Морфофункциональная характеристика экспериментальных повреждений головного мозга и их фармакотерапия растительными средствами

На правах рукописи

РАЗУВАЕВА ЯНИНА ГЕННАДЬЕВНА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА И ИХ ФАРМАКОТЕРАПИЯ РАСТИТЕЛЬНЫМИ СРЕДСТВАМИ 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Благовещенск – 2013

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки «Институт общей и экспериментальной биологии» Сибирского отде ления Российской академии наук

Научный консультант:

Кухаренко Наталья Степановна – доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты:

Хибхенов Лопсондоржо Владимирович – доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйствен ная академия им. В.Р. Филиппова» Министерства сельского хозяйства РФ / кафедра анатомии, гистологии и патоморфологии, заведующий Ламажапова Галина Петровна, доктор биологических наук, ФГБОУ ВПО «Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управле ния» / кафедра биоорганической и пищевой химии, старший преподаватель Ильина Ольга Петровна, доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия» Мини стерства сельского хозяйства РФ / факультет биотехнологии и ветеринарной медицины, декан

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Якутская государственная сельско хозяйственная академия» Министерства сельского хозяйства РФ

Защита диссертации состоится «18» декабря 2013 года в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д 220.027.02 при ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет» по адресу:

675005, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет»

Автореферат разослан “ ” _2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук О.Л. Самусенко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Данные эпидемиологических исследований, прово димые Всемирной организацией здравоохранения, и исследования в отдель ных странах показывают, что рост темпа жизни, урбанизация и научно технический прогресс, а также социально-экономическое напряжение в об ществе приводят к увеличению числа заболеваний нервной системы (Атама нов А.А., Менделевич В.Д., 2011;

Вельтищев Д.Ю., 2011;

Weisberg R.B., 2009;

Provencher M.D., 2013), среди которых, с отчетливой тенденцией к увели чению, преобладают синдром хронической усталости, тревожные расстрой ства и когнитивные нарушения (Воронина Т.А., 2009;

Захаров В.В., 2012;

Luyckx K. et al., 2011;

Durham R.C. et al., 2012). Основными факторами раз вития как тревожных расстройств, так и когнитивных нарушений являются наследственная предрасположенность, стрессы, расстройства мозгового кро вообращения различного генеза, использование нейропсихотропных средств, а также соматические и эндокринные заболевания (Вельтищев Д.Ю., 2011;

Захаров В.В., Вахнина Н.В., 2011;

Старчина Ю.А., 2012;

Forbes D. et al., 2011;

Provencher M.D. et al., 2012). Отмечается рост резидуальной цереб рально-органической патологии, вследствие цереброастенических и энцефа лопатических нарушений, возникающих на фоне внутриутробной асфиксии плода, родовых травм мозга и др. (Евтушенко Е.Д., 2003;

Уракова Н.А., 2012;

Poletti М. et al., 2012;

Suttanon Р. et al., 2012). С увеличением продолжитель ности жизни населения, резко возрос процент лиц с нейродегенеративными заболеваниями (Камчатнов П.Р. и др., 2010;

Старчина Ю.А., 2012;

Smith R.A.

et al., 2006;

Li H. et al., 2011;

Poletti М. et al., 2012).

В настоящее время в медикаментозном лечении больных с заболеваниями нервной системы применяются средства с анксиолитическим, антидепрес сивным, ноотропным и другими действиями, влияние которых направлено на высшие интегративные функции мозга: восстановление нарушенных мне стических и мыслительных функций, снижение неврологического дефицита, уровня тревожности и повышение резистентности организма к экстремаль ным воздействиям (Гуревич М.А., 2006;

Jellinger К.А., 2008). При этом большинство применяемых синтетических препаратов вызывает побочные реакции, что, в конечном итоге, нивелирует их терапевтическую эффектив ность. Так, на фоне анксиолитиков бензодиазепинового ряда наблюдаются нарушения когнитивных функций, синдром отнятия и рецидива тревоги в случае их отмены (Durham R.C. et al., 2012);

трициклические транквилизато ры проявляют антихолинергическое, кардиотоксическое влияние, нарушают когнитивные функции и др. (Durham R.C. et al., 2012;

Friborg О. et al., 2013).

Применяемые в настоящее время синтетические ноотропные средства также обладают рядом побочных эффектов, которые ограничивают их применение (Воронина Т.А., Середенин С.Б., 2007;

Akabay Р. et al., 2003).

Между тем, для лечения неврологической патологии с глубокой древ ности используются такие растения как женьшень, валериана лекарст венная, пустырник сердечный, мелисса лекарственная, пион уклоняющийся, зверобой продырявленный, шлемник байкальский и созданные на их основе фитосборы (Барнаулов О.Д., 2010;

Венгеровский А.И. и др., 2011;

Арушанян Э.Б., 2008;

2012). Доказано, что благодаря наличию комплекса биологически активных веществ растительные средства обладают широким спектром фар макологической активности, оказывают выраженный терапевтический эф фект и их побочное действие, в большинстве случаев, ограничивается инди видуальной непереносимостью компонентов (Авдеева Т.И., Кинкулькина М.А., 2008;

Турищев С.Н., 2008;

Алексеева А.В., 2011;

Бурчинский С.Г., 2012;

Куркин В.А. и др., 2012). Преимущество комплексных средств перед монопрепаратами обусловлено синергизмом действия лекарственных расте ний в сборах, благодаря чему усиливаются полезные свойства компонентов, входящих в их состав. Рационально подобранные фитопрепараты способны выступать в качестве регулирующей системы при патологических состояни ях организма (Николаев С.М., 2008;

2012). Интерес представляют традици онные медицинские системы, в частности тибетская, которая широко ис пользует многокомпонентные сборы при болезнях «гза» («болезни, насылае мые духами»: при инсультах, параличах и других нарушениях функций нервной системы) (Тибетская…, 2008).

В связи с этим актуальным является поиск средств в лечении расстройств нервной системы, обладающих широким спектром фармакологических свойств в сочетании с максимальной безвредностью. Лекарственные расте ния и созданные на основе тибетской традиции врачевания средства пред ставляют большой интерес.

Целью исследования явилось определение особенностей морфофунк циональных нарушений центральной нервной системы, вызванных алко гольной интоксикацией, длительным эмоциональным стрессом, депривацией сна, введением скополамина, а также гипоксией, и оценка фармакотерапев тической эффективности растительных средств при указанных патологиче ских состояниях.

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие за дачи:

1) определить особенности влияния алкогольной интоксикации, эмоцио нального стресса, депривации сна, скополамина и гипоксии на морфофунк циональное состояние центральной нервной системы;

2) изучить структурные изменения в коре больших полушарий головного мозга, гиппокампе и мозжечке при указанных патологических состояниях;

3) определить спектр нейропротективной активности исследуемых расти тельных средств;

4) оценить фармакотерапевтическую эффективность растительных средств на фоне алкогольной интоксикации;

5) определить фармакотерапевтическую эффективность экстракта сопло дий хмеля обыкновенного (ЭСХО), настойки цимицифуги даурской (НЦД) и «Анксиофита» при патологических состояниях, сопровождающихся тревож ными расстройствами;

6) изучить влияние растительных средств на морфофункциональное со стояние нервной системы при нейродегенеративных и гипоксических со стояниях;

7) выявить основные механизмы нейропротективного влияния исследуе мых растительных средств.

Научная новизна. Работа представляет комплексное исследование по влиянию алкогольной интоксикации, эмоционального стресса, депривации сна, введения скополамина и гипоксии на морфофункциональное состояние головного мозга белых крыс с обоснованием возможности и целесообразно сти фармакокоррекции растительными средствами указанных патологиче ских состояний. Определено, что при алкогольной интоксикации, стрессо вых, нейродегенеративных и гипоксических состояниях у животных разви вается комплекс поведенческих нарушений, характеризующийся двигатель ной и эмоциональной заторможенностью животных, нарушениями когни тивных функций. В коре больших полушарий, гиппокампе и мозжечке на блюдаются морфофункциональные изменения, характеризующиеся умень шением количества функционально активных и увеличением количества регрессивных форм нейронов (пикнотических, резко гипохромных и «кле ток-теней»), явлений сателлитоза и нейронофагии на фоне снижения энерге тического потенциала и подавления активности моноаминергической систе мы головного мозга. Установлено, что при длительной инъекции скополами на (экспериментальная болезнь Альцгеймера) у животных отмечаются наи более выраженные структурные изменения в гиппокампе, характеризующие ся не только тотальным гиперхроматозом нейронов, характерным для других патологических состояний, но и их лизисом, в результате чего наблюдаются массивные очаги клеточного опустошения.

Выявлено, что основными и общими механизмами в повреждающем дей ствии нервной системы при указанных патологических состояниях являются активация свободнорадикального окисления липидов и снижение активности системы антиоксидантной защиты.

В работе установлено, что исследуемые растительные средства оказыва ют ноотропное, антидепрессивное, антиагрессивное, анксиолитическое и умеренное седативное действие. Определено, что «Ноофит» проявляет более выраженное ноотропное действие, «Анксиофит» – анксиолитическое;

при этом, с повышением дозы фитопрепарата снижается ноотропное действие и повышается седативный эффект.

Установлено, что исследуемые растительные средства обеспечивают вы раженную фармакотерапевтическую эффективность при хронической алко гольной интоксикации, оказывая противотревожное и антиамнестическое влияние, уменьшая количество регрессивных нейронов в коре больших по лушарий, гиппокампе и мозжечке. Показано, что на фоне длительного эмо ционального стресса и депривации сна ЭСХО, НЦД и «Анксиофит» норма лизуют у животных поведенческие реакции, снижая эмоциональное напря жение, оказывая антиамнестическое влияние;

уменьшают количество регрес сивных нейронов в структурах головного мозга и стимулируют моноаминер гическую систему. При экспериментальных нейродегенеративных состояни ях «Ноофит» проявляет выраженную фармакотерапевтическую эффектив ность, нормализуя у животных поведенческие реакции, оказывая антиамне стическое влияние, подавляя свободнорадикальные процессы, активируя антиоксидантную систему организма, уменьшая количество регрессивных нейронов. Курсовое введение исследуемых средств оказывает антиамнести ческое влияние, нормализует энергетический потенциал нейронов и снижает содержание нейрон-специфической енолазы при гипоксии.

