее вещество фрадизины (особенно их концентрированные формы) по сравнению с тилозином были более активны как в отношении грампо ложительной, так и грамотрицательной микрофлоры, что, по видимому, связано с большим содержанием в них фосфолипидных фракций, обладающих антимикроб ной активностью.
Кроме того, нами была определена чувствительность возбудителя дизенте рии к различным тилозинсодержащим препаратам.
Установлено, что брахиспиры оказались чувствительны к отечественному тилозину в концентрации 15,92±1,59 мкг/мл и слабо чувствительны к фрадизину, фармазину. МБСК колебалась от 18,75±0,00 до 75,00±0,00 мкг/мл).
Таблица Антимикробная активность различных модификаций тилозина Бактериостатическое действие в пересчете на тилозин в мкг/мл Наимено- Кол-во вание исследован- политило фрадизин- фрадизин- фрадизин- тилозин культур ных культур зин 10 20 50 тартрат карбоксилат 150 E.coli 5 145-190 140-185 125-175 150- 130 S.ch.suis 5 135-145 125-130 120-125 130- 140 P.multocida 5 135-140 120-135 115-125 140- St.aureus 5 1,2-2 1-2 1-2 2-5 2- M.hyorhi 3 3,5-5,2 3,5-5,2 3,5-5,2 3,5-5,2 3,5-5, nis Следовательно, для обеспечения полного терапевтического эффекта тилози на тартрата у свиней со средней тяжестью течения болезни достаточно довести его содержание в толстом отделе кишечника до брахиспиростатической (25, мкг/мл). В этом случае организм больного животного способен освободиться от возбудителя дизентерии, подвергшегося воздействию антибиотика.
Выполненные нами 10-кратные пассажи культур брахиспир на полужидком триптиказослизистом агаре (ПЖТСЛА), содержащем возрастающие концентра ции тилозина тартрата, показали достаточно медленное формирование устойчиво сти. Так, через пять пассажей его бактериостатическая концентрация повысилась в 2,9 раза (75,00±0,00 мкг/мл) и через 10 - в 17,4 раза (450,00±0,00 мкг/мл).
Исходя из вышеизложенного можно сделать вывод, что препараты тилозина наиболее эффективны в отношении стафилококков, микоплазм и возбудителя ди зентерии свиней Brachispira hyodysenteriae. Активность их в отношении сальмо нелл, эшерихий, пастерелл и бордетелл оказалась ниже. Для повышения их анти микробной активности наиболее приемлемым в композиции оказался биовит-120.
Учитывая полученные ранее данные, для дальнейшего изучения были ото браны две композиции: фрадизин плюс фуразонал и фрадизин плюс биовит.
Методом выявления фракционных ингибирующих концентраций и вычис ления фракционно-ингибирующей концентрации индекса рассчитаны их опти мальные соотношения.
Установлено, что фракционные ингибирующие концентрации и индекс фра дизина и фуразонала составили для кишечной палочки – 0,1;
0,1;
0,2;
сальмонелл – 0,1;
0,1;
и 0,2;
пастерелл – 0,1;
0,1;
и 0,2 соответственно, а аналогичные показа тели фрадизина и биовита для кишечной палочки – 0,25;
0,2;
0,45;
сальмонелл – 0,3;
0,2;
и 0,5;
пастерелл – 0,2;
1,9;
и 2,1.
На основании представленных выше исследований соотношения для фради зина и биовита установлены как 1: 1, а для фрадизина и фуразонала 3:1 по дей ствующему веществу.
Исходя из того, что биовит и фуразонал потенцируют антимикробную ак тивность фрадизина и его ДВ тилозин более чем на 50%, его терапевтическая доза по действующему веществу в композиции определена как 5 мг/кг.
Фрадизин также обладает потенцирующим влиянием на фуразонал и биовит и поэтому их дозы в предлагаемых к клиническому изучению композициях также уменьшены на 50% от рекомендуемых существующими наставлениями.
С учетом полученных данных созданы препараты биофрад (фрадизин 40 + биовит-120) и фрадифур (фрадизин-40 + фуразонал).
Проведенными исследованиями установлено, что антимикробная актив ность фрадифура и биофрада выше, а формирование устойчивости к ним у возбу дителей болезней развивается значительно медленнее, чем к фрадизину. Так, по сле 30 пассажей резистентность кишечной палочки, сальмонеллы и стафилококка к фрадизину увеличилась в четыре, тогда как к фрадифуру-только в два раза.
3.2.2. Фармакотоксикологические свойства тилозинсодержащих препаратов Результаты токсикологических исследований тилозинсодержащих препара тов свидетельствуют о том, что они являются малотоксичными, наиболее безопас ным способом их введения является энтеральный, а их комбинированные формы в расчетных терапевтических дозах не вызывают каких-либо осложнений в орга низме животных.
Разработанные препараты при длительном их применении в дозах, трех кратно превышающих терапевтические, не оказывают отрицательного влияния на показатели крови телят, поросят, ягнят. Более того, они способствуют увеличе нию массы тела лабораторных (крысы) и сельскохозяйственных (поросята, телята, ягнята) животных, а также повышают содержание в крови гемоглобина и компле ментарную активность сыворотки крови у поросят группы доращивания.
Препараты тилозина в повышенных дозах не оказывали отрицательного влияния на основные физиологические системы организма. При их применении клинически не регистрировались синдромы и симптомы сердечной недостаточно сти, на вскрытии не обнаруживали патологоанатомических признаков поражения сердца, верхних и нижних дыхательных путей, легких, различных отделов пище варительного аппарата, печени, почек и других органов.
