Медицинский университет удк 611.811-018.81:575.822:6

«БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

УДК 611.811-018.81:575.822:612.82.014.43

ДУНАЙ

Валерий Иванович

ФИЛОГЕНЕЗ И ОНТОГЕНЕЗ NO-ЕРГИЧЕСКИХ

НЕЙРОНОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА: ВЛИЯНИЕ

ТЕМПЕРАТУРНОГО ФАКТОРА

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени

доктора биологических наук по специальности 03.00.25 – гистология, цитология, клеточная биология Минск 2009 1 Работа выполнена в УО «Белорусский государственный медицинский университет» и УО «Белорусский государственный университет»

Научный консультант: Кабак Сергей Львович, доктор медицинских наук, профессор, УО «Белорусский государственный медицинский университет», проректор по научной работе Официальные оппоненты: Мацюк Ярослав Романович, доктор биологических наук, профессор, УО «Гродненский государственный медицинский университет», профессор кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии Слука Борис Александрович, доктор биологических наук, профессор, УО «Белорусский государственный медицинский университет», заведующий кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии Солодков Александр Петрович, доктор медицинских наук, профессор, УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», проректор по научно-исследовательской работе Оппонирующая организация: УО «Витебская ордена Знак почета государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится 07 мая 2009 года в 14.00 часов на заседании совета по защите диссертаций Д 03.18.03 при УО «Белорусский государственный медицинский университет» по адресу: 220116, г. Минск, пр-т Дзержинского, 83, телефон 272-55-98.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке УО «Белорусский государственный медицинский университет».

Автореферат разослан 06 апреля 2009 года.

Ученый секретарь совета по защите диссертаций кандидат медицинских наук Ю. А. Гусева ВВЕДЕНИЕ Приспособление организма к меняющимся условиям окружающей среды обеспечивается непрерывным совершенствованием нервной системы. Изучение развития нервной системы в процессе эволюции живой природы представляется важным для понимания закономерностей ее функционирования.

Нормальное эмбриональное развитие мозга может нарушаться под влиянием многих факторов. Это обусловлено высокой чувствительностью мозга к повреждающим агентам, особенно в критические периоды его развития, а также необратимостью некоторых структурных изменений.

Высокий динамизм развития мозга присущ также ранним этапам постнатального онтогенеза, что делает понятными возможные последствия действия на него различных патогенных факторов.

Патогенные факторы внешней среды, оказывающие влияние на созревание системных функций в онтогенезе, включают в себя химические соединения, которые могут попадать в организм с пищей.

Такие соединения, как нитраты и нитриты, попадая в организм, могут превращаться в монооксид азота (NO), который, являясь молекулой, синтезируемой эндогенно, обладает чрезвычайно широким спектром биологических функций (В.П. Реутов, 2003). Имеющиеся экспериментальные данные свидетельствуют об участии NO в регуляции различных физиологических функций (А.В. Гурин, 2001;

S. Moncada, 1991;

C. Nathan, 1992;

M. Simmons, 1992;

S. Greenberg, 1993;

L. Kapas, 1994). Особое внимание исследователей привлекает проблема участия NO в нейрохимических механизмах, определяющих активность различных структур ЦНС (S. Snyder, 1992;

T. Dawson, S. Snyder, 1994). Существует мнение, что NO является представителем особого класса нейропередатчиков (В.П. Реутов, 1998;

Н.С. Косицин, 1998;

S. Moncada, 1999) и одним из важнейших факторов, участвующих в формировании центральной нервной системы (А.В. Гурин, 1998;

J. Galli, 1990).

Принимая во внимание имеющиеся факты, можно заключить, что выяснение филогенетических и онтогенетических закономерностей развития центральной NO-ергической системы необходимо для понимания общих принципов формирования нервной системы в онтогенезе с участием низкомолекулярных полифункциональных молекул. Полученные данные необходимо учитывать в клинической практике и в сельскохозяйственном птицеводстве для оценки возрастных показателей нормы, понимания патогенеза врожденных аномалий развития и разработки методов коррекции функциональных нарушений нервной системы, развивающихся в постнатальном онтогенезе.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Связь работы с крупными научными программами (проектами) и темами. Основные результаты диссертации получены в соответствии с научно-тематическим планом кафедры медико-биологических технологий БГУ «Роль монооксида азота в становлении системных функций в онтогенезе» (№ государственной регистрации 20032713).

Тема диссертационной работы соответствует приоритетному направлению фундаментальных и прикладных научных исследований – изучение влияния факторов внешней среды на процессы эмбриогенеза.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы является выявление закономерностей развития NO-ергических нейронов головного мозга в филогенезе и онтогенезе во взаимосвязи с формированием механизмов терморегуляции и других функций ЦНС.

Задачи исследования:

– изучить распределение NO-содержащих нейронов в головном мозге у представителей анамний и амниот;

– установить сроки появления NO-позитивных нейронов в гипоталамусе у представителей гомойотермных организмов в пренатальном онтогенезе;

– определить сроки структурного формирования NO-зависимых систем продолговатого мозга и гипоталамуса в раннем постнатальном онтогенезе у птиц и млекопитающих;

– выявить влияние температурного фактора на формирование NO-ергической системы гипоталамуса у гомойотермных животных в эмбриогенезе и реакцию этой системы на внешнее воздействие в постнатальном онтогенезе;

– изучить функциональное созревание центральных NO-зависимых систем в онтогенезе у птиц и млекопитающих и выявить влияние блокады центральных NО-зависимых механизмов в ранний постнатальный период на становление механизмов терморегуляции и деятельность ряда важнейших физиологических систем организма;

– разработать для птицеводческих хозяйств республики новые методы управления эмбриогенезом у птиц и внедрить их в практику сельскохозяйственного производства.

Объектом исследования служили 1420 взрослых и новорожденных животных: карп чешуйчатый (Cyprinus carpio), лягушка озерная (Rana ridibunda), курица домашняя (Gallus gallus), голубь сизый (Columba livia), утка мускусная (Cairina moschata), еж обыкновенный (Erinaceus europaeus), морская свинка домашняя (Cavia ареrеа porcellus) и крыса серая (Rattus norvegicus);

828 разновозрастных зародышей утки мускусной (Cairina moschata), морской свинки домашней (Cavia ареrеа porcellus) и человека (Homo sapiens).

Предметом исследования явились морфологические и функциональные закономерности развития NO-позитивных нейронов головного мозга в пренатальном и постнатальном онтогенезе у пойкилотермных и гомойотермных животных.

Положения, выносимые на защиту 1. В филогенезе параллельно с усложнением структурной организации центральной нервной системы наблюдается увеличение числа NO-синтезирующих нервных клеток в продолговатом и промежуточном мозге и, как следствие этого, успешное приспособление организмов к условиям окружающей среды.

2. Появление NO-позитивных нейронов в гипоталамусе определяется видовыми особенностями эмбриогенеза. Чем выше положение гомойотермных организмов в эволюционном ряду, тем раньше такие нейроны выявляются в составе ЦНС зародышей.

3. Сроки завершения структурного формирования NO-зависимых нервных центров гипоталамуса в постнатальном онтогенезе имеют видовые особенности и зависят от регулирующего влияния температурного фактора в течение первых дней жизни животных.

4. Температурный фактор оказывает модулирующее влияние на скорость формирования NO-ергической системы и зависимых от нее структурно-функциональных систем организма.

5. В онтогенезе гомойотермных животных развитие NO-ергической системы головного мозга координировано с деятельностью ряда важнейших физиологических систем организма.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена соискателем самостоятельно и основана на авторских материалах, собранных и обработанных в период 1997–2008 гг. на базе кафедр физиологии человека и животных;

биологии развития и медицинской биологии;

медико-биологических технологий и кафедры психофизиологии – УО «Белорусский государственный университет», кафедры морфологии человека – УО «Белорусский государственный медицинский университет», в лаборатории научной группы проблем экологической физиологии и стресса Института физиологии НАН Беларуси, в лаборатории рабочей группы перинатального развития университета имени А. Гумбольдта города Берлина.

В монографиях [1, 2], статьях в научных рецензируемых журналах и в сборниках научных трудов [3–13, 15–20, 23–27, 29, 31–39] и публикациях, написанных без соавторов [40, 41, 43, 44, 46, 56–58], сбор фактического материала исследования, анализ результатов осуществлены лично диссертантом. В статьях [14, 21, 22, 30] соискателю принадлежит интерпретация данных исследований распределения NO-позитивных нейронов в головном мозге у анамний. В публикациях [28, 42, 45, 47–55, 59–61] диссертанту принадлежит анализ экспериментально полученных результатов исследований. Диссертант лично проводил гистохимические и физиологические исследования.

Апробация результатов диссертации. Полученные результаты автором доложены и обсуждены на:

– Международном симпозиуме «Temperature control in health and disease» (Минск, 1997);

– Международной конференции «Роль монооксида азота в процессах жизнедеятельности» (Минск, 1998);

– Международном симпозиуме «Recent advances in thermal biology»

(Минск, 1999);

– Международной конференции «Роль нейромедиаторов и регуляторных пептидов в процессах жизнедеятельности», посвященной 150-летию со дня рождения И.П. Павлова, (Минск, 1999);

– Международном симпозиуме «Basic and Applied Thermophysiology» (Минск, 2000);

– Международной конференции «Функциональная роль монооксида азота и пуринов» (Минск, 2001);

– X съезде Белорусского общества физиологов (Минск, 2001);

– Международной конференции, посвященной 100-летию академика Д.М. Голуба (Минск, 2001);

– Международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2003);

– II Международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2004);

– III Международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2005);

– Международной конференции «The 2-nd Combined Workshop Fundamental Physiology of the European Working Group of Physiology and Perinatal Development in Poultry» (Berlin, 2005);

– XXXXV конгрессе Югославских антропологов (Бар, 2006);

– VII Международной конференции «Сахаровские чтения 2007 года:

экологические проблемы XXI века», посвященной 15-летию МГЭУ имени А.Д. Сахарова (Минск, 2007);

– Международной конференции «The 3-nd Combined Workshop Fundamental Physiology of the European Working Group of Physiology and Perinatal Development in Poultry» (Berlin, 2007);

– IV Международном междисциплинарном конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, 2008).