Доказано, что основными механизмами, определяющими нейропротек тивное влияние растительных средств, являются стимуляция ГАМК ергической и катехоламинергической нейропередач, нормализация энергети ческого обмена при антиоксидантном, мембраностабилизирующем, стресс протективном, антигипоксическом и церебропротекторном действии.

Практическое значение. Результаты проведенных экспериментальных исследований позволяют рекомендовать исследуемые средства для клиниче ских исследований с целью их применения в качестве эффективных и безо пасных средств в клинической и ветеринарной практике для лечения и про филактики тревожных расстройств, а также умеренных когнитивных нару шений.

Результаты проведенных исследований включены в научный отчет «Мо лекулярно-клеточные механизмы стресс-индуцированных патологических состояний и коррекция их средствами природного происхождения», пред ставленный в СО РАН. Материалы исследований включены в учебное посо бие «Особенности фитокоррекции заболеваний нервной системы» и исполь зуются в учебном процессе на кафедрах общей патологии человека и фарма кологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факуль тета Бурятского государственного университета;

анатомии, гистологии и патоморфологии Бурятской государственной сельскохозяйственной акаде мии им. В.Р. Филиппова;

внутренних незаразных болезней, клинической ди агностики и фармакологии Иркутской государственной сельскохозяйствен ной академии;

клинической фармакологии Иркутской государственной ме дицинской академии последипломного образования. По результатам иссле дований получены патент РФ (№ 2460534 от 10.09.2012 «Способ получения вещества, обладающего анксиолитической активностью») и Свидетельство о государственной регистрации биологически активной добавки к пище:

«Арура-Тан № 10» – «Анксиофит» (№ 77.99.11.003.Е.004344.05.13 от 28.05.2013).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Особенности влияния алкогольной интоксикации, эмоционального стресса, депривации сна, скополамина и гипоксии на психоэмоциональное состояние животных, когнитивные функции;

влияние указанных патологиче ских состояний на процессы свободнорадикального окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной защиты организма.

2. Структурные изменения в коре больших полушарий головного мозга, гиппокампе и мозжечке при указанных патологических состояниях: сниже ние количества функционально активных нейронов (нормохромных, уме ренно гипер- и гипохромных), увеличение количества регрессивных нейро нов (резко гипохромных, пикнотических и «клеток-теней»), явлений сател литоза и нейронофагии.

3. Спектр нейропротективной активности растительных средств: ан ксиолитическое, антидепрессивное, антиагрессивное, ноотропное и умерен ное седативное действие.

4. Нейропротективное влияние фитопрепаратов при указанных патоло гических состояниях: снижение количества дистрофически измененных и рег рессивных форм нейронов и увеличение функционально активных нейронов в структурах головного мозга;

подавление свободнорадикальных процессов и активация антиоксидантной системы организма.

5. Нормализация растительными средствами при расстройствах нервной системы поведенческих реакций: снижение неврологического дефицита, чув ства страха и тревоги, восстановление эмоционального статуса и антиамне стическое влияние.

6. Основные механизмы нейропротективного влияния исследуемых фи топрепаратов: стимуляция ГАМК-ергической и катехоламинергической ней ропередачи, нормализация энергетического обмена, антиоксидантное, мем браностабилизирующее, антигипоксическое и церебропротекторное дейст вие.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссерта ции доложены и обсуждены на: Южно-Сибирской Международной научной конференции молодых ученых «Экология Южной Сибири» (Абакан, 2001);

Международной научно-практической конференции «Устойчивое развитие сельского хозяйства в бассейне озера Байкал» (Улан-Удэ, 2002);

Всероссий ской научной конференции «Актуальные проблемы адекватного питания в эндемичных регионах» (Улан-Удэ, 2002);

IX, X, XII, XIX, XX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002;

2003;

2005;

2012;

2013);

VI Всероссийской научной конференции молодых ученых “Био логия – наука XXI века» (Пущино, 2002);

Международной научной конфе ренции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных живот ных» (Улан-Удэ, 2003);

Всероссийской научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004;

2010);

III Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функцио нальных продуктов» (Москва, 2005);

Международной научной конференции «Дорно-орнийн анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо» (Уланбатор, 2005);

Всероссийской научной конференции молодых ученых «Экология в совре менном мире: взгляд научной молодежи» (Улан-Удэ, 2007);

II International Symposium on Chemistry of Herbal Medicine and Mongolian Drug (Ulaanbaatar, 2006);

II International Сonference «Traditional medicine: current situation and future status» (Ulaanbaatar, 2006);

III International Scientific Conference «Tradi tional Medicine: a Current Situation and Perspectives of Development» (Ulan Ude, 2008);

IV International Symposium on Traditional Medicine and Innovative Drugs (Erdos, 2009);

Международном научном конгрессе «Современные тен денции и перспективы развития курортного дела в Российской Федерации» (Москва, 2010);

The International Scientific Conference “Current Situation and Future Trends of Drug Research and Development from Natural Sources” (Ulaan baatar, 2010);

V International Symposium on Present Situation and Future Devel opment of Mongolian Traditional Medicine (Ulaanbaatar, 2011);

II Международ ной научной конференции «Разнообразие почв и биоты Северной и Цен тральной Азии» (Улан-Удэ, 2011);

II Международной научно-практической конференции «Особенности формирования здорового образа жизни: факто ры и условия» (Улан-Удэ, 2012);

VI International Scientific Conference “Tradi tional Medicine: Ways of Integration with Modern Health Care» (Ulan-Ude, 2013).

Личный вклад автора. Вклад автора состоял в формировании направле ния исследования, непосредственном выполнении, постановке конкретных задач и их экспериментальном решении, интерпретации и обсуждении экс периментальных данных. Диссертационная работа представляет собой обобщение результатов многолетних исследований, полученных автором лично.

Связь задач исследований с проблемным планом НИР. Работа выпол нена в Отделе биологически активных веществ ФГБУН ИОЭБ СО РАН в соответствии с комплексной программой по научным проектам: интеграци онный проект № 54 «Научные основы разработки новых лекарственных средств. Перспективы использования возобновляемого сырья»;

проект СО РАН № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», проект СО РАН № VI.52.1.3 «Молекулярно-клеточные механизмы стресс-индуцированных па тологических состояний и коррекция их средствами природного происхож дения».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 105 научных работ, из них 40 статей – в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ, получены 1 патент РФ на изобретение и свидетельство о регистрации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 285 страни цах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, мате риалов и методов исследований, результатов собственных исследований ( главы), обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, спи ска использованной литературы, приложений. Работа иллюстрирована таблицами и 92 рисунками, в том числе 53 микрофотографиями. Список ли тературы включает 476 источников, из них 326 отечественных и 150 ино странных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Исследования выполнены на 1720 белых крысах линии Wistar обоего по ла с исходной массой 180–200 г. Содержание животных соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ № 708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Перед нача лом экспериментов животные, отвечающие критериям включения в экспе римент, распределялись на группы с учетом пола, возраста, массы и принци па рандомизации. Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных жи вотных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.), «Правила ми, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986). Протокол исследования согласован с этическим комите том ИОЭБ СО РАН (протокол №5 от 05.09.2000). Эвтаназию животных осу ществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом.

Кроме того, в экспериментах (in vitro) были использованы суспензии эрит роцитов и желточных липопротеидов, препараты тканей и биохимические тест-системы.

Алкогольную интоксикацию (АИ) вызывали внутрижелудочным введе нием животным 40% этанола в объеме 9,0 мл/кг в течение 45 дней (Воронина Т.А., Островская Р.У., 2005). Эмоциональный стресс (ЭС) моделировали по мещением крыс в тесные пластиковые цилиндры с последующим погруже нием их в воду до уровня шеи (20-220 С) на 2 часа ежедневно в течение суток (Захарова И.А. и др., 2009);

стресс Жуве (СЖ) – трехдневной деприва цией парадоксальной фазы сна (Воронина Т.А., Середенин С.Б., 2005). Экс периментальную болезнь Альцгеймера (БА) у крыс воспроизводили по мето дике Т.А. Ворониной и др. (2005): животным ежедневно в течение 20 суток внутрибрюшинно вводили М-холиноблокатор – скополамин в дозе 1 мг/кг/сут. Острую гипобарическую гипоксию моделировали путем «подъ ема» лабораторных животных в барокамерной установке на «высоту» 9000 м со средней скоростью 50 м/с, экспозицией их в этих условиях в течение мин и последующей трехчасовой реоксигенацией (Березовский В.А. и др., 1985).

В качестве объектов исследования были использованы:

сухой экстракт соплодий хмеля обыкновенного (Humulus lupulus L.) (ЭСХО), полученный путем последовательной экстракции (70%, 50% и 40 % спирт этиловый и вода) и последующей вакуумной сушкой;

настойка цимицифуги даурской (Cimicifuga dahurica (Turcz.) Maxim.) (НЦД)*, полученной экстрагированием на 70% спирте этиловом;

полиэкстракт «Анксиофит» (условное название), полученный путем по следовательной экстракции (70%, 50% и 40% спирт этиловый и вода) и по следующей вакуумной сушкой из: соплодий хмеля обыкновенного (Humulus lupulus L.), травы пустырника сердечного (Leonurus cardiaca L.), корней и корневищ шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi), травы мя ты перечной (Mentha х piperita L.), цветков календулы лекарственной (Ca lendula officinalis L.), плодов шиповника (Rosa spp.), взятых в соотношении 6:3:3:3:2:3 массовых частей;

полиэкстракт «Ноофит» – условное название экстракта жидкого, полу ченного путем экстракции 40% спиртом этиловым из: корней и корневищ шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi), левзеи сафроловид ной (Rhaponticum carthamoides (Willd.) Iljin) и валерианы лекарственной (Valeriana officinalis L), травы мяты перечной (Mentha х piperita L.), горца птичьего (Polygonum aviculare L.) и тысячелистника обыкновенного (Achillea millefolium L.) и листьев крапивы двудомной (Urtica dioica L.), взятых в со отношении 5:2:3:2:3:2:3 массовых частей.

