авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ  БИБЛИОТЕКА

АВТОРЕФЕРАТЫ КАНДИДАТСКИХ, ДОКТОРСКИХ ДИССЕРТАЦИЙ

<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ


Pages:   || 2 |
-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Антипов

Сергей Анатольевич

новые технологии хирургичеСкого

и комбинировАнного лечения

рАкА

желудкА

(экспериментально-клиническое

исследование)

14.01.17 – хирургия

14.01.12 – онкология

АвтореферАт

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

Иркутск – 2010

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и в «Учреждение Российской академии медицинских наук НИИ онкологии СО РАМН» (г. Томск).

научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН Дамбаев Георгий Цыренович доктор медицинских наук, Тихонов Виктор Иванович профессор официальные оппоненты:

Корнилов Николай Геннадьевич доктор медицинских наук доктор медицинских наук, Дыхно Юрий Александрович профессор доктор медицинских наук, Лалетин Владимир Григорьевич профессор ведущая организация:

ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет им. Н.И. Пирогова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (Москва)

Защита состоится 26 ноября 2010 года в 13 часов на заседании Диссертацион ного совета д 208.032.01 при ГОУ ВПО «Иркутский государственный медицин ский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1.

Автореферат разослан «» 2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совета Желтовский Ю.В.

доктор медицинских наук введение Актуальность проблемы Несмотря на тенденцию последних лет к снижению заболеваемости раком желудка, данная патология занимает одно из ведущих мест в структуре заболе ваемости и смертности. Результаты лечения рака желудка остаются неудовлет ворительными (Зырянов Б.Н., 1998;

Чиссов В.И., 2006;

Давыдов М.И., 2008).

Расширение объема операции при раке желудка не приводит к улучшению показателей выживаемости. Поэтому в настоящее время все большее значе ние приобретает «функциональная» хирургия, предотвращающая развитие постгастрорезекционных болезней и улучшающая качество жизни данной группе пациентов (Лысов А.И., 2004;

Черноусов Ф.А., 2008;

Helyer L.K., 2007).

Одними из направлений современной хирургической гастроэнтерологии явля ются применение пилоруссохраняющих операций и разработка пластических вмешательств по созданию искусственных жомно-клапанных устройств.

В последнее время разрабатывается технология лучевой терапии в виде интраоперационного облучения опухоли или ложа удаленной опухоли. Сфор мулированы показания и противопоказания для проведения интраоперационной лучевой терапии (ИОЛТ) при раке желудка, обозначено поле и выбрана опти мальная доза лучевого воздействия, что улучшает результаты лечения по срав нению с хирургическим методом (Бердов Б.А., 2004;

Афанасьев С.Г., 2005).

Использование радиомодификаторов позволяет повысить эффективность лучевого воздействия на опухолевую ткань без повышения дозы облучения.

Клиническое применение данной методики, ранний послеоперационный пе риод и осложнения, летальность и отдаленные результаты лечения, а также пути доставки модифицирующего агента требуют дальнейшего тщательного изучения.

Все попытки улучшения отдаленных результатов лечения больных с рас пространенным раком желудка с применением системной химиотерапии не принесли ожидаемого успеха (Гарин А.М., 2005). Увеличение дозы цитостатика ведет к повышению эффективности лечения, однако системная химиотерапия с применением высоких доз цитостатиков неизбежно связана с непереноси мыми системными побочными эффектами (Чиссов В.И., Вашакмадзе Л.А., Бутенко А. В., 2005).

Создание активных полимерных лекарственных форм, в которых полимер выступает в качестве носителя лекарственного вещества, – одно из актуальных направлений в онкологии. Преимущества таких композитов – уменьшение токсичности цитостатика, пролонгированность его действия и целенаправлен ный транспорт к органам-мишеням. В качестве полимерного транспортного средства цисплатина может быть использована метилцеллюлоза, которая вво дится интраперитонеально после выполнения хирургического этапа лечения (Неред С.Н., Клименков А.А., 2007).

Одним из направлений адресной доставки цитостатика являются магни тоуправляемые наноразмерные липидные комплексы. Литературные данные демонстрируют опыт использования магнетита в сочетании с доксорубицином и адриамицином при лечении злокачественных опухолей мягких тканей. При воздействии внешнего магнитного поля либо при имплантации магнита не посредственно в опухоль происходит повышение концентрации цитостатика в опухолевом очаге в 4 раза по сравнению с традиционными методами введе ния препарата (Толчева Е.Е., Оборотова Н.А., 2006;

Randal J., 2001;

Retel V.P.

et al., 2008).

Эффективность предлагаемого биотехнологического подхода использова ния низких доз цисплатина и наноферромагнетика в сочетании с липидными компонентами подтверждены экспериментальными исследованиями. Перспек тивы клинического применения данной методики в рамках комбинирован ного лечения больных со злокачественной опухолью желудочно-кишечного тракта достаточно высоки. Магнитоуправляемый липидный композит может использоваться как транспортное средство для адресной доставки и удержи вания цисплатина в ложе удаленной опухоли либо в местах наиболее частого метастазирования при местнораспространенной форме рака желудка. Все вышеизложенное определило цель и задачи данного диссертационного ис следования.

Цель исследования:

Обосновать эффективность, экспериментально разработать и оце нить клиническую значимость новых технологий хирургического и комби нированного лечения рака желудка, улучшающих ближайшие и отдаленные результаты лечения.

Задачи исследования:

1. Разработать в эксперименте новый метод формирования пищеводно желудочного и пищеводно-кишечного анастомозов после проксимальной резекции желудка и гастрэктомии и оценить его морфо-функциональное со стояние.

2. Обосновать в эксперименте и разработать в клинике метод комбини рованного лечения рака желудка с использованием внутриартериального вве дения цисплатина в качестве радиосенсибилизатора при интраоперационной лучевой терапии.

3. Обосновать в эксперименте и разработать в клинике метод интрапери тонеального введения цисплатина, иммобилизованного на метилцеллюлозе во время хирургического лечения рака желудка.

4. Разработать экспериментальную методику синтеза магниточувстви тельных ультрамелкодисперсных липидных композитов цисплатина и наноча стиц железа в углеродной оболочке, обладающих регулируемой подвижностью и способностью накапливаться в заданном месте при воздействии внеш-него магнитного поля.

5. Патогенетически обосновать в экспериментах in vitro и in vivo на мо дели аденокарциномы Эрлиха возможность использования магнитоуправляе мых лекарственных композитов при лечении опухолевой патологии и выявить механизмы их противоопухолевого эффекта.

6. Провести оценку клинической эффективности разработанного в экс перименте метода формирования пищеводно-желудочного и пищеводно кишечного анастомозов после проксимальной резекции и гастрэктомии.

7. Оценить клиническую эффективность комбинированного лечения местнораспространённой формы рака желудка с использованием внутриартери ального введения цисплатина в качестве радиосенсибилизатора при интрао перационной лучевой терапии в дозе 10 Гр.

8. Провести клиническую оценку результатов комбинированного лечения местнораспространенной формы рака желудка с использованием интрапери тонеальной химиотерапии цисплатином.

научная новизна Теоретически обоснована, экспериментально доказана и подтверждена результатами клинических исследований эффективность нового метода фор мирования арефлюксного свисающего клапанного эзофаго-гастроанастомоза (эзофаго-энтероанастомоза) при лечении рака желудка, улучшающего непо средственные и отдаленные результаты и качество жизни у больных в по слеоперационном периоде. Новизна и оригинальность этого исследования и разработки нового метода формирования анастомоза подтверждены патентом Российской Федерации (патент РФ на изобретение № 2346661 от 20.02.2009 г.

«Способ формирования арефлюксного эзофаго-гастроанастомоза при лечении рака желудка»).

Впервые разработан способ комбинированного лечения рака желудка III стадии с применением интраоперационной лучевой терапии на фоне внутри артериального введения малых доз цисплатина с целью радиосенсибилизации.

Проведена оценка эффективности использования радиосенсибилизатора при интраоперационной лучевой терапии местнораспространенного рака желудка.

Новизна и оригинальность этого исследования и разработки нового метода комбинированного лечения подтверждены патентом Российской Федерации (патент РФ на изобретение № 2127591 от 20.03.99 г. «Способ комбинированного лечения рака желудка III стадии»).

Теоретически обоснован, экспериментально доказан и подтвержден клини ческими исследованиями новый метод комбинированного лечения местнора спространенной формы рака желудка, включающий в себя хирургический метод и интраперитонеальную химиотерапию цисплатином, иммобилизированным на метилцеллюлозе, уменьшающий количество послеоперационных осложнений и повышающий двухлетнюю выживаемость у больных местнораспространенной формой рака желудка по сравнению с комбинированным методом лечения, включающий системную химиотерапию. Новизна и оригинальность этого ис следования и разработки нового метода интраперитонеальной химиотерапии подтверждены патентом Российской Федерации (патент РФ на изобретение № 2370222 от 20.10.2009 г. «Способ лечения диссеминированного и местно распространенного рака желудка IV стадии»).

Впервые синтезирован магнитоуправляемый, ультрамелкодисперсный липидный композит цисплатина и нанопорошка железа в пироуглеродной обо лочке. Новизна и оригинальность данной разработки подтверждены патентом Российской Федерации (патент РФ на изобретение № 2357724 от 10.06.2009 г.

«Способ получения магниточувствительных липосом»). Экспериментально обоснованы механизмы противоопухолевой эффективности липидного ком позита на модели аденокарциномы Эрлиха.

практическая значимость Разработана и внедрена в клиническую практику новая методика форми рования арефлюксного свисающего пищеводно-желудочного и пищеводно кишечного анастомозов. Использование данной методики снижает количество осложнений в раннем послеоперационном периоде в 1,8 раза, послеопера ционную летальность в 1,2 раза и количество осложнений в отдаленном по слеоперационном периоде в 2,1 раза, а также значительно улучшает качество жизни больных в сравнении с аналогичными параметрами у пациентов со стандартной методикой хирургического лечения.

