Значение вирусных инфекций в патологии, связанной с нарушениями противоинфекционной защиты, и методы их выявления
На правах рукописи
МАЛЬЧИКОВ ИГОРЬ АЛЕКСАНДРОВИЧ ЗНАЧЕНИЕ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ В ПАТОЛОГИИ, СВЯЗАННОЙ С НАРУШЕНИЯМИ ПРОТИВОИНФЕКЦИОННОЙ ЗАЩИТЫ, И МЕТОДЫ ИХ ВЫЯВЛЕНИЯ 14.00.36 - аллергология и иммунология 03.00.06 - вирусология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Екатеринбург - 2007 2
Работа выполнена в лаборатории вирусных инфекций ФГУН «Екатеринбургский научно-исследовательский институт вирусных инфекций» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, на кафедре хирургической стоматологии и на кафедре внутренних болезней № 2 ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.
Научные консультанты:
доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Нина Поликарповна Глинских доктор медицинских наук, профессор Ирина Александровна Тузанкина
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Сибиряк Сергей Владимирович доктор медицинских наук, профессор Кокорев Валерий Серафимович доктор медицинских наук, доцент Гусев Евгений Юрьевич Ведущее учреждение: Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им.
М.П.Чумакова РАМН, г. Москва
Защита диссертации состоится “” _ 2007 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 004.027.01 при Институте иммунологии и физиологии УрО РАН по адресу: 620049, г. Екатеринбург, ул. Первомайская, д.106. Факс (343) 374-47-
С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке УрО РАН (620041, г. Екатеринбург, ул.С.Ковалевской, д.22/20), с авторефератом диссертации - на сайте ВАКа Министерства образования и науки РФ – http:[email protected]
Автореферат разослан “” 200 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор И.А. Тузанкина
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Одной из серьезных проблем современности являются нарушения взаимоотношений микро- и макроорганизмов, которые во многом определяются состоянием окружающей среды, а также произошедшими изменениями эндоэкологического равновесия в пользу вирусного микроокружения. Вследствие этого персистирующие вирусные инфекции рассматриваются не только как инфекционное заболевание, но и как проявление глубоких генетических нарушений внутренней среды организма человека, ведущих к необратимым для него, как биологического вида, последствиям (Черешнев В.А., 2000). Существует мнение о том, что в развитии многих патологических состояний ведущая роль принадлежит вирусам, однако, продолжается поиск доказательств характера их участия - либо в роли этиологического фактора, либо триггера (Цинкернагель Р.М., 2005). Значительная роль во взаимодействии организма с внешней средой принадлежит иммунной системе. Известно, что иммунитет – это комплекс реакций, направленных на поддержание постоянства внутренней среды организма. Его дисбаланс приводит к развитию иммунопатологических состояний - синдрому нарушений противоинфекционной защиты, аллергии, аутоиммунным и пролиферативным процессам (Петров Р.В., 1989). Реакции иммунной системы на различные этиологические факторы правомерно рассматривать как ведущие и формирующие основное звено патогенеза инфекционного процесса (Черешнев В.А. с соавт., 2006, Сепиашвили Р.И., 2003).
Вирусные инфекции, приводя к развитию иммунопатологических процессов, способствуют развитию патологических состояний во многих системах организма. Это особенно важно в критические периоды развития человека – антенатальный, период раннего детства и старения.
В настоящее время важное значение приобретает оценка происходящих иммунологических изменений при развитии инфекционных процессов и патологических состояний с ними связанных. Особенно при различных физиологических состояниях, определяющих здоровье поколений, одним из которых является беременность. Баланс иммунологических факторов может обеспечивать как физиологическое течение беременности, так и защиту организма женщины и плода от вирусной инфекции. Но некоторые изменения, в том числе дисбаланс выработки активных форм кислорода нейтрофилами и продукции противовирусных цитокинов клетками иммунной системы, приводят к патологии беременности, проявляющейся в преждевременном её прерывании, задержке внутриутробного развития плода. При этом недостаточная иммунокомпетентность женщин является одной из причин внутриутробного инфицирования плода (Ганковская Л.В. с соавт., 2006;
Соловьева А.С. с соавт., 2006;
Зуйков И.А. с соавт., 2006).
В последние десятилетия внимание исследователей все чаще привлекает наличие связи инфекционных агентов, включая вирусы, с формированием различных воспалительных процессов, в том числе при заболеваниях опорно-двигательного аппарата (ОДА), широкое распространение которых наблюдается с развитием цивилизации (Никонова Е.П., 2000: Ивашкин В.Т., 2005;
Cai X.Y. et.al., 2003;
Regev E. et.al.,2003).
Заболевания, поражающие крупные и мелкие суставы, в частности височно нижнечелюстной сустав (ВНЧС), составляют проблему в клинической практике. Они могут приводить к длительной нетрудоспособности из-за частых обострений, принимать хроническое течение (Насонова В.А., 2000;
Фоломеева О.М., 2001). Но имеющиеся в настоящее время данные недостаточно отражают этиопатогенетическую роль отдельных вирусов и их возможных сочетаний. В проводимых исследованиях зачастую не учитываются активность и локализация патологических процессов, диагностика которых требует постоянного совершенствования. Вопросы влияния различных видов возбудителей на клинические проявления и особенности течения болезней, на характер иммунного ответа, до сих пор остаются окончательно не решенными (Королев М.А., 2001;
Соколова Л.А., 2002). Для решения вопросов о возможности распространении воспалительного процесса в суставах и торпидности к терапевтическим мероприятиям необходимо получение объективных данных об этиопатогенезе заболеваний ОДА Используемые в настоящее время методы выявления этиопатогенетических факторов имеют ряд недостатков - они весьма дорогостоящи, информативность их повышается лишь при комплексном повторном их применении в динамике патологического процесса. В этой ситуации особую значимость приобретают иммунологические исследования, помогающие выявить и проанализировать взаимосвязь вирусных агентов с развитием, как инфекционных заболеваний, так и индуцируемых ими патологических процессов, происходящих в макроорганизме, а также предупредить осложненное течение заболеваний путем своевременной и целенаправленной коррекции терапевтических комплексов.
Таким образом, высокая социально-экономическая значимость и широкая распространенность патологии беременности и детей раннего возраста, а также заболеваний ОДА, существующие недостатки в их диагностике, делают актуальными исследования этиопатогенеза указанных состояний и поиска новых информативных и экономичных методов их диагностики.
Цель исследования. Определение значения вирусных инфекций в развитии патологических процессов при нарушениях противоинфекционной защиты организма и разработка новых инструментально-диагностических способов их выявления.
Задачи исследования:
1. В эксперименте на животных оценить возможность вовлечения ОДА в инфекционный процесс, связанный с респираторными и герпетическими вирусами.
2. Определить морфологические признаки возможного присутствия вирусных агентов респираторной и герпетической группы в синовиальной жидкости с оценкой их роли в поражении суставов методом электронной микроскопии.
3. Оценить различия морфотекстур биологических жидкостей больных с различными патологическими процессами ОДА, развившимися при участии респираторных и герпетических вирусов, методом поляризационной микроскопии.
4. Дать характеристику иммунологическому профилю больных с патологией ОДА, имеющих клинико-лабораторное подтверждение наличия респираторной, герпетической инфекции и выявить специфические иммунологические изменения у больных с различными заболеваниями ОДА.
5. Охарактеризовать состояние иммунной системы у женщин во время беременности и оценить роль персистирующих вирусных агентов респираторной, герпетической групп в формировании патологии плода.
6. Дать сравнительную оценку состояния иммунной системы детей раннего возраста, имеющих нарушения противоинфекционной защиты, и их матерей, с оценкой роли вирусных агентов в формировании патологии.
Научная новизна.
Впервые получены данные, свидетельствующие об инфицировании суставов респираторными и герпетическими вирусами, которые могут рассматриваться не только как триггерные, но и как этиологические факторы при развитии различной патологии ОДА.
Впервые методом электронной микроскопии в синовиальной жидкости больных с поражениями ОДА обнаружены вирусы герпеса.
Получены новые данные о том, что на фоне нарушения противоинфекционной защиты у беременных, при инфицировании их респираторными вирусными агентами, происходит реактивация персистирующих в организме женщины герпесвирусов, что приводит к вовлечению в инфекционный процесс социально значимых возбудителей, таких как вирусы гриппа и энтеровирусы Коксаки группы В, наряду с бактериальными и грибковыми инфекционными агентами.
Представлены новые данные о специфических изменениях иммунологического профиля, развивающихся в различные периоды беременности у женщин, а также у детей раннего возраста на фоне респираторной, герпетической и энтеровирусной инфекций.
Определено значение вирусных агентов в развитии инфекционной патологии новорожденных и детей раннего возраста, развившейся на фоне синдрома нарушений противоинфекционной защиты и индуцируемой патологией матери.
Проведена оценка иммунологического профиля матерей, имеющих новорожденных и детей раннего возраста с синдромом нарушений противоинфекционной защиты.
Определено место внутриутробного инфицирования детей в структуре инфекционных заболеваний новорожденных и детей раннего возраста, госпитализированных в стационарные отделения с синдромом нарушений противоинфекционной защиты.
На основе поляризационной микроскопии разработаны диагностические морфотекстурные тесты для использования в комплексной диагностике патологии ОДА, определены отличия частоты встречаемости морфологических текстур при различных инфекционных процессах вирусной этиологии.
Результаты проведенных исследований Практическая значимость работы.
продемонстрировали необходимость использования клинико-лабораторного и иммунологического обследования больных различными заболеваниями, ранее не относимыми к инфекционным, для выявления вирусиндуцированных процессов, имеющих эпидемиологическую значимость в силу их распространенности, в целях определения стадии активности патологического процесса, характера нарушений противоинфекционной защиты организма и индуцированных вирусами аутоиммунных процессов. Использование в практической деятельности данных таких обследований дает возможность предупредить развитие осложнений, выработать эффективные меры терапевтической и профилактической направленности.