Перед экспериментами, с целью исключения влияния этанола, НЦД и экс тракт «Ноофит» деалкоголизировали путем выпаривания на водяной бане до 1/10 от исходного объема. Полученный остаток доводили водой очищенной до заданного объема в соответствии с рекомендациями (Правила…,1992).

ЭСХО вводили животным внутрижелудочно через зонд один раз в сутки в дозах 100, 200 и 300 мг/кг;

«Анксиофит» – в дозах 50, 100 и 300 мг/кг;

НЦД – в дозах 0,5 и 1,0 мл/кг;

«Ноофит» – в дозах 2,0;

5,0 и 10,0 мл/кг. Конечный объем исследуемых средств, вводимый животным, составлял 10 мл/кг. Про * Исследования проведены совместно с м.н.с. Д.Э. Гармаевым должительность введения фитоэкстрактов, а также сроки исследования варь ировали в зависимости от цели и продолжительности экспериментов. Жи вотные контрольной и интактной групп получали воду очищенную в соот ветствующем объеме по аналогичной схеме введения растительного средст ва. В качестве препаратов сравнения использовали аптечный экстракт из ва лерианы (ЭВ) в изоэффективной дозе 120 мг/кг и пирацетам в дозе 200 мг/кг, которые вводили животным по аналогичной схеме введения исследуемого средства.

Анксиолитическое и седативное действие фитосредств изучали согласно Методическим указаниям по изучению транквилизирующего (анксиолитиче ского) действия фармакологических веществ (Воронина Т.А., Середенин С.Б., 2005) в методиках: конфликтная ситуация по Vogel, приподнятый кре стообразный лабиринт (ПКЛ), «светлая/темная камера», «открытое поле», пролонгирование наркотического сна (кетамин гидрохлорид, 2,0 мл/кг;

гек сенал, 60 мг/кг). Антидепрессивное действие оценивали в тесте «поведенче ское отчаяние» по Порсолту, антиагрессивную активность – в тесте «немо тивированная агрессия» (Воронина Т.А., Середенин С.Б., 2005). Ноотропное действие исследовали согласно Методическим рекомендациям по изучению ноотропного действия новых фармакологических веществ (Воронина Т.А., Островская Р.У., 2005) в методиках: условная реакция пассивного избегания (УРПИ), условная реакция активного избегания (УРАИ) и условный рефлекс с положительным подкреплением, который проводили в Т-образном лаби ринте.

Об антистрессорной активности исследуемых фитосредств судили по вы раженности триады Селье. Для оценки напряжения симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизно-адренокортикальной системы в плазме крови и гомо генате головного мозга методом иммуноферментного анализа определяли содержание катехоламинов (адреналина, норадреналина и дофамина) с ис пользованием набора «IBL, RE 59395 TriCat ELISA» на анализаторе «Stat Fax 2100»;

в плазме крови – уровень адренокортикотропного гормона (АКТГ) и кортизола с помощью набора «СтероидИФА-кортизол» на автоматическом анализаторе «ALISEI»;

в гомогенате головного мозга (ГМ) – содержание метаболитов катехоламинов (метанефрина и норметанефрина) с помощью набора «MetCombiPlasma» на анализаторе «Multiskan Ascent». В сыворотке крови определяли содержание нейрон-специфической енолазы (NSE) с по мощью набора «Can Ag NSЕ» на иммуноанализаторе «Multiskan Ascent».

Интенсивность процессов свободнорадикального окисления (СРО) био макромолекул оценивали по накоплению малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977) и гомогенате ГМ (Владимиров Ю.В., Арчаков А.И., 1972). О состоянии антиоксидантной сис темы (АОС) судили по активности каталазы в гомогенате ГМ и в сыворотке крови (Королюк М.А. и др., 1988), супероксиддисмутазы (СОД) – в эритро цитах (Чевари С. и др., 1985) и содержание восстановленного глутатиона (ВГ) – в крови (Anderson T., 1991).

Для оценки влияния исследуемых средств на энергетический потенциал нейронов определяли содержание АТФ, молочной и пировиноградной ки слот в гомогенате ГМ (Методы…, 1982).

Антигипоксическое действие фитопрепаратов исследовали с использова нием моделей: острая нормобарическая гипоксия с гиперкапнией (Лукьянова Л.Д., 1989);

острая гемическая гипоксия (натрий нитрит, 200 мг/кг) (Костю ченко Ю.Ф., Фаранщук Н.Ф., 1982);

острая гистотоксическая гипоксия (на трий нитропруссид, 20 мг/кг) (Лукьянова Л.Д., 1989).

Противосудорожное действие исследуемых средств изучали на моделях стрихниновых (2 мг/кг), коразоловых (100 мг/кг) и камфорных (2 мл/кг) су дорог (Руководство…, 2005).

Мембраностабилизирующую активность фитосредств оценивали in vitro по степени торможения перекисного и осмотического гемолиза эритроцитов донорской крови (Ковалев И.Е. и др., 1986).

Антирадикальную активность экстрактов и их компонентов оценивали с применением DPPH-метода (Seyoum А. et al., 2006). Влияние исследуемых средств на связывание супероксидных анион-радикалов (О2·-) определяли в неэнзиматической системе феназин метосульфат/НАДН (Chen A.-S. et al., 2003);

Fe2+-хелатирующую активность – фенантролиновым методом (Олен ников Д.Н., 2008);

связывание молекул оксида азота (NO) – согласно R.

Govindarajan et al. (2003). Для оценки влияния экстрактов на процессы пере кисного окисления липидов (ПОЛ) использовали также модельную систему, состоящую из суспензии желточных липопротеидов (Клебанов Г.И., 2003).

Влияние фитосредств на состояние ГАМК-ергической системы исследо вали c помощью метода конфликтной ситуации по Vogel. С целью блокады ГАМКА-рецептора использовали бикукуллин (1,0 мг/кг), а для блокады хлорного канала – пикротоксин (1,0 мг/кг) (Воронина Т.А., Островская Р.У., 2005).

Для патоморфологических исследований ГМ животных фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина и 960 спирте. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, а также крезилвиолетом по Нисслю (Коржевский Д.Э., Гиляров А.В., 2010). Для определения степени повреждения структур ГМ проводили морфометрический анализ клеточного состава II-V слоев коры больших полушарий (КБП), мозжечка и гиппокампа.

Во II-V слоях КБП и подсчитывали количество разных по структуре нейро нов: нормохромные, умеренно и резко гиперхромные, умеренно и резко ги похромные, «клетки-тени», в гиппокампе – количество (в %) темных и свет лых нейронов по отношению к общей сумме клеток (Артюхина Н.И., Руси нова Е.В., 2002). Для выявления сукцинатдегидрогеназы (СДГ) свежезамо роженные срезы, приготовленные на криостате МК-25, окрашивали по На хласу, для выявления липидов – суданом IV (Микроскопическая…, 1996).

Цифровые данные статистически обработаны общепринятыми методами для малой выборки с определением средней величины (М) и ошибки (m).

Степень значимости результатов исследований (Р) оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия между данными кон троля и опыта считали статистически значимыми при вероятности 95 % (Р 0,05) (Сергиенко В.И., Бондарева И.Б, 2006).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Характеристика морфофункциональных повреждений головного мозга при различных патологических состояниях Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что морфофунк циональные изменения в структурах ГМ на фоне патологических состояний различного генеза (АИ, стрессовые, нейродегенеративные и гипоксические состояния) сопровождаются комплексом поведенческих нарушений, харак теризующихся повышением уровня тревожности и эмоциональности, изме нением ориентировочно-исследовательского и целенаправленного поведения на хаотичные движения, ухудшением процессов обучения и памяти. Так, на фоне 45-дневной АИ у животных контрольной группы при тестировании в «открытом поле» наблюдалось увеличение горизонтальной активности, при этом ни одно животное не заходило в центральные квадраты установки, и у них отсутствовал норковый рефлекс. Хаотическое поведение крыс сопрово ждалось увеличением количества дефекаций и актов груминга. О превалиро вании у контрольных животных чувства страха и тревоги на фоне указанного патологического состояния свидетельствовало поведение их в ПКЛ: количе ство заходов и время, проведенное в открытых рукавах установки, были со ответственно в 4,7 и 12,4 раза ниже указанных показателей животных ин тактной группы. На фоне ЭС у контрольных животных количество заходов и время пребывания в открытых рукавах ПКЛ были соответственно на 79% и 73 % ниже данных интактных животных;

72-часовая депривация сна (СЖ), оказывала более выраженное угнетающее действие на эмоциональное со стояние животных: ни одно животное контрольной группы в данной серии экспериментов не посетило открытые рукава ПКЛ, а количество переходов между закрытыми рукавами было в 3,0 раза ниже данных в интактной груп пе.