Разработана новая методика комбинированного лечения рака желудка III стадии с применением интраоперационной лучевой терапии на фоне внутриартериального введения малых доз цисплатина с целью радиосенси билизации. Использование радиосенсибилизатора при интраоперационной лучевой терапии у больных раком желудка улучшает отдаленные результаты комбинированного лечения без повышения разовой дозы облучения, при этом не усложняет проведение хирургического этапа лечения и не увеличивает частоту послеоперационных осложнений и летальности. Данная схема комби нированной терапии может быть рекомендована для внедрения в клиническую практику онкологических учреждений.

Разработаны, сформулированы и внедрены в клиническую практику по казания к применению новой методики интраперитонеальной химиотерапии при лечении больных с местнораспространенным раком желудка, которая снижает количество послеоперационных осложнений в раннем послеопе рационном периоде в 1,3 раза и увеличивает двухлетнюю выживаемость и безрецидивный период по сравнению с больными местнораспространенным раком, получившими комбинированное лечение с использованием системной химиотерапии.

Патогенетически обоснована биотехнологическая модель комбинирован ного лечения местнораспространенной формы рака с использованием липид ного композита, включающего низкие дозы цисплатина и наночастиц железа в углеродной оболочке. Полученные экспериментальные данные убедительно свидетельствуют о высокой противоопухолевой активности синтезированного липидного композита в сочетании с пониженной токсичностью (в сравнении с его отдельными компонентами). Определены перспективы клинического использования этой методики в рамках комбинированного лечения больных со злокачественной опухолью желудка. Магнитоуправляемый липидный ком позит сможет применяться как транспортное средство для адресной доставки и удерживания цисплатина в ложе удаленной опухоли либо в местах наиболее частого регионарного метастазирования при воздействии внешнего магнитного поля, при интраперитонеальном введении во время хирургического лечения местнораспространенной формы рака желудка.

основные положения, выносимые на защиту:

1. Методика формирования арефлюксного свисающего клапанного пищеводно-кишечного и пищеводно-желудочного анастомозов после гастрэк томии и проксимальной резекции желудка снижает частоту пострезекционных осложнений при радикальных оперативных вмешательствах на желудке и улучшает качество жизни данной категории больных.

2. Интраоперационная лучевая терапия на фоне внутриартериального введения цисплатина улучшает результаты лечения, не увеличивая количество послеоперационных осложнений и летальности у больных с местнораспро страненной формой рака желудка.

3. Интраперитонеальный метод введения цисплатина в системе метил целлюлозы при комбинированном лечении рака желудка увеличивает время возникновения местных рецидивов и отдаленных метастазов.

4. Синтезированный магниточувствительный, ультрамелкодисперсный липидный композит, включающий низкие дозы цисплатина и нанопорошок железа в углеродной оболочке, имеет высокую противоопухолевую активность и низкую токсичность на клеточном и тканевом уровнях.

5. Механизм противоопухолевого эффекта магниточувствительного уль трамелкодисперсного липидного композита цисплатина и наночастиц железа в углеродной оболочке обусловлен прямым цитотоксическим действием на опухолевые клетки и усилением реактивности соединительной ткани.

реализация результатов исследования По результатам исследования получено 4 патента Российской Федерации на изобретение. Разработанные технологии формирования арефлюксного свисаю щего клапанного пищеводнокишечного и пищеводножелудочного анастомозов после гастрэктомии и проксимальной резекции желудка и комбинированного лечения с применением интраперитонеальной химиотерапии внедрены в лечебную практику клиники госпитальной хирургии им. А.Г. Савиных ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Росздрава. Раз работанная технология внутриартериального введения цисплатина на фоне про ведения интраоперационной лучевой терапии при комбинированном лечении рака желудка внедрена в лечебную практику торакоабдоминального отделения клиник НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН. Результаты работы используются в педагогической, научной и практической деятельности сотрудников НИИ гастроэнтерологии им. Г.К. Жерлова, кафедр госпитальной хирургии, морфо логии и общей патологии ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (г. Томск), кафедры онкологии Красноярской государственной академии, в институте химии нефти СО РАН (г. Томск) и институте физики металлов УрО (г. Екатеренбург).

Апробация результатов Основные положения диссертационной работы представлены на I Казахско Японском симпозиуме по использованию радиомодификаторов при лечении рака (г. Алма-Ата, 15–17 сентября 1996 г.);

областном обществе онкологов (г. Томск, 4 апреля 1997 г.);

отчетной сессии НИИ Онкологии ТНЦ СО РАМН (г. Томск, 12 ноября 1997 г.);

Международном конгрессе по аналитической химии (г. Москва, 3 декабря 1997 г.);

конкурсе молодых ученых НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (г. Томск, 1998, 1999 гг.);

I Международном конгрессе по интраоперационной лучевой терапии (г. Памплона, Испания, 3–6 августа 1998 г.);

апробационном со вете НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН 12.05.2000 г.;

Всероссийской конференции с международным участием «Полифункциональные наноматериалы и нанотех нологии», посвященной 130-летию ТГУ (Томск, 19–22 сентября 2008 г.);

Между народном конгрессе «Nanotech Northern Europe 2008» (Копенгаген (Дания), 23–25 сентября 2008 г.);

6-м Международном семинаре «Drug Delivery System for Nanomedicine» (Либлиц (Чехия), 3–6 октября 2008 г.);

международной кон ференции (Монголия, 21–23 октября 2008 г.);

Международной конференции по производству и использованию наноматериалов «NANOSAFE-2008» (Гренобль (Франция), 3–7 ноября 2008 г.);

VIII Всероссийской конференции «Физикохи мия ультрадисперсных (нано-) систем» (ФХУДС-VIII) (Белгород, 10–14 ноября 2008 г.);

Международном форуме по нанотехнологиям «Rusnanotech-2008»

(Москва, 3–5 декабря 2008 г.);

Всероссийской научной конференции с между народным участием «Наноонкология» (Москва, 18–19 февраля 2009 г.);

III Все российской конференции по наноматериалам «НАНО-2009» (Екатеринбург, 20–24 апреля 2009 г.);

Всероссийской конференции «Химическая биология – фундаментальные проблемы бионанотехнологий» (Новосибирск, 10–14 июня 2009 г.) и на областном обществе хирургов (Томск, 17 декабря 2009 г.).

В рамках диссертационного исследования – руководство дипломной работой студентки VI курса медико-биологического факультета ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Росздрава «Влия ние фосфолипидных магниточувствительных липосом, инкапсулированных цисплатином, на жизнеспособность клеток карциномы Эрлиха и суспензий спленоцитов мыши» по специальности «биохимия» (Томск, июнь 2008 г.).

публикации По материалам диссертации опубликовано 40 печатных работ, в том числе 8 статей в журналах, рецензируемых ВАК РФ, 7 тезисов в международной пе чати, 1 учебно-методическое пособие (рекомендовано УМО по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России), 4 патента на изобретение РФ, 1 патент на полезную модель РФ.

Структура и объем работы Диссертация изложена на 295 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов и списка использованной литерату ры. Работа иллюстрирована 33 таблицами, 117 рисунками и 3 выписками из историй болезни. Библиографический указатель включает 487 источников, из которых 240 отечественных и 247 зарубежных.

личный вклад автора Принимал непосредственное участие в разработке и проведении экспери ментальных и клинических исследований. Весь материал диссертации собран, обработан и интерпретирован лично автором.

мАтериАл и методы иССледовАния Экспериментальная часть работы выполнена в Центральной научно иследовательской лаборатории (директор – доктор медицинских наук, про фессор А.Н. Байков) и на базе кафедры морфологии и общей патологии (за ведующая кафедрой – доктор медицинских наук, профессор И.А. Суходоло) ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава, в отделе экспериментальной цитологии НИИ медицинских материалов и имплантатов с памятью формы при Сибирском физико-техническом институте при Томском государственном университете (директор – доктор физико-технических наук, профессор В.Э. Гюнтер), в лабо раториях каталитических превращений легких углеводородов нефти Института химии нефти СО РАН (заведующий лабораторией – доктор химических наук А.В. Восмериков) и прикладного магнетизма НИИ физики металлов УО РАН (заведующий лабораторией – доктор физико-математических наук, профессор, лауреат Государственной премии А.Е. Ермаков).

оценку анатомо-физиологичесих характеристик разработанного арефлюксного свисающего клапанного эзофаго-гастроанастомоза/эзофаго энтероанастомоза провели на 25 взрослых беспородных собаках обоего пола, содержащихся до и в процессе эксперимента в обычных условиях вивария.

Всем животным выполняли лапаротомию, с последующим выполнением гастрэктомии или проксимальной резекции желудка. В ходе эксперимента проводили клиническое наблюдение, лучевой мониторинг и эндоскопический контроль. Срок наблюдения в эксперименте – до 2 лет. Рентгенографию осу ществляли с помощью аппарата фирмы VEB Transformatoren und Rontgenwerk «Hermann Matem» (TUR) типа D800-3. Выполняли фиброэзофагогастроскопию аппаратом ХХ («Olympus», Япония). Эндоскопическому исследованию было подвергнуто 5 животных: через 1 месяц – 1 собака, через 3 месяца – 1 собака, через 6 месяцев – 1 собака, через 1 год – 2 собаки. Механическую прочность, физическую герметичность и арефлюксные свойства, а также макро- и микро скопические особенности заживления анастомозов изучили на 15 животных в сроки 1, 7, 14, 21 и 30 суток, 3 и 6 месяцев, 1 и 2 года. Окрашивание срезов производили гематоксилином и эозином, а также железным гематоксилином Вейгерта и пикрофуксином по методу Ван-Гизона.

оценка радиосенсибилизирующего эффекта и определение концен трации цисплатина в зоне облучения при внутриартериальном введении.