Опубликованность результатов диссертации. По результатам диссертационного исследования опубликована 61 научная работа, в том числе 2 монографии, 34 статьи в научных рецензируемых журналах и сборниках научных трудов, включенных в перечень научных изданий Высшей аттестационной комиссии Республики Беларусь для опубликования результатов диссертационных исследований, 3 – в сборниках научных трудов (1 – зарубежном), 17 – в материалах конференций, 5 – в тезисах докладов конференций (3 – зарубежных).

Общий объем публикаций составляет 37,8 авторского листа, из них личный вклад – 29,8 авторского листа. Без соавторов опубликовано 42 научные работы, из них 2 монографии, 26 статей в научных рецензируемых журналах, 6 – в сборниках научных трудов, 6 – в материалах конференций, 2 – в тезисах докладов конференций.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, общей характеристики работы, обзора литературы, одной главы с изложением методик, пяти глав, содержащих результаты исследований, обобщения полученных результатов, заключения, библиографического списка, включающего список использованных источников (220 работ), список публикаций соискателя (61 работа) и приложения. Работа изложена на 222 страницах. Объем, занимаемый 13 таблицами, 65 рисунками и приложением, составляет 62 страницы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Развитие головного мозга в филогенезе и онтогенезе: участие монооксида азота. Нервная система проходит длительный путь развития, являясь самой сложной системой, созданной эволюцией. Она возникает и развивается в процессе взаимодействия организма с внешней средой (М.Ф. Никитенко, 1969). Важную роль в развитии головного мозга играют эмбриональный и ранний постнатальный периоды онтогенеза. Развитие и свойства этого органа определяются, прежде всего, генетическими факторами (Б.Я. Рыжавский, 2000). Наряду с другими биомаpкеpами, монооксид азота является предметом активных исследований на стыке медицины, биологии, биохимии и фармацевтики (В.П. Реутов, 1994).

NO играет большую роль в самых различных областях человеческой практики – от промышленных процессов и работы двигателя внутреннего сгорания до тонких механизмов биорегуляции (В.П. Реутов, 2003).

Монооксид азота, выделяемый NO-позитивными нервными клетками, участвует в становлении структуры и функции нервной системы в онтогенезе (А.В. Гурин, 1998;

J. Galli, 1990;

B. Derer, 1993), а также принимает участие в центральной регуляции большинства физиологических функций взрослого организма (А.В. Гурин, 2001;

S. Moncada, 1991;

C. Nathan, 1992;

M. Simmons, 1992;

S. Greenberg, 1993;

L. Kapas, 1994).

Однако до настоящего времени филогенетические и онтогенетические закономерности становления центральной NO-ергической системы и роль монооксида азота в развитии функциональных систем остаются мало изученными. Углубленное изучение филогенеза и онтогенеза NO-ергической системы головного мозга, а также выяснение роли NO мозга в развитии функциональных систем в онтогенезе гомойотермных животных позволило бы получить данные, необходимые для понимания общих принципов становления функциональных систем с участием низкомолекулярных полифункциональных молекул.

Материалы и методы исследования. Для выявления филогенетических и онтогенетических закономерностей развития центральной NO-ергической системы изучено с использованием гистохимического метода распределение нейронов, содержащих синтазу NO (СNO), в головном мозге у анамний и амниот.

Поскольку раннее было убедительно доказано (D. Bredt, 1991;

T. Dawson, 1991), что нейронная СNO является никотинамидаденинди нуклеотидфосфатдиафоразой (НАДФН-д), в работе был использован метод идентификации нейронов, содержащих этот фермент, разработанный U. Scherer-Singler (1983) в модификации B. Hope и S. Vincent (1992).

Использование гистохимической реакции на НАДФН-д для идентификации НАДФН-д/СNO-содержащих нейронов возможно только после фиксации в параформальдегиде. При этом инактивируются все НАДФН-зависимые ферменты-окислители, за исключением CNO (B. Pasqualotto, 1991). Специфичность гистохимической реакции проверялась инкубацией срезов в растворах, не содержащих нитросиний тетразолий или НАДФН, а также в растворе, содержащем НАДФ вместо НАДФН. Так как химической основой реакции является образование преципитата формазана, при восстановлении солей тетразолия НАДФН-д/СNO в присутствии НАДФН, гистохимическая реакция не наблюдалась в случае отсутствия в инкубационной среде нитросинего тетразолия или НАДФН, а также при использовании НАДФ вместо НАДФН.

Морфометрическое исследование проводилось с помощью системы текстурного анализа Leitz-TAS (ФРГ) по специально разработанной программе. Изображение препарата при помощи видеокамеры выводилось на экран монитора, а затем подсчитывалось количество нейронов на один мм2.

Для изучения развития NO-ергической системы у эмбрионов птиц осуществлялось ингибирование NO-синтазы путем введения в кровеносный сосуд яйца метилового эфира Nw-нитро-L-аргинина (L-МЭНА) в дозе 20 мкг/г яйца (E. Villamor, C. Kessel, 2005). В группе контроля в сосуд яйца вводили неактивный по отношению к CNO стериоизомер – метиловый эфир N-нитро-D-аргинина (D-МЭНА) в дозе 20 мкг/г яйца. В качестве донора NO в кровеносный сосуд яйца вводился L-аргинин в дозе 20 мкг/г яйца (А.В. Гурин, 1998). Использовались препараты производства фирмы «Sigma» (США).

Влияние температурного фактора на состояние центральной NO-ергической системы у гомойотермных животных в постнатальном онтогенезе оценивалось путем изучения распределения NO-позитивных нервных клеток в гипоталамусе кур и крыс при экспериментальных гипертермии и гипотермии. Для изучения влияния температурного фактора на развитие NO-ергической системы в пренатальном онтогенезе гомойотермных животных изучалось распределение NO-позитивных нервных клеток в гипоталамусе эмбрионов уток при экспериментальных гипертермии и гипотермии.

Экспериментальная гипертермия взрослых животных осуществлялась в термокамере при температуре 37,0 ± 0,5 °С (млекопитающие) и 39,0 ± 0,5 °С (птицы) в течение 10 ч, экспериментальная гипотермия – в термокамере при температуре 12,0 ± 0,5 °С в течение 10 ч (Hensel, 1973).

С целью создания гипертермии эмбрионы утки инкубировались в термостате при температуре 39 ± 0,5 °С в течение 3 ч 1, а для создания гипотермии эмбрионы инкубировались при температуре 34 ± 0,5 °С в течение 3 ч (B. Tzschentke, V. Dunai, 2004). Часть эмбрионов уток Физиологическая температура инкубации эмбрионов утки – 37,0 ± 0,5 °С.

помещались в термостат с температурой 38,5 ± 0,5 °С на 2 ч ежедневно на протяжении 3 суток, начиная с 28-го дня их эмбрионального развития (B. Tzschentke, V. Dunai, 2005).

Функциональная зрелость центральных NO-зависимых механизмов оценивалась по срокам появления изменений интенсивности метаболизма и температуры тела в ответ на введение ингибитора СNO в постнатальном онтогенезе цыплят, крыс и морских свинок. Интенсивность метаболизма оценивалась по скорости потребления кислорода. Животным вводился однократно подкожно L-МЭНА в дозе 100 мкг/кг (А.В. Гурин, 1999).

Через 1, 2 и 3 ч после введения ингибитора СNO с помощью респирометра SCHOLANDER (ФРГ) определялась скорость потребления кислорода в мл/кг/мин.

Измерение температуры тела и ректальной температуры проводилось цыплятам, крысам и морским свинкам. На первый, шестой, десятый и четырнадцатый дни после рождения им подкожно вводился L-МЭНА (100 мкг/кг). Температурные показатели снимались сразу после введения и через 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 и 240 мин после введения.

Ректальная температура определялась также за 90, 60, 30 мин до введения ингибитора NO-синтазы. Для измерения температуры тела применялся электротермометр ТПЭМ-1 (РФ).

Изучалось влияние ингибитора СNO (L-МЭНА), введенного двукратно на первом и третьем дне жизни в дозе 750 мкг/кг (А.В. Гурин, В.И. Дунай, 1999) на среднесуточную температуру тела взрослых крыс в состоянии покоя и при эмоционально-ориентировочной реакции в «открытом поле»;

колебания температуры тела при экспериментальной гипотермии и гипертермии;

колебания температуры тела при системном и локальном воспалении;

порог болевой чувствительности;

уровень общего тироксина;

частоту сердечных сокращений и сократительную функцию сердца.

Лихорадка вызывалась внутрибрюшинным введением липополисахарида E. coli в дозе 50 мкг/кг, а локальное асептическое воспаление – внутримышечным введением скипидарового масла в дозе 50 мкл/животное (L. LeMay, 1990).

Температура тела в течение суток регистрировалась с помощью телеметрической установки MINIMITTER (США). Для воспроизведения общепринятой модели эмоциональной ориентировочной реакции, сопровождающейся повышением температуры тела, крыс помещали в пластиковые емкости белого цвета размерами 70 40 40 см («открытое поле»). Латентный период рефлекса отдергивания хвоста определялся в ответ на тепловое ноцицептивное раздражение.

Для выявления частоты сердечных сокращений и температуры тела использовалась телеметрическая установка MINIMITTER (США) и ТЭМП-1 (РФ). Биомеханическая активность сердца регистрировалось с помощью многоканального поликардиографа «Мингограф-81» (Швеция).

Содержание общего тироксина определялось иммуноферментным методом с помощью наборов фирмы «Dialab» (Австрия).

Полученные цифровые данные обработаны на персональном компьютере общепринятыми методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента. Различия сравниваемых показателей считались статистически достоверными при р 0,05.

Распределение нейронов, содержащих НАДФН-диафоразу/СNO, в головном мозге у анамний и амниот. При изучении серийных гистологических срезов мозга, окрашенных на НАДФН-д/СNO, установлено, что все изучавшиеся структуры головного мозга карпа (продолговатый мозг, средний мозг, промежуточный мозг и передний мозг) содержали НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны.