При оценке когнитивных функций установлено, что гипоксия вызывает снижение процесса обучаемости и оказывает амнестический эффект в тесте УРПИ, что проявлялось в снижении латентного периода (ЛП) захода в тем ный отсек установки у контрольных животных через 1 час после выработки рефлекса в 1,9 раза, через 24 часа и 7 суток – в среднем в 2,7 раза по отноше нию к показателям интактных животных. Введение крысам этанола в тече ние 45 дней не оказывало влияние на выработку УРПИ у крыс контрольной и опытных групп, что согласуется с данными исследований других авторов (Буров Ю.В., 1985;

Воронина Т.А., 1989;

Шабанов П.Д., 1998), показавших, что этанол влияет на выработку условного рефлекса только после 4 месяцев введения. Однако, даже однократное введение этанола, по мнению этих же авторов, приводит к нарушению процессов консолидации и воспроизведения памятного следа, что соответствует результатам наших исследований: ЛП у крыс контрольной группы через 24 часа и 7 суток был ниже аналогичного показателя животных интактной группы на 53% и 66% соответственно. На рушение когнитивных функций отмечалось и на фоне стрессовых ситуаций:

в контрольной группе после четырехкратной иммобилизации ни у одного животного УРПИ не сохранился, при 80% показателе в интактной группе;

на фоне СЖ рефлекс воспроизводился у 30% животных, при этом ЛП был в 3, раза ниже показателя крыс интактной группы.

Достоверно известно, что когнитивные нарушения коррелируют со сте пенью органических изменений в ГМ. Многочисленными работами показа но, что КБП и гиппокамп являются структурами ГМ, участвующими в реали зации и организации когнитивных и эмоциональных процессов, таких как память, внимание, ориентация в пространстве, тревога и др. (Одинак М.М. и др., 2011) и являются основными мишенями при различных патологических состояниях (Сапфирова В.А. и др., 2005;

Овчинников А.А. и др., 2006;

Ару шанян Э.Б. и др., 2007;

Мухаметшина Э.И., 2008;

Lamy V. et al., 2007). При жизненные магнитно-резонансные, а также посмертные исследования ГМ показали, что деструктивные процессы, ведущие к БА, также развиваются преимущественно в структурах, участвующих в процессах обучения и памя ти (Аршавский Ю.И., 2011). При микроскопическом исследовании ГМ жи вотных, потреблявших в течение 45 дней этанол, обнаруживались значи тельные изменения в структуре нейронов КБП. При этом в III слое измене ния были направлены в сторону увеличения гиперхромных, а в V слое – в сторону гипохромных нейронов. При количественном анализе нейронов ука занных слоев КБП установлено, что у животных контрольной группы коли чество нормохромных клеток снижалось в среднем на 65%, умеренно гипер хромных клеток – на 28% и 38% по сравнению с таковыми у животных ин тактной группы (табл. 1). При этом в III слое увеличивалось количество рез ко гиперхромных нейронов и «клеток-теней» в 3,1 и 4,7 раза, в V слое резко гипохромных нейронов и «клеток-теней» – в 2,0 и 10,3 раза по сравнению с данными интактных животных.

Таблица 1 – Влияние «Ноофита» на количество (%) разных типов нейронов III и V слоев коры больших полушарий головного мозга белых крыс при ал когольной интоксикации;

M±m;

n= Тип клеток Группы животных Интактная Контрольная Опытная Опытная (Н20) (этанол + (этанол + (этанол Н20) «Ноофит») +пирацетам III слой Нормохромные 41,0±4,05 13,1±1,36** 26,8±3,12* 26,9±0,26* Умеренно гиперхромные 25,2±1,68 18,2±1,47** 11,2±1,18* 15,3±0, Резко гиперхромные 11,4±0,76 34,8±5,95** 26,3±2,29 25,8±2,36* Умеренно гипохромные 13,8±1,04 17,7±1,47 26,3±1,12* 20,9±3, Резко гипохромные 7,1±1,25 9,1±0,76 8,8±0,80 8,2±1, «Клетки-тени» 1,5±0,01 7,1±0,81** 0,6±0,03* 2,2±0,44* V слой Нормохромные 42,2±5,07 16,1±1,21** 26,8±2,35* 24,5±0,84* Умеренно гиперхромные 14,8±1,39 12,0±1,69 12,8±1, 9,2±0,81** Резко гиперхромные 11,7±0,64 15,5±1,32 13,7±1,09 15,1±2, Умеренно гипохромные 23,2±1,71 30,5±1,44** 25,7±2,46 26,8±4, Резко гипохромные 6,6±0,90 13,2±1,15** 9,8±3,32* 9,3±1, «Клетки-тени» 1,5±0,01 15,5±1,09** 12,0±0,60* 11,5±2, Примечание. Здесь и далее различия статистически значимы при Р 0,05: **– между данными животных интактной и контрольной групп, * – между данными животных контрольной и опытной групп;

n – количество животных в группе.

Для нейронов V слоя КБП при АИ было характерно поражение, называе мое «острое набухание» по Шпильмейру (Жаботинский Ю.М., 1965): увели чение размеров клеточного тела, набухание отростков, постепенное раство рение тигроида при четкой структуре слегка увеличенного ядра;

в ряде слу чаев набуханию подвергается верхушечный дендрит. Полученные морфоло гические данные согласуются с результатами других исследователей, пока завших, что введение этанола вызывает в КБП изменения, направленные на увеличение сосудистых нарушений, атрофических процессов и острых дис трофических изменений нейронов (Попова Э.Н., 1984;

1995;

1997;

Пермяков А.В., 1997;

Актушина Г.А., 1998;

Шпинькова В.Н., 2000;

Guerri C., 1994;

Kril J.J., 1999).

На фоне гипоксии у животных контрольной группы во II-V слоях КБП наблюдались нейроны с «тяжелой» степенью повреждения, которая характе ризуется пикнозом нейронов (28%) и образованием «клеток-теней» (16%). В результате чего, общее количество регрессивных нейронов составляло 54% от общей популяции клеток, что в 2,8 раза превышало показатели интактных животных. На фоне образования многочисленных очагов клеточного опус тошения отмечались явления нейронофагии и сателлитоза, нарушения цито архитектоники.

По данным патоморфологических исследований на фоне стрессовых си туаций (ЭС и СЖ) структурные изменения нейронов II - V слоев КБП харак теризовались появлением значительного количества резко гиперхромных пикнотических нейронов, образующих скопления, и резко гипохромных кле ток, находящихся в состоянии умеренного и тотального хроматолиза. На блюдали набухание и вакуолизацию цитоплазмы нейронов, увеличение ко личества «клеток-теней», явлений сателлитоза и нейронофагии. Результаты морфометрических исследований показали, что у животных на фоне стрес совых ситуаций количество нормохромных нейронов в КБП снижалось в среднем в 2,0 раза, резко гипохромных нейронов возрастало соответственно в 1,7 и 1,4 раза, резко гиперхромных – в 3,9 и 5,3 раза и количество «клеток теней» – в 5,1 и 6,6 раза по сравнению с указанными показателями животных интактной группы (табл. 2).

Таблица 2 – Влияние «Анксиофита» на количество (%) разных типов нейро нов II – V слоев коры больших полушарий головного мозга белых крыс на фоне длительного эмоционального стресса;

М±m;

n= Типы клеток Группы животных Интактная Контрольная Опытная Опытная (Н2О) (стресс + Н2О) (стресс+«Анкси (стресс +ЭВ) офит») Нормохромные 48,6±2,10 25,8±1,43** 34,2±1,42* 32,6±2,11* Умеренно гиперхромные 16,2±0,91 15,2±1,41 20,2±1,41* 21,2±1,21* Резко гиперхромные 5,2±0,12 20,2±1,62** 12,0±1,02* 13,2±1,02* Умеренно гипохромные 19,3±0,42 13,2±0,92** 18,2±1,41* 16,2±1,10* Резко гипохромные 8,6±0,61 14,8±1,01** 10,2±0,91* 11,2±1,12* «Клетки-тени» 2,1±0,12 10,8±0,92** 5,2±0,21* 5,6±0,41* В связи с тем, что на сегодняшний день наблюдается неуклонное старе ние населения, нейродегенеративные заболевания в структуре неврологиче ской патологии занимают значительное место, являясь основной причиной деменции (Суслина З.А., 2008;

Капай Н.А. и др., 2010;

Carvalho A.L. et al., 2008;

Jellinger K.A., 2008;

Downey D., 2008). Наиболее известными предста вителями данного класса заболеваний являются болезни Альцгеймера и Пар кинсона, для которых характерна медленно прогрессирующая гибель опре деленных групп нервных клеток и одновременно – постепенно нарастающая атрофия соответствующих отделов головного и/или спинного мозга (Рогаче ва Т.А., Краснослободцева Н.А., 2007;

Birks J., 2006). По данным многочис ленных исследований установлено, что при развитии БА происходит утрата холинергических нейронов, в первую очередь, в области базальных ганглиев, при этом степень нарушения функции холинергической системы коррелиру ет с тяжестью когнитивного дефицита (Боголепова А.Н., 2009;

Francis Р.Т. et al., 1999). В связи с этим, для моделирования БА использовали хроническое введение блокатора мускариновых холинорецепторов – скополамина. Полу ченные нами данные показали, что на фоне введения скополамина у живот ных наблюдается понижение мышечного тонуса, нарушение координации, увеличение уровня тревожности, а также снижение способности к обучению:

на 5 сутки в контрольной группе рефлекс выработался у 30 % животных, при 100 % показателе в интактной группе (рис. 1).

Рисунок 1 – 6 Влияние «Но 5 офита» на вы 4 работку услов 3 ного рефлекса 2 активного избе гания у белых 1 крыс на фоне 0 эксперимен Интакт Контроль Ноофит Пирацетам тальной болез Ч исло выполненых реакций Количество животных с выработанным рефлексом, % ни Альцгейме ра.

Патоморфологические исследования ГМ свидетельствуют, что на фоне экспериментальной БА в наружном зернистом слое КБП отмечалось выра женное увеличение количества пикнотических нейронов;

в третьем слое по направлению с поверхности в глубину – снижение пикнотических и увели чение клеток в состоянии хроматолиза. Исчезновение тигроидного вещества сопровождалось развитием набухания различной степени. В V слое КБП на фоне повышения количества гипохромных нейронов и «клеток-теней» уве личивалось число пикнотических нейронов, образующих небольшие скопле ния, что создавало мозаичную картину с явлениями нейронофагии, сателли тоза и «выпадения» нейронов. В нейронах выявлялись отложения липофус цина. Данные морфометрических исследований показали (табл. 3), что у жи вотных контрольной группы при моделировании БА число нормохромных клеток снижалось в 11,6 раза, умеренно гиперхромных нейронов – на 16%, количество резко гипохромных нейронов возрастало в 2,5 раза, резко гипер хромных и «клеток-теней» в среднем в 5,0 раз по сравнению с таковыми по казателями животных интактной группы.