Исследование по определению радиосенсибилизирующего эффекта прово дилось на трансплантируемой опухоли мышей (карцинома Эрлиха). Опухоль поддерживалась на мышах BALB/CaLac в асцитном варианте. В исследовании использовали 60 животных, распределенных на 6 групп, по 10 в каждой груп пе. При перевивке опухоли для опыта брали 10-дневный асцит, из которого готовили клеточную суспензию и вводили под кожу бедра животным. Через 11–12 суток, по достижению опухолями объема 0,5 см, проводили опыт. В качестве препарата сравнения использовали метронидазол, который вводился внутрибрюшинно за 40 мин. до облучения в дозе 0,5 мг/г массы тела живот ного. Цисплатин вводили внутривенно за 30 мин. до облучения в дозе 1,5 мг/ кг массы тела животного. Облучение животных осуществлялось стандартным рентгеновским излучением на аппарате РУМ-17 в дозе 10 Гр. Тело мышей экра нировалось свинцовой камерой. Объем опухоли определяли по формуле:

U =  / 6, где,, – размер трех взаимно перпендикулярных диаметров опухоли;

– постоянная 3,14157.

Реализация радиосенсибилизирующего эффекта цисплатина зависит от концентрации препарата в опухолевой ткани в момент облучения. Было про ведено исследование по определению концентрации цисплатины в крови, здоровой и опухолевой тканях у больного. Для определения препарата в био логических тканях использовался метод инверсионной вольтамперометрии.

По данным вольтамперограммы на графике реализуется количественное со держание платины в растворе.

методика определения концентрации платины в биологических объектах при внутрибрюшинном введении на фоне линтекс-мезогеля:

Использовали 20 белых беспородных крыс-самцов массой 260–280 г, которых содержали в стандартных условиях вивария. В первой (контрольной) группе животных в брюшную полость вводили 5 мл цисплатина 0,5%;

во второй (опыт ной) группе применяли раствор – 5 мл цисплатина 0,5% и 5 мл мезогеля. Для исследования кинетики поступления препарата в кровь через 30 минут, 1, 2 и 24 часа из хвостовой вены брали по 0,3 мл крови. После выведения животных из опыта через 24 часа производили забор печени для определения содержания платины. Определение платины в биологических объектах проводили методом инверсионной вольтамперометрии. Для определения активности цисплатина при взаимодействии с гелем Линтекс-Мезогель были выполнены физико химические исследования, целью которых являлось изучение электронных спектров поглощения взаимодействия Линтекс-Мезогеля с цисплатином и сывороткой крови.

исследование структурно-функциональной организации костного мозга при его взаимодействии in vitro с нанопорошком железа или его оксидом. Количественный состав гемопоэтических островков (ГО) изучали по методике Crocker и Gordon (1985) в модификации В.В. Новицкого и соавт.

(2004). Костный мозг мышей линии Balb/c из канала бедренной кости вымывали в пробирки с 1 мл среды RMI-1640. В часть пробирок добавляли нанодиспер -1640.

сию частиц магнетита Fe3O4 или железа в углеродной оболочке Fe(C) в конечной концентрации 3 мг/л, которую получали непосредственно перед смешиванием с клетками при помощи ультразвуковой обработки в течение 5 минут. Нега тивным контролем токсичности служила взвесь миелокариоцитов, в которую добавляли 0,9% NaCl в 1/10 (100 мкл) полного объема культуральной среды. В качестве позитивного контроля токсичности была выбрана перекись водорода в конечном разбавлении 1 мМ, обладающем цитотоксическим эффектом (Мень щикова Е.Б. и соавт., 2006). Перемешивали компоненты путем пипетирования клеточной взвеси через иглу диаметром 1 мм и культивировали в термостате в течение 1 часа при 37 оС. Далее снова пипетировали клеточную взвесь, смешивали в пропорции 1 : 1 с 0,1%-ным раствором нейтрального красного в 0,9%-ном растворе NaCl. Полученную смесь заносили в камеру Горяева и по всей ее рабочей поверхности подсчитывали число ГО с окрашенными или неокрашенными центральными элементами до и после их культивирования в термостате. За ГО принимали клеточные ассоциации, содержащие не менее миелокариоцитов, связанных с центрально расположенным моноцитом/макро фагом или стромальным механоцитом. Общее количество кариоцитов (ОКК) и число погибших клеток, окрашивающихся 0,4%-ным трипановым синим, оценивали в камере Горяева до и после добавления нанодисперсии согласно методике В.В. Новицкого соавт. (2004).

подготовка магнитоуправляемых липосомальных композитов ци сплатина. Липидные композиты, содержащие инкапсулированный цисплатин и ферромагнитный нанопорошок, были синтезированы в Институте химии нефти СО РАН (г. Томск) на основе фосфолипидных компонентов раститель ного и животного сырья. Характеристики магниточувствительных липидных композитов: размер – 500–1000 нм, концентрация цисплатина – 0,005 мг/мл, подвижность в магнитном поле – 0,18 kАм/кг. Концентрация нанопорошка железа в липидной эмульсии, определенная из кривых намагничивания – 0,2 %.

Степень включения цисплатина в липидный композит рассчитывали по разнице между исходной концентрацией цитостатика (0,05 % в изотоническом раство ре) и не включившегося в систему. Концентрацию свободного цитостатика в фосфатном буфере (после осаждения липидного композита центрифугирова нием) определяли спектрофотометрическим методом. Нанодисперсии Fe(C) с раствором цитостатика (Цисплатин-ЛЭНС) готовили в фосфатном буфере в присутствии фосфолипидного концентрата из хроматографически очищенного соевого лецитина [NS, Китай, содержащего 98 % фосфатидилхолина, с по NS,, мощью ультразвукового воздействия (ультразвуковой дезинтегратор UD-20, мощность – 1–8 Вт/см2, частота – 12 кГц) в среде фосфатного буфера.

In vitro оценка токсического эффекта цисплатина в составе магни тоуправляемого липосомального композита на клетки аденокарциномы Эрлиха. В качестве клеток-мишеней применяли краткосрочную культуру клеток перевиваемой карциномы Эрлиха, которая поддерживалась в асцитной форме на мышах линии С57Bl/6. Для исследований использовали популяции клеток, исходная жизнеспособность которых составляла не менее 90 %. Све жевыделенные опухолевые клетки или спленоциты мышей (5 105 клеток на лунку) инкубировали в 96-луночных планшетах (по 8 лунок на каждую груп пу) совместно с нанокомпозитами в течение 24 часов при 37 оС и 100%-ной влажности с 5 % СО2 в культуральной среде следующего состава: 95 % среды RMI-1640, 5 % эмбриональной телячьей сыворотки, 280 мг/л L-глутамина. Для определения числа жизнеспособных клеток использовали краситель (0,4%-ный раствор трипанового синего) и технику проведения анализа согласно между народному стандарту ISO 10993-5.

In vivo оценка токсического эффекта цисплатина в составе магни тоуправляемого липосомального композита на клетки аденокарциномы Эрлиха. Исследования проведены на 40 беспородных мышах обоего пола массой тела 18–22 г. Аденокарцинома Эрлиха пассировалась в асцитной форме.

Разовая доза перевивки в солидную форму (подкожно, нижняя конечность) составляла 5 106 клеток в 0,2 мл фосфатного буфера. Липидные композиты и контрольные растворы вводили местно в течение 10 дней, начиная через 24 часа после перевивки опухоли. На 28-е сутки после перевивки опухоли животных умерщвляли, оценивали массу мышей, массу и размер опухоли, из влекали внутренние органы. Интегральную эффективность лечения определяли по относительной массе опухоли (ОМО – отношение массы опухоли к массе животного, %), торможению роста опухоли (ТРО, %) и количественной морфо метрической оценке тонких срезов (Автандилов Г.Г., 2002) опухолевой ткани и внутренних органов животных, окрашенных гематоксилином-эозином. Выбор концентрации цисплатина был осуществлен на основе оценки зависимости вы живаемости клеток карциномы Эрлиха от концентрации цисплатина в среде.

клинические исследования Клиническая часть работы выполнена на основании анализа клинических наблюдений эффективности хирургического и комбинированного методов лечения 216 больных с диагнозом рак желудка. Для определения клинической эффективности нового метода формирования анастомоза после проксимальной резекции и гастрэктомии в исследование включено 76 пациентов с диагнозом рак желудка I–II стадии, с распространением опухоли Т1-Т3, с регионарным метастазированием N0-N2 и отсутствием отдаленного метастазирования M Для определения эффективности комбинированных методов лечения в исследование включено 140 пациентов с диагнозом рак желудка III стадии, с местным распространением опухоли Т3-Т4, с регионарным метастазированием N0-N2 и отсутствием отдаленного метастазирования M критерии включения пациентов в исследование: возраст от 35 до 80 лет;

верифицированный диагноз рака желудка I–II стадии для группы больных, по –II II лучивших хирургическое лечение и III стадии для группы больных получивших комбинированное лечение.

критерии исключения пациентов из исследования: несоответствие критериям включения;

клинически значимые сопутствующие заболевания опорно-двигательного аппарата, нервной и сердечно-сосудистой систем, ко торые могли бы повлиять на оценку клинических и лабораторных параметров основной патологии;

онкологические заболевания другой локализации;

гемато логические заболевания;

декомпенсированный сахарный диабет;

психические нарушения;

асоциальный статус больных;

беременность.

В соответствии с задачами исследования больные были разделены на следующие равнозначные и сопоставимые по основным прогностическим признакам группы:

(I–II стадия;

T(1-3) N(0-2) M(0)) I – пациенты с радикальной операцией с формированием арефлюксного свисающего клапанного пищеводно-желудочного/пищеводно-кишечного ана стомоза (основная группа, n = 35);

II – пациенты с радикальной операцией с формированием общепризнанного трехрядного погружного пищеводно-желудочного / пищеводно-кишечного анастомоза по А.Г. Савиных(группа контроля, n = 41);

(III стадия;

T(3-4) N(0-2) M(0)) III – пациенты с радикальной операцией в сочетании с интраоперационным облучением в дозе 10 Гр на зону левой желудочной артерии и ложе удаленной опухоли при внутриартериальном введении цисплатина в качестве радиосен сибилизатора (основная группа, n = 35);

IV – пациенты с радикальной операцией в сочетании с интраоперационным облучением в дозе 10 Гр на зону левой желудочной артерии и ложе удаленной опухоли (группа контроля, n = 35);

V – пациенты с радикальной операцией с интраоперационным внутрибрю шинным введением раствора Линтекс-Мезогеля и цисплатина в дозе 50 мг/м (основная группа, n = 30);

VI – пациенты с предоперационной химиотерапией 5ФУ и радикальной операцией (группа контроля, n = 40).