Полученные нами новые данные о роли инфекционных вирусных агентов в развитии патологии ОДА, позволят использовать их для определения спектра терапевтических вмешательств, направленных на повышение эффективности проводимого лечения.
Выявленные данные о том, что изменения клеточных иммунологических параметров - ведущий механизм в патогенезе развития заболеваний ОДА герпетической этиологии, открывают практическую перспективу повышения эффективности планируемого лечения за счет включения в терапевтический комплекс иммунотропных препаратов, прицельно действующих на клеточные механизмы противоинфекционной защиты.
Полученные нами данные свидетельствуют о том, что у иммунокомпрометированных женщин, не подготовленных к беременности профилактическими мероприятиями, обеспечивающими ее физиологическое течение, встреча с инфекционными агентами во время беременности заканчивается развитием инфекционного заболевания, что увеличивает риск инфицирования плода и угрозу прерывания беременности.
Выявленные факты, свидетельствующие о том, что у детей, родившихся от матерей с респираторными, герпетическими и энтеровирусными инфекциями, достоверно чаще наблюдались недоношенность и пороки развития, такие как врожденные пороки сердца, атрезия прямой кишки, расщелины неба и д.р., позволяет направить мероприятия по предупреждению их развития в сторону профилактики инфекций и улучшению функционирования иммунной системы.
Использование метода поляризационной микроскопии позволит получать более экономичным и менее трудозатратным путем подтверждение наличия специфических изменений при различных заболеваниях ОДА, протекающих с участием респираторных и герпетических вирусов. Получаемые результаты исследований могут быть применены в комплексном диагностическом процессе, а также в качестве скринингового метода получения диагностически значимой информации, определяющей последующий выбор тактики лечения больных. Они могут быть использованы при дальнейших исследованиях в области вирусологической и клинической иммунологии.
Положения, выносимые на защиту:
1. Вирусные агенты респираторной и герпетической группы непосредственно участвуют в полиорганном патологическом процессе с поражением различных систем организма, в т.ч. опорно-двигательного аппарата, сопровождаясь функциональными нарушениями клеточных и гуморальных параметров иммунной системы.
2. Перенесенная беременными женщинами респираторная инфекция может приводить к иммунодепрессивному состоянию, что ведет к обострению герпетической инфекции, персистирующей в организме, и способствует развитию осложнений беременности, преждевременных родов, патологическому их течению, формированию пороков развития у детей и синдрома нарушений противоинфекционной защиты, что сопровождается изменениями в структуре тимуса и микст инфицированием – бактериальными и грибковыми агентами.
3. Спектр актуальных вирусных агентов при патологических состояниях у беременных женщин достоверно различен.
4. Биологические жидкости организма человека и животных характеризуются специфическими морфо-текстурными особенностями, визуализирующими физико химическое состояние многокомпонентных коллоидных систем, состоящих из липидов, полипептидов, белков и солей, выявляемыми методом поляризационной микроскопии, результаты которого, в комплексе с другими лабораторными методами, могут служить маркёрами патологии опорно-двигательного аппарата, протекающей с участием инфекционных вирусных агентов.
Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в практику работы городского ревматологического отделения ЦГБ № 6 г. Екатеринбурга и стоматологической клиники ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия». Материалы диссертации вошли в учебные программы для студентов и врачей факультета усовершенствования врачей хирургической стоматологии ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия».
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на итоговой научно-практической конференции ЕНИИВИ (Екатеринбург, 1999);
VII Всероссийском съезде стоматологов (М., 2001);
1 общероссийском конгрессе стоматологов (Пермь, 2001);
VII Всероссийской научно-практической конференции (М., 2001);
на III съезде ревматологов России (Рязань, 2001);
1 конференции иммунологов Урала (Екатеринбург, 2001);
научно-практическом симпозиуме «Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении» (Москва, 2002);
4 Всероссийской научно-практической конференция «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Тверь,2002);
объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004);
Всероссийском стоматологическом форуме «Дентал-ревю» (Москва, 2005);
научно-практической конференции «Актуальные вопросы клинической гнатологии» (Тюмень, 2005);
V Всероссийском конгрессе «Эстетика в стоматологии, новые технологии в стоматологии» (Екатеринбург, 2005);
окружной научно-практической конференции «Актуальные аспекты вирусных инфекций в современный период» (Екатеринбург, 2007), 8-ой международной летней школе им. J.
Humphrey «Immunology and Viral Infection» (Москва, 2007).
Публикации. Основные результаты исследования опубликованы в 48 печатных работах. В том числе в 5 изданиях, рекомендованных ВАК, издан «Атлас текстур биожидкостей кристаллов при патологии суставов», получено 4 патента на изобретение, свидетельства о депонировании и регистрации произведения – объекта интеллектуальной собственности.
Работа изложена на 251 странице Объем и структура диссертации.
машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка используемой литературы, включающего источников, в том числе 276 отечественных и 151 зарубежных. Работа иллюстрирована рисунками, 15 таблицами и 3 схемами.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Работа проводилась в течение 1998-2006 гг. Объем выполненных исследований представлен на схеме 1. В экспериментальных исследованиях использовано лабораторных животных (мышей), на биологическом материале которых проведено лабораторных теста. Обследовано всего 785 человек. Проведено 18523 лабораторных теста, 1146 инструментально-диагностических и 164 морфологических исследований.
Экспериментальные группы. Для моделирования гриппозной инфекции были сформированы следующие группы:
- группа Iа - мыши массой 10-12 г (n=30), которых инфицировали под эфирным наркозом интраназально по 0,05 мл аллантоисной жидкости, содержащей вирус гриппа АPR/8/34 (H1N1);
- группа Iб - контрольные мыши массой 10-12 г (n=30), которым интраназально вводили физиологический раствор в объеме 0,05 мл.
Для моделирования герпетической инфекции были сформированы:
- группа IIа - мыши массой 20-22 г (n=30), которые были инфицированы внутрибрюшинно ВПГ с инфекционным титром 4,5 lg ТЦП50/мл: в объеме 0,2 мл - для воспроизведения острой герпетической инфекции;
- группа IIб - мыши (n=30) доза вируса 0,02 мл – для моделирования хронической герпетической инфекции (доза была подобрана предварительно опытным путем);
- группа IIв – контрольные животные (n=30), которым внутрибрюшинно вводили 0,2 мл 0,9% физиологического раствора.
Под рауш-наркозом проводили декапитацию мышей. Для исследования использовали ткани легких, мозга, печени, почек и суставов, с последующим их гистологическим анализом. Отбор материалов и органов осуществляли в динамике на 2,5,7,10,15,25,30 и 45 сутки с момента инфицирования. Методом поляризационной микроскопии проведены исследования биологических жидкостей мышей (ротовой жидкости, сыворотки крови, мочи).
Схема. Материалы и методы, используемые в работе Объект исследования: лабораторные животные (n=150);
беременные женщины (n=126);
матери (n=149);
дети (n=130);
больные с патологией ОДА с вовлечением ВНЧС (n=380) Формула исследования: при выполнении экспериментальных исследований (n=90) проводилась простая рандомизация с использованием маскирования (Simple Blind).
Для анализа клинических данных в наблюдаемых группах (n= 785) проводилось когортное проспективное исследование.
Исследования в клинических группах (n=404) проводились по типу случай-контроль для выяснения причинно следственной связи развития заболеваний. Выбывание пациентов из исследования составляло 3,5-5% Группы сравнения:
Беременные женщины без вирусных инфекций (n=33) Матери без вирусных инфекций (n=50) Дети без вирусных инфекций (n=48) I этап: Больные с патологией ОДА+ВНЧС без вирусной инфекции (n=48) отбор групп Основные группы Группа беременных женщин: (n=93) (n=99) Группа матерей:
(n=82) Группа детей:
Группа больных:
- реактивным артритом с вовлечением ВНЧС (n=77) - ревматоидным артритом с вовлечением ВНЧС (n=76) - остеоартрозом с вовлечением ВНЧС (n=74) II этап: - недифференцированной дисплазией соединительной ткани с вовлечением ВНЧС (n=75) Выполнение Контрольная группа: здоровые добровольцы (доноры) (n=78) лабораторных и Клинико-лабораторные методы: визуально-аналоговая шкала (ВАШ), анкетная шкала инструменталь- SF-36, HAQ, WOMAC, опросник боли MC GILL, общеклинические показатели, ных иммунологические показатели, серовирусологические лабораторные исследования диагностических биожидкостей организма (назальной, ротовой, синовиальной жидкости, сыворотки крови, мочи) исследований Методы визуализации: УЗИ вилочковой железы, рентгенограммы суставов Морфологические методы: световая, электронная, поляризационная микроскопия биопрепаратов Статистический анализ полученных данных:
использованы программы «Statistica 6,0» и «SPSS v.13.0» – определялся III этап характер распределения, параметрические и непараметрические методы, Обработка проводилась сравнительная оценка двух групп с использованием парных критериев (t-критерий, критерий Колмогорова-Смирнова, Вилкоксона, Сhi полученных квадрат), более двух групп (дисперсионный анализ ANOVA/MANOVA, данных Краскала-Уоллиса, поправка Бонферрони, критерий Мантеля-Гензеля). При значениях 5 – двухсторонний точный критерий Фишера. Применяли также четырехпольную таблицу, нулевая гипотеза отвергалась при p0,05.