Они не обладали местнораздражающими свойствами, эмбриотоксическим и тератогенным действием, препараты не увеличивали показатели пред- и постим плантационной гибели эмбрионов. Однако, при энтеральном применении крысам и поросятам группы доращивания токсических доз (30 мг/кг по ДВ) изучаемых нами препаратов тилозина (тилозина тартрата, фрадизина-40, биофрада и фради фура) в кале появлялся с-реактивный белок. При использовании профилактиче ских и терапевтических доз экссудативного белка не обнаруживали.
При вскрытии лабораторных животных морфологических изменений орга нов и тканей не выявляли.
После применения изучаемых препаратов тилозина биохимический состав скелетных мышц лабораторных (крысы) и сельскохозяйственных (поросята) жи вотных существенно не изменялся. Было отмечено лишь увеличение содержания суммы гидролизных аминокислот за счет изолейцина и метионина. Основные по казатели, учитываемые при ветеринарно-санитарной экспертизе мышц и органов сельскохозяйственных животных (пробы формольная, пероксидазная и с серно кислой медью), оказались без существенных изменений.
Проведенными исследованиями по изучению фармакокинетики препаратов тилозина установлено, что, тилозин из изучаемых препаратов медленно всасыва ется в желудочно-кишечном тракте, но, поступив в кровь, равномерно распреде ляется по органам и тканям. Выделяется он в основном с желчью и тем самым со здает в ней повышенные концентрации, которые достигают максимального содер жания через 24 часа (второй пик) после применения.
При назначении препаратов тилозина больным дизентерией свиньям кон центрации его в сыворотке крови колеблются в незначительных брахиспиростати ческих пределах. В кале повышенные его количества регистрируются через 3 и 24-48 часов после введения.
После перорального применения препаратов в дозах 5;
10 и 20 мг/кг массы тела установлено, что уже первые две дозы (5 и 10 мг ) создают в кишечном химу се необходимые антимикробные концентрации, губительные для находящихся здесь микроорганизмов, участвующих в патологическом процессе.
3.2.3. Изучение профилактической и химиотерапевтической эффективности тилозинсодержащих препаратов при экспериментальных инфекциях белых мышей Для воспроизведения бордетеллезной, сальмонеллезной, пастереллезной и стафилококковой инфекций использовали минимальную летальную дозу (DLM) возбудителей, которая, для бордетелл и сальмонелл составила 200 млн. микроб ных клеток в объеме 0,2 мл., пастерелл 250 тыс. - 0,25 мл. и стафилококков 1, млрд. в 0,4 мл.
Проведенными исследованиями установлено, что индекс защиты тилозина тартрата, фрадизина, биофрада и фрадифура при их применении за 3 часа до зара жения белых мышей был максимальным. При однократном введении препаратов одновременно с заражением он был ниже. Индекс защиты снижался при одно кратном применении препаратов через 3 часа после заражения. Введение препара тов одновременно с заражением и спустя 7 часов после него и последующее на значение их в течение 7 суток 2 раза в день обеспечивало довольно высокий ин декс защиты. От павших животных из крови миокарда, печени, почек и селезенки реизолировали исходные культуры.
Индекс защиты комбинированных препаратов (биофрада и фрадифура) был выше, чем тилозина тартрата и фрадизина.
Таким образом, применение тилозина тартрата, фрадизина, биофрада и фра дифура за 3 часа до заражения обеспечивает наиболее высокий эффект при про филактике изучаемых инфекций. При однократном введении препаратов тилозина одновременно с заражением и через 3 часа после него индекс защиты меньше, а назначение лекарств одновременно и через 7 часов после заражения и последую щее введение его в течение 7 суток обеспечивает сравнительно высокий терапев тический эффект.
3.2.4. Разработка показаний к применению тилозинсодержащих препаратов 3.2.4.1. При гастроэнтеритах и пневмониях бактериальной этиологии Основываясь на данных антимикробной активности препаратов тилозина in vitro и in vivo и фармакотоксикологической характеристики проведено изучение их лечебно-профилактической эффективности при массовых болезнях телят, по росят, ягнят и цыплят, сопровождающихся желудочно-кишечными и респиратор ными расстройствами.
Профилактическую эффективность тилозина тартрата и фрадизина опреде ляли при 7-суточном их введении в дозе 5 мг/кг массы тела животных, а биофрада и фрадифура - 2,5 мг/кг по ДВ (тилозину).
Лечебная эффективность изучена при 10-суточном введении тилозина тартрата и фрадизина в дозе 10 мг/кг массы тела, а биофрада и фрадифура - мг/кг по ДВ (тилозину).
Эффективность препаратов при профилактике гастроэнтеритов изучена в двух сериях опытов. В первой серии эффективность фрадизина, фрадифура и биофрада при профилактике гастроэнтеритов поросят составила от 75 до 85% при 40 %-ой заболеваемости в контроле, гастроэнтеритов телят-75-80% при заболевае мости в контроле 95%;
ягнят 80-90% (40%) и цыплят 65-70% (75%).