При исследовании срезов продолговатого мозга, окрашенных на НАДФН-д/СNO, выявлено, что НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки имели небольшие размеры – 6–12 мкм, плотность их расположения – 56,0 ± 4,64 на мм2. В среднем мозге размеры нервных клеток, содержавших НАДФН-д/СNO, достигали 10–16 мкм. Однако плотность их расположения была невелика – 16,1 ± 4,48 на мм2.

НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны в переднем и заднем отделах гипоталамуса имели размеры 6–10 мкм при плотности расположения 28,0 ± 4,62 на мм2. В переднем мозге выявлялись слабоокрашенные, мелкие (4–6 мкм) НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки с невысокой плотностью расположения (10,1 ± 2,36 на мм2).

При изучении срезов головного мозга лягушки установлено, что НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки продолговатого мозга имели размеры 10–16 мкм, плотность их расположения была 84,2 ± 8,46 на мм2.

В среднем мозге выявлялись нейроны, размером 8–14 мкм, в количестве 22,0 ± 2,24 на мм2. Передние и задние отделы гипоталамуса лягушки содержали слабоокрашенные НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны мелких размеров (6–10 мкм) в количестве 36,1 ± 6,44 на мм2. В переднем мозге НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны достигали размеров 6–12 мкм с плотностью расположения 16,1 ± 2,62 на мм2.

При анализе полученных результатов установлено статистически достоверное увеличение (p 0,05) количества нейронов, содержащих НАДФН-д/СNO, в продолговатом мозге земноводных по сравнению с рыбами.

В связи с тем, что NО является одним из важнейших факторов, обеспечивающих функционирование центральной нервной системы, выявленные филогенетические изменения в строении продолговатого мозга отражают смену типов дыхания и кровообращения, связанные с выходом на сушу предков современных земноводных.

У птиц и млекопитающих НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки обнаружены в тех же структурах, что и у рыб и земноводных.

На серийных срезах продолговатого мозга кур и голубей НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки выявлены в гигантоклеточном ретикулярном, дорзальном ретикулярном и вентральном ретикулярном ядрах. Продолговатый мозг крыс, морских свинок и ежей также содержит НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны во всех изучавшихся структурах: парагигантоклеточном ретикулярном, гигантоклеточном ретикулярном, медиальном вестибулярном ядрах, а также в ядрах солитарного тракта, паратригеминальном, парамедиальном ретикулярном, клиновидном, дорзальном ретикулярном ядрах и вентральном ретикулярном ядре.

На серийных срезах гипоталамуса кур и голубей обнаружены крупные, интенсивно окрашенные НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны в латеральной преоптической и медиальной преоптической областях, супраоптическом, паравентрикулярном, перивентрикулярном, вентромедиальном и дорсомедиальном ядрах, а также в латеральной гипоталамической области, латеральном маммиллярном ядре, медиальном маммиллярном ядре и супрамаммиллярном ядре.

У крыс, морских свинок и ежей в передних отделах гипоталамуса НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки встречаются в составе ряда ядер и областей: медиальном преоптическом и переднем коммиссуральном ядрах, медиальной преоптической и латеральной преоптической областях, переднем перивентрикулярном, преоптическом супрахиазмальном, супраоптическом, паравентрикулярном, круглом, дорсомедиальном, дорзальном и вентральном премаммиллярных ядрах, а также в латеральной части медиального маммиллярного и супрамаммиллярном ядрах.

Сравнительный анализ количества НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов в продолговатом мозге и гипоталамусе у рыб, земноводных, птиц и млекопитающих дает основание утверждать, что в процессе филогенеза по мере усложнения структурной организации центральной нервной системы, наблюдается статистически достоверное увеличение числа NO-синтезирующих нервных клеток в продолговатом (рисунок 1) и промежуточном мозге (рисунок 2).

* позитивных нейронов на мм Количество НАДФН-д/CNO * * продолговатый мозг рыб продолговатый мозг земноводных продолговатый мозг птиц продолговатый мозг млекопитающих Примечание – * различия достоверны по отношению к контролю;

p 0,05.

Рисунок 1 – Плотность НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов в продолговатом мозге у рыб, земноводных, птиц и млекопитающих * позитивных нейронов на мм Количество НАДФН-д/CNO * передний гипоталамус рыб передний гипоталамус земноводных передний гипоталамус птиц передний гипоталамус млекопитающих Примечание – * различия достоверны по отношению к контролю;

p 0,05.

Рисунок 2 – Плотность НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов в переднем гипоталамусе у рыб, земноводных, птиц и млекопитающих Формирование центральных NO-зависимых структур в пренатальном онтогенезе у гомойотермных животных. В период между 20-м и 33-м днем эмбрионального развития в гипоталамусе уток происходят существенные изменения в распределении НАДФН-д/СNO позитивных нейронов в составе центральной нервной системы.

При изучении серийных срезов гипоталамуса 20-дневных эмбрионов уток НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны не обнаруживаются в латеральной гипоталамической области, паравентрикулярном, преоптическом, вентромедиальном ядрах и переднем гипоталамусе.

У 23-дневных эмбрионов НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны выявляются в переднем гипоталамусе и латеральной гипоталамической области. В состав ядер переднего гипоталамуса 23-дневных эмбрионов входят нейроны размерами от 10–12 до 20–25 мкм. Форма клетки может быть округлой, овальной, веретенообразной или приближаться к треугольной. Крупные ядра, округлой или овальной формы, занимали большую часть клетки. Чаще всего они находились в эксцентричном положении, вплоть до резкого смещения к одному из полюсов клетки.

В некоторых нейронах цитоплазма имела вид узкого ободка серповидной формы, окружавшего ядро с одной стороны. Гранулы фермента располагались диффузно по всей цитоплазме и имели невысокую плотность расположения. Начальные отделы отростков нейронов не прокрашивались. В составе ядер гипоталамуса нейроны располагались, как правило, диффузно. Наряду с этим выявлены области с более высокой концентрацией нейронов, формированием одиночных групп, состоящих из 4–5 клеток.

Гипоталамическая область 28- и 33-дневных эмбрионов уток содержала НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны в переднем гипоталамусе, латеральной гипоталамической области и паравентрикулярном ядре.

В преоптическом и вентромедиальном ядрах у 28- и 33-дневных эмбрионов НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны не выявлялись.

В переднем гипоталамусе эмбрионов 28-дневных уток наблюдалось увеличение степени дифференцировки нервных клеток. Нейроны начинали группироваться в ядра. Наряду с увеличением размеров клеток происходило изменение ядерно-цитоплазменного отношения: объем цитоплазмы увеличивался по сравнению с объемом ядра. Изменялся и характер окрашивания цитоплазмы. Плотность расположения гранул фермента увеличивалась. Наряду с диффузным расположением гранул в цитоплазме нейронов встречались более крупные конгломераты.

В отдельных нервных клетках окрашивались начальные отделы нейритов.

НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны в переднем гипоталамусе морских свинок появляются в период между 35-м и 45-м днем эмбрионального развития. Размеры этих клеток колебались в пределах от 20 до 45 мкм. Их форма была веретенообразной или приближалась к треугольной. Крупные ядра округлой формы чаще всего занимали эксцентричное положение. Гранулы фермента в цитоплазме нейронов располагались диффузно по всей цитоплазме. Плотность их расположения была небольшой. Начальные отделы отростков нейронов хорошо прокрашивались. В составе ядер гипоталамуса НАДФН-д/СNO позитивные нейроны располагались, как правило, концентрированно, формируя одиночные группы клеток.

При изучении серийных срезов переднего гипоталамуса 55-дневных эмбрионов морских свинок наблюдалось увеличение степени дифференцировки нервных клеток. Нейроны группировались в ядра, объем их цитоплазмы, по сравнению с объемом ядра, увеличивался.

Плотность расположения гранул фермента также возрастала. Наряду с диффузным расположением гранул фермента в цитоплазме нейронов выявлялись области их концентрированного накопления.

У 11–12-недельных плодов человека в ядрах переднего гипоталамуса нейроны, содержавшие НАДФН-д/СNO, располагались диффузно (рисунок 3).

НАДФН-д/СNO позитивные нейроны Рисунок 3 – НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки в переднем гипоталамусе 11-недельного плода человека. Микрофото ( 400) Они имели самую разнообразную форму. Нервные клетки, вступившие в период дифференцировки, сохраняли ряд признаков, характерных для нейробластов: небольшие размеры, округлую или овальную форму, относительно большое, эксцентрично расположенное ядро. У более зрелых нейронов отмечалось увеличение размеров, тело приобретало треугольную, овальную или многоугольную форму. Ядро постепенно смещалось в центр нейроплазмы, а его относительные размеры из-за роста тела нейронов уменьшались. NO-содержащие гранулы распределялись в нейроплазме равномерно. В ходе последующей дифференцировки начинали постепенно окрашиваться начальные участки отростков (по типу аксонного холмика). В дальнейшем наблюдалось окрашивание и самих отростков на некотором протяжении от тела нейрона. Интенсивность окрашивания нейроплазмы клеток была различной – от светло- до темно-фиолетового цвета. При этом наибольшая активность NO наблюдалась у дифференцирующихся и растущих нейронов.

При изучении серийных срезов мозга 1-дневных уток, которым на 28-й день эмбрионального развития в кровеносный сосуд яйца вводили L-МЭНА, наблюдалось уменьшение интенсивности окраски НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов. У них на меньшем протяжении окрашивались отростки. При введении L-аргинина было отмечено более интенсивное окрашивание цитоплазмы нейронов. В ней наблюдалось более плотное расположение гранул фермента с образованием крупных глыбок.

Таким образом, гипоталамическая область уже 23-дневных эмбрионов уток содержит НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны.

У морских свинок НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны в переднем гипоталамусе появляются к 45-му дню эмбрионального развития. Кроме того, NO-содержащие нейроны обнаружены в ядрах переднего гипоталамуса 11–12-недельных плодов человека, что может свидетельствовать об относительно более раннем возникновении у человека NO-ергической системы переднего гипоталамуса, по сравнению с птицами и другими млекопитающими.

Развитие центральных NO-зависимых систем в раннем постнатальном онтогенезе у птиц и млекопитающих. При изучении серийных срезов гипоталамуса цыплят в возрасте одного дня НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны были обнаружены в латеральной преоптической и латеральной гипоталамической областях, а также в паравентрикулярном, латеральном маммиллярном и супрамаммиллярном ядрах.