Таблица 3 – Влияние «Ноофита» на количество (%) разных типов нейронов II – V слоев коры больших полушарий головного мозга белых крыс на фоне экспериментальной болезни Альцгеймера;

M±m;

n = Тип клеток Группы животных Интактная Контрольная Опытная Опытная (Н20) (скополамин (скополамин + (скополамин + Н20) «Ноофит») +пирацетам) Нормохромные 48,6±2,12 4,2±0,49** 15,8±1,61* 13,7±1,02* Умеренно гиперхромные 16,2±0,91 13,6±0,91 22,1±1,92* 19,2±1,21* Резко гиперхромные 5,2±0,11 26,3±1,87** 16,7±1,32* 19,8±1,42* Умеренно гипохромные 19,3±0,42 23,5±2,29 24,7±1,21 26,6±1, Резко гипохромные 8,6±0,61 21,8±1,52** 14,6±0,51* 13,2±1,03* «Клетки-тени» 2,1±0,11 10,6±1,02** 6,1±0,23* 7,5±0,22* По данным литературы известно, что гиппокамп, как центральная струк тура лимбической системы, играет существенную роль в формировании фи зической и психической зависимости от психоактивных веществ (Савоненко А.В., 1997;

De Bellis M.D. et.al, 2000), участвует в организации эмоциональ ного поведения и реакции на стресс (Арушанян Э.Б. и др., 2007). Особенно велико значение гиппокампа в организации познавательных процессов. Так, с повреждающим воздействием на структуры гиппокампа связывают амне стический эффект алкоголя (Бородкина Л.Е. и др., 2002). Установлено, что патологические изменения при нейродегенеративных состояниях в ГМ начи наются непосредственно в медиальной височной области полушарий, вклю чающий гиппокамп (Аршавский Ю.И., 2011).

Патоморфологические исследования показывают, что нервные клетки гиппокампа у интактных животных светлые и однородные по форме, содер жат большое округлое ядро и узкий ободок цитоплазмы. На фоне домини рующего количества таких нейронов в гиппокампе интактных животных, локально отмечаются гиперхромные пикнотические нейроны, не образую щие скопления. По результатам наших морфометрических исследований количество последних колеблется в пределах от 4,2% до 6,7%, что согласует ся с данными других авторов (Артюхина Н.И., Русинова Е.В., 2002). На фоне АИ, ЭС, СЖ и гипоксии наблюдалось увеличение количества пикнотических нейронов в гиппокампе соответственно в 3,7;

3,9;

4,6 и 5,1 раза по сравнению с указанным показателем животных интактной группы (рис. 2). Длительная инъекция скополамина вызывала более выраженные структурные изменения в гиппокампе, характеризующиеся не только тотальным гиперхроматозом нейронов, но и их лизисом, в результате чего отмечались массивные очаги клеточного опустошения. Установлено, что количество регрессивных нейро нов в гиппокампе животных на фоне инъекции скополамина увеличивалось в 5,9 раза по сравнению с интактом (рис. 2).

Рисунок 2 – Количество %, от интактного Количество регрессивных контроля форм нейро нов в гиппо кампе белых крыс при раз 100 личных пато Г иперхромные не йроны Р егрес сивные нейроны логических Алкогольна я интокс икация Эмоциональ ный ст ресс состояниях.

Г ипоксия Скополаминовая инт оксикация Как известно, кора мозжечка очень чувствительна к действию токсиче ских веществ и гипоксическому воздействию (Сергиенко В.И., 1993;

Baker K.G., 1999;

Thomas J.D.,1998;

Walker J.J.,1997). В наших исследованиях вве дение этанола и гипоксия вызывали токсикогипоксические изменения клеток Пуркинье, сходные с изменениями нейронов в КБП: увеличивалось количе ство пикнотических, «клеток-теней», резко гипохромных клеток с наличием в цитоплазме вакуолей, что согласуется с данными других авторов (Wenisch S., 1996;

Walker J.J.,1997).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что на фоне АИ, ЭС, СЖ, нейродегенеративных и гипоксических состояний отмечаются на рушения психоэмоционального статуса и когнитивных функций животных, коррелирующие с изменениями в структурах ГМ. Последние характеризуют ся снижением количества функционально активных нейронов и увеличением количества пикнотических нейронов, клеток с тотальным хроматолизом тиг роидного вещества и дистрофическими изменениями в виде вакуолизации цитоплазмы, а также «клеток-теней», явлений сателлитоза и нейронофагии.

По мнению некоторых авторов (Боголепов Н.Н., 1979), вакуольная дистро фия нейронов отражает нарушение их липопротеинового каркаса, что свиде тельствует о тяжелых необратимых изменениях. Гиперхроматоз является эквивалентом заторможенного состояния и характеризует гипоксическое повреждение ГМ (Гипоксия…, 2000;

Орловская Д.Д., 1986). Так, в литерату ре имеются сведения (Гипоксия…, 2000;

Матвеев В.Ф., 1976;

Попова Э.Н., 1984), что ультрамикроскопическое строение гиперхромных нейронов, на блюдаемых при гипоксических повреждениях и при действии психотропных веществ, однотипно: в цитоплазме наблюдаются увеличение объема мито хондрий, просветление их матрикса, деструкция крист, фрагментация и ли зис эндоплазматической сети. Наличие большого количества измененных нейронов: пикнотических, «клеток-теней», а также явлений сателлитоза и нейронофагии, по мнению Н.Н. Боголепова и др. (1979, 2001), является од ним из признаков выраженной гипоксии ГМ и указывает на истощение ре зервных возможностей нейронов. Степень гипоксических изменений ГМ и других органов определяется также по снижению активности митохондри альных ферментов и повышению активности лактатдегидрогеназы в них (Пермяков А.В., Витер В.И., 1997). Так, в наших исследованиях на фоне ал когольной интоксикации на микропрепаратах животных контрольной груп пы, окрашенных по Нахласу, было выявлено снижение активности СДГ во всех структурах ГМ. При всех указанных патологических состояниях отме чались гидропические изменения, характеризующиеся появлением перицел люлярного и периваскулярного отеков и наличием дренажных форм олиго дендроглиоцитов, что согласуется с результатами других авторов (Сергиенко В.И. и др., 1993) и, по мнению Э.Н. Поповой (1984), являются компенсатор но-приспособительной реакцией, направленной на поддержание функции нейронов.

По данным литературы (Завалишин И.А., Захарова М.Н., 1996;

Шабанов П.Д., 2009;

Александровский Ю.А., 2007), ключевым звеном в гибели нейро нов является СРО биомакромолекул и снижение АОС организма. Результаты исследований показали, что на фоне всех исследуемых патологических со стояний отмечались повышение содержания продукта ПОЛ – МДА в сыво ротке крови и гомогенате ГМ, а также снижение ферментов АОС – каталазы в сыворотке крови и гомогенате ГМ и СОД в эритроцитах, а также содержа ния ВГ в крови. У животных контрольных групп содержание МДА в сыво ротке крови повышалось в среднем в 3,5 раза, активность каталазы понижа лась в 2,0 раза по сравнению с данными интактных крыс. Наибольшее по вышение МДА (в 3,6 раза) и снижение активности каталазы (в 3,0 раза) в гомогенате ГМ по отношению к интакту наблюдалось при моделировании БА (табл. 4). Также при данном патологическом состоянии выявлялось вы раженное снижение активности СОД в эритроцитах (на 75 %), тогда как при других патологических состояниях указный показатель уменьшался в сред нем на 55% по сравнению с показателем интактных животных.

Таблица 4 – Влияние «Ноофита» на показатели перекисного окисления ли пидов и антиоксидантную активность организма белых крыс при экспери ментальной болезни Альцгеймера;

M±m;

n= Показатели Группы животных Интактная Контрольная Опытная Опытная (Н2О) (скополамин + (скополамин + (скополамин Н2О) «Ноофит») +пирацетам) МДА в сыворотке 3,8±0,12 12,8±0,71** 7,2±0,52* 7,4±0,85* крови, µМ/л МДА в гомогенате 2,7±0,11 9,8±0,12** 3,0±0,12* 3,9±0,22* ГМ, µМ/г ткани Каталаза в сыворотке 1,9±0,09 1,0±0,05** 1,6±0,10* 1,3±0,12* крови, mкат/л Каталаза в гомогенате 12,0±0,77 3,9±0,40** 6,7±0,65* 6,0±0,59* ГМ, µкат/г ткани СОД в эритроцитах, 2,4±0,12 0,6±0,04** 1,1±0,09* 0,92±0,09* усл.ед Исследование спектра нейропротективной активности и фармакотерапевтической эффективности растительных средств Широкое распространение психических и неврологических расстройств в ветеринарной и клинической практике делает актуальным поиск эффектив ных препаратов для их лечения. Известно, что в развитии данных рас стройств участвуют нейрохимический и нейроэндокринный уровни: нейро медиаторные системы, а также гормоны или пептиды, антиоксидантная сис тема, что объясняет столь широкий спектр фармакологических препаратов, использующихся для их купирования (Курпатов В.И., Осипова С.А., 2006).

Все это определяет значительный интерес к лекарственным средствам расти тельного происхождения, сочетающих в себе высокую эффективность, ши рокий спектр терапевтического действия, за счет реализации в одном расти тельном средстве всех основных направлений этиопатогенетической и сим птоматической терапии на фоне достаточно низкой токсичности (Вознесен ская Т.Г., 2008;

Николаев С.М., 2008, 2012;

Турищев С.Н., 2009;

Дробижев М.Ю., Овчинников А.А., 2010).

