Система комплексной фармакотерапии острого по слеродового эндометрита у коров
На правах рукописи
ВОЙТЕНКО ЛЮБОВЬ ГЕННАДЬЕВНА СИСТЕМА КОМПЛЕКСНОЙ ФАРМАКОТЕРАПИИ ОСТРОГО ПО СЛЕРОДОВОГО ЭНДОМЕТРИТА У КОРОВ 06.02.06. – ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных 06.02.03. - ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук
Краснодар – 2012 1
Работа выполнена в ГНУ «Краснодарский научно-исследовательский институт РАСХН» Научные консультанты:
Заслуженный деятель науки РСФСР, доктор ветеринарных наук, профессор, ака демик Никитин Виктор Яковлевич Заслуженный деятель науки РФ доктор ветеринарных наук, профессор член корр.
РАСХН Антипов Валерий Александрович
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный ветеринарный врач РФ Назаров Михаил Васильевич доктор ветеринарных наук, профессор Мануйлов Игорь Михайлович доктор ветеринарных наук, Коба Игорь Сергеевич
Ведущая организация: ФГОУ ВПО Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана апреля 2012 года в 1200 часов на заседании
Защита состоится « 05 » диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет (350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке «ФГОУ ВПО «Кубанский госу дарственный аграрный университет»
Автореферат разослан « » _ 2012 года
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук Родин И.А 1.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы Послеродовой эндометрит наблюдается у 22,5 – 38,4 % отелившихся коров, за нимая ведущее место в структуре послеродовых осложнений. Заболевают преиму щественно животные с высоким уровнем молочной продуктивности. Мероприятия по лечению и профилактики послеродового эндометрита занимают до 80% рабоче го времени ветеринарных врачей ( А.Н. Турченко 2003, Г.М. Андреев, 2004;
В.Я.
Никитин 2003;
Е. В. Ильинский 2004;
А.Г. Нежданов, 2005;
И.А. Порфирьев, 2006) Проблема устранения эндометрита коров является актуальной. Вследствие это го разработке методов и средств терапии и профилактики при данной патологии, ученые и ветеринарные практики уделяют большое внимание, как в нашей стране, так и за рубежом.
Наиболее эффективна при эндометрите комплексная терапия, направленная на подавление микрофлоры, стимуляцию сократительной функции матки и повыше ние резистентности организма и регенеративных процессов в эндометрии. (М.В.
Назаров 1996;
В.А. Титова с соавт. 2006;
В.А. Петров с соавт. 2007).
Цель и задачи исследований.
Целью работы являлось совершенствование методов комплексной фармако терапии острого послеродового эндометрита у коров.
Для достижения намеченной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Изучить распространение послеродового эндометрита у коров в хозяйствах Ро стовской области.
2. Изучить клинику послеродового эндометрита у высокопродуктивных коров в условиях Ростовской области.
3. Определить роль микробного фактора, моциона, уровня кормления и рези стентности организма коров, в возникновении послеродового эндометрита у ко ров.
4. Разработать и изучить комплексный этиотропный химиотерапевтический пре парат цефаметрин при эндометрите коров.
5. Разработать новые лечебно- профилактические средства этио-патогенетического действия при послеродовом эндометрите коров 6. Разработать и определить эффективность комплексной фармакотерапии при по слеродовом эндометрите коров Научная новизна исследований состоит в научно-обоснованной разработке нового подхода к выбору методов и средств фармакотерапии при послеродовом эн дометрите путем подавления условно патогенной микрофлоры и повышения есте ственной резистентности и коррекции симптомов эндометрита у коров.
Определена степень распространения острого послеродового эндометрита, его влияние на послеродовую функцию коров.
Разработан новый комплексный препарат цефаметрин, предназначенный для внутриматочного применения при послеродовом эндометрите коров, изучены его токсикологические свойства, определено влияние цефаметрина на естественную резистентность организма коров, морфологические биохимические показатели крови, микрофлору матки, показатели воспроизводительной функции коров. Дана фармакотоксикологическая и экспериментально-клиническая оценка терапевтиче ской эффективности цефаметрина.
На основе полученных данных разработана комплексная эффективная система мероприятий по профилактике и терапии послеродового эндометрита коров.
На разработанный новый препарат и способ профилактики послеродового эндо метрита, получены патенты (№2218155 и № 2203665), утверждена необходимая нормативно-техническая документация (технические условия, инструкция по изго товлению и контролю препарата, наставление по их применению).
Практическая значимость работы. Проведены научные исследования по изу чению распространения послеродового эндометрита у коров.
Разработана комплексная система по профилактике и лечению при послеродо вом эндометрите коров.
Предложен новый препарат, который обеспечивает высокую эффективность ле чения коров с послеродовым эндометритом, что создает условия для снижения чис ла дней бесплодия коров, экономического ущерба и повышения рентабельности молочного скотоводства.
На основании выполненных нами исследований и научных наблюдений уста новлена целесообразность применения биологических стимуляторов и лазерного излучения для фармакотерапии при послеродовом эндометрите у коров.
Материалы проведенных исследований были использованы при разработке си стемы комплексного лечения и фармакопрофилактики послеродового эндометрита.
Подготовлены и утверждены следующие разработки:
1. Научно-практические рекомендации по диагностике и фармакотерапии по слеродовго эндометрита коров.
2. Научно-практические рекомендации по применению биогенных стимуля торов для профилактики послеродового эндометрита у коров и повышения естественной резистентности у новорожденных телят.
3. Временное наставление по применению препарата цефаметрин для лечения и профилактики эндометрита у коров (в порядке широкого производствен ного опыта) в ростовской области в 2010-2011 гг.
Апробация результатов исследований. Основные положения диссертацион ной работы были доложены на международных научно-практических конферен циях в Донском, Кубанском, Мичуринском государственных аграрных универси тетах, Санкт-Петербургской ветеринарной и Белгородской сельскохозяйственной академиях.
Публикации: по результатам исследований опубликовано 38 работ, в том числе 16 в центральном издании, рекомендованном Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Распространение, этиология, клиника послеродового эндометрита у коров в условиях Ростовской области.
2. Материалы разработки, фармако-токсикологического исследования и экспе риментально-клинической оценки нового препарата цефаметрина для лечения ко ров при послеродовом эндометрите.
3. Данные о влиянии нового препарата на естественную резистентность орга низма коров, морфологические и биохимические показатели крови.
4. Разработка нового способа профилактики послеродового эндометрита у ко ров, применением иммуностимуляторов и веществ, стимулирующих обмен ве ществ.
5. Обоснование применения комплексной системы мероприятий по лечению и фармакопрофилактике при послеродовом эндометрите коров.
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Работа выполнялась в соответствии с государственной тематикой Российской академии сельскохозяйственных наук с 2001 по 2010 год (включительно) в ГНУ Краснодарском научно-исследовательском институте РАСХН, на базе 5 животно водческих хозяйств 3 районов Ростовской области.
Лабораторные исследования выполнялись в лаборатории кафедры акушерства и хирургии, клиническая часть работы осуществлена в производственных условиях молочно-товарных ферм. Объектами исследований являлись коровы в последние месяца беременности, первый - пятый месяц после отела, а также лабораторные животные (белые мыши, белые крысы, кролики).
На основе анализа необходимой зоотехнической и ветеринарной доку ментации, а также материалов акушерско-гинекологической диспансеризации крупного рогатого скота с проведением клинических и соответствующих лабора торных исследований определяли степень распространения неспецифических вос палений репродуктивных органов в стадах коров согласно общепринятой методи ке.
С целью выявления этиологических факторов выясняли обстоятельства воз никновения воспалений органов половой системы у коров, при этом анализирова ли условия кормления, содержания и эксплуатации молочно-продуктивных живот ных, учитывали физиологическое состояние животных, возраст, уровень продук тивности.
Клинико-гинекологическому исследованию по общепринятой методике под вергнуто 4989 отелившихся коров, из них у 314 животных проведены гематологи ческие, биохимические, иммунобиологические исследования. Для микробиологи ческих исследований использовано 199 проб маточных выделений коров больных острым послеродовым эндометритом.
Для исследований кровь от коров брали до кормления. При гематоло гических исследованиях определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в каме ре с сеткой Горяева, выводили лейкоформулу по В.Г. Мухину, содержание гемо глобина (гемоглобинцианидным методом), высчитывали цветовой показатель, СОЭ в аппарате Панченкова, характер лейкограммы (микроскопией окрашенных по Ро мановскому-Гимза мазках крови). Биохимические исследования состояли из опре деления в сыворотке крови общего белка (колориметрически), белковых фракций (нефелометрически), мочевины (цветной реакцией с диацетилмонооксимом и тио семикарбазидом), общего кальция (с орто-кризолфталеином), неорганического фосфора (с ванадат-молибдатным реактивом), глюкозы (ферментативно).
Для определения факторов резистентности использовали тест бактериально го фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям по И.В. Нестеровой с соавт. (1996). Бактерицидную активность сыво ротки крови (БАСК) определяли по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), ли зоцим-ную (ЛАСК) - по Д.Г. Дорофейчук, Т-, В-, МК-лимфоциты методом Пирса в модификации Н.Н. Гугушвили с соавт. (2000) с прочным синим и нафтилацетатом.
Для микробиологических исследований маточные истечения получали по ме тодике Н.Н. Михайлова, М.А. Лучко и З.С. Конновой (1967). С целью определения состава микрофлоры матки осуществляли посев полученного материала на МПА, МПБ, кровяной агар, МПА с 1% глюкозы, среды Эндо, Сабуро, кандида агар сусло агар и др. Идентификацию изолированных микроорганизмов проводили с учетом их морфологических, культуральных свойств по общепринятым методикам. Для определения вида бактерий использовали пластины биохимические дифференциру ющие энтеробактерии и стафилококки научно-производственного объединения «Диагностические системы», г. Нижний Новгород, углеводные среды Гиса. Видо вую принадлежность бактерии устанавливали, руководствуясь «Определителем бактерий» Берги (1980) и рекомендациями Н.Н. Михайлова (1983), В.М. Карташо вой с соавт. (1988), а грибов - «Определителем патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов» (1979) и также «Атласом грибов патогенных для сельскохо зяйственных животных и птиц» (1953). Патогенность микроорганизмов изучали путем внутрибрюшного заражения белых мышей одномиллиардной взвесью смыва суточной агаровой культуры в дозах 0,2-0,5 мл (200-500 млн микробных клеток).