У цыплят в возрасте одного дня НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны не выявлены в ряде структур гипоталамуса, в которых у взрослых организмов такие нейроны присутствуют. Так, не обнаружены НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны в медиальной преоптической области, супраоптическом, перивентрикулярном, медиальном маммиллярном, дорсомедиальном и вентромедиальном ядрах.

Гипоталамическая область 3-дневных цыплят содержала НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны в тех же структурах, что и у 1-дневных птиц. Кроме того, они обнаруживались в медиальном маммиллярном ядре, дорсомедиальном и вентромедиальном ядрах.

У цыплят в возрасте трех дней так же, как и у 1-дневных птиц, НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны не выявлены в медиальной преоптической области, супраоптическом и перивентрикулярном ядрах гипоталамуса.

Распределение НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов гипоталамической области, характерное для взрослого организма формировалось в период между третьим и десятым днями жизни.

В отличие от третьего дня развития, к десятому дню НАДФН-д/СNO позитивные нейроны обнаруживались в медиальной преоптической области и перивентрикулярном ядре. Однако гипоталамус 10-дневных цыплят по-прежнему не содержал НАДФН-д/СNO-позитивных клеток в супраоптическом ядре. Установлено, что крупные, интенсивно окрашенные НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны появляются в этом ядре в период между десятым и двадцатым днями после вылупливания.

Полученные данные свидетельствуют о том, что структурное формирование NO-зависимых систем нервных центров гипоталамуса цыплят, в основном, завершается к десятому дню после рождения.

В отличие от гипоталамической области НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки в составе продолговатого мозга цыплят обнаружены во всех изучавшихся структурах еще до рождения, что свидетельствует о функциональной готовности нервных центров этого отдела ЦНС с первых дней жизни обеспечивать выполнение важнейших вегетативных функций (дыхания и кровообращения).

При изучении серийных срезов гипоталамуса голубей в возрасте одного дня НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны обнаружены в латеральной преоптической и латеральной гипоталамической областях, в латеральном маммиллярном и в супрамаммиллярном ядрах. Вместе с тем, подобные нейроны не выявляются в медиальной преоптической области, супраоптическом, перивентрикулярном, медиальном маммиллярном и паравентрикулярном ядрах.

К десятому дню развития НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны появляются в паравентрикулярном ядре. Гипоталамус 10-дневного голубя не содержит НАДФН-д/СNO-позитивных клеток в медиальной преоптической области, в супраоптическом, перивентрикулярном и медиальном маммиллярном ядрах. В этих структурах крупные, интенсивно окрашенные НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны появляются в период между десятым и двадцатым днем после вылупливания.

Таким образом, формирование NO-эргической системы гипоталамуса у голубей завершается к 20-му дню эмбриогенеза. Кроме того, важно отметить, что у голубей как и у цыплят НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки в составе продолговатого мозга обнаружены во всех изучавшихся структурах еще до рождения. Это свидетельствует о том, что еще до вылупливания у них завершается формирование NO-зависимых систем нервных центров продолговатого мозга, структурная и функциональная зрелось которых в первые дни жизни будет обеспечивать важнейшие вегетативные функции.

Более позднее завершение формирования NO-зависимых систем гипоталамуса у голубей по сравнению с цыплятами (соответственно на 10-е и 20-е сутки после вылупливания) можно объяснить разными типами развития. Гнездовой тип развития у голубей предопределяет более позднюю по времени востребованность совершенной системы терморегуляции.

При изучении серийных срезов гипоталамуса морских свинок в возрасте одного дня НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны обнаружены в латеральной преоптической области, паравентрикулярном ядре, латеральной гипоталамической области и в супрамаммиллярном ядре.

При этом НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны не выявляются в медиальной преоптической области, супраоптическом, перивентрикулярном и медиальном маммиллярном ядрах. В возрасте трех дней они отсутствуют только в супраоптическом и перивентрикулярном ядрах гипоталамуса.

В период между третьим и десятым днями жизни морских свинок распределение НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов гипоталамической области приближается к дефинитивному. У 10-дневных животных эти нейроны присутствуют практически во всех структурах гипоталамуса, содержащих данный тип нервных клеток у взрослых особей, в том числе в супраоптическом и перивентрикулярном ядрах.

В отличие от гипоталамуса в продолговатом мозге морских свинок НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки присутствуют уже с момента рождения.

На серийных срезах гипоталамуса однодневных крыс НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны обнаружены в латеральной преоптической области, паравентрикулярном и супрамаммиллярном ядрах, а также в латеральной гипоталамической области. Вместе с тем, они отсутствуют в медиальной преоптической области, супраоптическом, перивентрикулярном и медиальном маммиллярном ядрах.

У 3-дневных крыс количество областей гипоталамуса, содержащих НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны, не изменяется. Вместе с тем, в пределах паравентрикулярного ядра, латеральной гипоталамической области и супрамаммиллярного ядра количество таких нейронов значительно возрастает.

В период между третьим и десятым днями у крысы формируются основные черты распределения НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов гипоталамической области, характерные для взрослого организма. Лишь в супраоптическом ядре НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны появляются на 20-й день постнатального онтогенеза. Таким образом, этот день можно считать днем завершения формирования NO-зависимых систем нервных центров гипоталамуса крысы. Результаты проведенных исследований подтверждают полученные ранее данные (А.В. Гурин, 1998) свидетельствующие о том, что окончательное структурное формирование NO-зависимых систем нервных центров гипоталамуса крысы происходит в период между 12 и 23 днями индивидуального развития.

В продолговатом мозге крыс НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки присутствуют уже к моменту рождения.

При исследовании серийных срезов гипоталамуса однодневных ежей НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны были обнаружены в латеральной преоптической, латеральной гипоталамической областях и в супрамаммиллярном ядре. В то же время у них не были выявлены НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны в медиальной преоптической области, супраоптическом, паравентрикулярном, перивентрикулярном и медиальном маммиллярном ядрах.

У 3-дневных ежей НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки появляются в паравентрикулярном ядре, а к десятому дню жизни они отсутствуют только в супраоптическом и перивентрикулярном ядрах.

В этих ядрах интенсивно окрашенные НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны появлялись в период между двадцатым и двадцать восьмым днем после рождения животных.

Таким образом, в гипоталамусе 28-дневного животного отсутствуют различия в распределении НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов по сравнению со взрослой особью. Полученные данные свидетельствуют о том, что между двадцатым и двадцать восьмым днями после рождения завершается структурное формирование NO-зависимых систем нервных центров гипоталамуса ежей. Также до рождения обнаруживается присутствие НАДФН-д/СNO-позитивных клеток в продолговатом мозге ежей.

Полученные данные свидетельствуют о том, что чем выше эволюционная ветвь развития животных, тем в более ранние сроки постнатального онтогенеза у них происходит структурное формирование NO-зависимых систем нервных центров гипоталамуса. Поэтому, в течение первых дней жизни они менее зависимы от действия температурного фактора.

Принимая во внимание полученные ранее данные (A.V. Gourine, V.A. Kulchitsky, V.N. Gourine, 1995), свидетельствующие, что NO может выполнять функции эндогенного модулятора активности гипоталамических нейронов, есть основания предполагать, что наблюдаемые изменения в распределении NO-синтезирующих нейронов в гипоталамусе в раннем постнатальном онтогенезе отражают развитие нейронных систем, участвующих в центральной регуляции автономных функций.

Влияние температурного фактора на состояние и формирование центральной NO-ергической системы у гомойотермных организмов.

После сеанса гипотермии во всех исследованных структурах гипоталамуса курицы обнаружены крупные, интенсивно окрашенные НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны. Плотность расположения на 1 мм составила: в латеральной и медиальной преоптических областях – 58,1 ± 4,48 и 67,0 ± 4,92 соответственно, в супраоптическом и паравентрикулярном ядрах – 314,2 ± 6,34 и 406,1 ± 4,08 соответственно, в перивентрикулярном ядре – 14,2 ± 3,65, в латеральной гипоталамической области – 482,0 ± 4,84, в латеральном маммиллярном и медиальном маммиллярном ядрах – 680,2 ± 6,16 и 760,2 ± 4,58 соответственно и в супрамаммиллярном ядре – 422,1 ± 6,32. При сопоставлении плотности НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов в экспериментальной и контрольной группе не выявлено статистически достоверных различий.

В серийных срезах гипоталамуса кур, которые подвергались экспериментальной гипертермии, обнаружено увеличение плотности НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов. Прирост, по сравнению с контрольными животными, составил: в латеральной преоптической области 16,37 % (p 0,05), медиальной преоптической области – 26,15 % (p 0,05), супраоптическом ядре – 20,32 % (p 0,05), паравентрикулярном ядре – 21,05 % (p 0,05) и супрамаммиллярном ядре – 16,75 % (p 0,05). В перивентрикулярном ядре, латеральной гипоталамической области, латеральном маммиллярном и медиальном маммиллярном ядрах статистически достоверных изменений плотности НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов по сравнению с контрольными животными не выявлено.

При исследовании серийных срезов гипоталамуса половозрелых крыс, которые подвергались экспериментальной гипотермии, также не обнаружена статистически достоверная разница изменения плотности НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов по сравнению с контрольными животными. НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны обнаружены во всех исследованных структурах. Плотностью расположения на 1 мм составила: в латеральной и медиальной преоптических областях – 311,1 ± 11,32 и 74,2 ± 3,23 соответственно, в супраоптическом ядре – 644,1 ± 4,24, в паравентрикулярном ядре – 712,0 ± 3,34, в перивентрикулярном ядре – 17,2 ± 5,33, в латеральном и медиальном маммиллярных ядрах – 1060,2 ± 2,42 и 1028,1 ± 4,62 соответственно, в латеральной гипоталамической области – 562,3 ± 4,54 и в супрамаммиллярном ядре – 370,1 ± 3,54.

В гипоталамусе крыс, которые подвергались экспериментальной гипертермии, происходило увеличение плотности НАДФН-д/СNO позитивных нейронов по сравнению с контрольными животными.