Исследование спектра нейропротективной активности фитосредств включало изучение ноотропного, анксиолитического, антидепрессивного антиагрессивного и седативного действия. «Открытое поле» – классическая модель, основанная на конфликте двух мотиваций: инстинктивной тенден ции к исследованию нового окружения и тенденций минимизировать воз можную опасность со стороны, и характеризует сразу два показателя лекар ственного средства – исследовательскую активность и седативное действие (Voronina T.A., 2006). В предварительной серии экспериментов по данной методике было исследовано 10 лекарственных средств: экстракт соплодий хмеля обыкновенного (ЭСХО), экстракт сабельника болотного, настойка цимицифуги даурской (НЦД), а также ряд комплексных фитопрепаратов:

«Анксиофит», «Ноофит», «Нейрофит», «Полиноофит», «Гепатон», «Вентро фит» и «Фитотон». Результаты тестирования показали, что наиболее выра женное влияние на ориентировочно-исследовательскую активность проявля ет комплексное средство «Ноофит». «Анксиофит» оказывает более выра женное противотревожное действие по отношению к моноэкстракту из со плодий хмеля обыкновенного, являющегося составным компонентом перво го. При этом в данном тесте на фоне введения «Анксиофита» отмечалось, что с увеличением дозы снижается анксиолитическая активность и повыша ется седативный эффект.

Анксиолитические свойства фитопрепаратов изучали в тестах ПКЛ, «светлая/темная камера» и конфликтная ситуация по Vogel. Установлено, что ЭСХО в дозах 200 и 300 мг/кг, «Анксиофит» в дозах 50, 100 и 300 мг/кг и «Ноофит» в дозах 5,0 и 10,0 мл/кг проявляют выраженное анксиолитическое действие в условиях ненаказуемого поведения, увеличивая количество пере ходов и время пребывания в светлом отсеке «светлой/темной камеры» и ко личество заходов и время пребывания в открытых рукавах ПКЛ;

в условиях наказуемого поведения, достоверно повышая количество наказуемых взятий воды в методике по Vogel по отношению к показателям интактного контро ля. Наиболее выраженное анксиолитическое действие проявляет «Анксио фит» в дозах 100 и 300 мг/кг, увеличивая количество заходов в открытые рукава ПКЛ в 3,0 и 2,8 раза, время пребывания в них – в 7,1 и 4,7 раза, а так же число наказуемых взятий воды – в 5,3 и 6,4 раза соответственно по срав нению с данными контрольных животных. Выраженное анксиолитическое действие «Анксиофита», вероятно, обусловлено -кислотами и эфирным маслом H. lupulus (Hansel R. et al., 1980;

Schiller H. et al., 2006), эфирами изо валериановой кислоты M. piperita (Павлов М., 1998), кислотами, вогонином S. baicalensis (Hui К.М. et al., 2002;

Jeong J.O. et аl., 2004), проявляющие ан ксиолитические свойства в эксперименте.

Одними из основных терапевтических свойств хмеля являются его седа тивное и снотворное действия. По данным литературы (Schiller Н. et al., 2006) экспериментально подтверждено седативное действие этанольного и СО2-экстрактов соплодий. Седативный эффект выявлен у -кислот и одного из компонентов эфирного масла хмеля – 2-метил-3-бутен-2-ола (Hansel R. et al., 1980;

Wohlfart R. et al., 1983). При этом имеются противоположные лите ратурные данные, свидетельствующие об отсутствии у соплодий хмеля седа тивного действия (Зузук Б.М., 2008). Данные наших исследований показали, что ЭСХО только в дозе 300 мг/кг оказывает потенцирующее влияние на длительность кетаминового сна, удлиняя его время на 21% по сравнению с контролем. При этом комплексное средство «Анксиофит» в дозе 300 мг/кг оказывает более выраженное седативное действие по сравнению как с ЭС ХО, так и с «Ноофитом», сокращая время наступления и удлиняя длитель ность кетаминововго и гексеналового сна в 1,4 и 1,8 раза соответственно по сравнению с контролем. Выраженный седативный эффект «Анксиофита», вероятно, обусловлен синергизмом действия его компонентов;

так, седатив ное влияние характерно для C. officinalis (Ercetin L.T. et al., 2012) и L.

cardiacа (Воробьева О.В., Акарачкова Е.С., 2007).

Наряду с анксиолитическими свойствами исследуемые фитопрепараты обладают антидепрессивной и антиагрессивной активностью, снижая время иммобилизации животных в тестах «поведенческого отчаяния» по Порсолту и порог возникновения агрессивной реакции. В литературе имеются сведе ния, что у фракции хмеля обыкновенного, содержащей -киcлoты, выявлено в эксперименте антидепрессивное действие (Lee К. et al., 1993;

Zanoli Р. et al., 2005;

2007);

аналогичным эффектом обладают: экстракт A. millefolium (Baretta I.P., 2012), галеновые лекарственные формы V. officinalis (Andreatini R., 2002;

Occhiuto F. et al., 2009), экстракты и флавоноид вогонин S.

baicalensis (Hui К.М. et al., 2002;

Jeong J.O. et аl., 2004), являющиеся компо нентами «Ноофита» и «Анксиофита».

Ноотропную активность исследуемых фитоэкстрактов исследовали по выработке и сохранности условных рефлексов с отрицательным (активным и пассивным) и положительным подкреплением. Полученные в работе данные показывают, что использование ЭСХО, «Анксиофита» и «Ноофита» вызыва ет стимуляцию когнитивных функций у крыс, что выражается в ускорении выработки условных рефлексов и сохранности памятного следа в отдален ные после обучения сроки в тестах Т-образный лабиринт, УРПИ и УРАИ.

Наиболее выраженное ноотропное действие, превосходящее эффект препа рата сравнения – пирацетама, проявляет «Ноофит» в дозе 5 мл/кг. При этом влияние «Ноофита» на формирование рефлекса с положительным подкреп лением значимо не отличалось от действия ЭСХО и «Анксиофита», что, вероятно, обусловлено тем, что выработка данного рефлекса основана на активации исследовательской активности, за счет снижения у животных пас сивно-оборонительной реакции, что более выражено у «Анксиофита». Выяв ленное ноотропное действие у комплексных фитоэкстрактов в большей сте пени обусловлено входящим в их состав S. baicalensis, обладающим ноо тропными свойствами (Дамдинова Г.Х., 2001;

Першина О.В. и др., 2005;

Heo Н. et al., 2009;

Jeong J.O., 2004). Комплексное воздействие на состояние нервной системы характерно и для M. piperita (Conforti F., 2008) и V.

officinalis (Valle-Mojica Del L.M. et al., 2011).

Таким образом, исследуемые растительные средства ЭСХО, «Анксио фит» и «Ноофит» обладают спектром нейропротективной активности, про являя анксиолитическое, умеренное седативное, антиагрессивное, антиде прессивное и ноотропное действие. Установлено, что более выраженное ан ксиолитическое действие оказывает «Анксиофит», ноотропное – «Ноофит»;

при этом, с увеличением дозы снижаются ноотропнные свойства и увеличи ваются седативные. По данным литературы, «полимодальность» психотроп ных эффектов, обусловленная сложностью механизмов нарушений психики, происходящих с участием многих нейромедиаторов, и общностью некото рых нейрохимических и нейрофизиологических звеньев этих нарушений (Бурчинский С.Г., 2005), характерна как для классических анксиолитиков и ноотропов (Александровский Ю.А., 2007;

Машковский М.Д., 2010), так и для лекарственных средств на основе растений гинко билоба, родиолы розовой, шлемника байкальского и др. (Арушанян Э.Б., 2008). Так, классический ноо троп – пирацетам в дозе 200 мг/кг проявляет ноотропные свойства, а в дозе 400 мг/кг – анксиолитические (Воронина Т.А., 2000);

подобный эффект при сущ фенотропилу, афобазолу и др. (Васильева А.В., 2006;

Волкова А.В., 2010;

Дьякова И.Н., Гаврилин М.В., 2010;

Самотруева М.А. и др., 2011).

Принимая во внимание, что психические и неврологические нарушения, возникающие на фоне интоксикаций, стрессовых, гипоксических и нейроде генеративных состояний сопровождаются выраженными структурными на рушениями в КБП и гиппокампе, фармакотерапевтическое влияние лекарст венных средств должно быть направлено на купирование данного комплек са: снижение тревожных состояний, ослабление нарушений памяти и обуче ния, а также на предотвращение гибели нервных клеток, что характерно для истинных нейропротекторов в эксперименте и клинике (Полуэктов М.Г., Левин Я.И., 2008).

По мнению некоторых авторов (Lamy V. et al., 2007), восстановление на рушений функций мозга у лиц, склонных к злоупотреблению психоактивны ми веществами, идет двумя основными путями: восстановление изменений мозга, вызванных развитием пристрастия, и нормализация когнитивных и моторных функций, нарушенных вследствие повреждения и гибели мозго вых клеток под влиянием этих веществ. Результаты наших исследований показали, что введение животным ЭСХО в дозе 200 мг/кг и «Анксиофита» в дозе 100 мг/кг на фоне длительной алкогольной интоксикации вызывало у крыс снижение чувства страха и тревоги. Так, в тесте «открытое поле» у жи вотных указанных опытных групп наблюдалось увеличение вертикальной активности в 4,3 и 6,2 раза соответственно по сравнению с контролем;

коли чество посещений центральных квадратов и показатели норкового рефлекса соответствовали таковым у крыс интактной группы, что указывает на прева лирование ориентировочно-исследовательского поведения над хаотичным движением. При исследовании поведения животных в тесте ПКЛ установле но, что введение крысам ЭСХО и «Анксиофита» увеличивает количество заходов и время пребывания их в открытых рукавах лабиринта по отноше нию к контролю. При проверке сохранности памятного следа выявлено, что введение белым крысам на фоне алкогольной интоксикации ЭСХО, «Ан ксиофита» и «Ноофита» обеспечивает сохранность когнитивных функций.

