Эпизоотологические особенности, диагностика, профилактика и лечение эшерихиоза кроликов в краснодарском крае
На правах рукописи
ДВАДНЕНКО АЛЕКСЕЙ ИГОРЬЕВИЧ ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ, ДИАГНОСТИКА, ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ЭШЕРИХИОЗА КРОЛИКОВ В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ 06.02.02. – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
г. Краснодар 2012 1
Работа выполнена на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»
Научный консультант: заслуженный работник сельского хозяйства РФ, лауреат премии Правительства РФ в области науки, доктор ветеринарных наук, профессор Шевченко Александр Алексеевич
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Басова Наталья Юрьевна кандидат ветеринарных наук Марченко Татьяна Витальевна
Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»
Защита состоится « 06 « апреля 2012 г. в 14 00 часов на заседании дис сертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государ ственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Кали нина, 13.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Ку банский государственный аграрный университет».
Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» http://www.kubsau.ru « » 2012 г. и официальном сайте ВАК РФ http://www.vak.ed.gov.ru.
Автореферат разослан « « 2012 г.
Ученый секретарь диссертационного совета И.А. Родин 1. Общая характеристика Актуальность темы. Звероводство является важной отраслью животноводства. Значительную часть дохода этой отрасли приносят кролики.
Кролиководство служит дополнительным источником мяса, которое относится к диетическим продуктам питания, используемым для лечебного питания при заболеваниях печени, желудочно-кишечного тракта, желчного пузыря, при пищевой аллергии, гипертонической болезни, малокровии и гастритах. Мясо кроликов отличается нежной консистенцией, сочностью, имеет хороший вкус, легко усваивается в организме человека, не имеет специфического привкуса, характеризуется тонковолокнистой структурой и мраморностью, которую образуют чередования мускульной, соединительной и жировой тканей. Соотношение мякоти мяса и костей с хрящами составляет 85 и 15%, в туше крупного рогатого скота доля костей достигает 30%. В 100 г мяса кроликов содержится около 220-250 ккал. Это значительно меньше, чем энергетическая ценность мяса крупного рогатого скота (270-330 ккал), баранины (320) и свинины (390 ккал). В мясе кролика холестерина содержится в среднем 25 мг в 100 г продукта, в мясе кур - 35-100 мг, телят -38-80 и в говядине - 35-45 мг. Поэтому мясо кроликов особенно ценно для питания пожилых людей и детей [Шевченко, А.А., Шевченко Л.В., 2005;
2010].
У кроликов хорошая шкурка, мех пользуется устойчивым спросом в про мышленности и у населения. В России разведением кроликов занимаются по всеместно. Среди населения имеется большой спрос на продукты кролико водства. Поэтому на основе использования прогрессивных технологий в стране создана сеть кролиководческих ферм. Разведением кроликов в России занимаются в различных климатических зонах государственные, фермерские хозяйства и кролиководы-любители. Однако, интенсивному развитию кроли ководства препятствуют инфекционные болезни: вирусная геморрагическая болезнь кроликов, миксоматоз, колибактериоз, сальмонеллез, стрептококкоз, пастереллез, энтерококковая инфекция и другие, наносящие значительный экономический ущерб отрасли [Евтушенко А.Ф.,1992;
Бакулов И.А., Вишня ков И.Ф., Власова Т.А., Шевченко А.А., 1994;
Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Литвинов А.М., 2002;
Шевченко А.А., Шевченко Л.В., 2005;
2010].
Надежной защитой кроликов от инфекционных болезней является специ фическая профилактика. Применение вакцин в звероводстве, позволяет сни зить стрессовые ситуации у прививаемых животных, уменьшить трудозатра ты и создать напряженный иммунитет в сжатые сроки [Ахмедов А.М., 1983;
Вачугов В.И., 1989]. По мнению многих ученых, инактивированные вакцины, изготовленные из штаммов возбудителей инфекционных болезней, выделен ные из эпизоотического очага, обладают более высокими антигенными и им муногенными свойствами и способствуют созданию иммунитета достаточ ной напряженности [Кадымов Р.А., 1990;
Маннапова Р.Т., 1998;
Шульга Н.Н., 2006].
В связи с этим необходимо разрабатывать средства для специфической профилактики инфекционных болезней кроликов и совершенствовать их ле чение.
Цель работы: изучить особенности эпизоотического процесса, клинические симптомы и патологоанатомические изменения при эшерихиозе кроликов, разработать эффективную систему лечебно – профилактических мероприятий заболевания в Краснодарском крае.
Задачи исследования:
• изучить особенности эпизоотического процесса эшерихиоза кроликов в условиях Краснодарского края за 10 лет (2001-2010 годы);
• выявить нозологический профиль инфекционной патологии кроликов и определить удельный вес эшерихиоза в нем;
• изучить территориальные, временные и возрастные особенности эшерихиоза кроликов;
• изучить клинические признаки, патоморфологические и гистологические изменения при эшерихиозе кроликов;
• определить этиологическую структуру и основные причины распространения эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае;
• определить чувствительность выделенных культур эшерихий к антибактериальным препаратам;
• разработать новую вакцину и схему лечения кроликов при эшерихиозе в комплексе противоэпизоотических мероприятий.
Научная новизна. Впервые в условиях Краснодарского края изучен нозологический профиль инфекционных болезней кроликов, характер и особенности проявления эпизоотического процесса эшерихиоза кроликов, заболеваемость возрастных групп, клиническое проявление, патоморфологические и гистологические изменения при эшерихиозе кроликов.
Разработана технология изготовления и изучены иммунобиологические свойства новой инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов.
Изучены антибактериальные препараты для лечения эшерихиоза кроликов и определенны наиболее эффективные из них (абактан, энрофлон).
Установлена чувствительность E. coli к абактану, энрофлону, к левомицетину, канамицину. Препарат абактан впервые применен при эшерихиозе кроликов. Апробированы и внедрены рекомендации, в которых предложены для внедрения в ветеринарную практику новые схемы лечения и система профилактики при эшерихиозе кроликов. Научная новизна подтверждена патентом на изобретение.
Практическая значимость. На основании изучения эпизоотической си туации для лечения эшерихиоза у кроликов рекомендуется применять абактан и энрофлон, для специфической профилактики разработана и предложена для внедрения новая инактивированная вакцина против эшери хиоза кроликов. Разработан и утвержден в установленном порядке проект нормативно-технической документации на производство и применение вак цины против эшерихиоза кроликов. Производство инактивированной вакци ны против эшерихиоза кроликов освоено в ФГУП «Армавирская биофабри ка».
На основании теоретических, экспериментальных и производственных исследований разработана и внедрена в ветеринарную практику комплексная система диагностики, профилактики и лечения эшерихиоза кроликов в Крас нодарском крае.