Во второй серии опытов изучали эффективность фрадизина и тилозина в сравнении с фармазином при профилактике гастроэнтеритов телят. Установлено, что фрадизин и тилозин оказывали профилактический эффект соответственно в 80 и 85% случаев, а фармазин - в 75% при заболеваемости в контроле 45%. Ско рость роста телят при использовании тилозина тартрата и фрадизина (250 и 270г) была больше, чем у животных, получавших фармазин (260г) и в контроле (230г).
При применении препаратов для профилактики пневмоний у поросят эффектив ность составила 80-90%, пневмоний телят - 80-85 % и пневмоний ягнят – 70 - % при заболеваемости в контрольных группах 35, 30 и 29% соответственно.
Лечебную эффективность препаратов тилозина определяли при гастроэнте ритах телят, поросят и ягнят. Применение тилозинсодержащих препаратов в дозе 10 мг/кг по ДВ два раза в сутки обеспечило выздоровление 50-60% телят, 73-80 % поросят и 50-70% ягнят (таблица 2).
Под влиянием биофрада в крови телят отмечено увеличение содержания эритроцитов, гемоглобина, общего белка, альбуминов и уменьшение к 15 и дням количества лейкоцитов в зависимости от тяжести воспалительного процесса за счет палочкоядерных нейтрофилов.
В двух других опытах на больных пневмонией поросятах выздоровление на ступало в 88 и 80 % случаев. К окончанию курса применения препаратов показа тели температуры тела, пульса и дыхания нормализовывались. Рецидивы не на блюдались.
В следующем опыте лечебная эффективность тилозина тартрата и фармази на при пневмониях поросят составила 73-76 %.
При изучении лечебно-профилактической эффективности препаратов тило зина при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка определяли влияние их на функции органов пищеварения и мочеотделения.
Проведенными исследованиями установлено, что физические свойства кала не отличались от таковых контрольных животных. Запах фекалий был естествен ным, цвет их не изменялся, форма и консистенция до- и после применения препа ратов были идентичными.
Таблица Лечебная эффективность тилозинсодержащих препаратов при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка Количество здоровых Было подвергнуто обра- Лечебная эффективность животных на конец Применяемые ботке (%) опыта препараты телят поросят ягнят телят поросят ягнят телят поросят ягнят при гастроэнтеритах 1. фрадизин 10 15 10 7 11 7 70 75 2. фрадифур 10 15 10 7 12 8 80 80 3. биофрад 10 15 10 8 12 8 80 80 4. биовит 10 15 10 6 7 6 60 46 при пневмониях 1. фрадизин 10 15 10 6 10 7 60 61 2. фрадифур 10 15 10 6 11 8 60 75 3. биофрад 10 15 10 7 11 7 70 75 4. биовит 10 15 10 6 10 6 60 61 Химическими исследованиями в кале не установлено увеличения количе ства желчных (проба с соляной кислотой и полуторахлористым железом, Фуше и Шлезингера) и кровяных (проба с пирамидоном, Вебера, Адлера и Грегенсена) пигментов, не выявлено также положительной реакции на нарушение структуры белков и наличия в сыворотке грубодисперсных глобулинов (пробы Вельтмана, сулемовая и тимоловая). Результаты, полученные указанными качественными ре акциями на состояние белкового и пигментного обменов, подтверждались количе ственными методами исследований (метод Френкеля и Райтмана), результаты ко торых свидетельствуют об отсутствии токсического действия препаратов на пе чень.
Установлено, что акты мочеиспускания у поросят и телят всех опытных групп были регулярными, произвольными, безболезненными, в естественной позе. Моча у животных светло-желтого цвета, прозрачная (без примеси слизи и крови), водянистой консистенции, специфического запаха, с концентрацией водо родных ионов у свиней 6,5-7,8;
а у телят 7,0 – 7.3.
3.2.4.2. При инфекционных болезнях молодняка Исследуемые препараты были эффективны при колибактериозе, сальмонел лезе, пастереллезе, бордетеллезе, стафилококкозе, дизентерии и стрептококкозе животных. Так, в испытаниях на поросятах профилактическая эффективность ти лозина тартрата при пастереллезе составила 93%, при 80%-ной заболеваемости в контроле, а фрадизина-40 при бордетеллезе поросят 95% при заболеваемости в контрольной группе 32% (таблица 3).
Лечебная эффективность тилозина тартрата при эшерихиозах поросят и стрептококкозах цыплят составила 80 и 84%, а контрольного препарата - тилана при эшерихиозе - 73,3 и фрадизина-50 при стрептококкозе цыплят - 89%.
Опыты по изучению лечебно-профилактической эффективности тилозина тартрата были проведены на 126 больных дизентерией поросятах и 309 поросятах, контактировавших с больными животными.
С лечебной целью 10%-ный раствор препарата вводили внутримышечно один раз в день в течение трех суток, а с профилактической - однократно.
Доза антибиотика составляла 20 м/кг массы тела. Диагноз на дизентерию устанавливали с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков бо лезни, патологоанатомических изменений и световой микроскопии фецес.
Таблица Профилактическая эффективность тилозинсодержащих препаратов при инфекционных болезнях молодняка Установлено, что на второй день лечения у животных вместо диареи с при Количество Количество Количество Среднесуточный Применяемые животных в Профилактическая заболевших павших жи- прирост массы препараты опытной эффективность животных вотных тела группе Профилактика сальмонелеза поросят 1. тилозина 20 3 1 85 тартрат 2. фрадизин 20 2 - 90 3. фармазин 20 4 1 80 4. контроль 20 10 5 50 Профилактика колибактериоза ягнят 1. тилозина 15 3 - 80 тартрат 2. фрадизин 15 2 - 86,7 3. фармазин 15 3 - 80 4. контроль 15 6 2 60 месью в фекалиях крови наблюдали жидкие или водянистые испражнения, а в их ректальных пробах обнаруживали единичные брахиспиры. Некоторые животные выздоравливали полностью. На третий день лечения все животные были здоровы.