Формирование групп больных осуществлялось методом «конвертов» после комплексного обследования, включающего в себя клиническое, рентгенологи ческое, эндоскопическое и морфологическое исследования.

новый способ формирования пищеводно-кишечного и пищеводно желудочного анастомозов. Выполняли верхнесрединную лапаротомию.

Проводили ревизию брюшной полости с целью определения отдаленных метастазов, локализации и распространения опухолевого процесса в желудке.

Осуществляли мобилизацию левой доли печени по Кохеру, затем – диафрагмо круротомию по А.Г. Савиных. Пищевод обходили инструментом или пальцем, брали на тесьму или резиновую держалку и вытягивали в брюшную полость.

Производили мобилизацию абдоминального отдела пищевода и желудка по малой и большой кривизне. Отступя 10 мм от кардиального жома, циркулярно рассекали адвентициальный и мышечный слои пищевода в абдоминальном отделе до подслизистого слоя и заворачивали кверху на ширину 15–20 мм, охватывая пищевод с фиксацией верхнего края отдельными швами, создавая тем самым мышечный жом. Выше края среза сосуды подслизистого слоя по всей окружности прошивали узловыми кетгутовыми швами. Слизисто подслизистый слой пищевода отсекали от желудка и брали на 2 держалки.

Выполняли проксимальную резекцию желудка (гастрэктомию) (рис. 1).

Формирование задней губы анастомоза начинали с наложения первого ряда швов. Задние полуокружности пищевода и культи желудка (кишки) сшивали 3–4 узловыми швами. Для этого на пищеводе в шов брали мышечную оболочку выше сформированной манжеты на 0,5 см с захватыванием подслизистого слоя;

на дне желудка (кишки) накладывали серозно-мышечный шов. После наложения 4–5 швов при натягивании нитей сдвигали дно желудка (кишки), швы поочередно затягивали. Края сформированной задней полуокружности брали на 2 держалки.

Отступя от края шва на 1 см, на передней стенки желудка (кишки) рассекали серозно-мышечный слой на ширину пищевода для формирования соустья.

а б в Рис. 1. Схема формирования арефлюксного свисающего клапанного анастомоза:

а) формирование мышечной «манжеты»;

б) формирование задней губы анастомоза;

в) окончательный вид анастомоза;

1 – слизистая пищевода;

2 – мышечный жом;

3 – стенка желудка;

4 – стенка пищевода;

5 – назоэ зофагеальный зонд.

Затем накладывали второй ряд швов. Для этого слизистоподслизистый слой пищевода за держалки отводили кверху. На пищеводе в шов брали мышечную дубликатуру нижней задней части сформированной манжеты, на желудке на кладывали серозно-мышечный шов по краю рассеченной стенки в области верхнего угла анастомоза. Лигатуру брали на держалку. Далее накладывали непрерывный шов рассасывающей нитью, формируя заднюю стенку до ниж него угла анастомоза. Лигатуру также брали на держалку.

После этого производили электрокоагуляцию и рассечение слизистоподсли зистого слоя в области анастомоза на передней стенке желудка (кишки). Края раны разводили, погружали свободный участок слизистоподслизистого слоя пищевода, предварительно перевязав данный участок рассасывающей нитью, через сформированное отверстие в просвет желудка (кишки). Свисающий в просвет свободный участок слизистоподслизистого слоя пищевода играет роль клапана, препятствующего забросу содержимого желудка (кишки) в пищевод, а фиксация свободной части кетгутовым узлом для профилактики инфициро вания содержимым ротовой полости зону анастомоза.

Формировали переднюю губу анастомоза путем продолжения наложения первого ряда пищеводно-желудочного непрерывного шва, начиная от нижнего угла в направлении верхнего.

На пищеводе в шов брали нижний край передней части манжеты, на же лудке (кишке) – серозномышечный слой по краю анастомоза.

Держалку срезали. Переднюю полуокружность пищевода и культи желуд ка (кишки) сшивали 3–4 узловыми швами, формируя второй ряд швов. Для этого на пищеводе в шов брали мышечную оболочку выше сформированной манжеты на 0,5 см, на желудке (кишке) накладывали серозномышечный шов на передней стенке, отступя от первого ряда швов на 2–3 см. После этого держалки срезали.

методика внутриартериального введения цисплатина на фоне интраоперационного облучения при комбинированном лечении рака желудка Катетеризация чревного ствола проводилась за 1–2 дня до оперативного лечения по методике транслюмбальной катетеризации чревной артерии, раз работанной Н.А. Макаркиным с соавт. (1990). Внутриартериальную инфузию осуществляли с помощью аппарата, обеспечивающего подачу лекарственных смесей под регулируемым давлением. Излучатель быстрых электронов мало габаритный бетатрон МИБ-6Э для интраоперационного облучения размещен непосредственно в операционной на специальной подвеске, перемещающейся над операционным столом по потолочной двутавровой стальной балке. За 30–40 минут до начала облучения во время проведения хирургического этапа лечения, при помощи дозатора, через ранее установленный катетер, проводят внутриартериальную инфузию цисплатина в дозе 20 мг/м. Выбор поля об лучения и его размеры устанавливаются непосредственно во время ревизии брюшной полости в зависимости от локализации и объема поражения, наличия увеличенных лимфоузлов в бассейнах регионарного метастазирования. Разо вая доза ИОЛТ – 10 Гр. По продолжительности сеанс занимает 15–18 минут.

По завершении сеанса облучения бетатрон отстыковывается и отводится за пределы операционного стола. Коллиматор удаляется из брюшной полости, затем восстанавливается проходимость пищеварительного тракта по обще принятым методикам.

методика интраперитонеальной химиотерапии цисплатином при комбинированном лечении рака желудка Предложенное комбинированное лечение осуществляют следующим об разом. Производят верхнесрединную лапаротомию, при интраоперационном подтверждении локализации и распространенности опухолевого процесса вы полняют хирургический этап лечения. Далее используют методику введения в брюшную полость цисплатина в производной целлюлозы, имеющей гелевую консистенцию – «Линтекс-Мезогель». Формируют транспортную систему:

гель противоспаечный рассасывающийся «Линтекс-Мезогель» стерильный применяют во время операции. Данный препарат разрешен для медицинского применения, имеет соответствующее регистрационное удостоверение № ФС 0126006/3224-06 и сертификат соответствия № РОСС RU. ИМ09.ВО 1505.

«Линтекс-Мезогель» промышленно выпускается в двойной герметичной по лимерной упаковке объемом 200 мл. Для применения геля во время операции наружную упаковку вскрывают, внутренний стерильный пакет извлекают, соблюдая правила асептики. Внутренний пакет вскрывают, шприцом в этот пакет вводят цисплатин в дозе 50–75 мг/м и равномерно размешивают. Гото вой системой равномерно, тонким слоем обрабатывают брюшину. Брюшную полость ушивают.

методы оценки результатов хирургического и комбинированного способов лечения Во всех исследуемых группах различий по возрастному признаку не вы явлено.

Для оценки распространенности опухолевого процесса мы руководство вались рекомендациями ВОЗ, используя классификацию по критериям ТNМ.

Распределение пациентов сравниваемых групп по критериям однородное, без достоверных различий. У исследуемых пациентов чаще имел место экзофитный вариант роста опухоли, значительно реже определялся эндофитный тип, и, в не большом проценте случаев, опухоль носила смешанный характер. По данному критерию сравниваемые группы также были однородными. Для анализа срав ниваемых групп по гистотипу мы пользовались рекомендуемой ВОЗ «Гистоло гической классификацией опухолей желудка и пищевода № 18, 1982 г.» Во всех группах значимых различий по гистологическому признаку не отмечено.

При оценке непосредственных результатов хирургического и комбини рованного лечения рака желудка проводили анализ особенностей послеопе рационного периода, частоты и характера послеоперационных осложнений, летальности больных.

Функциональное состояние пищеводно-кишечного и пищеводно желудочного анастомозов изучали в ранние (12–18 сутки), поздние (3–7 ме сяцев) и отдаленные (1–8 лет) сроки после операции. Наряду с клиническими критериями функции анастомоза (дисфагия, изжога, рвота желчью, гиперса ливация, сохранение аппетита, непереносимость отдельных продуктов) при меняли рентгенологические, эндоскопические методы исследования.

Особое внимание уделяли оценке качества жизни пациентов в соответствии со шкалой качества жизни онкологических больных, с использованием опро сника EORTC QLQ-C30 version 3.0 и модуля STO-22 для больных раком желудка.

Все больные заполняли анкету опросника до начала лечения, затем через 3, 5, и 10 месяцев после операции. С анкетой пациенты работали самостоятельно, в случае необходимости – с помощью лечащих врачей. Расчет всех параметров качества жизни производили в соответствии с рекомендациями EORTC.

Сравнительную оценку эффективности комбинированных методов лечения проводили с учетом данных анализа срока и частоты появления рецидивов и метастазов в ближайшие 2 года после операции. Для изучения отдаленных результатов произведен расчет скорректированной трех- и пятилетней вы живаемости.