Прирост составил: в латеральной преоптической области – 25,66 % (p 0,05), супраоптическом ядре – 17,53 % (p 0,05), паравентрикулярном ядре – 21,04 % (p 0,05). В перивентрикулярном ядре, медиальной преоптической области, супрамаммиллярном ядре, латеральной гипоталамической области, латеральном маммиллярном ядре и медиальном маммиллярном ядре статистически достоверных изменений плотности НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов по сравнению с контрольными животными не выявлено.

Таким образом, у представителей теплокровных организмов NO-синтезирующие нейроны содержатся в нервных центрах гипоталамуса, которые участвуют в регуляции активности периферических терморегуляторных эффекторов. Плотность распределения NO-синтезирующих нейронов различна. При воздействии гипертермии происходит увеличение числа NO-синтезирующих нервных клеток в ряде ядер гипоталамуса, в то время как гипотермия не влияет на плотность распределения NO-синтезирующих нейронов. Полученные данные согласуются с утверждением K. Sanders (1992) о том, что NO, образуемый CNO-позитивными нервными клетками гипоталамуса, может вовлекаться в терморегуляционные реакции гомойотермного организма при воздействии высоких внешних температур.

При изучении серийных срезов мозга 20-, 23-, 28- и 33-дневных эмбрионов утки, которые инкубировались при температуре 39 °С в течение 3 ч непосредственно перед забором материала, не выявлены изменения в распределении NO-позитивных нейронов в переднем гипоталамусе. Отмечено только уменьшение интенсивности окрашивания нервных клеток из-за более низкой плотности расположения гранул фермента в цитоплазме нейронов по причине уменьшения его активности.

Плотность НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов в переднем гипоталамусе 31-дневных эмбрионов уток, которые начиная с 28-го дня эмбрионального развития инкубировались при температуре 38,5 °С по 2 ч ежесуточно, составила 74,1 ± 6,4 на мм2, что достоверно больше, чем у контрольных животных (p 0,05) (рисунок 4).

* позитивных нейронов на мм Количество НАДФН-д/CNO передний гипоталамус контрольных эмбрионов передний гипоталамус экспериментальных эмбрионов Примечание – * различия достоверны по отношению к контролю;

p 0,05.

Рисунок 4 – Плотность НАДФН-д/СNO-позитивных нервных клеток в переднем гипоталамусе 31-дневных эмбрионов утки, инкубированных с 28-го дня пренатального развития при температуре 38,5 °С ежедневно в течение 2 ч Кроме того, установлено, что дозированная гипертермия (начиная с 28-го дня эмбрионального развития инкубация при температуре 38,5 °С по 2 ч ежесуточно) приводит к приросту массы тела на 24 % в раннем постнатальном периоде развития уток по сравнению с контрольными животными.

У эмбрионов, которые инкубировались при температуре 34 °С, НАДФН-д/СNO-позитивные нейроны появлялись в переднем гипоталамусе уже в 20-дневном возрасте. Незначительное увеличение активности фермента в нервных клетках ядер переднего гипоталамуса наблюдалось у 23-, 28- и 33-дневных эмбрионов.

Обнаружено, что гипотермия приводила также к укорочению эмбрионального периода развития уток на 2 суток.

Таким образом полученные данные доказывают, что при низких температурах инкубации птиц (уток), наблюдается активация СNO.

Низкие температуры стимулируют созревание НАДФН-д/СNO позитивных нейронов в эмбриогенезе птиц, а NO выступает сигнальной молекулой для взрослых животных.

Функциональное созревание центральной NO-ергической системы у птиц и млекопитающих и ее роль в становлении системных функций организма в онтогенезе. В ходе выполнения работы установлено, что у цыплят 1-, 6- и 12-дневного возраста введение ингибитора CNO (L-МЭНА) не сопровождается достоверным изменением в потреблении кислорода, что может свидетельствовать о функциональной незрелости NO-зависимых механизмов, участвующих в регуляции метаболизма. У животных 20-дневного возраста отмечалось снижение скорости потребления кислорода на 15,0 ± 0,25 мл/кг/мин через 2 ч после введения ингибитора CNO. Это дает основание предполагать, что завершение функционального созревания NO-зависимых механизмов, участвующих в регуляции метаболизма у цыплят, происходит в период между двенадцатым и двадцатым днями постнатального периода развития.

У крыс 1- и 6-дневного возраста введение ингибитора CNO не вызывало достоверных изменений в потреблении кислорода.

Это свидетельствует о функциональной незрелости NO-зависимых механизмов регуляции метаболизма. У животных 12-дневного возраста через 2 ч после введения L-МЭНА скорость потребления кислорода падает на 18,0 ± 0,25 мл/кг/мин. Полученные данные доказывают, что между шестым и двенадцатым днями постнатального периода онтогенеза происходит функциональное созревание NO-зависимых механизмов, участвующих в регуляции обмена веществ.

У морских свинок 1-дневного возраста введение ингибитора CNO не вызвало достоверных изменений в потреблении кислорода, что также свидетельствует о функциональной незрелости NO-зависимых механизмов, регуляции метаболизма. У животных 6-дневного возраста через 2 ч после введения L-МЭНА наблюдалось снижение скорости потребления кислорода на 14,0 ± 0,2 мл/кг/мин, что указывает на то, что к этому сроку завершается функциональное созревание NO-зависимых механизмов регуляции обмена веществ.

При изучении влияния ингибитора CNO, введенного в неонатальный период, на ректальную температуру гомойотермных организмов установлено, что у 1- и 6-дневных цыплят введение L-МЭНА не приводило к достоверным ее изменениям. У 14-дневных цыплят через 120 мин после введения ингибитора наблюдалось падение ректальной температуры на 1,00 ± 0,14 °С.

У 1- и 6-дневных крыс введение L-МЭНА не приводило к достоверным изменениям ректальной температуры, в то время как у 10-дневных крыс через 90 мин после введения препарата происходило снижение температуры на 1,25 ± 0,18 °С.

У 1-дневных морских свинок введение L-МЭНА не изменяло ректальную температуру, однако у 6- и 10-дневных особей через 60 мин после введения препарата отмечено ее снижение на 1,32 ± 0,16 °С.

Таким образом, функциональное созревание NO-зависимых механизмов, участвующих в регуляции метаболизма, у цыплят, крыс и морских свинок завершается к двадцатому, двенадцатому и шестому дню постнатального периода соответственно.

Полученные данные доказывают, что у крыс, которым в первые дни жизни вводился ингибитор СNO (L-МЭНА), становление температуры тела, характерной для взрослых животных, наблюдается позже, чем у контрольных крыс, которым вводили неактивный стериоизомер (D-МЭНА). Так, у 12-, 14-, 16- и 18-дневных крысят после введения L-МЭНА на первый и третий день жизни температура тела была 35,9 ± 0,41, 35,4 ± 0,42, 36,0 ± 0,23 и 36,2 ± 0,17 °С соответственно, в то время как у контрольных животных она составляла 37,1 ± 0,25, 37,3 ± 0,24, 36,7 ± 0,18 и 37,1 ± 0,22 °С. Температура тела крыс, которым в раннем онтогенезе ингибировали СNO, достигала значений, характерных для контрольных животных, лишь к двадцатому дню постнатального периода.

Установлено, что суточная температура тела у животных, которым в ранний постнатальный период вводили D-МЭНА, колебалась незначительно (37,5 ± 0,34 °С). У животных с ингибированным в раннем постнатальном онтогенезе синтазом NO суточные колебания температуры были более выраженными. Температура их тела ночью (с 23 ч до 1 ч) достигала 38,5 ± 0,13 °С, что было на 1 °С выше, чем у контрольных животных. Таким образом, можно предполагать, что NO в раннем постнатальном онтогенезе принимает участие в формировании механизмов, ответственных за изменение температуры тела в течение суток. Полученные результаты подтверждают данные о том, что блокада синтеза NO в центральной нервной системе проявляется развитием гипертермии (А.В. Гурин, 2001).

В результате оценки эмоционально-ориентировочной реакции, сопровождающейся повышением температуры тела, установлено, что выраженность гипертермии при эмоционально-ориентировочной реакции в «открытом поле» у животных, которым в раннем постнатальном онтогенезе ингибировали синтазу NO, и у контрольных была сходной.

Следовательно, ингибирование синтазы NO в неонатальный период существенно не влияет на эмоционально-ориентировочную реакцию экспериментальных животных.

Обнаружено также, что ингибирование синтазы NO в неонатальный период не оказывает существенного влияния на работу системы терморегуляции при перегревании и охлаждении у взрослых крыс.

Однако при этом наблюдается более выраженная лихорадочная реакция на эндотоксин. Так, через 5 и 6 ч после введения эндотоксина температура тела у экспериментальных животных составляла 38,0 ± 0,09 °С и 38,1 ± 0,04 °С соответственно. У контрольных животных во второй фазе лихорадочной реакции температура тела была 37,5 ± 0,13 °С и 37,6 ± 0,09 °С.

Установлено, что животные, которым в первые дни жизни ингибировали синтазу NO, отвечали более выраженной лихорадочной реакцией при локальном повреждении тканей. Так, через 10 ч после введения скипидарового масла у животных, которым ингибировали СNO в неонатальный период, температура тела составляла 39,5 ± 0,06 °С, что было на 0,5 °С выше, чем у контрольных животных (39,0 ± 0,12 °С).

Таким образом, в результате выполненных экспериментов установлено, что ингибирование синтазы NO в неонатальный период изменяет выраженность лихорадочной реакции у взрослых животных одновременно при системном и локальном воспалении, но не оказывает влияния на остальные изученные терморегуляторные реакции. При развитии лихорадочной реакции во время воспаления, при эмоционально ориентировочной реакции и действии холода активируются процессы теплопродукции и угнетаются процессы теплоотдачи. Поскольку ингибирование синтеза NO в неонатальный период проявляется лишь в выраженности лихорадочной реакции, но не влияет на температуру тела при охлаждении и эмоционально-ориентировочной реакции в «открытом поле», можно предположить, что NO не участвует в механизмах, ответственных за увеличение теплопродукции и уменьшение теплоотдачи. На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что действие ингибитора СNO в неонатальный период приводит к изменению реактивности центральных структур на действие пирогенов.