Основные положения, выносимые на защиту:
– изучение эпизоотологии эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае;
– изучение клинических признаков, патоморфологических и гистологических изменений при эшерихиозе кроликов;
– изучение иммунобиологических свойств и эффективность новой инактиви рованной вакцины против эшерихиоза кроликов;
– эффективность антибактериальных препаратов при эшерихиозе кроликов;
– комплексная система мероприятий по профилактике и терапии эшерихиоза кроликов.
Реализация результатов исследований. На основании полученных результатов улучшена система профилактических и лечебных мероприятий с использованием абактана и энрофлона в хозяйствах Краснодарского края.
Разработаны и внедрены рекомендации по диагностике, профилактике и лечению эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае.
Внедрение системы профилактических и лечебных мероприятий в ветеринарную практику кролиководческих хозяйств Краснодарского края позволит сохранить поголовье кроликов и оздоровить их от эшерихиоза.
Результаты исследований используются в учебном процессе на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии Кубанского государственного аграрного университета.
Апробация работы. Результаты исследований и основные положения диссертации доложены и обсуждены на Международных научно практических конференциях (г. Барнаул, 2010 г.;
г. Краснодар, 2011г.);
на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (г.
Краснодар, 2011г.);
на совещании кролиководов Краснодарского края (г.
Краснодар, 2010г.);
на заседаниях ученого совета Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2010-2011гг.);
на научных студенческих конференциях факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар, 2010 2011гг.).
Публикации: по теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе две в журналах, рецензируемых ВАК РФ.
Структура диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах компьютерного текста (Microsoft Word) и включает в себя введение, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы и предложения, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 27 рисунками, таблицами. Список литературы включает 224 источников, в том числе иностранных авторов.
2. Собственные исследования 2.1 Материалы и методы исследований Работа выполнялась в период 2010 по 2012 годы на кафедре микробиоло гии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО «Кубанский государствен ный аграрный университет» в соответствии с темой, государственный реги страционный № 01200113464, ГУ «Кропоткинская краевая ветеринарная ла боратория», в звероводческих фермерских хозяйствах Краснодарского края, в ФГУП «Армавирская биофабрика».
С целью изучения эпизоотологии эшерихиоза кроликов и особенностей возникновения заболевания у животных, проведены статистические исследования на основании данных учета, отчетности и статистических обзоров государственного управления ветеринарии Краснодарского края, ГУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория».
В работе использован комплексный эпизоотологический подход, включающий все современные основные методики эпизоотологических исследований согласно «Методическим указаниям по эпизоотологическому исследованию» (1982), а так же некоторые методы современной диагностики.
[И.А. Бакулов, В.А. Ведерников, А.Л. Семенихин, 2000;
С.И Джупина, 1984;
В.П. Урбан, Н.М. Калишин, 1994].
Эксперименты на лабораторных животных и кроликах проводили в вива рии ГУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», на базе фермер ских хозяйств Гулькевического, Кавказского, Тбилисского районов, в ФГУП «Армавирская биофабрика» Краснодарского края. В работе использо вали выделенные от павших кроликов штаммы возбудителя эшерихиоза (Е. соli О18, О20).
Лабораторные исследования на эшерихиоз проводили в соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденным Департаментом ветеринарии РФ [М., 2000].
Патогенные свойства эшерихий определяли на белых мышах массой 12 16 г., путем внутрибрюшинного заражения. Культуры признавались патоген ными, если из 3-х зараженных белых мышей в течение 5 дней погибало не менее 2-х животных.
Для определения патогенности возбудителей, испытаний вакцин на без вредность, реактогенность, иммуногенность, пассажей и титрования возбуди телей использовали белых беспородных мышей (Мurius) массой 16–18 г – 250 гол, кроликов различного возраста и окраса – 3,5 тыс.
Исследования проведены на клинически здоровых кроликах, которые были подобраны по принципу аналогов (породной принадлежности, возрасту, физиологическому состоянию, упитанности). Рационы животных соответствовали нормам, разработанным в НИИ пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева.
Для проведения научных исследований и производственных испытаний использовали опытные серии вакцин, разработанных нами для специфиче ской профилактики эшерихиоза кроликов.
Использовали реактивы, диагностикумы, наборы, тест-системы:
– формалин технический с содержанием формальдегида не менее 36% (ГОСТ-1625-61);
гидроокись алюминия (ГОА, с 6% сухого остатка);
парфю мерное масло Marcol – – сыворотки О-коли агглютинирующие, поливалентные и моновалентные ФГУ «Армавирская биофабрика»;
– антиадгезивные коли-сыворотки НПФ «ДИАВАК», п. Оболенск Мо сковской области.
Всего было проведено: клиническое обследование у 3748 голов, из них больных 593, патологоанатомических вскрытий павших животных 128 голов, отобрано проб, проведено 348 бакисследований, выделено 52 культуры эшерихий, при этом проведено 104 биохимических и 85 серотипизирующих тестов.
Клинические, экспериментальные и научно-производственные опыты проводили в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению основных условий кормления и содержания животных в период проведения и учета результатов [И.Т. Фролов]. В проведенных опытах были использованы бактериологические, биохимические, клинические, серологические, эпизоотологические и другие методы исследований.
Патоморфологические и гистологические исследования проводили по об щепринятым методикам. Во время вскрытия трупов павших кроликов отби рали кусочки пораженных органов: печени, почек, селезенки, сердца, легких, кишечника, лимфатических узлов, фиксировали в 10%-ном растворе ней трального формалина, изготавливали парафиновые срезы толщиной 6-8, окрашивали гематоксилин-эозином, изучали и фотографировали с помощью микроскопа МБИ-15.
Бактериологические исследования включали: посевы культур микроорга низмов на питательные среды, определение чистоты их роста, идентифика цию штаммов;
посевы на специальные среды для изучения биохимических свойств микроорганизмов, определение устойчивости их к антибиотикам;
определение концентрации микробных клеток, проведение биопробы на ла бораторных животных и кроликах [Б.И. Антонов, 1986].
Определение чувствительности выделенных изолятов E. coli О18,О20 к анти бактериальным препаратам проводили методом диффузии в агар с применением дисков и лунок, методом серийных разведений в бульоне или агаре согласно методическим указаниям по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней с.-х. животных [М., 1972], рекоменда ций по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам [А.В. Скориков, 2005].
Серологическую типизацию кишечной палочки и определение уровня ан тител в сыворотке крови кроликов проводили в реакции агглютинации (РА) согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике колибакте риоза животных, утвержденным Департаментом ветеринарии РФ [М., 2000].
Уровень специфических антител в сыворотке крови иммунизированных нутрий и процент защиты определяли на 30-е сутки и выборочно у 5% жи вотных через 270 дней после прививки инактивированными вакцинами про тив эшерихиоза кроликов.
Безвредность инактивированных вакцин против эшерихиоза кроликов проверяли на белых беспородных мышах массой 18–20 г, кроликах в воз расте 40–60 дней путем подкожного (мыши) и внутримышечного (кролики) введения вакцины в 3–5-кратной иммунизирующей дозе.