IV этап Анализ Обсуждение полученных данных, формулирование выводов и результатов практических рекомендаций исследования (всего 598 исследований). Одновременно проводили отбор секционного материла и его исследование в РИФ с целью обнаружения антигенов вирусов гриппа и простого герпеса (всего 900 исследований).
Клинические группы. Больные с патологией ОДА с вовлечением ВНЧС (n=380) находились на стационарном лечении в ревматологических отделениях ГКБ №6, ОКБ №1, а также амбулаторно наблюдались в артрологическом центре стоматологической клиники Уральской государственной медицинской академии г. Екатеринбурга (всего исследований).
При формировании клинических групп больных с патологией ОДА учитывались следующие факторы:
а) наличие лабораторно подтвержденных вирусных инфекций;
б) достоверно верифицированный в процессе всестороннего медицинского обследования клинический диагноз;
в) наличие артритов периферических суставов;
г) исключение других артритов (септический артрит, Лайм-артрит и спондилоартропатии).
д) для РА и ОА - наличие II, III и IV рентгенологических стадий заболевания по Келгрену;
е) для РА - подтверждение активности патологического процесса (по острофазным белкам СРП, СОЭ);
ж) при РеА наличие урогенитальной инфекции в стадии ремиссии, а также наличие факторов, свидетельствующих о предшествующих инфекциях (заболевания, возникшие в пределах 4-х недель до клинических проявлений артрита);
з) информированное согласие пациентов на проведение исследований.
Критерии исключения из исследования:
а) наличие острых и обострение хронических (кроме респираторных и герпетических) инфекционных заболеваний;
б) тяжелая сопутствующая патология сердечно-сосудистой системы, органов дыхания, пищеварения, печени, системы крови;
в) отсутствие достоверных критериев для постановки диагноза РеА, РА, ОА, НДСТ;
г) для РА - отсутствие данных, подтверждающих активность процесса по острофазовым белкам (СОЭ, СРП);
д) наличие бактериальной инфекции (при проведении исследований методом поляризационной микроскопии);
е) несоблюдение протокола исследования, отказ больного или его родственников от проведения дополнительных методов обследования.
С патологией ОДА обследовано 302 пациента, которые были распределены на группы.
Группа I - больные ревматоидным артритом (РА) с вовлечением ВНЧС (n=76).
Диагноз РА ставили с учетом диагностических критериев Американской ревматологической ассоциации (1987), а при его формулировке использовали классификацию РА, предложенную Институтом ревматологии (1989).
Группа II - больные реактивным артритом (РеА) с вовлечением ВНЧС (n=77).
Диагноз РеА формулировали с учетом диагностических критериев, принятых на III международном Конгрессе (Берлин, 1995) согласно международной классификации болезней МКБ-10 (Москва, 1996).
Группа III - больные с остеоартрозом (ОА) с вовлечением ВНЧС (n=74).
Группа IV - пациенты с недифференцированной дисплазией соединительной ткани (НДСТ) с вовлечением ВНЧС (n=75). Диагноз ОА и НДСТ выставляли в соответствие с международной классификацией болезней МКБ-10 (Москва, 1996).
Исследование иммунологического профиля проведено у 86 больных с диагнозом реактивный, ревматоидный артрит и остеоартроз, у которых клинически и лабораторно подтверждено наличие респираторной или герпетической инфекций. Сформированы группы больных, каждая из которых состояла из трех подгрупп, выделенных по характеру присутствия или отсутствия вирусной инфекции.
Группа I – больные «ревматоидным артритом» (n=46): 1.1. – РА с герпетической инфекцией (n=16);
1.2. – РА с респираторной инфекцией (n=14);
1.3. – РА без этих инфекций (n=16).
Группа II – больные «реактивным артритом» (n=48): 2.1. – РеА с герпетической инфекцией (n=16);
. 2.2.– РеА с респираторной инфекцией (n=15);
2.3. – РеА без этих инфекций (n=17).
Группа III – больные «остеоартрозом» (n=44): 3.1. – ОА с герпетической инфекцией (n=15);
3.2. – ОА c респираторной инфекцией (n=14);
3.3. – ОА без этих инфекций (n=15).
Контрольная группа – здоровые доноры (n=78) отделения переливания крови, не имевшие достоверных отличий по полу и возрасту с основными группами, а также без нарушений иммунитета, респираторных и герпетических инфекций на момент исследования. Биоматериалы от лиц указанной группы были использованы для контроля исследований методом поляризационной микроскопии (n=62) и иммунологических параметров (n=30).
беременных женщин проводили в отделении Клинические исследования дородовой подготовки и в консультативной поликлинике при ГУНИИ ОММ г.
Екатеринбурга (всего 3534 исследований). В результате клинико-анамнестического и лабораторного исследования были сформированы группы беременных женщин, имеющих лабораторно подтвержденную герпесвирусную (n=45), респираторную (n=48) и энтеровирусную (n=33) инфекции.
Группу сравнения составили 33 женщины, которые во время беременности вышеуказанными инфекциями не болели. Обследованные группы беременных женщин по возрастной характеристике, соматическому статусу, акушерско-гинекологическому анамнезу и срокам беременности были сопоставимы между собой.
Клинико-лабораторные исследования детей с инфекционной патологией, имеющих признаки синдрома нарушений противоинфекционной защиты, и их матерей, проведены у госпитализированных в отделения патологии новорожденных и детей раннего возраста ОКДБ № 1 г. Екатеринбурга (всего 6547 исследований). Были сформированы группы матерей и их детей:
- Iа группа состояла из детей с герпетической инфекцией (n=31);
- Iб группа - дети с респираторной инфекцией (n=28);
- Iв группа – с энтеровирусной инфекцией (n=23).
- Iг группа - без указанных инфекций (n=48).
- IIа группу составили матери с герпетической инфекцией в стадии обострения (n=39);
- IIб группу – с респираторной инфекцией (n=33);
- IIв группу – с энтеровирусной инфекцией (n=27);
- IIг группу составили 50 матерей без указанных инфекций.
Обследованные группы детей и их матерей по возрастной характеристике и соматическому статусу были сопоставимы между собой.
Методы клинико-лабораторных исследований. В соответствии с поставленными задачами у больных осуществляли определение наличия респираторных, герпетических и энтеровирусных инфекций лабораторными методами.
Для реакции иммунофлуоресценции использовали наборы НИИЭМ им. Гамалея РАМН, г. Москва – флуоресцирующие глобулины к антигенам вирусов гриппа А, В, парагриппа, аденовируса, респираторно-синцитиальному (РС), простого герпеса (ВПГ) и цитомегаловирусу (ЦМВ) – (5495 исследований).
Уровень специфических антител в сыворотке крови к респираторным вирусам определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) (4710 исследований), связывания комплемента (РСК) (785 определений) с использованием диагностикумов предприятия по производству диагностических препаратов НИИ гриппа РАМН, г.С Петербург.
Серологические исследования по определению уровня специфических иммуноглобулинов в сыворотке крови к герпетическим вирусам проводили на оборудовании для иммуноферментного анализа (ИФА) фирм “Labsystems” (Финляндия) и “Abbott” (США) с использованием диагностических иммуноферментных систем «Вектор ВПГ(ЦМВ)-IgМ-стрип» и «Вектор ВПГ(ЦМВ)-IgG-стрип», выпускаемые ЗАО «Вектор Бест» (пос. Кольцово, Новосибирская обл.) – 1570 определений.
Выявление ДНК ВПГ и ЦМВ - методом полимеразной цепной реакции с использованием оборудования и диагностических наборов НП фирмы института физической и химической медицины «Литех» (г.Москва) -1900 тестов.
Для индикации наличия вирусов в синовиальной жидкости больных с патологией ОДА методами РИФ и РН использовали культуры клеток ЛЭЧ 4 (81), ФЭЧ, Vero, MDSK из коллекции клеточных культур Екатеринбургского НИИ вирусных инфекций ( исследований). Анализ и фоторегистрацию препаратов осуществляли на электронном микроскопе «ЭМВ-100ЛМ» при 28000-кратном увеличении.
В качестве биоматериалов для поляризационной микроскопии с поляризационными насадками МБИ-6 и микрофотонасадками МФН-10У4.2 при 200-кратном увеличении использовали: сыворотку крови, синовиальную жидкость, носовой секрет, ротовую жидкость и мочу (1900 определений).
Выполнено 4344 лабораторных иммунологических тестов, включающих определение популяций и субпопуляций лимфоидных клеток методом иммунофлуоресценции с использованием панели ФИТЦ-меченных моноклональных антител к мембранным CD-рецепторам. Исследования выполнены на проточных цитометрах FACScan (Becton Dickinson) и FС-500 (Becman-Coulter). Определение содержания иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови проводили методом радиальной иммунодиффузии по Манчини (1964). Определение общего IgE - методом ИФА. Окислительно-восстановительную функцию (активность НАДФ-оксидазной системы) нейтрофилов оценивали с помощью НСТ-теста по стандартной методике.
Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов оценивали в тестах спонтанного и стимулированного микробными полисахаридами (зимозаном) фагоцитоза с латексными частицами. Оценку уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови, проводили методом преципитации в полиэтиленгликоле по общепринятой методике.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Проведено комплексное исследование, состоящее из экспериментального и клинико лабораторного блоков исследований.
При выполнении экспериментальных исследований, мы учитывали возможность возникновения патологических изменений многих систем организма в результате действия респираторных и герпетических вирусов, включая патологические процессы в суставах.
В (мыши с экспериментальной гриппозной инфекцией) при группе Iа гистологическом исследовании были выявлены выраженные изменения в легких, печени и суставах.
В органах респираторного тракта наблюдались типичные патологоанатомические изменения, характерные для этой инфекции - дистрофия и некробиоз эпителия трахеи и бронхов с последующим отторжением клеток в просвет дыхательных путей.