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам проводили на среде АГВ путем наложения стандартных дисков с антибиотиками. Антибактериальные средства лекарственных препаратов изучали луночным методом диффузии в агар (Е.А. Тебякин, С.М. Чайковская, 1959). Оценку чувствительности осуществляли по диаметру зоны задержки роста тест-культур.
Учитывая микробную этиологию послеродового эндометрита, значительно го распространения условно патогенной микрофлоры и во избежание образования лекарственноустойчивых штаммов предусматривали использование для их изго товления доступного сырья, совместимость, синергидность подбираемых компо нентов, обеспечивающую расширение спектра и усиление интенсивности антими кробного и противовоспалительного действия без отрицательного побочного влия ния.
Изучение специфической антимикробной активности препарата проводили в опытах in vitro на чистых культурах микроорганизмов, выделенных из содержимо го матки коров при послеродовом эндометрите методом серийных разведений в жидкой питательной среде и методом диффузии в агар.
Испытания разработанного нами препарата включало его эксперимен тальную и клиническую оценку. Экспериментальная оценка препарата пре дусматривала следующие исследования: а) изучение физико-химических свойств;
б) определение стабильности и срока годности;
в) изучение специфического дей ствия;
г) определение безвредности.
При изучении физико-химических свойств препарата определяли: цвет, запах, консистенцию (органолептически), плотность или удельную массу (ареомет ром), рН, а также подлинность составных компонентов рекомендуемыми химиче скими методами, предусмотренными техническими условиями.
Для определения плотности цефаметрина использовали ареометр. Отсчет плотности производили по уровню жидкости сверху вниз.
Для определения рН применяли рН - метр-милливольтметр 150М, с исполь зованием стеклянного комбинированного электрода ЭСКЛ – 08М Определение стабильности и установление срока годности препаратов прово дили по изменению внешнего вида, физико-химических свойств, антимикробной активности.
Определение срока годности и старение препарата проводили в соответствии с Временной инструкцией по проведению работ с целью определения срока годно сти лекарственных средств на основе метода ускоренного «старения» при повы шенной температуре (№ 42-2-82 Минздрава СССР (1983 г.), а также по показате лям качества препаратов по истечении 1, 3, 6 месяцев хранения.
Изучение специфического действия антимикробного препарата включало:
установление антибактериальных свойств методами диффузии в агар с образовани ем лунок и последовательных серийных разведений в МПБ с использованием в ка честве тест-микробов, выделенных из матки больных эндометритом коров микроб ных культур;
определение противовоспалительного действия путем накожных ап пликаций испытуемых препаратов на область экспериментально вызванного тер мическим и химическим факторами воспаления кожи и подкожной клетчатки у кроликов (по Ж.И. Абрамову, 1954), учитывая при этом степень развития и время исчезновения воспалительной реакции).
Фармакокинетику антимикробного препарата определяли путем выявления остаточного количества его основных активно действующих веществ в молоке, ме тодом основанном на восстановлении метиленового голубого в молоке с микроор ганизмами вида Streptococcus thermopiles с 1по 10 день после внутриматочного введения препарата (Соловьев А.И., Афанасьев А.И., Федоров Н.М, Лысенко С.Н., Поляков Г.Д., 2003).
Безвредность препарата изучали путем установления их «острой» и «хрони ческой» токсичности, раздражающего и аллергогизирующего действия.
Оценку местного раздражающего действия цефаметрина осуществляли на кроликах массой 2,2-3,2 кг методом многократных накожных аппликаций. Для проведения опыта сформировали 2 группы кроликов. В первой группе кроликов использовали аппликации цефаметрина по 0,1 мл на один и тот же участок кожи размером 4*6 см ежедневно в течение 4 дней.
На седьмой день провели капельные пробы: в опытной группе – цефаметрином, в контрольной – лошадиной сывороткой. Учет реакции проводили через 24 часа, на 8, 9, 10 сутки. О раздражающем действии судили по развитию выраженного дерма тита в местах капельных проб.
Общее токсическое действие препарата оценивали, определяя острую и хро ническую токсичности в соответствии с « Методическими указаниями по опреде лению токсичных свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животно водстве» (1991), утвержденными ГУВ СССР и « Методическими рекомендациями по токсико- экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветери нарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).
Острую токсичность цефаметрина определяли на белых крысах массой 100 120 г по методу Deichmann, и Le Blanc (И.В. Саноцкий, 1970). Опыт проводили на восьми крысах. Каждую дозу подбирали так, чтобы последующая отличалась от предыдущей в 1,5 раза. Цефаметрин вводили внутрижелудочно через зонд, после чего за животными вели ежедневные наблюдения в течение 10 дней, отмечая время наступления гибели. За LD50 принимали промежуточную дозу препарата между наименьшей летальной и наибольшей переносимой.
Параметры хронической токсичности определяли на белых крысах- самцах массой 140-200 г. разбитых на две группы: опытную и контрольную, подобранных по методу пар-аналогов, используя тест «субхронической токсичности» R.K. Lim с соавт. (И.В. Саноцкий, 1970). Препарат задавали ежедневно в течение 20 дней, вну трижелудочно в различных дозах по схеме. В контрольной группе животным вводили стерильный физраствор, в опытной – цефаметрин, установив первоначальную дозу (0,1 от LD50), увеличивая ее через каждые 4 дня в 1,5 раза. Весь опыт разбили на периодов. Для вычисления коэффициента кумуляции использовали расчетную формулу Ю.С. Кагана и В.В. Станкевича (И.В. Саноцкий,1970), учитывая макси мально переносимую дозу при однократном введении (острое действие) и много кратном - (подострое действие). За животными велось ежедневное наблюдение, учитывались аппетит и общее состояние. Перед каждым повышением дозы препа рата, проводились морфологические, а также биохимические исследования крови, ко торые включали: определение мочевины уреазным методом по Conway (1935), обще го белка рефрактометрическим методом Рейсса.
Хроническую токсичность препаратов изучали при их длительном примене нии в лечебных и повышенных дозах лабораторным животным и больным эндо метритом коровам. В частности, безвредность проверяли на коровах спустя 6- дней после отела больных острым послеродовым эндометритом;
препарат вводили внутриматочно в лечебной дозе и дозах, превышающих последнюю в 3,5 и 10 раз.
В рекогносцировочном опыте на больных острым эндометритом коровах устанавливали оптимальные лечебные дозы разработанного препарата. Клиниче скую оценку терапевтической эффективности предложенного препарата в сочета нии с другими лечебными приемами осуществляли в сравнительном аспекте в се рии научно-хозяйственных опытов с разделением коров по принципу пар-аналогов в опытные и контрольные группы при одинаковых условиях их кормления, содер жания, эксплуатации и осеменения. При этом в контрольных группах в качестве базового лечения использовали традиционные, ранее предложенные лекарственные средства этиотропной, патогенетической и заместительной терапии.
В опытах, в сравнении с общеизвестными антимикробными препаратами определяли терапевтическую эффективность цефаметрина, вводимых внутрима точно на фоне идентичных в опытных и контрольных группах коров других лечеб ных приемов (согласно имеющимся наставлениям), при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров, как наиболее распространенной форме неспецифического воспаления эндометрия. В дополнение к этому изучали возмож ность использования этого препарата после патологических отелов с целью профи лактики острого послеродового эндометрита. В связи с тем, что весьма часто острый послеродовый эндометрит развивается у коров после отделения задержав шегося последа или на фоне субинволюции половой сферы, или снижения есте ственной резистентности, а также с учетом осложнения воспаления эндометрита дисфункцией (гипофункцией) яичников возникла необходимость в серии специаль ных научно-производственных опытов определить эффективность препарата цефа метрина в сочетании с биологическими стимуляторами и лазерного излучения при указанных патологических процессах для предупреждения симптоматического бесплодия у крупного рогатого скота. Основным критерием оценки профилактиче ской и терапевтической эффективности испытуемых препаратов явилось восста новление в возможно короткие сроки у подопытных животных их воспроизводи тельной способности. При этом принимали во внимание продолжительность курса лечения, сроки исчезновения выраженных признаков заболевания или возможного предотвращения их проявления, сроки возобновления половых циклов и полно ценность, оплодотворяемость после первого и последующих осеменений, индекс осеменения, число дней бесплодия.
Цифровой материал подвергали биометрической обработке в соответствии с рекомендациями И.А. Ойвина (1960) и Н.А. Плохинского (1970) с использованием ЭВМ «Реntium-4».
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Распространение эндометрита коров В хозяйствах Ростовской области в последние 5 лет уровень бесплодия у коров достигает 30-40%. По причине бесплодия коров в Ростовской области ежегодно недополучают 50-60 тыс. телят и 70-75 тыс. тонн молока. Бесплодие обусловлено многими причинами, прежде всего акушерскими и гинекологическими болезнями.
Возникновение симптоматического бесплодия на 60% и более обусловлено болез нями матки воспалительного характера.
В результате акушерской диспансеризации, проведенной с 2006 по 2010 год в 5 хозяйствах Ростовской области, было обследовано 4989 отелившихся и в то мчисле 2468 больных эндометритом, коров. С помощью клинико - акушерского исследования установлено распространение послеродового эндометрита у коров.
Послеродовым эндометритом в среднем заболевает 49,19 % коров. (табл. 1).