Иммуногенность вакцинных препаратов оценивали по проценту выживае мости (защиты) привитых кроликов (белых мышей) после заражения виру лентными возбудителями эшерихиоза (E. сoli О18,О20) в летальных дозах, определяемых на кроликах и белых мышах предварительным титрованием.
Статистическую обработку массовых цифровых материалов проводили на персональном компьютере IBM с использованием пакета статистических программ «Microsoft», «Microsoft Word» и «Microsoft Excel».
3. Результаты собственных исследований 3.1 Эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням кроликов в Краснодарском крае Для этого провели анализ уровня заболеваемости и падежа кроликов от инфекционных болезней в сравнительном аспекте и динамике. За основу были взяты ветеринарная отчетность по инфекционной патологии живот ных в Краснодарском крае за 2001–2010 гг. и результаты собственных ис следований – количество и видовой состав выделенных культур возбуди телей.
В результате установлено, что в течение 10 лет заболеваемость и падеж кроликов в Краснодарском крае регистрируются ежегодно от различных ин фекционных болезней: эшерихиоза, стрептококкоза, сальмонеллеза, псевдо моноза, стафилококкоза, энтерококковой инфекции, анаэробной энтеротоксе мии. Среди них доминирует эшерихиоз.
В нозологическом профиле инфекционных болезней кроликов в Красно дарском крае эшерихиоз составляет 45%, стрептококкоз - 24%, сальмонеллез - 13%, псевдомоноз - 9%, стафилококкоз 7%, энтерококковая инфекция и ана эробная энтеротоксемия по 1% (рис. 1).
Рисунок 1 - Нозологический профиль инфекционных болезней кроликов в Краснодарском крае При рассмотрении удельного веса эшерихиоза в течение срока наблюдения видно, что идет постепенное увеличение удельного веса эшерихиоза в нозологическом профиле, так в 2001 году 46,0%, а в 2010 году 47,0%, изменяясь из года в год (рис. 2).
80 45 49 54 54 70 проценты 50 30 55 51 46 46 20 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 годы прочие эшерихиоз Рисунок 2 – Удельный вес эшерихиоза в инфекционной патологии кроликов в Краснодарском крае (2001-2010гг.) При изучении территориальных и временных границ эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае установлено, что распространение имеет выражен ные региональные особенности (рис. 3).
Белореченский Е йский Кавказский Каневской 1% 2% 6% 10% Крымский 1% 5% 38% Кущевский 2% Ленинградский 5% С еверский 1% С лавянский Тбилисский 4% 23% 1%1% Тимашевский Тихорецкий Усть-Лабинский Краснодар Рисунок 3 – Распространение эшерихиоза кроликов по районам в Краснодарском крае (2001-2010гг.) Наибольшее количество случаев регистрации эшерихиоза наблюдается в Кавказском (38%), Каневском (23%), Усть-Лабинском (10%) районах, меньше в г. Краснодаре (6%), в Славянском и Тимашевском районах по 5%.
Значительное количество выделяемых культур эшерихий именно в данных районах говорит о более изменчивой погоде в переходные периоды времен года (весна, осень), а также зимой. Характерно, что от сельскохозяйственных животных в этот период также выделяется значительное количество культур эшерихий.
При изучении годовой динамики заболеваемости кроликов эшерихиозом проанализировали данные периода с 2005 по 2010 гг. установлено, что вспышки заболеваемости кроликов эшерихиозом в зимний и весенний периоды (январь-апрель) связаны, с нарушением кормления и содержания животных. Кормление кроликов не сбалансированными рационами по витаминам, микроэлементам, содержание их в занавоженных помещениях с высокой влажностью все это приводит к снижению резистентности организма. В дальнейшем кролики становятся подвержены воздействию условно-патогенной микрофлоре, в том числе и к эшерихиям.
При изучении восприимчивости различных возрастных групп к эшерихиозу установлено, что к эшерихиозу восприимчивы кролики с дневного возраста до взрослых кроликов: в возрасте 1-10 дней 50%, в 10- дней – 30%, в 20-60 дней – 10%, в 60-120 дней - 6%, взрослые – 4%. Наиболее восприимчиво поголовье кроликов с 1 до 20 дней. Взрослое поголовье заболевает реже молодняка и чаще в хронической форме, являясь часто бактерионосителями.
Таким образом, в нозологическом профиле инфекционной патологии кроликов в Краснодарском крае за период (2001-2010гг.) основную роль играет эшерихиоз, удельный вес этого заболевания постоянно повышается, чаще регистрируется в Кавказском (38%), Каневском (23%), Усть-Лабинском (10%) районах. Вспышки эшерихиоза у кроликов чаще наблюдаются в зимний и весенний периоды (январь-апрель). К эшерихиозу кролики восприимчивы с 1 дневного возраста, наиболее чаще болеет поголовье с 1 до 20 дней. Взрослое поголовье заболевает реже молодняка и чаще в хронической форме, являясь часто бактерионосителями.
3.2. Диагностика, клинические признаки, патоморфологические и гистологические изменения эшерихиоза кроликов Диагностику эшерихиоза проводили с учетом эпизоотологических, клинических, патоморфологических данных и подтверждением лабораторных исследований. Лабораторная диагностика основана на результатах бактериологического исследования. Бактериологическое исследование включает обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды или методом биопробы, идентификацию возбудителя по тинкториальным, культурально-морфологическим, ферментативным, патогенным и серологическим признакам с использованием микротест-систем ММТ-Е1 и ММТ-Е2.
Клиническое проявление эшерихиоза у кроликов зависит от патогенности, дозы эшерихий и уровня резистентности организма. В соответствии с этим наблюдаются различные клинические симптомы проявления заболевания.
При обследовании поголовья в неблагополучном хозяйстве клинически диагноз был установлен у кроликов различного возраста. При этом наблюдались следующие клинические признаки течения болезни.
Острое течение заболевания с проявлением диареи и септических явлений. При этом болезнь длится в течение 3–5 дней. Наблюдается сильное угнетение, отказ от корма, малоподвижность. Температура тела повышается до 40,5 – 41,0 С°. Шерсть взъерошена, слезотечение. Дыхание учащенное.
Отмечалось наличие отечности в области шеи и головы, у некоторых животных развивался паралич задних конечностей. Летальность 70-80%.
При подостром течении заболевания болезнь продолжается до 14 дней и заканчивается либо гибелью животного, либо выздоровлением (с последующим бактерионосительством). При подостром течении животное отказывается от корма, плохо ест, наблюдается диарея, поражения центральной нервной системы. Дыхание учащено и затруднено. Истечение из носовых отверстий незначительное, слизистой консистенции. Летальность до 50%.
Хроническое течение наблюдается реже у взрослых животных, прогрессирующее истощение животного. Животное часто мало угнетено, температура колеблется в пределах физиологической нормы. Наблюдается периодически диарея, органные поражения (абсцесс, уроцистит, уретрит, мастит).