При оценке полученных данных были использованы стандартные пакеты программ Statistica (версия 6.0) и SSS Statistics (версия 17.0). Оценку раз личий между выборками проводили с использованием t-критерия Стьюдента (при нормальном распределении переменных), U-критерия Манна-Уитни и Т-критерия Вилкоксона (в случае отсутствия согласия данных с нормальным распределением). Для каждой выборки вычисляли средневыборочные харак теристики: среднее арифметическое (Х), среднее квадратичное отклонение (), ошибка среднего (m) или медиана (Ме), 25 % (Q1) и 75 % (Q3) квартили.

С целью выявления связи между исследуемыми показателями проводили линейный регрессионный анализ, а также определение коэффициентов ран говой корреляции Спирмена (r). Различия считали достоверными при уровне значимости р 0,05. Для оценки качественных различий в сформированных группах использовали метод Фишера для четырехпольной таблицы. Для оценки функции выживания использовали метод Каплана и Мейера (1958), для оцен ки различий в выживаемости выборок использовали обобщенный критерий Вилкоксона (по Гехану).

обоснование и разработка новых технологий лечения местнораспространенного рака желудка в эксперименте результаты макро- и микроскопического исследований пищеводно кишечного и пищеводно-желудочного анастомозов, сформированных по предлагаемой методике. С целью морфологического изучения процессов заживления арефлюксного свисающего клапанного пищеводно-кишечного / пищеводно-желудочного анастомоза после гастрэктомии и проксимальной ре зекции желудка был выполнен эксперимент на 25 беспородных собаках. Всего было проведено 12 гастрэктомий и 13 проксимальных резекций желудка.

Выполняли лапаротомию для оценки макроскопических изменений в брюшной полости в разные сроки после операции, затем производили извле чение органокомплекса для проведения макро-, микроскопических и функцио нальных исследований в области анастомоза. При вскрытии всех животных в зоне оперативного вмешательства отмечался умеренный спаечный процесс, четко визуализировалась «манжетка». Зона демаскулированного участка сли зистоподслизистого слоя, играющая роль клапана, погружена в просвет кишки (желудка), без рубцовых изменений.

Через трое суток после операции со стороны серозной оболочки в об ласти анастомоза имеется незначительный отек. В области соустья серозная оболочка тусклая. Со стороны слизистой клапан, выступающий в просвет желудка, утолщен за счет отека слизистой оболочки, пальпаторно эластичен, явлений некроза нет.

При микроскопическом исследовании на 3-и сутки зона соустья умеренно инфильтрирована сегментоядерными лейкоцитами, по линии сшивания орга нов видны участки некроза небольшого размера. Между соприкасающимися поверхностями слизистых оболочек имеются наложения из рыхлого фибрина, проникающего на отдельных участках в толщу подслизистого слоя пищевода и желудка. Слизистая, подслизистая основа пищевода, погруженная в просвет желудка, характеризуется одинаковым утолщением в различных отделах. Сфор мированный пищеводный мышечный «жом» представлен удовлетворительно вы являющимися гладкими миоцитами, идущими в неодинаковом направлении.

На 7-е сутки отмечено заметное уменьшение отека тканей вблизи анасто моза. Микроскопически в указанные сроки после операции в области соустья сохраняется экссудация сегментоядерными лейкоцитами. По краю сшитых слизистых оболочек отмечено уменьшение воспалительной инфильтрации.

Молодая грануляционная ткань заполняет дефекты между слизистыми. В основании мышечного «жома» сосуды расширены, заполнены форменными элементами, между продольными и циркулярными слоями – очаги кровоиз лияния. Большинство миоцитов продольного и циркулярного слоев имеют обычный вид, участками между ними определяются скопления фибробластов и сегментоядерных клеток.

Через 14 суток после операции отек в области анастомоза полностью раз решился. Снаружи анастомоза восстанавливается серозная оболочка. Анасто моз эластичен. Отека клапана нет, его высота – 18–20 мм, просвет анастомоза со стороны культи желудка сомкнут. Линия соединения слизистых оболочек прослеживается с трудом. При микроскопическом исследовании в области пищеводно-желудочного соустья утолщен серозный покров, рубец представлен нежными прослойками коллагеновых волокон. В мышечном слое на месте некротических тканей определяется нежная полоска соединительной ткани, практически без воспалительной инфильтрации. Подслизистый слой умеренно отечен, с диффузной лейкоцитарной инфильтрацией К 30-м суткам после операции проксимальной резекции желудка отека и инфильтрации зоны анастомоза нет, сероза гладкая, чистая, линия швов не видна. При вскрытии просвета желудка обнаружено, что анастомоз эластичен, широкий, без признаков рубцового сужения. Клапан – высотой 16–18 мм, сви сает в просвет культи желудка. Вершиной клапана является слизистая оболочка пищевода, линия соединения слизистых пищевода и желудка располагается проксимальнее на 3–4 мм от вершины клапана. Слизистая оболочка пищевода складчатая, гладкая, блестящая без признаков воспаления. В указанные сроки при гистологическом исследовании отмечается полная эпитализация по краю соустья. Мышечные слои «жома» представлены отчетливо выявляющимися элементами гладкой мускулатуры пищевода, цитоплазма мышечных клеток окрашивается эозином равномерно, кровеносные сосуды не расширены.

Между подслизистыми слоями пищевода и дна желудка в области «клапана»

определяется узкая полоска зрелой соединительной ткани.

Таким образом, через 1 месяц после операции проксимальной резекции желудка макро- и микроскопические исследования свидетельствовали о полном заживлении пищеводно-желудочного анастомоза и завершении органоспе цифической дифференцировки его тканей с восстановлением в области их соединения типичного строения слизистой оболочки пищевода и желудка.

Через 1 год после операции пищевод не расширен, клапан – высотой 18 мм, слизистая его не отличается от аналогичной оболочки пищевода. Просвет клапана сомкнут. На разрезе просвет пищевода свободен от слизи. Слизистая оболочка пищевода блестящая, с продольными складками. Линия стыка сли зистых оболочек располагается на 3–5 мм выше вершины клапана и как бы прикрывает слизистую оболочку пищевода от воздействия желудочного со держимого. При микроскопическом исследовании в участке искусственного «жома» выявляются 2 четко выраженных пласта мышечной ткани, в которых гладкие миоциты идут в различных направлениях и, соответственно, принад лежат циркулярному и продольному слоям.

Через 2 года после операции микроскопическая картина стенки пищевода не отличается от таковой при сроке наблюдения в 1 год.

Проведенные макро- и микроскопические исследования показали, что использование в эксперименте методики послойного рассечения и сшивания одноименных тканей с наложением подслизисто-слизистого шва обеспечивает неосложненное заживление соустья. Формируемый клапан сохраняет свою фор му и структуру в контрольные сроки наблюдения, предупреждает регургитацию и развитие рефлюкс-эзофагита в отдаленном послеоперационном периоде.

изучение арефлюксной функции свисающего клапанного анастомоза.

Для объективной оценки арефлюксных свойств пищеводно-желудочного соустья в сроки от 1 месяца до 1 года после операции проводили эндоскопическое ис следование. При эндоскопическом исследовании в установленные сроки данных за стеноз и рефлюкс-эзофагит не было выявлено ни в одном случае. Пищеводно желудочное соустье во всех случаях было сомкнуто, при введении воздуха оно раскрывалось до 11–14 мм, приобретая округлую или овальную форму.

В послеоперационном периоде 5 собакам были выполнены рентгеноло гические исследования. Выполняли обзорные и прицельные рентгенограммы желудка и зоны соустья. Поступление контраста в пищевод не наблюдалось.

После этого собаку переводили в положение Тренделенбурга. Вся бариевая взвесь находилась в желудке, гастроэзофагеальный рефлюкс отсутствовал.

С целью объективной оценки арефлюксной функции свисающего кла панного анастомоза нами использован метод пневмопрессии извлеченного пищеводно-желудочного (пищеводно-кишечного) комплекса. Запирательный механизм пищеводно-желудочного (пищеводно-кишечного) анастомоза, пред ставленный свисающим клапаном, выдерживал нагнетание воздуха в желудок (кишечник) до 30 мм рт. ст. При этом в сроки до 1 месяца давление составляло 35–40 мм рт. ст., через 3 месяца – 30–35 мм рт. ст. и в дальнейшем не менялось.

Данное обстоятельство обусловлено, на наш взгляд, имеющимися воспали тельными изменениями со стороны анастомоза, которые в ранние сроки после операции в определенной степени способствуют затруднению эвакуации. В дальнейшем, по мере стихания воспалительных явлений, свисающий клапан обеспечивает практически нормальное давление в зоне анастомоза. Таким обра зом, приведенные данные экспериментальных исследований свидетельствуют о надежной арефлюксной функции сформированного свисающего клапанного анастомоза и отсутствии грубых дегенеративно-дистрофических изменений со стороны слизистой в области соустья.

Экспериментальное обоснование эффективности внутриартериально го введения цисплатина при интраоперационном облучении. Результаты эксперимента по определению радиосенсибилизирующих свойств продемон стрировали, что скорость роста карциномы Эрлиха контрольной группы выше, чем у животных других групп.

При сочетании воздействия на опухоль цисплатина и рентгеновского излучения показано, что скорость увеличения объема опухоли значительно меньше, чем в группе животных, которые подверглись только облучению.

Так, на 12-е сутки наблюдения выявлены достоверные различия объема опу холи (табл. 1). Средняя продолжительность жизни животных в группе при сочетании воздействия цисплатина и рентгеновского облучения составила 55,3 ± 2,7 суток, что в 1,5 раза выше относительно контроля – 35,3 ± 3,1 су ток и в 1,2 раза выше относительно группы животных, подвергнутых только облучению – 50,6 ± 3,2 суток. Коэффициент эффективности воздействия в группе, где на фоне вводимого цисплатина проводилось рентгеновское облучение, увеличивается в 1,2 раза относительно группы животных, под вергнутых только облучению, и в 1,13 раза относительно группы животных, подвергнутых воздействию метронидазола и рентгеновского излучения одно временно. Результаты экспериментальной работы показывают, что малые дозы цисплатина обладают радиосенсибилизирующими свойствами в условиях высокой однократной дозы облучения. При этом усиливается канцероцидный эффект лучевой терапии и увеличивается продолжительность жизни экспе риментальных животных (табл. 2).