При этом в 2007 году (второй год наблюдения) заболеваемость составила 62,18 %, что на 13 % больше средней величины. Однако заболеваемость коров послеродо выми эндометритами неравномерна.
Таблица 1 – Распространение послеродового эндометрита коров в хозяйствах Ростовской области Годы Исследовано ко- Выявлено больных эндометритом коров % ров после отела 2006 1160 520 44, 2007 1100 684 62, 2008 992 452 45, 2009 887 435 49, 2010 850 377 44, Так, с 2006 по 2007 года наблюдалось повышение заболеваемости. С года процент заболеваемости коров снизился, к 2009 снова повысился и к году он уже снизился и составлял 44,35%.
Нами установлено, что заболевание коров послеродовым эндометритом имеет определенный сезонный характер, больше всего коров заболевает в зимнее весенний период. Так в I квартале заболело 51,1% от общего количества отелив шихся коров в этот период, во втором квартале – 44,2%, в III – 30,6 и IV квартале – 43,3%.
При определении соотношения форм эндометрита, выявили, что удельный вес катарального эндометрита составляет 10,9%, катарально-гнойного - 70,0, фи бринозного - 12,1%, некротического 7,1%.
Наименьший процент заболеваемости эндометритом отмечен у животных с нормальным течением родов - 11,9%. В группе животных, которым оказывалось родовспоможение, заболеваемость послеродовым эндометритом составила 31%. У коров с задержанием последа, была более высокая степень заболеваемости до 52%.
3.2. Изучение клинических признаков острого послеродового эндометрита у высокопродуктивных коров Клинически послеродовой эндометрит проявляется угнетением, повышени ем температуры тела до 39,7-40,0° С., учащением пульса до 89 уд/мин и до 30- дых/мин, выделением лохий серого или грязно-бурого цвета, жидких, неоднород ных с обрывками плодных оболочек и карункулов, гиперемией слизистой оболочки влагалища и влагалищной части шейки матки, изменением их цвета до ярко-крас ного, точечными кровоизлиями или разлитыми кровоподтеками. Канал шейки мат ки открыт на 3-4 см. через него выделяется воспалительный экссудат, серого или красно-коричневого цвета, неоднородный, с примесью слизи и гноя. Шейка матки находилась на переднем крае лонного сращения, 7-8см в диаметре, мягкой эластич ной консистенции, безболезненная. Рога матки увеличены, опущены в брюшную полость, не контурированы, флюктуируют, отечные, не сокращается при массаже, стенки рогов матки дряблые.
В результате проведенных исследований, у сухостойных коров которые по сле отела заболели гнойно-катаральным эндометритом количество гемоглобина было на 19,6г/л меньше чем у животных без патологии. Количество эозинофи лов было увеличено на 71,4%. В нейтрофильной части крови у глубокостельных коров, которые заболели эндометритом отмечалось увеличение количества моло дых форм, в частности палочкоядерных нейтрофилов на 37,5%. У коров после оте ла без акушерской патологии количество гемоглобина было на 20,5г/л выше, чем у больных, число лейкоцитов у больных животных увеличение на 34,6%. Число лимфоцитов ниже на 38,7% по сравнению с коровами без послеродового эндомет рита, увеличение количества палочкоядерных на 41,4% и на 35,0% сегменто ядерных нейтрофилов.
3.2. Изучение роли микробного фактора в возникновении послеродового эндометрита у коров и чувствительности микрофлоры, выделенной из содержимого шейки матки к антибиотикам При послеродовом гнойно-катаральном эндометрите в 1 мл маточного со держимого обнаружили 3157 ± 3,67 микроорганизмов, что больше, чем у животных без клинических признаков, в 1,5 раза.
В результате бактериологического исследования выделяли большое количе ство отличавшихся по морфологическим и культуральным свойствам колоний ми кроорганизмов, 43 из них были изолированы в чистые культуры и изучены с помо щью основных биохимических тестов с целью определения их рода. Микрофлора у больных и здоровых животных почти не отличалась и была представлена родами:
Escherichia, Staphilococcus, Streptococcus, Proteus, Enterobacter, Pseudomonas, Bacil lus, Candida.
В биоматериалах от всех животных культуры выделяли в ассоциации. Ми крофлору в ассоциации с преобладанием Г (-) палочек выделяли чаще при послеро довом эндометрите, чем при нормальном течении послеродового периода.
Большинство выделенных культур были непатогенными (37 из 43).
Полное отсутствие чувствительности установлено к пенициллину и эритро мицину у 47,5 % культур, полимиксину и стрептомицину – у 22,5 %, тетрациклину – у 27,5 %, цефатоксиму – у 0,5 %. Низкочувствительными к пенициллину были 30,0 % культур, к полимиксину – 20,0 %, к тетрациклину и эритромицину – 27,5 %, стрептомицину – 22 %, Среднюю чувствительность к пенициллину проявили 7,5 % испытанных культур, полимиксину – 14,5 %, эритромицину – 5,0 %, стрептомици ну – 12,5 %, тетрациклину – 27,5 %, цефатоксиму – 10,0 %. Высокочувствитель ными к пенициллину оказались 7,5 % культур, к полимиксину - 9 %, и эритроми цину – 13,5 %, стрептомицину – 12,5 %, тетрациклину – 17,5% и цефатоксиму – 85,5 %.
3.4. Роль резистентности организма высокопродуктивных коров в этиоло гии эндометрита Решающим фактором, который способствует усилению патогенных свойств микроорганизмов является снижение естественной резистентности организма ко ров в послеродовой период. В связи с этим нами проведено исследование по изу чению морфологического и биохимического состава крови высокопродуктивных коров, не заболевших и больных послеродовым эндометритом.
Для проведения эксперимента подбирали 20 коров голштинской породы. В первую группу включили 10 коров с нормально протекающим послеродовым пери одом (здоровых) во вторую 10 животных, больных послеродовым эндометритом.
У клинически здоровых коров первой группы уровень гемоглобина, эритроци тов, лейкоцитов, общий белок, альбуминов, фагоцитарная активность, фагоцитар ное число и фагоцитарный индекс лейкоцитов и остальные показатели были близ ки к физиологической норме. У коров второй группы коров, заболевших послеро довым эндометритом, был повышен уровень лейкоцитов на 3,3х1012 \л, лимфоцитов на 19,7%, понижено количество сегментоядерных нейтрофилов на 13,1%, понижен общий белок на 15,1г\л, понижены фагоцитарная активность на 15,1%, фагоцитар ное число на 0,9%,бактерицидная и лизоцимная активность снижены на 1,6 и 2,3%, снижено количество Т и Б лимфоцитов на 9,3 и 7,5%.
У коров наблюдается выраженная нейтрофилия с резким регенеративным сдвигом, характеризующаяся появлением в периферической крови юных, увеличе нием процента палочкоядерных нейтрофилов, с лейкоцитозом, а также лимфоцито пенией, гипоэозинофилией, сопровождающиеся снижением альбуминов, - глобу линов, увеличением а- и - глобулиновых фракций, что указывает на наличие острого воспалительного процесса в организме животных.
Низкий процент фагоцитарной активности, незавершенность фагоцитарного акта, снижение уровня лимфоцитов позволяют судить о нарушении неспецифиче ского звена иммунной системы. Развитию острого послеродового эндометрита способствует ослабление иммунной системы организма.
3.5. Изучение влияния кормления на обмен веществ и проявление послеродо вого эндометрита у высокопродуктивных коров Животные круглогодично обеспечено кормами, в основном силосом, сеном, концентратами. Фермы находится на силосно-концентратном типе кормления.
Рационы в целом сбалансированы по основным питательным веществам и состоит из сена, силоса, комбикорма, жмыха подсолнечного, шрота рапсового, шрота сое вого, кукурузы и патоки. В 1кг сена содержалось 4,16 мг каротина, в 1кг силоса – 16,64мг. Коровы получают ежедневно по 5,6-6,8 кормовых единиц, 590г перевари мого протеина, около 192 мг каротина, 76,6 г кальция и 16 г фосфора. В рационе 70 г переваримого протеина, 12г фосфора, 30 мг каротина и избыток кальция 20г.
Потребление сухого вещества на 1-м месяце лактации составило 18-19кг в сутки, на 2-3 месяце лактации – 21-2 кг в сутки. В тоже время доля концентратов по сухо му веществу в рационе составляет удоя 30 л – 62,2%, для удоя 35 л – 66%.
В результате проведения ранней клинико акушерской диспансеризации, включающей клинический и биохимический анализ крови коров, мы не выявили закономерных колебаний количества эритроцитов и лейкоцитов в зависимости от сезона года и от уровня кормления коров. Резервная щелочность резко колебалась, причем самый низкий показатель резервной щелочности был, весной в марте, что способствовало развитию ацидоза. Обнаружена диспротеинемия, повышение со держания альбуминов, глобулинов и снижение глобулинов. У обследованных коров наблюдается гипокаратинемия (30%), гиперфосфоремия (50%), ацидоз (99%). У большинства высокопродуктивных животных наблюдается нарушение минерального и углеводного обмена веществ.
Рацион не обеспечил потребностей организма животных. Очевидно, что по вышенное содержание концентратов в рационе приводит к повышению среднего удоя по хозяйству. Отмечается большой недостаток сена, не занимаются произ водством кормовой свеклы. Качество кормов низкое, особенно сена, сенажа и сило са. Снижение молочной продуктивности коров, заболевание их гинекологическими болезнями вследствие нарушения обмена веществ обусловлено кормлением нека чественными кормами и несбалансированностью рационов по питательным веще ствам и низким в них сахаропротеиновым отношением.
Контроль за полноценности кормления животных является неотъемлемым условием в интенсивной системе ведения животноводства. Несбалансированность рационов, низкий и чрезмерно высокий уровни кормления, низкое качество кормов - основные причины нарушения обмена веществ у животных.