В печени животных наблюдалась гиперемия и стаз в мелких сосудах и капиллярах, гидропическая дистрофия печеночных клеток с очаговым некробиозом и некрозом.
В тканях суставов фаза экссудативного воспаления синовиальной оболочки сопровождалась мукоидным набуханием. Отмечалась гиперплазия ворсин. Все это свидетельствует о роли вируса гриппа как инициатора сложнейших каскадных механизмов, ведущих к поражению всего организма.
В группе IIа (животные с экспериментальной острой герпетической инфекцией) гистологическое исследование органов подтвердило типичные патолого-анатомические изменения, соответствующие их клиническим проявлениям.
В легких - отек перибронхиальных и периваскулярных пространств, циркуляторные нарушения, развитие мелкоочаговой, затем крупноочаговой пневмонии.
В белом веществе головного мозга развивались периваскулярные инфильтраты.
Мягкая мозговая оболочка была отечна, полнокровна и инфильтрирована лимфоидными, лимфогистиоцитарными и лимфолейкоцитарными элементами.
В печени наблюдалась гиперемия и стаз в мелких сосудах и капиллярах, распространенная гидропическая дистрофия печеночных клеток с очаговым некробиозом и некрозом. В очагах некробиоза отмечалась значительная гистиоцитарная и макрофагальная инфильтрация. Наблюдалась краевая вакуолизация и некробиоз гепатоцитов, выявлялись двуядерные гепатоциты.
В почках имели место мелкие и крупные лимфоидные инфильтраты в интерстициальной ткани со сдавлением канальцев, а также дистрофические изменения канальцевого эпителия, полнокровие клубочковых и стромальных капилляров.
В тканях суставов исследуемых мышей наблюдалось воспаление, отек, мукоидное набухание, очаги фибриноида. Данные наблюдения также доказывали способность ВПГ вызывать аналогичные, множественные, системные процессы.
В группе IIб (животные с экспериментальной хронической ВПГ-инфекцией) при гистологическом исследовании в легких пролонгировались циркуляторные нарушения с явлениями кровоизлияний, выраженным отеком перибронхиальных и периваскулярных пространств. В просвете альвеол наблюдали скопления отечной жидкости, продуктов распада некротизированных клеток и лейкоцитов.
В головном мозге наблюдались репаративные процессы с незначительными следами глиофиброзной пролиферации. Процессы резорбции и пролиферации затухали в динамике наблюдения.
В печени сохранялась гиперемия и стаз в мелких сосудах и капиллярах, в очагах некробиоза - гистоцитарная и макрофагальная инфильтрация.
В почках усиливались дистрофические изменения канальцевого эпителия, оставалось полнокровие клубочковых и стромальных капилляров.
В тканях суставов мышей обнаружено разрастание грануляционной ткани в субинтимальном слое, выраженный склероз синовиальной оболочки сустава и мукоидное набухание структур хрящевого матрикса, очаговая деструкция хондроцитов. Наблюдалось разрушение хряща с образованием узур, трещин и секвестров, что указывало на усугубление патологических процессов, приводящих к склеротическим, необратимым изменениям. Это, может быть связано с прямым и длительным воздействием вируса на ткань пораженного органа. Необходимо учитывать тот факт, что персистенция герпесвирусов в органах создает патогенетически неблагоприятные условия для функционирования последних, а также является одной из причин развития вторичных иммунных нарушений и состояний с этим связанных.
Столь выраженные изменения, происходящие в тканях и системах организма, не могли не повлиять на физико-химические свойства биожидкостей. Поэтому нами были проведены исследования последних, позволившие оценить возможность использования поляризационного метода для выявления в организме экспериментальных животных процессов, наблюдаемых при развитии респираторных и герпетических инфекций.
Достоверные отличия от контрольных показателей получены в следующих случаях.
У мышей, инфицированных вирусом гриппа, в сыворотке крови были выявлены средние сферодендриты и скелетные дендриты. В моче были найдены достоверные отличия по измененным сферолитам и трипельфосфатам;
У мышей, инфицированных ВПГ, в сыворотке крови появлялись такие структурные признаки, как средние сферолиты, средние, крупные сферодендриты, тонкие и скелетные дендриты. В ротовой жидкости – визуализировались маслянистые бороздки и веерные текстуры, аномальные связи «маслянистые бороздки–веерные текстуры» (МБ–ВТ), атипичные формы «веера». При исследовании мочи выявлены измененные и гигантские сферолиты и трипельфосфаты.
Полученные результаты продемонстрировали информативность поляризационно микроскопического метода, который может быть использован в диагностическом процессе различных заболеваний в качестве дополнительного метода получения информации, что позволило нам применить его в дальнейшем для исследования биоматериалов различных групп больных.
Клинико-иммунологическая характеристика больных с патологией ОДА при наличии у них вирусных инфекций Получены данные о том, что вирусы, особенно герпетической группы, служат триггерным фактором развития патологии ОДА, а в ряде случаев (РеА) в качестве этиологических факторов. У больных РеА, обследованных серологическими методами, определено диагностически значимое увеличение титров антител в сыворотке крови к вирусам гриппа в 26% случаев, к другим респираторным вирусам – 28,6%. Антитела IgM класса к ВПГ – в 24,6%, к ЦМВ – 29,8% случаев. У больных РА – 21,1%, 19,7%, 17,8% и 17,8% случаев соответственно.
При исследовании синовиальной жидкости больных РеА вирусный агент гриппозной этиологии обнаружен в ней у 31,1% пациентов, у больных РА вирусный агент респираторной этиологии – в 31,4% случаев, герпесвирусной – в 30,3%.
Чрезвычайно сложно трактовать данные, оценивающие те виды инфекций, которые относятся к персистирующим формам, например герпетическую инфекцию, учитывая их неоднозначность. Также трудно прогнозировать тяжесть и спектр осложнений со стороны различных органов и систем организма после перенесенного инфекционного заболевания, в частности гриппозной этиологии. Поэтому представлялось важным сопоставить результаты, полученные нами с помощью разных лабораторных методов выявления данных инфекций у больных с патологией ОДА, для чего проведено сравнение частоты выявления антигенов и антител к респираторным и герпетическим вирусам различными лабораторными методами.
Оказалось, что выявление антигенов и вирусов гриппа А, парагриппа, ВПГ и ЦМВ методом люминесцентной микроскопии чаще наблюдалось в группе больных РеА, гриппа В и аденовируса – в группе больных ОА (р0,05). Реже всего – у пациентов с НДСТ.
По данным ИФА, антитела IgM класса к ВПГ и ЦМВ чаще всего выявлялись у больных РеА (р0,05), реже – у больных ОА. Достоверно высокий уровень антител IgG класса (1:3200) к ВПГ определялся у больных РеА, РА и ОА (p0,05).
Чаще всего ДНК герпетических вирусов в биожидкостях определялась у больных РеА (ДНК ВПГ – 64,9%, ДНК ЦМВ –29,7%).
При использовании метода вирусовыделения на клеточных культурах вирусы гриппа и герпеса также достоверно чаще определялись в синовиальной жидкости больных РеА, реже – в группе больных РА (p0,05). При этом обращает на себя внимание диагностически значимое увеличение антител к вирусу гриппа (18,2%) и ЦМВ (30,3%) в сыворотке крови у данных больных. Обнаружение антигенов и высоких титров антител к респираторным и герпетическим вирусам различными лабораторными методами, в основном у больных РеА, свидетельствует о взаимосвязи патогенеза заболеваний суставов и вирусной инфекции.
Совокупность полученных данных позволяет также утверждать, что имеет место непосредственная связь развития патологических процессов ОДА с указанными инфекциями.
При этом, реактивный артрит (РеА) можно рассматривать как воспалительный процесс вирусной этиологии в активной стадии заболевания, протекающий на фоне выраженного синдрома нарушений противоинфекционной защиты,, для которого характерно: политопность инфекционных поражений, упорство и/или атипичность течения заболеваний, торпидность к терапевтическим мероприятиям, наличие множества этиологически значимых инфекционных агентов, в том числе бактериальных, грибковых (Петров Р.В. с соавт, 2002, Сепиашвили Р.И., 2003).
Подтверждения этому были получены проведенными иммунологическими исследованиями, выделением вирусов из синовиальной жидкости методом клеточных культур и обнаружением их методом электронной микроскопии. Вирусный агент при РеА выступал в роли этиологического фактора.
Ревматоидный артрит (РА) – другое патологическое состояние, которое можно рассматривать как хронический иммунопатологический процесс аутоиммунного характера, возникающий у больных, перенесших острое воспалительное заболевание, о чем свидетельствовало проведенное иммунологическое исследование. В данном случае процесс носил иммуноопосредованный характер, а вирусы играли роль триггера.
Недостоверные отличия уровня антител к ВПГ (1:3200) в сыворотке крови пациентов ОА, НДСТ и контрольной группы позволили констатировать отсутствие зависимости патогенеза данных заболеваний с герпесвирусной инфекцией.
Факт обнаружения антигенов вирусов в специфических клетках синовиальной жидкости наблюдаемых больных может свидетельствовать о присутствии данных инфекционных агентов в полости суставов, и, вследствие этого, развитии индуцированных вирусами патологических изменений, что было подтверждено различными лабораторными методами, в том числе и электронной микроскопией. В синовиальной жидкости больных РеА, РА, ОА были выявлены сформированные вирусные структуры, которые идентифицированы нами как принадлежащие герпетическому вирусу. Эти частицы находились в процессе репродукции, которая наблюдалась преимущественно у внутренней поверхности ядерной мембраны с нарушением ее целостности и выходом вирионов в перинуклеарное пространство и цитоплазму. Методом электронной микроскопии в синовиальной жидкости у больных с патологией ОДА респираторные вирусы не были обнаружены, хотя методом клеточных культур в этих же образцах биожидкостей они были выявлены.