У взрослых крыс, которым в первые дни жизни ингибировали СNO, в 3-х месячном возрасте латентный период реакции отдергивания хвоста на болевой раздражитель составлял 4,0 ± 0,47 с, в то время как у животных, которым в первые дни жизни вводили D-МЭНА, он составлял 13,1 ± 1,2 с. Эти данные свидетельствуют о том, что в неонатальный период монооксид азота не только участвует в развитии системы терморегуляции, но и влияет на формирование ноцицептивной системы организма.

Таким образом, полученные данные дают достаточные основания утверждать, что NO в неонатальный период не только участвует в развитии механизмов, ответственных за становление устойчивой температуры тела, характерной для взрослых животных и изменение температуры тела в течение суток, а также принимает участие в становлении ноцицептивной системы.

Ингибирование синтазы оксида азота на раннем этапе постнатального онтогенеза повышает уровень тироксина у взрослых животных. Установлено, что введение ингибитора СNO увеличивает уровень гормона щитовидной железы у экспериментальных животных по сравнению с контролем на 33 % (рисунок 5).

Проведенные исследования показали, что у животных, которым на раннем этапе постнатального развития вводили ингибитор NO-синтазы, частота сердечных сокращений не отличалась от таковой у контрольных особей, однако максимальное внутрижелудочковое давление сердца существенно изменялось: Рmax у экспериментальных крыс было на 23,7 % меньше, чем у контрольных животных (см. таблицу).

Полученные результаты свидетельствуют о снижении инотропной функции сердца после применения ингибитора NO-синтазы в неонатальный период развития. Данная модификация функционального состояния сердца может быть обусловлена нарушением периферических механизмов нейрогормональной регуляции сократительной способности миокарда.

* Количество тироксина, нмоль/л – опыт, (L-МЭНА);

– контроль, (D-МЭНА) Примечание – * различия достоверны по отношению к контролю;

p 0,05.

Рисунок 5 – Влияние ингибитора синтазы NO (L-МЭНА), введенного на первый и третий день жизни, на уровень тироксина у взрослых крыс Таблица – Функциональные показатели сердца зрелых крыс после применения ингибитора NO-синтазы на раннем этапе постнатального онтогенеза Показатели Группы животных ЧСС, сокр./мин Рmax, мм рт. ст.

Контроль 294,8 ± 9,2 120,6 ± 6, После применения L-МЭНА 282,1 ± 7,3 92,0 ± 4,7* Примечание – * различия достоверны по отношению к контролю;

p 0,05;

ЧСС – частота сердечных сокращений;

Рmax – максимальное давление в левом желудочке сердца.

На основе проведенных исследований можно заключить, что ингибирование синтазы оксида азота на раннем этапе постнатального онтогенеза оказывает влияние на биомеханическую функцию сердца зрелых животных, снижая силу сердечных сокращений.

В целом, проведенные исследования показали, что функциональное созревание NO-зависимых механизмов, участвующих в регуляции метаболизма, у цыплят, крыс и морских свинок завершается к двадцатому, двенадцатому и шестому дням постнатального онтогенеза соответственно. Центральная NO-ергическая система принимает активное участие в формировании системных функций в онтогенезе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ Основные научные результаты диссертации. Учитывая все представленные результаты выполненной работы можно сделать следующие выводы:

1. В головном мозге у рыб, земноводных, птиц и млекопитающих присутствуют НАДФН-д/СNO-позитивные нервные клетки. В филогенезе (от рыб до млекопитающих) по мере усложнения центральной нервной системы количество таких нейронов увеличивается в продолговатом мозге в 2,3 раза, в промежуточном мозге – в 23,2 раза [2, 9, 14, 15, 21, 22, 28, 30, 39].

2. NO-позитивные нейроны в головном мозге уток и морских свинок появляются во второй половине пренатального онтогенеза (на 23 и день соответственно), а у зародышей человека – в начале плодного периода (на 11–12 неделе внутриутробного периода развития) [2, 12, 18, 20, 27, 29, 41, 43, 58].

3. У гомойотермных животных структурное формирование NO-зависимых систем нервных центров гипоталамуса завершается в постнатальном онтогенезе: у выводковых птиц – к десятому дню;

у гнездовых птиц – к двадцатому дню;

у зрелорождающихся млекопитающих – в период между третьим и десятым днем, у незрелорождающихся млекопитающих – на двадцатый день после рождения [2, 4, 10, 11, 13, 17, 19, 23, 27, 31, 34, 35, 38, 40, 41, 44, 46, 47, 56, 57].

4. Температурный фактор оказывает модулирующее влияние на дифференцировку NO-позитивных нейронов и функциональную активность всей NO-ергической системы головного мозга.

Экспериментальная гипертермия увеличивает число NO-синтезирующих нервных клеток в ядрах гипоталамуса у всех гомойотермных организмов.

Дозированная гипертермия (начиная с 28-го дня эмбрионального развития инкубация яиц при температуре 38,5 °С в течении 2 ч ежесуточно) на фоне стандартного режима инкубации приводит к приросту массы тела на 24 % в раннем постнатальном периоде развития птиц. Дозированная гипотермия стимулирует созревание NO-позитивных нейронов в эмбриогенезе птиц [1, 2, 7, 8, 16, 37, 52, 59–61].

5. В онтогенезе структурно-функциональное созревание центральной NO-ергической системы предопределяет возможность осуществления ряда системных функций организма. Экспериментальное ингибирование синтазы оксида азота в раннем постнатальном периоде развития снижает силу сердечных сокращений на 23,7 %, и повышает уровень тироксина в сыворотке крови на 33 % [1–3, 5, 6, 24, 25, 26, 28, 32, 33, 36, 42, 45, 48–51, 53–55].

6. Особый режим инкубации эмбрионов утки (ежедневное, начиная с 20-го дня развития содержание яиц при температуре 34 ± 0,5 °С в течение 3 ч) на фоне стандартного режима инкубации ускоряет эмбриональное развитие в среднем на двое суток [2, 7, 52, 59–61].

Рекомендации по практическому использованию результатов С целью получения большего прироста массы тела у уток в птицеводческих хозяйствах целесообразно использовать методику дозированной гипертермии (начиная с 28-го дня эмбрионального развития инкубировать яйца при температуре 38,5 ± 0,5 °С в течение 2 ч ежесуточно). Положительные результаты данной методики получены при ее использовании в ряде хозяйств Республики Беларусь (акт о внедрении из РУП «Опытная научная станция по птицеводству» от 31.08.2007 г.;

акт о внедрении из РУСПП «ППР Правда» от 02.09.2007 г.).

Для уменьшения сроков инкубации уток птицеводческим хозяйствам Республики Беларусь следует применять следующую схему гипотермии:

начиная с 20-го дня пренатального развития инкубировать яйца при температуре 34 ± 0,5 °С ежедневно в течении 3 ч. Использование данной методики в ряде хозяйств (акт о внедрении из РУСПП «ППР Правда» от 14.08.2007 г.;

акт о внедрении из РУП «Опытная научная станция по птицеводству» от 22.08.2007 г.;

акт о внедрении из РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» от 03.09.2007 г.) позволило ускорить эмбриональное развитие на двое суток.

Полученные в диссертации результаты целесообразно использовать при написании учебников, учебно-методических пособий, а также в учебном процессе в качестве дополнения к лекционному материалу и для проведения практических занятий по гистологии, цитологии, эмбриологии и биологии развития в вузах биологического, медицинского и ветеринарного профилей. Имеются положительные результаты внедрения в ряде вузов Республики Беларусь: УО «Международный государственный экологический университет им. А.Д. Сахарова», кафедра экологической и молекулярной генетики (акт о внедрении от 18.04.2007 г.), кафедра биологии человека и экологии (акт о внедрении от 15.05.2007 г.);

УО «Витебский государственный медицинский университет имени Дружбы народов», кафедра гистологии (акт о внедрении от 18.10.2007 г.), кафедра биологии (акт о внедрении от 18.10.2007 г.) и УО «Белорусский государственный педагогический университет имени М. Танка», кафедра анатомии, физиологии и валеологии (акт о внедрении от 28.11.2007 г.).

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ СОИСКАТЕЛЯ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Монографии  1. Дунай, В.И. Становление терморегуляции в онтогенезе: участие монооксида азота / В.И. Дунай. – Минск: БГУ, 2005. – 79 с.

2. Дунай, В.И. Филогенез и онтогенез NO-ергической системы головного мозга / В.И. Дунай. – Минск: БГУ, 2007. – 175 с.

Статьи в научных рецензируемых журналах 3. Дунай, В.И. Влияние ингибитора синтазы NO на лихорадочную реакцию и латентный период ноцицептивных рефлексов в онтогенезе у крыс / В.И. Дунай // Вестник Бел. гос. ун-та. – 1999. – № 3. – С. 28–29.

4. Дунай, В.И. Онтогенез NO-зависимых механизмов, участвующих в терморегуляции у птиц / В.И. Дунай // Весцi НАН Беларусi. Сер. бiял.

навук. – 1999. – № 4. – С. 84–85.

5. Дунай, В.И. Влияние ингибитора синтазы NO, введенного в неонатальном периоде, на становление терморегуляции, сердечно сосудистой и ноцицептивной систем / В.И. Дунай // Мед. журн. – 2007. – № 3. – С. 51–53.

6. Дунай, В.И. Влияние ингибитора синтазы NO, введенного в неонатальном периоде, на терморегуляцию при системном и локальном воспалении у взрослых крыс / В.И. Дунай // Весцi НАН Беларусі. Сер.

бiял. навук. – 2007. – № 4. – С. 84–86.

7. Дунай В.И. Влияние температурного фактора и блокады NO-зависимых механизмов на становление NO-ергических структур переднего гипоталамуса в пренатальном онтогенезе уток / В.И. Дунай // Весцi Бел. дзярж. пед. ун-та. – Сер. 3. – 2007. – С. 36–40.

8. Дунай, В.И. Влияние температурного фактора на распределение НАДФН-д/СNO-позитивных нейронов в гипоталамусе у гомойотермных организмов / В.И. Дунай // Мед. журн. – 2007. – № 3. – С. 53–55.