3.6. Роль моциона в этиологии послеродового периода у коров При изучении роли моциона в профилактике послеродового эндометрита у вы сокопродуктивных коров выявили, что у 40% животных опытной группы, со держащихся с активным моционом послеродовой период протекал без осложне ний (табл. 2).
Таблица 2 - Влияние моциона на течение послеродового периода у коров Группа Число С нормальным С патологией послеродового отелив- течением по- периода Эндометрит Субинволюция шихся слеродового матки коров периода коров % коров % коров % Контрольная 150 32 21,3 75 50,0 43 28, Опытная 140 56 40 54 38,5 28 20, В контрольной группе таких животных было меньше 1,5 раза и составило 21,3%%. Послеродовой эндометрит регистрировали у коров контрольной группы в 50,0% случаев, а у животных опытной группы, которые выходили на прогулки– 38,5%, при этом в опытной группе заболевших субинволюцией было тоже меньше на 8,6 % по сравнению с группой, где животные не имели выгула в базу.
Морфологические, биохимические и иммунологические исследования крови показали, что в контрольной группе коров (без моциона) наблюдается нейтрофи лия с увеличением сегментоядерных и палочкоядерных нейтрофилов на 15,1 и 4,1% и лимфоцитопения на 18,4%, снижение альбуминов на 6,5% и увеличение гамма глобулинов на 7,1% относительно первой группы коров (с моционом). Также у животных контрольной группы отмечался низкий процент фагоцитарной актив ности, наблюдалась незавершенность фагоцитарного процесса и снижение уровня Т и В лимфоцитов. Все это свидетельствует о нарушении целостности неспецифи ческого звена иммунной системы.
3.7. Разработка комплексного этиотропного химиотерапевтического препа рата цефаметрина для фармакотерапии эндометрита коров 3.7.1. Технология получения цефаметрина Разработка и приготовление новых эффективных препаратов, обладаю щих сильным противомикробным и противовоспалительным действием весьма ак туальна. На кафедре акушерства и хирургии разработан новый комплексный этио тропный химиотерапевтический препарат цефаметрин.
Полученный препарат - цефаметрин представляет собой раствор зеленого цвета, со специфическим приятным запахом алоэ, непрозрачный, полужидкой кон систенции. Стойкий при хранении в обычных условиях в защищенном от света ме сте. Не горюч, не пожароопасен. Плотность препарата составляет 1,23 г/мл, рН – 7,9 – 8,1. Активнодействующим компонентом является цефотаксим – антибиотик цефалоспоринового ряда 3 поколения.
Соотношение активных компонентов в новом препарате – цефаметрине опре деляли с учетом наставления для их применения в трех составах.
Состав 1. Этакридина лактат – 0,6 г, сок алоэ – 50,4г, цефотаксим – 2,0г, мочевина – 15,0 г, формалин нейтральный – 10,0 г, вода дистиллированная – 5,0г, глицерин – 17,0г.Состав 2. Этакридина лактат – 1,0г, сок алоэ – 51г, цефотаксим – 1,0г, мо чевина – 15,0г, формалин нейтральный – 10,0г, вода дистиллированная – 5,0 г, гли церин – 17,0г.Состав 3. этакридина лактат – 1,0г, сок алоэ – 51,5г, цефотаксим – 0,5г, мочевина – 15,0г, формалин нейтральный – 10,0г, вода дистиллированная – 5,0г, глицерин – 17,0г.
Для определения оптимального соотношения компонентов в новом препара те подбирали коров в возрасте 4 – 7 лет черно-пестрой породы, с признаками по слеродового гнойно-катарального эндометрита. Из них сформировали 3 группы, в каждой, по принципу пар аналогов. В первой группе коровам вводили новый пре парат цефаметрин внутриматочно в составе 1, во второй – в составе 2, в третьей в составе 3, в дозе 50-80 мл (в зависимости от объема матки), через 48 часов до вы здоровления. В результате улучшение состояния отмечалось у животных первой и второй группы на третьи сутки, у коров третьей группы улучшение наступало на 4 5 сутки. У опытных животных наблюдалось уменьшение воспалительного отека, количества катарально-гнойного экссудата, объёма матки, флюктуации. Выздоров ление наступало у коров 1 группы в среднем на 8,2 сутки после начала лечения. У коров 2 группы на 9,1 сутки, в третьей на 12,4 сутки. Интервал от отела до первого осеменения был короче в первой группе, чем во второй в 1,11 раз, и в 1,25 - чем в третьей. Период времени от отела до плодотворного осеменения (сервис-период), в первой группе был в пределах нормы и составил в среднем 57 суток, когда как во второй и третьей группе был несколько длиннее, в 1,07 и 1,17 раз соответственно.
Дни бесплодия наблюдали во второй и третьей группе. Индекс осеменения в пер вой группе составил 1,4, а во второй и третьей группе этот показатель был больше в 1,14 и 1,5 соответственно. Таким образом, применение цефаметрина в составе для лечения коров с послеродовым эндометритом способствовало их быстрому вы здоровлению и оказывало положительное влияние на воспроизводительные показа тели.
Изучение физико-химических свойств проводили в соответствие с СТО 26582716 – 0001 – 05 в течение 6 мес.
При определении дозы и безвредности выявили, что оптимальной разовой дозой цефаметрина для внутриматочного введения коровам с послеродовым эндо метритом является доза – 80 мл. При введении цефаметрина в дозах 50, 80, мл наступает выздоровление животных, не отмечается отклонений в изменении температуры тела за пределы нормы и частоты пульса и дыхания. Цефаметрин не обладает вредным действием при внутриматочном введении.
При изучении стабильности препарата флаконы с цефаметрином выдержива ли 41 сутки в холодильном шкафу при температуре +5 +10 градусов С. Затем под вергали «ускоренному старению» 15 суток в термостате при температуре 38 граду сов С. Срок годности вычисляли по формуле: С = К * Сэ + Со, где С – срок годно сти препарата в сутках;
К – коэффициент зависимости от температуры хранения;
Сэ – предельный срок экспериментального хранения препарата сохранившего свои качества, в сутках;
Со – время от изготовления испытуемого средства до начала опыта в сутках. С = 10 * 15 + 41 = 191 или 6,4 месяца Изучение стабильности в процессе хранения – при комнатной температуре, в защищенном от света месте проводили в течение 6 месяцев. Определение парамет ров цефаметрина: внешнего вида, запаха, консистенции, концентрации водородных ионов и безвредность проводили каждый месяц срока хранения препарата. Цефа метрин на протяжении всего периода исследований сохранял исходный цвет и внешний вид – зеленый раствор, со специфическим приятным запахом алоэ, рН це фаметрина в пределах 7,9 – 8,1.
3.7.2. Определение токсичности препарата цефаметрин Препарат в дозах 2100, 3200, 4700 мг/кг вызывает у крыс непродолжительное сильное беспокойство, переходящее затем в угнетение и диарею, возникающую через три часа после введения препарата. Вышеуказанные дозы вызвали гибель животных.
Исходя из факта гибели подопытного животного, не перенесшего дозу мг/кг живой массы, и оставшегося в живых животного перенесшего дозу 1400 мг/кг живой массы, по условию методики была выбрана промежуточная доза между наи меньшей летальной и наибольшей переносимой для получения более точного ре зультата. С этой целью, доза 1750 мг/кг живой массы была введена крысам с соблю дением всех условий опыта по предварительному нахождению средней смертельной дозы. По результатам опыта ни одно животное не погибло. Доза 2100 мг/ кг живой массы была принята за среднюю смертельную дозу при однократном введении (LD50).
Доза 4700 мг/кг массы тела принята абсолютно смертельной LD(100). Следовательно, препарат цефаметрин по классификации химических веществ, при однократном оральном пути введения относится к III классу токсичности - умеренно токсические вещества.
Хроническая токсичность препарата определялась нахождением его способно сти к кумуляции, проводились морфологические и биохимические исследования крови перед каждым повышением дозы препарата. Гибель животных регистрировали на 15, 18,, 20 сутки от начала опыта. В IV период погибло 3 животных ( 10%) на 15-е сутки.
В V период погибло 5 животных, что составило 16,6% от общего числа крыс, вклю ченных в опыт: две крысы погибли на 18-е сутки, три крысы на 20-е сутки.
LD50 при многократном скармливании препарата составила за I - V периоды опыта - 11072 мг/кг массы тела животного (840+1260+1888+2832+4252).
Коэффициент кумуляции (Кк) при многократном применении препарата цефа метрин рассчитали по формуле Ю.С. Кагана и В.В. Станкевича (1964):
Кк = LD50 хроническая/ LD50 острая, Кк= 11072 : 2100 = 5,27.
Коэффициент кумуляции равный 5,27 позволяет отнести препарат к четвертой группе - слабо выраженная степень кумуляции [по Л. И. Медведю, 1964].
Изменения в лейкоцитарной формуле указывают на происходящие перемены в организме животных опытных групп. Количество лимфоцитов возрастало с увеличе нием суммарной дозы препарата с 63,6 до 76,7 %..На фоне лимфоцитоза происходило снижение количества сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов. Ток сические изменения показателей крови крыс у опытных групп, начинались на 13- сутки от начала опыта при суммарных дозах препарата 2800-4300 мг/кг массы тела животных. Содержание мочевины в крови крыс, получавших цефаметрин стало выше на 20% относительно контроля к 14 дню опыта, что указывает на возрастание функциональной нагрузки на почки.
При оценке раздражающего действия цефаметрина методом многократных накожных аппликаций на кожу кроликов, видимых реакций кожи, не наблюдали.
3.7.3. Фармакологические свойства цефаметрина Изучение фармакологического действия цефаметрина включало опреде ление антимикробных свойств методом серийных разбавлений в жидкой пита тельной среде и методом диффузии в агар. Цефаметрин показал выраженное бактерицидное и бактериостатическое действием по отношению ко всем испы туемым культурам микроорганизмов.