Это может объясняться тем, что процесс инфицирования при гриппе происходит достаточно быстро, поэтому уловить высокую концентрацию патогена в суставе, необходимую для выявления методом электронной микроскопии, не всегда представляется возможным. При этом, изменения, характерные для вирусного воспаления, обнаружились в тканях суставов.. Такие гистологические данные были получены нами при проведении экспериментальных исследований на лабораторных животных.
При анализе иммунологических параметров здоровых лиц и лиц с патологией ОДА выявлено следующее (рис.1).
У больных РА в зависимости от наличия или отсутствия инфекции:
– при герпесвирусной инфекции – уменьшение количества лейкоцитов, относительного количества лимфоцитов, концентрации IgA, IgM в сыворотке крови, относительного количества CD3+ и CD4+лимфоцитов, субпопуляционного индекса, НСТ теста стимулированного, увеличение таких показателей, как СОЭ, уровень ЦИК, сывороточной концентрации IgG, CD8+лимфоцитов, НСТ-теста спонтанного, т. е.
происходило снижение фагоцитарных функций и числа иммунокомпетентных клеток, активация гуморальных параметров иммунитета;
– при респираторной инфекции – уменьшение относительного количества CD3+, CD4+лимфоцитов, увеличение общего количества лейкоцитов, СОЭ, ЦИК, концентрации сывороточных IgM и IgG, т. е. наблюдался дисбаланс клеточных и гуморальных параметров иммунитета;
без вирусной инфекции – выявлено уменьшение количества CD3+ и – CD4+лимфоцитов, увеличение ЦИК, содержания IgM в сыворотке крови;
у этих больных основным диагностическим критерием являлось также наличие в сыворотке крови ревматоидного фактора – аутоантител IgM–класса.
У больных РеА в зависимости от наличия или отсутствия инфекции выявлены следующие достоверные иммунологические особенности При герпетической инфекции – выявлено снижение количества лейкоцитов, лимфоцитов, концентрации IgA, IgM, относительного числа CD3+, CD4+ лимфоцитов, субпопуляционного индекса, функциональной активности нейтрофилов, увеличение СОЭ, уровня ЦИК, относительного числа CD8+ лимфоцитов, т. е. данные свидетельствуют о нарушениях функциональной активности иммунокомпетентных клеток, снижении их числа, активизация цитотоксической активности, что создает условия для персистирования инфекционных агентов и хронизации процесса. Утяжеление течения воспалительного процесса сопровождалось снижением субпопуляционного индекса за счет повышения числа CD8+лимфоцитов.
При респираторной вирусной инфекции наблюдалось увеличение общего количества лейкоцитов, показателя СОЭ, уровня ЦИК, сывороточных IgM и IgG, НСТ-теста.
# # больные РА с # 60 герпетической инфекцией # # 10 больные РА без # 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 инфекции - - СD4+/CD8+лимф CD3+ лимфабс CD8+лимф абс - Лейкоциты г/л Лимфоциты % CD3+ лимф % CD4+лимф % CD8+лимф % НСТ сп СОЭ мм ЦИК Ед IgM г/л IgG г/л НСТ ст IgA г/л # а) # больные РА с респираторной инфекцией 20 больные РА без инфекции 10 1 2 3 4 5 6 7 - CD3+ лимфабс - Лейкоциты г/л CD3+ лимф % CD4+лимф % - б) СОЭ мм ЦИК Ед IgM г/л IgG г/л # больные РеА с герпетической инфекцией # # больные РеА без инфекции 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 - - - СD4+/CD8+лимф - Лимфоциты абс Лейкоциты г/л Лимфоциты % CD3+ лимф % CD4+лимф % CD8+лимф % - в) НСТ СП СОЭ мм ЦИК Ед IgM г/л НСТ ст IgA г/л больные РеА с # респираторной 60 # инфекцией больные РеА 10 без инфекции 1 2 3 4 5 6 - Лейкоциты г/л - НСТ сп СОЭ мм ЦИК Ед IgM г/л IgG г/л НСТ ст - г) Рис. 1 Достоверные отличия иммунологических параметров у больных ревматоидным и реактивным артритами: а) и в) при герпетической инфекции, б) и г) при острой респираторной инфекции.
При меч ани е: индекс 1 соответствует медианам нормативных значений иммунологических параметров здоровых лиц, по оси ординат указан процент отличий медиан в группах больных относительно нормативных значений, по оси абсцисс – иммунологические параметры # p0,05 – отличия от группы сравнения.
Без вирусной инфекции – выявлено снижение количества лейкоцитов, увеличение ЦИК, концентрации IgM в сыворотке крови, т.е. полученные в этой группе сравнения результаты иммунологических исследований подтвердили участие иммунных механизмов в развитии РеА, но иммунокомпетентность пациентов обеспечила более легкое течение заболеваний и отсутствие участия вирусных агентов в развитии патологического процесса, имеющего, по-видимому, конституциональную обусловленность.
У больных ОА в зависимости от наличия или отсутствия инфекции были выявлены следующие иммунологические данные. При герпесвирусной инфекции наблюдалось уменьшение количества CD4+лимфоцитов, субпопуляционного индекса, НСТ-теста стимулированного, увеличение СОЭ, ЦИК, CD8+лимфоцитов, т.е. иммунные нарушения у больных ОА могли способствовать затяжному течению заболевания со склонностью к рецидивам и развитию осложнений на фоне персистирующей герпетической инфекции.
При респираторной инфекции имело место увеличение ЦИК и НСТ-теста, что было вполне адекватно при респираторных инфекциях.
У больных без вирусной инфекции не выявлено каких-либо изменений иммунологических параметров.
Среди причин разнородности больных с одной и той же нозологической формой патологии ОДА и наличию той или иной вирусной инфекции, были выявлены определенные особенности состояния иммунной системы. Сравнительный анализ результатов иммунологического обследования больных с герпетической или респираторной инфекцией с больными, не имевшими этих инфекций, позволил выделить достоверный спектр отличий иммунологического профиля больных.
При ревматоидном артрите у больных с герпетической инфекцией, в отличие от больных, не имевших вирусных инфекций, были отмечены достоверные различия по общему количеству лейкоцитов (лейкопения), увеличению ЦИК и СОЭ, снижению НСТ теста и сывороточного IgM. Эти изменения, по сравнению с нормативными данными, были более значительными, чем у больных, не имевших герпетической инфекции (р0,05);
При респираторной инфекции в группе больных РА отмечены в основном изменения показателей клеточного состава периферической крови, которые не имели достоверных отличий от показателей больных РА без вирусной инфекции, за исключением СОЭ и ЦИК (p0,05), что отражало адекватную реакцию компетентного организма на респираторную вирусную инфекцию.
В группе больных с другой патологией ОДА – РеА при герпетической инфекции наблюдалось изменение концентрации IgM, НСТ-теста стимулированного по сравнению с больными РеА без инфекции (р0,05).
При респираторной инфекции у больных РеА отмечены изменения показателей клеточного состава периферической крови, которые не имели достоверных отличий от значений показателей больных из группы сравнения (p0,05), за исключением общего количества лейкоцитов – наблюдался лейкоцитоз и ускоренная СОЭ (p0,05).
У больных ОА с герпесвирусной инфекцией отличия от группы сравнения касались только увеличения СОЭ и ЦИК (p0,05), как и у больных РА с респираторной вирусной инфекцией, что может свидетельствовать об иммунокомпетентности больных ОА и отсутствии иммунопатологических процессов в патогенезе заболевания.
При респираторной инфекции у больных ОА достоверные изменения иммунологических параметров отсутствовали (p0,05).
Различными исследователями высказывается предположение о том, что депрессия клеточного звена иммунной системы – ведущий механизм в патогенезе заболеваний ОДА при встречи с герпетической инфекцией. В этих условиях пролонгированное воздействие герпесвирусов не только индуцирует иммунодепрессивное состояние организма, но и усугубляет его, что приводит к учащению рецидивов и генерализации инфекции, наблюдавшейся у больных исследуемых групп (Пирумян А.Г., 2000;
Кузьмина Н.М., 2001;
Cai X.Y., 2003).
Результаты проведенных нами исследований, а также данные других авторов (Соколова Л.А., 2002;
Belin V. et.al., 2003, Yang X.Y., 2003, Арямкина Л.Л., 2006;
) позволили определить значение вирусных агентов как триггерного фактора при развитии патофизиологических процессов у ряда больных с патологией ОДА. В роли провоцирующего фактора могут выступать респираторные вирусы, основное свойство которых – индукция воспалительных реакций в различных органах.
Полученные доказательства этиологической роли герпетических вирусов в развитии ряда заболеваний, традиционно не относимых ранее к инфекционным. Главной особенностью этих вирусов является способность к длительному, внутриклеточному паразитированию, что может привести к аутоиммунным нарушениям. Патогенетические аспекты таких взаимодействий представлены на схеме 2.
Указанные вирусные агенты, имея свойство вмешиваться в обменные процессы, происходящие в клетках, разрушают их, приводя к нарушениям гомеостаза. Этому также способствуют генетические факторы и неблагоприятный преморбидный фон макроорганизма, находящегося в среде обитания, которой является современное урбанизированное общество с высоким риском токсикогенного влияния на организм стрессов и гипокинезии.
Возникающие иммунные нарушения и изменения неспецифической резистентности организма тесно взаимосвязаны в своем функционировании, дополняя друг друга. Это приводит к нарушениям противоинфекционной защиты, развивается гиперчувствительность аллергического и неаллергического типа, аутоиммунные и пролиферативные процессы. У лиц, генетически детерминированных к развитию иммуносупрессорного состояния, имеющих предпосылки для развития частых инфекционных и соматических заболеваний, депрессий, в том числе иммунодепрессии, с очагами хронических инфекций, может развиться тяжелая соматическая патология. У них отмечаются более тяжелые последствия, такие как инвалидизация с профнепригодностью.