9. Дунай, В.И. Изменение в распределении нейронов, содержащих НАДФН-диафоразу/NO-синтазу, в гипоталамусе и продолговатом мозге в процессе филогенеза / В.И. Дунай // Мед. журн. – 2007. – № 4. – С. 56–58.

10. Дунай, В.И. Онтогенетическое развитие NO-зависимых систем ствола головного мозга у гомойотермных организмов / В.И. Дунай // Вестник Витебск. гос. мед. ун-та. – 2007. – Т. 6, № 3. – С. 13–19.

11. Дунай, В.И. Развитие центральных NO-зависимых структур в постнатальном онтогенезе / В.И. Дунай // Мед. журн. – 2007. – № 3. – С. 55–57.

12. Дунай, В.И. Развитие NO-ергической системы переднего гипоталамуса в эмбриогенезе птиц и человека / В.И. Дунай // Эколог.

вестник – 2007. – № 1. – С. 112–114.

13. Дунай, В.И. Развитие NO-ергических структур ствола головного мозга в онтогенезе гнездовых и выводковых птиц / В.И. Дунай // Журн.

Гродн. гос. мед. ун-та. – 2007. – № 3. – С. 45–47.

14. Дунай, В.И. Распределение нейронов, содержащих НАДФН-д/СNO, в головном мозге у анамний / В.И. Дунай, С.Б. Мельнов, Б.В. Лысый // Эколог. вестник – 2007. – № 2. – С. 112–116.

15. Дунай, В.И. Распределение NO-ергической системы головного мозга позвоночных в процессе филогенеза / В.И. Дунай // Докл. НАН Беларуси. – 2007. – Т. 51, № 5. – С. 106–109.

16. Дунай, В.И. Роль температурного фактора в эмбриональном развитии NO-ергических структур переднего гипоталамуса у гомойотермных организмов / В.И. Дунай // Журн. Гродн. гос. мед. ун-та. – 2007. – № 3. – С. 42–44.

17. Дунай, В.И. Становление центральных NO-ергических структур в постнатальном онтогенезе у морских свинок / В.И. Дунай // Вестник Витебск. гос. мед. ун-та. – 2007. – Т. 6, № 2. – С. 25–28.

18. Дунай, В.И. Становление центральных NO-ергических структур в эмбриогенезе зрелорождающихся млекопитающих / В.И. Дунай // Мед.

новости. – 2007. – № 6. – С. 104–106.

19. Дунай, В.И. Становление NO-зависимых систем ствола головного мозга в онтогенезе гомойотермных организмов / В.И. Дунай // Мед.

новости. – 2007. – № 5. – С. 98–101.

20. Дунай, В.И. Становление NO-зависимых структур переднего гипоталамуса в пренатальном онтогенезе / В.И. Дунай // Мед. журн. – 2007. – № 2. – С. 32–34.

21. Дунай, В.И. Филогенетические аспекты распределения нейронов, содержащих НАДФН-д/СNO в головном мозге у анамний и амниот / В.И. Дунай, С.Б. Мельнов, Б.В. Лысый // Эколог. вестник – 2007. – № 3. – С. 123–129.

22. Дунай, В.И. Филогенез NO-ергической системы головного мозга / В.И. Дунай, Б.В. Лысый, С.Б. Мельнов // Весцi Бел. дзярж. пед. ун-та. – Сер. 3. – № 4 (54) – 2007. – С. 40–43.

23. Дунай, В.И. Формирование NO-ергических структур ствола головного мозга в онтогенезе зрелорождающихся и незрелорождающихся млекопитающих / В.И. Дунай // Мед. журн. – 2007. – № 2. – С. 34–36.

24. Дунай, В.И. Функциональное созревание NO-зависимых систем в онтогенезе гомойотермных организмов / В.И. Дунай // Мед. журн. – 2007. – № 4. – С. 58–59.

25. Дунай, В.И. Влияние ингибитора синтазы NO, введенного в неонатальном периоде на становление механизмов теплообмена в постнатальном онтогенезе у млекопитающих / В.И. Дунай // Проблемы здоровья и экология – 2008. – № 1 (15). – С. 108–112.

26. Дунай, В.И. Влияние ингибитора синтазы NO на скорость потребления кислорода и терморегуляцию у млекопитающих в постнатальном онтогенезе / В.И. Дунай // Вестник Брест. ун-та. – 2008. – № 1 (30). – С. 78–83.

27. Дунай, В.И. Изменения в распределении нейронов, содержащих синтазу NO в гипоталамусе и продолговатом мозге в постнатальном онтогенезе у зрелорождающихся млекопитающих / В.И. Дунай // Журн.

Гродн. гос. мед. ун-та. – 2008. – № 1. – С. 62–64.

28. Дунай, В.И. Морфо-функциональное созревание центральных NO-ергических нейронов в постнатальном онтогенезе у морских свинок / В.И. Дунай, С.Л. Кабак // Мед. журн. – 2008. – № 4. – С. 85–86.

29. Дунай, В.И. Пренатальное развитие NO-зависимых структур переднего гипоталамуса утки / В.И. Дунай // Веснiк МДУ iмя А.А. Куляшова – 2008. – № 2-3 (30). – С. 168–173.

30. Дунай, В.И. Распределение NO-позитивных нейронов в головном мозге рыб и земноводных / В.И. Дунай, С.Б. Мельнов, Б.В. Лысый // Наука и инновации – 2008. – № 1. – С. 34–36.

31. Дунай, В.И. Распределение NO-позитивных нейронов в головном мозге у пойкилотермных организмов / В.И. Дунай // Журн. Гродн. гос.

мед. ун-та. – 2008. – № 2. – С. 44–46.

32. Дунай, В.И. Роль монооксида азота становлении механизмов теплообмена в перинатальном онтогенезе птиц / В.И. Дунай // Известия Гом. гос. ун-та им. Ф. Скорыны. – 2008. – № 4. – С. 152–156.

33. Дунай, В.И. Структурно-функциональное созревание NO-зависимых систем в онтогенезе / В.И. Дунай // Журн. Гродн. гос. мед.

ун-та. – 2008. – № 2. – С. 40–43.

Статьи в сборниках научных трудов 34. Дунай, В.И. Изменение в распределении нейронов, содержащих НАДФН-диафоразу/синтазу NO, в гипоталамусе и продолговатом мозге у птиц / В.И. Дунай // Функциональная нейроморфология:

фундаментальные и прикладные исследования: сб. ст., посвящ. 100-летию акад. Д.М. Голуба;

под ред. В.Н. Гурина. – Минск: Бизнесофсет, 2001. – С. 92–93.

35. Дунай, В.И. Развитие центральных NO-ергических систем в онтогенезе у зрелорождающихся млекопитающих / В.И. Дунай // Функциональная нейроморфология: фундаментальные и прикладные исследования: сб. ст., посвящ. 100-летию акад. Д.М. Голуба;

под ред.

В.Н. Гурина. – Минск: Бизнесофсет, 2001. – С. 93–95.

36. Дунай, В.И. Роль монооксида азота в становлении терморегуляции, сердечно-сосудистой и ноцицептивной систем в онтогенезе / В.И. Дунай // Здоровье и окружающая среда: сб. науч. тр. / Респ. науч.-практ. центр гигиены;

гл. ред. С.М. Соколов. – Минск, 2007. – Вып. 10. – С. 1048–1054.

37. Дунай, В.И. Влияние температурного фактора на эмбриональное развитие центральных NO-ергических структур у гомойотермных организмов / В.И. Дунай // Здоровье и окружающая среда: сб. науч. тр. / Респ. науч.-практ. центр гигиены;

гл. ред. С.М. Соколов. – Минск, 2007. – Вып. 10. – С. 1054–1061.

38. Дунай, В.И. Изменения в распределении нейронов, содержащих НАДФН-диафоразу/NO-синтазу, в гипоталамусе и продолговатом мозге у птиц / В.И. Дунай // Здоровье и окружающая среда: сб. науч. тр. / Респ.

науч.-практ. центр гигиены;

гл. ред. С.М. Соколов. – Минск, 2007. – Вып. 10. – С. 1061–1067.

39. Дунай, В.И. Филогенетические и онтогенетические особенности развития NO-ергической системы переднего гипоталамуса / В.И. Дунай // Glasnik antropoloskog drustva Jugoslavije. – Beograd, 2007. – Vol. 42. – P. 211–213.

Материалы конференций 40. Дунай, В.И. Развитие NO-ергических механизмов мозга в онтогенезе птиц / В.И. Дунай // Роль монооксида азота в процессах жизнедеятельности: материалы науч. конф., Минск, 1998 / Ин-т физиологии НАН Беларуси. – Минск, 1998. – С. 36–38.

41. Дунай, В.И. Существует ли корреляция между созреванием холинергических и NO-ергических механизмов в стволе головного мозга у млекопитающих? / В.И. Дунай // Роль монооксида азота в процессах жизнедеятельности: материалы науч. конф., Минск, 1998 / Ин-т физиологии НАН Беларуси. – Минск, 1998. – С. 39–40.

42. Дунай, В.И. Ингибирование синтазы NO в неонатальном периоде усиливает лихорадочную реакцию на эндотоксин у крыс / В.И. Дунай, А.В. Гурин // Роль нейромедиаторов и регуляторных пептидов в процессах жизнедеятельности: материалы науч. конф., Минск, 1999 / Ин-т физиологии НАН Беларуси. – Минск, 1999. – С. 149–150.

43. Дунай, В.И. Роль NO в становлении терморегуляции в онтогенезе у птиц / В.И. Дунай // Роль нейромедиаторов и регуляторных пептидов в процессах жизнедеятельности: материалы науч. конф. / Ин-т физиологии НАН Беларуси. – Минск, 1999. – С. 147–148.

44. Дунай, В.И. Изменение в распределении нейронов, содержащих НАДФН-диафоразу/синтазу NO, в гипоталамусе и продолговатом мозге у зрелорождающихся млекопитающих / В.И. Дунай // Функциональная роль монооксида азота и пуринов: материалы науч. конф., Минск, 13–14 сент.

2001 г. / Ин-т физиологии НАН Беларуси – Минск, 2001. – С. 58–60.