Таким образом, эшерихиоз у кроликов протекает остро и подостро преимущественно болеют с 2-3-х дней после рождения и до 120 дней жизни и взрослые, проявляется септицемией, токсинемией, энтеритами, поражением центральной нервной системы, а иногда и других органов. Заболевание регистрируется в течение года, чаще всего в периоды (январь – апрель).
Летальность кроликов составила 50–80%.
3.3 Изучение патоморфологических и гистологических изменений при эшерихиозе кроликов В этом разделе обобщили материалы патоморфологических и гистологи ческих исследований 31 трупа кроликов, у которых предварительно был по ставлен диагноз по эпизоотологическим, клиническим данным на эшерихиоз и затем подтвержден бактериологическими исследованиями. Вскрытие трупов проводили в соответствии с требованиями. В кишечнике наблюдали ката ральное, серозно-катаральное или геморрагическое воспаление, слизистая оболочка кишечника была гиперемирована, иногда в слизистой и под слизи стой оболочками встречались кровоизлияния, отмечали нефриты, пневмонии, гепатиты и миокардиты.
Гистологическим методом исследования пораженных легких от павших кро ликов при эшерихиозе установлено, что сосуды легкого сильно расширены и за полнены кровью. Просветы альвеол и мелких бронхов заполнены экссудатом в виде войлокообразной, сетчатой массы (фибрин), в экссудате много эритроцитов с примесью полиморфно-ядерных лейкоцитов и слущенных клеток альвеолярн ного эпителия, находящихся в состоянии дистрофии. Некоторые альвеолы запол нены эритроцитами, другие спавшиеся.
При гистологическом исследовании пораженных почек от павших кроликов при эшерихиозе установлена зернистая дистрофия почечных канальцев. Отмече ны участки скопления эозинофилов, кровоизлияния.
При исследовании печени от павших кроликов при эшерихиозе нарушена структура балочного строения. Отмечены дистрофические изменения, гепатоци ты разрушены, между балками скопление лимфоидных клеток.
При гистологическом исследовании миокарда от павших кроликов при эше рихиозе установлено, что структура не нарушена, между мышечными волокнами незначительные кровоизлияния.
Таким образом, при эшерихиозе кроликов отмечали серозно-катаральный и геморрагический гастроэнтерит (40%), гепатит (30%), нефрит (15%), пневмо ния (10%), кровоизлияния в мышце сердца (5%).
3.4. Выделение, идентификация культур эшерихий, циркулирующих в организме кроликов в Краснодарском крае Выделение чистой культуры возбудителя эшерихиоза и изучали характе ристику его в соответствии с «Методическими указаниями по бактериологи ческой диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденных 27.07.2000 г. №13-7-2/2117, Департаментом ветеринарии МСХ РФ.
Патологический материал отбирали по правилам от павших (не позднее 2-3 ч. после гибели) или вынужденно убитых животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами. Взятие и доставку материала осуществляли в соответствии с действующими правилами взятия патологиче ского материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследо вания. Для исследования использовали свежие трупы, трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, селезенку, почку, сердце, перевязанное лигату рой у аорты, брыжеечные лимфоузлы, отрезок тонкого кишечника, перевя занный с двух сторон и головной мозг. Для прижизненной диагностики ис следовали фекалии, кровь.
Из поступившего материала готовили мазки-отпечатки, окрашивали по Граму и микроскопировали под иммерсионной системой микроскопа. При микроскопировании препаратов под иммерсионной системой микроскопа на блюдали палочки размером (1,0-3,0х0,3-0,6 мкм) с закругленными концами красного цвета, расположенные одиночно, что характерно для E.сoli.
Для определения культуральных свойств возбудителя эшерихиоза кроли ков E.сoli делали посевы выделенной культуры из патологического материа ла в мясо – пептонный бульон (МПБ), на среду Эндо, на мясо - пептонный агар (МПА) и инкубировали в термостате при 37 С в течение 18-24 часов.
На чашках Петри с МПА вырастали влажные колонии с ровными краями и гладкой поверхностью серого цвета. В пробирках с МПБ наблюдали равно мерное помутнение питательной среды с небольшим осадком, разбивающим ся при встряхивании. В чашках Петри, на среде Эндо наблюдали рост коло ний малиново–красного цвета с розовым ободком диаметром 2-3 мм, харак терные для E.сoli.
При определении биохимической активности чистых культур проводи ли посевы на дифференциально – диагностические среды с различным набо ром компонентов и с использованием микротест-систем ММТ-Е1 и ММТ-Е2.
Для E.сoli характерно расщепление глюкозы и лактозы с образованием кис лоты и газа, выделение индола, отсутствие уреазы.
Патогенность изучаемых культур эшерихий определяли в биопробе на белых мышах. Для этого испытуемый штамм выращивали на МПА при 37 38° С в течение 18-24 часов, смывали стерильным физиологическим раство ром, готовили суспензию концентрацией 1 млрд. микробных клеток в 1см 3 по оптическому стандарту мутности и вводили внутрибрюшинно по 0,5 см3 трем белым мышам массой 14-16 г. Наблюдение за зараженными животными про водили в течение трех суток. При гибели двух и более зараженных мышей выделенный штамм признавали патогенным и считали возбудителем.
Для подтверждения специфичности гибели мышей из паренхиматозных органов павших мышей готовили мазки – отпечатки, окрашивали их по Гра му. Серологическую типизацию кишечной палочки проводили в реакции аг глютинации с набором типоспецифических сывороток по общепринятой ме тодике. В реакции агглютинации исследуемая культура кишечной палочки реагирует с колисывороткой и виден хлопьевидный осадок (положительный результат) при отрицательном контроле.
Выделенные чистые культуры микроорганизмов с характерными для эшерихий культуральными, морфологическими, тинкториальными и фермен тативными свойствами окончательно относили к роду Escherichia и виду E. coli.
При лабораторных исследованиях от больных и павших кроликов мы выделяли сероварианты E. coli, доля которых составила (%): О20 – 24,0, О – 10,0, О26 – 9,0, К-88 - 7,0, О9 – 6,0, О78 – 6,0, О55 – 4,0, О103 – 4,0, О35 – 4,0, О86 – 3,0, О115 – 3,0, О127 – 3,0, А-24 – 3,0, 987Р – 3,0, О137 – 2,0, F- -2,0, О119 – 2,0, О15 – 1,0, О1 – 1, 0, О8 – 1,0, О41 – 1,0, О111 – 1,0, О119 – 1,0, О139, - 1,0, О149 – 1,0, К-99 – 1,0. Доминирующими среди них были се ротипы E. coli О20 – 24,0% и О18 – 10,0.
Рисунок 4 – Выделение серотипов E. coli от кроликов в Краснодарском крае Таким образом, нами из 125 исследованных культур эшерихий были изучены морфологические, тинкториальные, культуральные, биохимические и серологические свойства 52 эшерихий, доминировали штаммы Е. coli О18 и О20, которые использовали в дальнейшей работе.