В клинической практике приходится решать сложную задачу – несмотря на различия клинических форм, определить этиопатогенез основного заболевания как можно в более ранние сроки. В связи с этим, особое значение приобретает разработка экспресс-методов диагностики различного рода патологических состояний, в том числе, направленных на идентификацию инфекционных процессов, особенно в случаях отсутствия патогномоничных симптомов возникающих инфекций или сглаженных, атипичных форм заболеваний (Львов Д.К., 2000;
Высоцкий В.В., 2005;
Кутырев В.В. с соавт., 2005).
Использование возможностей новых технологий для определения различных патологических состояний организма, служащих вспомогательными методами диагностики, – рациональный путь совершенствования диагностического процесса.
Схема 2.
ФОРМИРОВАНИЕ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ МАКРООРГАНИЗМА ДРУГИЕ МИКРООРГАНИЗМЫ МИКРООРГАНИЗМЫ (условно первичные) (условно вторичные) - вирусы - бактерии - грибы - вирусы ИММУННЫЕ НАРУШЕНИЯ АУТОИММУНЫЕ НАРУШЕНИЯ ПРОЦЕССЫ ПРОТИВОИНФЕК ЦИОННОЙ ЗАЩИТЫ ЛОКАЛИЗОВАННЫЙ СИСТЕМНЫЙ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЙ ПРОЦЕСС ПРОЦЕСС ПАТОЛОГИЯ МАКРООРГАНИЗМА Одним из таких направлений может стать поляризационная микроскопия (Гайворонская В.И. с соавт., 2000;
Жданова Т.В. с соавт., 2001).
При проведении лабораторных исследованиях оценка структуры биологической ткани проводится, как правило, только на клеточных формах. Исследование морфологии внеклеточной ткани организма, в частности биожидкостей, является новым направлением в области анализа пространственно-временной организации живых систем. Главным преимуществом определения структурной организации является то, что она дает сведения о характере взаимосвязи между составляющими элементами биологических жидкостей, которые, по мнению Шабалина В.Н. (2002), могут служить «зеркалом метаболических процессов, протекающих в клетках организма», поскольку изменения биохимического состава биожидкостей при патологических процессах оказывают влияние на явления кристаллизации в них. В литературных данных приводятся результаты ряда исследовательских работ, направленных на оценку значения морфотекстурных изменений при различных видах патологии (Груздев М.П. с соавт., 2001;
Мартусевич А.К. с соавт., 2007). Однако, такие исследования при заболеваниях суставов, в т.ч. вирусной этиологии, не проводилось. В связи с этим, обоснованными являются наши исследования жидкокристаллических свойств внеклеточных субстратов в таких группах больных.
Методом поляризационной микроскопии был определен спектр характерных морфотекстурных признаков для каждого патологического состояния (РеА, РА, ОА и НДСТ). Так, при воспалительных заболеваниях суставов наблюдалось увеличение частоты обнаружения игольчатых кристаллов, средних и крупных сферолитов, малых, средних, крупных сферодендритов, уменьшение количества конфокальных доменов (КД) в сыворотке крови и в синовиальной жидкости. В ротовой жидкости – увеличение ЖКЛ, миелиновых форм, морфологических связей «маслянистые бороздки-конфокальные текстуры» (МБ–КТ) и «маслянистые бороздки-веерные текстуры» (МБ–ВТ), уменьшение конфокальных доменов (КД) и появление специфической окраски. Следует отметить, что жидкокристаллические системы очень быстро реагировали на любые воздействия, выражаясь в определенном изменении ансамбля структур, что может быть использовано, например, для оценки эффективности терапии в динамике.
У исследуемых нами больных РеА и РА также были определены общие признаки, отражавшие неспецифический ответ организма на воспалительный процесс. Они согласуются с системными нарушениями при заболеваниях ОДА, соответствуют характеру процесса, происходящего в организме, отражая функциональное состояние белкового и липидного состава биожидкостей организма. Выявленное увеличение количества средних и крупных сферолитов, наряду с уменьшением мелких, образующихся при кристаллизации белка, может указывать на изменения его свойств, свидетельствуя о нарушении белкового баланса. Увеличение показателей структуры кристаллов, формирующихся, в основном, из моногидрата холестерина, дает основания предполагать наличие нарушений в системе липидного баланса.
При сравнении биожидкостей больных, имеющих различную патологию ОДА, были обнаружены определенные типы морфотекстур и кристаллических форм, различные по количеству и качеству от биожидкостей здоровых лиц. Выявленные специфические критерии морфотекстур, определяемые нами методом поляризационной микроскопии, наблюдались при РеА в 75 % случаев, РА – в 68,2%;
ОА – в 73,4%;
НДСТ – в 59,8%.
При наличии у данных больных инфекционного заболевания, подтвержденного лабораторными методами диагностики (РИФ, ИФА, ПЦР), в биожидкостях происходила своеобразная, характерная только для герпетической или респираторной инфекции, организация структур, отличающаяся от контрольных образцов.
При гриппозной инфекции такими факторами были увеличение в сыворотке крови средних сферодендритов и скелетных дендритов. В назальном секрете таких больных наблюдалось увеличение миелиновых бороздок, веерных текстур, сферолитов и специфической окраски с темным налетом. В моче – увеличение сферолитов, оксалатов кальция и трипельфосфатов.
При РС-инфекции – появлялись массивные маслянистые бороздки и веерные текстуры.
При герпетической инфекции этими критериями являлись, прежде всего, увеличение в сыворотке крови числа средних сферолитов, средних и крупных сферодендритов, скелетных дендритов. В ротовой жидкости – появление маслянистых бороздок, веерных текстур, морфологической связи «маслянистые бороздки – веерные структуры»;
атипичных форм и сферолитов. В моче – сферолитов и трипельфосфатов.
Выявленные специфические особенности морфотекстур, определяемые методом поляризационной микроскопии, наблюдались у больных гриппозной инфекцией в 66,7% случаев, РС-инфекцией – 55,5%, герпетической – 63,6% случаев.
Учитывая, что биожидкости представляют собой многокомпонентные коллоидные системы, состоящие из растворов липидов, полипептидов, белков, солей, которые структурно мобильны, реализуя процессы адаптации при экзогенных и эндогенных воздействиях, их исследование методом поляризационной микроскопии у больных с различной патологией может служить косвенным подтверждением деструктивных процессов, наблюдаемых как при активном иммунном воспалении, так и при инфекционно воспалительных процессах. Это может быть использовано в диагностическом процессе, в том числе для контроля эффективности проводимой терапии.
Клинико-иммунологическая характеристика беременных женщин, детей раннего возраста и их матерей с вирусными инфекциями.
Известно, что плод развивается в условиях сложных иммунологических взаимоотношений с организмом матери. Поэтому наличие у беременной женщины очагов инфекции является серьезным фактором риска развития различных патологических состояний плода и новорожденного. Наблюдающееся в последние годы повышение значимости внутриутробных инфекций в перинатологии обусловлено, по мнению целого ряда авторов, возрастанием инфицированности женщин фертильного возраста, что в значительной степени связано с увеличением в современной человеческой популяции прослойки иммунокомпрометированных лиц, у которых в определенных стрессовых ситуациях легко развиваются различные инфекционно-воспалительные заболевания.
Неоднозначными являются мнения исследователей о характере воздействия таких состояний на развивающийся плод и на возможность внутриутробного инфицирования детей.
Исходя из вышесказанного, особое внимание в нашем исследовании уделялось определению закономерностей развития вирусных инфекций у женщин, относящихся к группе повышенного риска возникновения патологии беременности, а также детей раннего возраста, рожденных от матерей с нарушениями механизмов противоинфекционной защиты.
У женщин, не подготовленных к беременности профилактическими мероприятиями, направленными на предупреждение развития инфекционных процессов, во время гестации наблюдались их обострения, что, в свою очередь, приводило к увеличению риска инфицирования плода и рождения нездорового ребенка.
Женщины, имевшие патологию беременности и их дети чаще переносили вирусные инфекции, при этом наблюдалось совпадение спектра вирусных антигенов у детей и их матерей. Так, в случаях преждевременных родов герпетическая инфекция регистрировалась у матерей и их детей– в 19,7%, при наличии внутриматочной инфекции в 22,7% случаев. То есть, у ребенка имелся наибольший риск инфицирования герпесвирусами в случае выявления у женщины внутриматочной инфекции. В случаях внутриутробного инфицирования наиболее актуальными были энтеровирусы, встретившиеся в 11,7% наблюдений.
Инфекционные процессы респираторной этиологии среди всех наблюдаемых беременных чаще диагностировались во II триместре - у 39,5% женщин, в III триместре – большее этиологическое значение имели вирусы группы герпеса (37,8%) и энтеровирусы (11,7%). При этиологической расшифровке суммарной респираторной инфекции в I и III триместрах выделены вирусы парагриппа (4,2 и 12,5% соответственно), во II триместре – аденовирусы (22,9%).
При развитии у беременных женщин вирусной инфекции происходили процессы, связанные с изменением количества иммунокомпетентных клеток в периферической крови.