В разведении 1:32 по отношению к культуре Str.epidermis и E. Coli, в разведении 1:16 по отношению к культуре St. Aureus и Pr. vulgaris. Все испытанные культу ры микроорганизмов проявили к цефаметрину достаточную (з.з.р. 20,6 –24, мм) чувствительность.
Сроки выделения цефаметрина с молоком у опытных коров, контролирова ли по определению остаточных количеств ингибирующих веществ, методом осно ванном на восстановлении метиленового голубого в молоке с микроорганизмами вида Streptococcus thermopiles с 1по 3 день после внутриматочного введения пре парата. Во всех пробах обнаруживали обесцвечивание метиленового голубого, что свидетельствовало об отсутствии антибиотика в молоке.
Для определения фармальдегида в молоке в пробирку наливали 2 мл смеси серной и азотной кислот: (серная кислота, плотностью 1,82г/мл 100 мл + 1 капля концентрированной азотной, плотностью 1,3 г/мл) и осторожно наслаивали 5 мл молока (Булдакова М.А.,2004). На границе жидкостей во всех пробах образовы валось желтое кольцо, что говорило об отсутствие формальдегида в молоке, при наличии формальдегида образовывалось бы фиолетовое кольцо Определение наличия соматических клеток в молоке определяли косвенным методом с применением препарата «Мастоприм», ГОСТ 23453-90, с использовани ем препарата «Мастоприм», в результате смешивания которого с молоком меняет ся его консистенция. Во всех пробах образовывался слабый сгусток, который слег ка тянулся за палочкой в виде нити, что говорило о низком содержании соматиче ских клеток в 1мл (до 500тыс).
При определении терапевтической эффективности нового препарата цефа метрина по сравнению с метрикуром и внутриматочными палочками с фуразолидо ном на желатиновой основе, выявили, что все этиотропные препараты, использо ванные для лечения коров, больных послеродовым гнойно-катаральным эндомет ритом были эффективными. Однако в первой группе (n-18), где применяли цефа метрин выздоровело 94% коров, во второй (n-18) - 88 (метрикур) и третьей (n-18) 72% (фуразолидоновые палочки) коров. В первой и второй группах был самый ко роткий терапевтический курс. Он был в среднем короче по сравнению с третьей группой на 5,2 суток (Р 0,001).Лучшие показатели воспроизводительной функции получены также в первой опытной группе. Так осеменений приходящихся на одну стельность в первой группе потребовалось в 1,05 и 1,23 раза меньше, чем во вто рой и третьей группах соответственно. Число дней бесплодия в первой группе было достоверно меньше, чем во второй и третьей группе.
Число эритроцитов после лечения повысилось в первой, второй и третьей группах в 1,09, 1,08, 1,03 раз соответственно, количество лейкоцитов после лече ния – уменьшилось, в том числе: палочкоядерных на 4,2 %, сегментоядерных на 8,1 %, снизилось количество лимфоцитов на 9,1 %. Юные - обнаруживали в крови больных животных до лечения в количестве 0,1 – 0,4%, а после лечения в крови ко ров их не было. Количество базофилов, эозинофилов, и моноцитов было в пределах физиологической нормы до лечения и не изменилось после него. Число лимфоци тов в крови коров до лечения находилось на высоком уровне, но не превышало фи зиологической нормы. После курса терапии содержание лимфоцитов в крови подо пытных животных было несколько ниже, чем до лечения такая динамика характер на для фазы выздоровления.
Уровень белка у коров всех групп до лечения был почти одинаковым и нахо дился на нижнем уровне. После лечения этот показатель увеличился в первой груп пе на 4,13 %, во второй на 0,52, в третьей на 1,59%. Уровень кальция в сыворотке крови коров всех трех групп был в пределах 10,5 – 10,7%. После лечения этот пока затель у коров первой группы увеличился на 4,13%, у коров второй и третьей групп отмечалось снижения кальция в сыворотке крови на 1,3% и на 2,4% соответствен но. Уровень неорганического фосфора – после лечения увеличился в среднем на 3,73% у животных всех трех групп. Содержание альфа-глобулинов в сыворотке крови коров после лечения цефаметрином увеличилось на 17,4% в сравнении с уровнем -глобулинов до начало опытов, что характеризует мобилизацию иммун ной системы к и благоприятный исход течения болезни. При этом - глобулиновая фракция у коров этой группы была почти на одном уровне до после лечения, что свидетельствует об отсутствие патологии в области почек. До начала опыта разни ца в уровне глобулинов в сыворотке коров первой группы в сравнении с данными этой же группы после лечения составила 16,4%.
Изучение сравнительной терапевтической эффективности цефаметрина и ри хометрина, проведенное в опытах на базе двух хозяйств показало, что оба препа рата при лечении коров, больных послеродовым гнойно-катаральным эндометри том были эффективны. Однако в опытных группах (цефаметрин) выздоровели 95 100% коров, а контрольной группе процент выздоровления животных был несколько ниже - 80 – 85%. В опытных группах терапевтический курс, был в сред нем короче по сравнению с контрольными группами на 2 – 4.8 суток. Динамика патологического процесса в группах также отличалась. В опытных группах первые признаки улучшения наступили на 3 – 4 сутки лечения, а в контрольной несколько позднее – на 4 - 6 сутки. Все животные, включённые в опытные группы, были ре зультативно осеменены, индекс осеменения составил в среднем 1,85. В контрольных группах индекс осеменения был в среднем 2,2. Период от отёла до плодотворного осеменения был также различным в опытных и контрольных груп пах. У коров опытной группы меньше по сравнению с контролем на 7,5 суток.
3.7.4. Профилактическое действие цефаметрина при послеродовом эндометри те коров Для изучения профилактического действия цефаметрина сформировали пять групп (n- 26), состоящих из коров-аналогов в первый день после отёла. Животным четырех опытных групп для профилактики послеродового эндометрита в первый день после отёла вводили внутриматочно готовые лекарственные препараты: в пер вой опытной группе - метромакс по 2 палочки, коровам второй опытной группы 2 таблетки гинобиотика, животным третьей опытной группы - эмульсию йодвис мутсульфамида в дозе 100 мл, коровам четвёртой опытной группы – цефаметрин в дозе 80 мл. За коровами пятой группы вели наблюдения без применения препара тов. В результате эксперимента в четвертой опытной группе коровы эндометри том не заболели. Несколько худшие результаты получены при применении метро макса, гинобиотика и эмульсии йодвисмутсульфамида при которых заболевае мость послеродовым эндометритом была ниже, чем в контрольной группе. Продол жительность периода от отёла до плодотворного осеменения у коров опытных групп была примерно одинаковой и в 1,4 – 1,5 раза короче по сравнению с контро лем. Наименьшее число осеменений на одну стельность потребовалось в группе ко ров, которым применили метод комплексной профилактики послеродового эндо метрита (1,3). Этот показатель был ниже по сравнению с контролем в 1,9 раза, со второй опытной группой – в 1,4, третьей и пятой – в 1,2 раза.
3.8. Разработка иммуностимулирующих средств для фармакопрофилактики послеродового эндометрита коров Мы разработали способы профилактики послеродового эндометрита у коров применением иммуностимуляторов и веществ стимулирующих обмен веществ.
В структуре родеста содержится группа SO2 Cl в открытой или блокирован ной Na-форме. Родест рекомендуются как активнодействующее вещество, которое при парентеральном введении существенно повышает резистентность и имунноре активность животных и человека. Родест в определенных дозах вызывает направ ленный иммунный ответ. Максимальная реакция на введение родеста установлена авторами на 20 сутки, по их сведениям уровень плато максимум сохраняется до 35 40 суток. Для удобства применения родест предлагают использовать в виде масля ной суспензии на растворе тривита. Тривит используется как стерильная масляная среда, обеспечивающая пролонгированное действие родеста. Для приготовления одной дозы родеста 15-30млг растворяли в 5 мл масляного раствора тривита. При готовленную суспензию родеста инъецировали внутримышечно в область средней трети шеи глубокостельным коровам за 14-16 дней до отела, предварительно под готовив место инъекции по общепринятым правилам асептики.
Выбор времени инъекции определили по резкому снижению резистентности и реактивности организма коров в последние две недели и 1-3 недели после отела, а родест как раз вызывает максимальную реакцию на 20 сутки, сохраняя уровень плато максимум до 35-40 суток. Для выбора и обоснования дозы родеста подбира ли 30 стельных коров за 14-16 дней до отела. Из них сформировали 3 группы по принципу пар аналогов (n -10 ). Животным первой группы инъецировали родест в дозе 15-20 млг расворенного в 5 мл тривита, во второй группе - 25-30 млг, в тре тьей 35-40млг. У всех коров, включенных в опыт брали пробы крови на первые и 15 сутки после отела для иммунологического исследования.
Профилактическая эффективность родеста составляет 60-90%. Лучший эф фект получен при введении родеста в дозе 25-30 млг, при максимальном повыше нии бактерицидной (БАКС) и лизоцимной (ЛАСК) активности сыворотки крови, к 15 дню исследования. Небольшие дозы 15-20 мг лишь незначительно повысили БАСК и ЛАСК, а введение родеста в дозе 35-40 мг вызвало угнетение этих показа телей.
В следующем эксперименте, для проведения сравнительных испытаний подо брали 30 стельных коров, за 14-16 дней до отела. Из них сформировали 3 группы по принципу пар аналогов (n -10 ): две опытные и одну контрольную. Животным 1 ой опытной группы инъецировали родест в дозе 25-30 млг, растворив его в 5 мл тривита, однократно внутримышечно. Животным 2-ой опытной группы вводили мл тривита, однократно внутримышечно. В третьей группе (контрольной) препара тов не вводили. Применение родеста в дозе 25-30 мг, растворенного в 5 мл масля ного раствора тривита, позволяет профилактировать послеродовой эндометрит в 90% случаев. При заболеваемости в контрольной группе 40%, а во второй опытной – 20%. Этот способ даёт возможность существенно снизить заболеваемость коров послеродовым эндометритом, что обеспечит повышение и улучшение показателей воспроизводства стада крупного рогатого скота.