Реализация радиосенсибилизирующего эффекта цисплатина зависит от концентрации препарата в опухолевой ткани в момент облучения. Полученные результаты показали, что наибольшая концентрация платины определяется в крови, затем в опухолевой ткани и незначительное количество – в здоровой ткани (табл. 3). Таким образом, внутриартериальное введение цисплатина по зволяет добиться достаточной концентрации препарата в тканях, пораженных опухолью, для потенцирования лучевого воздействия. Причем концентрация цисплатина в опухоли значительно выше, чем в нормальной ткани, что обе спечивает адресное сенсибилизирующее действие лучевой терапии, без по вреждения критических органов в зоне облучения.

Таблица Динамика увеличения объема опухоли (см3) Rx Rx Rx 0 0,52 ± 0,09 0,51 ± 0,08 0,53 ± 0,06 0,53 ± 0,05 0,53 ± 0,08 0,53 ± 0, 1 0,58 ± 0,10 0,52 ± 0,16 0,54 ± 0,05 0,46 ± 0,06 0,32 ± 0,09 0,43 ± 0, 3 0,74 ± 0,16 0,55 ± 0,22 0,61 ± 0,05 0,43 ± 0,07 0,26 ± 0,11 0,33 ± 0, 5 0,92 ± 0,17 0,64 ± 0,23 0,74 ± 0,12 0,58 ± 0,10 0,31 ± 0,10 0,42 ± 0, 7 1,17 ± 0,28 0,87 ± 0,36 0,97 ± 0,23 0,76 ± 0,10 0,62 ± 0, 0,46 ± 0, 10 1,67 ± 0,21 1,25 ± 0,36 1,39 ± 0,25 1,09 ± 0,1 0,81 ± 0,1 0,96 ± 0, 12 2,20 ± 029 1,74 ± 0,36 1,87 ± 0,27 1,47 ± 0,13 1,06 ± 0,10 ( ) 1,26 ± 0, 15 3,16 ± 0,29 2,40 ± 0,39 2,59 ± 0,28 2,08 ± 0,12 1,70 ± 0.10 () 1,93 ± 0, 18 4,05 ± 0,40 3,03 ± 0,57 3,41 ± 0,39 2,86 ± 0,10 2,45 ± 0,10 () 2,65 ± 0, Примечание: – достоверное различие с контролем при Р 0,05;

– достоверное различие с контролем при Р 0,01;

– достоверное различие с контролем при Р 0,001;

() – достоверное различие с облучением животных при Р 0, Таблица Средняя продолжительность жизни животных – 35,3 ± 3, 1,455 ± 0,061 40,1 ± 2, 1,364 ± 0,044 37,3 ± 3, Rx 1,691 ± 0,036 50,6 ± 3, 55,3 ± 2, Rx 2,055 ± 0,042( ) 1,818 ± 0,049 53,1 ± 3, Rx Примечание: (*) – достоверное различие с облученными животными (Р 0,05).

Таблица Концентрация платины в тканях t, % 10 – - 7, 10 – 5, 10 – 4, 10 – 0, Наибольшая концентрация цисплатина в крови обеспечивает максималь ную концентрацию препарата в зоне облучения. Методом инверсионной воль тамперометрии было установлено, что наибольшая концентрация препарата в крови определяется через 30 минут от начала внутриартериальной инфузии Таким образом, ИОЛТ при раке желудка необходимо проводить через 30–40 минут от начала регионарной инфузии цисплатина, для того чтобы до биться максимального сенсибилизирующего эффекта.

теоретическое и экспериментальное обоснование применения препа рата «мезогель» в качестве транспортного средства доставки цисплатина при комбинированном лечении рака желудка. С целью создания условий для пролонгированного действия цисплатина, представляющего собой комплексное соединение двухвалентной платины, изучено взаимодействие с полимером носителем окисленной оксидом азота (IV) целлюлозой – монокарбоксил целлюлозой. Иммобилизация цитостатика на природных биодеградируемых полимерах-носителях позволяет снизить токсичность, обеспечить длительное и равномерное поступление препарата к органу-мишени. Гель на основе ме тилцеллюлозы псевдопластичен, физиологически инертен, обладает высокой адгезией к биологическим тканям, хорошей смачивающей и флотационной способностью, нетоксичен.

Были выполнены физико-химические исследования, целью которых явля лось спектрофотометрическое изучение взаимодействия «Линтекс-Мезогеля»

с цисплатином и сывороткой крови.

Поскольку состояние электронных переходов в молекулах реагирующих компонентов четко и ясно прослеживается на электронных спектрах погло щения (ЭСП), данный метод был использован для получения результатов на качественном уровне (спектры сняты на UV/VIS спектрофотометре UVIKON 943 в 1 см кюветах, ширина щели – 2 нм).

В ЭСП цисплатина наблюдается одна основная полоса поглощения (ПП) при 220 нм и слабый пик с max ~ 295 нм.

На рисунке 2 приведены спектры исходных веществ: цисплатина, (на спектре – I) мезогеля и сыворотки крови. Из них 2 компонента (цисплатин и мезогель, спектры 1 и 2) имеют ЭСП с дифференцированными максимумами поглощения аналитических длин волн: max – 205, 220 и 300 нм соответственно.

А для сыворотки первый максимум поглощения различается только по форме и интенсивности от второй ПП для цисплатина (max = 300 нм).

На рисунке 3 представлены электронные спектры для сочетаний 3 реаген тов – мезогель + цисплатин (спектр 1) и сыворотка + цисплатин (спектр 2).

Спектр 1 (мезогель + цисплатин) содержит ПП при max = 220 нм (как в свободном цисплатине) и левое плечо при max = 205 нм (как в свободном мезогеле). Но положение второго максимума для цисплатина смещается на 25 нм и трансформируется в появлении правого плеча основного пика при max = 275 нм, что свидетельствует об имеющем место слабом взаимодействии между парой реагентов (мезогель и цисплатин).

В ЭСП спектра 2 (сыворотка + цисплатин) присутствует главный пик с max = 300 нм, характерный для сыворотки, но его интенсивность значительно возрастает на фоне полного отсутствия главной ПП цисплатина. По-видимому, имеет место прочное комплексообразование между компонентами сыворотки и цисплатина.

Рис. 2. Электронный спектр поглощения Рис. 3. Электронный спектр поглоще цисплатина (1), мезогеля (2) и ния комбинаций мезогеля и ци сыворотки крови (3). сплатина (1), сыворотки крови и цисплатина (2).

Известно, что системное применение цитостатиков характеризуется не высоким терапевтическим эффектом из-за низкой селективности процесса их доставки к опухолевому очагу и побочными токсическими осложнениями.

Интраперитонеальное введение препаратов является вариантом регионарной, адресной доставки противоопухолевого агента. Вместе с тем, известен «Способ профилактики образования послеоперационных спаек серозных полостей», когда в процессе оперативного вмешательства на органах места вероятного образования спаек покрывают стерильным водным гелем метилцеллюлозы.

При нанесении геля метилцеллюлозы на висцеральную/париетальную брю шину он равномерно покрывает серозную оболочку органов, что, с одной сто роны, разобщает тканевые поверхности, подвергшиеся хирургической агрессии, препятствуя их консолидации и образованию спаек, а с другой – обеспечивает постепенный, дозированный выход цитостатика и его поступление в опухоль.

Таким образом, применение гелевой композиции на основе метилцеллю лозы и цитостатика обеспечивает двойной эффект – возможность пролонгиро ванного и дозированного высвобождения цитостатика к тканям пораженного органа и реализацию «барьерной» функции для профилактики спаек.

теоретическое и экспериментальное обоснование применения магнитоуправляемых нанокомпозитных материалов для векторной доставки цитостатика Физико-химическая аттестация магниточувствительных нанопорошков Размер частиц железа в углеродной оболочке, в соответствии с данными просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) (измерение ~ 200 частиц), составляет от 5 до 10 нм. Средний размер частиц нанопорошков магниевого феррита MgFe2O4 и оксида железа Fe3O4 не превышает 18 нм.

В Рамановском спектре нанопорошка Fe(C) присутствуют 2 больших пика, которые дают возможность предположить наличие в углеродной оболочке угле рода в 2 гибридных состояниях – sp3 и sp2. Толщина внешнего углеродного слоя при этом не превышает 1–2 нм. Рентгенофазовый анализ образцов проводили с помощью дифрактометра ДРОН-6 в излучении CuK в режиме пошагового сканирования с шагом 0,05 град (2). На рисунке 4 представлена типичная рент генограмма для нанопорошков Fe(C). Заметное уширение линий обусловлено относительно малыми размерами частиц металлического Fe (менее 10 нм).

Рис. 5. Кривые намаг Рис. 4. Дифрактограмма Рис. 6. ДТА-спектр Fe(С).

ничивания для Fe(C).

нанопорошков Fe(C), Fe3O и MgFe2O4.

Исследование намагниченности образцов проводили на вибрационном магнетометре в полях до 27 кЭ. Кривые намагничивания исследованных фер ритов (рис. 5) характеризуются довольно крутым начальным участком, что свойственно магнитомягким веществам, к которым и относятся эти соединения в массивном состоянии.

Для Fe(C) начальный участок кривой намагничивания более пологий, что связано с малостью размеров частиц и обусловленным этим явлением суперпа рамагнетизма. В соответствии со значениями удельного магнитного момента, его наибольшим значением обладают нанопорошки Fe(C).

На рисунке 6 приведены типичные кривые ДТА и ТГ для исследованных нано порошков железа 1-5 Fe(C), которые были записаны в условиях неизотермического окисления образцов на воздухе (дериватограф Q-1500 D). Интенсивный экзо-эффект регистрируется на спектре в виде пика с размытым максимумом в диапазоне темпе ратур 100–200 °С и соответствует сгоранию углеродного слоя и окислению металла.