При снижении уровня CD4+лимфоцитов наблюдалась активация хронических вирусных инфекций. Выявлялась недостаточность гуморальных факторов – важнейшее условие патогенеза, от эффективности действия которого зависит течение процесса рецидивирования и характер генерализации инфекции. Иммуноглобулины играют важную функциональную роль посредников в развитии иммунного ответа и могут обусловливать результативность конечных, эффекторных реакций клеточных механизмов иммунитета в процессе инактивации вирусных антигенов. Имевшая место дисиммуноглобулинемия, наряду с выявленными фагоцитарными нарушениями, отсутствием функционального резерва фагоцитирующих клеток и изменениями количества иммунокомпетентных клеток в периферической крови, может свидетельствовать о некомпетентности иммунной системы при встрече с инфекцией. У этих женщин на фоне изменения иммунных функций присоединялись вторичные инфекции в виде кольпита в 28,7% случаев, бактериального вагиноза (6,0%), а также аднексита и кандидоза.
У исследуемых беременных женщин, заболевших вирусными инфекциями во II и III триместрах, в 66,7% случаев наблюдали формирование тяжелых форм фетоплацентарной недостаточности с исходом в синдром задержки развития плаценты, в 37,5% случаев внутриутробное инфицирование, в 35,4% случаев диагностировали патологию родов многоводие, угрозу прерывания беременности, кровотечение, отслойку плаценты, тазовое предлежание плода, развитие у него хронической гипоксии, в 8,3% случаев диагностировали гестоз.
В зависимости от вида инфекции у беременных женщин во II и III триместрах наблюдались следующие изменения иммунологических параметров (рис.2):
– при герпетической инфекции – статистически значимое снижение функциональной активности фагоцитирующих нейтрофилов, относительного и абсолютного количества Т лимфоцитов, относительного числа CD4+лимфоцитов, субпопуляционного индекса лимфоцитов СD4+/CD8+, концентрации IgM в сыворотке крови, повышение ЦИК, относительного количества CD8+лимфоцитов, относительного и абсолютного числа NK клеток (CD16+лимфоцитов) (р0,05);
– при респираторных инфекциях – снижение относительного числа лимфоцитов, абсолютного количества CD4+, CD8+лимфоцитов, относительного и абсолютного содержания CD16+лимфоцитов, повышение уровня сывороточного IgG, ЦИК, относительного количества В-лимфоцитов (CD19+лимфоцитов), титра комплемента СН50, НСТ-теста спонтанного и стимулированного, коэффициента стимуляции нейтрофилов (р0,05).
Влияние вирусов на иммунологический профиль заключалось в том, что в ходе инфекции изменялся не один, а серия показателей, характеризующих иммунный ответ пораженного вирусом организма на чужеродные антигены.
Сравнение медиан в группах _ ** * * * Сравнение медиан в группах * ** ** ** ** * 10 **** 1 2 3 4 5 6 7 беременные с 0 - беременные с герпетической 1 2 3 4 5 герпетической -10 - инфекцией инфекцией -20 - -30 - -40 - СоотношениеCD4+/ Сывороточный IgM CD3+ лимфоциты, CD4+лимфоциты, CD8+ лимфоцитов - CD8+лимфоциты, НСТ-тест стим, % - CD4+ лимфоциты % Сывороточный IgM CD16+лимфоциты, CD3+лимфоциты, CD3+ лимфоциты, НСТ-тест сп,% D16+лимфоциты, ЦИК б) а) г/л абс % % г/л абс абс % % Сравнение медиан в группах _ Сравнение медиан в группах 80 ** * * 60 беременные ** ** 40 с ОРВИ ** * ** 20 ** ** * беременные * 10 с ОРВИ 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 7 8 - - - CD4+лимфоциты абс - СывороточныйIgG, CD16+лимфоциты, CD16+лимфоциты, CD19+лимфоциты, CD8+лимфоциты, - КСнейтрофилов - КС нейтрофилов Лимфоциты, % НСТ-тест СП НСТ-тест ст НСТ-тест ст ЦИК CH50 ед СН50 ед абс г/л абс в) г) % % Рис. 2. Достоверные отличия иммунологических параметров у беременных женщин:
при герпетической инфекции: а) во II триместре, б) в III триместре;
при острой респираторной инфекции в) во II триместре, г) в III триместре.
Пр и м еч ан и е: индекс 1 соответствует медианам нормативных значений иммунологических параметров, по оси ординат указана кратность отличий медиан в группах больных относительно нормативных значений (женщины с физиологически протекающей беременностью), по оси абсцисс – иммунологические параметры. * p0.05, ** p0. У беременных женщин с вирусной инфекцией имелась тенденция к более выраженным изменениям компонентов иммунной системы в III триместре по сравнению со II триместром беременности в отличие от женщин, беременность которых протекала без вирусных инфекций. При герпетической инфекции были выявлены изменения следующих показателей – абсолютного числа CD3+лимфоцитов, субпопуляционного индекса CD4+/CD8+, НСТ-теста спонтанного. С диагностированной респираторной инфекцией абсолютного числа CD8+лимфоцитов, CH50, НСТ стимулированного, КС нейтрофилов.
Проведенные вирусологические исследования выявили следующее: 68,9% детей, родившихся от матерей, имевших инфекционные процессы во время беременности, были инфицированы вирусами. При этом антигены вирусов группы ОРВИ у детей в периоде новорожденности обнаружены в 52,9%, ВПГ – в 60,7%, ЦМВ – в 3,9%, энтеровирусы группы Коксаки В – в 19,6% случаев. Миксты (два и более возбудителей) выявлены у детей в 35,5% случаев.
Последнее затрудняло определение ведущего этиологического фактора внутриутробного и перинатального инфицирования. Но, поскольку указанные вирусы не совпадали со спектром вирусных агентов у их матерей, правомочно полагать, что инфицирование произошло уже в постнатальный период, и немаловажное значение в этих случаях имели иммунные изменения, сформировавшие синдром нарушений противоинфекционной защиты в силу перинатально действующих неблагоприятных факторов (схема 3).
Чаще всего наблюдалась ассоциация вируса герпеса и респираторных вирусов – в 15,7%, энтеровирусов и респираторных вирусов – в 11,8% случаев. Уровень антител к респираторным вирусам имел тенденцию к увеличению в динамике наблюдения у 67,5% детей, что могло свидетельствовать об активности воспалительных процессов вирусной этиологии. Антитела к энтеровирусам определялись у 74,2% детей, причем при обнаружении антигенов энтеровирусов у детей в 70,1% случаев они встречались совместно с респираторными вирусами. Обращает на себя внимание тот факт, что 70,7% детей были инфицированы при наличии у матерей микст–инфекций.
По данным ИФА, у детей, родившихся от инфицированных герпесвирусами матерей, антитела IgM-класса к ВПГ и ЦМВ отсутствовали. При этом антиген этих вирусных агентов у детей был выявлен, т.е. имело место либо инфицирование новорожденных в постнатальном периоде, либо антенатальное инфицирование, свидетельством которого могут быть уже имевшие место изменения структуры тимуса у новорожденных, а также их анэргия по отношению к вирусам.
Общее количество случаев обнаружения антител IgG-класса к ВПГ составило 87,8%, к ЦМВ – 24,3% от всей группы.
Схема 3.
ФОРМИРОВАНИЕ ВИРУСИНДУЦИРУЕМОЙ ПАТОЛОГИИ В СИСТЕМЕ МАТЬ-РЕБЕНОК ГЕРПЕТИЧЕСКИЕ ВИРУСЫ ИЗМЕНЕНИЯ ИММУННЫХ ФУНКЦИЙ МАТЕРИ Условно- Респираторные и энтеровирусы патогенные Персистирующие микроорганизмы вирусы РАЗВИТИЕ ИНФЕКЦИИ У МАТЕРИ (МОНО- ИЛИ МИКСТ) ИЗМЕНЕНИЯ РАЗВИТИЕ Фетоплацентар ИММУННЫХ ИНФЕКЦИИ ная недоста У ПЛОДА ФУНКЦИЙ точность ПЛОДА прежде временные гипоксия системное роды воспаление патология родов ГЕНЕРАЛИЗОВАННАЯ ИНТРАНАТАЛЬНАЯ ПОРОКИ ИНФЕКЦИЯ У ПАТОЛОГИЯ РАЗВИТИЯ НОВОРОЖДЕННОГО РЕБЕНКА При обследовании пар «ребенок – мать», в которых дети имели клинические признаки нарушений противоинфекционной защиты и были госпитализированы по этому поводу, в 17,5% случаев вирусные агенты не были выявлены. В 8 случаях (10,8%) вирусные инфекции зарегистрированы только у матерей. В 2 парах (2,7%) инфицированы были только дети. Кроме того, в некоторых случаях, при сочетанных инфекциях, у детей наблюдались отличия спектра инфекционных агентов от спектра материнских патогенов.
Это может свидетельствовать о послеродовом инфицировании детей в раннем неонатальном периоде.
У детей раннего возраста в зависимости от вида выявленной инфекции наблюдались следующие изменения иммунологических параметров (рис.3):
– при герпесвирусной инфекции – уменьшение относительного числа CD3+ и абсолютного и относительного числа CD4+лимфоцитов, субпопуляционного индекса CD4+/CD8+, концентрации IgG, увеличение относительного количества CD8+лимфоцитов, концентрации IgM в сыворотке крови (р0,05);
– при респираторной инфекции – увеличение общего количества лейкоцитов, абсолютного и относительного числа CD20+, CD25+лимфоцитов, концентрации IgM, IgG (р0,05);
– при энтеровирусной инфекции – уменьшение относительного количества эозинофилов, палочкоядерных нейтрофилов, увеличение моноцитов, СОЭ (p0,05).