3.5. Разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов Нами были изучены биологические свойства наиболее часто выделяемых се роваров 52 культур эшерихий, и на основании проведенных исследований по ан тигенности, иммуногенности, стабильности отобраны штаммы Е. coli О18 и О20 для изготовления вакцины. Накопление микробных клеток (м.к./см3) изуча ли на обогащенных питательных средах: Эндо, Левина, селенитовой, желчном, мясо-пептонном и глюкозо-сывороточном бульонах. Оно составило от 10 до 20 млрд м.к./см3. Для получения бактериального сырья для производства вакцин нами был взят как наиболее доступный и дешевый мясо-пептонный бульон, обо гащенный глюкозой, который позволяет получать необходимую концентрацию микробных клеток.
Для изготовления опытных образцов инактивированных вакцин вирулентные штаммы эшерихиоза (Е. coli О18, О20) освежали в пробирках с МПБ биофабрич ного производства, рН 7,2–7,4, в условиях термостата при 37С в течение 16–18 ч (Е. coli О18, О20). Проверку на чистоту роста проводили на МПА, МПБ, средах Эндо и Плоскирева, Китта-Тароцци, агаре и бульоне Сабуро, окраской по методу Грама.
Матровую расплодку E. coli О18, О20 нарабатывали отдельно во флаконах емкостью 250 мл. В каждый из них вносили 80–100 мл МПБ (Е. coli О18, О20) рН 7,2–7,4 и 1–2 мл освеженной культуры возбудителя с концентрацией не менее 4–8 млрд микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасе вича. Посевы инкубировали при 37С в условиях термостата в течение 16–18 ч (Е. coli О18, О20). Проверку на чистоту роста проводили на МПА, МПБ, средах Эндо и Плоскирева, Китта-Тароцци, агаре и бульоне Сабуро, окраской по методу Грама.
Бактериальную массу E. coli О18, О20 нарабатывали в 3–5-литровых буты лях. В каждую из них вносили МПБ и 5–10% матровой расплодки культуры воз будителя от объема питательной среды, инкубировали при 37С в течение 12– ч, рН 7,6–7,8. Проверку на чистоту роста проводили на МПА, МПБ, средах Эндо, Китта-Тароцци, агаре и бульоне Сабуро, окраской по методу Грама.
Полученную бактериальную культуру с концентрацией не менее 4–8 млрд м. к./см3 по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича E. coli О18, О20 инактивировали отдельно путем внесения формалина в 0,4–0,5% ной конечной концентрации в течение 48–96 ч при температуре 37С. Про верку полноты инактивации проводили посевом бактериальной массы на МПА, МПБ, среды Эндо и Плоскирева и просмотра их в течение 10 сут, а также при необходимости заражением исследуемым материалом белых мы шей и наблюдением за их клиническим состоянием в течение 10 сут.
Для получения инактивированной вакцины необходимо было подобрать эф фективный препарат и щадящий режим для инактивации, позволяющий пода вить патогенность возбудителя, но сохранить его иммуногенные свойства. При отработке параметров инактивации брали отдельно выращенную культуру E. сoli О18, О20 с концентрацией 5–8 млрд м. к./см3 по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича, вносили в нее концентрации формалина от 0,1 до 0,4% по активности формальдегида, оставляли при температуре 37±2°С и 22±2°С в тече ние 15 сут, периодически перемешивая. Полноту инактивации возбудителя опре деляли путем посева бактериального сырья на стерильные питательные среды (МПА, МПБ, Эндо, окраска по Граму) и просмотра их в течение 10 сут, а также при необходимости заражением исследуемым материалом белых мышей и на блюдением за их клиническим состоянием в течение 10 сут. В результате нами был разработан режим для инактивации возбудителя эшерихиоза кроликов:
- инактиватор формалин в 0,4%-ной концентрации;
- температура 37±2°С;
время инактивации в течение 2–3 сут;
- температура 22±2°С;
время инактивации 5–6 сут.
При указанных режимах обработки возбудитель эшерихиоза кроликов инактивируется полностью.
Таким образом, в результате проведенных экспериментов были разрабо таны эффективные режимы инактивации возбудителя колибактериоза (Е. coli О18, О20) кроликов на основе совместного действия формалина в 0,4–0,5% ной концентрации и температуры 37±2°С. Они позволили в 4 раза сократить время инактивации микроорганизмов по сравнению с традиционной техноло гией.
Инактивированную бактериальную массу подвергали стандартизации пу тем разбавления ее физиологическим раствором до концентрации 4 млрд ми кробных клеток в 1 см3 по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича. Де понирование биомассы проводили путем внесения адъюванта – 6%-ного гид рата окиси алюминия до 10;
20;
30% к объему и выдерживания с ним в тече ние 12–24 ч при температуре 20–25°С.
В результате проведенных исследований нами была разработана техноло гическая схема изготовления инактивированной вакцин против эшерихиоза кроликов.
3.5.1. Изучение иммунобиологических свойств вакцины против эшерихиоза кроликов в экспериментальных и производственных условиях По разработанной нами технологии на основе выделенного и изученного вирулентного штамма Е. coli О18, О20 были изготовлены опытные образцы вакцины против эшерихиоза нутрий: серия № 1 – гидроокисьалюминиевая (ГОА) формолвакцина;
серия № 2 – формолвакцина с масляным адъювантом;
серия № 3 – формолвакцина без адъюванта.
Иммуногенность и безвредность серий вакцины оценивали на кроликах.
На каждую серию биопрепарата брали по 5 животных в возрасте 40–50 дней, вакцинировали однократно и двукратно: первая доза – 1,0 см, вторая – 1,5 см с интервалом 10 сут и заражения их через 14 сут после ревакцинации вирулентной культурой Е. coli О18, О20 в смертельной дозе – 2 млрд м.к./см внутримышечно. Наблюдение за животными вели в течение 30 сут.
В результате установлено, что у кроликов через 14 сут после однократной прививки ГОА-формолвакциной против эшерихиоза в дозе 1,0 см формиро вался напряженный иммунитет, обеспечивающий 80%-ную защиту живот ных от вирулентной культуры Е. coli О18, О20, вакциной без адъюванта – 60%. У животных, иммунизированных формолвакциной против эшерихиоза кроликов с масляным адъювантом, наблюдали хромоту в течение 2–3 дней, защита кроликов от возбудителя эшерихиоза составила 80%.
При изучении иммунобиологических свойств ГОА-формолвакцины про тив эшерихиоза кроликов после двукратной прививки животных установле но, что у кроликов через 14 сут после ревакцинации ГОА-формолвакциной против эшерихиоза формировался напряженный иммунитет, обеспечиваю щий 100%-ную защиту животных от Е. coli О18, О20. Поствакцинальных осложнений у кроликов не наблюдали.