Данная стадия, в свою очередь, сопровождается уменьшением массы образца за счет летучих продуктов (СО2 и СО), а также растрескиванием защитной углеродной оболочки и открытием доступа кислорода воздуха к ядру металла, который также начинает окисляться с образованием различных оксидных форм железа.

Процессы горения углерода и окисления железа завершаются около 500 °С.

Нужно отметить, что при температуре до 100 °С углеродная оболочка сохраняет свою целостность и сплошность и выполняет защитную функцию достаточно прочного покрытия.

химическое тестирование поверхности нанопорошков Исследование состояния поверхности нанопорошков в образцах осущест вляли методом ИК спектроскопии, а также путем химического тестирования га зообразным аммиаком (для выявления кислотных центров) и модельной реакции окисления изопропилбензола (ИПБ) (в присутствии молекулярного кислорода).

Согласно результатам термодесорбционного анализа, молекулы-зонды NH3 на гетерогенной поверхности нанопорошков Fe(C) не сорбируются. Это позволяет предполагать отсутствие Бренстедовских кислотных центров и цен тров Льюиса. В соответствии с ИК спектрами (ИК-Фурье спектрометр Nexus Nikolet N5700), на поверхности нанопорошков железа в углероде отсутствуют функциональные группы.

Было обнаружено, что тепловые эффекты, зарегистрированные в модельной реакции окисления кумола, для образцов Fe(C) и оксида железа Fe3O4, по уровню значений могут соответствовать физическим процессам смачивания и адсорбции, но не связаны с протеканием основной реакции. В то же время, наноразмерный магниевый феррит MgFe2O4 «запускает» собственно реакцию окисления кумола, о чем свидетельствует высокое значение теплового эффекта.

На примере нанопорошков Fe(C) было установлено, что результаты физико химических анализов для одного и того же образца остаются неизменными в течение 10 дней их хранения на воздухе, что свидетельствует об их относи тельной стабильности.

Таким образом, результаты физико-химического тестирования поверхности серии нанопорошков Fe(С) свидетельствуют об отсутствии поверхностных активных центров, которые могут обусловливать проявление реакционной способности в превращениях, протекающих по кислотному и свободноради кальному механизмам. Как известно, вклад такого рода механизмов в реали зацию биологических процессов весьма существенен.

и с с л ед ов а н и е в з а и мод е й с т в и я н а н о п о р о ш ков F e ( С ) с цисплатином Данное исследование было мотивировано поиском новых наноферромаг нетиков для магниточувствительных липидных композитов, инкапсулирующих цисплатин.

В этой связи представлялось вполне обоснованным исключить возмож ность взаимного влияния цисплатина и ферромагнитного нанопорошка, а также переход в его присутствии цис-формы цисплатина в фармакологически неактивную транс-модификацию.

Электронные спектры поглощения растворов образцов записывали на спектрофотометре Uvikon 943 (кварцевая кювета, толщина слоя 1 мм) в диа пазоне 200–700 нм. Было обнаружено, что электронный спектр цисплатина в составе дисперсии цисплатин и нанопорошок после выдерживания в среде 0,9%-го раствора хлорида натрия при температуре 37 °С в течение 24 часов не претерпевает изменений, а это означает, что изомеризации цисплатина в исследованных условиях не происходит. Данный результат, в свою очередь, дополнительно свидетельствует об инертности металлического ядра в отно шении химических факторов окружающей среды в условиях, приближенных к биологическим.

в л и я н и е i n v i t r o н а н о п о р о ш ка же л е з а и е го о кс и д а на структурно-функциональную организацию костного мозга Экспериментальные исследования показали (табл. 4), что в изучаемых группах не выявлены статистически значимые различия морфологических показателей культуры костного мозга in vitro.

Таблица Количество окрашенных ядросодержащих клеток (% от исходного) и ОКК в культуре костного мозга мышей Balb/c через 1 ч после добавления взвесей нанопорошков в конечной концентрации 3 мг/л (Х ± m) 138,73 ± 24,92 81,25 ± 7, 0,9 % NaCl (n = 5) Fe3O4 (n = 5) 120,72 ± 12,16 93,62 ± 11, Fe(C) (n = 5) 137,77 ± 16,09 97,37 ± 10, 157,82 ± 11,59 81,96 ± 9, H2O2 (n = 6) Общая клеточность (общее количество кариоцитов (ОКК)) и гибель миелокариоцитов путем некроза, оцененные по внутриклеточному проник новению трипанового синего, после добавления наночастиц варьировали в пределах значений негативного и позитивного контролей токсичности. При этом структурно-функциональная активность клеток костного мозга, оцененная по содержанию гемопоэтических островков (ГО), снижалась практически в 1,5–2 раза после добавления в культуру перекиси водорода (табл. 5). Особенно резко падало (на 45 % по сравнению с негативным контролем) количество ГО, центральный элемент которых окрашивается нейтральным красным. Следует отметить, что наночастицы магнетита оказывали на кроветворные островки действие, близкое по своей амплитуде к эффекту Н2О2, приводящее к сниже нию суммарного содержания ГО до 70 % (p = 0,031) от уровня негативного контроля токсичности. С другой стороны, прямой контакт наночастиц железа в углеродной оболочке с кроветворными клетками не приводил к нарушению их ассоциаций, играющих важную роль в процессах кроветворения. Содержание ГО варьировало в пределах значений негативного контроля токсичности и пре вышало аналогичные показатели (окрашенные ГО, сумма ГО) в позитивном контроле токсичности.

Таблица Содержание ГО (% от исходного) в костном мозге мышей Balb/c через 1 ч после добавления взвесей нанопорошков в конечной концентрации 3 мг/л (Х ± m) 126,15 ± 15,27 224,38 ± 28,27 161,06 ± 14, 0,9%- NaCl (n = 5) Fe3O4 (n = 5) 91,68 ± 11,30 148,18 ± 24,22 113,45 ± 11,08* 137,35 ± 22,35+ 153,30 ± 15,20+ Fe(C) (n = 5) 175,17 ± 8, 69,03 ± 16,21* 142,18 ± 30,51 92,78 ± 10,74* H2O2 (n = 6) Примечания: * – достоверность различия показателей относительно негативного контроля токсичности;

+ – достоверность различия показателей относительно позитивного контроля токсичности.

In vitro оценка токсического эффекта цисплатина в составе магни тоуправляемого липосомального композита на клетки аденокарциномы Эрлиха. Как следует из данных, представленных на рисунке 7, один цисплатин в конечной дозе 1/10 ЛД50 оказывал in vitro примерно одинаковое цитотоксиче ское действие на здоровые спленоциты и опухолевые клетки, зафиксированное по увеличению проницаемости их цитоплазматических мембран для красителя трипановый синий. Последовательное добавление в систему фосфатидилхоли на и наночастиц Fe(С) статистически значимо повышало (более чем на 20 %) относительное количество погибших клеток аденокарциномы в сравнении со спленоцитами. Построение линий тренда (величина линейной аппроксимации R = 0,96–0,99) при последовательном добавлении компонентов системы по казало скорость прироста числа погибших опухолевых клеток 36 % при 26 % для иммунокомпетентных клеток.

% 1 2 3 Рис. 7. Жизнеспособность клеток аденокарциномы Эрлиха и спленоцитов мыши через 24 ч культивирования с липидными композитами цисплатина и на ночастиц железа в углеродной оболочке. Состав исследуемых систем in vitro и in vivo: 1 – фосфатный буфер;

2 – фосфатный буфер + цисплатин;

3 – фосфатный буфер + фосфолипидный концентрат + цисплатин;

4 – фос фатный буфер + фосфолипидный концентрат + цисплатин + Fe(С).

In vivo оценка токсического эффекта цисплатина в составе магни тоуправляемого липосомального композита на клетки аденокарциномы Эрлиха. Анализ гистологических препаратов показал, что при подкожном введении клетки аденокарциномы Эрлиха пытаются сформировать желези стоподобные структуры. Опухоль построена из резко атипичных железистых трубочек, имеющих разные размеры и форму.

В клетках опухолевой ткани имеет место резко выраженный клеточный атипизм, что сопровождается образованием клеток разной формы и размеров с анизо- и гиперхромными полиморфными ядрами. Среди опухолевых клеток опре деляются атипичные гигантские клетки с множественными ядрами (4–6 ядер).

Внутриопухолевое введение цисплатина in vivo вызывало статистически значимое 2–3-кратное уменьшение размеров и массы подкожного узла адено карциномы Эрлиха (табл. 6).

Таблица Морфологические и гистологические показатели подкожного роста аденокарциномы Эрлиха после курсового введения препаратов (Х ± m) (n = 10) 1 2 3 0,88 ± 0,06 2,36 ± 0,03 1,09 ± 0, ( ) 2,44 ± 0, p1 0,01 p2 0,01 p3 0, 8,4 22,4 6, (%) 28, p1 0,01 p2 0,01 p3 0, 78,0 22,0 81, (% ) p1 0,01 p2 0,01 p3 0, 7,2 ± 0,34 8,96 ± 0,67 2,21 ± 0, S (%) 24,0 ± 1, p1 0,01 p2 0,01 p3 0, 40,0 ± 3,0 33,0 ± 2, 83,0 ± 6,0 86,0 ± 4, (%) p2 0, 54,3 ± 3,0 70,0 ± 3,0 13,0 ± 1, (%) 30,0 ± 3, p1 0,01 p2 0,01 p3 0, 54,0 ± 2, 0 0 (%) p3 0, 311,7 ± 74, 1 95,6 ± 7,4 102,9 ± 10, p2 0, Примечания: n – количество животных и срезов опухолевых узлов в каждой группе;

1, 2, 3 – достоверность различия показателей с аналогичными в группах с соответствующим номером;

номер группы соответствует номеру системы T1–T4.