Выявленные изменения иммунологических параметров у детей раннего возраста могут свидетельствовать об активности воспалительного процесса и об изменении иммунных функций, а также об иммунокомпрометированности их уже при рождении, на фоне которой развился инфекционный процесс. Обнаруженное снижение клеточных факторов и повышенное содержание IgM в сыворотке крови новорожденных детей не исключало внутриутробного инфицирования. Нарушение механизмов противоинфекционной защиты, индуцируемое вирусами, может стать основой таких процессов как длительная персистенция вирусов в организме и появление большого количества хронических и инаппарантных форм проявления инфекции. Полученные нами данные о патологии беременности, заболеваниях детей первого года жизни подтверждают это мнение.
При антенатальном инфицировании детей, которое наблюдалось в 37,5% случаев, происходили изменения в структуре тимуса, что служило предпосылкой для развития патологических состояний уже в периоде новорожденности.
Сравнение медиан в группах 120 ** ** Сравнение медиан в группах ** * 40 * дети с дети с * *** * * * 60 ОРВИ герпетичес * кой 1 2 3 4 5 6 * - инфекцией - - CD4+лимф., абс - CD3+лимф.,% CD8+лимф., % 1 2 3 4 5 6 CD20+лимф., CD20+лимф., CD25+лимф., CD25+лимф., CD4+лимф.,% Лейкоциты, C4+/CD8+ IgМ г/л IgG г/л IgM г/л IgG г/л абс абс абс абс % а) б) _ Сравнение медиан в группах Сравнение медиан в группах ** _ * * ** ** матери с герпетиче ** дети с 10 ской * ** * 1 2 3 Коксаки В -20 инфекцией инфекцией 1 2 3 4 - - - - CD3+лимф., % CD4+лимф., % - CD4+/ CD8+ - П/я нейтрофилы, Эозинофилы, % Моноциты, % ЦИК у.е.
IgG г/л СОЭ, мм/ч в) г) % ** Сравнение медиан в группах Сравнение медиан в группах * _ * _ ** ** матери с Коксаки В ** * инфекцией матери с ОРВИ 1 2 3 4 - * * * - 1 2 3 4 - - С/я нейтрофилы, Лимфоциты, Лимфоциты, СD3+лимф., Лейкоциты, CD19+лимф.,% -40 - Эозинофилы, Эозинофилы, 109/л IgG абс абс IgG г/л % д) Абс е) абс % Рис. 3. Достоверные отличия иммунологических параметров:
- у детей при а) герпетической инфекции, б) острой респираторной инфекции, в) энтеровирусной инфекции;
- у матерей при г) герпетической инфекции, д) острой респираторной инфекции, е) энтеровирусной инфекции;
Пр им еч ан и е: индекс 1 соответствует медианам нормативных значений иммунологических параметров, по оси ординат указана кратность отличий медиан в группах больных относительно нормативных значений (матери и дети без вирусной инфекции), по оси абсцисс – иммунологические параметры. * p0.05, ** p0. Дети рождались недоношенными, имели пороки развития (врожденные пороки сердца, атрезию прямой кишки, расщелины неба и т.д.) - в 28,5% от всей группы детей и в 51% при выявлении у матерей антигенов герпесвирусов. При выявлении структурных изменений тимуса у детей (при гипо- и гиперплазии, диффузных нарушениях) у их матерей обнаруживались те или иные вирусные агенты. Так, антигены респираторных вирусов были выявлены в 43,0% случаев, антигены герпесвирусов – в 50%, сочетание респираторных и герпетических вирусов – в 72% случаев (р0,05).
Проведенные нами исследования показали, что широкий спектр выделенных у новорожденных детей инфекционных агентов, повышенная вероятность микст-инфекций затрудняют определение ведущего этиологического фактора внутриутробного и перинатального инфицирования. Это осложняет подбор этиотропного терапевтического комплекса для таких детей, приводя к необходимости введения препаратов иммунотропной направленности.
Чрезвычайно важна роль иммунокомпетентности матери при развитии инфекционных процессов у детей первого года жизни, поэтому проведен анализ состояния иммунной системы матерей госпитализированных детей первого года жизни по поводу инфекционных процессов.
У матерей, имеющих детей с инфекционными проявлениями, в зависимости от вида инфекции наблюдалось:
– при герпесвирусной инфекции – уменьшение относительного числа CD3+ и CD4+лимфоцитов, увеличение ЦИК, субпопуляционного индекса CD4+/CD8+, количества IgG в сыворотке крови (р0,05);
– при респираторной инфекции – снижение относительного и абсолютного количества лимфоцитов, абсолютного количества Т-лимфоцитов, увеличение общего количества лейкоцитов, концентрации IgG в сыворотке крови (р0,05);
– при энтеровирусной инфекции снижение относительного и абсолютного числа эозинофилов, абсолютного числа сегментоядерных нейтрофилов, увеличение относительного количества CD19+лимфоцитов и сывороточного IgG (р0,05).
Полученные данные объясняют высокую частоту патологии беременности и родов у этих женщин. Так, у матерей с герпетической инфекцией преждевременные роды регистрировались в 71,0% случаев обнаружения антигенов герпесвирусов в осадке мочи у матерей. В 5,8% случаев у женщин наблюдалась угроза прерывания беременности на ранних сроках.;
у 35,3% женщин из этой группы дети рождались недоношенными. В 28,5% у детей возникали пороки развития.
При выявлении антигенов герпесвирусов у матерей в этой группе 40,0% их детей имели нарушения противоинфекционной защиты с формированием молочницы, гнойного конъюнктивита, либо омфалита и д. р.
В группе матерей с респираторными инфекциями, внутриутробное инфицирование плода регистрировали в 36,8% случаев, недоношенность у ребенка – в 6,7% случаев, при выявлении антител в сыворотке крови к респираторным вирусам – роды преждевременные развились в 35,2% случаев, гестоз у женщин имел место в 8,3% случаев;
патология мочеполовой системы – в 10,0% случаев.
В группе матерей с энтеровирусной инфекцией антитела к вирусам Коксаки В в сыворотке крови были обнаружены только в случае внутриутробного инфицирования плода (33,3%).
При обнаружении у матерей антигенов герпесвирусов в осадке мочи у половины детей (50%) наблюдали формирование пороков развития (атрезия прямой кишки, врожденный порок сердца и д. р.). В 36,3% случаев обнаружения в вагинальном соскобе матери антигенов герпесвирусов ребенок рождался недоношенным (p0,05).
При выявлении у матерей герпетической инфекции в 64,0% случаев этот антиген определяли в ротовой полости у новорожденного ребенка, в 40,0% случаев антиген ВПГ и 34,1% антиген ЦМВ выявляли в моче (p0,05). При выявлении респираторной инфекции у матерей, в 66,7% случаев антигены вирусов, в 16,7% – антитела к респираторным вирусам были обнаружены и у ребенка (p0,05).
Полученные данные позволили выявить следующую закономерность: при обнаружении антигена ВПГ у матери в вагинальном секрете, в 35,8% случаев у ребенка выявлялись антигены респираторных вирусов, в 80,0% случаев определяли антитела к ним (р0,05). Этот факт создал высокий риск интранатального инфицирования ребенка, что могло привести к изменениям в системах противоинфекционной защиты организма.
Ребенок становился более восприимчивым к другим инфекциям, в том числе респираторным, что и было констатировано у исследованных детей, госпитализированных в стационарные отделения ОДКБ№1 или получавших лечение в амбулаторных условиях.
Особенно следует отметить частоту возникновения инфекционных процессов у детей в случаях выявления антигенов герпесвирусов у матерей в сочетанных локализациях – в слизистой оболочке полости рта и осадке мочи. В 57,2% случаев дети этих матерей имели заболевания органов дыхания. При выявлении и антигенов, и антител к респираторным вирусам у матерей 71,4% детей имели заболевания мочеполовой системы (p0,05).
Выявленные нами изменения иммунологических параметров у детей и их матерей при различных патологических процессах, в том числе при вирусных инфекциях, позволило нам не только оценить состояние иммунной системы, но и послужило важным критерием назначения или отказа от иммунотропных препаратов. А также полученные данные явились обоснованием необходимости разработки скрининг-программ подготовки женщин к предстоящей беременности, обследования их во время беременности, особенно при наличии факторов риска внутриутробного инфицирования плода, что позволит более эффективно проводить профилактические мероприятия по разработке и предупреждению развития патологических процессов у детей.
Таким образом, проведенные комплексные исследования экспериментального и клинического характера, позволили получить комплекс данных о том, что в основе таких разнородных состояний как патология беременности, болезни детей раннего возраста и заболевания ОДА, лежат одни и те же механизмы опосредованного действия вирусов на органы и системы организма человека, включая иммунную, состояние которой определяет дальнейший характер течения патологических процессов в организме. Клинически это выражается многообразием проявлений - от выраженной манифестной до инаппарантной форм заболевания.
Полученные данные позволили разработать этиопатогенетические представления о развитии патологических процессов, имеющих связь с вирусными агентами, и сформулировать следующие выводы.
ВЫВОДЫ 1. В эксперименте на животных при моделировании гриппозной и герпетической инфекции получены данные о том, что эти вирусы являются индуцирующим фактором развития полиорганных патологических процессов, в т.ч. опорно-двигательного аппарата, что сопровождается нарушениями противоинфекционной защиты.
2. Доказано этиопатогенетическое значение герпесвирусной инфекции в развитии патологии опорно-двигательного аппарата, что подтверждено при электронно микроскопическом исследовании синовиальной жидкости больных.
3. Для больных с ревматоидным артритом, протекающим на фоне респираторной инфекции, характерна активация гуморальных факторов иммунной системы, с дисбалансом клеточных параметров иммунитета, снижение фагоцитарных функций. При герпесвирусной инфекции – угнетение большинства иммунологических факторов - общего количества лейкоцитов, CD3+ и CD4+лимфоцитов, субпопуляционного индекса Т лимфоцитов, сывороточных IgA и IgM, НСТ-теста стимулированного.