Таким образом, нами была разработана и испытана в лабораторных усло виях безвредная и высокоиммуногенная ГОА-формолвакцина против эшери хиоза кроликов, которая после одно- и двукратной иммунизации обеспечива ла соответственно 80 и 100%-ную защиту животных от возбудителя.
В соответствии с международными требованиями и национальными стан дартами по ветеринарным биопрепаратам для применения пригодны вакци ны, которые безвредны для животных, стерильны и главное обладают имму ногенностью. Поэтому для производства вакцин необходимо разрабатывать методы контроля качества.
Вакцину против эшерихиоза кроликов контролировали по внешнему виду, цвету, стерильности, безвредности и полноте инактивации, иммуноген ности.
Внешний вид, цвет, отсутствие посторонней примеси, нарушение укупор ки и наличие трещин флаконов определяли визуально. Вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встря хивании легко разбивается в гомогенную взвесь без посторонних примесей.
Контроль возможной контаминации вакцины бактериальной и грибковой микрофлорой осуществляли по ГОСТ 28085-89 путем посева ее на питатель ные среды (МПБ, МПА, бульон и агар Сабуро, Китта-Тароцци) и выдержива ния их в течение 10 сут при температуре термостата 37°С. Рост микрофлоры отсутствовал.
Контроль вакцины на полноту инактивации проводили высевом на пита тельные среды: МПА, МПБ, Эндо, на безвредность – на 5 белых мышах массой 18–20 г. С этой целью им вводили вакцину подкожно в дозе 0,5 см3 и вели наблюдение в течение 5 сут. Все мыши остались живы и здоровы в тече ние эксперимента. У привитых мышей не отмечали признаков заболевания и отклонений от физиологической нормы, а также изменений в месте введения биопрепарата.
Иммуногенную активность вакцины проверяли путем прививки 10 белых мышей массой 18–20 г подкожно в дозе 0,5 см3 двукратно с интервалом 10 сут, а 10 животных (контроль) не вакцинировали. Через 14 сут после по вторной вакцинации всех мышей заражали внутрибрюшинно Е. coli О18, О20 в подтитрованной дозе (2 млрд м.к./см3). Вакцину считают активной при выживании не менее 8 из 10 вакцинированных и гибели 8 из 10 контрольных мышей в течение 72–96 ч после заражения.
Эффективность предложенного метода контроля подтверждена при производстве 3 опытных серий вакцины против эшерихиоза кроликов.
Таким образом, разработанные методы контроля на безвредность, полно ту инактивации, иммуногенную активность, стерильность позволяют выпус кать безвредную, стерильную и высокоиммуногенную вакцину против эше рихиоза кроликов.
3.5.2. Изучение инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов в производственных условиях Производственные испытания биопрепарата проводили в фермерских хозяйствах Гулькевического, Кавказского и Тбилисского районов Краснодарского края. С этой целью нами по ранее разработанной технологии были изготовлены две серии инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов и проверены на безвредность и иммуногенность на белых мышах.
В хозяйстве иммунизировали по 1000 кроликов 40–45-дневного возраста двукратно внутримышечно в область бедра: первая доза – 1,0 см, через 10 дней вторая – 1,5 см. За привитыми животными вели наблюдение в течение 9 мес.
Для оценки напряженности иммунитета у вакцинированных кроликов мы изучали накопление специфических антител. Уровень их в сыворотке крови иммунизированных кроликов определяли выборочно (у 5% животных) после повторной прививки в РА к Е. coli О18, О20 по общепринятым методикам.
Установлено, что у кроликов, привитых инактивированной вакциной против эшерихиоза двукратно, отклонений от физиологической нормы не было, через 14 сут после ревакцинации формировался напряженный иммунитет. Уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных кроликов через 30 сут колебался в пределах 1:256 до 2048, а через 9 мес наблюдения к Е. coli О20 и серотипу О18 составлял 1:128 1:512, обеспечивающий защиту 97,5 – 98,9% привитых животных (табл. 1).
Таблица 1 – Иммунобиологические свойства вакцины против эшерихиоза кроликов в производственных условиях № Наименование Кол-во Доза Сохранность Иммуногенность в см п/ хозяйства жив-х (титр антител) п в Кол-во через через опыте гол. % 30 сут 270 сут 1 ЛПХ Кавказского 1000 первая 985 98,5 1:256- 1:128 района – 1,0, 1:512 1: вторая – 1, 2 ЛПХ 1000 первая 989 98,9 1:512- 1:256 Гулькевического – 1,0, 1:1024 1: района вторая – 1, 3 ЛПХ 1000 первая 975 97,5 1:512- 1:256 Тбилисского – 1,0, 1:2048 1: района вторая – 1, Таким образом, испытания в производственных условиях инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов показали, что новая вакцина безвредна и высокоиммуногена.
3.6. Разработка лечения при эшерихиозе кроликов В последние годы для лечения большинства бактериальных инфекций применяется широкий спектр антибактериальных средств: нитрофураны, сульфаниламиды, антибиотики. Эффективность лечения инфекционных заболеваний антимикробными препаратами зависит от правильного выбора лекарственного средства с учетом чувствительности к нему возбудителя, выбора оптимальной дозы, кратности и длительности его применения, что возможно после постановки точного диагноза, выделения возбудителя заболевания и определения его чувствительности.
Особое внимание заслуживают антибиотики, как препараты наиболее эффективные к микроорганизмам. Антибиотики – это продукты жизнедеятельности, образуемые микроорганизмами или полученные из иных природных источников, а также их производные и синтетические продукты, обладающие бактерицидным или бактериостатическим действием. В настоящее время выделено и описано более 3800 микробных метаболитов и около 35 тыс. их производных и полностью синтезированных, проявляющих бактерицидное или бактериостатическое действие. Для установления действия антибиотиков на E. coli провели исследования по общепринятой методике. Установлено, что штаммы E. coli наиболее чувствительны к абактану и энрофлону – 97,62%, к левомицетину – 55,71%, аминогликозидам:
канамицину – 45,24%, неомицину – 28,57%, мономицину – 26,19%, тетрациклину – 12,86% и ампициллину – 35,71%.
Для испытаний в производственных условиях были взяты абактан, энро флон и для сравнения биовит-80 (контроль), применяемый в хозяйстве.
Терапевтическую эффективность лечебных препаратов определяли на кроли ках 40–50-дневного возраста при эшерихиозе в фермерском хозяйстве. На каждый препарат взяли по 50 больных животных. Для лечения больным кро ликам задавали с кормом биовит-80 из расчета 0,5 г на кролика в течение дней, энрофлон – в дозе 0,25 г на 1 кг массы тела животного в течение 7 дней (согласно наставления по применению), абактан вводили внутримышечно в дозе 5 мг/кг массы в течение 3 дней. Абактан, действующее вещество пе флоксацин, является отечественным антибиотиком из группы фторхинолов, который активно ингибирует бактериальную ДНК-гидразу, а также влияет на РНК бактерий и синтез бактериальных белков, на стабильность мембран и другие жизненные процессы бактериальных клеток. Абактан обладает опти мальной фармакокинетической активностью при парентеральном и перораль ном применении, всасывается более чем на 90% и имеет длительный период полувыведения из организма (11 часов). Результаты исследований представ лены в таблице 2.