При этом более выраженное влияние на консолидацию и воспроизведение памятного следа оказывает «Ноофит»: ЛП был выше показателя у крыс кон трольной группы через 24 часа и 7 суток после выработки рефлекса в 2,3 и 2,7 раза соответственно.

Патоморфологическими исследованиями показано, что применение ис следуемых фитосредств на фоне алкоголизации вызывало менее выраженные структурные изменения в КБП и гиппокампе. По данным морфометрических исследований введение животным ЭСХО и «Анксиофита» снижало количе ство резко гиперхромных нейронов на 49% и 39%, резко гипохромных на 42% и 37% и «клеток-теней» на 53% и 49% и, а также увеличивало число умеренно гипо- и гиперхромных клеток в среднем в 2,0 и 1,7 раза соответст венно по сравнению с таковыми показателями животных контрольной груп пы (табл. 2). Применение «Ноофита» вызывало снижение количества резко гиперхромных нейронов в III слое на 24 % и резко гипохромных в V слое на 26%, а также выраженное уменьшение количества «клеток-теней» в указан ных слоях КБП по сравнению с контролем (табл. 1). На фоне введения «Но офита» происходило увеличение количества нормохромных, умеренно гипо и гиперхромных клеток, повышение активности СДГ на микропрепаратах всех структур ГМ, что свидетельствует о повышении функциональной ак тивности нейронов. На фоне введения животным ЭСХО и «Анксиофита» количество гиперхромных нейронов в гиппокампе снижалось на 26% и 20%, «Ноофита» – на 44% по сравнению с таковым контрольных животных.

Выраженное стресспротективное и нейропротективное влияние иссле дуемых фитосредств установлено и на фоне стрессовых ситуаций. Курсовое введение животным ЭСХО, «Анксиофита» и НЦД оказывало выраженное снижение относительной массы надпочечников, увеличение относительных масс тимуса и селезенки по сравнению с показателями контрольных живот ных. На фоне эмоционального стресса применение ЭСХО и «Анксиофита» увеличивало количество заходов в открытые рукава ПКЛ в среднем в 3,0 раза и время пребывания в них – в 3,7 и 2,4 раза по сравнению с показа телями животных контрольной группы. Введение животным НЦД повышало указанные показатели по отношению к контролю соответственно в 7,5 и 7, раз, а также увеличивало в 2,1 и 6,6 раза горизонтальную и вертикальную активность в тесте «открытое поле». Оценка когнитивных функций показала, что введение белым крысам на фоне эмоционального стресса ЭСХО и «Ан ксиофита» вызывает сохранность памятного следа. Так, в указанных опыт ных группах на 4 сутки эксперимента рефлекс сохранялся у 60% животных, при 80% – в интактной группе. НЦД не проявляла ноотропное влияние при данном патологическом состоянии.

В другой серии экспериментов установлено выраженное противотревож ное и антиамнестическое влияние ЭСХО на фоне СЖ: 30% животных данной опытной группы посетили однократно открытый рукав ПКЛ, время пребы вания в нем в среднем составило 8 секунд (рис. 3);

количество животных с сохранившимся рефлексом при проверке сохранности УРПИ было в 2,0 раза выше, чем в контрольной группе.

2,5 60 Рисунок 3 Количество заходов Влияние Время пребывания ЭСХО на 1,5 поведение белых крыс в припод 0,5 10 нятом кре стообраз 0 ном лаби Интактная Контрольная ЭСХО ринте при Количество заходов в темный отсек стрессе Количество заходов в светлый отсек Время пребывания в светлом отсеке, сек Жуве.

Результаты патоморфологических исследований ГМ показали, что курсо вое введение животным ЭСХО и «Анксиофита» на фоне ЭС предотвращало развитие выраженных структурных изменений: количество гиперхромных пикнотических нейронов в КБП снижалось на 54% и 41%, нейронов с то тальным лизисом тигроидного вещества – на 28% и 31% и «клеток-теней» – на 57% и 52%;

количество пикнотических нейронов в гиппокампе – на 25% и 43% соответственно по сравнению с таковыми показателями животных контрольной группы. На микропрепаратах ГМ животных, получавших ЭС ХО на фоне СЖ, выявлено, что в среднем более 70 % от всей популяции кле ток составляют функционально активные нейроны, находящиеся в состоянии умеренного гиперхроматоза или слабо выраженного хроматолиза (табл. 5), единично находили изменения, характеризующиеся наличием пикнотиче ских нейронов, «клеток-теней», явлений сателлитоза и нейронофагии. При менение ЭСХО на фоне депривации сна снижало количество гиперхромных нейронов в гиппокампе на 26 % по сравнению с контролем.

Как показали проведенные исследования, ЭС сопровождается активацией симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной сис тем, о чем свидетельствует повышение уровня гормонов стресса: адреналина и норадреналина, АКТГ и кортизола в плазме крови, а также уменьшение концентрации катехоламинов и их метаболитов (метанефрина и нормета нефрина) в гомогенате ГМ животных контрольной группы (табл. 6). Курсо вое введение животным НЦД оказывало выраженное стресспротективное действие, о чем свидетельствует достоверное снижение содержания адрена лина и норадреналина в плазме крови соответственно на 57% и 20% по срав нению с аналогичными данными крыс контрольной группы. Наряду с этим показано, что испытуемый препарат предотвращает гиперактивацию гипота ламо-гипофизарно-адренокортикальной системы, о чем свидетельстовало снижение уровня кортизола в крови животных опытной группы на 55% по сравнению с данными крыс контрольной группы, а также тенденция к сни жению содержания АКТГ в плазме крови.

Таблица 5 – Влияние ЭСХО на количество (%) разных типов нейронов II-V слоев коры больших полушарий головного мозга белых крыс при стрессе Жуве;

M±m;

n = Тип клеток Группы животных Контрольная Опытная (стресс Жуве +Н2О), (стресс Жуве +ЭСХО) Нормохромные 20,0±1,42 17,5±1, Умеренно гиперхромные 16,9±1,06 33,2±3,57* Резко гиперхромные 27,7±2,05 10,2±1,46* Умеренно гипохромные 9,1±0,76 25,3±2,44* Резко гипохромные 12,3±2,50 10,8±0, «Клетки-тени» 14,0±1,61 3,1±0,05* Полученные нами данные об истощении на фоне хронического эмоцио нального стресса запасов катехоламинов в ГМ согласуются с результатами других авторов (Белякова Е.И., Менджерицкий А.М., 2006), которые выяви ли дефицит катехоламинов в гомогенате ГМ при болевом стрессе. По дан ным литературы (Титкова А.М., Эпштейн О.И., 2002;

Лелевич С.В. и др., 2010), нарушение серотонин- и норадренергических систем отмечается так же при естественном старении, гипоксии, алкогольной и других интоксика циях. На фоне курсового введения ЭСХО, «Анксиофита» и «Ноофита» на блюдалось повышение содержания катехоламинов в гомогенате ГМ (табл.

6);

применение НЦД увеличивало уровень метанефрина и норметанефрина в гомогенате ГМ в среднем на 62% по сравнению с данными контрольных животных. Способность ослаблять нарушения нейромедиаторных систем на фоне восстановления когнитивных функций в условиях хронического стрес са выявлено у препаратов на основе гинкго билоба (Арушанян Э.Б., Бейер Э.В., 2008).

Таблица 6 – Влияние растительных средств на содержание катехоламинов в гомогенате головного мозга (нмоль/г ткани) белых крыс при эмоциональном стрессе;

M±m;

n = Группы животных Показатели Адреналин Норадреналин Дофамин Интактная (Н2О) 130,0±12,50 472,9±15,91 227,1±2, Контрольная (стресс + Н2О) 1,3±0,01** 16,2±1,10** 13,2±1,12** Опытная (стресс + ЭСХО) 34,9±2,32* 75,7±4,54* 30,2±1,06* Опытная (стресс + «Анксиофит») 49,1±1,40* 37,9±2,21* 58,7±1,10* Опытная (стресс + «Ноофит») 55,7±2,19* 262,0±20,1* 33,8±0,98* В экспериментах на животных доказана высокая эффективность расти тельных адаптогенов в лечении дегенеративных заболеваний, в частности, БА. Так, препараты родиолы розовой и женьшеня улучшают когнитивные функции, защищают клетки ГМ от токсического действия -амилоидного пептида (Арушанян Э.Б., 2008). Полученные нами данные показывают, что применение «Ноофита» в дозе 5 мл/кг нормализует когнитивные функции, мышечный тонус, координацию движений, а также уменьшает чувство стра ха и тревоги у животных на фоне экспериментальной БА. Патоморфологиче скими исследованиями показано, что на фоне введения животным «Ноофи та» наблюдалась более сглаженная гистологическая картина по сравнению с контролем: в наружном зернистом слое КБП не отмечался тотальный гипер хроматоз нейронов;

в III слое выявлялись нейроны с умеренным хроматоли зом, единичные «клетки-тени» и явления сателлитоза;

в V слое наблюдались нейроны, в основном, с периферическим и центральным хроматолизом на фоне локально расположенных единичных гиперхромных клеток, не обра зующих очаговых скоплений. В результате чего общая гистологическая кар тина у животных опытной группы не выглядела так мозаично, как на микро препаратах животных контрольной группы. Результаты морфометрических исследований КБП показали, что введение белым крысам «Ноофита» вызы вало снижение количества резко гиперхромных, гипохромных нейронов и «клеток-теней» в среднем в 1,5 раза, а также увеличение количества нормо хромных и умеренно гиперхромных клеток в 3,8 и 1,6 раза соответственно по сравнению с контролем. Использование «Ноофита» ограничивало в значи тельной мере развитие дистрофических и некротических изменений в гиппо кампе животных, в результате чего количество регрессивных нейронов сни жалось в 1,5 раза по сравнению с контролем.