Кал был оформлен, брахиспиры в мазках из фецес не выявлялись, аппетит восста навливался. Во время опыта два поросенка пало. Причиной их гибели явилось не своевременное выявление болезни и к моменту лечения, животные были ослабле ны, плохо принимали корм и воду. Терапевтическая эффективность тилозинa тартрата составила 98,4%. После проведенного лечения в течение 3-недельного периода наблюдения рецидива заболевания не отмечали.
Контролем эффективности тилозинa тартрата служила группа больных по росят (n-22), которых лечили метронидазолом. Клинические признаки болезни у них исчезли на третий день лечения.
Профилактической обработке при дизентерии подвергли 309 поросят, кон тактировавших с больными животными. Из секций свинарника удаляли клиниче ски больных поросят и подвергали их лечению, а остальным - одно-кратно инъ ецировали тилозина тартрат в дозе 20 мг/кг массы тела. Аналогичным животным (n-23) контрольной группы антибиотик не вводили. При клиническом исследова нии случаев заболевания свиней дизентерией в опытной группе не регистрирова ли в течение 3-недель, а в контрольной заболело дизентерией 26% поросят.
Таким образом, поросятам с острым течением дизентерии 10%-ный водный раствор антибиотика целесообразно вводить внутримышечно один раз в день в течение трёх суток в дозе 20 мг/кг массы тела. Однократная инъекция тилозина тартрата в дозе 20 мг/кг массы тела свиньям, подозреваемым в заражении возбу дителем дизентерии, профилактирует возникновение заболевания.
4. Выводы 1. Широкое распространение желудочно-кишечных и респираторных болез ней (25-76%) в крупных животноводческих хозяйствах обусловлено воздействием на организм животных многочисленных технологических стресс-факторов (транс портировка, перегруппировки, повышенная контаминация помещений микроорга низмами и др.), снижающим естественную резистентность организма, патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, как в отдельности, так и в различных ассоциациях.
В этиологии желудочно-кишечных болезней чаще всего принимают уча стие: у поросят St.аureus, Е.соli. S.ch. suis, Str.pyogenes и патогенные представите ли рода Enterobacter;
у телят: St.аureus, Е.соli. S.dublin, Str.pyogenes и P.vulgaris;
у ягнят: St.аureus, Е.соli, S.dublin, P.multocida;
у цыплят: Е.соli, St.аureus.
Причинами респираторных болезней являются: у поросят - St. аureus, Е.соli.
S.ch.suis, Str.pyogenes, P.multocida;
у телят - St.аureus, Е.соli. S.dublin, Str.pyogenes, P.multocida, B.bronchiseptica;
у ягнят - St.аureus, Е.соli. S.dublin, B.bronchiseptica.
2. Выделяемая микрофлора при желудочно-кишечных и респираторных бо лезнях животных слабочувствительна и нечувствительна к большинству применя емых в ветеринарной практике препаратам (пенициллину, эритромицину, тетра циклину, фармазину, гентамицину, мономицину, неомицину и т.д.) и часто проявляла к ним множественную устойчивость.
3. Тилозина тартрат и фрадизин обладают широким спектром антимикроб ного действия, проявляя высокую активность в отношении грамположительной микрофлоры St.аureus, Str.pyogenes и менее выраженную в отношении грамотри цательных бактерий Е.соli. S.ch. suis и представителей рода Enterobacter, а также S.dublin, P.vulgaris, P.multocida, B.bronchiseptica и возбудителя дизентерии Brachispira hyodisenteriae.
Тилозина тартрат и фрадизин обладают профилактической и терапевтиче ской эффективностью при экспериментальных инфекциях белых мышей, вызван ных St.аureus, S.ch.suis, P.multocida и B.bronchiseptica. Индекс защиты у тилозина тартрата и фрадизина при профилактике бордетеллезной инфекции составил 63, и 71,0%, сальмонеллезной 56,0 и 50,0%, пастереллезной 50,0 и 50,0% и стафило кокковой инфекции 80,0 и 67,0%, при лечении соответственно 60,0 и 44,0%;
44, и 38,%;
44,0 и 38,0%;
40,0 и 43,0%.
4. Комбинированные препараты биофрад, содержащий тилозина тартрат и тетрациклин в соотношении 1:1 и фрадифур, состоящий из фрадизина и фуразона ла в соотношении 3:1 по ДВ, обладают широким спектром антимикробного дей ствия, проявляя более высокую активность, чем тилозина тартрат и фрадизин в отдельности в отношении грамположительной микрофлоры (St.аureus) и менее выраженную в отношении грамотрицательных микроорганизмов (Е. соli, S. chоlerasuis, S. dublin, P. vulgaris, P. multocida, B. bronchiseptica).