Таблица 2 - Терапевтическая эффективность антибактериальных препаратов при лечении эшерихиоза кроликов Живот- Препара Выздоро- Пало ные ты вело Дни лечения 1 234567891 1 1 гол % гол % 0 1 + ++ 49 98,0 1 2, Кролики, абактан больные + +++++++++ + + 22 44,0 28 56, биовит эшерихи озом + ++++++ 48 96,0 2 4, энро флон Установлено, что наиболее эффективным оказался абактан в дозе 5мг/кг массы тела при внутримышечной инъекции в течение 3-х дней. По этой схе ме лечили 50 голов, из них выздоровело 49 (98,0 %). При применении энро флона с кормом в дозе 0,25 г/кг массы тела животного в течение 7 дней вы здоровело 48 гол из 50 (96,0 %), а биовит-80 соответственно 0,5 г/голову в течение 12 дней – 22 гол из 50 (56,0 %).
Таким образом, в производственных условиях при эшерихиозе кроликов высокую терапевтическую эффективность показали абактан (98,0%) и энро флон (96,0%).
3.7. Разработка мероприятий по профилактике и ликвидации эшерихиоза кроликов Учитывая, что в России комплексная система диагностики, лечения и профилактики эшерихиоза кроликов отсутствует, нами разработана такая си стема по каждой указанной инфекции.
Мероприятия по профилактике эшерихиоза кроликов строятся по четкой, предельно жесткой системе, охватывающей весь комплекс организационно хозяйственных, зооинженерных, ветеринарно-санитарных, зоогигиенических и специфических мероприятий.
3.7.1 Комплексная система профилактики эшерихиоза кроликов Диагностика эшерихиоза. Диагностику эшерихиоза проводят с учетом эпизоотологических, клинических, патоморфологических данных и подтвер ждением лабораторных исследований. Для проведения лабораторных исследо ваний в ветеринарную лабораторию направляют 2-3 трупа кроликов или кусоч ки пораженных органов, завернутые в пергаментную бумагу, целлофановый па кет. Бактериологическое исследование включает обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культу ры посевом на питательные среды или методом биопробы, идентификацию воз будителя по тинкториальным, культурально-морфологическим, ферментатив ным, серологическим и патогенным признакам с использованием микротест-си стем ММТ-Е1 и ММТ-Е2.
Мероприятия по профилактике эшерихиоза кроликов. Профилактика эшерихиоза основывается на проведении комплекса технологических, зооги гиенических, ветеринарно-санитарных и специфических мероприятий, направленных на повышение резистентности организма матери и новоро жденного молодняка, снижение уровня контаминации помещений репродук торного отделения фермы возбудителями болезни и предотвращения зараже ния животных в период их рождения и выращивания патогенными микроор ганизмами через корма, объекты внешней среды.
С целью предупреждения возникновения эшерихиоза у новорожденных животных своевременно и грамотно проводят иммунизацию маточного пого ловья и молодняка вакцинами против эшерихиоза в сроки и в дозах, указан ных в наставлениях по их применению. Мы рекомендуем для специфической профилактики эшерихиоза применять вакцины, изготовленные по разрабо танной нами технологии из штаммов, выделенных непосредственно в кон кретном хозяйстве. Наряду с вакцинами рекомендуем применять иммуномо дуляторы (поливедрин, вестин, левамизол, полиоксидонин, Т- и В-активин и др., которые вводят одновременно с вакциной одно- или двукратно согласно на ставлению по их применению;
поливалентную гипериммунную колисыворотку, а также колифаг в соответствии с действующими наставлениями по их при менению;
нормальные глобулины сывороток крови животных. Препарат вво дят внутримышечно или подкожно по 0,7 мл на 1 кг массы тела один раз в сутки в течение 2–3 дней;
пробиотики (ветом - 1.1. споробактерин, субалин, ромакол, бифидумбактерин, бифацидобактерин, лактицин и др.) применяют в профилактической дозе по схеме, указанной в наставлении по применению.
Для предупреждения заболевания эшерихиозом кроликов руководители, специалисты, рабочие хозяйств (ферм), предприятий по приемке, транспор тировке и переработке кроликов и сырья, заготовительные конторы, склады, граждане-владельцы кроликов обязаны строго выполнять утвержденные ве теринарно-санитарные правила для кролиководческих ферм.
Ветеринарные специалисты кролиководческих хозяйств (ферм), коопера тивных организаций, обществ кролиководов-любителей, а также учреждений государственной ветеринарной сети обязаны: обеспечить систематическое наблюдение за состоянием кроликов в зоне обслуживания;
проводить плано вые профилактические прививки против эшерихиоза, обратив внимание на иммунизацию кроликов, содержащихся вокруг заготовительных контор, складов, баз и холодильников мехового сырья, перерабатывающих предприя тий.
Мероприятия по ликвидации эшерихиоза кроликов. По установлению диагноза на эшерихиоз администрация района (города) в порядке, предусмот ренном Федеральным законом «О ветеринарии», по представлению главного ветеринарного врача района (города) выносит решение об объявлении хозяй ства (фермы), населенного пункта (или его отдельной самостоятельной части – в зависимости от эпизоотической обстановки) неблагополучными по эше рихиозу и установлении ограничений. В решении указывают точные границы эпизоотического очага болезни, неблагополучного пункта, угрожаемой зоны, а также определяют основные мероприятия по ликвидации болезни в не благополучном пункте и ее профилактике в угрожаемой зоне.
По условиям ограничений в неблагополучном пункте запрещают: ввоз и вывоз кроликов, продуктов их убоя, шкурок, инвентаря и кормов;
перегруп пировку кроликов;
организацию выставок и других мероприятий, связанных со скоплением кроликов;
торговлю кроликами, продуктами их убоя, шкурка ми;
обмен животными между кролиководами;
заготовку и скармливание кро ликам травы и сена из мест, где могли находиться больные или имелись тру пы этих животных.
В неблагополучном хозяйстве (пункте): проводят точный учет всего пого ловья кроликов;
для лечения больным кроликам задают с кормом энрофлон в дозе 0,25 г на 1 кг массы тела животного в течение 7 дней или пефлоксацин внутримышечно в дозе 10 мг/кг массы в течение 3 дней. Затем данное пого ловье иммунизируют вакциной против эшерихиоза;
применяют специфиче скую сыворотку против колибактериоза согласно наставлению по примене нию, а затем через 10–14 дней проводят вакцинацию этого поголовья;
прово дят тщательную механическую очистку и дезинфекцию кролиководческих ферм, выгульных дворов, оборудования, а также помещений, где содержались животные у граждан-владельцев кроликов;
шкурки от кроликов из неблагопо лучных пунктов (хозяйств) дезинфицируют в процессе их технологической обработки на перерабатывающем предприятии согласно действующей инструкции по дезинфекции шкурок.