Установленная фармакотерапевтическая эффективность «Ноофита» при нейродегенеративных нарушениях, вероятней всего, обеспечивается нейро протективными и нейротропными эффектами экстрактов S. baicalensis (Yune T.Y. et al., 2009, Zhang X.W. et al., 2011) V. officinalis (Valle-Mojica Del L.M. et al., 2011), и M. piperita (Lim J.S. et al., 2010). По данным литературы (Рогов ский В.С. и др., 2012) известно, что рутин и кверцетин предотвращают амне зию, индуцированную введением скополамина. Данные флавоноиды являют ся биологически активными веществами компонентов «Ноофита»: рутин входит в состав M. piperita (Гелла Э.В., 1980), кверцетин – P. aviculare (Chen Х., Cheng D., 2004).

По данным многочисленных исследований установлено, что гипоксия ор ганов и тканей, особенно ГМ, возникает практически при любом патологи ческом процессе (Гипоксия…, 2000;

Лукьянова, Л.Д., 2000;

2011;

Новиков В.Е., Левченкова О.С., 2013). По мнению Т.А. Ворониной (2009), именно наличие противогипоксической активности в значительной степени опреде ляет нейропротекторные свойства отдельных ноотропных препаратов. По лученные нами данные показывают, что ЭСХО, «Анксиофит» и «Ноофит» проявляют антигипоксическое действие при нормобарической гипоксии с гиперкапнией, гемической и гистотоксической гипоксиях, увеличивая сред нюю продолжительность жизни животных. На модели ишемического ин сульта выявлен церебропротекторный эффект «Ноофита»: в опытной группе гибель животных составила 30 %, тогда как в контрольной группе – 70 %.

Высокой антиамнестической активностью нейропротекторы обладают и в условиях амнезии, вызванной гипоксией. Основными проявлениями нару шений интегративной функции после гипоксии служат сужение объема вос приятия, затруднение усвоения новой информации, ухудшение качества за поминания, угнетение мотивации и переключение с одного вида деятельно сти на другой (Воронина Т.А., 2002). При проверке выработки УРПИ через 1 час, установлено (рис. 4), что на фоне введения животным ЭСХО ЛП был выше показателя животных контрольной группы на 27%. В опытных группах животных, получавших «Анксиофит» и «Ноофит», условный рефлекс выра ботался в 100 % случаях, тогда как в контрольной группе – у 50 % животных, в результате чего ЛП был в 2,2 раза выше такового в контроле. При проверке сохранности памятного следа выявлено, что на фоне введения животным ЭСХО и «Анксиофита» ЛП через 24 часа и 7 суток увеличивался в среднем в 1,5 и 1,7 раза соответственно по сравнению с данными животных контроль ной группы. Наиболее выраженное антиамнестическое влияние проявлял «Ноофит», увеличивая ЛП через 24 часа и 7 суток по отношению к контролю в 3,5 и 2,7 раза соответственно.

Данные морфометрических исследований показывают, что введение «Ноофита» предотвращало развитие дистрофических и некротических про цессов в КБП, индуцированных гипоксией, в результате чего, общее количе ство регрессивных нейронов снижалось на 41% по отношению к контролю.

На фоне введения указанного средства возрастало количество умеренно ги по- и гиперхромных нейронов в среднем в 1,9 раза по сравнению с показате лями животных контрольной группы. При анализе клеточного состава гип покампа и мозжечка выявлено, что у животных, получавших «Ноофит», ко личество гиперхромных нейронов в гиппокампе снижалось на 41 %, количе ство регрессивных клеток Пуркинье (в основном за счет резко гиперхром ных) – в 2,0 раза по сравнению с данными животных контрольной группы.

Рисунок 4 – Латентный период, % от контроля Влияние расти тельных средств на выработку и сохранность ус ловного рефлек са пассивного избегания у бе лых крыс на фо не гипоксии.

1 час 24 часа 7 суток Контроль (гипоксия + Н2О) Опыт (гипоксия + ЭСХО) Опыт (гипоксия + "Анксиофит") Опыт (гипоксия + "Ноофит") Результаты наших исследований показали (табл. 7), что 30-минутная ги побарическая гипоксия животных на «высоте» 9000 км приводит к сниже нию содержания АТФ и повышению соотношения лактат/пируват в гомоге нате ГМ животных контрольной группы по сравнению с показателями ин тактных животных. На фоне введения животным исследуемых средств со держание АТФ в гомогенате ГМ было значительно выше показателя кон трольных животных, а соотношение лактат/пируват соответствовало таково му крыс интактной группы. Вероятно, использование указанных фитоэкс трактов в условиях гипоксии вызывает регуляторное репрограммирование дыхательной цепи в сторону компенсаторной активации митохондриального комплекса – сукцинатдегидрогеназного пути окисления субстратов, благода ря чему предупреждаются или ослабляются нарушения синтеза АТФ, что согласуется с предположением Л.Д. Лукьяновой (2011).

Таблица 7 – Влияние растительных средств на показатели энергетического статуса головного мозга белых крыс на фоне гипоксии;

M±m, n= Показатели Группы животных Интактная Контрольная Опытная Опытная Опытная (Н2О) (гипоксия + (гипоксия + (гипоксия + (гипоксия + Н2О) ЭСХО) «Анксио- «Ноофит») фит») АТФ, мкм/г 1,41±0,015 0,46±0,075** 0,76±0,112* 0,94±0,150* 1,25±0,075* ткани ПВК, ммоль/г 0,15±0,042 0,09±0,004** 0,13±0,009 0,12±0,009 0,14±0,0290* ткани МК, ммоль/г 0,31±0,034 0,37±0,026** 0,27±0,069 0,25±0,025* 0,28±0,056* ткани Соотношение 1:2 1:4 1:2 1:2 1: ПК : МК Нейрон-специфическая енолаза (NSЕ) является маркером повреждения ГМ при различных патологических состояниях (Карякина Г.М. и др., 2007;

Nagdyman N. et al., 2003). Данные, представленные в таблице 8, показывают, что на фоне гипобарической гипоксии наблюдалось повышение содержания NSЕ в сыворотке крови белых крыс на 29% по сравнению с данными интакт ных животных, что подтверждается работой Е.И. Мурач и Е.И. Ерлыкиной (2013), в которой отмечается увеличение на фоне гипобарической гипоксии («высота» 12000 м) содержания NSЕ на 65 % по отношению к интакту.

Результаты исследований свидетельствуют, что наиболее выраженное нейропротективное действие проявляет «Ноофит»: содержание NSЕ в сыво ротке крови достоверно снижалось на 18 % по сравнению с контролем. На фоне курсового введения животным ЭСХО наблюдалась лишь тенденция к снижению NSЕ в сыворотке крови.

Таблица 8 – Влияние растительных средств на содержание NSЕ в сыворотке крови белых крыс на фоне гипоксии;

M±m, n= Группы животных NSЕ, мкг/л Интактная (Н2О) 1,22±0, Контрольная (гипоксия + Н2О) 1,58 ±0,032** Опытная (гипоксия + ЭСХО) 1,40±0, Опытная (гипоксия + «Анксиофит») 1,34±0,020* Опытная (гипоксия + «Ноофит») 1,30±0,041* Свободнорадикальные процессы, повреждающие мембрану нейронов, принимают участие в базисных механизмах нарушений синаптической пла стичности, когнитивных функций, тревожных расстройств. Многие ноотро пы и анксиолитики обладают поликомпонентным механизмом действия, включающим и антирадикальные свойства (Дьякова И.Н., Гаврилин М.В., 2010). При этом анксиолитические и ноотропные свойства выявлены и у мексидола – препарата, относящегося к группе антигипоксантов с антиокси дантным действием (Воронина Т.А., 2009;

Ерофеева С.Б., 2009). Многочис ленные исследования показывают, что эффективными антиоксидантами яв ляются флавоноиды (и содержащие их растения), для которых характерно:

радикал-утилизирующая активность в отношении активных форм кислорода (АФК) и вторичных продуктов ПОЛ, реализуемые при непосредственном взаимодействии с биорадикалами;

хеллатирование металлов переменной валентности, участвующих в образовании свободных радикалов, что ограни чивает продукцию АФК;

ингибирование некоторых прооксидантных фер ментов и/или активацию других эндогенных антиоксидантов (Азарова О.В., Галиктионова Л.П., 2012;

Niki E., Nogochi N., 2000;

Soobrattee M.A., 2005;

Apak R. et al., 2007). Отдельным механизмом антиоксидантного действия флавоноидов является стабилизация клеточных мембран, благодаря их спо собности проникать в липидный бислой мембран, изменяя их текучесть (Ni jveldt R.J., 2001). Данные наших исследований показывают, что на фоне нор мализации эмоционального статуса, когнитивных функций, а также струк турных изменений в ГМ при всех исследуемых патологических процессах, применение ЭСХО, НЦД, «Анксиофита» и «Ноофита» вызывало ингибиро вание ПОЛ (снижение содержания МДА в сыворотке крови и гомогенате ГМ) и активацию АОС (увеличение активности каталазы в сыворотке крови и гомогенате ГМ, СОД в эритроцитах и содержания ВГ в крови). Выражен ное антиоксидантное действие исследуемых фитопрепаратов подтверждается исследованиями в модельных системах. Так, в условиях in vitro выявлено, что «Анксиофит» (IC50=41 мкг/мл) и «Ноофит» (IC50 =35 мкг/мл) обладают выраженной антирадикальной активностью в отношении DPPH-радикала. В проявление данного вида активности комплексных фитосредств наибольший вклад вносит входящая в их состав M. piperita (IC50=39 мкг/мл). При изуче нии влияния «Анксиофита» и «Ноофита» на ряд активных форм кислорода (O2•-и NO) и ионы Fe2+ выявлено, что исследуемые средства обладают спо собностью к их инактивации. Fe2+-хелатирующая способность «Анксиофита» (IC50=678 мкг/мл) и связывание NO (IC50=1110 мкг/мл) в большей степени обусловлена присутствием L. cardiacа (IC50Fe=133 мкг/мл;

IC50NO=70 мкг/мл).