Биофрад и фрадифур обладают более выраженной, чем тилозина тартрат и фрадизин профилактической и лечебной эффективностью при эксперименталь ных инфекциях белых мышей, вызванных St. аureus, S. chоlerasuis, P. multocida и B. bronchiseptica. Индекс защиты биофрада и фрадифура при про филактике бордетеллезной инфекции составил 71,0 и 66,0%, сальмонеллезной 78,0 и 75,0%, пастереллезной 78,0 и 43,0% и стафилококковой инфекции 78,0 и 66,0%, а при лечении 57,0 и 50,0%;
33,0 и 62,%;
33,0 и 43,0%;
40,0 и 43,0%.
При комплексном применении тилозинсодержащих препаратов в комбина ции с фуразоналом и биовитом-120 медленнее и в меньшей степени формируется устойчивость у изучаемых микроорганизмов (St.аureus, Е.соli, S. chоlerasuis).
5. Препараты тилозина тартрат, фрадизин-40(50), биофрад и фрадифур отно сятся к 4 классу токсичности при энтеральном способе введения и не оказывают вредного воздействия на организм животных.
При энтеральном введении LD50 для тилозина тартрата составляет мг/кг, фрадизина-40(50) - 4700 мг/кг, биофрада 5000 мг/кг, фрадифура 4800 мг/кг;
подкожном соответственно 1500 мг/кг;
2100 мг/кг;
2500 мг/кг;
2100 мг/кг. При внутрибрюшинном введении тилозина тартрата LD50 составляет 700 мг/кг и вну тривенном - 550 мг/кг.
Тилозина тартрат, фрадизин-40(50), биофрад и фрадифур не вызывают тера тогенных и эмбриотоксических эффектов, не проявляют вредного действия на ор ганизм при энтеральном применении в дозах и сроки в три раза превышающие ре комендуемые для лечения.
Биофрад и фрадифур обладают меньшей токсичностью по сравнению c мо нотилозиновыми, содержащими один тилозин. Ветеринарно-санитарная оценка мышц и органов животных, длительное время получавших препараты тилозина, позволяет считать мясо и органы безвредными и не имеющими противопоказаний к употреблению их в пищу спустя 5 суток после окончания применения всех изу ченных средств.
6. Тилозинсодержащие препараты обладают широким фармакологическим действием на организм клинически здоровых и больных животных, характеризуе щемся:
- стимуляцией у здоровых и нормализацией у больных животных белкового ( увеличением содержания общего белка на 5-17% и глобулиновых фракций белка у здоровых животных и уменьшением уровня бета- и гамма-глобулиновых фрак ций до физиологических границ у больных;
повышением содержания свободных аминокислот в крови) обмена веществ;
- увеличением показателей клеточной и гуморальной защиты (опсонофаго цитарной реакции лейкоцитов, комплементарной, лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови) на 5 - 15 %;
7. Фармакокинетика тилозинсодержащих препаратов характеризуется до стижением максимальной концентрации действующего вещества - тилозина - в органах и тканях спустя 3-6 часов после применения и выведением его с желчью, мочой и калом в течение 24-48 часов.
Высокая концентрация тилозина при внутреннем назначении препаратов в до зах 5 и 10 мг/кг массы тела (по ДВ) сохраняется в желудочно-кишечном тракте в тече ние суток, а в органах и тканях она значительно ниже и неравномерна распределена.
В печени высокая концентрация тилозина наблюдается в первые 3-12 часов, которая более стабильна и по сравнению с уровнем в других органах сохраняется в последующие 24 часа, что свидетельствует о разрушении препарата и выведе нии его из организма с желчью.
8. Применение тилозинсодержащих препаратов клинически здоровым жи вотным после воздействия технологических стресс-факторов сопровождается по вышением общей неспецифической резистентности организма и приростом массы тела на 5-15%.
Препараты тилозина предупреждают возникновение гастроэнтеритов у по росят в 75 - 80%, телят в 85 - 90%, ягнят в 75 - 85%, цыплят в 80 - 85% и кроликов в 85 и 90% случаев;
(при назначении тилозина тартрата и фрадизина-40);
гастроэнтеритов поросят в 85-95%, телят 90-95%, ягнят 85-90%, цыплят 85-90% случаев;
пневмоний поросят в 85-95%, телят 80-95%, ягнят 85-90% случа ев, (биофрад и фрадифур).
9. Применение тилозинсодержащих препаратов в стационарно неблагопо лучных хозяйствах предупреждает возникновение: стрептококкоза кур в 89% при назначении тилозина тартрата;
в 88% случаев - фрадизина-40;
колибактериоза яг нят в 80% при использовании тилозина тартрата и в 87% случаев фрадизина-40;
сальмонеллеза поросят: в 85% - тилозина тартрата, в 90% случаев - фрадизина-40, дизентерии поросят в 100% случаев при применении тилозина тартрата, пастерел леза телят в 72% - тилозина тартрата и в 80% фрадизина-40(50) случаев, энзооти ческой пневмонии поросят - в 90% тилозина тартрата и 95% при использовании фрадизина-50 случаев.
Тилозинсодержащие препараты обладают выраженной терапевтической эф фективностью, которая составляет при гастроэнтеритах поросят бактериальной этиологии 90-95%, телят 85-90%, ягнят 80-85%, цыплят 85-90%, при пневмониях поросят 72-80%, телят 80-85%, ягнят 75-85% ( при применении тилозина тартрата и фрадизина-40);
при гастроэнтеритах поросят 95-100%, телят 90-95%, ягнят 80 90% (биофрада и фрадифура) ;
при стафилококкозе кроликов 80% тилозина тартрата и 85% фрадизина-50, стрептококкозе поросят 80%, эшерихиозе кроликов в 85% тилозина тартрата, дизентерии поросят 98,4% тилозина тартрата, эшерихи озе поросят 80% тилозина тартрата. Выздоровление животных сопровождается увеличением содержания в крови эритроцитов, гемоглобина, лимфоцитов, бе та-глобулинов, повышением фагоцитарной активности лейкоцитов, комплемен тарной, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови на 5,0-15,0%.