Рост размеров и массы опухолевого узла может быть связан не только с основным процессом, но и с реакцией макроорганизма, приводящей к отеку, инфильтрации, некрозу и склерозу патологического очага. Так, 3-я система по морфологическим индексам (размер, масса опухолевого узла, ТРО) ухудшала, а по гистологическим (площадь опухолевой ткани) – усиливала противоопу холевое действие цисплатина.

Показатели массы, размеров и ТРО опухоли не коррелировали с площа дью опухолевой ткани, выявленной на срезах, что позволило перемножить их вероятности и ввести новый показатель эффективности исследуемых групп (ОМО площадь опухоли на срезе). При этом в срезах опухолевой ткани в 3 раза увеличивалось число гигантских клеток.

Наиболее значительной противоопухолевой активностью in vivo обладала 4-я система композитов, состоящая из мицеллярной формы цитостатика с наночастицами пироуглеродного железа. В сравнении с другими группами наблюдения обращал на себя внимание факт более чем 50%-ного фиброза опухолевого узла при малом количестве инфильтрата и гигантских клеток на гистологических срезах.

оценка in vivo побочных эффектов применения цисплатина в со ставе магнитоуправляемого липидного композита. В эксперименте на мышах показано, что у мышей-опухоленосителей Balb/c в паренхиме печени гепатоциты формируют четкую печеночную дольку, включающую обычные печеночные пластинки, триады, синусоидные капилляры и центральные вены. Печеночные пластинки состоят из 2 рядов гепатоцитов и, радиально соединяясь, замыкаются в центральную вену. Между гепатоцитами от мечаются мелкие скопления (2–3 клетки) лимфоцитоподобных клеток (pit клетки).

Внутриопухолевое применение цисплатина (группа 2) приводило к рез кому увеличению признаков компенсаторно-приспособительной перестройки паренхимы печени. В препаратах выявляли признаки венозного полнокровия центральной вены. Синусоидные капилляры расширены, эндотелиальные клетки набухшие. Полиморфноклеточный инфильтрат очаговый, локализуется периваскулярно. Определяли большое число гепатоцитов с признаками зерни стой дистрофии, некротизированные клетки. Реакция Перлса отрицательная.

Статистически значимо возрастали, в сравнении с опухолевыми животными (группа 1), активность воспалительного процесса, оцененная по плотности инфильтрата (практически в 2 раза), количество гепатоцитов с морфологиче скими признаками дистрофии (в 785 раз) и гибели путем некроза (в 1906 раз).

Как следствие, усиливались признаки регенерации органа, связанные с ростом числа двуядерных гепатоцитов (в 749 раз).

Липидная форма цисплатина (группа 3) при внутриопухолевом назначении снижала системный токсический эффект цитостатика. В сравнении с группой наблюдали статистически значимое уменьшение (в 1,5–2 раза) количества некротизированных и, соответственно, двуядерных гепатоцитов. При внутри опухолевом введении липидного композита цисплатина и наночастиц железа в углеродной оболочке (группа 4) системное токсическое действие цитостатика на печень мышей существенно уменьшалось (табл. 7). За исключением при знаков дистрофии гепатоцитов, остальные показатели оказались значительно (в 2,5–7,5 раз) ниже таковых в группе 3. При этом в группе 4 уровень клеток, несущих морфологические знаки некроза, статистически не отличался от соот ветствующего показателя у животных-опухоленосителей, получавших только растворитель (фосфатный буфер).

На гистологических препаратах качественные изменения печеночной паренхимы оказались незначительными. Сосудистые изменения не выра жены. Большая часть гепатоцитов находится в состоянии белковой и жиро вой дистрофии. По периферии печеночных долек выявляется выраженный фиброз.

Таблица Морфологические показатели печени у мышей Balb/c после курсового введения препаратов в подкожный узел аденокарциномы Эрлиха (Х ± m) % % % (n = 10) 1 126,23 ± 12,20 6,14 ± 0,68 0,89 ± 0,31 2,22 ± 0, 234,55 ± 38,9 48,23 ± 7,47 16,96 ± 1,70 16,63 ± 0, p1 10–6 p1 10– p1 0,016 p1 0, 211,86 ± 25,19 40,29 ± 6,45 8,23 ± 1,19 10,27 ± 1, p2 0,0006 p2 0, 27,32 ± 3,52 29,07 ± 2,53 2,19 ± 0,44 4,36 ± 0, p1 10–6 p1 10– 4 p3 0,00015 p1 0, p3 10–6 p3 0, Примечания: n – число животных и срезов печени в каждой группе;

1, 2, 3 – достоверность различия показателей с аналогичными в группах с соответствующим номером.

Анализ гистологических срезов легкого у мышей-опухоленосителей, полу чавших только растворитель (фосфатный буфер;

группа 1), показал в некоторых участках в межальвеолярных промежутках мелкие диапедезные кровоизлияния с небольшим очаговым лимфоцитарным инфильтратом. Венозное полнокровие слабо выражено. Мелкие бронхи сохраняют типичное строение и состоят из слизистой, волокнисто-хрящевой и адвентициальной оболочки.

Направленность структурных изменений легочной ткани у мышей после назначения различных форм цитостатика во многом схожа с нарушениями, зафиксированными в печени. При использовании групп 2 и 3 определяется выраженное полнокровие легких с резко расширенными венозными сосудами, диффузный полиморфноклеточный инфильтрат, который локализуется как в межальвеолярных перегородках, так и в собственной пластинке слизистой оболочки бронха. В некоторых бронхах инфильтрация под базальной мембра ной сочетается с эксфолиацией бронхиального эпителия в просвет бронха. В отдельных альвеолах наблюдается скопление жидкости с признаками отека.

При внутриопухолевом введении липидного композита цисплатина и на ночастиц железа в углеродной оболочке (группа 4) в ткани легких определялся небольшой перибронхиальный фиброз. В некоторых участках просвет альвеол эмфизематозно расширен, межальвелярные перегородки истончены, в них в небольшом количестве выявлялись лейкоциты.

У мышей с подкожным узлом перевиваемой аденокарциномы Эрлиха (группа 1) в почках определяется корковое и мозговое вещество. Корковое вещество представлено почечными тельцами, мозговое вещество – почечными канальцами. Почечное тельце образовано сосудистым клубочком и капсулой Боумана-Шумлянского, которая выстлана одним слоем подоцитов.

Внутриопухолевое введение цисплатина (группа 2) оказывало системное токсическое воздействие на паренхиму почек. В препарате имело место вы раженное полнокровие коркового вещества почек с очагами кровоизлияния в клубочки почек. Просвет канальцев расширен, в некоторых из них определя ются скопления эксфолиированного цилиндрического эпителия, которые фор мируют цилиндры. Между канальцами определяется очаговый инфильтрат.

Применение липидной формы цисплатина (группа 3) практически не меняло характер качественных изменений почечной паренхимы: полнокровие коркового вещества почек с кровоизлияниями в клубочки, полиморфноклеточный инфиль трат, очаги десквамации эпителия канальцев с формированием цилиндров.

В то же время характер нарушений структуры почек резко менялся на фоне внутриопухолевого введения липидного композита цисплатина и наночастиц железа в углеродной оболочке (группа 4). Наряду с расширением просвета ка нальцев и дегенеративными изменениями нефроцитов, сосудистые нарушения оказались мало выраженными.

Таким образом, нанопорошки железа в углеродной оболочке характери зуются высокой подвижностью в магнитном поле, химической инертностью и устойчивостью внешних пироуглеродных слоев, надежно защищающих ме таллическое ядро, и могут рассматриваться как перспективные наноразмерные биоферромагнетики. В связи с этим, для создания магниточувствительных наноразмерных носителей противоопухолевых препаратов оптимальными представляются нанопорошки железа в углеродной оболочке.

Липидная форма цисплатины и, тем более, магниточувствительный липид ный композит цитостатика при внутриопухолевом назначении резко усиливает противоопухолевй эффект и снижает системное токсическое влияние цитоста тика по сравнению с внутриопухолевым введением стандартной формы выпу ска цисплатина. Другими словами, новые формы цитостатического препарата способствовали его относительной локализации в патологическом очаге.

новые технологии в лечении меСтно-рАСпроСтрАненного рАкА желудкА непосредственные клинические результаты хирургического лечения рака желудка с формированием арефлюксного свисающего клапанного пищеводно-кишечного/пищеводно-желудочного анастомоза. Учиты вая предложенную оригинальную методику формирования арефлюксного пищеводно-кишечного/пищеводно-желудочного анастомоза, в исследование были включены хирургические вмешательства в объеме проксимальной резекции желудка и гастрэктомии. Методики выполнения гастрэктомий и субтотальных резекций соответствовали стандартным радикальным онкологи ческим операциям при раке желудка, с обязательным удалением регионарных лимфатических коллекторов большого и малого сальников с лимфодиссекцией, соответствующей методике Д Всего прооперировано 76 пациентов;

46 больным выполнена гастрэктомия (60,5 %), 30 – проксимальная субтотальная резекция желудка (39,5 %). Умерло 5 больных, совокупная послеоперационная летальность составила 6,6 %.

В основной группе (n = 35), где формировался арефлюксный свисающий клапанный пищеводно-кишечный либо пищеводно-желудочный анастомоз, выполнено: гастрэктомий – 19 (54,3 %), проксимальных резекций желуд ка – 16 (45,7 %). В контрольной группе (n = 41) выполнено: гастрэктомий – 27 (65,9 %), проксимальных резекций желудка – 14 (34,1 %).

Непосредственно после оперативного вмешательства в основной группе умер 1 пациент, послеоперационная летальность составила 2,9 %. В контрольной группе умерло 4 пациента, послеоперационная летальность составила 9,8 %.

При анализе послеоперационной летальности в зависимости от объема выполненного хирургического вмешательства выявлено, что в контрольной группе при проксимальной резекции желудка умер 1 больной из 14 (7,1 %), после гастрэктомии умерло 3 из 27 больных (11,1 %).



Pages:   || 2 |
 




 
2013 www.netess.ru - «Бесплатная библиотека авторефератов кандидатских и докторских диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.