В дальнейшей работе, для профилактики послеродового эндометрита, испы тали гамавит. Гамавит содержит комплекс биологически активных веществ, благо даря которым оптимизирует обменные процессы в организме (в частности бел ковый, витаминный и минеральный).. Он содержит в качестве действующих ве ществ: нуклинат натрия – 0,002%, кислотный гидролизат плаценты денатурирован ной эмульгированной (ПДЭ) – 0,08% и среду 199 (сбалансированный раствор со лей, аминокислот и витаминов) 10% и воду для инъекций до 100%.
Гамавит инъецировали коровам опытной группы (n -15 ) внутримышечно в первый и пятый день после отела, в дозе 0,1мл на 10кг живой массы. В контроль ной группе(n -15 ) профилактику послеродового эндометрита не проводили.
В результате у коров опытной группы послеродовой период протекал без осложнений, в контрольной группе 6 коров (40,0 %) заболело послеродовым гнойно-катаральным эндометритом. Показатель БАСК у коров контрольной группы средний на десятый день после отёла несколько снизился по сравнению с первым днём, а у коров опытной группы заметно повысился и был достоверно выше (р 0,01) по сравнению с контролем. Показатель ЛАСК у контрольных ко ров на десятый день после отёла повысился по сравнению с первым днём в 1, раза, но был достоверно ниже по сравнению с таковым у коров опытной группы (р 0,01). Относительное количество лимфоцитов, фагоцитарная активность нейтро фильных лейкоцитов, фагоцитарный индекс у коров контрольной группы в первый и десятый дни после отёла были примерно на одном уровне. У коров опытной группы они возросли на десятый день по сравнению с первым соответственно в 1,14;
1,22 и 1,21 раза и были достоверно выше по сравнению с контрольной груп пой. Фагоцитарное число у контрольных животных на десятый день после отёла выросло по сравнению с первым днём в 1,14, но было достоверно ниже по сравне нию с таковым у опытных животных.
Для изучения профилактической эффективности дюфалайта – используемо го в ветеринарии для профилактики и лечения гиповитаминозов, нарушении белко вого обмена, повышения резистентности организма, препарат вводили путем вну тримышечных инъекций за 30 дней до отела. В 1мл дюфалайта содержится: вита мины - витамин В1 - 0,10мг, витамин В2 - 0,04мг, витамин В6 - 0,10 мг, ви тамин В12 - 0,05 мг, никотиномид - 1,50 мг, d-пантенол - 0,05 мг;
аминокис лоты и питательные вещества, декстроза - 45,56мг, L-Аргинин - 0,025мг, L – Цистеин - 0,01мг. глутамат натрия - 0,04мг, L –Гистидн - 0,01мг. L – Изолейцин - 0,01мг, L – Лейцин - 0,04мг, L – Лизин - 0,03 мг, L Метионин – 0,01 мг, Д L Фенилаланил – 0,03мг, L – Треонин - 0,02мг, Д L – Триптофан - 0,01 мг, Д L – Валин - 0,05 мг,;
электролит: кальция хлорид - 0,23 мг, магния сульфат - 0,29мг, калия хлорид - 0,20мг;
вспомогательные вещества: метил-парабен - 1,80мг, пропил парабел - 0,20мг, фенол - 0,10 мг, ЭДТА - 0,15мг, ацетат натрия - 2,50мг, лимонная кисло та (как регулятор рН), вода для инъекций до 1,0мл.
В контрольной группе профилактику послеродового эндометрита не прово дили. В результате эксперимента в опытной группе (n-17) острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом заболели (11,8 %). В контроле (n -20 ), забо лело 40,0 % и было больше по сравнению с опытной в 3,4 раза. У всех коров клиничский воспалительный процесс в матке протекал аналогично. У коров, по лучавших дюфалайт, период от отёла до плодотворного осеменения составил в среднем 45,6 ± 1,2 дня с колебаниями от 40 до 62 дней. У коров контрольной груп пы этот период был 95 ± 3,4 дня с колебаниями от 48 до 125 дней, оказавшись та ким образом длиннее в 2,1 раза. Индекс осеменения в опытной группе был в 1, раза меньше по сравнению с контрольной В результате следующего эксперимента по изучению эффективности гамави та, родеста и дюфалайта с профилактической целью при послеродовом эндомет рите, в сравнительном аспекте, в период стельности, во второй группе (n -10 ) (га мавит) эндометритом коровы не заболели, в третьей группе (n -10 ) (дюфалайт) за болело две коровы (20%) в первой (родест) – одна корова (10%), а в контрольной (n -10 ) (без применения средств профилактики) - четыре (40%).
В контрольной группе БАСК на 14 день после отёла снизился по сравнению с первым днём, а у коров опытных - повысился и был выше (р 0,01) по сравне нию с контролем. Показатель ЛАСК у контрольных коров повысился по сравне нию с первым днём, и был ниже по сравнению с опытной группой (р 0,01). Фа гоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов, фагоцитарный индекс у коров опытных групп возросли на 14 день по сравнению с первым были достоверно выше по сравнению с контролем. Фагоцитарное число у контрольных животных было достоверно ниже по сравнению с таковым у опытных животных.
3.9. Разработка способа фармакопрофилактики послеродового эндометрита коров применением утеротонических средств Важным условием быстрого своевременного возвращение матки после родов в исходное до беременности состояние является восстановление её тонуса. Изуче ние фармакопрофилактического действия средств повышающих тонус матки при послеродовом эндометрите коров провели на 38 коровах после отела, которых разбили на 2 группы, опытную и контрольную (n – 17). В опытной группе профи лактику послеродового эндометрита проводили путем однократной внутримышеч ной инъекции утеротона через 6 часов после отела. В контрольной группе профи лактику послеродового эндометрита не проводили. В результате в опытной группе острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом заболела одна корова (5,5 %). В контроле заболело коров в 9 раз больше. Заболевшим острым после родовым гнойно-катаральным эндометритом коровам контрольной группы потре бовалось по 4 введения цефаметрина на седьмой, девятый, десятый, одиннадцатый дни послеродового периода, после чего наступило выздоровление. У коров опыт ной группы, период от отёла до плодотворного осеменения составил в среднем 51, ± 0,2 дня с при 100,0 % - ной оплодотворяемости. У коров контрольной группы этот период был 105,3 ± 3,4 дня, оказавшись таким образом длиннее в 2,1 раза при 94,0 % - ной оплодотворяемости. Две коровы контроле не имевшие клинических признаков эндометрита, не оплодотворились в течение 120 дней. Индекс осемене ния в опытной группе был в 1,4 раза меньше по сравнению с контрольной.
Миотропным действием обладает лазерное излучение при местном воздей ствии. Благодаря миотоническому действию, лазерное излучение стимулирует сократительную деятельность матки. В следующем эксперименте коровам опыт ной группы (n – 23) применяли лазер «Зорька» трансректально в 5 режиме на 1, 2, и 3 дни после отела. Лазерное облучение осуществляли с помощью лазерного терапевтического комплекса (ЛТК) «Зорька». В результате в опытной группе острым эндометритом коровы не заболели. Послеродовой период у них протекал без осложнений, лохиальный период закончился на 12-13 сутки. В контрольной группе заболело 8 коров, что составило 34,0%.
3.12. Экспериментальное обоснование и клиническая оценка эффективности комплексного лечения и профилактики при послеродовом эндометрите коров Для изучения эффективности комплексного лечения коров при послеродовом эндометрите, с применением биогенных стимуляторов, этиотропных, симптомати ческих, патогенетических препаратов организовали серию опытов в хозяйствах Ро стовской области. Для очередного эксперимента коров подбирали на пятый – седь мой дни после отёла с признаками эндометрита. Их разбили их на 3 группы (n-12).
В контрольной группе животным водили цефаметрин внутриматочно в дозе мл через 48 часов до выздоровления, окситоцин в дозе 50 ЕД внутримышечно и проводили новокаиновую блокаду по Фатееву в 1, 2 и 5 дни лечения. В первой группе лечение животных дополняли инъекцией гамавита в дозе 0,1 мл на 10 кг массы животного внутримышечно в первые пять дней подряд, во второй группе введением дюфалайта в дозе 10мл внутримышечно однократно в первый день ле чения. В результате комплексного лечения выздоровели все коровы. Терапевтиче ский курс составил в 1-й опытной группе в 6,0, во 2-й был на 1,5 дня, а в 3-й - на 3,3 дня длиннее,. Число дней бесплодия во второй опытной и контрольной было больше чем в первой опытной на 6 и 29 соответственно. Индекс осеменения в пер вой группе колебался в пределах 1,4, а во второй опытной и контрольной был выше на 0,2 и 1,2 соответственно. В результате гематологического исследования выявили, что до начала лечения во всех трех группах отмечалось снижение количе ства эритроцитов и гемоглобина в среднем до 5,31012/л и 94г/л соответственно.
Количество лейкоцитов во всех группах было увеличено и в среднем составило 13,6109/л. На 10 сутки после выздоровления отмечалось увеличение количества гемоглобина в первой опытной группе до 114,2г/л, что на 11,5 и на 14,8г/л (Р0,99) чем во второй опытной и контрольной группах соответственно. При изучении лей кограммы, установлено, что количество лейкоцитов нейтрофильной группы в опытных и контрольной группах уменьшилось, лимфоцитов увеличилось.