Практические предложения Применение препаратов тилозина (тилозина тартрата, фрадизина, биофрада и фрадифура) рекомендуется:
- при гастроэнтеритах и пневмониях молодняка в соответствии с разрабо танными и утвержденными ГУВ МСХ СССР наставлениями (1990г) и «Методиче скими указаниями по диагностике, профилактике и лечению респираторных бо лезней телят» (1988).
- при дизентерии свиней согласно «Методическим рекомендациям по диа гностике, лечению и профилактике»(2009).
- при колибактериозе, сальмонеллезе, пастереллезе, бордетеллезе, стафило коккозе, стрептококкозе в разработанных дозах и схемах.
Список научных работ, опубликованных по теме диссертации 1. Зуев Н.П. Профилактическая эффективность фрадизина-50 и влияние его на организм поросят/ Н.П. Зуев//Тезисы докладов Всесоюзной конференции г. Москва, 9-10 декабря 1987 г.
«Разработка и применение антибиотиков немедицинского назначения». – С. 67-69.
2. Шахов А.Г. Лечебная эффективность фрадизина-40 при респираторных болезнях свиней/ А.Г. Шахов, Н.П. Зуев //Сборник научных трудов «Терапия и профилактика незаразных болезней сельскохозяйственных животных при их интенсивном использовании» Воронеж, 1988 г., С. 116-119.
3. ОСТ «Поросята. Технология ветеринарного обеспечения при получении и выращива нии»./М., 1988;
Утверждено Госкомитетом СССР по стандартам.
4. Зуев Н.П. Применение фрадизина - 50 при болезнях свиней/ Н.П. Зуев, А.Г. Шахов, В.А. Антипов.//Тезисы докладов к 1-ой межвузовской научно-практической конференции», Ле нинград, 1989. – С. 8-9.
5. Шахов А.Г. Фрадизин - 50 при пневмонии поросят (профилактика, лечение)/ А.Г.
Шахов, В.А. Антипов, Н.П. Зуев, Ю.Н. Бригадиров, Э.Г. Положенко // Ветеринария. - Но ябрь 1991. С. 54 – 56.
6. Зуев Н.П. Влияние фрадифура на структуру тканей и органов лабораторных живот ных/ Н.П. Зуев,//Тезисы докладов к 5-ой межгосудартсвенной межвузовской научно-произ водственной конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии».// Санкт-Петер бург, 1993г. – С. 111.
7. Шахов А.Г. Эффективность биофрада при пневмониях поросят/ А.Г. Шахов, Г.И.
Сергеев, Н.П. Зуев, Ю.Н. Бригадиров// Материалы межвузовской конференции «Животно водство и ветеринария, Белгород, 1995г. – С. 87.
8. Зуев Н.П. Влияние фрадизина -40(50) на иммунологические показатели крови свиней/ Н.П. Зуев // Материалы межвузовской конференции «Животноводство и ветеринария, Белгород, 1995 г. – С. 78.
9. Зуев Н.П. Иммунологические исследования сыворотки больных пневмонией поросят/ Н.П. Зуев, П.И. Бреславец //Тезисы докладов международной научно-произвоственной конфе ренции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их реше ния». Белгород. 1997 г. – С. 129.
10. Зуев Н.П. Влияние фрадизина-50 на основные метаболические процессы в организме поросят/ Н.П. Зуев, М.В. Розовенко//Тезисы докладов международной научно-произвоственной конференции». Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. Белгород. 1997. – С. 19.
11. Зуев Н.П. Взаимосвязь зоогигиенических показателей животноводческих помеще ний с заболеваемостью поросят бронхопневмонией /Н.П. Зуев, М.Е. Павлов, Р.А. Мерзленко, В.А. Сыровицкий// Тезисы докладов 2-международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения.
Белгород, 1998 г. – С. 63.
12. Павлов М.Е. Определение уровня обмена веществ и неспецифической устойчивости организма свиней в условиях совхоза «Губкинский»/ М.Е. Павлов, В.В. Концевенко, Н.П.
Зуев// Тезисы докладов 2-международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». Белгород, 1998 г. – С. 119-120.
13. Зуев Н.П. Влияние фрадизина 40-(50) на микрофлору носовой слизи больных брон хопневмонией поросят/ Н.П. Зуев// Тезисы докладов 2-международной научно-производствен ной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». Белгород, 1998 г. – С. 92.
14. Зуев Н.П. Влияние тилозинсодержащих препаратов на аминокислотный обмен у по росят/ Н.П. Зуев, В.В. Дронов//Материалы межрегиональной научно-практической конферен ции молодых ученых и специалистов посвященной 30-летию ВГАУ им. Н.Д. Глинки. Воронеж 2003г. – С. 18-119.
15. Зуев Н.П. Сравнительная клинико-морфологическая характеристика больных гастро энтеритами, пневмониями и пневмоэнтеритами молодняка сельскохозяйственных животных/ Н.П. Зуев//Материалы конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на совре менном этапе и пути их решения» 7-я международная научно-производственная конференция (25-28 марта 2003 г), Белгород, Россия. – С. 167.