Снятие ограничений. Хозяйство (пункт) объявляют благополучным че рез 15 дней после проведения в нем вакцинации кроликов и заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий. Ввоз кроликов в бывший неблагопо лучный пункт и угрожаемую зону допускается после их вакцинации против эшерихиоза в хозяйствах-поставщиках, которые обязаны сделать об этом со ответствующую запись в ветеринарном документе.
Ответственность за проведение технологических, организационно-хозяй ственных, зоотехнических и ветеринарно-санитарных мероприятий возлага ется на руководителя хозяйства, а за проведение лечебных и противоэпизоо тических мероприятий – на ветеринарных специалистов.
ВЫВОДЫ 1. Установлено, что эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням кроликов в Краснодарском крае напряженная. За 2001-2010 гг. у кроликов в крае зарегистрированы инфекционные болезни: эшерихиоз (45%), стрептококкоз (24%), сальмонеллез (13%), псевдомоноз (9%), стафилококкоз (7%), энтерококковая инфекция и анаэробная энтеротоксемия по 1%.
2. В нозологическом профиле инфекционной патологии кроликов в Краснодарском крае доминирует эшерихиоз. За 2001-2010 гг.
неблагополучными по эшерихиозу кроликов являются 13 районов, а также г. Краснодар: в Кавказском (38%), Каневском (23%), Усть-Лабинском (10%) районах, меньше в г. Краснодаре (6%), в Славянском и Тимашевском районах по 5%.
3. В хозяйствах Краснодарского края от кроликов выделены серовариантов E. coli, доминируют среди них О20 (24,0%) и О18 (10,0%).
Изучены их морфологические, тинкториальные, антигенные, биологические свойства.
4. К эшерихиозу восприимчивы кролики всех возрастных групп, но преимущественно в возрасте 10 - 20 дней (27-44%), заболеваемость кроликов чаще отмечается в зимний и весенний периоды (январь-апрель). Взрослое поголовье чаще переболевает в хронической форме, являясь бактерионосителями.
5. Эшерихиоз у кроликов протекает остро и подостро, проявляется угнетением, нарушением аппетита, малоподвижностью, септицемией, токсинемией, энтеритами, поражением центральной нервной системы, а иногда и других органов, быстрой потерей веса и заканчивается гибелью через 3-5 дней. Летальность составляет 50- 70%.
6. При патоморфологических и гистологических исследованиях при эшери хиозе у кроликов отмечали следующие основные изменения: серозно-ката ральный и геморрагический гастроэнтерит (40%), гепатит (30%), нефрит (15%), пневмония (10%), кровоизлияния в мышце сердца (5%).
7. Разработаны режимы инактивации возбудителя эшерихиоза формалином в 0,4-0,5%-ной концентрации при температуре 37°С в течение 2-4 суток, а при температуре 22±2°С – в течение 4-14 суток, позволяющие полностью инакти вировать возбудитель, при сохранении иммуногенной активности.
8. В экспериментальных и производственных условиях изучены иммуно биологические свойства новой инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов. Вакцина признана безвредной и высокоиммуногенной.
После однократной иммунизации в дозе 1,0 см и двукратной: первая доза 1, см, вторая – 1,5 см с интервалом 10 суток, у привитых кроликов формируется напряжённый иммунитет, обеспечивающий не менее 80% защиту от возбудителя эшерихиоза.
9. В производственных условиях установлена высокая экономическая эффективность применения инактивированной вакцины против эшерихиоза кроликов - 26 руб. на 1 руб затрат и высокая терапевтическая эффективность отечественного антибактериального препарата абактана - 7,68 руб. на 1 руб.
затрат при лечении кроликов, больных эшерихиозом.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ 1. Для специфической профилактики эшерихиоза кроликов предложена новая инактивированная вакцина, производство освоено на ФГУП «Армавирская биофабрика».
2. Для лечения эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае предложена комплексная система лечебно-профилактических мероприятий с спользова нием абактана и энрофлона.
3. На основе результатов исследования разработаны и изданы «Рекомендации по диагностике, профилактике и лечению эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае».
4. Результаты могут быть использованы в учебном процессе, при планирова нии противоэпизоотических мероприятий и ФПК зооветеринарных специалистов.
Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Двадненко, А.И. Эпизоотологические особенности колибактериоза кроликов /А.А. Шевченко, А.И. Двадненко, Д.Ю. Зеркалев // Аграрная наука – сельскому хозяйству: матер. 5-й межд. науч.-практич.конф., сборник статей, книга 3. – Барнаул, 2010. – С. 417-420.
2. Двадненко. А.И. Иммунобиологические свойства вакцины против колибактериоза кроликов / А.А. Шевченко, А.И. Двадненко //Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства, посвященной 80-летию образования зооинженерного факультета УО БГСХА: матер. 13-ой межд.
науч.-практич.конф. – Горки, 2010. – С. 225-228.
3. Двадненко, А.И. Эпизоотологические особенности и профилактика колибактериоза кроликов / А.И. Двадненко//«Опыт сотрудничества в области экологии, лесного хозяйства, ветеринарной медицины и охотоведения» 11- июля 2011 г.: матер. 2-ой межд. научн.-практич. конф., посвященной 90 летию со дня образования Кубанского государственного аграрного университета. – Краснодар, 2011. – С. 57-61.
4. Двадненко, А.И. Эпизоотологические особенности и специфическая профилактика колибактериоза кроликов/ А.И. Двадненко, Левченко Т.В., А.А. Шевченко// Научный журнал. Университет. Наука, идеи и решения.
№1, Краснодар, 2010. – С. 46-49.
5. Двадненко, А.И. Терапевтическая эффективность эшерихиоза кроликов / А.И. Двадненко, А.А. Шевченко//Труды Кубанского ГАУ. – 2012. – № 2(35)– 2012г.
6. Двадненко, А.И. Эпизоотологические особенности, специфическая профилактика и лечение эшерихиоза кроликов/ А.И. Двадненко//Ветеринария Кубани. – 2012. – № 2 – С.5-7.
7. Положительное решение на выдачу патента, Российской Федерации.
Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов/ Шевченко А.А., Зеркалев Д.Ю., Шевченко Л.В., Черных О.Ю., Двадненко А.И.;
заяви тель и патентообладатель ФГБУ ВПО «Кубанский государственный аграр ный университет», заявка №2010126692/10(037989);
заявл. 26.06.2010.
8. Двадненко, А.И., Шевченко А.А. Рекомендации по диагностике, профилак тике, лечению и ликвидации эшерихиоза кроликов в Краснодарском крае. – Краснодар, 2012. – 34 с.