45. Гурин, А.В. Влияние ингибитора синтазы NO в неонатальном периоде на реактивность центральных структур к действию пирогенов / А.В. Гурин, В.И. Дунай // Медико-социальная экология личности:

состояние и перспективы: материалы междунар. конф., Минск, 4–5 апр.

2003 г. / Бел. гос. ун-т. – Минск, 2003. – С. 66–67.

46. Дунай, В.И. Изменение в распределении нейронов, содержащих НАДФ-диафоразу-CNO, в гипоталамусе и продолговатом мозге у гнездовых птиц / В.И. Дунай // Медико-социальная экология личности:

состояние и перспективы: материалы междунар. конф., Минск, 4–5 апр.

2003 г. / Бел. гос. ун-т. – Минск, 2003. – С. 67–68.

47. Лысый, Б.В. Созревание холинергических и NO-ергических механизмов в стволе головного мозга у птиц / Б.В. Лысый, О.А. Киркорова, В.И. Дунай // Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы: материалы междунар. конф., Минск, 4–5 апр. 2003 г. / Бел.

гос. ун-т. – Минск, 2003. – С. 101.

48. Пархач, Л.П. Характер процессов массопереноса кислорода в сердечной мышце, перекисного окисления липидов, кислотно-основного состояния крови крыс в условиях модуляции L-аргинин-NO-системы в онтогенезе / Л.П. Пархач, О.А. Киркорова, В.И. Дунай // Медико социальная экология личности: состояние и перспективы: материалы междунар. конф., Минск, 4–5 апр. 2003 г. / Бел. гос. ун-т. – Минск, 2003. – С. 114–115.

49. Дунай, В.И. Влияние ингибитора синтазы монооксида азота, вводимого в неонатальном периоде, на потребление кислорода у крыс / В.И. Дунай, А.В. Гурин // Медико-социальная экология личности:

состояние и перспективы: материалы II междунар. конф., Минск, 2–3 апр.

2004 г. / Бел. гос. ун-т. – Минск, 2004. – С. 77–78.

50. Дунай, В.И. Сократительная функция сердца после ингибирования синтазы оксида азота в раннем постнатальном онтогенезе / В.И. Дунай, А.Н. Антоненко, Л.П. Пархач // Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы: материалы II междунар. конф., Минск, 2–3 апр. 2004 г. / Бел. гос. ун-т. – Минск, 2004. – С. 62–63.

51. Ковкова, А.В. Влияние ингибирования синтазы оксида азота в раннем постнатальном онтогенезе на уровень тироксина у взрослых животных / А.В. Ковкова, В.И. Дунай // Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы: материалы II междунар. конф., Минск, 2–3 апр. 2004 г. / Бел. гос. ун-т. – Минск, 2004. – С. 89–90.

52. Дунай, В.И. Влияние температурного фактора на становление центральных NO-зависимых структур в пренатальном онтогенезе уток / В.И. Дунай, Б. Тщентке // Медико-социальная экология личности:

состояние и перспективы: материалы III междунар. конф., Минск, 1–2 апр. 2005 г. / Бел. гос. ун-т. – Минск, 2005. – С. 125–128.

53. Дунай, В.И. Перекисное окисление липидов и физико химические свойства крови после ингибирования NO-синтазы на раннем этапе постэмбрионального развития / В.И. Дунай, Л.П. Пархач, А.Н. Антоненко // Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы: материалы III междунар. конф., Минск, 1–2 апр. 2005 г. / Бел. гос. ун-т. – Минск, 2005. – С. 123–125.

54. Semenenya, I.N. Nitric Oxide Synthesis in Hypothalamic Nuclei of Experimental Animals After Application of Freund’s Complete Adjuvant and Low Ambient Temperatures / I.N. Semenenya, V.I. Dunai // Temperature Control in Health and Disease / Edited by V.N.Gourine. – Minsk, 1997. – Р. 185–187.

55. Dunai, V.I. Effect of the NO Synthase Inhibitor, L-NAME, on Body Temperature in Birds in Different Periods of Postnatal Ontogenesis / V.I. Dunai, A.V. Gourine // Recent Advances in Thermal Biology / Edited by V.N. Gourine. – Minsk, 1999. – Р. 18–19.

56. Dunai V.I. Development of the Central NO-ergic Systems in Ontogenesis of Maturenate Mammals / V.I. Dunai // Basic and Applied Thermophysiology: millenium symposium, Minsk, September 19–21, 2000 / Institute of Physiology;

edited by V.N. Gourine. – Minsk, 2000. – Р. 183–184.

Тезисы докладов конференций 57. Дунай, В.И. Изменение распределения нейронов, содержащих НАДФ-диафоразу/NO-синтазу, в гипоталамусе морских свинок / В.И. Дунай // Х съезд Белорус. о-ва физиологов: тез. докл., Минск, 3–4 сент. 2001 г. / Бел. об-во физиологов, НАН Беларуси, М-во образования Респ. Беларусь, М-во здравоохранения Респ. Беларусь, Ин-т физиологии НАН Беларуси. – Минск, 2001. – С. 50.

58. Дунай, В.И. Развитие NO-зависимых структур переднего гипоталамуса в пренатальном онтогенезе / В.И. Дунай // Сахаровские чтения 2007 года: экологические проблемы XXI века: материалы 7-й междунар. Научной конф., Минск, 17–18 мая 2007 г. / Мин. обр. РБ, Мин.

прир. рес. и охр. окр. среды, Деп. по ликв. посл. кат. на Черн. АЭС, Мин.

по чрезв. ситуац. РБ, Пост. комиссия по радиоэкол. образов. стран СНГ, Общ. совет базов. организ. по экол. образов. стран СНГ, Бел. Рес. фонд фунд. исслед., Центр.-европ. инициат., УО «Междунар. гос. экол. ун-т им. А.Д. Сахарова» – Минск, 2007. – С. 78.

59. Дунай, В.И. Влияние температурного фактора на развитие NO-зависимых структур переднего гипоталамуса в пренатальном онтогенезе гомойотермных организмов / В.И. Дунай, Б. Тщентке // Нейронаука для медицины и психологии: материалы IV междунар.

междисциплинарного конгресса, Судак, 10–20 июня 2008 г. / РАН, Физиол. общество им. И.П. Павлова, Ин-т высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН, ГУ НИ ин-т нормальной физиол. им.

П.К. Анохина РАМН, Ин-т теоретической и экспериментальной биофизики РАН, University of maryland medical school, Донецкий нац. мед.

ун-т им. М. Горького – Судак, Крым, Украина, 2008. – С. 115–116.

60. Dunai, V.I. Development of the Anterior Hypothalamic NO-dependent Structures in the Prenatal Ontogenesis of Ducks and Influence of Temperature Stimuli / V.I. Dunai, B.Tzschentke // The 2-nd Combined Workshop Fundamental Physiology of the European Working Group of Physiology and Perinatal Development in Poultry, Berlin, September 23–25, 2005 / Institute of Biology, Humboldt-University of Berlin. – Berlin, 2005. – Р. 20.

61. Dunai, V.I. Influence of Thermal Stimulation on Activation of nеuronal NO-synthase in the Anterior Hypothalamus During the Prenatal Ontogenesis in Muscovy Ducks / V.I. Dunai, B.Tzschentke // The 3-nd Combined Workshop on Fundamental Physiology and Perinatal Development in Poultry, Berlin, Oktober 5–7, 2007 / Institute of Veterinary Physiology, Freie University of Berlin. – Berlin, 2007. – Р. 19.

РЭЗЮМЭ Дунай Валерый Iванавiч Філагенэз і антагенэз NO-эргічных нейронаў галаўнога мозгу:

уплыў тэмпературнага фактару Ключавыя словы: філагенэз, антагенэз, галаўны мозг, монааксід азоту, інгібітар сінтазы монааксіда азоту, тэрмарэгуляцыя.

Мэта даследавання: выяўленне заканамернасцей развіцця NO-эргічных нейронаў галаўнога мозгу ў філагенэзе і антагенэзе ва ўзаемасувязі з фарміраваннем механізмаў тэрмарэгуляцыі і іншых функцый ЦНС.

Метады даследавання: марфалагічны (гістахімічны), марфаметрычны, фізіялагічны, тэлеметрычны, бiяхiмiчны, фармакалагічны і статыстычны.

Атрыманыя вынікі і іх навізна: упершыню вызначана, што ў працэсе філагенэзу пазваночных жывёл назіраецца павелічэнне колькасці NO-сінтэзуючых нервовых клетак у прадаўгаватым і прамежкавым мозгу.

Тэрміны структурнага фарміравання NO-эргічнай сістэмы гіпаталамуса вызначаюцца месцазнаходжаннем віда ў эвалюцыйным радзе развіцця і залежнасцю першых дзён жыцця жывел ад тэмпературнага фактару.

У ходзе эвалюцыйнага развіцця гамаетэрмных арганізмаў назiраецца з’яўленне NO-пазітыўных нервовых клетак у гіпаталамусе на больш ранніх перыядах эмбрыягенэзу. Тэмпературны фактар аказвае ўплыў на актыўнасць НАДФН-д/СNO-пазітыўных нейронаў у перыяд прэнатальнага антагенэзу, а таксама на тэрміны эмбрыянальнага развіцця і прырост масы цела ў постнатальным перыядзе ў птушак. У антагенэзе гамаетэрмных жывёл NO-эргічная сістэма прымае ўдзел у станаўленні фізіялагічных функцый арганізму.

Cтупень выкарыстання: вынікі даследавання ўкаранены ў працу РУП «Вопытная навуковая станцыя па птушкагадоўлі», РУСПП «ППР Праўда», РУП «Iнстытут эксперыментальнай ветэрынарыі імя С.Н. Вышэлесскага», а таксама ў навучальным працэсе у шэрагу вышэйшых навучальных устаноў Рэспублікі Беларусь.

Галіна прымянення: навукова-даследчыя лабараторыі, птушкагадоўчыя гаспадаркі, вучэбны працэс.

РЕЗЮМЕ Дунай Валерий Иванович Филогенез и онтогенез NO-ергических нейронов головного мозга:

влияние температурного фактора Ключевые слова: филогенез, онтогенез, головной мозг, монооксид азота, ингибитор синтазы монооксида азота, терморегуляция.