16. Зуев Н.П. Изучение привыкания микроорганизмов, выделенных от больных гастро энтеритами, пневмониями и пневмоэнтеритами, к наиболее часто применяемым препаратам/ Н.П. Зуев//Материалы конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на совре менном этапе и пути их решения» 7-я международная научно-производственная конференция (25-28 марта 2003 г).Белгород, Россия. – С. 168.
17. Зуев Н.П. Этиология желудочно-кишечных болезней молодняка/ Н.П. Зуев//Матери алы конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» 7-я международная научно-производственная конференция (25-28 марта г), Белгород, Россия. – С. 169.
18. Зуев Н.П. Этиология пневмоэнтеритов молодняка сельскохозяйственных животных/ Н.П. Зуев//Материалы конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на совре менном этапе и пути их решения» 7-я международная научно-производственная конференция (25-28 марта 2003 г), Белгород, Россия. – С. 170.
19. Зуев Н.П. Кожно-резорбтивное, аллергенное и раздражающие свойства тилозинсо держащих препаратов/ Н.П. Зуев, Р.А. Мерзленко//Материалы конференции «Проблемы с.-х.
производства на современном этапе и пути их решения» 27-31 октября 2003г. – С. 105.
20. Зуев Н.П. Состав препарата фрадизин-40/ Н.П. Зуев,//Материалы конференции «Проблемы с.-х. производства на современном этапе и пути их решения». 27-31 октября 2003 г.
– С. 107.
21. Зуев Н.П. Сравнительная антимикробная активность различных препаратов тилозина /Н.П. Зуев// Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003г, Ульяновск. – С. 170.
22. Зуев Н.П. Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия препаратов тило зина /Н.П. Зуев //Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003г, Ульяновск. – С. 174.
23. Зуев Н.П. Основные фармакотоксикологические свойства препаратов тилозина / Н.П. Зуев // Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003 г. Ульяновск. – С. 180.
24. Зуев Н.П. Влияние тилозинсодержащих препаратов на структуру органов и тканей животных/ Н.П. Зуев// Материалы международной научно-практической конференции. «Акту альные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003 г, Ульяновск. – С. 182.
25. Зуев Н.П. Влияние препаратов тилозина на электрофизиологическую активность сер дечной мышцы/ Н.П. Зуев// Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин», 25-26 октября 2003г, Ульяновск. – С. 184.
26. Зуев Н.П. Влияние токсических доз тилозинсодержащих препаратов на элементы физиологических систем организма животных/ Н.П. Зуев// Материалы международной научно практической конференции «Актуальные проблемы вет.медицин». 25-26 октября 2003 г, Улья новск. – С. 185.
27. Зуев Н.П. Применение препаратов тилозина при гастроэнтеритах и пневмониях кроликов/Н.П. Зуев, В.Г. Плотников//«Кролиководство и звероводство» №3, 2004г. – С. 25.
28. Зуев Н.П. Влияние фрадизина-50 на функции органов пищеварения и мочеотделения / Н.П. Зуев, В.Д. Буханов//Материалы конференции «Проблемы сельскохозяйственного произ водства на современном этапе и пути их решения» 10-я международная научно-производствен ная конференция (15-19 мая 2006 года), Россия, Белгород. – С. 16.
29. Зуев Н.П. Чувствительность возбудителя дизентерии к тилозинсодержащим препа ратам / Н.П. Зуев, В.Д. Буханов, А.В. Логачев// Россия, Белгород, Бюллетень научных работ, 2006г, выпуск 5. – С. 47.
30. Зуев Н.П. Терапевтическая эффективность композиционных тилозинсодержащих препаратов в остром опыте/ Н.П. Зуев, В.Д. Буханов//Материалы первого съезда ветеринарных фармакологов России (21-23 июня 2007 года), Воронеж, 2007 г. – С. 307-311.
31. Зуев Н.П. Совместимость и свойства ингредиентов при создании комбинированных тилозинсодержащих препаратов/Н.П. Зуев, В.Д. Буханов //Материалы первого съезда ветери нарных фармакологов России (21-23 июня 2007 года), Воронеж, 2007г. – С. 316-319.
32. Шахов А.Г. Применение тилозинсодержащих препаратов при дизентерии сви ней/ А.Г. Шахов, Н.П. Зуев, В.Д. Буханов// Ветеринария, 2007г, №7. – С. 22-27.
33. Зуев Н.П. Разработка антимикробных композиций на основе тилозинсодержащих препаратов и изучение их профилактической и лечебной эффективности при желудочно-кишеч ных и респираторных болезнях животных бактериальной этиологии/ Н.П. Зуев, А.Г. Шахов, В.Д. Буханов//Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях», г. Воронеж, 17-19 сентября 2008 года.
– С. 137-143.
34. Зуев Н.П. Экспертиза мяса кроликов при применении препаратов тилозина/ Н.П. Зуев, В.Г. Плотников, Зуев С.Н. и др.// «Кролиководство и звероводство» №3, 2008 г.
– С. 31.
35. Зуев Н.П. Экологическая безопасность применения тилозинсодержащих препа ратов в овцеводстве/ Н.П. Зуев, П.П. Корниенко, и др.// Научно-производственный журнал «Овцы, козы, шерстяное дело» №2, 2008 г. – С. 76-79.