Концентрация общего белка в сыворотке крови у коров больных гнойно-ката ральным эндометритом до проведенного лечения во всех исследуемых группах в среднем составила 72,8 г/л. После проведенного лечения концентрация общего белка в сыворотке крови имела тенденцию к увеличению в опытных группах по сравнению с контрольной на 11,7 и на 11,2 г/л соответственно. Концентрация альбуминов, альфа- и бета- глобулинов после проведенного лечения увеличилась незначительно и на протяжении всего эксперимента была в пределах первоначаль ных показателей. Однако выявлены изменения содержания гамма-глобулиновой фракции у коров в 1-й и 2-й опытных групп при использовании в схемах лечения биологически активных веществ гамавита и дюфалайта. Концентрация гамма-гло булинов после проведенного лечения по сравнению с коровами контрольной груп пы до лечения в 1-й и 2-й опытных группах увеличилась на 7,5 и 6,8г/л соответ ственно. Существенные изменения отмечены при определении гуморальных фак торов естественной защиты организма у коров после проведенного лечения: так бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови в 1-й и во 2-й опытных группах по сравнению с контрольной увеличилась на 7,0 % и 6,9 % и на 4,7 % и 5,6% соответственно. У коров всех групп заболевших гнойно-катаральным эндо метритом фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов, фагоцитарный ин декс до лечения были примерно на одном уровне. После проведенного лечения у коров 1-й и 2-й опытных групп фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоци тов увеличилась на 11,6 (Р0,99) и 9,5 % (Р0,95) по сравнению с показателями контрольной группы до лечения. Этот показатель у коров контрольной группы по сле лечения также увеличился на 1,2%.
Производственные опыты по испытанию комплексного лечения в хозяй ствах Ростовской области в отношении острого послеродового эндометрита у ко ров подтвердили его высокую эффективность.
4. Схема комплекса мероприятий по предупреждению и терапии острого по слеродового эндометрита у коров Анализируя и обобщая результаты исследования причин послеродового эндо метрита у коров, результатов клинической оценки разработанного комплексного химиотерапевтического препарата, профилактических средств и комплексных схем лечения, считаем возможным предложить, наряду с общепринятыми ветеринарны ми, зооинженерными и общехозяйственными мероприятиями следующие методы профилактики и терапии послеродового эндометрита в стадах молочного и мясомо лочного скота.
1. Правильная организация моциона коров в период сухостоя, в первый и по следующие месяцы после отела, использование летних лагерей.
2. Полноценное сбалансированное кормление по питательным веществам: бел кам, жирам, углеводам, витаминам, макро-микроэлементам.
3. Проведение искусственного осеменения коров после завершения периода инволюции половой системы и телок, достигших физиологической зрелости с соблюдением ветеринарно-санитарных правил.
4. Круглогодовое, рациональное использование родильных отделений на фер мах крупного рогатого скота, обустроенных и разделенных на секции: доро довую, родовую и послеродовую. Осуществление мероприятий по профилак тике послеродового эндометрита с использованием разработанных нами средств: иммуностимуляторов: родеста, гамавита;
веществ, повышающих уровень обмена веществ - дюфалайта, миотропных – утеротона, лазерного излучения 5. Регулярное проведение ранней клинико-акушерской диспансеризации с це лью выявления и своевременного, комплексного лечения коров при послеро довом эндометрите с использованием препарата цефаметрина.
6. Создание, максимально приближенных к привычным, условий кормления и содержания импортного скота с целью адаптации к условиям Северного Кав каза (Ростовской области).
5. Выводы 1. В хозяйствах Ростовской области, послеродовой эндометрит имеет широ кое распространение, он регистрируется в среднем у 49,9% от числа отелившихся коров и протекает по типу гнойно-катарального воспаления у 70 % коров, ката рального у 10,9 %, некротического у 7,1 %, фибринозного у 12 % коров.
2. Острый послеродовой эндометрит имеет определенный сезонный харак тер. Наибольшее количество коров, до 57 %, в хозяйствах заболевает в зимне-ве сенний период и значительно меньше, до 44 %, в летнее-осенний период. Частота проявления послеродового эндометрита зависит от течения родов, наименьший процент заболеваемости эндометритом наблюдается у коров с нормальным течени ем родов -11,9%, при родовспоможении заболеваемость послеродовым эндометри том выше и составляет 31,2%, наиболее высокая степень заболеваемости эндо метритом до 52%, у коров с задержанием последа.
3. Основным этиологическим фактором острого послеродового эндометрита у коров является развитие в матке условно-патогенной микрофлоры. В 1 мл ма точного содержимого коров, больных послеродовым эндометритом общее число микроорганизмов превышает таковые у животных без выраженных клинических признаков в 1,5 раза. Видовой состав микрофлоры представлен штаммами родов Staphilococcus, Streptococcus, Escherichia, Proteus, Enterobacter, Bacillus, Pseu domonas, из них высокочувствительными к пенициллину было 7,5 % культур, к по лимиксину - 9%, эритромицину – 13,5 %, стрептомицину – 12,5 %, тетрациклину – 17,5%, цефатоксиму – 85,5 %.
4. Основным способствующим фактом возникновения эндометрита у коров является снижение резистентности организма после родов, которое характеризует ся увеличением уровня лейкоцитов на 3,3х1012 \л, лимфоцитов на 19,7%, пониже нием количества сегментоядерных нейтрофилов на 13,1%, понижением общего белка на 15,1г\л, фагоцитарной активности на 15,1%, фагоцитарного числа на 0,9%, бактерицидной и лизоцимной активности на 1,6 и 2,3%, снижением количе ства Т и Б лимфоцитов на 9,3 и 7,5%.
5.Несбалансированность рационов, низкий и чрезмерно высокий уровни кормления, низкое качество кормов являются основными причинами нарушения обмена веществ у высокопродуктивных коров, и ведет к нарушению функциональ ной деятельности органов репродуктивной системы. Создание животным на мо лочных комплексах и фермах промышленного типа условий содержания требует систематического активного моциона после отела, который позволяет на 21,5% сократить заболеваемость коров эндометритом и на 8,6% - субинволюцией матки, способствует повышению естественной резистентности организма животных при одних и тех же условиях кормления и доения. У коров, не имевших постоянного моциона наблюдается нейтрофилия с увеличением сегментоядерных и палочко ядерных нейтрофилов на 15,1 и 4,1% и лимфоцитопения на 18,4%, причем наблю дается снижение альбуминов на 6,5% и увеличение гамма глобулинов на 7,1% от носительно коров, пользующихся моционом, низкий процент фагоцитарной актив ности, незавершенность фагоцитарного процесса и снижение уровня Т и В лимфо цитов.
6. Клинические признаки послеродового катарального эндометрита: частичное разжижение лохий и приобретение ними сероватого цвета обнаруживаются на 5- сутки после отела. На 7-8 день наблюдается выделение большого количества ло хий, жидких и неоднородных серого цвета со слизистыми прожилками, с перехо дом в катарально-гнойную или гнойно-катаральную форму воспаления, из матки выделятся лохии, красноватые со слизью, с хлопьями или прожилками гноя, сли зистая оболочка отечная, ярко-красного цвета, с полосчатыми или точечными кровоизлияниями. На нижней стенке влагалища слизисто-гнойный экссудат, чаще в виде белых рыхлых пленок. Шейка матки увеличена до 6-8 см в диаметре, отеч ная, гиперемированая, из канала шейки матки вытекал экссудат, матка увеличена, опущена в брюшную полость, стенка матки дряблая, отечная, тестоватая, матка не отвечает сокращением на массаж. При некротическом - выделение серого или бу рого экссудата из матки с ихорозным запахом и примесью хлопьев или крошек не кротизированных тканей. Слизистая оболочка влагалища сухая, с красными поло сами, шейка матки увеличена, с кровоподтеками, матка увеличена, болезненна, на ходится в брюшной полости, ее стенки уплотнены или тестоваты. На массаж матка не реагирует. При фибринозном эндометрите наблюдали слизисто-гнойные обиль ные истечения из матки серо-желтого или желто-бурого цвета с хлопьями и кру пинками фибрина, атонию и увеличение матки, утолщение ее стенок, часто болез ненность. Температура тела превышает верхнюю границу нормы на 1-2°С, пульса учащен на 15-20 уд/мин., увеличено количество дыхательных движений на 5-10. На нижней части поверхности слизистой оболочки влагалища отмечали наличие бе лых рыхлых пленок.
7. Цефаметрин представляет собой раствор со специфическим приятным запа хом алоэ, непрозрачный, полужидкой консистенции, с Рн в пределах 7,9 – 8,1, удельным весом 1,23, не вызывает раздражающего и вредного действия на орга низм животных, обладает выраженным бактерицидным и бактериостатическим действием по отношению к микроорганизмам. Период хранения цефаметрина 6 ме сяцев. Характеризуется комплексным лечебным действием, При внутриматочном введении цефаметрина для лечения коров с послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, в дозе 80 мл с интервалом 48 часов способствует их быстрому вы здоровлению в течение 8,2±0,4 суток и оказывает положительное влияние на их воспроизводительные показатели. Он отнесен к малотоксичным препаратам, класса токсичности, его активнодействующие компоненты после введения в моло ке не обнаруживаются.
8. Применение профилактических средств и комплексных схем лечения при послеродовом эндометрите с применением этиотропных, миотропных и общести мулирующих средств позволило предупредить заболеваемость коров эндометри том, получить терапевтический эффект до 96%, уменьшить число дней бесплодия, увеличить процент оплодотворяемости, повысить сохранность и жизнеспособность телят.
9. Проведение ветеринарных профилактических и лечебных мероприятий при послеродовом эндометрите экономически выгодно. Применение нового препа рата цефаметрина с лечебной целью в условиях широкой производственной апро бации получено 18,05 руб. прибыли на один рубль затраченных средств, использо вание комплексной терапии с применением этиотропных, миотропных, патогене тических и общестимулирующих средств позволило поучить на один рубль за трат 21,02 рублей экономического эффекта. Проведение профилактики при после родовом эндометрите показало экономический эффект, который составил 75782, руб., или на 1 рубль затрат 16,84 руб.
6. Практические предложения 1. Для лечения коров при послеродовом эндометрите и повышения резистентности их организма рекомендуем внутриматочное введение цефаметрина в дозе 80 мл с ин тервалом 48 часов до выздоровления.
2. С лечебной целью при остром послеродовом эндометрите у коров рекомендуем комплексное лечение:
по схеме 1: цефаметрин в дозе 80 мл внутриматочно с интервалом 48 часов до выздоровления и лазер «Зорька» трансректально в пятом режиме утром и вечером до выздоровления;
по схеме 2: дюфалайт в дозе, окситоцин в дозе 50 ЕД, цефаметрин в дозе 80 мл внутриматочно с интервалом 48 часов до выздоровления, блокада по Фатееву в 1, 3, 5 дни лечения.
3. С профилактической целью при остром послеродовом эндометрите рекомендуем применение биологических стимуляторов: родест в дозе 30 млг растворенного в 5мл тривита или гамавит в дозе 10мл или дюфалайт в дозе 10 мл стельным коро вам за 30 дней до отела или споробактерин в суточной дозе 200 млрд. микробных клеток с концентрированным кормом с первого по десятый день после отела.
4. Для предупреждения послеродового эндометрита, наряду с общеизвестными орга низационными и ветеринарно-зооинженерными мероприятиями, максимальное внимание уделять организации моциона коров в период сухостоя, в первый и по следующие месяцы после отела, полноценного сбалансированного кормления по питательным веществам: белкам, жирам, углеводам, витаминам, макро-микроэле ментам, проведения искусственного осеменения коров после завершения периода инволюции половой системы и телок, достигших физиологической зрелости с соблюдением ветеринарно-санитарных правил, рационального использования ро дильных отделений на фермах крупного рогатого скота, обустроенных и разделен ных на секции: дородовую, родовую и послеродовую, регулярному проведению ранней клинико-акушерской диспансеризации с целью выявления и своевременно го, комплексного лечения коров при послеродовом эндометрите с использованием разработанного нами и других лечебных препаратов, средств физиотерапии.
5. Научные выводы и практические предложения, вытекающие из материалов диссер тационной работы использовать в учебном процессе по курсам ветеринарного аку шерства, гинекологии и биотехники размножения и фармакологии.
Список опубликованных работ по теме диссертации 1. Войтенко Л.Г. Новый препарат для лечения животных при послеродовом эндометрите / Л.Г.
Войтенко, Е.И. Нижельская, Т.Н. Щебетовская // Серия ветеринарные науки. Труды Куб ГАУ, №1, (ч.1.) 2009, С. 267-269.
2. Войтенко Л.Г. Влияние биологических стимуляторов на показатели естественной резистентно сти организма коров и частоту заболеваний их послеродовым эндометритом / Л.Г. Войтенко, Е.
С. Полозюк // Серия ветеринарные науки. Труды Куб ГАУ, №1, (ч.2.) 2009, С. 149- 3. Войтенко Л.Г. Совершенствование терапии при послеродовом эндометрите коров / Ж. Ветери нарный врач, 2010, №4, С. 43-46.
4. Войтенко Л.Г. Влияние микробного фактора на возникновение послеродового эндометрита у коров / Л.Г. Войтенко, Е. И. Нижельская, И.П. Хабузов // Серия ветеринарные науки. Труды Куб ГАУ, №, (ч..) 2010, С. 126-130.
5. Войтенко Л.Г. Эффективность цефаметрина при послеродовом гнойно-катаральном эндомет рите коров / Л.Г. Войтенко, В.Я. Никитин, Е.И. Нижельская // Ж. Ветеринария, 2011, №3, С. 38 6. Войтенко Л.Г Сравнительная терапевтическая эффективность цефаметрина, метрикура и фу разолидоновых палочек при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите коров / Л.Г. Войтен ко, В.Я. Никитин // Ж. Ветеринарный врач, №1, 2011. С. 20-22.
7. Войтенко Л.Г. Влияние некоторых показателей крови на возникновение послеродового эндо метрита коров / Л.Г. Войтенко, // ж. Вестник Мичуринского ГАУ, 2011. С. 13- 8.Войтенко Л.Г Клинические и лабораторные испытания нового внутриматочного препарата це фаметрина / Л.Г. Войтенко, В.Я. Никитин // Ж. Вестник Мичуринского ГАУ, 2011. С. 26- 9. Войтенко Л.Г Эффективность применения комплексных схем лечения при послеродовом эн дометрите коров / Л.Г. Войтенко, В.Я. Никитин, Е.С. Полозюк // Ж. Зоотехния, 2011, №5, С.21 22.
10. Войтенко Л.Г Эффективность комплексного лечения коров при послеродовом эндометрите с применением лазерного излучения и цефаметрина / Л.Г. Войтенко // Ж. Ветеринарная патология, 2011, №, С.21-22.
11. Войтенко Л.Г. Средство для лечения животных при послеродовом эндометрите / Л.Г. Войтен ко, Б.П. Гриценко, Е.И. Нижельская, О.М. Карноухова, Н.В. Степаненко, Е.Б. Вербина // Патент на изобретение № 2203665, г. Москва, 2009.
12. Войтенко Л.Г. Способ профилактики послеродового эндометрита коров / Л.Г. Войтенко, Б.П.
Гриценко, О.Н. Полозюк // Патент на изобретение №№ 2218155, г. Москва, 2004.
13. Войтенко Л.Г. Производственная апробация комплексных схем лечения с использованием биогенных стимуляторов при послеродовом эндометрите коров / Л.Г. Войтенко // Ж. Ветерина рия Кубани, 2011, № С. 19- 14. Войтенко Л.Г. Биогенные стимуляторы в лечении эндометрита /Л.Г. Войтенко, В.Я. Никитин, Е.С. Полозюк // Ж. Животноводство России, 2011, № С. 15.Войтенко Л.Г. Профилактика послеродового эндометрита у коров применением ежедневного моциона / Л.Г. Войтенко, В.Я. Никитин // ж. Вестник Мичуринского ГАУ, 2011, №, С. 14- 16. Войтенко Л.Г Лечение коров с применением биогенных стимуляторов / Л.Г. Войтенко, В.Я.
Никитин // Ж. Вестник Мичуринского ГАУ, 2011. С. 19- 17. Войтенко Л.Г Влияние биологических стимуляторов на эффективность комплексного лече ния при послеродовом эндометрите коров / Л.Г. Войтенко, В.Я. Никитин, Е.С. Полозюк // Труды Куб ГАУ, №, (ч..) 2011, С.
18. Войтенко Л.Г. Лазеротерапия при послеродовом эндометрите коров/ Л.Г. Войтенко Н.Л.
Хижнякова, А.А. Болдарев// Инновационный путь развития АПК-магистральное направление научных исследований для сельского хозяйства. Материалы международной научно-практиче ской конференции. Пос. Персиановский, 2007. С. 37-39.
18. Войтенко Л.Г. Влияние лазеротерапии на гематологические показатели организма коров при послеродовом эндометрите/ Л.Г. Войтенко, Е.И. Нижельская// Инновационный путь развития АПК - магистральное направление научных исследований для сельского хозяйства. Материалы международной научно-практической конференции. Пос. Персиановский, 2007. С. 39-40.
19. Войтенко Л.Г. Влияние лазеротерапии на биохимические показатели сыворотки крови коров при послеродовом эндометрите/ Л.Г. Войтенко, Е.Б. Вербина// Инновационный путь развития АПК - магистральное направление научных исследований для сельского хозяйства. Материалы международной научно-практической конференции. Пос. Персиановский, 2007. С. 40-42.
20. Войтенко Л.Г Сравнительная оценка различных методов терапии коров при послеродовом эндометрите с использованием лазера зорька /Л.Г. Войтенко Е.И., Нижельская, Н.В.
Степаненко//Через инновации в науке и образовании к экономическому росту АПК. Труды Дон ГАУ пос. Персиановский, 2008. С. 70- 21. Войтенко Л.Г. Влияние комплексной терапии на гематологические показатели коров при по слеродовом эндометрите/Л.Г. Войтенко Е.И. Нижельская, А.С. Пасичниченко, О.Н Тимченко/ Через инновации в науке и образовании к экономическому росту АПК. Труды Дон ГАУ пос.
Персиановский, 2008. С. 73- 22. Войтенко Л.Г. Применение ЛТК «Зорька» при послеродовом эндометрите у коров//Л.Г. Вой тенко Е.И. Нижельская, Ю.С. Войтенко/Пути научного обеспеспечения национального проекта по животноводству. Материалы научно-практической дистанционной конференции. Труды Дон ГАУ пос. Персиановский, 2008. С. 73- 23. Войтенко Л.Г. Изучение влияния лазеротерапии на биохимические процессы организма коров при послеродовом эндометрите/Л.Г. Войтенко, Е.И. Нижельская, Е.В. Воронянская// Развитие инновационного потенциала агропромышленного производства, науки и аграрного образования.
Материалы международной научно-практической конференции. Пос. Персиановский, 2009. С.
75-77.
24. Войтенко Л.Г. Профилактика послеродового эндометрита применением лазерного излучения/ Л.Г. Войтенко, Е.И. Нижельская// Труды Дон ГАУ пос. Персиановский, 2009. С. 75-77.
25. Войтенко Л.Г. Новый препарат для лечения животных при послеродовом эндометрите/ Л.Г.
Войтенко, О.М. Карноухова, Н.В. Степаненко// Инновационные подходы в решении проблем экологии сельскохозяйственного производства. Материалы научно-практической конференции.
Том 1. Пос. Персиановский, 2009. С. 233-235.
26. Войтенко Л.Г. Комплексный метод лечения коров при послеродовом эндометрите/ Л.Г. Вой тенко, Е.С. Полозюк, А.А. Пасечниченко//Инновационные подходы в решении проблем экологии сельскохозяйственного производства. Материалы научно-практической конференции. Том 1.
Пос. Персиановский, 2009. С. 235-237.