36. Зуев Н.П. Получение и разработка антимикробных композиций на основе тило зинсодержащих препаратов/ Н.П. Зуев //Международный научно – практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии «Ветеринарная патология» №3 (26), 2008 г. – С. 97–100.
37. Зуев Н.П. Экологическая безопасность применения тилозинсодержащих препа ратов в животноводстве/ Н.П. Зуев// Международный научно - практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии «Ветеринарная патология» № (27), 2008 г. – С. 85-89.
38. Зуев Н.П. Экологическая безопасность применения тилозинсодержащих препара тов в свиноводстве / Н.П. Зуев, Г.С. Походня, С.Н. Зуев // Свиноводство, 2008 г. – С. 31-32.
39. Патент на изобретение № 2372982 «Способ удаления белковых соединений из водных растворов». В.Д. Буханов, А.И. Везенцев, А.И. Шапошников, Н.П. Зуев и др. // М., ФГУ ФИПС, 2009г., Бюл. №32.
40. Зуев Н.П. Методы профилактики и лечения при желудочно-кишечных и респиратор ных болезнях молодняка сельскохозяйственных животных. Учебное пособие для самостоятель ной работы студентов /Н.П. Зуев, Н.В. Безбородов, С.Н. Зуев и др.// Белгород, БелГСХА, 2009г.
– 108 с.
41. Антипов В.А. Биологическое действие и использование тилозина/ В.А. Антипов, Е.М.
Ахламов, Н.П. Зуев, А.Г. Шахов.// Ростов-на Дону, 2009г. – 45 с.
42. Скворцов В.Н. Дизентерия свиней. Методические рекомендации по диагностике, ле чению и профилактике/ В.Н. Скворцов, Д.В. Юрин, А.А. Титов, Н.П. Зуев и др. // г. Москва:
ВИЭВ, 2009 г. Одобрены и рассмотрены на заседании секции «Инфекционная патология живот ных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН «26» августа 2008 г, протокол №2. – 29 с.
43. Шахов А.Г. Система ветеринарно-санитарных мероприятий в промышленном молочном скотоводстве/ А.Г. Шахов, В.А. Антипов, Н.П. Зуев и др. - Белгород, БелГСХА, 2010 г. – 89 с.
44. Буханов В.Д. Применение фитоаскоминералосорбента при колибактериозе телят и дизентерии свиней/ В.Д. Буханов, А.И. Везенцев, А.А. Шапошников, В.Н. Скворцов, Н.П.
Зуев, Л.А. Козубова, Н.А. Воловичева, Г.В. Фролов – Белгород, Научно рецензируемый журнал Научные ведомости Белгородского государственного университета;
Серия Есте ственные науки.2010г. №9(80). Выпуск 11. – С. 99-103.
45. Зуев Н.П. Экологическая безопасность применения тилозинсодержащих препа ратов в скотоводстве/ Н.П. Зуев, Г.С. Походня, Я.П. Масалыкина, С.Н. Зуев // Журнал «Зоотехния», 2011 г., Москва, № 10. – С. 19.
46. Зуев Н.П. Применение тилозина при гастроэнтеритах у ягнят/ Н.П. Зуев, В.Ю. Кова лева и др.// Материалы конференции (23-26 мая 2011 года) Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения. – С. 105.
47. Зуев Н.П. Фармакокинетика препаратов тилозина/ Н.П. Зуев, В.Ю. Ковалева и др.// Материалы конференции (23-26 мая 2011 года) «Проблемы сельскохозяйственного произ водства на современном этапе и пути их решения». – С. 104.
48. Патент на изобретение №2412702 Композиционный препарат для профилактики и лечения гастроэнтеритов поросят, Зуев Н.П., Безбородов Н.В., Буханов В.Д., Скворцов В.Н., Зуев С.Н. и др. // М., ФГУ ФИПС, 2011 г., Бюл. №6.
49. Зуев Н.П. Создание комбинированных препаратов тилозина/ Международный научно - практический журнал по фундаментальным и прикладным вопросам ветерина рии «Ветеринарная патология» №3, 2011 г. – С. 131-133.
50. Зуев Н.П. Влияние фрадизина-50 на общую неспецифическую резистентность сви ней/ Н.П. Зуев, С.Н. Зуев //Международный научно - практический журнал по фундаменталь ным и прикладным вопросам ветеринарии «Ветеринарная патология» №3, 2011 г. – С. 128-130.
51. Зуев Н.П. Применение тилозинсодержащих препаратов в пчеловодстве/Зуев Н.П., Зуева Е.Н.// Вестник Алтайского государственного аграрного университета № 1 (88), 2012. – С. 54. 52. Зуев Н.П. Изучение химиотерапевтического действия препаратов тилозина/Зуев Н.П., Зуева Е.Н.// Вестник Алтайского государственного аграрного университета № 2 (88), 2012. – С. 53. Антипов В.А. Клинико-экспериментальное обоснование применения препаратов ти лозина в ветеринарии/ В.А. Антипов, Н.П. Зуев, В.М. Бреславец, С.Н. Зуев // Монография, Бел город, 2011 г. – 136 с.
Отпечатано в ООО Издательско-полиграфический центр «ПОЛИТЕРРА» Подписано в печать 12.04.2012 г. Формат 60х Печать офсетная. Усл. печ. л. 2,0, Тираж 120 экз. Заказ № г. Белгород, пр. Б.-Хмельницкого, 137, корпус 1, офис тел.: 35-88-99*401, 8-910-360-14-